ES2653268T3 - 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC-O) 40:1 como biomarcador para el envejecimiento saludable - Google Patents

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Abstract

Un método para diagnosticar un estilo de vida que permita un envejecimiento saludable que comprenda: - determinar el nivel de 1-O-alquil-2 acilglicerofosfocolina 40:1 (PC-O 40:1), en una muestra de suero aislada de un sujeto, y - comparar el PC-O 40:1 del sujeto a un valor de referencia predeterminado, en el que el valor de referencia predeterminado se basa en un nivel de PC-O 40:1 en suero en una población de control, y en el que un nivel de PC-O 40:1 en suero disminuido en la muestra en comparación con el valor de referencia predeterminado indica una mayor probabilidad de permitir un envejecimiento saludable.

Description

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En aspectos adicionales, la presente invención proporciona métodos para:
-retrasar, evitar y/o prevenir el desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, -promover un envejecimiento saludable, -promover la longevidad, -reducir el riesgo de una reducción de la esperanza de vida, -promover interacciones más saludables entre la microflora y el huésped, y/o -prevenir las interacciones intestinales entre la microflora y el huésped.
Típicamente, tales métodos comprenden una etapa de realizar un método de diagnóstico como se describe aquí en un sujeto; y modificar el estilo de vida del sujeto en función de un resultado del mismo. Por ejemplo, el método puede comprender modificar un estilo de vida del sujeto si el resultado del paso de diagnóstico indica:
-una mayor probabilidad del desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, -un estilo de vida que pueda prevenir el envejecimiento saludable, -un riesgo para una reducción en la esperanza de vida, y/o -interacciones intestinales de microflora-huésped menos saludables;
en el sujeto.
La modificación en el estilo de vida en el sujeto puede ser cualquier cambio como se describe en este documento, por ejemplo, un cambio en la dieta, un trabajo diferente, más horas de sueño, menos alcohol, más desafíos, menos estrés, menos tabaquismo, más deportes, un ambiente laboral y/o de vida diferente.
Preferiblemente, el cambio es el uso de al menos un producto nutricional que previamente no se consumía o consumía en diferentes cantidades, por ejemplo un producto nutricional que tiene un efecto sobre el envejecimiento saludable y/o evita los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento (incluidos los productos alimenticios, bebidas, productos alimenticios para mascotas, complementos alimenticios, nutracéuticos, aditivos alimentarios o fórmulas nutricionales).
La modificación de un estilo de vida del sujeto también incluye indicar la necesidad de que el sujeto cambie su estilo de vida, por ejemplo, prescribir, promover y/o proponer un cambio en el estilo de vida según lo descrito anteriormente al sujeto. Por ejemplo, el método puede comprender una etapa de administración o suministro de al menos un producto nutricional como se describió anteriormente al sujeto.
Las ventajas y características adicionales de la presente invención son evidentes a partir de las siguientes tablas, ejemplos y figuras.
La Tabla 1 muestra las características clínicas demográficas de la cohorte de envejecimiento reclutada. Los valores se presentan como la media (±DE) con el rango entre paréntesis. 1BMI = índice de masa corporal, 2Diabetes mellitus: antecedentes de diabetes, plasma de glucosa en ayunas ≥126mg/dl, 3HDL = lipoproteína de alta densidad,4LDL = lipoproteína de baja densidad, 5MMSE = medida de la función cognitiva mediante el Mini-Mental State Examination (MMSE). El puntaje utilizado en el análisis se corrigió por edad y años de educación para personas mayores. El MMSE para el deterioro cognitivo en la tercera edad se calificó como severo (puntaje 0-17), leve (puntaje 18-23) o no presente (puntaje 24-30). MMSE para centenarios ≥ 20 ausencia de deterioro cognitivo severo; <12 presencia de deterioro cognitivo severo. 6CRP = proteína C reactiva 7A-SAA = proteínas de amiloide A séricas (SAA).
