ES2682973T3 - Compuestos y composiciones que comprenden dichos compuestos para la prevención o el tratamiento de dislipidemias - Google Patents

Abstract

Compuesto seleccionado entre monooleato de manida, oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietanololeamida para un uso en la prevención o el tratamiento en un sujeto de síndrome metabólico, diabetes tipo II o esteatosis hepática.

Description

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DESCRIPCION

Compuestos y composiciones que comprenden dichos compuestos para la prevencion o el tratamiento de dislipidemias

La presente invencion se refiere al campo de la medicina. Mas particularmente se refiere a la utilizacion de compuestos para prevenir y/o tratar, en un sujeto, una dislipidemia, que sea de origen alimentario o, alternativamente, asociada a una hipoxia celular, estando dicha dislipidemia asociada tipicamente a la presencia en exceso en las membranas biologicas, incluyendo las membranas biologicas de celulas no adipocitarias, de acidos grasos, en particular acidos grasos de cadenas largas saturadas, y/o esteroles. La invencion se refiere igualmente a composiciones, en particular composiciones farmaceuticas y suplementos o complementos alimenticios, que comprenden dichos compuestos, asf como sus utilizaciones para prevenir y/o tratar una dislipidemia. Los compuestos y composiciones segun la invencion se pueden utilizar en particular ventajosamente para prevenir y/o tratar una patologfa elegida entre el smdrome metabolico y/o un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente para prevenir y/o tratar la diabetes de tipo 2 (“T2DM”) o la esteatosis hepatica.

Tecnica anterior

La resistencia a la insulina, la deficiencia de insulina, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, en particular la hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL, la hipertrigliceridemia, la hipertension, la insuficiencia cardfaca y la esteatosis hepatica son algunos de los smtomas o anomalfas caractensticos del smdrome metabolico.

El smdrome metabolico se define, principal y tfpicamente (en ausencia de tratamiento) como la manifestacion de al menos tres de las cinco anomalfas siguientes: obesidad abdominal, hipertrigliceridemia (TG > aproximadamente 1,7 mM), baja concentracion de colesterol HDL (HDLc < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertension (PA > aproximadamente 130/85 mm de Hg) y glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM (vease "Syndrome metabolique et diabete chez l'homme. Composition lipidique et oxydation des lipoproteines de basse densite (DL) plasmatiques en relation avec l'activation des plaquettes sanguines” - manuscrito de la tesis de Romain Colas - defendida el 10 de diciembre de 2010). La implicacion de las dislipidemias en el desarrollo del smdrome metabolico se conoce desde hace varias decadas.

Una dislipidemia se define tfpicamente como una concentracion anormalmente elevada o disminuida de lfpidos, tfpicamente de acidos grasos libres o no esterificados, esteroles (por ejemplo, colesterol, trigliceridos o fosfolfpidos en la sangre). La mayor parte de las dislipidemias consisten en un aumento de la tasa de estos elementos, siendo mucho mas rara una disminucion.

Los acidos grasos no esterificados (AGNE) o acidos grasos libres (AGL) representan un elemento energetico importante del organismo. Estan constituidos por una mezcla compleja de acidos grasos que difieren en su numero de dobles enlaces y en el numero de atomos de carbono que forman su cadena hidrocarbonada. De origen endogeno, se forman por biosmtesis en el citoplasma de las celulas y se utilizan para la smtesis de trigliceridos, en forma de acil-CoA, en el tejido adiposo y en el hugado, u oxidados por las celulas. Igualmente entran en la composicion de los lfpidos estructurales que constituyen las membranas biologicas, como los fosfolfpidos y esfingolfpidos. En el plasma, se encuentran principalmente cuatro acidos grasos que representan el 85% de los

AGNE: acidos oleico, palmttico, linoleico y estearico. La mayona de los AGNE estan asociados a la albumina.

Provienen de los trigliceridos del tejido adiposo hidrolizados durante el ayuno, bajo la accion de la lipoprotema lipasa tisular y sangumea, en glicerol y acidos grasos. Su concentracion vana en proporciones importantes segun la edad, la toma de alimentos y el ejercicio ffsico. En general, en el penodo posprandial, se suprime su liberacion.

Un esterol es un lfpido que posee un anillo de esterano cuyo carbono 3 es portador de un grupo hidroxilo. Los esteroles se consideran una subclase de esteroides. El colesterol, uno de los esteroles mas comunes y generalizados, es vital para el funcionamiento celular y es un precursor de vitaminas y hormonas esteroides liposolubles.

Tfpicamente, a una concentracion anormalmente elevada de lfpidos en la sangre corresponde una concentracion anormalmente elevada de lfpidos en las membranas biologicas (“dislipidemia celular”). Por ejemplo, a una concentracion anormalmente elevada de acidos grasos saturados libres (AGNE) en la sangre, corresponde una

concentracion anormalmente elevada de acidos grasos saturados esterificados (AGE) en los fosfolfpidos de las

membranas biologicas.

Estos lfpidos se encuentran siempre asociados a protemas espedficas para formar lipoprotemas. Las dislipidemias son el resultado de una desregulacion de la homeostasis lipfdica.

Se ha establecido que una alimentacion excesivamente rica en materias grasas de origen animal conduce principalmente a una acumulacion de acidos grasos saturados (AGS) en las membranas biologicas (“lipo- intoxicacion”) y que esto conduce a la perturbacion global de la plasticidad membranal a nivel celular y luego a la inactivacion metabolica de las celulas y finalmente a la apoptosis de la celula (Figura 1).

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Hasta ahora, solo los acidos grasos insaturados (AGI), en particular el acido oleico (aceite de oliva), eran conocidos para contrarrestar los efectos nocivos de una intoxicacion relacionada con la acumulacion de AGS (Cunha et al., 2008; Diakogiannaki et al., 2008; Katsoulieris et al., 2009; Pineau et al., 2009; Stein et al., 1997; Wei et al., 2006; Deguil et al., 2011). Sin embargo, su uso como alicamento y/o medicamento encuentra dos limitaciones importantes. Por una parte, los AGI presentan propiedades esencialmente preventivas y por tanto tienen un interes limitado en el marco del tratamiento de las lipo-intoxicaciones instaladas, es decir lipo-intoxicaciones responsables de una perturbacion del conjunto de mecanismos membranales (detectable en todas las etapas de la via de secrecion de protemas). De hecho, los AGI actuan entrando en competicion directa con los AGS, durante la ingesta de alimentos, en la smtesis de los fosfolfpidos (FL) membranales. Por otra parte, la toxicidad de los AGI se ha demostrado en celulas incapaces de transformar (“tamponar”) y luego almacenar el exceso de acidos grasos libres, principalmente AGI, en lfpidos neutros, tipicamente en trigliceridos (TG) y/o esteroles esterificados. Es el caso por ejemplo de una cepa de levadura en la que, debido a la ausencia de las cuatro enzimas aciltransferasas Lrolp, Dgalp, Arelp y Are2p, se observa una desregulacion de la smtesis de los lfpidos neutros. Durante una exposicion de esta cepa mutante a una fuente de AGI exogenos, la desregulacion lipfdica se traduce en una proliferacion masiva de las membranas intracelulares y posterior muerte de las celulas, por un proceso independiente de la respuesta a protemas desplegadas (UPR, por la expresion inglesa Unfolded Protein Response; vease a continuacion) (Kohlwein & Petschnigg, 2007; Petschnigg et al., 2011). Curiosamente, se han podido observar fenomenos identicos en celulas de mairnferos (Listenberger et al., 2003). Esto explica por que los acidos grasos insaturados llegan a ser toxicos para la celula en condiciones de lipo-intoxicacion previa de esta ultima, estado en el que se sobrepasa la capacidad de almacenamiento de los acidos grasos insaturados en forma de lfpidos neutros en la celula (celula lipo-intoxicada calificada como “metabolicamente inactiva”) o, alternativamente, en condiciones normales, en celulas que presentan una capacidad muy baja de smtesis de TG, tales como las celulas pancreaticas no beta (Cnop M., et al., 2001). En el hombre, con la excepcion de los adipocitos (solo capaces de sintetizar lfpidos neutros y almacenarlos), el conjunto de tipos celulares es tambien susceptible de verse afectado por la lipo-intoxicacion. Se sabe en particular que las perturbaciones asociadas a la acumulacion de los AGS conducen a la apoptosis de las celulas p-pancreaticas responsables de la smtesis de la insulina (Butler et al., 2003) o la de los hepatocitos (Egnatchik et al., 2014).

En el caso de la diabetes de tipo 2 ("T2DM"), las repercusiones de la acumulacion de AGS se manifiestan en diferentes organos y se traducen en particular en una deficiencia de insulina en el pancreas (relacionada con la apoptosis de las celulas p-pancreaticas, descrita anteriormente) pero igualmente por una resistencia a la insulina en el hngado y en los musculos.

