ES2654464T3 - Derivados de quinazolinona como inhibidores de PARP - Google Patents

Derivados de quinazolinona como inhibidores de PARP Download PDF

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Abstract

Compuestos seleccionados del grupo No. Nombre "A1" 6-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A2" 2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metoxi-3H-quinazolin-4-ona "A3" 8-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A4" 5-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A5" 6-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A6" 8-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A7" 6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-3H-quinazolin-4-ona "A11" 6,8-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A12" 5,6-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A13" 6-fluoro-2-[5-(1-hidroxi-1-metil-etil)-2-piridil]-3H-quinazolin-4-ona "A14" 2-[4-(1-etil-1-hidroxi-propil)fenil]-6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona "A16" 6-fluoro-2-[4-(1-hidroxiciclopentil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A17" 6-fluoro-2-[4-(3-hidroxioxetan-3-il)fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A18" 2-[4-[1-(2-aminoetoxi)-1-metil-etil]fenil]-6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona "A19" 6-fluoro-2-[4-(4-piperidil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A21" 6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-8-metil-3H-quinazolin-4-ona "A23" 5-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A24" 2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona "A25" 6-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona "A26" 5,6,8-trifluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A27" 5,8-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A29" 6-fluoro-2-[4-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona "A31" 6-fluoro-2-[4-(4-hidroximetil-piperidin-1-il)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona "A32" 6-fluoro-8-metil-2-[4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona "A33" 6-fluoro-8-metil-2-(4-piperidin-4-il-fenil)-3H-quinazolin-4-ona "A34" clorhidrato de 6,8-difluoro-2-(4-piperidin-4-il-fenil)-3H-quinazolin-4-ona y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, incluyendo mezclas de los mismos en todas las proporciones.

Description

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De este modo, por ejemplo, en el caso de administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el componente de ingrediente activo se puede combinar con un excipiente inerte oral, no tóxico y farmacéuticamente aceptable, tal como, por ejemplo, etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan triturando el compuesto a un tamaño fino apropiado y mezclándolo con un excipiente farmacéutico triturado de manera similar, tal como, por ejemplo, un carbohidrato comestible, tal como, por ejemplo, almidón o manitol. Un sabor, conservante, dispersante y colorante también pueden estar presentes.
Las cápsulas se producen preparando una mezcla de polvo como se describió anteriormente y rellenando con ella conchas de gelatina conformadas. Los deslizantes y lubricantes, tales como, por ejemplo, ácido silícico altamente disperso, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol en forma sólida, se pueden adicionar a la mezcla de polvo antes de la operación de llenado. También se puede adicionar un desintegrante o solubilizante, tal como, por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio, con el fin de mejorar la disponibilidad del medicamento después de que se haya tomado la cápsula.
Además, si se desea o es necesario, también se pueden incorporar a la mezcla aglutinantes, lubricantes y disgregantes apropiados, así como colorantes. Los aglutinantes apropiados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, tales como, por ejemplo, glucosa o beta-lactosa, edulcorantes hechos de maíz, caucho natural y sintético, tales como, por ejemplo, goma arábiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras, y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitarse a ellos, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o prensando en seco la mezcla, adicionando un lubricante y un disgregante y prensando toda la mezcla para dar comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo mezclando el compuesto triturado de forma apropiada con un diluyente o una base, como se describió anteriormente, y opcionalmente con un aglutinante, tal como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina
o polivinilpirrolidona, un retardante de la disolución, tal como, por ejemplo, parafina, un acelerador de absorción, tal como, por ejemplo, una sal cuaternaria, y/o un absorbente, tal como, por ejemplo, bentonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla en polvo se puede granular humedeciéndola con un aglutinante, tal como, por ejemplo, jarabe, pasta de almidón, mucílago de acadia o soluciones de celulosa o materiales poliméricos y presionándola a través de un tamiz. Como alternativa a la granulación, la mezcla de polvo se puede pasar a través de una máquina de hacer comprimidos, dando grumos de forma no uniforme, que se rompen para formar gránulos. Los gránulos se pueden lubricar mediante la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral con el fin de evitar que se peguen a los moldes de moldeo de comprimidos. A continuación, la mezcla lubricada se prensa para dar comprimidos. Los compuestos según la invención también se pueden combinar con un excipiente inerte de flujo libre y luego se pueden presionar directamente para dar comprimidos sin llevar a cabo las etapas de granulación o prensado en seco. Puede estar presente una capa protectora transparente u opaca que consiste en una capa de sellado de goma laca, una capa de azúcar o material polimérico y una capa brillante de cera. Se pueden adicionar tintes a estos recubrimientos con el fin de poder diferenciar entre diferentes unidades de dosificación.
Se pueden preparar líquidos orales, tales como, por ejemplo, solución, jarabes y elixires, en forma de unidades de dosificación, de modo que una cantidad dada comprenda una cantidad previamente especificada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el compuesto en una solución acuosa con un sabor apropiado, mientras que los elixires se preparan usando un vehículo alcohólico no tóxico. Las suspensiones se pueden formular por dispersión del compuesto en un vehículo no tóxico. También se pueden adicionar solubilizantes y emulsionantes, tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados y polioxietilen sorbitol éteres, conservantes, aditivos de sabor, tales como, por ejemplo, aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina, u otros edulcorantes artificiales y similares.
