ES2646099T3

ES2646099T3 - Método para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer utilizando chaperonas farmacológicas para aumentar la actividad de gangliosidasas

Info

Publication number: ES2646099T3
Application number: ES15173518.0T
Authority: ES
Inventors: Brandon Wustman; Kenneth Valenzano; Robert Boyd
Original assignee: Amicus Therapeutics Inc
Current assignee: Amicus Therapeutics Inc
Priority date: 2009-10-19
Filing date: 2010-10-12
Publication date: 2017-12-12
Anticipated expiration: 2030-10-12
Also published as: EP2490712B1; EP2957295B1; JP2013508371A; JP6061677B2; PT2490712E; WO2011049787A1; CA2778049A1; US9044437B2; DK2490712T3; EP2957295A1; US20120309788A1; US20150374733A1; EP2490712A4; CA2778049C; JP6204961B2; EP2490712A1; JP2016041741A; US9931353B2; HK1175400A1; PL2490712T3

Abstract

Una chaperona farmacológica para uso en tratar la Angiopatía Amiloide Cerebral (CAA) en donde la chaperona farmacológica se une selectivamente a y estabiliza una gangliosidasa seleccionada del grupo que consiste en ß- hexosaminidasa A, ß-hexosaminidasa B y ß-hexosaminidasa S; y en donde la chaperona farmacológica se selecciona de: N-butil-desoxigalactonojirimicina (NB-DGJ) N-acetil-glucosamina-tiazolina (NGT) 2-acetamido-1,2-didesoxinojirimicina (AdDNJ) 2-acetamido-2-desoxinojirimicina (ADNJ) 6-acetamido-6-desoxicastanospermina Pirimetamina 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (LABNAc) N-bencil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBn-LABNAc) N-butil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBu-LABNAc) DABNAc hidrocloruro de (2R, 3R, 4S, 5R)-2-acetamido-3,4-dihidroxi-5-hidroxi-metil-piperidinio (GalNAc-isofagomina HCl) Galactosa O-(2-acetamido-2-desoxi-d-glucopiranosilideno)-amino-N-fenilcarbamato (Gal-PUGNAc) NAG-tiazolina (y sus derivados) PUGNAc (y sus derivados) 6-acetamido-2,6-didesoxi-2-C-hidroximetil-D-gluco-δ-lactama 2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-d-lactama 2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-desocinojirimicina derivados del ácido 3-hidroxipipecólico derivados de ácido 3,4,5-trihidroxipipecólico (3R,4R,5R,6R)-tetrahidroxiazepano NAc-1-Cp NAc-1-(CH3)2 (5R,6S,7S,8S)-8-acetamido-5,6,7,8-tetrahidro-5-(hidroximetil)-imidazol[1,2-a]piridina-6,7-triol 2-acetamido-1,2,5-tridesoxi-1,5-imino-D-glucitol (2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-aminometil-3,4-dihidroxi-piperidina (2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-hidroximetil-3,4-dihidroxi-piperidina.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

DESCRIPCION

Metodo para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer utilizando chaperonas farmacologicas para aumentar la actividad de gangliosidasas

CAMPO DE LA INVENCION

La presente invencion se refiere a un metodo para tratar a un individuo que tiene Angiopatfa Amiloide Cerebral (cAa) utilizando chaperonas farmacologicas para aumentar la actividad de las enzimas gangliosidasa y/o sialidasa implicadas en el catabolismo de gangliosidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

La enfermedad de Alzheimer es una de las mayores cargas de salud socio-economicas. La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por demencia progresiva e histopatologicamente por la presencia de ovillos neurofibrilares (NFTs) y placas neunticas (seniles). Las placas consisten en una protema denominada amiloide (Ap) y los ovillos estan formados por una protema denominada Tau.

Placas amiloides y NFTs son ambas distintivos de la enfermedad de Alzheimer. Las mutaciones en la APP y presenilina conducen a formas de brote temprano de la enfermedad de Alzheimer, que apoyan la hipotesis de que el procesamiento de la APP tambien puede desempenar un papel importante en la patogenesis de la AD (enfermedad de Alzheimer) esporadica. Ademas de ello, la "hipotesis amiloide" predice que la acumulacion de Ap en alguna forma toxica es perjudicial para el cerebro. APP puede ser procesada por las vfas de a- y p-secretasa. Hasta la fecha, la mayona de los esfuerzos de investigacion para desarrollar terapias de AD que retarden el progreso de la enfermedad se centran en la inhibicion de la Y-secretasa y la p-secretasa y el metabolismo de APP para formar peptido Ap o la activacion del procesamiento de a-secretasa para aumentar la produccion del peptido sAPPa neuroprotector al tiempo que reduce la produccion de Ap. El desarrollo de inhibidores espedficos para la p- secretasa ha sido diffcil, en parte debido a que parece que existe una relacion no lineal entre la disminucion de la actividad de p-secretasa in vivo, y una reduccion de los peptidos Ap en el cerebro. Una dificultad adicional es la baja penetracion en el cerebro de la mayona de los inhibidores. Inhibidores de Y-secretasa han estado plagados, ademas, de graves efectos secundarios GI (gastrointestinales) asociados con la inhibicion de Notch, ya que la y- secretasa procesa numerosos otros sustratos ademas de la APP, incluido el receptor Notch. Ademas, se ha demostrado que una deficiencia de la actividad de Y-secretasa provoca la neurodegeneracion y puede asociarse con el brote temprano autosomico-dominante de la enfermedad de Alzheimer provocada por la mutacion en presenilina 1 (un componente del complejo de Y-secretasa que contiene el sitio activo del complejo de Y-secretasa).

La mayona de los esfuerzos destinados a tratar la enfermedad de Alzheimer (AD) se han centrado en reducir los smtomas de la AD. En particular, la identificacion de una menor concentracion de colina acetiltransferasa en neuronas afectadas de los prosencefalos de pacientes con AD ha conducido a tratamientos dirigidos a inhibir la hidrolisis de la acetilcolina en la hendidura sinaptica y a prolongar el nivel de acetilcolina en la sinapsis. Aunque esta estrategia ha dado como resultado al menos una correccion parcial de los niveles de neurotransmisores, los beneficios terapeuticos han sido pequenos.

Ademas, la AD se clasifica como una tauopatfa. Tauopatfas son provocadas por una hiperfosforilacion anormal de tau fomentando su agregacion y formacion de ovillos neurofibrilares (NFTs). Dado que las mutaciones en tau y la APP provocan demencia, uno o ambos pueden contribuir a la progresion de la enfermedad de Alzheimer. Se entiende bien que las mutaciones que conducen a un procesamiento alterado de la APP provocan la AD. Actualmente, no existen terapias aprobadas para ralentizar el progreso de la enfermedad de Alzheimer. Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad de tratamientos de la AD mas beneficiosos. Aunque la mayona de las terapias en desarrollo se centran en la alteracion del metabolismo de la APP (p. ej., inhibicion de p-secretasa y Y-secretasa) o el bloqueo de la agregacion de tau, la presente invencion proporciona un tratamiento que utiliza chaperonas farmacologicas que se unen a una o mas gangliosidasas y/o sialidasas y, con ello, aumentan la produccion de sAPPa y reducen la produccion de Ap y tau hiperfosforilada.

COMPENDIO DE LA INVENCION

La presente invencion se refiere a un metodo para el tratamiento de la Angiopatfa Amiloide Cerebral (CAA) mediante la administracion de una chaperona farmacologica que se une selectivamente y estabiliza a una o mas gangliosidasas.

De acuerdo con una realizacion, se proporciona un metodo para el tratamiento de Angiopatfa Amiloide Cerebral en un individuo, que comprende administrar al individuo una cantidad eficaz de una chaperona farmacologica.

En una realizacion, se proporciona un metodo para el tratamiento de Angiopatfa Amiloide Cerebral, en que la CAA es CAA Familiar provocada por mutaciones en APP.

En una realizacion, la chaperona farmacologica se selecciona de:

2

5

10

15

20

25

30

35

N-butil-desoxigalactonojirimicina (NB-DGJ)

N-acetil-glucosamina-tiazolina (NGT)

2-acetamido-1,2-didesoxinojirimicina (AdDNJ)

2-acetamido-2-desoxinojirimicina (ADNJ)

6-acetamido-6-desoxicastanospermina

Pirimetamina

2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (LABNAc)

N-bencil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBn-LABNAc)

N-butil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBu-LABNAc)

DABNAc

hidrocloruro de (2R, 3R, 4S, 5R)-2-acetamido-3,4-dihidroxi-5-hidroxi-metil-piperidinio (GalNAc- isofagomina HCl)

Galactosa O-(2-acetamido-2-desoxi-d-glucopiranosilideno)-amino-N-fenilcarbamato (Gal-PUGNAc)

NAG-tiazolina (y sus derivados)

PUGNAc (y sus derivados)

6-acetamido-2,6-didesoxi-2-C-hidroximetN-D-gluco-8-lactama

2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-d-lactama

2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-desocinojirimicina

derivados del acido 3-hidroxipipecolico

derivados de acido 3,4,5-trihidroxipipecolico

(3R,4R,5R,6R)-tetrahidroxiazepano

NAc-1-Cp

NAc-1-(CHa)2

(5R,6S,7S,8S)-8-acetamido-5,6,7,8-tetrahidro-5-(hidroximetN)-imidazol[1,2-a]piridina-6,7-

triol

2-acetamido-1,2,5-tridesoxi-1,5-imino-D-glucitol

(2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-aminometil-3,4-dihidroxi-piperidina

(2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-hidroximetil-3,4-dihidroxi-piperidina.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 muestra un esquema para el procesamiento de la APP.

