ES2633689T3

ES2633689T3 - Regulación de fosfato con moléculas pequeñas

Info

Publication number: ES2633689T3
Application number: ES10733188.6T
Authority: ES
Inventors: Uttam Saha; Christian F. Helvig; P. Martin Petkovich
Original assignee: Opko Ireland Global Holdings Ltd
Current assignee: Opko Ireland Global Holdings Ltd
Priority date: 2009-01-26
Filing date: 2010-01-26
Publication date: 2017-09-22
Anticipated expiration: 2030-01-26
Also published as: EP3251677A2; JP5783910B2; US20120028926A1; CA2977001A1; EP2389183A1; JP2012515727A; WO2010083613A1; EP3251677A3; EP2389183B1; US9198923B2; CA2746832A1; CA2746832C; CA2977001C; EP3351250A2; EP2389183A4; EP3351250A3; JP2015155461A

Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:**Fórmula** y combinaciones cualquiera de los anteriores; en donde X es O, S, NH o N-alquilo; R1 es halógeno, OH, O-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo en posiciones únicas o múltiples; y R2 es H, alquilo o bencilo sustituido; para uso en: un método para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia.

Description

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DESCRIPCION

Regulacion de fosfato con moleculas pequenas

Antecedentes

Campo de la divulgacion

La divulgacion se refiere en general a moleculas pequenas que se pueden usar para inhibir el transporte de fosfato. Particularmente, la divulgacion se dirige a moleculas pequenas que se pueden usar para tratar o prevenir enfermedades que estan relacionadas con trastornos en el mantenimiento de niveles normales de fosfato en suero. Mas particularmente, esta divulgacion se dirige a moleculas pequenas que se pueden usar para tratar o prevenir hiperfosfatemia.

Breve descripcion de tecnologia relacionada

El fosforo y el fosfato inorganico (Pi) participan en numerosos procesos biologicos cnticos incluyendo senalizacion celular, smtesis de acidos nucleicos, metabolismo de energfa, funcion de la membrana, y mineralizacion del hueso. Por tanto, cambios significativos en los niveles en suero de Pi o un equilibrio de Pi descentrado pueden tener consecuencias fisiologicas significativas. Los descensos rapidos en las concentraciones de Pi en suero se pueden manifestar en un numero de patologfas incluyendo miopatfa, disfuncion cardiaca, funcion anormal de neutrofilos, disfuncion de plaquetas, y fragilidad de la membrana de globulos rojos. La deficiencia cronica en Pi en suero puede causar alteracion en la mineralizacion de huesos, que puede producir osteomalacia y raquitismo. En contraste, las concentraciones elevadas de Pi en suero contribuyen a la patogenesis de hiperparatiroidismo secundario en pacientes con insuficiencia renal cronica. La hiperfosfatemia y el consecuente aumento en el producto calcio-fosfato (Ca x P) produce la calcificacion de tejidos blandos y paredes de vasos sangumeos, y se asocia con mayor riesgo de mortalidad.

El nivel en plasma de Pi se establece principalmente mediante: (1) el control de la absorcion de Pi en el intestino delgado, que esta directamente estimulado por vitamina D, (2) factores que controlan la velocidad de resorcion del hueso, y (3) excrecion de Pi en el rinon, que esta bajo la influencia de la hormona paratiroidea (PTH) y factores fosfaturicos tales como el factor de crecimiento de fibroblastos-23 (FGF-23). Las alteraciones de las rutas de senales que controlan la homeostasis de fosfato, tal como funcion renal inadecuada o hipoparatiroidismo, con frecuencia dan lugar a hiperfosfatemia. La hiperfosfatemia cronica puede producir anomalfas graves en el metabolismo de calcio y fosforo, que con frecuencia se manifiesta por hiperparatiroidismo, enfermedad osea y calcificacion ectopica en articulaciones, pulmones, ojos y vasculatura. Para pacientes que muestran insuficiencia renal, un aumento del fosforo en suero dentro del intervalo normal se ha asociado con la evolucion de la insuficiencia renal y un riesgo aumentado de episodios cardiovasculares. A la inversa, reducir la retencion de fosfato puede ralentizar la evolucion de la enfermedad renal. Por tanto, para pacientes con insuficiencia renal que son hiperfosfatemicos y para pacientes con enfermedad renal cronica (ERC) cuyo fosfato en suero esta dentro del intervalo normal o solo esta ligeramente elevado, los enfoques terapeuticos para reducir la absorcion y retencion de fosfato son beneficiosos.

Segun evoluciona la enfermedad renal cronica, los niveles de fosfato en suero se hacen mas diffciles de controlar. Se describio que mas del 60% de los pacientes en hemodialisis teman niveles de fosfato en suero que superaban 5,5 mg/dl. Una concentracion de fosforo en suero fisiologica normal en general se considera que esta entre aproximadamente 2,5 mg/dl hasta aproximadamente 4,5 mg/dl (Block G & Port F, Am. J. Kidney Dis. 2000, 35:12261237). Ademas, se describio que los pacientes de hemodialisis con niveles de fosforo en suero mayores de 6,5 mg/dl teman un riesgo de mortalidad el 27% mayor que pacientes con fosforo en suero entre 2,4 y 6,5 mg/dl. Basado en estos descubrimientos, la National Kidney Foundation - Kidney Disease Outcome Quality Initiative (K/DOQI) Clinical Practice Guidelines for Bone Metabolism and Disease in Chronic Kidney Disease han recomendado recientemente acciones mas rigurosas para controlar el fosforo en suero y el producto Ca x P para mejorar la calidad de vida y longevidad de los pacientes.