Las formulaciones de la unidad de dosificación para administración oral pueden, si se desea, encapsularse en microcápsulas. La formulación también se puede preparar de tal manera que la liberación se extienda o retrase, tal como, por ejemplo, mediante revestimiento o incrustación de material particulado en polímeros, cera y similares.
Los compuestos de fórmula I, según la reivindicación 1 y las sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, también se pueden administrar en forma de sistemas de administración de liposomas, tales como, por ejemplo, vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares. Los liposomas se pueden formar a partir de diversos fosfolípidos, tales como, por ejemplo, colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Los compuestos de fórmula I, según la reivindicación 1 y las sales, tautómeros y derivados fisiológicamente funcionales farmacéuticamente aceptables de los mismos también se pueden administrar usando anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los que se acoplan las moléculas del compuesto. Los compuestos también se pueden acoplar a polímeros solubles como portadores de medicamento dirigidos. Tales polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidofenol, polihidroxietilaspartamidofenol o poli(óxido de etileno) polilisina, sustituidos por radicales de palmitoilo. Los compuestos se pueden acoplar adicionalmente a una clase de polímeros biodegradables que son apropiados para lograr la liberación controlada de un medicamento, por ejemplo, ácido poliláctico, poli-épsilon-caprolactona, ácido
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polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidroxipiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloques reticulados o anfipáticos de hidrogeles.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica se pueden administrar como parches independientes para un contacto prolongado y estrecho con la epidermis del receptor. De este modo, por ejemplo, el ingrediente activo se puede liberar del emplasto mediante iontoforesis, como se describe en términos generales en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).
Los compuestos farmacéuticos adaptados para administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, rociadores, aerosoles o aceites.
Para el tratamiento del ojo u otro tejido externo, por ejemplo, la boca y la piel, las formulaciones se aplican preferiblemente como ungüento o crema tópica. En el caso de la formulación para dar un ungüento, el ingrediente activo se puede emplear con una base de crema ya sea parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo se puede formular para dar una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la aplicación tópica en el ojo incluyen gotas oculares, en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un portador apropiado, en particular un solvente acuoso.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la aplicación tópica en la boca abarcan pastillas para deshacer en la boca, pastillas y enjuagues bucales.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal se pueden administrar en forma de supositorios o enemas.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal en las que la sustancia portadora es un sólido comprenden un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de 20-500 micras, que se administra de la manera en la que se inhala tabaco, esto es, por inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente que contiene el polvo mantenido cerca de la nariz. Las formulaciones apropiadas para la administración como pulverización nasal o gotas nasales con un líquido como sustancia portadora comprenden soluciones de ingrediente activo en agua o aceite.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración por inhalación abarcan polvos o nieblas finamente particulados, que se pueden generar mediante diversos tipos de dispensadores presurizados con aerosoles, nebulizadores o insufladores.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración vaginal se pueden administrar como formulaciones de pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizaciones.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que comprenden antioxidantes, soluciones reguladoras, bacteriostáticos y solutos, por medio de los cuales la formulación se vuelve isotónica con la sangre del receptor que se va a tratar; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas, que pueden comprender medios de suspensión y espesantes. Las formulaciones se pueden administrar en recipientes de una sola dosis o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se almacenan en estado congelado en seco (liofilizado), de modo que solo la adición del líquido estéril portador, por ejemplo, agua para inyección, inmediatamente antes de usar es necesario. Las soluciones y suspensiones de inyección preparadas de acuerdo con la receta se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
Es evidente que, además de los constituyentes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones también pueden comprender otros agentes habituales en la técnica con respecto al tipo particular de formulación; de este modo, por ejemplo, las formulaciones que son apropiadas para la administración oral pueden comprender aromas.
Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, según la reivindicación 1 depende de una serie de factores, que incluyen, por ejemplo, la edad y el peso del animal, la afección precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y el procedimiento de administración, y en última instancia es determinado por el médico o veterinario tratante. Sin embargo, una cantidad eficaz de un compuesto según la invención está generalmente en el intervalo desde 0.1 a 100 mg/kg de peso corporal del receptor (mamífero) por día y particularmente por lo general en el intervalo desde 1 a 10 mg/kg de peso corporal por día. De este modo, la cantidad real por día para un mamífero adulto que pesa 70 kg es generalmente entre 70 y 700 mg, donde esta cantidad se puede administrar como una dosis única por día o generalmente en una serie de dosis parciales (tales como, por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco o seis) por día, de modo que la dosis diaria total sea la misma. Se puede determinar una cantidad eficaz de una sal o solvato o de un derivado fisiológicamente funcional de la misma como la
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Agentes de platino
Cisplatino Oxaliplatino Espiroplatino Carboxiftalatoplatino Tetraplatino Ormiplatino Iproplatin Carboplatino ZD-0473 (AnorMED) Lobaplatino (Aetema) Satraplatin (Johnson Matthey) BBR-3464 (Hoffrnann-La Roche) SM-11355 (Sumitomo) AP-5280 (Acceso)
Antimetabolitos
Azacitidina Gemcitabina Capecitabina 5-fluorouracilo Floxuridina 2-clorodesoxiadenosina 6-Mercaptopurina 6-Tioguanina Citarabina 2-fluorodesoxicitidina Metotrexato Idatrexato Tomudex Trimetrexato Deoxicoformicina Fludarabina Pentostatina Raltitrexed Hidroxiurea Decitabina (SuperGen) Clofarabina (Bioenvisión) Irofulven (MGI Pharrna) DMDC (Hoffmann-La Roche) Etinilcitidina (Taiho)
Inhibidores de la topoisomerasa
Amsacrina Epirubicina Etopósido Tenipósido o mitoxantrona Irinotecan (CPT-11) 7-etil-10-hidroxicamptotecina Topotecan Dexrazoxanet (TopoTarget) Rubitecan (SuperGen) Mesilato de exatecan (Daiichi) Quinamed (ChemGenex) Gimatecan (Sigma-Tau) Diflomotecan (Beaufour-Ipsen) TAS-103 (Taiho) Elsamitrucin (Spectrum) J-107088 (Merck & Co)
BNP-1350 (BioNumerik)
Pixantrona (Novuspharrna)
CKD-602 (Chong Kun Dang)
Análogo de rebecamicina (Exelixis) BBR-3576 (Novuspharrna)
KW-2170 (Kyowa Hakko)
Antibióticos antitumor
Dactinomicina (Actinomicina D) Doxorubicina (Adriamycin) Deoxirrubicina Valrubicina Daunorubicina (Daunomicina) Epirrubicina Terarubicina Idarubicina Rubidazon Plicamicina Porfiromicina Cianomorfolinodoxo-rubicina Mitoxantron (Novantron) Amonafida Azonafida Antrapirazol Oxantrazol Losoxantrona Sulfato de bleomicina (Blenoxan) Ácido Bleomicinico Bleomicina A Bleomicina B Mitomicina C MEN-10755 (Menarini) GPX-100 (Gema Pharmaceuticals)
Agentes antimitóticos
Paclitaxel Docetaxel Colchicina Vinblastina Vincristina Vinorelbina Vindesina Dolastatina 10 (NCI) Rhizoxin (Fujisawa) Mivobulin (Warner-Lambert) Cemadotina (BASF) RPR 109881A (Aventis) TXD 258 (Aventis) SB 408075 (GlaxoSmithKline) E7010 (Abbott) PG-TXL (Cell Therapeutics) IDN 5109 (Bayer) A 105972 (Abbott) A 204197 (Abbott) LU 223651 (BASF) D 24851 (ASTA Medica) ER-86526 (Eisai) Combretastatina A4 (BMS) Isohomohalicondrina-B(PharmaMar) ZD 6126 (AstraZeneca) PEG-paclitaxel (Enzon)
Epotilona B (Novartis) T 900607 (Tularik) T 138067 (Tularik) Criptoficina 52 (Eli Lilly) Vinflunina (Fabre) Auristatin PE (Teikoku Hormone) BMS 247550 (BMS) BMS 184476 (BMS) BMS 188797 (BMS) Taxoprexina (Protarqa)
AZ10992 (Asahi) IDN-5109 (Indena) AVLB (Prescient NeuroPharma) Azaepothilon B (BMS) BNP-7787 (BioNumerik) CA-4-profármaco (OXiGENE) Dolastatina-10 (NrH) CA-4 (OXiGENE)
Inhibidores de aromatasa
Aminoglutetimida Letrozol Anastrazol Formestan Exemestano Atamestan (BioMedicines) YM-511 (Yamanouchi)
Inhibidores de timidilato sintasa
Pemetrexed (Eli Lilly) ZD-9331 (BTG) Nolatrexed (Eximias) CoFactor™ (BioKeys)
Antagonistas de ADN
Trabectedina (PharmaMar) Glufosfamida (Baxter International) Albúmina + 32P (Isotope Solutions) Tymectacina (NewBiotics) Edotreotida (Novartis) Mafosfamida (Baxter International) Apaziquona (Spectrum Pharmaceuticals) O6-bencilguanina (Paligent)
Inhibidores de la farnesil transferasa