Hoy en dfa se estima en 382 millones el numero de individuos diabeticos en el mundo. Si desde hace varias decadas se ha establecido la implicacion de una desregulacion de la homeostasis lipfdica, la mayona de los tratamientos actuales se centran en los niveles de insulina secretada o el nivel de azucar en la circulacion sangumea. Concretamente, se utilizan varias moleculas para el tratamiento de la diabetes tipo 2. Estas se ensayan para cada paciente y luego se reemplazan secuencialmente por nuevas (en funcion de su influencia sobre la masa corporal y otros efectos secundarios potenciales), si se muestran ineficaces. Segun las recomendaciones de AFSSAPS de 2006, se usa principalmente la metformina (un tipo de biguanida) para disminuir la resistencia a la insulina sin provocar hipoglucemia. En una segunda etapa, se pueden usar secretores de insulina, tales como sulfamidas hipoglucemicas o glinidas. Ademas, desde el ano 2008, inhibidores de la DPP4 (gliptinas) y otros analogos del GLP1 (incretinomimeticos) han aparecido igualmente en la gama de productos disponibles para rectificar la glucemia sin afectar por otro lado el contexto dislipidemico. Finalmente, como ultimo recurso, se prescriben inyecciones de insulina.

Ninguna de las estrategias mencionadas permite restaurar, en la base, la funcionalidad de las celulas y de los organos lipo-intoxicados y, por tanto, no pueden intervenir en etapas tempranas en la cascada de efectos perjudiciales que se encuentran en el smdrome metabolico, o incluso en la diabetes tipo 2, tfpicamente aguas arriba de cada una de las etapas de los tratamientos existentes. El enfoque terapeutico actual destinado a estimular las funciones fisiologicas de los organos "enfermos" podna incluso contribuir, de forma contraproducente, a su debilitamiento y explicar la ineficacia de los medicamentos utilizados en numerosos pacientes y, ademas, la aparicion con el tiempo de fenomenos de resistencia.

Los inventores describen ahora moleculas o compuestos, y composiciones que comprenden dichas moleculas o compuestos, que permiten prevenir la aparicion de una dislipidemia en el seno de las membranas biologicas, tfpicamente la acumulacion celular de acidos grasos, en particular de acidos grasos saturados, y/o esteroles, o tratar una dislipidemia instalada actuando sobre el fenomeno comunmente alterado en el conjunto de los tejidos lipo- intoxicados: la plasticidad membranal.

Sumario de la invencion

La invencion se refiere a una nueva clase de moleculas destinada a la prevencion o al tratamiento de patologfas asociadas a una lipo-intoxicacion por acidos grasos, tfpicamente por acidos grasos saturados (AGS) y/o por esteroles, en particular por acidos grasos de cadena larga saturada y/o trans. Por acidos grasos de cadenas largas se entiende tfpicamente acidos grasos cuya cadena carbonada comprende al menos 14 atomos de carbono, tfpicamente entre 14 y 24 atomos de carbono, por ejemplo al menos 16 o al menos 18 atomos de carbono, tfpicamente entre 14 y 22 o entre 14 y 18 atomos de carbono.

La lipo-intoxicacion se puede manifestar por una inversion de la relacion acidos grasos saturados/acidos grasos insaturados (AGS/AGI) en los fosfoUpidos (FL) presentes en el seno de las membranas biologicas, llegando a ser los AGS mayoritarios, incluso sustituyendo completamente a los AGI. Las moleculas de la invencion estan as^ destinadas tipicamente a la prevencion o al tratamiento de una dislipidemia, un smdrome metabolico, un smtoma o 5 una anomaKa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente a la prevencion o tratamiento de la diabetes tipo 2 o de la esteatosis hepatica.

Una ventaja considerable que presentan las moleculas (o compuestos) de la invencion, con relacion a los acidos grasos insaturados (AGI), en particular al acido oleico, utilizados en la tecnica anterior para compensar un exceso de acidos grasos saturados (AGS), es que contrariamente a estos ultimos, no causan ninguna toxicidad celular, 10 especialmente ninguna toxicidad sobre las celulas incapaces de sintetizar lfpidos neutros, tfpicamente sobre las celulas no adipocitarias, por ejemplo, sobre las celulas pancreaticas.

Las moleculas de la invencion presentan otra ventaja importante que, a diferencia de los AGI usados de manera preventiva en la tecnica anterior, se pueden usar igualmente de manera terapeutica debido a su aptitud para restablecer la funcionalidad celular, por ejemplo, actuando sobre la plasticidad membranal. Se pueden por tanto 15 utilizar ventajosamente para tratar una dislipidemia instalada, es decir una dislipidemia responsable de un disfuncionamiento celular detectable, tfpicamente una alteracion de la capacidad o incluso una incapacidad (inactivacion metabolica) de la celula para ejercer su funcion natural.

La descripcion se refiere asf a un compuesto que comprende una cabeza polar, que comprende al menos un residuo de hidroxilo, sobre el que esta injertado un unico acido graso insaturado que comprende entre 16 y 24, por ejemplo, 20 entre 16 y 22 o entre 16 y 20, atomos de carbono y que tienen de 1 a 6, por ejemplo 3, insaturaciones en configuracion cis para uso en prevenir o tratar una dislipidemia, en un sujeto. La dislipidemia afecta tfpicamente a las membranas biologicas, incluidas las membranas biologicas de las celulas no adipocitarias. La dislipidemia se asocia generalmente a la presencia en exceso en dichas membranas biologicas de acidos grasos saturados, mas particularmente acidos grasos de cadenas largas saturadas y/o de esteroles. La cantidad de acidos grasos 25 saturados y/o esteroles se considera en particular excesiva, por ejemplo, cuando al alterar la plasticidad membranal provoca un disfuncionamiento celular.

En un modo de realizacion preferido de la invencion, dicho compuesto: i) no permite la produccion o introduccion de fosfolfpidos di-insaturados en la membrana de las celulas tratadas, tfpicamente no restaura, en la celula tratada, una composicion de acidos grasos de los fosfolfpidos membranales comparable a la de los fosfolfpidos membranales de 30 una celula correspondiente no lipo-intoxicada, ii) no constituye una fuente de acido oleico para la celula tratada, tfpicamente una fuente de acido oleico capaz de restaurar la plasticidad membranal de la celula tratada, y preferiblemente iii) no induce la movilizacion calcica intracelular y/o no es degradado por las lipasas.

La descripcion se refiere a un compuesto cuya cabeza polar es de formula (I):

imagen1

35 en la que:

A es un atomo de nitrogeno o de oxfgeno, preferiblemente un atomo de oxfgeno, n es 2 o 3, preferiblemente n es 2, y R es cualquier grupo qrnmico,

para uso en prevenir o tratar una dislipidemia en un sujeto, tfpicamente una dislipidemia tal como se ha definido 40 anteriormente.

Dichos compuestos para su utilizacion en la prevencion y/o el tratamiento de una dislipidemia estan descritos en los documentos WO 2012/054527, WO 2010/149170 y EP0104043.

Los compuestos segun la invencion: i) que no permiten la produccion de fosfolfpidos di-insaturados, o que no provocan la introduccion de dichos fosfolfpidos en la membrana de las celulas tratadas, tfpicamente que no 45 restauran, en la celula tratada, una composicion de acidos grasos de los fosfolfpidos membranales comparable a la de los fosfolfpidos membranales de una celula correspondiente no lipo-intoxicada, y ii) que no constituyen una fuente de acido oleico para la celula tratada, tfpicamente una fuente de acido oleico capaz de restaurar la plasticidad membranal de la celula tratada, se seleccionan entre monooleato de manida, oleato de 3 -hidroxi-2,2- bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietanololeamida (por ejemplo, contrariamente al acido 1-oleoil-lisofosfatfdico o LPA).

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Los compuestos segun la invencion que no inducen la movilizacion calcica intracelular son monooleato de manida y oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo. Contrariamente al OAG, que es una molecula de referencia que induce una movilizacion calcica celular (Marin & Cooper, 2006) o alternativamente, al 1 -oleoilglicerol y al 2- oleoilglicerol (Iwasaki et al., 2008), estos compuestos son particularmente ventajosos porque presentan un riesgo de toxicidad menor por procesos perjudiciales que dependen del nivel de calcio intracelular, tales como la proliferacion o la apoptosis (Stutzmann GE et al., 2011).

El compuesto segun la realizacion preferido en el sentido que resiste la accion de degradacion por las lipasas es N,N-dietilanololeamida.

La invencion se refiere ademas a un compuesto, tal como se describe en la presente memoria, para uso en la prevencion o tratamiento del smdrome metabolico, tipicamente al menos un smtoma o anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente al menos dos o tres smtomas, seleccionandose dichos smtomas entre resistencia a la insulina, deficiencia de insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tipicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardfaca y esteatosis hepatica, preferiblemente entre resistencia a la insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tfpicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardfaca y esteatosis hepatica. Un objeto particular se refiere a un compuesto segun la invencion para usar en la prevencion o el tratamiento de la diabetes tipo 2.

Un compuesto segun la invencion particularmente preferido es el monooleato de manida, del que los inventores han demostrado, con ayuda de celulas beta-pancreaticas de marnfferos lipo-intoxicadas por acidos grasos saturados, que es ventajosamente capaz de aumentar la secrecion de insulina, en sujetos que padecen lipo-intoxicacion y/o diabetes tipo 2 favoreciendo en ellos la maduracion de la proinsulina en insulina.

La invencion se refiere ademas a una composicion, que se presenta en forma de una composicion farmaceutica, un alicamento o un suplemento alimenticio, que comprende al menos un compuesto segun la invencion. Un objeto particular se refiere tfpicamente a una composicion farmaceutica que comprende, ademas de dicho al menos un compuesto segun la invencion, al menos otro compuesto (diferente de los compuestos segun la invencion) activo en el plano terapeutico (y reconocido como tal por el experto en la tecnica).