Los enfoques terapeuticos actuales para tratar la hiperfosfatemia incluyen limitar la ingesta de fosforo alimentario y emplear matrices que unen fosfato, ambos de los cuales son en gran medida inadecuados y con frecuencia mal tolerados. El enfasis clmico temprano se dirigfa hacia limitar la ingesta de fosforo alimentario. El fosforo alimentario viene de tres fuentes principales, el contenido en fosforo inherente en productos alimenticios, aditivos que contienen fosfato para conservacion, y suplementos alimenticios que contienen fosfato. Puesto que el fosforo alimentario deriva principalmente de protema, la restriccion significativa de fosforo inevitablemente limita la ingesta de protemas. Como resultado, los pacientes de dialisis experimentan un riesgo aumentado de malnutricion y mortalidad.

Las matrices que unen fosforo inicialmente usadas eran compuestos de aluminio y calcio. Las sales de calcio que se han utilizado para la union a fosfato incluyen carbonato, acetato (tal como PhosLo® comprimidos de acetato de calcio), citrato, alginato, y sales cetoacidas de calcio. Las ventajas de usar calcio como la sustancia principal que forma complejos con fosforo son los efectos inhibidores sobre la secrecion de la hormona paratiroidea, bajo coste, y buena tolerabilidad. Sin embargo, esta clase de agentes terapeuticos generalmente producen hipercalcemia porque

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tales unidores pueden subir el mdice Ca x P, produciendo las manifestaciones de fosforo elevado. Las sales de aluminio y magnesio estan disponibles como unidores de fosfato no basados en calcio, pero estos compuestos tienen un numero de potenciales efectos secundarios graves. El uso prolongado de geles de aluminio produce acumulaciones de aluminio, y con frecuencia toxicidad de aluminio, acompanada por tales smtomas como encefalopatia, osteomalacia y miopatfa.

Las resinas polimericas, inicialmente desarrolladas como secuestrantes de acidos biliares, tambien se estan estudiando o usando clmicamente como unidores de Pi. Se demostro la evolucion reducida o incluso la mejora de calcificaciones vasculares con el uso de estos unidores de fosfato basados en polfmeros. Sin embargo, inherente en su capacidad de unir colesterol, estos unidores tambien forman complejos con y por tanto reducen la vitamina D, entre otras importantes vitaminas y nutrientes. El cloruro de lantano, un unidor de fosfato no basado en calcio tambien se ha investigado clmicamente. Los efectos sobre los niveles de fosfato parecen ser similares a los de unidores de fosfato basados en polfmeros. El oxido de hierro, debido a su capacidad de formar complejos con fosfato tambien se esta usando en clmica. Todas las terapias actuales se basan en formar complejos con fosfato alimentario para hacerlo inaccesible para el trasporte transluminal en suero.

El documento EP1813620 describe una serie de derivados de acido fosfonico y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos que se manifiesta que son agentes anti-hiperfosfatemia y se describe que tienen actividad que disminuye la concentracion de fosfato en suero. Los derivados tienen la formula general (I) que comprende un anillo B unido a un anillo C a traves de un enlazador D.

Por las razones anteriores, permanece una necesidad para nuevos metodos y composiciones farmaceuticas para reducir la absorcion de fosfato en el aparato digestivo y para prevenir o atenuar la hiperfosfatemia.

Compendio

La invencion reivindicada se define en la reivindicacion 1 y la reivindicacion 4.

Por tanto, la invencion reivindicada proporciona el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para tratar, retrasar, o prevenir hiperfosfatemia, en donde el compuesto se selecciona del grupo como se define en las reivindicaciones. La invencion reivindicada tambien proporciona un compuesto para uso en un metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia, en donde el compuesto se selecciona del grupo como se define en las reivindicaciones.

En una forma de realizacion de la divulgacion, dicho metodo es para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia que surge como resultado de intervencion farmaceutica para el tratamiento de enfermedades en necesidad de tal terapia y es por administracion de una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones o cualquier formulacion que comprende una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones.

Estas moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones pueden inhibir el transporte de fosfato a traves de la membrana de celulas epiteliales humanas, y por tanto pueden inhibir la absorcion gastrointestinal de fosfato. Estos compuestos se pueden usar para tratar o prevenir enfermedades cuya causa o efecto rafz estan relacionados con trastornos en el mantenimiento de niveles normales de fosfato en suero.

Estas moleculas pequenas se pueden administrar solas o en combinacion en una formulacion farmaceuticamente aceptable, por via oral o por inyeccion.

Las caractensticas preferidas, tal como componentes, intervalos composicionales de los mismos, sustituyentes, condiciones, y etapas, se pueden seleccionar de varios ejemplos proporcionados en el presente documento.

Los aspectos y ventajas adicionales seran aparentes para los expertos en la materia a partir de una revision de la siguiente descripcion detallada, tomada junto con las figuras. Mientras que la invencion es susceptible de formas de realizacion en varias formas, la descripcion posterior incluye formas de realizacion espedficas con el entendimiento de que la divulgacion es ilustrativa, y no se pretende que limite el ambito de la invencion a las formas de realizacion espedficas descritas en el presente documento. El ambito de la invencion se define en las reivindicaciones.

Se debe entender que la fraseologfa y terminologfa usadas en el presente documento son para el fin de descripcion y no se deben considerar como limitantes. El uso de los terminos “incluir”, “tener” y “comprender” y variaciones de los mismos en el presente documento se pretende que abarque los elementos enumerados despues de ellos y equivalentes de los mismos, asf como elementos adicionales opcionales y equivalentes de los mismos.

Breve descripcion de las figuras

La figura 1 muestra los efectos de los compuestos 001-029 sobre la inhibicion de la absorcion de fosfato en celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2.