Arglabina (NuOncology Labs) lonafarniba (Schering-Plough) BAY-43-9006 (Bayer) Tipifarniba (Johnson & Johnson) alcohol perílico (DOR BioPharma)
Inhibidores de bomba
CBT-1 (CBA Pharma) Tariquidar (Xenova) MS-209 (Schering AG) Triclorhidrato de zosuquidar (Eli Lilly) Dicitrato de biricodar (Vertex)
Inhibidores de la histona acetiltransferasa
Tacedinalina (Pfizer) SAHA (Aton Pharma) MS-275 (Schering AG) Butirato de pivaloiloximetilo (Titán) Depsipéptido (Fujisawa)
Inhibidores de la metaloproteinasa Inhibidores de la ribonucleótido reductasa
Neovastat (Aeterna Laboratories) Marimastat (British Biotech) Maltolato de galio (Titán) Triapin (Vion) CMT -3 (CollaGenex) BMS-275291 (Celltech) Tezacitabina (Aventis) Didox (Molecules for Health)
Agonistas/antagonistas de TNF-alfa
Virulizina (Lorus Therapeutics) CDC-394 (Celgene) Revimida (Celgene)
Antagonistas del receptor de la endotelina-A
Atrasentann (Abbott) ZD-4054 (AstraZeneca) YM-598 (Yamanouchi)
Agonistas del receptor de ácido retinoico
Fenretinida (Johnson & Johnson) LGD-1550 (ligando) Alitretinoína (Ligando)
Inmunomoduladores
Interferón Oncófago (Antigenics) GMK (Progenics) Vacuna para el Adenocarcinoma (Biomira) CTP-37 (AVI BioPharma) JRX-2 (Immuno-Rx) PEP-005 (Peplin Biotech) Vacunas Synchrovax (CTL Immuno) Vacuna para Melanoma (CTL Immuno) Vacuna p21-RAS (GemVax) Terapía de Dexosoma (Anosys) Pentrix (Australian Cancer Technology) JSK-154 (Tragen) Vacuna contra cáncer (Intercell) Norelina (Biostar) BLP-25 (Biomira) MGV (Progenics) β-Aletina (Dovetail) CLL-Thera (Vasogen)
Agentes hormonales y antihormonales
Estrógenos Estrógenos conjugados Etinilestradiol Clorotrianiseno Idenestrol Caproato de hidroxiprogesterona Medroxiprogesterona Testosterona Propionato de testosterona Fluoximesterona Metiltestosterona Dietilestilbestrol Megestrol Tamoxifeno Toremofina Dexametasona Prednisona Metilprednisolona Prednisolona Aminoglutetimida Leuprolida Goserelina Leuporelina Bicalutamida Flutamida Octreotida Nilutamida Mitotano P-04 (Novogen) 2-Metoxiestradiol (EntreMed) Arzoxifeno (Eli Lilly)
Agentes fotodinámicos
Talaporfina (Light Sciences) Teralux (Theratechnologies) Motexafina-Gadolinio (Pharmacyclics) Bacteriofeoforbicida de Pd (Yeda) Texafirina de Lutecio (Pharmacyclics) Hipericina
Inhibidores de tirosina quinasa
Imatinib (Novartis) Leflunomida (Sugen/Pharmacia) ZDI839 (AstraZeneca) Erlotinib (Oncogene Science) Canertjnib (Pfizer) Escualamina (Genaera) SU5416 (Pharmacia) SU6668 (Pharmacia) ZD4190 (AstraZeneca) Kahalida K (PharmaMar) CEP-701 (Cephalon) CEP-751 (Cephalon) MLN518 (Millenium) PKC412 (Novartis) Fenoxodiol O Trastuzumab (Genentech) C225 (ImClone) rhu-Mab (Genentech)
ZD6474 (AstraZeneca) Vatalanib (Novartis) PKI166 (Novartis) GW2016 (GlaxoSmithKline) EKB-509 (Wyeth) EKB-569 (Wyeth)
MDX-H210 (Medarex) 2C4 (Genentech) MDX-447 (Medarex) ABX-EGF (Abgenix) IMC-1C11 (ImClone)
Agentes varios
SR-27897 (inhibidor de CCK-A, Sanofi-Synthelabo) Tocladesina (agonista de AMP cíclico, Ribapharm) Alvocidib (inhibidor de CDK, Aventis) CV-247 (inhibidor de COX-2, Ivy Medical) P54 (inhibidor de COX-2, Phytopharm) CapCellMR (estimulante de CYP450, Bavarian Nordic) GCS-IOO (antagonista de gal3, GlycoGenesys) Inmunógeno de G17DT (inhibidor de gastrina, Aphton) Efaproxiral (oxigenador, Allos Therapeutics) PI-88 (inhibidor de heparanasa, Progen) Tesmilifen (antagonista de histamina, YM BioSciences) Histamina (receptor agonista de histamina H2, Maxim) Tiazofurina (inhibidor de IMPDH, Ribapharm) Cilengitida (antagonista de integrina, Merck KGaA) SR-31747 (antagonista de IL-1, Sanofi-Synthelabo) CCI-779 (inhibidor de quinasa mTOR, Wyeth) Exisulind (inhibidor de PDE-V, Cell Pathways) BCX-1777 (inhibidor de PNP, BioCryst) Ranpirnasa (estimulante de ribonucleasa, Alfacell) Galarrubicina (inhibidor de la síntesis de ARN, Dong-A) Tirapazamina (agente reductor, SRI International) N-acetilcisteína (agente reductor, Zambon) R-Flurbiprofeno (inhibidor de NFkappaB, Encore) 3CPA (inhibidor de NF-kappaB, Active Biotech) Seocalcitol (agonista del receptor de la vitamina D, Leo) 131-I-TM-601 (antagonista de ADN, TransMolecular) Eflornitina (inhibidor de ODC, ILEX Oncology) Ácido minodrónico (inhibidor de osteoclastos, Yamanouchi) Indusulam (estimulante de p-53, Eisai) Aplidina (inhibidor de PPT, PharmaMar) Rituximab (anticuerpo CD20, Genentech) Gemtuzumab (anticuerpo CD33, Wyeth Ayerst) PG2 (promotor de hematopoyesis, Pharmagenesis) ImmunolTM (enjuague bucal de triclosán, Endo)