La FIG. 2 muestra evidencia del metabolismo de la APP alterado y la fosforilacion de tau en los cerebros de ratones deficientes en la actividad de p-hexosaminidasa.

La FIG. 3 muestra que fibroblastos derivados de pacientes de la enfermedad de Sandhoff secretan mas sAPPp y Ap y menos aAPPa en comparacion con fibroblastos control y exhiben una hiperfosforilacion de tau.

La FIG. 4 muestra el incremento en los niveles de p-hexosaminidasa de tipo salvaje endogena y la diseminacion de sAPPa en neuroblastomas N2A de raton tratados con las chaperonas farmacologicas NGT y AdDNJ

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

La FIG. 5 muestra los efectos de la dosis y de lavado sobre la actividad de p-hexosaminidasa de tipo salvaje endogena en los cerebros de ratones C57BL6 tratados con la chaperona farmacologica NGT y los niveles de farmacos correspondientes en el cerebro y plasma.

La FIG. 6 muestra una evolucion en el tiempo de los efectos de la chaperona farmacologica NGT sobre niveles endogenos de tipo salvaje de la actividad de p-hexosaminidasa y niveles de sAPPa en los cerebros de ratones C57BL6.

La FIG. 7 muestra la mejora de los niveles de neuraminidasa 1 en fibroblastos debido a la chaperona farmacologica NB-DANA.

La FIG. 8 muestra el incremento en los niveles de neuraminidasa 3 en neuroblastomas SHSY-5Y debido a la chaperona farmacologica Zanamivir.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

Ap es un peptido de 38 a 43 aminoacidos hidrofobo, que se encuentra en todos los fluidos biologicos y que se deriva de la escision enzimatica de una protema de membrana de tipo I mas grande, la protema precursora de amiloide (APP). Vease la Figura 1, que representa el procesamiento de la APP. Estudios de asociacion de pacientes con la AD familiares identificaron un cierto numero de mutaciones en dos genes, APP y presenilina, asociadas con el metabolismo aberrante de APP y una produccion incrementada de la agregacion de formas de Ap. Se piensa que Ap forma oligomeros toxicos que pueden desempenar un papel importante en la patologfa de la enfermedad de Alzheimer (Shankar et al., 2O08).

Los gangliosidos fomentan la generacion de formas neurotoxicas de Ap en el cerebro (es decir, oligomeros). Los gangliosidos son glucoesfingolfpidos que contienen acido sialico que se encuentran en la cara exterior de las membranas celulares, y son particularmente abundantes en la superficie celular de las neuronas. Se sabe que los gangliosidos existen en racimos y que forman microdominios en la superficie de la membrana plasmatica. Esta localizacion espedfica de los gangliosidos les permite interactuar con una diversidad de bioefectores, incluyendo glicoprotemas, hormonas peptfdicas y factores de crecimiento. Ademas, los gangliosidos (p. ej., el gangliosido GM1) puede fomentar la diferenciacion celular, evitar la perdida de la neurogenesis y desempenar un papel neuroprotector en modelos in vitro e in vivo de lesion neuronal.

Los gangliosidos son mas abundantes en el sistema nervioso y estan implicados en una diversidad de funciones, incluyendo la mediacion de la transduccion de senales, la adhesion celular y la diferenciacion celular. Mientras que mas de 200 gangliosidos han sido identificados, la mayona de los gangliosidos en las neuronas son catabolizados por una o mas gangliosidasas y/o sialidasas.

Los productos de la actividad de a-secretasa, APPa soluble y la actividad de p-secretasa, APPp soluble (sAPPp), se diferencian por la inclusion en sAPPa de los primeros 16 residuos de Ap. Dado que la escision de APP por parte de a-secretasa divide el dominio Ap, ninguno de los productos de la reaccion puede dar lugar a amiloide. Por lo tanto, se plantea la hipotesis de que la activacion de la regulacion positiva de la actividad de a-secretasa previene o reduce la formacion de oligomeros Ap toxicos y placas amiloides, al tiempo que aumenta la diseminacion de sAPPa neurotrofica y neuroprotectora. Curiosamente, la inhibicion de la smtesis de glucoesfingolfpidos y gangliosidos ha demostrado activar la diseminacion de sAPPa (Sawamura et al, 2004).

Mutaciones en la APP tambien provocan la enfermedad de Alzheimer familiar y/o la angiopatfa amiloide cerebral (CAA). Los gangliosidos GM2, GM3 y GD3 pueden modular la deposicion regional de Ap, ya que se expresan de una manera espedfica para la zona en el cerebro. (Yamamoto et al., 2006) han demostrado que el ensamblaje de Aps de tipo holandes y de tipo italiano de variante hereditaria, y Ap de tipo flamenco fue acelerado por el gangliosido GM3 y el gangliosido GD3, respectivamente. De manera notable, las celulas de la musculatura lisa cerebrovascular, que componen la pared del vaso cerebral en donde se depositan los Aps de tipo holandes y de tipo italiano, expresan exclusivamente GM2 y GM3 (Yamamoto et al., 2006). Por lo tanto, el ensamblaje de variantes hereditarias Ap puede acelerarse por factores medioambientales locales tales como la presencia de gangliosidos particulares en el cerebro.

La presente invencion proporciona compuestos, conocidos como chaperonas farmacologicas, y metodos para utilizar estos compuestos para tratar la CAA en un paciente en riesgo de desarrollo o diagnosticado con la misma, que incluye administrar al paciente que lo necesita una cantidad eficaz de una chaperona farmacologica incluyendo compuestos de formula I:

5

10

15

20

25

30

imagen1

en donde:

R1 es C(R2)(R3)(R4);

R2 es hidrogeno, -OH o halogeno;

R3 es hidrogeno, -OH, halogeno o alquilo C1-8;

R4 es halogeno, alquilo C1-8, alquilo C1-8 sustituido, arilo, arilo sustituido, alquilcicloalquilo o alquilcicloalquilo sustituido

R3 y R4 pueden unirse con el carbono al que estan unidos para formar un anillo cicloalquilo, que puede estar opcionalmente sustituido, preferiblemente con halogeno y mas preferiblemente con uno o mas atomos de fluor;

R6 es hidrogeno, alquilo C1-8, alquilo C1-8 sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, alquilarilo o alquilarilo sustituido;

Z es opcional, cuando esta presente Z es -(CH2)1-8-, -C(=O)-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2-, -C(=S)NH-, -S(=O)2- CH3, C(=O)-NH-, -S(=O)2-NR9R10, -C(=O)alquilo C1-8 o -C(=O)CH(NH2)CH3;

R9 es hidrogeno, alquilo C1-8 o alquilo C1-8 sustituido;

R10 es hidrogeno, alquilo C1-8 o alquilo C1-8 sustituido;

R5 es hidrogeno, alquilo C1-8, alquilo C1-8 sustituido, arilo, arilo sustituido, alquenilo C1-8, alquenilo C1-8 sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, alquilarilo, alquilarilo sustituido, aminoarilalquilo o aminoarilalquilo sustituido ;

R7 es -OH o halogeno; y

R8 es hidrogeno, halogeno o alquilo C1-8,

con la condicion de que R2 y R3 no puedan ser ambos hidrogeno cuando R4 es un halogeno, Z no esta presente,

R7 es -OH, R5, R6 son hidrogeno.

Mas espedficamente, la presente invencion proporciona compuestos conocidos como chaperonas farmacologicas y metodos para utilizar estos compuestos para tratar la CAA, en donde la chaperona farmacologica se une selectivamente y estabiliza una gangliosidasa seleccionada del grupo que consiste en p-hexosaminidasa A, p- hexosaminidasa B y p-hexosaminidasa S; y en donde la chaperona farmacologica se selecciona entre:

N-butil-desoxigalactonojirimicina (NB-DGJ)

N-acetil-glucosamina-tiazolina (NGT)

2-acetamido-1,2-didesoxinojirimicina (AdDNJ)

2-acetamido-2-desoxinojirimicina (ADNJ)

6-acetamido-6-desoxi-castanoespermina

Pirimetamina

2-acetamido-1,4-imino-1,2,4 - tridesoxi-L-arabinitol (LABNAc) N-bencil-2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBn-LABNAc) N-butil-2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol; (NBu-LABNAc)

5 DABNAc

hidrocloruro de (2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-3,4-dihidroxi-5-hidroxi-metil-piperidinio (GalNAc-isofagomina HCl)

Galactosa O-(2-acetamido-2-desoxi-d-glucopiranosiliden)-amino-N-fenilcarbamato (Gal-PUGNAc) NAG-tiazolina (y sus derivados)

10 PUGNAc (y sus derivados)

6-acetamido-2,6-didesoxi-2-C-hidroximetil-D-gluco-8-lactama 2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-d-lactama 2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-desoxinojirimicina derivados del acido 3-hidroxipipecolico 15 derivados del acido 3,4,5-trihidroxipipecolico

(3R,4R,5R,6R)-tetrahidroxiazepano NAc-1-Cp Nac-1-(CH3)2

(5R,6S,7S,8S)-8-Acetamido-5,6,7,8-tetrahidro-5-(hidroximetil)-imidazol[1,2-a]piridina-6,7-triol

20 2-Acetoamido-1,2,5- tridesoxi-1,5-imino-D-glucitol

(2R,3R,4S,5R)-2-Acetamido-5-aminometil-3,4-dihidroxi-piperidina

(2R,3R,4S,5R)-2-Acetamido-5-hidroximetil-3,4-dihidroxi-piperidina.