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La figura 2 muestra el efecto de la dosis de los compuestos 002, 004, 012 y 028 sobre la inhibicion de la absorcion de fosfato en celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2.

La figura 3 muestra la viabilidad de celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2 en presencia de los compuestos 002, 004, 012 y 028 usando reduccion del colorante AZUL ALAMAR.

La figura 4 muestra la viabilidad de celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2 en presencia de los compuestos 002, 004, 012 y 028 usando exclusion de azul de tripan.

La figura 5 muestra el efecto de la dosis de los compuestos 002, 004, 012, 021, 022, 023 y 028 en ratas Sprague Dawley machos.

Descripcion detallada

Sin pretender estar asociado a ninguna teona particular, un enfoque mas eficaz a limitar la absorcion de fosfato (en lugar de restringir la ingesta alimentaria de fosfato o usar matrices que unen fosfato) es bloquear directamente la actividad fosfatasa alcalina intestinal responsable de la produccion de fosfato intestinal e inhibir el sistema de transporte transluminal (NaPi-2b) responsable de hacer llegar el fosfato al suero. La absorcion de fosfato en el intestino delgado puede estar mediada por transportador, acoplando el transporte de fosfato al de sodio en un mecanismo dependiente de energfa. Un ejemplo es el caso del cotransportador de Na/fosfato NaPi-2b. Sin embargo, otros mecanismos tambien pueden ser importantes para el transporte. La identificacion de inhibidores de molecula pequena del transporte de fosfato se puede usar terapeuticamente para limitar la absorcion de fosfato intestinal de fuentes nutricionales. Este enfoque puede ser util, por ejemplo, para el tratamiento o prevencion de hiperfosfatemia en pacientes con enfermedad renal.

Al describir las formas de realizacion y reivindicar la invencion, se usa la siguiente terminologfa segun las definiciones explicadas a continuacion, a menos que explfcitamente se caractericen de otra manera.

Como se usa en el presente documento, el termino “inhibir” significa reducir o prevenir, en todo o en parte.

Como se usa en el presente documento, el termino “prevenir” significa alcanzar un beneficio profilactico. Por ejemplo, un compuesto de molecula pequena que tiene un grupo fosfonato se administra a un paciente en riesgo de desarrollar hiperfosfatemia o a un paciente que describe uno o mas de los smtomas patofisiologicos de hiperfosfatemia incluso aunque puede que no se haya hecho un diagnostico de hiperfosfatemia. Espedficamente, un compuesto de molecula pequena que tiene un grupo fosfonato se puede administrar a un paciente con enfermedad renal cronica en donde no se ha diagnosticado hiperfosfatemia.

Como se usa en el presente documento, una “formulacion farmaceuticamente aceptable” se refiere a una entidad o composicion molecular que esta aprobada o es aprobable por la Agencia de Alimentos y Farmacos de los EE UU o una agencia reguladora extranjera correspondiente para la administracion a seres humanos.

Como se usa en el presente documento, una “cantidad eficaz” es una cantidad que produce un desenlace terapeutico beneficioso de la afeccion que se trata. Por ejemplo, una cantidad eficaz de una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato tendra uno o mas efectos tales como disminuir los niveles de fosforo en suero en un sujeto que tiene hiperfosfatemia, prevenir que los niveles de fosforo en suero suban en un sujeto que tiene o en riesgo de tener hiperfosfatemia, o reducir la absorcion de fosforo de alimentos que se puede medir, por ejemplo, por fosforo fecal aumentado o por nivel de fosforo en suero disminuido o estabilizado.

Como se usa en el presente documento, “desenlace terapeutico beneficioso” incluye alivio o erradicacion del trastorno subyacente que se trata, a pesar de que el sujeto pueda estar todavfa afectado con el trastorno subyacente. En un sujeto que tiene hiperfosfatemia, un desenlace clmico beneficioso incluye el alivio o erradicacion de la hiperfosfatemia subyacente. Por ejemplo, el sujeto que tiene hiperfosfatemia experimental una disminucion en la gravedad de los smtomas, incluyendo niveles disminuidos de fosfato en suero, o un retraso en el inicio de los smtomas asociados con la causa o efecto de niveles de fosfato en suero elevados. Tales smtomas comprenden calcificacion ectopica de tejido blando, calcificacion cardiovascular, episodios cardiovasculares, deterioro renal, calcifilaxia, hiperparatiroidismo, enfermedad osea uremica, enfermedad osea renal, osteoporosis, e hiperfosfatemia.

Como se usa en el presente documento, “sujetos en necesidad de tratamiento” incluye sujetos que actualmente tienen o pueden desarrollar enfermedades y/o afecciones que se pueden tratar con inhibidores de transporte de fosfato para alcanzar un desenlace terapeutico beneficioso. Un subconjunto contemplado de tales sujetos son sujetos a los que se ha diagnosticado una enfermedad o afeccion que se puede tratar con inhibidores de transporte de fosfato para alcanzar un desenlace terapeutico beneficioso. Como se ha indicado anteriormente, la invencion reivindicada se dirige a un compuesto para uso en un metodo para tratar, retrasar, o prevenir hiperfosfatemia, y el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia.

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Como se usa en el presente documento, un “portador farmaceuticamente aceptable” incluye cualquier solvente, medio de dispersion, recubrimiento, agente antibacteriano y antifungico, agente isotonico y retrasador de absorcion y similares. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmaceuticamente activas se conoce bien en la tecnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con las composiciones terapeuticas, se contempla su uso en composiciones terapeuticas. Tambien se pueden incorporar ingredientes activos suplementarios en las composiciones.