CP-461 (inhibidor de PDE-V, Cell
Triacetiluridina (profámaco de uridina,
Pathways)
Wellstat)
AG-2037 (inhibidor de GART, Pfizer)
SN-4071 (agente de sarcoma, Signature
BioScience)
WX-UK1 (inhibidor del activador de
TransMID-107TM (inmunotoxina, KS
plasminógeno, Wilex)
Biomedix)
PBI-1402 (estimulante de PMN,
PCK-3145 (promotor de apoptosis, Procyon)
ProMetic LifeSciences)
Bortezomib (inhibidor de
Doranidazol (promotor de apoptosis, Pola)
proteasoma, Millenium)
SRL-172 (estimulante de células T,
CHS-828 (agente citotóxico, Leo)
SR Pharma)
TLK-286 (inhibidor de la glutatión S-
Ácido trans-retinoico (diferenciador, NIH)
transferasa, Telik)
PT-100 (agonista del factor de
MX6 (promotor de apoptosis, MAXIA)
crecimiento, Point Therapeutics)
Midostaurina (inhibidor de PKC,
Apomina (promotor de apoptosis, ILEX
Novartis)
Oncology)
Briostatina-1 (estimulante de PKC,
Urocidina (promotor de apoptosis, Bioniche)
GPC Biotech)
CDA-II (promotor de apoptosis,
Ro-31-7453 (promotor de apoptosis. La
Everlife)
Roche)
SDX-101 (promotor de apoptosis,
Brostalicina (promotor de apoptosis,
Salmedix)
Pharmacia)
Ceflatonina (promotor de apoptosis,
ChemGenex)
Las siguientes abreviaturas se refieren respectivamente a las siguientes definiciones: aq (acuoso), h (hora), g (gramo), l (litro), mg (miligramo), MHz (Megahertz), min. (minuto), mm (milímetro), mmol (milimol), mM (milimolar),
p.f. (punto de fusión), eq (equivalente), ml (mililitro), µl (microlitro), ACN (acetonitrilo), AcOH (ácido acético), CDCl3
5 (cloroformo deuterado), CD3OD (metanol deuterado), CH3CN (acetonitrilo), c-hex (ciclohexano), DCC (diciclohexil carbodiimida), DCM (diclorometano), DIC (diisopropil carbodiimida), DIEA (diisopropiletilamina), DMF (dimetilformamida), DMSO (dimetilsulfóxido), DMSO-d6 (dimetilsulfóxido deuterado), EDC (1-(3-dimetil-amino-propil)3-etilcarbodiimida), ESI (ionización por electroaspersión), EtOAc (acetato de etilo), Et2O (éter dietílico), EtOH (etanol), HATU (hexafluorofosfato de dimetilamino-([1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)-metilene]-dimetilamonio),
10 HPLC (cromatografía líquida de alta resolución), i-PrOH (2-propanol), K2CO3 (carbonato de potasio), LC (cromatografía líquida), MeOH (metanol), MgSO4 (sulfato de magnesio), MS (espectrometría de masas), MTBE (metil tert-butil éter), NaHCO3 (bicarbonato de sodio), NaBH4 (borohidruro de sodio), NMM (N-metil morfolina), RMN (resonancia magnética nuclear), PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio), RT (temperatura ambiente), Rt (tiempo de retención), SPE (extracción en fase sólida), TBTU (tetrafluoro borato de 2-(1
15 H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluromio), TEA (trietilamina), TFA (ácido trifluoroacético), THF (tetrahidrofurano), TLC (cromatografía en capa fina), UV (ultravioleta).
Descripción de los ensayos in vitro
Abreviaturas:
GST = Glutatión-S-transferasa
20 FRET = transferencia de energía de resonancia de fluorescencia
HTRF® = (fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea)
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HEPES = solución reguladora de ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina etanosulfónico
DTT = Ditiotreitol
BSA = albúmina de suero de bovino
CHAPS = detergente;
CHAPS = 3-[(3-colamidopropil) dimetilamonio]-1-propanosulfonato
Streptavidin-XLent® es un conjugado de estreptavidina-XL665 de alto grado para el que las condiciones de acoplamiento se han optimizado para producir un conjugado con prestaciones mejoradas para algunos ensayos, particularmente aquellos que requieren alta sensibilidad.
Prueba de actividad bioquímica de Tanquirasa 1 y 2: ensayo de autoparsilación
El ensayo de autoparsilación se realiza en dos etapas: la reacción enzimática en la que Tanquirasa-1 marcada con GST, Tanquirasa-2 resp. transfiere ADP-ribosa biotinilada a sí misma de NAD biotinilado como cosustrato y la reacción de detección donde se analiza un FRET de tiempo resuelto entre el anti-GST marcado con criptato unido a la etiqueta GST de la enzima y la estreptavidina marcada con Xlent® unida al residuo de parsilación de biotina. La actividad de autoparsilación fue detectable directamente a través del aumento en la señal de HTRF.