La invencion se refiere igualmente al uso de dicha composicion para prevenir o tratar, en un sujeto, una dislipidemia, tfpicamente una dislipidemia en las membranas biologicas, incluyendo las membranas biologicas de las celulas no- adipocitarias, en particular una dislipidemia asociada a la presencia en exceso en dichas membranas biologicas de acidos grasos, mas particularmente de acidos grasos de cadenas largas saturadas y/o trans, y/o esteroles. Tambien se refiere al uso de dicha composicion para prevenir o tratar, en un sujeto, el smdrome metabolico, tfpicamente al menos un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente varios smtomas (por ejemplo, 2, 3, 4 o 5); preferiblemente para prevenir o tratar la diabetes tipo 2. Los usos descritos tambien se pueden llevar a cabo ventajosamente en combinacion con al menos otro compuesto terapeuticamente activo (reconocido como tal por los expertos en la tecnica y diferente de los compuestos segun la invencion), en particular en el tratamiento del smdrome metabolico, tfpicamente de al menos un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico y/o de la diabetes tipo 2.

Descripcion detallada

Los inventores han demostrado que los AGS que provienen de una fuente exogena (alimentacion) o endogena (hipoxia o alteracion, por mutacion, de las etapas de desaturacion de los acidos grasos) se acumulaban en el seno de los fosfolfpidos que constituyen las membranas celulares, perturbando por tanto numerosos procesos, alterando la funcionalidad de los organulos intracelulares que intervienen en la via de secrecion de las protemas (vease la Figura 1).

Para realizar esta demostracion, los inventores desarrollaron un modelo unicelular simple (cepa hemlA elaborada a partir de la levadura de panadena Saccharomyces cerevisiae) que reproduda el conjunto de impactos de los AGS y del colesterol observados en celulas de mairnfero, en particular el conjunto de anomalfas implicadas en el desarrollo del smdrome metabolico (Pineau et al., 2008 y Pineau et al., 2009).

En un medio YPG (es decir, medio que no contiene ni ergosterol (Erg) ni acido oleico (Ole)), la cepa hemlA acumula acidos grasos saturados (principalmente acido palmftico, C16:0) en sus fosfolfpidos, en particular en la fosfatidilcolina (FC). Cabe senalar que el ergosterol es el esterol presente mayoritariamente en las levaduras y constituye, por tanto, en las levaduras, el equivalente al colesterol para el hombre.

La cepa QM (Petschingg et al., 2009), en la que han sido delecionados los genes que codifican las enzimas responsables de la smtesis de trigliceridos y esteres de esterol, es por sf misma incapaz de transformar un aporte

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exogeno de acidos grasos libres, tipo acido oleico C 18:1, en Ifpidos neutros, de manera que este aporte causa un estres perjudicial debido a la perturbacion del equilibrio de la plasticidad membranal que genera. El uso de la cepa QM ha permitido en particular a los inventores realizar ensayos de toxicidad que han permitido demostrar claramente la toxicidad del acido oleico en tales circunstancias (vease la Figura 4).

Mas precisamente, los inventores observaron en las cepas hemlA los efectos negativos de la acumulacion de fosfolfpidos que llevan cadenas saturadas (FL saturados) y de colesterol en las membranas de organulos intracelulares, sobre la formacion de vesmulas secretoras. Esta lipo-intoxicacion (endogena, pues el sistema celular de las cepas hemlA no sintetiza mas que los AGS) perturba el ambiente lipfdico de la membrana del retmulo endoplasmico (RE), altera el proceso de plegamiento (“misfolding") de las protemas y desencadena una respuesta compleja en dicho RE, respuesta conocida con el nombre “Unfolded Protein Response" (UPR). Una saturacion de este sistema de proteccion causa la muerte celular por apoptosis. Paralelamente, los inventores pudieron observar perturbaciones de la vesiculacion del aparato de Golgi, asf como una alteracion del trafico de las protemas de referencia (por ejemplo, Fur4p) entre el aparato de Golgi y la membrana plasmatica. Concretamente, los inventores observaron una alteracion del conjunto de la via de secrecion debida a la lipo-intoxicacion. En otras palabras, la cepa hemlA de levadura les permitio confirmar tanto los impactos de los AGS sobre el estres del RE como igualmente sobre el trafico de las protemas hacia la membrana plasmatica.

El retmulo endoplasmico (RE) esta implicado en varios procesos celulares fundamentales, incluyendo la smtesis lipfdica, la regulacion de la homeostasis calcica y la smtesis de las protemas destinadas a los diferentes organulos y a la superficie celular (por ejemplo, las protemas membranales, tales como los canales ionicos y los transportadores). El RE es igualmente el sitio donde las protemas membranales o secretadas se ensamblan y se pliegan. En consecuencia, la UPR desempena un papel esencial en el mantenimiento de la integridad y funcionalidad del RE, permitiendo a este organulo gestionar la acumulacion de protemas mal plegadas (Kincaid & Cooper, 2007; Zhang & Kaufman, 2006). Tengase en cuenta que la toxicidad de los AGS esta asociada, en las celulas p-pancreaticas (responsables de la smtesis de la insulina en los mairnferos) a la induccion de la respuesta UPR (Cunha et al., 2008; Diakogiannaki & Morgan, 2008; Laybutt et al., 2007). Alkhateeb et al., (2007) y Kato et al., (2008) observaron ademas que la acumulacion de los AGS altera el direccionamiento del receptor a la insulina y del transportador de glucosa Glut4 a la superficie de las celulas musculares.

Schneider et al., (1999) observaron que las membranas del retmulo endoplasmico (RE) y del aparato de Golgi estan constituidas muy mayoritariamente por fosfolfpidos (FL) insaturados, mientras que la proporcion de FL saturados aumenta gradualmente en los compartimentos mas distales en la via de secrecion para alcanzar su maximo en la membrana plasmatica. Las proporciones importantes de FL insaturados se traducen en una fluidez membranal elevada, un parametro crucial para el reclutamiento de ciertas protemas esenciales en la formacion de vesmulas. Un ejemplo tfpico lo proporcionan las protemas de la familia Arf-GAP1, siendo una de entre ellas Gcslp en la levadura. Se ha demostrado que Gcslp es un mediador del transporte vesicular tanto entre el aparato de Golgi y el RE como entre el RE y la membrana plasmatica (Robinson et al., 2006). Curiosamente, la delecion del gen GCS1 provoca una fragmentacion del aparato de Golgi y una perturbacion del trafico vesicular pos-Golgiano (Poon et al., 2001), fenomenos que los inventores han podido observar ellos mismos en el modelo de levadura hemlA, es decir, en condiciones de acumulacion de AGS (vease Payet et al., 2013).

Las protemas de la familia Arf-GAP1 responden a la curvatura membranal siendo adsorbidas en la superficie membranal por medio de un resto espedfico denominado Arf-GAP1 Lipid Packing Sensor (ALPS; (Bigay et al., 2005)). Concretamente, el resto ALPS no reconoce la curvatura membranal per se, es decir, una geometna curva, pero reconoce un pequeno apilamiento de las cabezas polares de los fosfolfpidos (“Loose Lipid Packing") que es una consecuencia de la curvatura membranal (Bigay et al., 2005). Los inventores fueron capaces de demostrar que los elevados niveles de FL saturados en condiciones de lipo-intoxicacion estan asociados a un aumento del empaquetamiento de lfpidos en las membranas (Deguil et al., 2011) y que este aumento altera el reclutamiento por el aparato de Golgi del Gcs1p proveniente del citoplasma (Payet et al., 2013). Mas en general, demostraron que la acumulacion de acidos grasos, en particular aGs, en las membranas biologicas provocaba la desregulacion funcional de los organulos intracelulares, incluyendo el aparato de Golgi y el retmulo endoplasmico (RE), y en particular una disminucion del mdice de vesiculacion responsable de una disminucion de la translocacion de ciertos transportadores y receptores membranales en la superficie celular.

Las lipo-intoxicaciones celulares provocadas por los inventores dieron como resultado, in vitro, una exposicion a una fuente exogena de acidos grasos exclusivamente en forma saturada (lipo-intoxicacion “exogena”) o, alternativamente, una incapacidad intrmseca de la celula para producir formas insaturadas de acidos grasos (lipo- intoxicacion “endogena”).

Con ayuda de su modelo de levadura hemlA, los inventores mostraron que el acido oleico (Ole), estando metabolizado en los fosfolfpidos (FL) (vease la figura 1 - perdida de FL con aGs a favor de FL con AGI), permite restaurar la plasticidad de las membranas previamente lipo-intoxicadas por los AGS. Igualmente demostraron con ayuda de la cepa de levadura QM que el efecto beneficioso observado se limitaba a las celulas que teman la capacidad de tamponar un exceso de AGI exogenos en forma de lfpidos neutros. En las celulas que no teman esta capacidad, el excedente de acido oleico exogeno ocasionaba, finalmente, una proliferacion anormal de las membranas intracelulares que, al estresarse las celulas, desencadenaran su apoptosis.

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Los inventores usaron su modelo de levadura hemlA y la cepa QM para cribar las moleculas de interes susceptibles de impedir o limitar este fenomeno, idealmente contrarrestar el efecto toxico de los acidos grasos presentes en exceso y/o mal metabolizados (es decir, esterificados) toxicos y de corregir el conjunto de fenomenos perturbados. As^ descubrieron moleculas capaces, en particular, de restaurar una funcionalidad celular (restaurando, por ejemplo, la fluidez membranal) comparable a la encontrada en condiciones no patologicas.