La tabla 2 muestra la característica y el resumen del modelo para el modelo discriminante entre los grupos de envejecimiento seleccionados.
La Tabla 3 muestra todos los metabolitos regulados significativamente en la orina para los 3 grupos de edad detectados por 1H-RMN. Para obtener información semicuantitativa, las áreas de los picos en los espectros originales se integraron para estos tres metabolitos y las diferencias con la significación estadística se confirmaron mediante la prueba de suma de rangos de Wilcoxon y se marcaron como sigue *p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
La Tabla 4 muestra todos los metabolitos regulados significativamente en el suero sanguíneo para los 3 grupos de edad detectados por CL-EM. Los valores se expresan como valores medios ±DE, y se marcan de la siguiente manera: *p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
La Tabla 5 muestra los niveles de concentración (ng/100 l) de marcadores inflamatorios en suero para los 3 grupos de edad analizados por UPLC-ESI-EM/EM, y se marcan como sigue: *p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001
La Figura 1 representa perfiles típicos de 600 Mhz en orina de la cohorte de envejecimiento que muestran picos que surgen de moléculas principales de bajo peso molecular, tales como cuerpos cetónicos, ácidos orgánicos,
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aminoácidos, así como metabolitos derivados del metabolismo microbiano tanto en mamíferos como intestinales (PAG Y PCS).
La Figura 2 muestra la puntuación OPLS-DA (A) a partir de los espectros de 1H-RMN urinaria de ancianos y centenarios (B) de adultos jóvenes y centenarios.
La Figura 3 muestra el gráfico de coeficientes derivado de los espectros 1H-RMN urinarios de ancianos y centenarios.
La figura 4 muestra diagramas de caja en información semicuantitativa, derivados de áreas de pico (área bajo la curva) en los espectros originales para PAG y PCS. La significación estadística se confirmó mediante el uso de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon y se detalla en la tabla 3.
La figura 5a, 5b muestra las diferencias en los perfiles lipidómicos (concentraciones medias de lípidos) entre los tres puntos de tiempo de envejecimiento medidos mediante análisis metabolómico dirigido de UPLC-ESI-EM/EM. Los diagramas de caja representan cambios de izquierda a derecha que denotan centenarios, ancianos y personas jóvenes. La concentración está en mM. Los valores medios ±DE de la EM objetivo en los tres grupos de envejecimiento y la significación estadística se confirmaron mediante la prueba de suma de rangos de Wilcoxon y se enumeran en la tabla 4. Solo se muestran diferencias significativas y se evaluaron mediante la prueba U de Mann-Whitney.
La Figura 6 muestra las diferencias en los perfiles lipidómicos (los resultados se expresan en ng/100 l y representan las concentraciones medias de lípidos) entre los tres puntos de tiempo de envejecimiento medidos mediante análisis metabolómico dirigido de UPLC-ESI-EM/EM. Los diagramas de caja representan cambios de izquierda a derecha que indican centenarios, personas mayores y jóvenes. Los valores medios ±DE de la EM objetivo en los tres grupos de envejecimiento y la significación estadística se confirma utilizando la prueba de suma de rangos de Wilcoxon y se enumera en la tabla 5. Solo se muestran diferencias significativas y se evaluaron mediante la prueba U de Mann-Whitney.
Ejemplos:
Sujetos y grupos de estudio
Cada individuo y su familia dieron su consentimiento informado para que el estudio tuviera lugar. En general, se inscribieron 541 sujetos pertenecientes a diferentes grupos de edad para este estudio en el norte de Italia, que incluye Bolonia, Florencia, Parma y Milán. Los centenarios fueron compuestos por 156 individuos (125 mujeres y 31 hombres), el grupo de ancianos estaba compuesto por 363 individuos (205 mujeres y 158 hombres), el grupo de adultos jóvenes estaba compuesto por 22 individuos (10 mujeres y 12 hombres).
El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité Ético del Hospital Universitario Sant'Orsola-Malpighi (Bologna, Italia). Las muestras biológicas resultantes (suero y orina) se almacenaron a -80 ° C hasta el análisis metabolómico.