El ensayo de autoparsilación se realiza como formato de ensayo HTRF® de 384 pocillos (Cisbio, Codolet, France) en placas de microtitulación de 384 pocillos de bajo volumen nb Greiner y se utiliza para el cribado de alto rendimiento. Tanquirasa-1 marcada con GST 250nM (1023-1327 aa), respectivamente aproximadamente Tanquirasa-2 marcada con GST 250 nM (873-1166 aa) y bio-NAD 5 µM (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) como el cosustrato se incuban en un volumen total de 5 µl (HEPES 50 mM, cloruro de Mg 4 mM, Pluronic F-68 al 0.05%, DTT 1.4 mM, DMSO al 0.5%, pH 7.7) en ausencia o presencia del compuesto de prueba (10 concentraciones de dilución) durante 90 minutos a 30 °C. La reacción se detiene mediante la adición de 1 µl de solución EDTA 50 mM. 2 µl de la solución de detección (SA-Xlent® 1.6 µM (Cisbio, Codolet, France), Anti-GST-K®
7.4 nM (anti-GST marcado con Eu, Cisbio, Codolet, France) en HEPES 50 mM, KF 800 mM, BSA al 0.1%, EDTA 20 mM, CHAPS al 0.1%, pH 7.0). Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, el HTRF se mide con un lector multimodo Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) a una longitud de onda de excitación de 340 nm (modo láser) y longitudes de onda de emisión de 615 nm y 665 nm. La proporción de las señales de emisión se determina. El valor completo usado es la reacción libre de inhibidor. El valor cero farmacológico usado es XAV-939 (Tocris) en una concentración final de 5 µM. Los valores inhibidores (IC50) se determinan usando el programa Symyx Assay Explorer® o Condosseo® de GeneData.
Medición de la inhibición celular de la tanquirasa
Como las tanquirasas se han descrito para modular el nivel celular de Axin2 (Huang et al., 2009; Nature), el aumento del nivel de Axin2 se usa como lectura para la determinación de la inhibición celular de las tanquirasas en un ensayo basado en Luminex.
Las células de la línea celular de carcinoma de colon DLD1 se siembran en placas de 96 pocillos con 1.5x104 células por pocillo. Al día siguiente, las células se tratan con una dilución en serie del compuesto de prueba en siete etapas como triplicado con una concentración final de DMSO de 0.3%. Después de 24 horas, las células se lisan en solución reguladora de lisis (Tris/HCl 20 mM, pH 8.0, NaCl 150 mM, NP40 al 1%, glicerol al 10%) y los lisados se clarifican por centrifugación a través de una placa de filtro de 96 pocillos (0.65 µm). La proteína Axin2 se aísla de los lisados celulares mediante la incubación con un anticuerpo monoclonal anti-Axin2 (R&D Systems # MAB6078) que se une a perlas carboxi fluorescentes. A continuación, la Axin2 unida se detecta específicamente con un anticuerpo policlonal anti-Axin2 (Cell Signaling # 2151) y un anticuerpo secundario fluorescente de PE apropiado. La cantidad de proteína Axin2 aislada se determina en una máquina Luminex200 (Luminex Corporation) de acuerdo con las instrucciones del fabricante contando 100 eventos por pocillo. La inhibición de Tanquirasa por los compuestos de prueba da como resultado niveles más altos de Axin2 que se correlaciona directamente con un aumento de la fluorescencia detectable. Como controles, las células se tratan solo con solvente (control neutro) y con un inhibidor de referencia de tanquirasa IWR-2 (3E-06 M) que se refiere como control para el aumento máximo de Axin2. Para el análisis, los datos obtenidos se normalizan frente al control de solvente no tratado y se ajustan para la determinación de los valores de EC50 usando el software Assay Explorer (Accelrys).
Descripción del ensayo PARP1
Prueba de actividad bioquímica de PARP-1: ensayo de autoparsilación
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El ensayo de autoparsilación se lleva a cabo en dos etapas: la reacción enzimática en la que Parp-1 etiquetada con His transfiere ADP-ribosa/ADP-ribosa biotinilada a sí misma a partir de NAD/NAD biotinilada como cosustrato y la reacción de detección en un momento la FRET de tiempo resuelto entre el anticuerpo anti-His marcado con criptato unido a la etiqueta His de la enzima y la estreptavidina marcada con Xlent® unida al residuo de parsilación de biotina se analiza. La actividad de autoparsilación es detectable directamente a través del aumento en la señal de HTRF.