A continuacion, estos mismos inventores analizaron y demostraron la eficacia de las moleculas preseleccionadas por ellos, es decir, su capacidad para restaurar una funcionalidad celular comparable a la encontrada en condiciones no patologicas, incluso en el caso de dislipidemias instaladas, en las celulas p-pancreaticas de mairnfero, en particular en las celulas p-pancreaticas de rata (linaje BRIN-BD11). Ademas, los inventores han podido demostrar que los compuestos de interes presentan una influencia muy limitada sobre los fenomenos celulares, tales como la movilizacion calcica responsable de la induccion de fenomenos de proliferacion celular y apoptosis. Presentan asf una toxicidad menor en comparacion con los compuestos, tal como el OAG, induciendo o favoreciendo, por el contrario, dicha movilizacion calcica celular. Asimismo, ciertos compuestos han demostrado ser particularmente eficaces en restaurar la conversion de la pro-insulina en insulina en celulas p-pancreaticas de mamffero, en particular en celulas p-pancreaticas de raton (linaje MIN6).

La invencion se refiere asf a un compuesto que comprende una cabeza polar, que comprende al menos un residuo de hidroxilo, sobre el que esta injertado un unico acido graso insaturado que comprende entre 16 y 24, por ejemplo entre 16 y 20, tfpicamente 18, atomos de carbono y que tiene 1 a 6, por ejemplo 3, insaturaciones en configuracion cis (identificado en la presente memoria como "compuesto de interes") para su uso en la prevencion o el tratamiento de una dislipidemia en un sujeto.

El sujeto implicado es un animal, tfpicamente un marnffero, por ejemplo, un mamffero seleccionado entre un raton, una rata, un cerdo y un ser humano. El sujeto implicado es preferiblemente un ser humano.

En el contexto de la presente descripcion, la dislipidemia cuya prevencion o tratamiento se busca afecta tfpicamente a las membranas biologicas, en particular a las membranas biologicas de celulas no adipocitarias. En general, se asocia a la presencia en exceso en dichas membranas biologicas de acidos grasos, mas particularmente acidos grasos de cadenas largas saturadas y/o trans y/o esteroles. La dislipidemia es tfpicamente responsable de la intoxicacion (lipo-intoxicacion) de celulas no adipocitarias dando origen al disfuncionamiento o la apoptosis de dichas celulas por la disminucion o incluso supresion de la fluidez de su membrana plasmatica y/o la membrana de sus organulos.

En un modo de realizacion particular de la invencion, la dislipidemia esta asociada a la presencia en el sujeto de un smdrome metabolico, tfpicamente al menos un smtoma del smdrome metabolico, preferiblemente al menos dos o tres smtomas, seleccionandose dichos smtomas entre resistencia a la insulina, deficiencia de insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tfpicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardfaca y esteatosis hepatica, preferiblemente entre resistencia a la insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tfpicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardfaca y esteatosis hepatica.

Por tanto, como se desprende de la presente descripcion, la expresion “presencia en exceso” de acidos grasos, en particular AGS, y/o esteroles, es sinonima de “lipo-intoxicacion”, por ejemplo de lipo-intoxicacion de origen exogeno o, alternativamente, de lipo-intoxicacion de origen endogeno (por ejemplo, hipoxica), y designa la presencia, en una celula no adipocitaria, en particular de acidos grasos saturados y/o trans y/o esteroles en una cantidad suficiente para perturbar la via de secrecion descrita anteriormente y por tanto alterar el funcionamiento celular (tfpicamente la via de secrecion de las protemas y en consecuencia la funcion de dichas protemas), o incluso, a un nivel superior, alterar en consecuencia el funcionamiento del organo correspondiente.

Una lipo-intoxicacion renal se manifiesta, por ejemplo, cuando acidos grasos saturados, en particular de cadena larga, se almacenan en las celulas del rinon y las celulas del tubulo contorneado proximal. Dicho almacenamiento conduce a una inflamacion del tubulo intersticial y a una fibrosis, incluso a una insuficiencia renal y a la muerte del sujeto afectado en los casos mas graves. A modo de ejemplo, una lipo-intoxicacion del pancreas se diagnostica tfpicamente por el almacenamiento en el seno de los fosfolfpidos membranales de acidos grasos saturados, en particular de cadena larga, en las celulas p-pancreaticas.

A nivel celular, una lipo-intoxicacion se diagnostica tfpicamente por la deteccion de una modificacion del contenido de acidos grasos de los fosfolfpidos (FL) de las membranas biologicas (principalmente a nivel de las especies fosfolipfdicas de la fosfatidilcolina (FC)) y, en particular, por la disminucion de las formas de FL en AGI para beneficio de FL en AGS. Al igual que el modo de funcionamiento descrito en la parte experimental de la presente descripcion,

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dicha firma lipidomica se puede demostrar como consecuencia de la extraccion de los Upidos celulares totales, de la purificacion de sus fosfoKpidos y del analisis de estos ultimos por espectrometna de masas (Deguil et al., 2011).

Ademas, esta lipo-intoxicacion celular se puede manifestar por la induccion de la respuesta UPR (“Unfolded Protein Response"). Tal como lo demuestra la parte experimental, es posible, in vitro, detectar y medir esta respuesta UPR por el analisis de la expresion de un gen indicador (tal como el gen lacZ que codifica la p-galactosidasa cuya actividad enzimatica puede ser cuantificada) que contiene en su secuencia promotora uno o mas, por ejemplo 4, elementos de respuesta a la UPR (“UPRE”) espedficos de un gen caractensticamente inducido durante el desencadenamiento de dicha respuesta, por ejemplo, de un gen seleccionado entre CHOP, BiP, GRP78 y ATF4 (Laybutt et al., 2007). Alternativamente, el desencadenamiento de la UPR en respuesta a una lipo-intoxicacion se puede detectar y medir cuantificando la proporcion de formas activas de ciertas protemas claves en esta cascada de episodios celulares. Este es el caso de la protema eIF2a cuya abundancia de la forma activa fosforilada es proporcional al estado de activacion de la UPR. Como se explica en la parte experimental, la cantidad de la forma activa fosforilada se puede evaluar por densitometna de las imagenes obtenidas despues de la transferencia de Western (Dhayal & Morgan, 2011).

En el contexto de la presente invencion, la respuesta UPR se puede detectar o medir ventajosamente por deteccion o medida de la expresion de un gen o de la actividad de una protema implicada en la respuesta “UPR”, como se explico anteriormente.

Un compuesto descrito en la presente memoria es un compuesto tal como se ha definido anteriormente, cuya cabeza polar es de formula (I):

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en la que:

A es tfpicamente un atomo de oxfgeno o un grupo NR1, siendo R1 = H o un alquilo de C1-C6 opcionalmente sustituido con un OH, y A es preferiblemente un atomo de oxfgeno o NH o NCH3 o NCH2CH2OH e incluso mas preferiblemente A es un atomo de oxfgeno,

n = 2 o 3, preferiblemente n = 2, y

R es cualquier grupo qrnmico y puede ser diferente de un grupo (CHR) a otro.

En la formula (I), el enlace interrumpido por zigzags representa el enlace entre la cabeza polar y la cadena de carbonos del acido graso insaturado, siendo el grupo C=O de formula (I) el C=O del acido graso insaturado.

Preferiblemente, R es un grupo que comprende unicamente atomos de carbono, hidrogeno y oxfgeno.

Preferiblemente, R es un grupo saturado que comprende unicamente atomos de carbono, hidrogeno y oxfgeno.

Preferiblemente, el radical (CHR)n-OH es un derivado de glicerol, de eritritol o de un monosacarido, tal como manosa.

En la presente descripcion, cada residuo de hidroxilo puede estar independientemente fosfatado.

Ejemplos de compuestos descritos en la presente memoria como utilizables para prevenir o tratar una dislipidemia se identifican a continuacion:

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1 -oleoil-2-acetil-sn-glicerMo (OAG)

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5 1-oleoil-sn-glicerol-3-fosfato (acido 1 -oleoil-lisofosfatidico o LPA),

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2-araquidonoilglicerol (2-AG),

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monooleato de manida

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oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo

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N.N-dietanololeamida,

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monooleato de propilenglicol,

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1-oleoil-glicerol

2-oleoil-glicerol,

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monoester del acido oleico con triglicerol,

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ester (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metflico del acido (Z)-9-octadecenoico,

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monooleato de dietilenglicol.

Los compuestos descritos como utilizables para prevenir o tratar una dislipidemia se seleccionan, por ejemplo, entre 1 -oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG), 1-oleoil-sn-glicerol-3-fosfato (acido 1 -oleoil-lisofosfatidico o LPA), 2- araquidonoilglicerol (2-AG), monooleato de manida, oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo, N,N- dietanololeamida, monooleato de propilenglicol, monoester del acido oleico con triglicerol y ester (2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-il)metilico del acido (Z)-9-octadecenoico.

Los compuestos usados segun la invencion para prevenir o tratar una dislipidemia, en particular una lipo-intoxicacion asociada a una enfermedad metabolica, tal como la diabetes tipo II y/o una lipo-intoxicacion hipoxica, se eligen entre monooleato de manida, oleato de 3 hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietanololeamida.

Un compuesto de interes particularmente preferido para prevenir o tratar una dislipidemia, en particular en el contexto de la prevencion y/o el tratamiento de una enfermedad metabolica, y/o un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente de la diabetes tipo 2, es el monooleato de manida.