A continuacion se enumeran definiciones de diversos terminos y expresiones utilizados para describir esta invencion. Estas definiciones se aplican a los terminos tal como se utilizan a lo largo de esta memoria descriptiva, a menos que 25 se limiten en casos espedficos, ya sea individualmente o como parte de un grupo mas grande.

El termino "alquilo" se refiere a grupos hidrocarburo no sustituidos, de cadena lineal o ramificada, de 1 a 20 atomos de carbono, preferiblemente de 1 a 8 atomos de carbono, mas preferiblemente de 1 a 6 atomos de carbono. La expresion "alquilo inferior" se refiere a grupos alquilo no sustituidos de 1 a 4 atomos de carbono.

La expresion “alquilo sustituido” se refiere a un grupo alquilo sustituido, por ejemplo, con uno a cuatro sustituyentes 30 tales como halo, hidroxi, alcoxi, oxo, alcanoilo, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, aminas disustituidas en las que los 2 sustituyentes amino se seleccionan entre alquilo, arilo o aralquilo; alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido, p. ej., SO2NH2, sulfonamido sustituido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, p. ej., CONH2, carbamilo 35 sustituido, p. ej., CONHalquilo, CONHarilo, CONHaralquilo o casos en los que hay dos sustituyentes en el nitrogeno seleccionados entre alquilo, arilo o aralquilo; alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino y heterociclos tales como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares. En los casos en los que se ha indicado anteriormente en que el sustituyente esta sustituido adicionalmente, lo estara con alquilo, alcoxi, arilo o aralquilo.

40 El termino “halogeno” o “halo” se refiere a fluor, cloro, bromo y yodo.

El termino “arilo” se refiere a grupos hidrocarburos aromaticos monodclicos o bidclicos que tienen de 6 a 12 atomos de carbono en la porcion del anillo tales como grupos fenilo, naftilo, bifenilo y difenilo, cada uno de los cuales puede estar sustituido.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

El termino "aralquilo" se refiere a un grupo arilo unido directamente a traves de un grupo alquilo tal como bencilo. De forma similar, el termino "alquilarilo" se refiere a un grupo alquilo unido directamente a traves de un grupo arilo tal como metilbencil.

La expresion “arilo sustituido” se refiere a un grupo arilo sustituido, por ejemplo, con uno a cuatro sustituyentes tales como alquilo, alquilo sustituido, halo, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, aralquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, arilsulfonilamina, acido sulfonico, alquilsulfonilo, sulfonamido, ariloxi y similares. El sustituyente puede estar ademas sustituido con hidroxi, alquilo, alcoxi, arilo, arilo sustituido, alquilo sustituido o aralquilo. En algunas realizaciones, el arilo sustituido es un fenilalquilo o un fenilalquilo sustituido. En algunas realizaciones, el fenilalquilo sustituido esta preferiblemente sustituido con un halogeno, alcoxi o alquilo.

El termino “heteroarilo” se refiere a un grupo aromatico, opcionalmente sustituido, por ejemplo, que es un sistema monodclico de 4 a 7 miembros, bidclico de 7 a 11 miembros o tridclico de 10 a 15 miembros, que tiene al menos un heteroatomo y al menos un anillo que contiene atomos de carbono, por ejemplo, piridina, tetrazol, indazol.

El termino “alquenilo” se refiere a grupos hidrocarburos de cadena lineal o ramificada de 2 a 20 atomos de carbono, preferiblemente de 2 a 15 atomos de carbono y lo mas preferiblemente de 2 a 8 atomos de carbono, con uno a cuatro dobles enlaces.

La expresion “alquenilo sustituido” se refiere a un grupo alquenilo sustituido, por ejemplo, con uno a dos sustituyentes tales como halo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, alquiltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, guanidino, indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares.

El termino “alquinilo” se refiere a grupos hidrocarburos, de cadena lineal o ramificada, de 2 a 20 atomos de carbono, preferiblemente de 2 a 15 atomos de carbono, y lo mas preferiblemente de 2 a 8 atomos de carbono, con uno a cuatro triples enlaces.

La expresion “alquinilo sustituido” se refiere a un grupo alquinilo sustituido, por ejemplo, con un sustituyente tal como halo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, alquiltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, guanidino y heterociclo, p. ej., imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares.

El termino “cicloalquilo” se refiere a sistemas de anillos hidrocarbonados dclicos saturados, opcionalmente sustituidos, que contienen preferiblemente 1 a 3 anillos y 3 a 7 carbonos por anillo, que pueden estar ademas condensados con un anillo carbodclico C3-C7 insaturado. Grupos a modo de ejemplo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, cicloctilo, ciclodecilo, ciclododecilo y adamantilo. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o mas grupos alquilo tal como se ha descrito anteriormente, o uno o mas grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

Los terminos “heterociclo”, “heterodclico” y “heterociclo” se refieren a un grupo dclico aromatico o no aromatico, saturado o insaturado, opcionalmente sustituido, por ejemplo, que es un sistema de anillos monodclico de 4 a 7 miembros, bidclico de 7 a 11 miembros o tridclico de 10 a 15 miembros, que tiene al menos un heteroatomo en al menos un anillo que contiene atomos de carbono. Cada uno de los anillos del grupo heterodclico que contiene un heteroatomo puede tener 1, 2 o 3 heteroatomos seleccionados de atomos de nitrogeno, atomos de oxfgeno y atomos de azufre, en que los heteroatomos de nitrogeno y azufre tambien pueden estar opcionalmente oxidados y los heteroatomos de nitrogeno tambien pueden estar opcionalmente cuaternizados. El grupo heterodclico puede estar unido a cualquier heteroatomo o atomo de carbono

Grupos heterodclicos monodclicos a modo de ejemplo incluyen pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxazepinilo, azepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, N-oxopiridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilsulfoxido, tiamorfolinilsulfona, 1,3-dioxolano y tetrahidro-1,1-dioxotienilo, dioxanilo, isotiazolidinilo, tietanilo, tiiranilo, triazinilo y triazolilo, y similares.

Grupos heterodclicos a modo de ejemplo bidclicos incluyen 2,3-dihidro-2-oxo-1H-indolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, quinolinil-N-oxido, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, cromonilo, cumarinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,1-b]piridinilo] o furo[2,3-b]piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo), benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzodiazinilo, benzofurazanilo, benzotiopiranilo, benzotriazolilo, benzpirazolilo, dihidrobenzofurilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzotiopiranilo, dihidrobenzotiopiranil-sulfona, dihidrobenzopiranilo, indolinilo, isocromanilo, isoindolinilo,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

naftiridinilo, ftalazinilo, piperonilo, purinilo, piridopiridilo, quinazolinilo, tetrahidroquinolinilo, tienofurilo, tienopiridilo, tienotienilo y similares.

Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o mas grupos alquilo o aralquilo como se ha descrito anteriormente o uno o mas grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

Tambien se incluyen heterociclos mas pequenos tales como epoxidos y aziridinas.

El termino "heteroatomos" debe incluir ox^geno, azufre y nitrogeno.

Los compuestos de formulas I, II y III pueden formar sales que estan tambien dentro del alcance de esta invencion. Se prefieren sales farmaceuticamente aceptables (es decir, no toxicas, fisiologicamente aceptables), aunque tambien son utiles otras sales, p. ej., para aislar o purificar los compuestos de esta invencion.

En una realizacion de la invencion, la chaperona farmacologica se une selectivamente y estabiliza a una o mas enzimas gangliosidasa. Las gangliosidasas pueden incluir, por ejemplo, p-hexosaminidasa A, p-hexosaminidasa B y p-hexosaminidasa S o cualquier otra gangliosidasa asociada con la CAA.