Química Clínica
Se midieron las concentraciones séricas totales de lipoproteínas de alta densidad de colesterol (HDL) y triglicéridos con los correspondientes kits enzimáticos de Roche Diagnostics usando un autoanalizador (Roche Diagnostics Hitachi 917, Hitachi Ltd, Tokio, Japón). Se calcularon las concentraciones de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL) usando la fórmula de Friedewald (Friedewald WT, et al., Clinical Chemistry 18 (6):499-502). Citoquinas, incluyendo interferón gamma de ratón (IFNy), interleucina 1 beta (IL-1β), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), interleucina 12 p70 (IL-12 p70), quimiocinas derivadas de queratinocitos (KC y el factor de necrosis tumoral (TNF) se midieron usando un kit multiplex proinflamatorio de ratón (Meso Scale Discoveries, Gaithersburg, Maryland, EE. UU.). El ensayo se llevó a cabo de acuerdo con el manual del fabricante. Se midió la proteína C reactiva de alta sensibilidad (CRP) usando un ELISA sándwich de doble anticuerpo sensible con CRP antihumano de conejo y CRP antihumano de conejo conjugado con peroxidasa.
Preparación de muestra para espectroscopia de 1H-RMN. Se secó 1 ml de muestra de orina de los tres grupos de envejecimiento en un aparato de liofilización (Freeze-Dryer Fisher Scientific) y se ajustó a pH 6,8 usando 580 l de una solución tampón de fosfato (KH2PO4, concentración final de 0,2 M) que contenía 1 mM de 3-trimetilsililo)[2,2,3,3-2H4]-1-propionato de sodio (TSP), e introducido en tubos de RMN de 5 mm. Los perfiles metabólicos se midieron en un espectrómetro Bruker Avance III 600 MHz equipado con una sonda criogénica inversa de 5 mm a 300 K (Bruker Biospin, Rheinstetten, Alemania). Para cada muestra de orina, se registraron los espectros de 1H RMN usando secuencias de pulso que incluyen una detección de 1H estándar con supresión de agua. Los espectros estándar se adquirieron con un retraso de relajación de 4s y un tiempo de mezcla tm de 100 ms. Los espectros de 1H RMN adquiridos se procesaron usando el paquete de software Topspin (versión 2.1, Bruker Biospin, Rheinstetten, Alemania) y se hizo referencia al estándar (TSP) a δ = 0.0. La asignación máxima a metabolitos específicos se logró usando una biblioteca interna de compuestos y la literatura y se confirmó mediante espectroscopía de RMN
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bidimensional estándar (JRES, TOCSY, HSQC, HMBC) en muestras seleccionadas. Para el análisis estadístico, todos los espectros de RMN se convirtieron en puntos de datos de 12 K en el intervalo de δ 0,4 a 10,0 y se importaron en el software MATLAB (versión 7.11.0 (R2010b); The MathWorks Inc., Natick, MA) excluyendo el residuo de agua (agua δ = 4,7120-4,84). Los espectros se normalizaron a la suma total de todas las intensidades dentro del rango especificado.