Los compuestos de interes se usan en el contexto de la invencion para prevenir o tratar las dislipidemias, tfpicamente restaurando la fluidez de las membranas biologicas. Una caractenstica ventajosa de estos compuestos es que, a diferencia de los acidos grasos insaturados utilizados en la tecnica anterior, no son toxicos para las celulas incapaces de sintetizar los lfpidos neutros, tfpicamente trigliceridos y/o esteroles esterificados. Estos compuestos son en particular no toxicos para las celulas pancreaticas (celulas p-pancreaticas y celulas a-pancreaticas). Igualmente son preferiblemente no toxicos para las celulas renales, hepaticas, cardiacas y musculares. Ademas, son con preferencia ventajosamente capaces de restaurar la funcionalidad de una celula lipo-intoxicada asf como, si fuera necesario, la del organo implicado.

Un compuesto de interes tfpico de la invencion presenta ventajosamente las siguientes propiedades:

(i) restaura el crecimiento de un mutante hemlA de la levadura Saccharomyces cerevisiae lipo-intoxicado,

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(ii) reduce o suprime la respuesta UPR (“Unfolded Protein Response"),

(iii) no es toxico para un mutante QM de la levadura Saccharomyces cerevisiae, y/o

(iv) reduce o suprime la muerte celular por apoptosis de una celula de mairnfero lipo-intoxicada.

Los compuestos particulares utilizados en el contexto de la invencion son capaces de restaurar el crecimiento de un mutante hemlA de la levadura Saccharomyces cerevisiae lipo-intoxicado y/o reducir o suprimir la respuesta UPR (“Unfolded Protein Response"), tfpicamente la respuesta UPR inducida por una lipo-intoxicacion (ya sea esta ultima de naturaleza endogena o exogena).

Los compuestos particulares usados en el contexto de la invencion no son toxicos para las levaduras de la cepa QM.

Los compuestos particulares usados en el contexto de la invencion son capaces de reducir o suprimir la muerte celular por apoptosis de celulas de mamnferos lipo-intoxicadas.

Entre los compuestos descritos en la presente memoria, algunos actuan directamente sobre el contenido lipfdico, es decir, sobre la composicion de acidos grasos, de los fosfolfpidos presentes en el seno de las membranas celulares. Ejemplos de tales compuestos son 1-oleoil-sn-glicerol-3-fosfato (acido 1-oleoil-lisofosfatfdico o LPA) y monooleato de propilenglicol. Los compuestos descritos restauran la fluidez y, por tanto, la funcionalidad membranal sin restablecer una composicion normal de fosfolfpidos di-insaturados en el seno de las membranas celulares. Un ejemplo preferido de dicho compuesto es 1 -oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG). Ejemplos incluso mas preferidos son monooleato de manida, oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietilanololeamida.

En un modo de realizacion preferido de la invencion, los compuestos se utilizan para prevenir y/o tratar una patologfa elegida entre el smdrome metabolico y/o un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente para prevenir o tratar la diabetes tipo 2.

En un modo de realizacion particular de la invencion, los compuestos se utilizan para prevenir y/o tratar el smdrome metabolico, tfpicamente al menos un smtoma del smdrome metabolico, preferiblemente al menos dos o tres smtomas, seleccionandose dichos smtomas entre resistencia a la insulina, deficiencia de insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tfpicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardfaca y esteatosis hepatica, preferiblemente entre resistencia a la insulina, hiperglucemia (tfpicamente glucemia en ayunas > aproximadamente 5,5 mM), hipercolesterolemia, en particular hipercolesterolemia caracterizada por una baja concentracion de colesterol HDL (tfpicamente < aproximadamente 1 mM para los hombres y < aproximadamente 1,3 mM para las mujeres), hipertrigliceridemia (tfpicamente TG > aproximadamente 1,7 mM), hipertension (tfpicamente presion arterial (PA) > aproximadamente 130/820 mm de Hg), insuficiencia cardiaca y esteatosis hepatica.

Como se explico anteriormente, para la diabetes tipo 2, los enfoques terapeuticos actuales se dirigen a los parametros que intervienen aguas abajo de las dislipidemias iniciales. Aunque validados en contextos fisiologicos en el laboratorio, estos tratamientos adolecen de una falta de eficacia asociada a la perturbacion global de los mecanismos membranales observados en el caso de lipo-intoxicacion instalados que se manifiestan en particular por una fluidez membranal alterada o ineficaz (en cuanto a la celula considerada ya no es funcional). En particular, actualmente no existe ninguna molecula o compuesto que permita tratar las dislipidemias que afectan a las celulas incapaces de sintetizar lfpidos neutros, en particular las celulas no adipocitarias.

En un modo de realizacion preferido de la invencion, al menos un compuesto, tal como se describe en la presente memoria, se usa para prevenir y/o tratar la diabetes tipo 2. El monooleato de manida es un ejemplo de un compuesto utilizado de manera preferida para prevenir y/o tratar la diabetes tipo 2.

Este al menos un compuesto se puede usar, en un modo de realizacion particular de la invencion, en combinacion con un compuesto distinto conocido por los expertos en la tecnica y utilizado convencionalmente en la prevencion o el tratamiento de la diabetes tipo 2, seleccionandose dicho compuesto distinto preferiblemente entre biguanida, glitazona, sulfamida hipoglucemiante, glinida, inhibidor de DPP4, incretinomimetico e inhibidor de la a-glucosidasa.

Otro objeto de la invencion se refiere ademas a una composicion que se presenta en forma de una composicion farmaceutica, un alicamento, un suplemento o un complemento alimenticio, que comprende al menos un compuesto segun la invencion.

Un objeto particular se refiere tfpicamente a una composicion farmaceutica que comprende al menos otro dicho compuesto segun la invencion, al menos otro compuesto (diferente de los compuestos utilizados en el contexto de la invencion para prevenir o tratar una dislipidemia sin inducir toxicidad en las celulas no adipocitarias) terapeuticamente activo (y reconocido como tal por los expertos en la tecnica), en particular un compuesto activo en

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la prevencion o tratamiento de un smtoma o de una anomaKa caractenstico del smdrome metabolico y/o de la diabetes tipo 2 (por ejemplo, tales como los descritos en la presente memoria).

La invencion se refiere igualmente a una composicion, tal como se describe en la presente memoria, para uso en prevenir o tratar una dislipidemia, tipicamente una patologfa elegida entre smdrome metabolico y/o un smtoma o una anomalfa caractenstico del smdrome metabolico, preferiblemente para prevenir o tratar la diabetes tipo 2.

El termino “tratamiento” designa el tratamiento curativo, sintomatico o preventivo. Los compuestos de la presente invencion se pueden usar asf en sujetos (como mairnferos, en particular seres humanos) afectados de una enfermedad declarada. Los compuestos de la presente invencion tambien se pueden usar para retardar o ralentizar la progresion o prevenir una progresion segun avance la enfermedad, mejorando de este modo el estado de los sujetos. Los compuestos de la presente invencion pueden finalmente ser administrados “preventivamente” a los sujetos no enfermos, pero que normalmente podnan desarrollar la enfermedad o que tienen un riesgo importante de desarrollar la enfermedad.

El o los compuestos o las composiciones segun la invencion se pueden administrar de diferentes maneras y en diferentes formas.

Asf, en un modo de realizacion tfpico, el o los compuestos se administran al sujeto, juntos o por separado, y el o los compuestos o composiciones segun la invencion se administran de forma continua o secuencial, una o varias veces al dfa (administracion diaria), una o varias veces por semana (administracion semanal) o una o varias veces al mes (administracion mensual), durante todo el tiempo del tratamiento, es decir, hasta la mejora de los smtomas de la patologfa tratada, preferiblemente la desaparicion de todos o parte de dichos smtomas.

Si es necesario, la dosis diaria se puede administrar por ejemplo en dos, tres, cuatro, cinco, seis o mas tomas al dfa o en sub-dosis multiples administradas a intervalos apropiados durante el dfa.

Estos compuestos o composiciones se pueden administrar por ejemplo de manera sistemica, por via oral, parenteral, por inhalacion o por inyeccion, como por ejemplo, por via intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutanea, transdermica, intraarterial, etc. Tratandose de un tratamiento a largo plazo, la via de administracion preferida sera sublingual, oral, intraperitoneal o transcutanea.

Las composiciones se pueden formular en forma de suspensiones inyectables, aceites, supositorios, capsulas de gelatina, capsulas, aerosoles, etc., eventualmente por medio de formas galenicas o de dispositivos que aseguren una liberacion prolongada y/o retardada. Para las inyecciones, los compuestos se acondicionan generalmente en forma de suspensiones lfquidas, que pueden ser inyectadas, por ejemplo, por medio de jeringas o perfusiones.

Se entiende que el caudal y/o la dosis inyectada pueden ser adaptados por los expertos en la tecnica en funcion del paciente, la patologfa, el modo de administracion, etc. En general, la dosis diaria del compuesto sera la dosis minima para obtener el efecto terapeutico.

La cantidad de compuesto presente en la composicion terapeutica se puede modular de forma que se obtenga una tasa circulante de principio activo necesaria para la obtencion del efecto terapeutico deseado para un paciente particular, una composicion, un modo de administracion y preferiblemente sin toxicidad para el paciente. La cantidad seleccionada dependera de multiples factores, en particular de la via de administracion, la duracion de la administracion, el momento de la administracion, la velocidad de eliminacion del compuesto, del o los diferentes productos utilizados en combinacion con el compuesto, la edad, el peso y el estado ffsico del paciente, asf como su historial medico y otras informaciones conocidas en medicina.