En otra realizacion, la chaperona farmacologica aumenta el trafico de la gangliosidasa y/o sialidasa desde el reticulo endoplasmico (ER) hasta la localizacion final de las enzimas en una celula donde realiza su funcion enzimatica. En los casos de neuraminidasa 1, p-hexosaminidasa A y p-hexosaminidasa B, las chaperonas farmacologicas aumentan el trafico de las enzimas del ER al lisosoma. En el caso de la neuraminidasa 2, las chaperonas farmacologicas aumentan el trafico de las enzimas del ER al citosol. En el caso de la neuraminidasa 3, las chaperonas farmacologicas aumentan el trafico de la enzima del ER a los endosomas y a la membrana plasmatica. En el caso de la neuraminidasa 4, las chaperonas farmacologicas aumentan el trafico de la enzima del ER a las lisosomas y las mitocondrias. En el caso de la glucocerebrosidasa, la chaperona farmacologica aumenta el trafico de la enzima del ER al lisosoma. La chaperona farmacologica puede aumentar la actividad gangliosidasa y/o sialidasa mutante y/o de tipo salvaje. Ademas, la gangliosidasa o sialidasa puede catabolizar uno o mas gangliosidos. La actividad de la enzima puede incrementarse hasta en un 5%. La actividad de la enzima tambien puede aumentarse hasta un 10%, 20%, 40%, mas del 50%, casi 100% o incluso mas de 100%.

En una realizacion, la enzima es p-hexosaminidasa A y el gangliosido a catabolizar es GM2. En otra realizacion, la enzima es p-hexosaminidasa B y los gangliosidos a catabolizar son GA2 y GM2. En otra realizacion, la enzima es p- hexaminidasa S y los productos a catabolizar son gangliosidos sulfatados, glucosfingolfpidos sulfatados, glicosil- aminoglicanos sulfatados, oligosacaridos sulfatados y sulfato de dermatan.

En un aspecto de la invencion, la chaperona farmacologica es N-tiazolina acetilglucosamina (NGT). En otro aspecto la chaperona farmacologica es N-butil-desoxigalactonojirimicina (NB-DGJ). En otro aspecto la chaperona farmacologica es 2-acetamido-2-desoxinojirimicina (AdDNJ).

En un aspecto de la invencion, la chaperona farmacologica NB-DGJ tambien funciona para reducir la smtesis de gangliosidos mediante la inhibicion de la glucosilceramida sintasa, la enzima que cataliza la primera etapa en la smtesis de glucoesfingolfpidos y gangliosidos. NB-DGJ es una chaperona farmacologica que tambien puede funcionar como un SRT. Otras chaperonas farmacologicas tambien tienen esta doble funcion.

En otro aspecto de la invencion, una chaperona farmacologica puede combinarse con N-butildesoxinojirimicina (NB- DNJ), un inhibidor de glucosilceramida sintasa. La chaperona farmacologica y NB-DNJ se pueden dosificar simultaneamente al dfa, una vez por semana, dos veces por semana, tres veces por semana, cuatro dfas a la semana, cinco dfas a la semana o incluso menos o con mas frecuencia, o segun sea necesario. Una o mas chaperonas farmacologicas y NB-DNJ tambien se pueden dosificar por separado o al mismo tiempo y cada una se puede dosificar una vez por semana, dos veces por semana, tres veces por semana o cuatro o mas veces por semana, o segun sea necesario.

Muchas chaperonas farmacologicas diferentes se pueden utilizar para tratar la enfermedad de Alzheimer, incluyendo, pero no limitadas a, las enumeradas en las Tablas 1 y 2. Chaperonas farmacologicas adicionales que aumentan la actividad de una o mas enzimas gangliosidasa o sialidasa se pueden encontrar en Tropak et al., The Journal of Biol. Chem. 279 (14), 13478-13487 (2.004), asf como las estructuras qrnmicas de muchos de los compuestos enumerados en las Tablas 1 y 2.

Tabla 1:

Beta-Hexosaminidasa A y B:: N-acetil-glucosamina-tiazolina; (NGT)

: 2-acetamido-1,2-didesoxinojirimicina (AdDNJ)

: 2-acetamido-2-desoxinojirimicina (ADNJ)

: 6-acetamido-6-desoxicastanospermina

: Pirimetamina

: Inhibidores identificados median te rastreo HTS en Chemistry & Biology 2007 14, 153-164

: 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol; (LABNAc)

: N-bencil-2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol; (NBn-LABNAc)

: N-butil-2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol; (NBu-LABNAc)

: DABNAc

: Hidrocloruro de (2R, 3R, 4S, 5R)-2-acetamido-3,4-dihidroxi-5-hidroxi-metN- piperidinio; (GalNAc-isofagomina HCl)

: Galactosa O-(2-acetamido-2-desoxi-d-glucopiranosilideno)-amino-N- fenilcarbamato; (Gal-PUGNAc)

: Derivados de Gal-PUGNAc segun se describe para PUGNAc

: NAG-tiazolina (y sus derivados)

: PUGNAc (y sus derivados)

: 6-acetamido-2,6-didesoxi-2-C-hidroximetN-D-gluco-8-lactama

: Derivado 5 de 1-N-amino-2-acetamidometilo

: 2-acetamido-2-desoxi-d-glucoso-d-lactama

: 2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-desoxinojirimicina

: Derivados del acido 3-hidroxipipecolico

: Derivados del acido 3,4,5-trihidroxipipecolico

: Imidazopiridinas 14 y 15

: (3R,4R,5R,6R)-tetrahidroxiazepano

: NAc-1-Cp

: Nac-1-(CHa)2

: (5R,6S,7S,8S)-8-acetamido-5,6,7,8-tetrahidro-5-(hidroximetil)-imidazol[1,2- a]piridina -6,7-triol

: 2-acetamido-1,2,5-tridesoxi-1,5-imino-D-glucitol

: (2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-aminometil-3,4-dihidroxi-piperidina

: (2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-hidroximetil-3,4-dihidroxi-piperidina

N-Heptil IFG

N-(piperidin-4-ilmetM) IFG

N-(2-metoxietil) IFG

: Hidrocloruro de N-(2-metilbencil) IFG

: Hidrocloruro de N-(3-metilbencil) IFG

: N-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil) IFG

: N-(tiofen-2-ilmetM) IFG

: N-(piridin-4-MmetM) IFG

: N-Ciclopentilmetil IFG

: N-(5-metilpentil) IFG

: N-(4-aminobencil) IFG

: N-fenetil IFG

: N-(4-nitrobencil) IFG

: N-(4-metoxibencil) IFG

: N-Ciclohexil IFG

: Hidrocloruro de (3S,4R,5R)-3-fluoro-5-(hidroximetil)piperidin-4-ol

: (3R,4R,5R)-1-(2-ciclohexiletil)-5-(hidroximetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-(hidroximetil)-1-(2-nitrobencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-1-(3-aminobencil)-5-(hidroximetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-(hidroximetil)-1-(3-nitrobencil)piperidina-3,4-diol

: (S)-2-amino-1-((3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)piperidin-1-il)-4-metilpentan-1-ona

: (R)-2-amino-1-((3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)piperidin-1-il)-4-metilpentan-1-ona

: Hidrocloruro de (3R,4R,5S)-5-(fluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-(hidroximetil)-1-(3-metilbut-2-enil)piperidina-3,4-diol

: Cloruro de (3R,4R,5R)-1-((E)-3,7-dimetilocta-2,6-dienil)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)piperidinio

: (3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)-N-propilpiperidina-1-carboxamida

: 1-((3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)piperidin-1-il)pentan-1-ona

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-etilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-isopropilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2-hidroxipropan-2-il)piperidina-3,4-diol

: (4R,5R)-3,3-difluoro-5-(hidroximetil)piperidin-4-ol

: (4R,5R)-5-(hidroximetil)-3-metilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(1,1 -difluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(trifluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2,2-difluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-ciclopropilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2,2-difluorociclopropil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S,6S)-6-etil-5-(fluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S,6R)-6-etil-5-(fluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S,6S)-5-(difluorometil)-6-etilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S,6R)-5-(difluorometil)-6-etilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-1-bencil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-((S)-hidroxi(fenil)metil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-1-butil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-1-alil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

: 1-((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)pentan-1-ona

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(3-metoxibencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-metilbencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(metilsulfonil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-fluorobencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-((4-fluorofenil)(hidroxi)metil)piperidina-3,4-diol

: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-propilpiperidina-1-carboxamida

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-tosilpiperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(4-metilbencil)piperidina-3,4-diol

: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperidina-1-carboxamida

: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperidina-1-carbotioamida

: (3S,4R,5R)-N-butil-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidina-1-carboxamida

: (3S,4R,5R)-N-butil-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidina-1-carbotioamida

: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N,N-dimetilpiperidina-1-sulfonamida

: (3R,4R,5R)-5-(2-ciclohexil-1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2-ciclohexil-1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(4-fluorobencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5R)-5-((3,5-difluorofenil)(hidroxi)metil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-((3,5-difluorofenil)fluorometil)piperidina-3,4-diol

: 1-((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)etanona

: ((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)(fenil)metanona

Tabla 2:

OH F ^IST H: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

OH H: (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol

OH OH HOy^A H: (3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol

OH F HGyUv H: (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-etilpiperidina-3,4-diol