Preparación de muestra para el análisis del kit Biocrates Life Sciences AbsoluteIDQTM. El kit AbsoluteIDQTM de Biocrates Life Sciences se utilizó para muestras de suero de la cohorte de envejecimiento seleccionada según se publicó anteriormente (Römisch-Margl, W., C. Prehn, R. Bogumil, C. Röhring, K. Suhre, J. Adamski, Procedure for tissue sample preparation and metabolite extraction for high-throughput targeted metabolomics. Metabolomics, 2011. Online First). La preparación de la placa de pocillos y la aplicación y extracción de la muestra se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se cargó un volumen final de 10 l de suero en la placa de 96 pocillos provista, que contenía patrones internos marcados isotópicamente. La cromatografía líquida se realizó en un sistema de cromatografía líquida de ultra alta presión (UHPLC) Dionex Ultimate 3000 (Dionex AG, Olten, Suiza) acoplado a un espectrómetro de masas 3200 Q TRAP (AB Sciex; Foster City, CA, EE. UU.) equipado con una fuente de iones TurboV que funciona en modo de ionización por electrospray (ESI). Los extractos de muestra (20 l) se inyectaron dos veces (en modos ESI positivo y negativo) mediante infusión directa usando un caudal de gradiente de 0-2,4 min:30 l/min, 2,4-2,8 min:200 l/min, 2,9-3 min:30 l/min. Los parámetros fuente de EM se establecieron en: temperatura de desolvatación (TEM): 200 °C, alta tensión: -4500 V (ESI-), 5500 V (ESI+), cortina (CUR) y nebulizador (GS1 y GS2) gases: nitrógeno; 20, 40 y 50 psi; respectivamente, presión de gas de colisión de nitrógeno: 5 mTorr. La adquisición de EM/EM se realizó en modo de monitorización de reacción programada (SRM) con valores optimizados de potencial de desclasamiento para los 163 metabolitos seleccionados en el ensayo. Los archivos de datos brutos (software Analyst, versión 1.5.1, AB Sciex, Foster City, CA, EE. UU.) Se importaron en el software de análisis proporcionado MetIQ para calcular las concentraciones de metabolitos. La lista de todos los metabolitos detectables está disponible en Biocrates Life Sciences, Austria (http://biocrates.com). La preparación de muestras y la cuantificación de los marcadores de inflamación mediante UPLC-ESI-MS/MS utilizando la técnica de dilución de isótopos.
En base al trabajo publicado previamente (Naga, et al., PROG. LIPID RESEARCH, 2001, 40, 199-299) se desarrolló internamente un método para medir un panel de 63 marcadores inflamatorios. Se homogeneizaron 300 l de muestras de suero del material biológico disponible restante de los tres grupos de edad (n = 15 centenarios, n = 30 ancianos, n = 50 adultos jóvenes) con 10 l de tampón BHT (hidroxitolueno butilado, 79,2 mg/ml de PBS ) utilizando el sistema FastPrep® 24. Para cada muestra, se mezcló un total de 50 l de suero con 5 l de la solución estándar interna (0,1 ng/l). La mezcla se acidificó mediante la adición de 15 l de ácido cítrico (1 N). Para precipitar las proteínas, se añadió un volumen de 550 l de metanol/etanol (1:1, v:v) y las muestras se mezclaron durante 15 min a 4 °C antes de centrifugarse (3500 rpm, 10 min, 4 °C). La fase orgánica se evaporó a sequedad bajo un flujo constante de nitrógeno y los residuos se solubilizaron con 80 l de agua, seguido de la adición de 20 l de acetonitrilo, antes de centrifugarse a 3500 rpm durante 1 minuto a 4 ºC. El sobrenadante se transfirió a Frascos CL-EM antes del análisis. Los análisis se llevaron a cabo mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (CL-EM/EM). La CL se realizó en un sistema de cromatografía líquida de ultrapresión Dionex Ultimate 3000 (UPLC) (Dionex AG, Olten, Suiza). La detección de EM se realizó en un espectrómetro de masas 5500 Q TRAP (AB Sciex; Foster City, CA, EE. UU.) Que funciona en modo ESI. La separación por cromatografía en gradiente se realizó en una columna Acquity BEH C18 (2,1 x 150 mm, 1,7 m, Waters, Milford, EE. UU.). El volumen de inyección fue de 5 ml y la columna se mantuvo a 50 °C. La fase móvil consistió en agua que contenía ácido acético al 1% (eluyente A) y acetonitrilo (eluyente B) a un caudal constante ajustado a 450 l/min. La elución de gradiente comenzó desde 20% B con un aumento