El ensayo de autoparsilación se realiza como formato de ensayo HTRF® de 384 pocillos (Cisbio, Codolet, France) en placas de microtitulación de 384 pocillos de bajo volumen nb Greiner. Parp-1 etiquetado con His 35 nM (humano, recombinante, Enzo Life Sciences GmbH, Lörrach, Germany) y una mezcla de bio-NAD 125 nM (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) y NAD 800 nM como cosustrato se incuban en un volumen total de 6 µl (Tris/HCl 100 mM, cloruro de Mg 4 mM, IGEPAL® CA630 al 0.01%, DTT 1 mM, DMSO al 0.5%, pH 8, 13 ng/µl de ADN activado (BPS Bioscience, San Diego, EE. UU.)), en ausencia o presencia del compuesto de prueba (10 concentraciones de dilución) durante 150 min a 23 °C. La reacción se detiene mediante la adición de 4 µl de la solución de detención/detección (SA-Xlent® 70 nM (Cisbio, Codolet, France), Anti-His-K® 2.5 nM de (anti-His etiquetado con Eu, Cisbio, Codolet, France) en HEPES 50 mM, KF 400 mM, BSA al 0.1%, EDTA 20 mM, pH 7.0). Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, el HTRF se midió con un lector multimodo Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) a una longitud de onda de excitación de 340 nm (modo láser) y longitudes de onda de emisión de 615 nm y 665 nm. La proporción de las señales de emisión se determina. El valor completo usado es la reacción libre de inhibidor. El valor cero farmacológico usado es Olaparib (LClabs, Woburn, EE. UU.), en una concentración final de 1 µM. Los valores inhibidores (IC50) se determinan usando el programa Symyx Assay Explorer® o Condosseo® de GeneData.
Descripción del ensayo ELISA TNKS1 y TNKS2
Ensayo de actividad bioquímica de TNKS 1 y 2: actividad ELISA (ensayo de autoparsilación)
Para el análisis de la actividad de autoparsilación de TNKS 1 y 2 se realiza un ELISA de actividad: en la primera etapa, se captura la TNKS etiquetada con GST en una placa recubierta con Glutatión. A continuación, el ensayo de actividad con NAD biotinilado se realiza en ausencia/presencia de los compuestos. Durante la reacción enzimática, el TNT etiquetado con GST transfiere ADP-ribosa biotinilada a sí misma a partir de NAD biotinilado como cosustrato. Para la detección, se adiciona el conjugado de estreptavidina-HRP que se une a la TNKS biotinilada y de este modo se captura en las placas. La cantidad de TNKS autoparsilada resp. biotinilada se detecta con un sustrato de luminiscencia para HRP. El nivel de la señal de luminiscencia se correlaciona directamente con la cantidad de TNKS autoparsilada y, por lo tanto, con la actividad de TNKS.
El ELISA de actividad se realiza en placas de microtitulación recubiertas con glutatión de 384 pocillos (Express capture Glutathione coated plate, Biocat, Heidelberg, Germany). Las placas están preequilibradas con PBS. A continuación, las placas se incuban con 50 µl de 20 ng/pocillo deTnks-1 marcada con GST (1023-1327 aa, preparada internamente), respectivamente Tnks-2 marcada con GST (873-1166 aa, preparada internamente) en solución reguladora de ensayo (HEPES 50 mM, cloruro de Mg 4 mM, Pluronic F-68 al 0.05%, DTT 2 mM, pH 7.7) durante la noche a 4 ºC. Las placas se lavan 3 veces con PBS-Tween-20. Los pocillos se bloquean mediante incubación a temperatura ambiente durante 20 minutos con 50 µl de solución reguladora de bloqueo (PBS, Tween20 al 0.05%, BSA al 0.5%). Después, las placas se lavan 3 veces con PBS-Tween-20. La reacción enzimática se realiza en 50 µl de solución de reacción (HEPES 50 mM, cloruro de Mg 4 mM, Pluronic F-68 al 0.05%, DTT 1.4 mM, DMSO al 0.5%, pH 7.7) con bio-NAD 10 mM (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) como cosustrato en ausencia o presencia del compuesto de prueba (10 concentraciones de dilución) durante 1 hora a 30 °C. La reacción se detiene 3 veces lavando con PBS-Tween-20. Para la detección se adicionan 50 µl de 20 ng/µl de estreptavidina, HRP conjugado (MoBiTec, Göttingen, Germany) en PBS/ Tween-20 al 0.05%/BSA al 0.01% y las placas se incuban durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de tres lavados con PBS-Tween-20, se adicionan 50 µl de solución de sustrato de sensibilidad máxima SuperSignal ELISA Femto, (ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany). Después de una incubación de 1 minuto a temperatura ambiente, las señales de luminiscencia se miden con un lector multimodo Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) a 700 nm. El valor completo usado es la reacción libre de inhibidor. El valor cero farmacológico usado es XAV-939 (Tocris) en una concentración final de 5 µM. Los valores inhibidores (IC50) se determinan usando el programa Symyx Assay Explorer® o Condosseo® de GeneData.
Anteriormente y después, todas las temperaturas se indican en °C. En los siguientes ejemplos, "tratamiento convencional" significa: si es necesario se adiciona agua, el pH se ajusta, si es necesario, a valores entre 2 y 10, dependiendo de la constitución del producto final, la mezcla se extrae con acetato de etilo o diclorometano, las fases se separan, la fase orgánica se seca sobre sulfato de sodio y se evapora, y el residuo se purifica por cromatografía en gel de sílice y/o por cristalización. Valores de Rf en gel de sílice; eluyente: acetato de etilo/metanol 9: 1.