OH H

OH | ho^AA H: (3R,4R,5S)-5-isopropilpiperidina-3,4-diol

OH OH HO yU< ^NT H: (3R,4R,5S)-5-(2-hidroxipropan-2-il)piperidina-3,4-diol

OH OH w N H: (4R,5R)-3,3-difluoro-5-(hidroximetil)piperidin-4-ol

OH OH yy N H: (4R,5R)-5-(hidroximetil)-3-metilpiperidina-3,4-diol

OH F HOyA H: (3R,4R,5S)-5-(1,1 -difluoroetil)piperidina-3,4-diol

OH F H°Tj F H: (3R,4R,5S)-5-(trifluorometil)piperidina-3,4-diol

OH H0'CrrF H: (3R,4R,5S)-5-(2,2-difluoroetil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

OH SsT H

HO^ H: (3R,4R,5S)-5-ciclopropilpiperidina-3,4-diol

hoJ^/Vp V F H: (3R,4R,5S)-5-(2,2-difluorociclopropil)piperidina-3,4-diol

OH F HO^Ayj H: (3R,4R,5S,6S)-6-etil-5-(fluorometil)piperidina-3,4-diol

OH F HOy\J k'N'AN H: (3R,4R,5S,6R)-6-etil-5-(fluorometil)piperidina-3,4-diol

OH F ho^AAp ^IST '''i H: (3R,4R,5S,6S)-5-(difluorometil)-6-etilpiperidina-3,4-diol

OH F h°vYf k'N'AS H: (3R,4R,5S,6R)-5-(difluorometil)-6-etilpiperidina-3,4-diol

OH F VsAp ^NT: (3R,4R,5S)-1-bencil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

QH OH H: (3R,4R,5R)-5-((S)-hidroxi(fenil)metil)piperidina-3,4-diol

OH F ho^AAf ^IVT V: (3R,4R,5S)-1-butil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

LJ- X~ o X: (3R,4R,5S)-1-alil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

OH F h°yYf X: 1-((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)pentan-1-ona

OH F hovYf: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(3-metoxibencil)piperidina-3,4-diol

OH F h°vYF: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-metilbencil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(metilsulfonil)piperidina-3,4-diol

OH F h°TT^f i o=s=o 1

OH F ^IVT ka.: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-fluorobencil)piperidina-3,4-diol

OH OH H: (3R,4R,5R)-5-((4-fluorofenil)(hidroxi)metil)piperidina-3,4-diol

OH F H0vS^f ^INf O^NH s: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-propilpiperidina-1-carboxamida

OH F h°yYf ^IST i 0=S=0 $: (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-tosilpiperidina-3,4-diol

OH H: (3R,4R,5S)-5-(4-metilbencil)piperidina-3,4-diol

OH F h°Tj F O^NH 6

Tl: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperidina-1-carbotioamida

OH F HOv^AF H: (3S,4R,5R)-N-butil-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidina-1-carboxamida

OH F H0Y^J^F H: (3S,4R,5R)-N-butil-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidina-1-carbotioamida

OH F h°tSAf ^Ff i o=s=o 1 N / \: (3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N,N-dimetilpiperidina-1-sulfonamida

OH OH "Vi: (3R,4R,5R)-5-(2-ciclohexil-1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol

: (3R,4R,5S)-5-(2-ciclohexil-1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

OH HtmF H: (3R,4R,5S)-5-(4-fluorobencil)piperidina-3,4-diol

OH OH ho4sA_1x^^,f " T: (3R,4R,5R)-5-((3,5-difluorofenil)(hidroxi)metil)piperidina-3,4-diol

OH f HOV^V^Xv^5;5^F H J: (3R,4R,5S)-5-((3,5-difluorofenil)fluorometil)piperidina-3,4-diol

OH F «VS^ ^ivf cA: 1-((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)etanona

OH F h°yS^f ^NT oAo: ((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidin-1-il)(fenil)metanona

oh a-\ " F: Hidrocloruro de (3R,4R,5R,6S)-6-(2,4-difluorobencil)-5-(hidroximetil)piperidina-3,4- diol

: Hidrocloruro de (3S,4R,5R)-3-fluoro-5-(hidroximetil)piperidin-4-ol

CH CH "CTho N

CH N a^O 6: (3R,4R,5R)-5-(hidroximetil)-1-(2-nitrobencil)piperidina-3,4-diol

CH hcx0^oh k^^NH2: (3R,4R,5R)-1-(3-aminobencil)-5-(hidroximetil)piperidina-3,4-diol

OH KXj^^oh N 9 ^'0: (3R,4R,5R)-5-(hidroximetil)-1-(3-nitrobencil)piperidina-3,4-diol

CH n^S^an Y^° ' NH2: (S)-2-amino-1-((3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)piperidin-1-il)-4-metilpentan- 1-ona

CH 0^001 1 NH2: (R)-2-amino-1-((3R,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)piperidin-1-il)-4-metilpentan- 1-ona

5

10

OH F "fin N H

OH F HOvVS H

Procedimiento Quimico

Las composiciones de la presente invencion pueden prepararse de acuerdo con uno o mas de los siguientes esquemas.

imagen2

Hidrocloruro de ((2S,3S,4aR,8R,8aR)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol (2). Una disolucion de 1 (20,0 g, 55,0 mmol) en MeOH (500 ml) se combino con Pd(OH)2 (4-6 g) y formiato de amonio (14 g, 220 mmol) y la mezcla se calento a 50-55°C. Se anadieron cantidades adicionales (3 x 100,0 mmol) de formiato de amonio a lo largo de las siguientes 8 h. Despues de la adicion final, la mezcla de reaccion se agito adicionalmente y se calento durante 16 h adicionales a 50-55 °C. El catalizador se separo por filtracion y el filtrado se evaporo en vado. El producto bruto se disolvio en acetona (150 ml), se filtro y se anadio HCl en 2-PrOH. Despues de sembrar y despues de enfriar en un bano de hielo, el producto se recogio en forma de un solido cristalino blanco (11,0 g, 71%). 1H RMN (DMSO-d6) 9,45 (s, 2H), 4,80 (t, 1H, ex), 3,85 (m, 1H), 3,0-3,75 (m, 11H), 2,8 (q, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,2 (2, 6H).

(2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol (3). A una

disolucion de 2 (14,85 g, 50,0 mmol) en DMF (200 mL) se anadio K2CO3 (17,25 g, 125 mmol) y la mezcla se agito a 40°C durante aproximadamente 4 h. En este punto, se anadio BnCl (5,7 mL, 50,0 mmol) en una porcion y la reaccion se agito a 40 °C durante la noche. El disolvente se evaporo en vado y el residuo se suspendio en agua (600 mL) y

5

10

15

20

25

30

35

se anadio HCl para disolver el residuo. La disolucion se lavo con Et2O y luego se basifico con Na2CO3. La disolucion se extrajo con EtOAc (2 veces) y los extractos reunidos se lavaron con agua y despues con salmuera y luego se secaron sobre MgSO4. La disolucion se filtro y el filtrado se evaporo en vado para dar el compuesto del titulo (17,2 g, >95%) en forma de un aceite viscoso de incoloro a amarillo muy palido que se utilizo sin purificacion adicional. 1H RMN (CDCl3) 7,3 (m, 5H), 3,6-3,8 (m, 2H), 3,5 (s, 3H), 3,4 (t, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,268 (s, 3H), 2,9 (m, 2H), 2,2 (s ancho, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (t, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).

(2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetMoctahidro-[1,4]dioxmo[2,3-c]piridm-8-M)carboxaldehido (Procedimiento General A) (4). A una disolucion de DMSO (7,3 g, 96,9 mmol) en CH2Cl2 (150 mL), enfriada a -78°C, se anadio gota a gota una disolucion de cloruro de oxalilo (6,1 mL, 72,8 mmol) en CH2Cl2. Una vez completada la adicion, la mezcla de reaccion se agito durante 30 min adicionales, punto en el cual se anadio gota a gota una disolucion de 3 (17,0 g, 48,4 mmol) en CH2Cl2. Una vez completada la adicion, la reaccion se agito durante 1 h a -78°C y despues se anadio gota a gota diisopropiletilamina (34,4 mL, 193 mmol). Una vez completada esta adicion, se retiro el bano de enfriamiento y la mezcla de reaccion se dejo calentar a 0 °C cuando se anadio NaHCO3 saturado. La mezcla se diluyo con algo de CH2Cl2 adicional y despues la capa organica se separo y se seco sobre MgSO4. Despues de filtrar, el disolvente se evaporo en vado y el producto bruto se purifico por cromatogratia en gel de silice (Hex/EtOAc) para dar el compuesto del titulo (12,7 g, 75%) en forma de un aceite viscoso. 1H RMN (CDCl3) 9,73 (s, 1H), 7,2 (m, 5H), 3,75 (m, 2H), 3,5 (q, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,7-3,0 (m, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,25 (2s, 6H).