lineal hasta 50% B a los 6 min, desde 50% a 95% B a los 13 min, se mantuvo durante 3 min a 95% B, antes de volver al 20% B a 16,1 min y reequilibrio de la columna por 11 min adicionales. Los analitos se controlaron en el modo de monitoreo de reacción seleccionado programado (SRM programado) provisto dentro del software Analyst (versión 1.5.1, AB Sciex, Foster City, CA, EE. UU.). Todas las transiciones masivas y los parámetros de fuente de EM se dan en datos suplementarios. El tiempo de ventana de detección de SRM se estableció en 120 segundos con un tiempo de exploración de destino de 0,5 segundos. El nitrógeno se usó como gas de cortina y desolvatación a la presión respectiva de CUR:20, GS1:70, GS2:20 (unidad arbitraria). La temperatura de la fuente del bloque se mantuvo a 600 °C, con los correspondientes voltajes: ISV:4000 V, EP:-10 V, CXP:-5 V. Se realizó una curva de calibración de 15 puntos antes del análisis de la muestra midiendo diferentes diluciones de la solución estándar (0-10 ng). El procesamiento de datos se realizó utilizando el software Analyst (versión 1.5.1, AB Sciex, Foster City, CA, EE. UU.). Se calculó la relación de área máxima de cada analito frente a su patrón interno correspondiente o marcador sustituto. Vale la pena mencionar que PGJ2, PGF2a, PGE2, PGE1, 15-oxo-HETE, 15-deoxi-Δ12,14-PGJ2, 6-ceto PGF1a y 5-oxo-ETE estaban por debajo de su límite de detección en muestras de suero y por lo tanto, no se tuvieron en cuenta para el análisis estadístico.
Análisis de datos multivariados (MVA)
El MVA se realizó en varios entornos de software. Por lo tanto, los pasos de importación y preprocesamiento de datos para 1H RMN y datos de EM específicos se realizaron usando rutinas "internas" escritas en MATLAB (versión 7.11.0, The Mathworks Inc., Natick, MA, EE. UU.). En el análisis de datos de RMN, los modelos OPLS-DA se
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referencia predeterminados indican una mayor probabilidad de retrasar y/o evitar trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento.
7. Un método no invasivo de diagnóstico de un estilo de vida que permite retrasar y/o evitar los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, que comprende
-obtener una muestra de orina de un sujeto -determinar el nivel de fenilacetilglutamina (PAG) en la muestra y -comparar el nivel de fenilacetilglutamina (PAG) del sujeto con un valor de referencia predeterminado,
en el que el valor de referencia predeterminado se basa en un nivel de PAG de orina promedio en una población de control, y en el que un nivel de PAG de orina elevado en comparación con el valor de referencia predeterminado indica una mayor probabilidad de retrasar y/o evitar los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento.
8. El método del párrafo 7, que comprende además:
-determinar el nivel de sulfato de p-cresol (PCS) en la muestra, y -comparar el nivel de PCS del sujeto con un valor de referencia predeterminado,
en el que el valor de referencia predeterminado se basa en PCS de orina promedio. nivel en una población de control, y en el que los niveles elevados de PAG y PCS en la muestra en comparación con los valores de referencia predeterminados indican una mayor probabilidad de retrasar y/o evitar los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento.
9.
El método de uno de los párrafos 1 a 8 para diagnosticar un estilo de vida que permite un envejecimiento saludable.
10.
El método de uno de los párrafos 1 a 9 para diagnosticar la longevidad.
11.
El método de uno de los párrafos 1 a 10 para diagnosticar interacciones intestinales de microflora-huésped más saludables.
12.
El método del párrafo 11, en el que se diagnostican las interacciones más saludables entre la microflora y el huésped en personas de edad avanzada.
13.
El método de uno de los párrafos 1 a 12 para diagnosticar un estilo de vida más saludable, en el que los valores de referencia predeterminados se basan en los niveles de suero u orina obtenidos del sujeto antes de un cambio en el estilo de vida.
14.
El método de acuerdo con el párrafo 13, donde el cambio en el estilo de vida es un cambio en la dieta.
15.