Tfpicamente, los compuestos se administran a dosis que pueden variar entre 1 |jg y 2 g por administracion, preferiblemente de 0,1 mg a 1 g por administracion. Por otra parte, las composiciones segun la invencion pueden comprender, ademas, otros agentes o principios activos como se ha explicado anteriormente. Las composiciones segun la invencion tambien pueden comprender uno o varios excipientes o vehmulos, farmaceuticamente aceptables. Por ejemplo, se pueden citar soluciones salinas, fisiologicas, isotonicas, tamponadas, etc., compatibles con un uso farmaceutico y conocidas por los expertos en la tecnica. Las composiciones pueden contener uno o varios agentes o vehmulos seleccionados entre dispersantes, solubilizantes, estabilizantes, conservantes, etc.

Tambien se describen en la presente memoria metodos de prevencion o tratamiento de una dislipidemia en un sujeto, que comprenden la administracion a un sujeto que padece una dislipidemia o susceptible de desarrollar una dislipidemia, de un compuesto o de una composicion de interes, tales como los descritos en la presente memoria para prevenir o tratar dicha dislipidemia.

La descripcion se refiere ademas a los metodos de prevencion o tratamiento en un sujeto que padece una patologfa seleccionada entre smdrome metabolico, smtoma o anomalfa caractenstico del smdrome metabolico y diabetes tipo 2. Todos estos metodos incluyen una etapa de administracion a un sujeto que padece dicha patologfa, o que es susceptible de desarrollar dicha patologfa, de un compuesto o de una composicion de interes, tales como lo descritos en la presente memoria para prevenir o tratar dicha patologfa.

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Las figuras y ejemplos siguientes ilustran la invencion sin limitar su alcance.

Leyendas de las figuras

Figura 1: Via de secrecion y plasticidad membranal.

Despues de su smtesis, las protemas membranales o secretadas (“herramientas” moleculares de las celulas) deben experimentar etapas de maduracion en el interior de las celulas. Cada una de las etapas de este proceso denominado “via de secrecion” tiene lugar en un compartimento subcelular especftico (principalmente el retmulo endoplasmico (RE) y el aparato de Golgi). La obtencion de protemas maduras necesita por tanto un transporte intracelular funcional entre los diferentes sistemas endomembranales. Este flujo esta influenciado, entre otros, por la plasticidad de las membranas de los compartimentos intracelulares lo que esta, a su vez, directamente correlacionado con la naturaleza de los fosfoftpidos (FL) que componen las membranas. En particular, se admite que la presencia de acidos grasos saturados (AGS) en los fL disminuye la fluidez membranal, mientras que los FL que contienen acidos grasos insaturados (AGl) forman membranas mas fluidas.

El efecto beneficioso del acido oleico (Ole) se observa en las celulas que tienen la capacidad de tamponar un exceso de AGl exogenos en forma de ftpidos neutros (trigliceridos (TG) o esteroles esterificados (EE) acumulados en forma de gotitas lipfdicas (GL)). En las celulas que no tienen esta capacidad, el exceso de oleato exogeno produce al final una proliferacion de las membranas intracelulares, la cual provocando un estres celular va a desencadenar la apoptosis.

Figura 2: Las vias de la UPR en los eucariotas superiores (Pineau & Ferreira, 2010).

Figura 3: El acido oleico, OAG y LPA restauran el crecimiento de levaduras lipo-intoxicadas.

A) Estructuras moleculares del acido oleico, del OAG y del LPA. B) Restauracion del crecimiento (despues de 3 dfas) de levaduras hemlA cultivadas en condiciones de acumulacion de AGS, en presencia de concentraciones crecientes de acido oleico, OAG y LPA.

Figura 4: El OAG y el LPA no son toxicos para las celulas que no sintetizan trigliceridos.

Se depositaron gotitas de 5 pL de OAG, de LPA o de acido oleico a partir de soluciones madre en las concentraciones indicadas, en la superficie de un medio de agar-agar sobre el cual habfa sido previamente extendida la cepa QM. Despues de tres dfas se pudieron observar halos de inhibicion del crecimiento (ausencia de colonias) en el caso del acido oleico. Por el contrario, dichos halos no se observaron en presencia de LPA o de OAG.

Figura 5: El OAG y el LPA reducen la respuesta UPR en levaduras lipointoxicadas.

Una construccion plasirndica que lleva un gen de fusion, correspondiente a la secuencia codificadora del gen LacZ colocada bajo la dependencia de un promotor artificial que contema 4 elementos UPR (UPRE), se introdujo en una cepa hemlA de levadura como ha sido descrito por Pineau et al., (2009). Durante una induccion de la respuesta uPr, se activo el factor de transcripcion Hac1p/XBP1p y se fijo sobre los elementos UPR del gen de fusion, produciendo la transcripcion del gen LacZ. Como el gen LacZ codifica la p-galactosidasa, el nivel de induccion de la UPR se mide por tanto por deteccion de la actividad enzimatica correspondiente. La cepa hemlA de levadura se cultivo en un medio ftquido que inducfa la acumulacion de AGS sin otra adicion (0), o en el mismo medio suplementado con 200 pM de acido oleico, de OAG o de LPA, como se ha indicado.

Figura 6: El OAG previene la apoptosis de las celulas p-pancreaticas en presencia de acidos grasos saturados, reduciendo la proporcion de induccion de la UPR.

Las celulas p-pancreaticas BRIN-BD11 se cultivaron en condiciones de control o en presencia de una fuente exogena de acido graso saturado (acido palmftico, 200 pM), como ha sido descrito por Dhayal & Morgan (2011), con el fin de generar condiciones de lipo-intoxicacion con o sin adicion de OAG. A) La proporcion de celulas muertas se estimo en ausencia (control) o en presencia de acido palmftico, para concentraciones crecientes de OAG. B) Las tasas de fosforilacion de eIF2a se analizaron igualmente en las diferentes condiciones por transferencia de Western, en presencia o ausencia (0) de OAG, y se normalizaron a las cantidades de eIF2a totales. Estando correlacionada la proporcion de fosforilacion con la intensidad de la respuesta UPR, este experimento demuestra que el OAG reduce la UPR inducida por la acumulacion de acido palmftico.

Figura 7: El oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo y el monooleato de manida no inducen la movilizacion calcica.

Las celulas epiteliales humanas, CFBE, se cargaron con una sonda calcica fluorescente y luego se expusieron a 100 pM de OAG, oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo, monooleato de manida o N,N-dietanololeamida. A continuacion, se registraron las evoluciones de la intensidad de fluorescencia, asociadas a los movimientos calcicos intracelulares (vease Vachel et al., 2013). Los resultados obtenidos indican que el oleato de 3-hidroxi-2,2- bis(hidroximetil)propilo y el monooleato de manida ejercen una influencia muy debil sobre el vaciado de las reservas

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calcicas celulares (en otras palabras, no inducen la movilizacion calcica celular) con relacion al OAG, y que por tanto estos compuestos presentan riesgos muy limitados de toxicidad celular.

Figura 8: Los oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo, monooleato de manida y N,N-dietanololeamida previenen la apoptosis de las celulas p-pancreaticas en presencia de acidos grasos saturados.

Las celulas p-pancreaticas BRIN-BD11 se cultivaron en presencia de una fuente exogena de acido graso saturado (acido palmttico, 200 pM), como han descrito Dhayal & Morgan (2011), con el fin de generar condiciones de lipo- intoxicacion, antes de la adicion de oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo, monooleato de manida o N,N- dietanololeamida. Completando los datos de la figura 6, estos resultados indican que los tres compuestos de interes previenen la muerte de las celulas p-pancreaticas inducidas por lipo-intoxicacion.

Figura 9: El monooleato de manida restaura la maduracion de la pro-insulina en condiciones de lipo- intoxicacion de celulas p-pancreaticas de mamifero.

Se cultivaron celulas p-pancreaticas MIN6 en condiciones de control (0) o, alternativamente, en presencia de una fuente exogena de acido palmftico a 400 pM (P), durante 48 horas, como han descrito Boslem et al. (2011), con el fin de generar condiciones de lipo-intoxicacion. Durante las ultimas 24 horas de cultivo, se anadieron o no 200 pM de OAG, de LPA o de monooleato de manida, como se habfa mencionado. En estas condiciones, las muestras de protema se sometieron a una transferencia de Western y los resultados obtenidos indican que solo el monooleato de manida restaura la maduracion de la pro-insulina en insulina en condiciones de lipo-intoxicacion.

Figura 10: La N,N-dietanololeamida resiste la actividad hidrolitica de las lipasas.

Se sometieron 15 pmol de OAG y de N,N-dietanololeamida (+), o no (-), a una exposicion de 10 U de de lipasas durante 30 minutos a 37°C. Despues de la incubacion, las especies lipfdicas se extrajeron de las muestras antes de separarlas por cromatograffa en capa fina. Se anotan las especies moleculares de interes y los resultados indican que, contrariamente al OAG, la N,N-dietanololeamida resiste la hidrolisis por lipasas.

Ejemplos

A/ Cepas de levaduras y linajes de celulas de mamiferos

Las cepas de la levadura Saccharomyces cerevisiae recogidas en la Tabla 1 se utilizan para los diferentes ensayos de restauracion del crecimiento, para la puesta de manifiesto de las toxicidades, para el analisis del contenido de acidos grasos de los fosfolfpidos celulares, asf como para los ensayos de desencadenamiento de la “Unfolded Protein Response" (UPR).