Condiciones de HPLC/MS A
columna: Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100 x 3 mm2
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A una suspensión de 6-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona (149 mg, 0.50 mmol) en etano1,2-diol (2 ml), se le adiciona monohidrato de ácido tolueno-4-sulfónico (114 mg, 0.60 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 3 horas a temperatura ambiente. La suspensión luego se calienta a 80 °C y la solución clara
5 resultante se agita a esta temperatura durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se adiciona agua. El precipitado resultante se separa por filtración y se lava con agua. El residuo se somete a cromatografía en una columna de gel de sílice con ciclohexano/acetato de etilo como eluyente para proporcionar la 6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-3H-quinazolin-4-ona como cristales de color blanco; HPLC/MS 2.28 min (B), [M+H] 343;
10 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] 12.60 (s, 1H), 8.15 (d, J=8.6, 2H), 7.82 (m, 2H), 7.72 (td, J=8.7, 3.0, 1H), 7.61 (d, J=8.6, 2H), 4.58 (t, J=5.7, 1H), 3.50 (q, J=5.6, 2H), 3.19 (t, J=5.6, 2H), 1.51 (s, 6H).
Los siguientes compuestos se preparan de manera análoga:
6-fluoro-2-{4-[1-(2-metoxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-3H-quinazolin-4-ona ("A8") (ejemplo de referencia)
imagen18
15 HPLC/MS 2.61 min (B), [M+H] 357;
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] 12.60 (s, 1H), 8.15 (m, 2H), 7.82 (m, 2H), 7.72 (td, J=8.7, 3.0, 1H), 7.59 (m, 2H), 3.45 (dd, J=5.7, 4.2, 2H), 3.29 (dd, J=5.7, 4.2, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.51 (s, 6H); 6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-8-metil-3H-quinazolin-4-ona ("A21")
imagen19
20 HPLC/MS 1.90 min (A), [M+H] 327;
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] 12.60 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.73 -7.44 (m, 4H), 4.56 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.52 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.65 (s, 3H), 1.52 (s, 6H).
Ejemplo 3
Síntesis de 2-(4-tert-butil-fenil) -6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona ("A9") (ejemplo de referencia)
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"A7"
A B B
"A11"
A A B
"A12"
A A B
"A13"
B C C
"A14"
A B A
"A16"
A B B
"A21"
B B A
"A23"
B B B
"A24"
A A A
"A25"
A A A
"A26"
A B A
"A27"
A B B
"A29"
B B A
"A31"
B B A
"A33"
A B A
"A34"
A B B
IC50: < 0.3 µM= A 0.3 -3 µM = B 3-50 µM=C Los compuestos mostrados en la tabla 2 son compuestos particularmente preferidos según la invención. Tabla 3 Inhibición de tanquirasas de algunos compuestos representativos de fórmula I, según la reivindicación 1
Compuesto No.
PARP IC50 TNKS1 ELISA IC50 TNKS2 ELISA IC50
"A1"
B A A
"A7"
B A A
"A2"
B A A
"A4"
B A A
"A3"
B A A
"A5"
A A
"A6"
B A A
"A12"
B A A
"A14"
B A A
"A16"
B A A
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Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuestos seleccionados del grupo
    No.
    Nombre
    "A1"
    6-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A2"
    2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metoxi-3H-quinazolin-4-ona
    "A3"
    8-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A4"
    5-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A5"
    6-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A6"
    8-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A7"
    6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-3H-quinazolin-4-ona
    "A11"
    6,8-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A12"
    5,6-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A13"
    6-fluoro-2-[5-(1-hidroxi-1-metil-etil)-2-piridil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A14"
    2-[4-(1-etil-1-hidroxi-propil)fenil]-6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona
    "A16"
    6-fluoro-2-[4-(1-hidroxiciclopentil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A17"
    6-fluoro-2-[4-(3-hidroxioxetan-3-il)fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A18"
    2-[4-[1-(2-aminoetoxi)-1-metil-etil]fenil]-6-fluoro-3H-quinazolin-4-ona
    "A19"
    6-fluoro-2-[4-(4-piperidil)fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A21"
    6-fluoro-2-{4-[1-(2-hidroxi-etoxi)-1-metil-etil]-fenil}-8-metil-3H-quinazolin-4-ona
    "A23"
    5-cloro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A24"
    2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona
    "A25"
    6-fluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona
    "A26"
    5,6,8-trifluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A27"
    5,8-difluoro-2-[4-(1-hidroxi-1-metil-etil)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A29"
    6-fluoro-2-[4-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona
    "A31"
    6-fluoro-2-[4-(4-hidroximetil-piperidin-1-il)-fenil]-8-metil-3H-quinazolin-4-ona
    "A32"
    6-fluoro-8-metil-2-[4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-fenil]-3H-quinazolin-4-ona
    "A33"
    6-fluoro-8-metil-2-(4-piperidin-4-il-fenil)-3H-quinazolin-4-ona
    "A34"
    clorhidrato de 6,8-difluoro-2-(4-piperidin-4-il-fenil)-3H-quinazolin-4-ona
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, incluyendo mezclas de los mismos en todas las proporciones.
    43
    imagen1
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