Como se usa en el presente documento, “excipiente” se refiere a portadores, solventes, estabilizadores, adyuvantes, diluyentes, etc., dependiendo de la forma particular de administracion y forma farmaceutica, para la administracion de un agente farmaceutico, tal como los compuestos descritos en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, “hiperfosfatemia” se usa en sentido amplio para describir un estado en un sujeto en donde el fosforo en suero esta presente a una concentracion por encima del intervalo normal medicamente aceptado.

Como se usa en el presente documento, el termino “alquilo” se refiere a grupos hidrocarbonados saturados de cadena lineal y ramificados, cuyos ejemplos no limitantes incluyen metilo, etilo, y grupos propilo y butilo de cadena lineal y ramificados. Los grupos alquilo pueden tener, por ejemplo, de 1 a 20 atomos de carbono, de 1 a 10 atomos de carbono, y/o de 1 a 6 atomos de carbono.

Como se usa en el presente documento, el termino “dialquilo” se refiere a grupos alquilo que estan unidos al mismo atomo. Por ejemplo, N-dialquilo se refiere a dos grupos alquilo que estan cada uno unido al mismo atomo de nitrogeno.

Como se usa en el presente documento, el termino “arilo” se refiere a un grupo aromatico monodclico o polidclico, preferiblemente un grupo aromatico monodclico o bidclico. A menos que se indique de otra manera, un grupo arilo puede estar sin sustituir o sustituido con uno o mas, y en particular de uno a cuatro, grupos independientemente seleccionados de, por ejemplo, grupos halo, alquilo, alquenilo, -OCF3, -NO2, -CN, -NC, -OH, alcoxi, amino, -CO2H, - CO2-alquilo, arilo y heteroarilo. Los grupos arilo ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, clorofenilo, metilfenilo, metoxifenilo, trifluorometilfenilo, nitrofenilo, 2,4-metoxiclorofenilo, y similares.

Como se usa en el presente documento, el termino “heteroarilo” se refiere a un sistema de anillos monodclico o bidclico que contiene uno o dos anillos aromaticos y que contiene al menos un atomo de nitrogeno, oxfgeno o azufre en un anillo aromatico. A menos que se indique de otra manera, un grupo heteroarilo puede estar sin sustituir o sustituido con uno o mas, y en particular de uno a cuatro, grupos independientemente seleccionados de, por ejemplo, halo, alquilo, alquenilo, -OCF3, -NO2, -CN, -NC, -OH, alcoxi, amino, -CO2H, -CO2-alquilo, arilo y heteroarilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no estan limitados a, tienilo, furilo, piridilo, oxazolilo, quinolilo, tiofenilo, isoquinolilo, indolilo, tricinilo, triazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, benzotiazolilo, piracinilo, pirimidinilo, tiazolilo, y tiadiazolilo.

Como se usa en el presente documento, el termino “bencilo” se refiere a un grupo aromatico unido a un metileno. A menos que se indique de otra manera, un grupo bencilo puede estar sin sustituir o sustituido con uno o mas, y en particular de uno a cuatro, grupos independientemente seleccionados de, por ejemplo, grupos halo, alquilo, alquenilo, -OCF3, -NO2, -CN, -NC, -OH, alcoxi, amino, -CO2H, -CO2-alquilo, arilo, aromatico y heteroarilo. Un ejemplo de un grupo bencilo es -CH2-C6H5.

Como se usa en el presente documento, el termino “metileno” se refiere a un carbono que esta unido a dos atomos de hidrogeno.

Como se usa en el presente documento, el termino “halogeno” se refiere a los halogenos del grupo VIIA de la tabla periodico, incluyendo F, Cl, Br y I.

Como se usa en el presente documento, las abreviaturas identificadas en la tabla 1 a continuacion designan el nombre qdmico correspondiente identificado en la tabla 1, a menos que explfcitamente se indique de otra manera en el contexto:

Tabla 1

Abreviatura: Nombre quimico

AcOH: Acido acetico

nBuLi: n-butillitio

CaCl2: Cloruro de calcio

CCl4: Tetracloruro de carbono

DCM: Diclorometano

DIPA: Diisopropilamina

DIPEA: Diisopropiletilamina

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DMEM: Medio de Eagle modificado por Dulbecco

DMF: N,N-dimetilformamida

DMSO: Dimetilsulfoxido

dppb: 1,4-bis-(difenilfosfino)butano

EDTA: Acido etilendiaminatetraacetico

Et2O: Eter dietflico

EtOAc: Acetato de etilo

EtOH: Etanol

HPLC: Cromatograffa lfquida de alta resolucion

KCl: Cloruro de potasio

MeOH: Metanol

MgSO4: Sulfato de magnesio

NaBH4: Borohidruro de sodio

Na2SO4: Sulfato de sodio

NH4Cl: Cloruro de amonio

RMN: Resonancia magnetica nuclear

PBS: Solucion salina tamponada con fosfato

PhMgBr: Bromuro de fenilmagnesio

PMA: Acido fosfomolfbdico

rt: Temperatura ambiente

Rf: Factor de retencion

TEA: Trietilamina

THF: Tetrahidrofurano

TLC: Cromatograffa de capa fina

TMS-Br: Bromuro de trimetilsililo

Tris-HCl: 2-amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, clorhidrato

UV: Ultravioleta

Metodos

Como se ha indicado anteriormente, la invencion reivindicada proporciona el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia, en donde el compuesto se selecciona del grupo como se define en las reivindicaciones.

La invencion reivindicada tambien proporciona un compuesto para uso en un metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia, en donde el compuesto se selecciona del grupo como se define en las reivindicaciones.

El metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia puede comprender la etapa de administrar a un sujeto humano que tiene dicha enfermedad, una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, o cualquier formulacion que comprende una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, en una cantidad eficaz para prevenir, estabilizar o invertir la evolucion de la enfermedad.

El metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia puede comprender la etapa de administrar a un sujeto humano en necesidad de reduccion de fosfato en suero o mantenimiento de fosfato en suero, una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, o cualquier formulacion que comprende una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, en una cantidad eficaz para reducir o mantener los niveles de fosfato en suero.

El metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia puede comprender la etapa de administrar a un sujeto humano que ha tenido intervencion farmaceutica para el tratamiento de una enfermedad en necesidad de tal intervencion una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, o cualquier formulacion que comprende una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, en una cantidad eficaz para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia.

Para cualquiera de los metodos divulgados en el presente documento, la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones se puede administrar sola o alternativamente se puede administrar en combinacion con una o mas moleculas pequenas adicionales que tienen un grupo fosfonato.

Compuestos de molecula pequena que tienen un grupo fosfonato

La presente invencion hace uso de moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato. Las reivindicaciones definen los compuestos que se van a usar a este respecto.

Como se ha indicado anteriormente, la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato se puede administrar sola, o alternativamente se puede administrar en combinacion con una o mas moleculas pequenas adicionales que tienen un grupo fosfonato. Los ejemplos de moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato incluyen, pero no estan limitados a, los compuestos 001-029 descritos en la tabla 2. Los compuestos C-001, C-003 a C-006 y C-010 a C029 5 se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones.

Tabla 2

C-001: % ?H*/9 HO-P—|—P^OH HO OH OH C-016 OH 0=P-OH o-si'u

C-002: Cl nV i JL °H C-017 OH (Xoctr O-p u 6

C-003: HO'P OH C-018 0H 0=P-OH

C-004: CH, 0#» C-019 OH °1

C-005: rT^i ch2 [1 1 0 .0 lQ«'p'0H C-020 OH oje±"

C-006: .N V0H H3C ^ oh C-021 pW' 0=P-OH OH

C-007: On3;oh OH C-022 OH OH HO-P=0 0=P-OH

C-008: o C-023 9' „OH Ct-poh

imagen1

En una forma de realizacion, la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato se selecciona de las formulas estructurales I-VII, en donde X = O, S, NH o N-alquilo; R1 = halogeno, Oh, O-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo en 5 posiciones unicas o multiples; y R2 = H, alquilo o bencilo sustituido.

imagen2

Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales VIII-XI, en donde R3 = halogeno, 5 alquilo, bencilo sustituido, OH, O-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo en posiciones unicas o multiples. La posicion del atomo de N puede variar. Por ejemplo, el atomo de N es parte de un anillo aromatico que contiene el sustituyente fosfonato en el compuesto IX, pero no es parte del anillo aromatico que contiene el sustituyente fosfonato en el compuesto XI.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales XII-XIII, en donde R4 = H, halogeno, O-alquilo, S-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo; y n = 0, 1 o 2.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XIV, en donde R1 = halogeno, OH, O- 20 alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo; R5 = alquilo, arilo o arilo sustituido; y m = de 1 a 6 atomos de carbono.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XV, en donde R6 = alquilo, bencilo o bencilo sustituido con aromatico.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XVI, en donde R7 = H, alquilo, bencilo o bencilo sustituido con aromatico.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales XVII-XVIII, en donde R8 = H, alquilo, arilo, bencilo o bencilo sustituido con aromatico; y m = 1 atomo de carbono o mayor, preferiblemente de 1 a 6 atomos de carbono.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales XIX-XXI, en donde Y = O o S; R1 = OH, O-alquilo, halogeno, N-dialquilo o NHCO-alquilo; R9 = H o alquilo; y n = 0, 1 o 2.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXII, en donde R10 = alquilo, O-alquilo, S-

'44 4444 49 1 1

alquilo, arilo, NR2 o NCOR11; R11 es alquilo o arilo; y R = halogeno.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXIII, en donde cada Z es independientemente O, S, N o CH2 y n = 0, 1 o 2.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXIV, en donde R13 = halogeno, OR14, NR152, PO3H2, SO3H, COOH o NH2; R14 = metilo, etilo, isopropilo, tert-butilo, alilo o bencilo sustituido o bencilo sin sustituir; R15 = metilo, etilo, isopropilo, alilo o bencilo sustituido o bencilo sin sustituir; y m = de 1 a 6 atomos de carbono.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXV, en donde A =

X = O, S, NH, o N-alquilo; y R16 = SO3H, COOH o NH2.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales XXVI-XXVII en donde R17 = metilo, etilo, isopropilo, tert-butilo, ciclohexilo, arilo o heteroarilo, preferiblemente benceno, piridilo o bencilo; y R18 = metilo, etilo, isopropilo, tert-butilo, halogeno, OH, O-alquilo, N-dialquilo, o NHCO-alquilo en posiciones unicas o multiples.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXVIII, en donde R19 = halogeno, NR112, NHCOR11, SR11 o heteroarilo; R20 = halogeno, metilo, etilo, isopropilo, tert-butilo, N(CHa)2, N(Et)2, N(iPr)2, NHCOCH3, NHCOCF3 o NHCOPh; R11 = alquilo o arilo; y n = 0, 1, o 2.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, las formulas estructurales XXIX-XXXI en donde R10 = alquilo, O- alquilo, S-alquilo, arilo, NR 2 o NCOR ; en donde R = alquilo o arilo.

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Tambien se divulgan como moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato, pero que no estan dentro del ambito de los compuestos definidos en las reivindicaciones, la formula estructural XXXII, en donde R21 = alquilo, alquilo halogenado, O-alquilo, arilo sustituido o heteroarilo; R5 = alquilo, arilo o arilo sustituido; n = 0, 1, o 2.