El estado de activacion de la UPR y la induccion de la muerte celular por lipo-intoxicacion se analizaron igualmente en los linajes p-pancreaticos de rata, BRIN-BD11.

Ademas, los ensayos de movilizacion calcica se realizaron en celulas epiteliales humanas, CFBE, y los experimentos de maduracion de la insulina se realizaron en un linaje p-pancreatico de muridos, MIN6.

Tabla 1: Cepas de levaduras utilizadas

Cepa

Genotipo Origen

hemlA

MATa trpl his3 ura3 leu2 hem1::LEU2 FY1679a x FYHO4

QM (H1246 W303)

MATa are1::HIS3 are2::LEU2 dga1::KanMX4 lro1::TRP1 ScanBi Ltd., Alnarp, Suecia

ADE2 met ura3

WT (G175 W303)

MATa ADE2 METhis3 leu2 ura3 trpl ScanBi Ltd,. Alnarp, Suecia

B/ Lipo-intoxicaciones de levaduras hemlA

La cepa que lleva la mutacion hemlA se cultiva, en condiciones aerobias, bajo agitacion y a 28°C, en un medio lfquido YPGA (YPG (extracto de levadura al 1% (m/v), peptona al 1% (m/v) y glucosa al 2% (m/v)) suplementado con acido 8-aminolevulmico (ALA) a 80 pg/mL). La lipo-intoxicacion por acidos grasos saturados (AGS) es provocada por disminucion de los acidos grasos insaturados (AGI) - cuya smtesis es dependiente de la presencia de hemo (principalmente el agrupamiento prostetico de la enzima Ole1p) - por transferencia en medio YPG+ (YPG suplementado con ergosterol a 80 pg/mL para compensar la disminucion de esterol obtenida en esta condicion). La lipo-intoxicacion puede ser inducida en medio solido YPG+ + agar-agar al 2% (m/v) transfiriendo 3500 celulas (hemlA procedentes de un precultivo en YPGA)/cm2 o, alternativamente, en medio lfquido inoculando 2.106

celulas/mL de YPG+. Clasicamente, los efectos de la lipo-intoxicacion por AGS se analizan 7 horas despues de la transferencia en medio YPG+. La capacidad de un compuesto en contrarrestar los efectos perjudiciales de una lipo- intoxicacion por AGS se evalua sucesivamente a la adicion de este compuesto sobre (o en) el medio de transferencia YPG+, despues de la siembra con las celulas.

5 C/ Lipo-intoxicaciones de celulas p-pancreaticas de rata por acido palmitico

1) Preparacion de los reactivos lipidicos:

Las especies lip^dicas se preparan en etanol antes de ser complejadas con seroalbumina bovina (BSA, inicialmente desprovista de acidos grasos) por una incubacion de 1 hora a 37°C. La reserva de acido palmttico se obtiene por adicion de un volumen de etanol antes de que el conjunto sea calentado a 70°C para su homogeneizacion. Las 10 soluciones de OAG y de LPA se preparan en etanol al 100% a temperatura ambiente. Para las incubaciones de celulas de mairnferos, las concentraciones finales de BSA y de etanol en el medio de cultivo se mantienen respectivamente en 1 y 0,5% (m/v).

2) Ensayos de viabilidad celular:

El linaje de celulas p-pancreaticas (BRIN-BD11) de rata se cultiva en medio RPMI-1640 completo que contiene 15 glucosa 11 mM y suplementado con 10% (v/v) de suero de ternero fetal (STF), L-glutamina 2 mM, 100 U/mL de penicilina y 100 pg/mL de estreptomicina. Para cada experimento las celulas se siembran inicialmente a una densidad de 0,5 x 105 celulas/mL en placas de 6 pocillos durante 24 horas. A continuacion, el medio completo se reemplaza por un equivalente desprovisto de STF pero conteniendo los reactivos lipfdicos de interes, en las concentraciones deseadas, complejados con BSA. En el caso de las condiciones de control se utilizan entonces 20 cantidades identicas de BSA y etanol. Al final de las incubaciones se recoge el conjunto de celulas (muertas y vivas) y se centrifuga a 300 g durante 5 minutos. El sedimento celular se vuelve a poner en suspension en 200 pL de medio, y despues el ADN de las celulas muertas (que han perdido la integridad de su membrana plasmatica) se marca con yoduro de propidio (YP) anadiendo 200 pL de una solucion de YP a 20 pg/mL del tampon FACS (solucion salina tamponada con fosfato (PBS), 2% (v/v) de STF, nitruro de sodio 10 mM). Despues de una incubacion de 10 25 minutos sobre hielo, las muestras asf obtenidas se analizan por citometna de flujo. Para la cuantificacion se utiliza un aparato Beckman Coulter EPICS XL MCL, un canal FL3 sirve para la deteccion de las emisiones de YP intercalado en el ADN y el analisis se realiza con ayuda del programa informatico EXPO32 ADC (Applied Cytometry Systems V 1.1, version 207).

3) Transferencia de Western:

30 Las celulas BRIN-BD11 se siembran a una densidad de 0,5 x 105 celulas/mL en frascos T25 durante 24 horas. Como se ha indicado precedentemente, el medio completo se reemplaza luego por un equivalente desprovisto de STF pero que contiene los reactivos lipfdicos de interes. Despues de 6 horas de incubacion se realiza la extraccion de las protemas totales con ayuda de un tampon de lisis (Tris 20 mM, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM y Triton-X al 1% (v/v)) que contiene inhibidores de proteasas y de fosfatasas. Estas protemas se someten entonces a una electroforesis en 35 gel de acrilamida al 12% NuPAGE® Novex® Bis-Tris Gels (Invitrogen) antes de ser transferidas a una membrana de PVDF y despues sondadas con ayuda de los anticuerpos anti-fosfoeIF2a (Cell Signalling (New England Biolabs)) diluidos 1/1000. En un segundo momento las membranas son decapadas con el tampon Re-Blot Plus-Strong (Millipore) antes de ser sondadas una segunda vez con anticuerpos anti-eIF2a total (Cell Signalling (New England Biolabs)) diluidos 1/1000. El analisis por densitometna de la abundancia relativa de las formas fosforiladas o no 40 fosforiladas de la protema eIF2a se efectua con el sistema de analisis Fluor-S Multi-imager combinado con el programa informatico Quantify One (Biorad UK Ltd).

D/ Seguimiento de la maduracion de la insulina (vease la Figura 9)

De la misma manera que se ha descrito anteriormente para la lipo-intoxicacion de celulas BRIN-BD11, el linaje MIN6 se cultiva en un medio de DMEM-alto contenido de glucosa (6 mM) completo, suplementado con 10% (v/v) de suero 45 de ternero fetal (STF), HEPES 15 mM, 100 U/mL de penicilina y 100 pg/mL de estreptomicina, y la lipo-intoxicacion se induce por exposicion a acido palmitico 400 pM, acoplado a la BSA (0,92% (p/v) final), durante 48 horas, con o sin adicion de compuesto de interes (vease Boslem et al., 2011). A continuacion, se recogen las celulas y se realiza una transferencia de Western como se ha indicado anteriormente, usando anticuerpos antiinsulina con el fin de seguir la maduracion de la pro-insulina en insulina.

50 E/ Ensayo de movilizacion calcica (vease la Figura 7)

El linaje de celulas epiteliales humanas, CFBE, se cultiva en una caja con fondo de vidrio en un medio MEM + GlutaMAX™ -1 (aMEM; Invitrogen) suplementado con 10% de suero de ternero fetal (STF), 100 UI/mL de penicilina, 100 pg/mL de estreptomicina y 0,5 pg/mL de puromicina. Las celulas se cargaron inicialmente con 3 pM de sonda calcica fluorescente ester fluo-4-acetoximetilico (FluoProbes®) durante 20 minutos a temperatura ambiente. A 55 continuacion, se registra la movilizacion calcica por la adquisicion de las evoluciones de intensidad de fluorescencia, para una zona de interes, gracias a un microscopio invertido Zeiss Axio observer Z1, para las secuencias de estimulacion de laser de 250 ms, durante 4 minutos. Los datos recogidos se interpretan entonces utilizando el

programa informatico Carl Zeiss AxioVision Release 4.8.2 y el modulo de adquisicion fisiologica asociado. Finalmente se normalizan los perfiles de intensidad dividiendo la intensidad en cada p^xel en un momento t (F) por la intensidad de fluorescencia en ese pixel antes de la estimulacion (Fo). Las imagenes ((F-Fo)/Fo) as^ obtenidas permiten obtener un perfil de intensidad/movilizacion calcica, sobre el conjunto del registro (vease Vachel et al., 5 2013).

F/ Restauracion(es) del crecimiento

1) Cribado de compuestos: Despues de la induccion de una lipo-intoxicacion por AGS (para hemlA cultivadas en un medio solido) se depositan en la superficie del agar-agar gotas de 5 pL de soluciones de diferentes compuestos a 10 mM en dimetilsulfoxido (DMSO) o en etanol (EtOH). La capacidad de un compuesto en

10 contrarrestar la detencion del crecimiento celular inducido por lfpidos se estima por la aparicion de un halo de

colonias de hemlA en el emplazamiento del deposito de dicho compuesto despues de 3 dfas de cultivo a 28°C (vease Deguil et al., 2011).