Hidrocloruro de ((2S,3S,4aR,8S,8aR)-6-bencN-8,8-difluorometN-2,3-dimetoxi-2,3-dimetMoctahidro-

[1,4]dioxino[2,3-c]piridina (Procedimiento General B) (5). A una disolucion de DAST (1,4 mL, 10,3 mmol) en CH2Cl2 (50 mL) enfriada a -15 °C se anadio gota a gota una disolucion de 4 (2,4 g, 6,9 mmol). Despues de 10 minutos, se retiro el bano de hielo y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. En este punto, la mezcla de reaccion se enfrio de nuevo en un bano de hielo y la reaccion se enfrio bruscamente por adicion de NaHCO3 saturado (gota a gota al principio, puesto que esto produce una ligera exotermia). La capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4, se filtro y el disolvente se evaporo en vado para dar un aceite amarillo. El residuo se purifico por cromatogratia sobre gel de silice (Hex/EtOAc) para dar el compuesto del titulo (1,6 g, 62%) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (CDCl3) 7,2 (m, 5H), 6,0 (dt, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,55 (m, 3H), 3,2 (2s, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 1,5 (s ancho, 1H), 1,2 (2s, 6H).

Hidrocloruro de (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina 3,4-diol (Procedimiento General C) (6). El compuesto 5 (1,6 g, 4,3 mmol) se calento a reflujo en una mezcla de EtOH/H2O/HCl (40 mL/40 mL/5 mL) y la reaccion se monitorizo mediante HPLC hasta que ya no se pudo detectar el material de partida. El disolvente se evaporo en vado y luego se co-evaporo 2 veces con EtOH. El residuo se disolvio en MeOH y se hidrogeno sobre Pd(OH)2. Una vez completado, el catalizador se separo por filtracion y el filtrado se evaporo en vado. El residuo se recristalizo en EtOH (50 mL) para dar compuesto del titulo (0,55 g, 66%) en forma de un solido blanco (p.f. 168-170 °C). 1H RMN (D2O) 6,15 (dt, 1H), 4,3-4,8 (m, 2H), 3,0 (t, 1H), 2,85 (t, 1H), 2,3 (m, 1H).

5

10

15

20

25

imagen3

(R) y (S)-1-((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)etanol Procedimiento General D (15/16). A una disolucion de 4 (7,0 g, 20,0 mmol) en THF seco (l0o mL) se anadio MeMgBr (20,0 mL, 1,4 M en THF/tolueno 3:1) y la reaccion se agito durante una noche a temperatura ambiente. La reaccion se enfrio bruscamente con NH4CI saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc (2 veces). Los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y el filtrado se evaporo en vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en gel de silice (hexano/2-PrOH) para dar el isomero principal (15) (1,6 g, 24,6%). 1H RMN (CDCl3) 7,3 (m, 5H), 4,15 (m, 1H), 3,5-3,9 (m, 3H), 3,3 (2s, 6H), 2,85 (m, 2H), 2,0 (2m, 4H), 1,3 (2s, 6H), 1,2 (d, 3H) Tambien se aislo el isomero secundario (16) (0,55 g, 7,5%) 7,3 (m, 5H), 3,75 (m, 2h), 3,5 (m, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,8 (m, 2H) , 2,0 (t, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,2 (2s, 6H), 1,0 (d, 3H).

(3R,4R,5R)-5((R)-1-hidroxietil)piperidina 3,4-diol (17). El compuesto 15 (0,55 g, 1,5 mmol) se agito en una mezcla de 9/1 TFA:H2O (20 mL) hasta que el material de partida ya no pudo detectarse por HPLC. Los componentes volatiles se retiraron y el residuo se co-evaporo 2-3 veces con EtoH y despues se disolvio en EtOH y se trato con K2CO3 solido. Despues de filtrar el solido, el filtrado se evaporo en vado, y el residuo se convirtio en una sal de HCl y se hidrogeno sobre Pd(OH)2. El catalizador se filtro y el filtrado se evaporo en vado. El producto bruto se purifico utilizando una resina de intercambio ionico (Dowex 50WX8 - 200) eluyendo con NH4OH 0,1 N. Las fracciones apropiadas se reunieron y se liofilizaron para dar el compuesto del tttulo (0,12 g, 50%). 1H RMN (D20) 4,2 (q, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,45 (m, 3H), 2,8 (m, 2H), 1,65 (m, 1H), 1,15 (d, 3H).

(3R,4R,5R)-5((S)-1-hidroxietil)piperidina 3,4-diol (10). El compuesto 16 (0,34 g, 0,93 mmol) se desprotegio como se ha descrito anteriormente para dar el compuesto del tttulo (0,11 g, 75%). 1H RMN (D2O) 4,15 (m, 2H), 3,5 (m, 1H), 3,35 (t, 1H), 3,15 (m, 2H), 1,8 (m, 1H), 1,1 (d, 3H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-8(S)-(1fluoroetil)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c] (11). El

compuesto 15 (1,8 g, 5,0 mmol) se fluoro utilizando el Procedimiento General B. La cromatograffa en gel de silice (Hex/EtOAc) dio el compuesto del tftulo (0,42 g, 23%). 1H RMN (CDCl3) 7,25 (m , 5H), 4,7-4,9 (dq, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,8 (m, 2H), 2,0 (m, 3H), 1,35 (dd, 3H), 1,2 (2s, 6H).

Hidrocloruro de (3R,4R,5R)-5((S)-1-fluoroetil)piperidina 3,4-diol (13). El compuesto 11 (0,42 g, 1,14 mmol) se desprotegio como se describe en el Procedimiento General C. Despues de separar el catalizador, el filtrado se evaporo en vado y luego se co-evaporo con EtOH (2 veces). El residuo resultante se trituro con acetona para dar el

compuesto del t^tulo (0,20 g, 88%) en forma de un solido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) 9,0 (s ancho, 2H), 5,6 (d, 1H, ex), 5,4 (d, 1H, ex), 5,0-5,2 (dq, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,2 (m, 2H), 2,9 (t, 1H), 2,7 (t, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,3 (dd, 3H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-8(R)-(1fluoroetil)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridina (12). El compuesto 16 (0,55 g, 1,5 mmol) se fluoro utilizando el Procedimiento General B para dar el compuesto del 5 tftulo (0,22 g, 40%). 1H RMN (CDCl3) 7,3 (m, 5H), 5,0 (dq, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,5-3,75 (m, 3H), 3,3 (2s, 6H), 3,0 (d, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,1 (m, 2H), 1,85 (m, 3H), 1,3 (2s, 6H).

Hidrocloruro de (3R,4R,5R)-5((R)-1-fluoroetil)piperidina 3,4-diol (14). El compuesto 12 (0,22 g, 0,6 mmol) se desprotegio como se describe en el Procedimiento General C. Despues de que se separo el catalizador, el filtrado se evaporo en vado y luego se co-evaporo con EtOH (2 veces). El residuo resultante se trituro con acetona para dar el 10 compuesto del tftulo (0,08 g, 67%) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (D2O) 5,1 (dq, 1H), 3,5 (m, 4H),

2,8 (m, 2H), 1,8 (m, 1H), 1,3 (dd, 3H).

imagen4

Hidrocloruro de ((2S, 3S,4aR, 8R, 8aR)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxmo[2,3-c]piridm-8- il)metanol (2). Una disolucion de 1 (20,0 g, 55,0 mmol) en MeOH (500 mL) se combino con Pd(OH)2 (4-6 g) y 15 formiato de amonio (14 g, 220 mmol) y la mezcla se calento a 50-55 °C. Se anadieron cantidades adicionales (3 x 100,0 mmol) de formiato de amonio a lo largo de las siguientes 8 h. Despues de la adicion final, la mezcla de reaccion se agito adicionalmente y se calento durante 16 h adicionales a 50-55 °C. El catalizador se separo por filtracion y el filtrado se evaporo en vach. El producto bruto se disolvio en acetona (150 mL), se filtro y se anadio Hcl en 2-PrOH. Despues de sembrar y despues enfriar en un bano de hielo, el producto se recogio en forma de un solido 20 cristalino blanco (11,0 g, 71%). 1H RMN (DMSO-de) 9,45 (s, 2H), 4,80 (t, 1H, ex), 3,85 (m, 1H), 3,0-3,75 (m, 11H),