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Las moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, se pueden usar para inhibir el transporte de fosfato a traves de la membrana de celulas epiteliales humanas, y por tanto la absorcion gastrointestinal de fosfato. Estas moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato tambien se pueden usar para tratar o prevenir enfermedades cuya causa o efecto rafz esta relacionado con trastornos en el mantenimiento de niveles de fosfato en suero normales como se describe en el presente documento.

Formulaciones y dosificacion de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato

La molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, sola o en combinacion, se puede preparar para administracion por via oral como una formulacion alimenticia tal como, pero no limitada a, un elixir, lfquido, gel, jarabe, papilla, o en forma de capsulas, comprimidos, o pfldoras. Los compuestos, solos o en

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combinacion, se pueden inyectar en una formulacion adecuada para inyeccion ya sea por via subcutanea, intravenosa o intraperitoneal.

La molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones se puede administrar en una formulacion farmaceutica que comprende una o mas de las moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato y un portador, diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable.

La molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones se puede administrar sola o en combinacion en una formulacion farmaceutica aceptable para reducir o limitar la acumulacion de fosfato en un sujeto humano reduciendo la absorcion de fosfato del aparato digestivo y/o aumentando la velocidad de excrecion de fosfato en orina en sujetos en necesidad de tal intervencion terapeutica o profilacticamente.

Para los fines de la invencion, la cantidad o dosis de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones administrada, o formulacion farmaceutica de la misma, debe ser suficiente para llevar a cabo, por ejemplo, una respuesta terapeutica o profilactica, en el sujeto humano durante un intervalo de tiempo razonable. La dosis se determinara por la eficacia de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato particular y el estado del sujeto humano, asf como el peso corporal del sujeto humano que se va a tratar.

La dosis de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato como se define en las reivindicaciones, o formulacion farmaceutica de la misma, tambien se determinara por la existencia, naturaleza, y grado de cualquier efecto secundario adverso que pudiera acompanar la administracion de una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato particular o formulacion farmaceutica de la misma. Tfpicamente, el medico responsable decidira la dosis de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato con la que tatar a cada paciente individual, considerando una variedad de factores, tales como la edad, peso corporal, salud general, dieta, sexo, la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato que se va a administrar, via de administracion, y la gravedad de la afeccion que se trata. A modo de ejemplo y sin pretender limitar la invencion, la dosis de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato o formulacion farmaceutica de la misma puede ser de aproximadamente 0,0001 hasta aproximadamente 1 g/kg de peso corporal del sujeto que se trata/dfa, desde aproximadamente 0,0001 hasta aproximadamente 0,001 g/kg de peso corporal /dfa, o desde aproximadamente 0,01 mg hasta aproximadamente 1 g/kg de peso corporal Ma.

Ejemplos

Se proporcionan los siguientes ejemplos para ilustracion y no se pretende limitar el ambito de la invencion.

Ejemplo 1: Efecto de los compuestos 001-029 sobre la inhibicion de la absorcion de fosfato en celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2

Se cultivaron celulas Caco-2 en medio DMEM que contema suero bovino fetal al 20%. El medio de la monocapa subconfluente de celulas Caco-2 se elimino. Las celulas resultantes se lavaron o bien con un tampon sin sodio (cloruro de colina 137 mM, KCl 5,4 mM, CaCh 2,8 mM, MgSO4 1,2 mM, y Tris-HCl 14 mM a pH 7,4), o con un tampon de contema sodio (cloruro de sodio 137 mM, KCl 5,4 mM, CaCl2 2,8 mM, MgSO41,2 mM, y Tris-HCl 14 mM a pH 7,4). Despues del lavado, se anadio a las celulas tampon con sodio o sin sodio que contema 1 pM de fosfato radiomarcado (K2H32PO4, 1 pCi/ml) y 100 pM de una molecula pequena que tiene un grupo fosfonato que se selecciono del grupo que contiene los compuestos 001-029 y se incubaron durante 20 minutos a 37°C. La absorcion de fosfato se termino eliminando el medio de absorcion y lavando las celulas en una solucion enfriada en hielo de Tris-HCl 14 mM, pH 7,4 que contema 137 mM de o bien cloruro de colina o cloruro de sodio. Las monocapas de las celulas se solubilizaron mediante la adicion de una solucion al 1% de Triton X-100 para extraer el fosfato radiomarcado. Se anadieron alfcuotas del fosfato radiomarcado a lfquido de centelleo y la radioactividad se determino por contaje de centelleo lfquido. La diferencia entre los ensayos usando las dos soluciones con o sin sodio representa el transporte de fosfato dependiente de sodio. La figura 1 muestra que, con la excepcion de C-003, 014, 016 y 018 (ejemplos de referencia), las moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato redujeron o inhibieron por completo la absorcion de fosfato en celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2.

Ejemplo 2: Efecto de la dosis de los compuestos de molecula pequena que tienen un grupo fosfonato sobre la inhibicion de la absorcion de fosfato

Se repitio el procedimiento del ejemplo 1 usando C-002 (ejemplo) y C-004, C-012, y C-028 (ejemplos de referencia) a concentraciones desde 1 a 100 pM. Los resultados se registraron como el porcentaje de inhibicion de la absorcion de fosfato frente a la concentracion de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato. La figura 2 muestra que el porcentaje de inhibicion de la absorcion de fosfato en celulas Caco-2 aumento con la concentracion del compuesto de molecula pequena que tiene un grupo fosfonato hasta que se alcanzo una concentracion limitante.