2) Cinetica de proliferacion: Conjuntamente con la induccion de una lipo-intoxicacion por AGS (para hemlA en medio lfquido) se anaden diferentes compuestos a los cultivos a una concentracion inicial de 200 pM. El

15 seguimiento de la proliferacion se realiza midiendo la densidad celular por espectrometna, a intervalos de tiempo

regulares (todas las horas de la duracion de la observacion). A una longitud de onda de 600 nm, una unidad de densidad optica (DO600 nm) corresponde a 2.107 celulas/mL.

G/ Ensayo de toxicidad

Paralelamente, las cepas naturales (WT) y QM se cultivan, en condicion aerobia, bajo agitacion y a 28°C, en un 20 medio lfquido YPG antes de sembrar 3500 celulas por cm2 de YPG + agar-agar al 2% (m/v). Despues de esta transferencia sobre medio solido, se depositan en la superficie del agar-agar gotas de 1 pL de soluciones de diferentes compuestos a 1, 10 y 100 mM en DMSO o EtOH. Separadamente, se realizan igualmente depositos de DMSO y de EtOH con el fin de evaluar la toxicidad intrmseca de estos dos disolventes. Despues de 3 dfas de cultivo a 28°C, se evalua la toxicidad de los compuestos ensayados comparando los diametros de los halos de inhibicion 25 del crecimiento obtenidos para los depositos de los disolventes en bruto con los de los depositos de las diferentes concentraciones de los compuestos ensayados. Contrariamente a la cepa WT, la cepa QM es incapaz de tamponar un exceso de acido oleico exogeno bajo la forma de lfpidos neutros (trigliceridos (TG) o esteres de esteroles (EE)) en las gotitas lipfdicas. Asf, en el caso de una ausencia de toxicidad frente a la cepa WT, la observacion de una toxicidad de un compuesto frente a la cepa QM indica que este compuesto es percibido como una fuente de acido 30 graso libre por las levaduras.

H/ Extraccion de lipidos totales

La cepa hemlA se cultiva en medio lfquido YPGA, YPG+ o YPG+ + 200 pM del compuesto de ensayo, en condiciones aerobias, bajo agitacion y a 28°C durante 7 horas, a partir de una concentracion celular inicial de 2.106 celulas/mL. Al final del cultivo, se recogen 108 celulas con el fin de realizar la extraccion de los lfpidos totales. 35 Despues de haber puesto las celulas en suspension en 1 mL de agua destilada a 4°C, se anaden 500 pL de bolas de vidrio (0 0,6 mm) y el conjunto se somete luego a 3 secuencias de 20 segundos a 5000 revoluciones/minuto en un agitador (los tubos se mantienen sobre hielo entre cada una de las 3 secuencias). El lisado celular asf obtenido, completado con el agua de lavado de las bolas (1 mL), se transfiere luego a un tubo de vidrio de 40 mL (Corex™) antes de realizar la extraccion de los lfpidos utilizando una relacion metanol:cloroformo 2:1 (v/v). Inicialmente, se 40 anaden 6 mL de metanol y el conjunto se agita con vortice durante 30 segundos y luego se incuba durante 15 minutos a 65°C. Una vez que la mezcla se ha enfriado a la temperatura ambiente, se anaden 3 mL de cloroformo y despues el conjunto se agita de nuevo con vortice durante 30 segundos antes de dejar que se desarrolle la extraccion durante 16 horas. Posteriormente, la muestra se centrifuga durante 12 minutos a 10.000 g antes de transferir el lfquido sobrenadante a un nuevo tubo Corex™. Despues de la adicion de 2 mL de cloroformo y luego de 45 4 mL de agua destilada, el conjunto se agita con vortice durante 30 segundos y luego se centrifuga durante 8

minutos a 3000 g. Despues de eliminacion de la fase superior resultante, la fase organica inferior se recoge en un tubo de vidrio para hemolisis. Finalmente, se evapora el disolvente bajo corriente de nitrogeno a 80°C para obtener las muestras de lfpidos celulares totales.

I/ Purificacion de fosfolipidos y analisis por espectrometna de masas

50 Las muestras de lfpidos celulares totales se vuelven a poner en suspension en 1 mL de diclorometano siendo agitadas con vortice durante 30 segundos. El conjunto se deposita sobre una columna de sflice (BOND ELUT-SI, 100 mg, 1 mL) pre-acondicionada con 3 mL de metanol y luego 2 mL de diclorometano sucesivamente. La fraccion retenida por la columna se lava a continuacion con 2 mL de diclorometano y luego con 3 mL de acetona sucesivamente. Finalmente, se depositan sobre la columna 2 mL de una mezcla de cloroformo/metanol/agua 50:45:5 55 (v/v/v) y los fosfolfpidos asf eluidos se recogen en un tubo de vidrio para hemolisis. El disolvente se evapora bajo

nitrogeno a 80°C para obtener las muestras de fosfolfpidos celulares.

Una vez puesta de nuevo en suspension en 100 pL de mezcla Mix' (isopropanol/acetonitrilo/agua 2:1:1 (v/v/v) + trietilamina al 1% (v/v)) o de mezcla Mix+ (isopropanol/acetonitrilo/agua 2:1:1 (v/v/v) + acido formico al 1% (v/v)), se

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analizan las muestras por espectrometna de masas (ElectroSpray Ionization-Mass Spectrometry (ESI-MS)), en modo negativo o positivo respectivamente, y los resultados obtenidos sirven para analizar el contenido de acidos grasos de las diferentes especies de fosfolfpidos.

J/ Ensayo de desencadenamiento de la UPR

La cepa hem1A transformada por el plasmido pPW344 [2j URA3 4xUPRE-LacZ (Patil et al., 2004)] se cultiva en medio lfquido YPGA, YPG o YPG + 200 |jM del compuesto de ensayo, en condicion aerobia, bajo agitacion y a 28°C durante 7 horas, a partir de una concentracion celular inicial de 2.106 celulas/mL. Al final del cultivo se recogen 108 celulas con el fin de cuantificar la actividad de la beta-galactosidasa (p-gal) resultante de la expresion del transgen LacZ (en el caso de una activacion de la UPR). En un primer momento las celulas se ponen de nuevo en suspension en 1,5 mL de tampon Z (Na2HPO4 60 mM, NaH2PO4 40 mM, KCl 10 mM, MgSO4 1 mM y p-mercaptoetanol 50 mM; solucion a pH 7), y despues una dilucion 1/15 de esta suspension se utiliza para realizar una medida de DO600 nm. En un segundo momento, la suspension se completa con 100 jL de dodecil-sulfato sodico (SDS) al 0,1% (v/v) y 200 jL de cloroformo, y despues se agita con vortice en dos secuencias sucesivas de 30 segundos. Despues de decantacion, 400 jL (volumen V) de la solucion asf obtenida se transfieren a un tubo de vidrio para hemolisis y despues se completan con 600 jL de tampon Z. Se anaden entonces 200 jL del sustrato orto-nitrofenil-p- galactosido (ONPG) a 4 mg/mL de tampon Z antes de que el conjunto sea homogeneizado por agitacion con vortice y luego se incuba al bano mana a 30°C para iniciar la reaccion. Cuando el conjunto presenta una ligera tonalidad amarilla se interrumpe la reaccion (en el tiempo t), a temperatura ambiente, por adicion de 500 pL de Na2CO3 1 M. Finalmente, despues de haber centrifugado las muestras durante 5 minutos a 800 g y recogidos los lfquidos sobrenadantes en nuevos tubos de vidrio para hemolisis, los productos de la reaccion (o-nitrofenol), asf como los residuos celulares se valoran por espectrometna a longitudes de onda 420 y 550 nm respectivamente. Para cada muestra la actividad de p-gal (U) se calcula por la formula U = (1000 x [DO420 nm - (1,75 x DO550 nm)])/(t x V x DO600 nm), expresada en unidades arbitrarias.

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Claims (6)

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   REIVINDICACIONES

   1. Compuesto seleccionado entre monooleato de manida, oleato de 3-hidroxi-2,2-bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietanololeamida para un uso en la prevencion o el tratamiento en un sujeto de smdrome metabolico, diabetes tipo II o esteatosis hepatica.
2. 2. Compuesto segun la reivindicacion 1, para un uso en la prevencion o tratamiento del smdrome metabolico, tfpicamente al menos un smtoma del smdrome metabolico seleccionado entre resistencia a la insulina, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipertension, insuficiencia cardiaca y esteatosis hepatica.
3. 3. Compuesto segun la reivindicacion 1, para un uso en la prevencion o tratamiento de la diabetes tipo 2 en combinacion con un compuesto distinto utilizado convencionalmente en la prevencion o el tratamiento de la diabetes tipo 2, seleccionandose preferiblemente dicho compuesto distinto entre biguanida, glitazona, sulfamida hipoglucemiante, glinida, inhibidor de DPP4, incretinomimetico e inhibidor de a-glucosidasa.
4. 4. Compuesto para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el sujeto es un animal, tfpicamente un mairnfero, preferentemente un ser humano.
5. 5. Composicion que comprende un compuesto seleccionado entre monooleato de manida, oleato de 3-hidroxi- 2,2-bis(hidroximetil)propilo y N,N-dietilanololeamida para un uso en la prevencion o el tratamiento en un sujeto de smdrome metabolico, diabetes tipo 2 y/o esteatosis hepatica.
6. 6. Composicion para uso segun la reivindicacion 5, seleccionandose dicha composicion entre una composicion farmaceutica, un alicamento y un suplemento alimenticio.

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