2,8 (q, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,2 (2, 6H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol (3). A

una disolucion de 2 (14,85 g, 50,0 mmol) en DMF (200 mL) se anadio K2CO3 (17,25 g, 125 mmol) y la mezcla se agito a 40 °C durante aproximadamente 4 h. En este punto, se anadio BnCl (5,7 ml, 50,0 mmol) en una porcion y la 25 reaccion se agito a 40 °C durante la noche. El disolvente se evaporo en vach y el residuo se suspendio en agua (600 mL) y se anadio HCl para disolver el residuo. La disolucion se lavo con Et2O y despues se basifico con Na2CO3. La disolucion se extrajo con EtOAc (2 veces) y los extractos reunidos se lavaron con agua y despues con salmuera y despues se seco sobre MgSO4. La disolucion se filtro y el filtrado se evaporo en vach para dar el compuesto del tftulo (17,2 g, >95%) en forma de un aceite viscoso de incoloro a amarillo muy palido que se utilizo sin purificacion 30 adicional. 1H RMN (CDCla) 7,3 (m, 5H), 3,6-3,8 (m, 2H), 3,5 (s, 3H), 3,4 (t, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,268 (s, 3H), 2,9 (m, 2H), 2,2 (s ancho, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (t, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridm-8-il)carboxaldehdo (Procedimiento General A) (4). A una disolucion de DMSO (7,3 g, 96,9 mmol) en CH2CI2 (150 mL) enfriada a -78 °C se anadio gota a gota una disolucion de cloruro de oxalilo (6,1 mL, 72,8 mmol) en CH2CI2. Despues de completarse la adicion, la mezcla de reaccion se agito durante 30 min adicionales, punto en el que se anadio gota a gota una disolucion de 3 (17,0 g, 48,4 mmol) en CH2Cl2. Una vez completada la adicion, la reaccion se agito durante 1 h a -78°C y despues se anadio gota a gota diisopropiletilamina (34,4 mL, 193 mmol). Despues de completarse esta adicion, el bano de refrigeracion se retiro y se dejo que la mezcla de reaccion se calentara a 0 °C cuando se anadio NaHCO3 saturado. La mezcla se diluyo con algo de CH2Ch adicional y despues la capa organica se separo y se seco sobre MgSO4. Despues de la filtracion, el disolvente se evaporo en vado y el producto bruto se purifico mediante cromatograffa en gel de silice (Hex/EtOAc) para dar el compuesto del tftulo (12,7 g, 75%) en forma de un aceite viscoso. 1H RMN (CDCla), 9,73 (s, 1H), 7,2 (m, 5H), 3,75 (m, 2H), 3,5 (q, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,7-3,0 (m, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,25 (2s, 6H).

Hidrocloruro de ((2S,3S,4aR,8S,8aR)-6-bencil-8,8-difluorometil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-

[1,4]dioxino[2,3-c]piridina (Procedimiento General B) (5). A una disolucion de DAST (1,4 mL, 10,3 mmol) en CH2Cl2 (50 mL) enfriada a -15 °C se anadio gota a gota una disolucion de 4 (2,4 g, 6,9 mmol). Despues de 10 minutos, el bano de hielo se retiro y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. En este punto se enfrio de nuevo la mezcla de reaccion en un bano de hielo y la reaccion se enfrio bruscamente mediante la adicion de NaHCO3 saturado (gota a gota al principio, ya que esto produce una ligera exotermia). La capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4, se filtro y el disolvente se evaporo en vach para dar un aceite amarillo. El residuo se purifico mediante cromatograffa sobre gel de sflice (Hex/EtOAc) para dar el compuesto del tftulo (1,6 g, 62%) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (CDCh) 7,2 (m, 5H), 6,0 (dt, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,55 (m, 3H), 3,2 (2s, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 1,5 (s ancho, 1H), 1,2 (2s, 6H).

Hidrocloruro de (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina 3,4-diol (Procedimiento General C) (6). Compuesto 5

(1,6 g, 4,3 mmol) se calento a reflujo en una mezcla de EtOH/H2O/HCl (40 mL/40 mL/5 mL) y la reaccion se monitorizo mediante HPLC hasta que ya no se pudo detectar el material de partida. El disolvente se evaporo en vado y luego se co-evaporo 2 veces con EtOH. El residuo se disolvio en MeOH y se hidrogeno sobre Pd(OH)2. Una vez completado, el catalizador se separo por filtracion y el filtrado se evaporo en vach. El residuo se recristalizo en EtOH (50 mL) para dar el compuesto del tftulo (0,55 g, 66%) en forma de un solido blanco (p.f. 168-170 °C). 1H RMN (D2O) 6,15 (dt, 1H), 4,3-4,8 (m, 2H), 3,0 (t, 1H), 2,85 (t, 1H), 2,3 (m, 1H).

imagen5

(3R,4R,5S)-1.butil-5-(difluorometil)piperidina 3,4-diol (Procedimiento General D) (7a; R5 = Bu). Una mezcla de 6 (0,30 g, 1,4 mmol), K2CO3 (0,48 g, 3,5 mmol) y BuBr (0,20 g, 1,4 mmol) se combino en DMF (10 mL) y se calento durante la noche a 60°C. El disolvente se evaporo en vach y el residuo se disolvio en EtOAc, se lavo con agua y despues con salmuera y se seco sobre Na2SO4. Despues de la filtracion, el filtrado se evaporo en vado para dar el producto bruto que se purifico por cromatograffa (CH2Ch/(9:1) MeOH/NH4OH) para dar el compuesto del tftulo (0,25 g, 80%) en forma de un jarabe incoloro. MH+ = 224. 1H RMN (DMSO-cfe) 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,13 (d, 1H, ex), 4,91 (d, 1H, ex), 3,3 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,9 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,75 (t, 1H), 1,2-1,5 (2m, 4H), 0,9 (t, 3H).

(3R,4R,5S)-1.Alil-5-(difluorometil)piperidina 3,4-diol (7b; R5 = alilo). Siguiendo el Procedimiento General D utilizando bromuro de alilo (0,17 g, 1,4 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,22 g, 76%). MH+ = 208. 1H RMN (DMSO-de) 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,8 (m, 1H), 5,2 (m, 3H), 4,92 (d, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,1 (1H), 2,95 (d, 2H), 2,85 (d, 2H), 1,9 (m ancho, 2H), 1,75 (t, 1H).

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-fluorobencil)piperidina 3,4-diol (7c; R5 = 4-fluorobencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando bromuro de 4- fluorobencilo (0,26 g, 1,4 mmol), el compuesto del tftulo se obtuvo en forma de un solido blanco (0,22 g, 56%). MH+= 276. 1H RMN (DMSO-de) 7,4 (m, 2H), 7,15 (m, 2H), 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4,9 (d, 1H, ex), 3,5 (q, 2H), 3,3 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-metilbencil)piperidina 3,4-diol (7d; R5 = 4-metilbencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando bromuro de 4- metilbencilo (0,26 g, 1,4 mmol), el compuesto del tftulo se obtuvo en forma de un solido blanco (0,30, 81%). MH+ = 272. 1H RMN (DMSO-de) 7,2 (m, 4H), 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4,9 (d, 1H, ex), 3,5 (q, 2H), 3,3 (1H), 3,05 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 2,5 (s, 3H), 1,95 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

5

10

15

20

25

30

35

40

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(4-metoxilbencil)piperidma 3,4-diol (7e; R5 = 4-metoxilbencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de 4- metoxilbencilo (0,26 g, 1,4 mmol), el compuesto del t^tulo se obtuvo en forma de un jarabe incoloro (0,19 g, 49%). MH+ = 288. 1H RMN (DMSO-da) 7,3 (m, 1H), 6,85 (m, 3H), 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4.9 (d, 1H, ex), 3,75 (s, 3H), 3,5 (q, 2H), 3,4 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,85 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

imagen6

1-((3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxipiperidma-1-il) pentan-1-ona (8a; Z = CO; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de pentanofto (0,17 g, 1,4 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,26 g, 71%). MH+ = 252. 1H RMN (DMSO-de) 5,9-6,5 (dt, 1H), 5,35 (m, 1H, ex), 5,25 (m, 1H, ex), 4,2 (dd, 1H), 3,75 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (t, 2H), 1,9 (m ancho, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,25 (m, 2H), 0,85 (t, 3H).

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(metanosulfoml)piperidma 3,4-diol (8b; Z = SO2; R5 = Me) Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de metanosulfonilo (0,16 g, 1,4 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,17 g, 51%). 1H RMN (DMSO-d6) 6,2 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,43 (d, 1H, ex), 5,38 (d, 1H, ex), 3,2-3,7 (m, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 2,7 (t, 1H), 2,1 (s ancho, 1H).

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-tosilpiperdma 3,4-diol (8b; Z = SO2; R5 = Ph) Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reaccion se realizo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de toluenosulfonilo (0,26, 1,4 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,35 g, 67%). 1H RMN (DMSO-de) 7,6 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,25 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,4 (2d, 2H, ex), 3,3-3,55 (m, 4H), 3,2 (m, 1H), 2,5 (m, 3H), 2,4 (t, 1H), 2,1 (m, 1H).

imagen7

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-W-propilpiperdma-1-carboxamida (Procedimiento General E) (9a; X = O; R5 = propilo). A una disolucion de 6 (base libre) (0,29 g, 1,2 mmol) en DMF seca (5 mL) se anadio isocianato de propilo (0,10 g, 1,2 mmol) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se evaporo en vado y el residuo se purifico mediante cromatograffa (CH2Ch/MeOH) para dar el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,14 g, 48%). MH+ = 253. 1H RMN (DMSO-de) 6,7 (t, 1H), 6,22 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,25 (d, 1H, ex), 5,15 (d, 1H, ex), 4,05 (d, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,3 (m, 2H), 3,0 (q, 2H), 2,5 (m, 1H), 1,8 (a ancho, 1H), 1,4 (m, 2H), 0,85 (t, 3H).