Ejemplo 3: Determinacion de la toxicidad de compuestos de molecula pequena que tienen un grupo fosfonato en el ensayo de transporte de fosforo

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Se realizo la tincion con colorante AZUL ALAMAR en presencia de C-002, C-004, C-012 y C-028 100 pM para excluir la toxicidad del compuesto en el ensayo de transporte de fosforo. Se sembraron celulas Caco-2 en una placa de 96 pocillos en concentraciones que dieron aproximadamente 16.000 celulas/pocillo el dfa del ensayo (por ejemplo, 8000 celulas/pocillo para un crecimiento de 1 d^a, 4000 celulas/pocillo para un crecimiento de 2 dfas, 2000 celulas/pocillo para un crecimiento de 3 dfas). El dfa del ensayo, el medio viejo se sustituyo por 80 pl de medio fresco por pocillo que tema o bien una concentracion final de 100 pM de la molecula pequena que tiene un grupo fosfonato en DMSO, o con el 1% de DMSO en los pocillos control. El ensayo se realizo en duplicado. El colorante AZUL ALAMAR (BioSource International, Inc., Cat.#DAL1100) se anadio a una concentracion final del 10% en cada pocillo segun las instrucciones del fabricante. Las celulas se incubaron despues a 37°C durante otras 18 o 24 horas, y la reduccion del colorante AZUL ALAMAR por celulas vitales se midio espectrofotometricamente a 570 nm y 600 nm. Los resultados se calcularon como el porcentaje de reduccion usando la formula en el manual del fabricante (TREK Diagnostic Systems, PI-DIAL 1025/1100 Rev 1.0). La figura 3 muestra que la diferencia en porcentaje en reduccion de colorante AZUL ALAMAR despues de 18 y 24 horas estaba virtualmente sin cambiar, lo que indica que las moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato no eran toxicas para las celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2.

Se uso la exclusion de azul de tripan para determinar el efecto de C-002, 004, 012 y 028 sobre la viabilidad celular. Las celulas se sembraron de la misma manera que en el ensayo de colorante AZUL ALAMAR (vease anteriormente). El dfa del ensayo, el medio se elimino, las celulas se lavaron con PBS y se incubaron con 100 pM (concentracion final) de C-002, C-004, C-012 y C-028 bien en un tampon sin sodio (cloruro de colina 137 mM, Kcl 5,4 mM, CaCl2 2,8 mM, MgSO41,2 mM, y Tris-HCl 14 mM a pH 7,4), o con un tampon de contema sodio (cloruro de sodio 137 mM, KCl 5,4 mM, CaCl2 2,8 mM, MgSO4 1,2 mM, y Tris-HCl 14 mM a pH 7,4). El ensayo se realizo en duplicado. Despues de 1 hora de incubacion las celulas se despegaron usando tripsina/EDTA, se transfirieron a un tubo Eppendorf, y su viabilidad se conto usando colorante azul de tripan al 0,4% (Invitrogen, Cat.#15250-061) en una dilucion 1:4 con microscopfa confocal. La figura 4 muestra que las moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato no teman efecto significativo sobre la viabilidad de las celulas epiteliales intestinales humanas Caco-2 despues de una hora de incubacion.

Ejemplo 4: Determinacion de la dosis tolerada maxima (DTM) de moleculas pequenas que tienen un grupo fosfonato para ratas Sprague Dawley macho

Se dio a ratas Sprague Dawley macho C-002, C-004, C-012, C-021, C-022, C-023, y C-028 por via oral y a diario a dosis de 0,5, 5 y 10 mg por kg durante doce dfas. Se registraron la mortalidad y el peso animal. No se contabilizaron muertes y no se observo efecto significativo sobre la ganancia de peso (vease la figura 5). Estos resultados sugieren ninguna o baja toxicidad de estos compuestos cuando se administran hasta 10 mg/kg.

Ejemplo 5: Eficacia de los compuestos representados por las formulas estructurales I-XXXII sobre la reduccion de fosfato en suero

La eficacia de los compuestos representados por las formulas estructurales I-XXXII en reducir el nivel de fosfato en suero se prueba en ratas uremicas. Para inducir insuficiencia renal y elevacion de los niveles de fosfato en suero, se administro a ratas Sprague Dawley macho por via oral y a diario, adenina (500 mg/kg/dfa), durante un periodo de doce dfas. En la misma solucion de alimentacion forzada, los compuestos representados por las formulas estructurales I-XXXII se administraron por via oral y a diario a dosis que variaban desde 0,5 a 10 mg/kg. Durante el estudio, 25 g de una dieta alta en fosfato se ofrecieron a diario, inmediatamente despues de la alimentacion forzada oral, durante un periodo de tiempo restringido (por ejemplo, tres horas). Se recoge sangre los dfas 1, 6 y 12. Se recogen los intestinos el dfa 12. Se miden los niveles de fosfato y FGF-23 en suero y se cuantifica el transcrito NaPi- 2b del intestino. Se espera que los niveles de fosfato en suero se reduzcan durante el curso del estudio. El fosfato en suero reducido debe producir una elevacion del FGF-23 en suero y una elevacion en la transcripcion intestinal de NaPi-2b.

Ejemplo 6: Preparacion del compuesto 002 (esquema 1)

Esquema 1

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Un matraz de fondo redondeado de 4 bocas, de 100 ml se cargo con 2,3,4,5,6-pentacloropiridina (10 g, 0,0397 mol) y fosfito de trietilo (6,8 g, 0,0409 mol) en nitrogeno. La mezcla de reaccion se calento a reflujo, se mantuvo durante 24 horas, y despues se llevo a 25-30°C. Se anadio agua (50 ml) a la mezcla de reaccion y la extraccion se produjo

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con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado para dar un material crudo. El material crudo se purifico por cromatograffa en columna (gel de sflice 100-200) con DCM (900 ml) como el eluyente. Las fracciones puras de la columna se combinaron y se vaporaron al vado para dar un solido de color crema (3,8 g, rendimiento del 27%). Se realizo 1H RMN en el solido de color crema y el espectro era consistente con el compuesto A.