El método de acuerdo con el párrafo 14, en donde el cambio en la dieta es el uso de al menos un producto nutricional que previamente no se consumía o consumía en diferentes cantidades.
16.
El método de acuerdo con el párrafo 14 o 15 para probar la efectividad de un nuevo régimen nutricional.
17.
El método de uno de los párrafos 1 a 16 en el que los niveles de los biomarcadores se determinan por 1H-RMN y/o espectrometría de masas en la muestra y en la referencia.
18.
El método de uno de los párrafos 1 a 17 para diagnosticar un estilo de vida más saludable, donde los valores medios de referencia predeterminados son
-2 M para 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC-O) 32:1, -7,80 M para 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC -O) 34:1, -1,25 g/100 ml de suero para el ácido 15-hidroxi-eicosatetraenoico (15-HpETE), -0,013 g/100 ml de suero para leucotrieno E4 (LTE4), -0,020 g/100 ml de suero para leucotrieno B4 (4LTB), y/o -0,070 g/100 ml de suero para 8,9-epoxieicosatrienoico (8,9 EpETre) -16,07 M para hidroxi-esfingomielina (SM-OH) 22:1, -52,00 M para lisofosfatidilcolinas (LPC) ) 18:0, -25,00 M para esfingomielina (SM) 24:0, -5,07 M para 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC-O) 34:3, -14,30 M para 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC-O) 36:4, -1,41 M para 1-O-alquil-2-acilglicerofosfocolina (PC-O) 40:1,
15
25
35
45
55
65
-10,00 M para fosfatidilcolina (PC) 36:2, -0,34 g/100 ml de suero para ácido hidroxioctadecadienoico (9-HODE), -0,043 g/100 ml de suero para ácido 9-oxo-octadecadienoico (9-oxo-HODE), y/o -0,017 g/100 ml de suero para ácido 11,12-epoxieicosatrienoico (11,12-DiHETre).
19. El método de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 18, que además comprende:
-obtener una muestra de orina de un sujeto -determinar el nivel de fenilacetilglutamina (PAG) y/o sulfato de p-cresol (PCS) en la muestra, y -comparar el nivel de fenilacetilglutamina (PAG) y/o PCS del sujeto a un valor de referencia predeterminado,
en el que el valor de referencia predeterminado se basa en un nivel promedio de PAG y/o PCS en una población de control, y niveles elevados de PAG y/o PCS en orina la muestra en comparación con los valores de referencia predeterminados indican una mayor probabilidad de retrasar y/o evitar los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento.
20.
Un biomarcador para el diagnóstico de un estilo de vida que permite retrasar y/o evitar trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, en el que el biomarcador es 9-Oxo-HODE.
21.
Un biomarcador para el diagnóstico de un estilo de vida que permite retrasar y/o evitar trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, en el que el biomarcador es SM-OH 22:1.
22.
El biomarcador de acuerdo con el párrafo 20 o 21, en el que el biomarcador debe detectarse en suero.
23.
Un biomarcador para el diagnóstico de un estilo de vida que permite retrasar y/o evitar el envejecimiento de los trastornos inflamatorios crónicos, en donde el biomarcador es fenilacetilglutamina (PAG).
24.
Un biomarcador para el diagnóstico de un estilo de vida que permite retrasar y/o evitar trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, en el que el biomarcador es el sulfato de p-cresol (PCS).
25.
El biomarcador de acuerdo con el párrafo 23 o 24, en el que el biomarcador ha de detectarse en la orina.
26.