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-W-femlpiperdma-1-carboxamida (9b; X = O; R5 = fenilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isocianato de fenilo (0,14 g, 1,2 mmol) se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,21 g, 62%). MH+ = 287. 1H RMN (DMSO-de) 8,7 (s, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,3 (t, 2H), 6,95 (t, 1H), 6,3 (t, 1H, J = 5,5 (d, 1H), 5,35 (d, 1H), 5,25 (d, 1H), 4,1 (t, 2H), 3,3 (m, 2H), 2,85 (t, 1H), 2,75 (t, 1H), 1,95 (d ancho, 1H).

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-W-butilpiperdma-1-carboxamida (9c; X = O; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isocianato de butilo (0,12 g, 1,2 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un solido blanco (0,24 g, 76%). MH+ = 267. 1H RMN (DMSO-de) 6,6 (t, 1H), 6,2 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,25 (d, 1H), 5,1 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,05 (q, 2H), 2,65 (t, 1H), 2,45 (m, 1H), 1,8 (d ancho, 1H), 1,2-1,4 (2m, 4H), 0,85 (t, 3H).

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-W-butilpiperdma-1-carbtioamida (9d; X = S; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isotiocianato de butilo (0,14 g, 1,2 mmol), se obtuvo el compuesto del tftulo en forma de un jarabe incoloro (0,21 g, 63%). MH+ = 283. 1H RMN (DMSO-de) 7,85 (t, 1H), 6,25 (t, 1H), 5,35 (2d, 2H),

4,8 (d, 1H), 4,45 (d, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,05 (t, 1H), 2,8 (t, 1H), 1,85 (d ancho, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,35 (m, 2H), 1,1 (m, 1H), 0,95 (t, 3H).

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-W-femlpiperdma-1-carbotioamida (9e; X = S; R5 = fenilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isotiocianato de fenilo (0,16 g, 1,2 mmol) se obtuvo el compuesto del tttulo en 5 forma de un solido blanco (0,31 g, 86%). MH+ = 303. 1H RMN (DMSO-de) 9,5 (s, 1H), 7,3 (m, 4H), 7,1 (t, 1H), 6,35 (t, 1H), 5,35 (2d, 2H), 4,85 (d, 1H), 4,55 (d, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,2 (t, 1H), 3,0 (t, 1H), 2,05 (d ancho, 1H).

Los compuestos de la presente invencion tambien pueden ser preparados por un experto en la tecnica utilizando los siguientes esquemas generales:

imagen8

Claims

5

10

15

20

25

30

35

REIVINDICACIONES

1. Una chaperona farmacologica para uso en tratar la Angiopatia Amiloide Cerebral (CAA) en donde la chaperona farmacologica se une selectivamente a y estabiliza una gangliosidasa seleccionada del grupo que consiste en p- hexosaminidasa A, p-hexosaminidasa B y p-hexosaminidasa S; y en donde la chaperona farmacologica se selecciona de:

N-butil-desoxigalactonojirimicina (NB-DGJ)

N-acetil-glucosamina-tiazolina (NGT)

2-acetamido-1,2-didesoxinojirimicina (AdDNJ)

2-acetamido-2-desoxinojirimicina (ADNJ)

6-acetamido-6-desoxicastanospermina

Pirimetamina

2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (LABNAc)

N-bencil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBn-LABNAc)

N-butil 2-acetamido-1,4-imino-1,2,4-tridesoxi-L-arabinitol (NBu-LABNAc)

DABNAc

hidrocloruro de (2R, 3R, 4S, 5R)-2-acetamido-3,4-dihidroxi-5-hidroxi-metil-piperidinio (GalNAc-isofagomina HCl) Galactosa O-(2-acetamido-2-desoxi-d-glucopiranosilideno)-amino-N-fenilcarbamato (Gal-PUGNAc)

NAG-tiazolina (y sus derivados)

PUGNAc (y sus derivados)

6-acetamido-2,6-didesoxi-2-C-hidroximetil-D-gluco-8-lactama

2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-d-lactama

2-acetamido-2-desoxi-d-glucono-desocinojirimicina

derivados del acido 3-hidroxipipecolico

derivados de acido 3,4,5-trihidroxipipecolico

(3R,4R,5R,6R)-tetrahidroxiazepano

NAc-1-Cp

NAc-1-(CHa)2

(5R,6S,7S,8S)-8-acetamido-5,6,7,8-tetrahidro-5-(hidroximetil)-imidazol[1,2-a]piridina-6,7-triol

2-acetamido-1,2,5-tridesoxi-1,5-imino-D-glucitol

(2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-aminometil-3,4-dihidroxi-piperidina

(2R,3R,4S,5R)-2-acetamido-5-hidroximetil-3,4-dihidroxi-piperidina.
2. Una chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la chaperona se une a p- hexosaminidasa B.
3. Una chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en donde la chaperona farmacologica aumenta el trafico de la gangliosidasa desde el retfculo endoplasmico al citosol o desde el retfculo endoplasmico al endosoma y la membrana plasmatica.
4. Una chaperona farmacologica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la chaperona farmacologica aumenta la actividad mutante y/o de tipo salvaje de la gangliosidasa.
5. Una chaperona farmacologica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la gangliosidasa cataboliza gangliosidos; y en donde la gangliosidasa es p-hexosaminidasa B y los gangliosidos son GA2 y GM2.
6. La chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la chaperona farmacologica es 5 N-acetil-glucosamina-tiazolina.
7. La chaperona farmacologica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la Angiopatia Amiloide Cerebral es Angiopatia Amiloide Cerebral Familiar.
8. La chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en donde la Angiopatfa Amiloide Cerebral Familiar es provocada por una mutacion en la protema precursora amiloide (APP).

10 9. Una chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la chaperona farmacologica

es 2-acetamido-1,2-dihidroxinojirimicina.
10. La chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en donde la Angiopatfa Amiloide Cerebral es Angiopatia Amiloide Cerebral Familiar.
11. La chaperona farmacologica para uso de acuerdo con la reivindicacion 10, en donde la Angiopatia Amiloide 15 Cerebral Familiar es provocada por una mutacion en la protema precursora amiloide (APP).

imagen1

iren-D. pasrratca

sAPPa

sAPPp

APP

(3-secretasa

AICD

AICD

citosol

imagen2

corteza de ratones HEXB -/■

HEXB*H

Niveles de APP, sAPP, CTF y A(5 en

AB42 intraneuronal en la

ratones HEXB +/+, HEXB +/- y HEXB

de 4 meses de edad

hexb*;*

HEXB*/

HEXB-/

X

—

Niveles de Tau total y P-Tau en

P-Tau(Thr202) en la medula de

homogeneizados de cerebro de raton

ratones HEXB

□

Tau Total

|M8u(Thr231)

p-Tau(Ser202)

p-Tau(Thr181)

HEXB-/.

HEXBV»

A|51-40 (pg/miyproteina total

imagen3

imagen4

Niveles de B-Hex en Neuroblastomas de Raton N2A

(tratados 3 dias con 10 uM de AdDNJ, NGT o DGJ)

o ro o

~r co

CO.

No tratado AdDNJ

NGT

DGJ

QC

Niveles de sAPPa en Neuroblastomas de Raton

N2A (tratados 3 dias con 10 pM de AdDNJ o NGT)

1.0

CL ,ro

< o B
0.5-

T3 03

> <U

<r

No tratado AdDNJ

NGT

imagen5

A

Actividad Total de B-Hexosaminidasa B Actividad Total de (3-Hexosaminidasa

NGT (100 mg/kg/d) Estudio Lavado

NGT Dosis Respuesta

(7 dias tratamiento)

lavado

C2_

2000-.

20001

1600

ro 4=1600

O)

ra —

£ E 1000-

ro-51000- .

500-

500-

no tratado

100

300

mg/kg AT3150 (agua potable)

dias de lavado

Niveles en Cerebro de NGT

Niveles en Plasma de NGT

10-,

10-

lavado

lavado

mg/kg por dia; Agua Potable

100 mg/kg por dia; Agua Potable

sAPPa Actividad Total Especifica de P-Hex

(% relativo a no tratado) nmol/mg proteina/h

Transcurso en el Tiempo de NGT Actividad Total de P-Hex en Cerebro

imagen6

-Cr no tratado -O 30 mg/kg NGT ■O 100 mg/kg NGT

Dias de Tratamiento (agua potable)

Niveles de sAPPa en Cerebro

imagen7

-g- no tratado ■o 30 mg/kg NGT •<>• 100 mg/kg NGT

imagen8

cambio relativo en mveles

cambio relativo en mveles de

de neuramimdasa 1

neuramimdasa 1

2 >

10-
0.5-

Acido n-butil-2-desoxi-2,3-

dehKJro-N-acetilneuramimco

isofagomma :

Unidades de Densitometria

Figura 8

o

TJ

c

o

Li.

0)

TJ

(/>

TO

tj

'to

v_

</>

3

CO

Niveles de Neu3 en Celulas SHSY-5Y Tratadas 600000 Con Cosis Crecientes de Zanamivir

imagen9

Zanamivir (^M)