Un método para diagnosticar (i) un estilo de vida que favorezca el desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) un estilo de vida que pueda prevenir un envejecimiento saludable, (iii) un riesgo de reducir la esperanza de vida, y/o (iv) ) interacciones intestinales de microflora-huésped no saludables, que comprenden
-obtener una muestra de suero de un sujeto -determinar el nivel de 9-Oxo-HODE y/o SM-OH 22:1 en la muestra, y -comparar el 9-Oxo-HODE del sujeto y/o nivel SM-OH 22:1 a un valor de referencia predeterminado,
en el que el valor de referencia predeterminado se basa en un nivel promedio de 9-Oxo-HODE y/o SM-OH 22:1 en una población de control, y en el que un aumento del nivel de suero 9-Oxo-HODE y/o SM-OH 22:1 en la muestra en comparación con el valor de referencia predeterminado indica (i) un estilo de vida que favorece el desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) un estilo de vida que es probable que evite el envejecimiento saludable, (iii) un mayor riesgo de reducir la esperanza de vida, y/o (iv) interacciones microflorahuésped no saludables.
27. Un método para diagnosticar (i) un estilo de vida que favorezca el desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) un estilo de vida que pueda prevenir un envejecimiento saludable, (iii) un riesgo de reducir la esperanza de vida, y/o (iv) interacciones entre la microflora y el huésped menos saludables, que comprenden
-obtener una muestra de orina de un sujeto -determinar el nivel de PAG y/o PCS en la muestra, y -comparar el nivel de PAG y/o PCS del sujeto con un valor de referencia predeterminado,
en el que el valor de referencia predeterminado se basa en un nivel promedio de PAG y/o PCS en una población de control, y en el que un nivel de PAG y/o PCS de orina inferior en la muestra comparado con el valor de referencia predeterminado indica (i) un estilo de vida que favorece el desarrollo de los trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) un estilo de vida que probablemente evite el envejecimiento saludable, (iii) un mayor riesgo de reducir la esperanza de vida, y/o (iv) interacciones intestinales entre la microflora y el huésped menos saludables.
28. Un método para (i) retrasar, evitar y/o prevenir el desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) promover un envejecimiento saludable, (iii) promover la longevidad, (iv) reducir el riesgo de
reducir la esperanza de vida, (v) promover interacciones saludables entre la microflora intestinal y el huésped, y/o
(vi)
prevenir interacciones intestinales no saludables entre la microflora y el huésped, lo que incluye:
(a)
realizar un método de diagnóstico como se describe en el párrafo 26 o 27; y
5 (b) modificar un estilo de vida del sujeto si el sujeto tiene (i) una mayor probabilidad del desarrollo de trastornos inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento, (ii) un estilo de vida que probablemente prevendrá un envejecimiento saludable, (iii) un mayor riesgo de reducir la esperanza de vida, y/o (iv) interacciones intestinales entre la microflora y el huésped menos saludables.
10 29. Un método de acuerdo con el párrafo 28, en el que la modificación del estilo de vida en el sujeto comprende un cambio en la dieta.
30. Un método de acuerdo con el párrafo 29, en el que el cambio en la dieta comprende administrar al menos un
producto nutricional al sujeto que tiene un efecto sobre el envejecimiento saludable y/o evitar los trastornos 15 inflamatorios crónicos relacionados con el envejecimiento.
Tabla 1:
Factor
Centenarios Ancianos Jóvenes
Demografía Sexo, masculino/femenino Edad, años
31/125 100,9±2 (99-111) 158/205 70,4±6 (55-88) 12/10 30,6±5 (25-40)
Clínica
IMC1, kg/m2
23,8±3,7 (13,3-34,1) 26,9±4,6 (16,7-54,7) 21,92±2,1 (18,3,23,6)
HOMA
1,90±2,8 (0,20-23) 3,3±3,1 (0,20-28,9) n/a
Diabetes2, n
8 36 n/a
Colesterol, mg/dl
188,2±38,1 (110-318) 201,0±38,8 (5-335) 162,3±28,4 (123-207)
Triglicéridos, mg/dl
119,6±65,4 (50-535) 125,5±63,1 (41-550) 71,1±32,1 (28-143)
HDL3, mg/dl
47,4±13,1 (20-99) 55,8 ± 21,1 (20-212) 51,3±8,7 (38-66)
LDL4, mg/dl
116,2±36,1 (27-248) 120±41,7 (12-248) 96,8±30,1 (49-144)
MMSE5
20,3±6,4 (1,3-30,8) 27,3±1,9 (1,3-31,0) n/a
CRP6, mg/L
5,8±6,1 (0,28-28,2) 2,8±3,7 (0,11-25,7) 0,7±0,4 (0,28-2,03)
Insuficiencia cardíaca, n
44 4 0
Ritmo cardíaco irregular, n
33 46 0
Angina de pecho, n
25 12 0
A-SAA7 , g/ml
540±706 (0,01-3859,4) 158,2±21,9,6 (0,01 n/a
1861,9)
Metabolómica
Orina-1H-RMN
18/74 128/155 11/10
Sexo, masc/fem, años
100,9±2 (99-111) 70,1±6 (55-88) 30,9±5 (24-40)
Suero objetivo EM
30/113 34/56 11/9
Sexo, masc/fem, años
100,9±2 (99-111) 69,6±6 (56-86) 30,6±5 (24-40)
Lipidómica Suero objetivo EM Sexo, masc/fem, años
2/10 101±2 (99-104) 21/16 70±6 (59-78) 9/9 31,2±5 (25-40)
20 Tabla 2:
Descripción general
R2X (cum) R2Y (cum) Q2Y AuROC
Centenarios vs, Ancianos
0,14 0,52 0,39 0,96 0,93
Centenarios vs, Jóvenes
0,14 0,86 0,75 1,00 1,00
Jóvenes vs, Ancianos
0,05 0,21 0,09 0,92 0,81
Tabla 3:
Grupo de edad
Centenarios Ancianos Jóvenes
Media ± DE
Media ± DE
Media ± DE
Pico Integral (au)
Cambio químico
PAG
2,34 (s) 9,93 ± 3,72*** 6,62 ± 2,59 5,89 ± 2,35
PCS
7,36 (m) 4,06 ± 1,53*** 2,62 ± 1,22 2,32 ± 0,85
Tabla 4:
Metabolitos [M/1]
Jóvenes Ancianos Centenarios
Media ± DE
Media ± DE
Media ± DE
PC-O 32:1
2,02 ± 0,36 2 ± 0,51 2,35 ± 0,63*
PC-O 34:1
7,34 ± 1,07 7,88 ± 1,71 9,54 ± 2,19***
PC-O 34:3
5,73 ± 1,4 5,07 ± 1,71 3,94 ± 1,54***
PC-O 36:2
9,54 ± 1,75 9,58 ± 2,39 9,29 ± 2,26*
PC-O 36:4
14,48 ± 2,83 14,35 ± 3,55 12,39 ± 2,56*
PC-O 40:1
1,23 ± 0,23 1,41 ± 0,41 1,02 ± 0,32***
LPC 18:0
52,18 ± 12,93 52 ± 13,5 40,4 ± 12,02**
SM 24:0
23,45 ± 4,37 25,64 ± 5,31 19,79 ± 4,92***
SM-OH 22:1
14,52 ± 2,94 16,07 ± 3,37 11,51 ± 3,04***
Tabla 5:
Metabolitos [(g/100 ml de suero]
Jóvenes Ancianos Centenarios
LTE4
0,015 ± 0,014 0,013 ± 0,011 0,035 ± 0,03 ***
LTB4
0,011 ± 0,014 0,019 ± 0,047 0,016 ± 0,009 *
EPA
0,097 ± 0,036 0,123 ± 0,052 0,078 ± 0,026 **
15-HpETE
1,512 ± 1,949 1,255 ± 1,245 3,348 ± 2,865 ***
11,12-DIHETRE
0,02 ± 0,006 0,017 ± 0,004 0,016 ± 0,006 *
9-oxo-ODE
0,042 ± 0,028 0,043 ± 0,039 0,022 ± 0,013 ***
9-HODE
0,348 ± 0,223 0,397 ± 0,677 0,204 ± 0,211 **
8,9-EpETrE
0,067 ± 0,101 0,074 ± 0,186 0,113 ± 0,107 ***

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  1. imagen1
    imagen2
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