Un matraz de fondo redondeado de 4 bocas, de 100 ml se cargo con el compuesto A (1,5 g, 0,0042 mol) y acido clorddrico 6 M (50 ml). La mezcla de reaccion se calento a reflujo, se mantuvo durante 4 h, se llevo a 25-30°C, y se concentro al vado. Se anadio agua (30 ml) a la mezcla de reaccion y la solucion se concentro al vado. Se anadio despues acetona (50 ml) a la mezcla de reaccion y la solucion se concentro al vado. Se anadio diclorometano (30 ml) a la mezcla de reaccion y la solucion se agito durante 15 min a 25-30°C. El compuesto se precipito, filtro y la suspension se lavo con n-hexano (30 ml) para dar C-002 (1,2 g, rendimiento del 95%) como un solido blanquecino. C-002 se caracterizo por 1H RMN, 13C RMN y 31P RMN. ^H RMN (DMSO-d6): 8 5,00-7,00 ppm (bs,2H). 13C RMN (DMSO-d6): 8 146,87, 146,76, 146,17, 144,85, 131,28, 131,26. 31P RMN (DMSO-d6): 8 0,65(s). Se determino que la pureza de C-002 era el 98,3% por HPLC. MS (m/z): calculada para C5H2O4NO3P, 296,9; determinada (M-1), 295,9.

Ejemplo 7: Preparacion del compuesto 004 (esquema 2)

Esquema 2

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Un matraz de fondo redondeado 4 bocas, de 250 ml se cargo con acetofenona (25 g, 0,208 mol) en nitrogeno. Se anadieron tricloruro de fosforo (22,4 ml, 0,256 mol) y acido acetico (60 g, 0,999 mol) al matraz en secuencia a 25- 30°C y se agito durante 2 h. La mezcla de reaccion se enfrio a 0-5°C y se paso gas acido clorddrico anhidro a traves de la mezcla de reaccion a 0-5°C durante 1,5 h. La mezcla de reaccion se llevo a temperatura ambiente y se agito durante 14 h adicionales. El compuesto precipitado se filtro y la suspension se lavo con eter (100 ml). El compuesto se coloco en un matraz de fondo redondo de 100 ml, se calento a 190°C, y se mantuvo a esa temperatura durante 15 min. El compuesto se enfrio despues a 60°C, se anadio cloroformo (20 ml) al matraz, y la solucion se agito durante 15 min a 25-30°C. El solido precipitado se filtro y seco a 50°C para dar C-004 (3 g, rendimiento del 8%) como un solido blanquecino. C-004 se caracterizo por 1H RmN, 13C RMN, 31P RMN y FT-IR. 1H RMN (CD3OD): 8 7,6 (m,2H), 7,35 (m,3H), 6,20 (s, 1H), 6,16 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,96 (s, 1H). 13C RMN (CD3OD): 8 145,16, 143,77, 139,00, 138,90, 129,29, 129,12, 129,06, 129,04, 128,70, 128,65. 31P RMN (CD3OD): 8 13,30, 13,10. Se determino que la pureza de C-004 era el 98,4% por HPLC. MS (m/z): calculada para C8H9O3P, 184,13; determinada (M-1), 183,1

Ejemplo de referencia 8: Preparacion del compuesto 012 (esquema 3)

Esquema 3

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Se disolvio acido palmidronico (4,7 g, 0,021 mol) en una mezcla de agua (10 ml), trietilamina (12 ml) y etanol (40 ml). Se anadio el reactivo 4-nitrofenilisotiocinato (3,96 g, 0,0219 mol) a la mezcla de reaccion a 25-30°C. La mezcla de reaccion se agito durante 16 h, se calento a reflujo, y se mantuvo durante 1 h. Despues de enfriar la mezcla a 5- 10°C, se anadio acido clorddrico al 20% (20 ml) y la reaccion se agito a 25-30°C durante 14 h. El precipitado solido resultante se filtro y se lavo con agua, etanol y acetona. El precipitado se seco en un horno de aire caliente a 60- 65°C durante 4 h para dar el compuesto B (4,5 g, rendimiento del 50%). El compuesto B se caracterizo por 1H RMN.

Un matraz de fondo redondo de 4 bocas, de 100 ml se cargo con el compuesto B (2,25 g, 0,0054 mol), etanol (35 ml), y agua (6 ml), en nitrogeno. Se anadio trietilamina (1,2 ml) a la mezcla de reaccion y se agito durante 10 min a 25-30°C. La mezcla de reaccion se calento a reflujo, se mantuvo durante 1 h, y despues se llevo a 25-30°C. Se

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anadio acido clorhndrico (20%, 1,2 ml) a la mezcla de reaccion a 25-30°C y se agito durante 1 h. La mezcla de reaccion se enfrio a 10-15°C y se agito durante 1 h adicional. El precipitado se filtro, la suspension se lavo con etanol (15 ml) y acetona (20 ml), y el compuesto humedo se seco a 50-60°C durante 2 h para dar C-012 (1,15 g, rendimiento del 47%) como un solido amarillo claro. C-012 se caracterizo por 1H RMN. 1H RMN (CD3OD): 8 8,4 (d,2H), 7,85 (d,2H), 6,8 (s, 1H), 4,65 (s, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,45 (s, 3H). Se determino que la pureza de C-012 era del 97,7% por hPlC. MS (m/z): calculada para C13H18N3OgP2S+, 454,31; determinada (M+), 454,2.

Ejemplo de referencia 9: Preparacion del compuesto 021 (esquema 4)

Esquema 4

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0P(0)(0H)2

OP(0)(OEt)2

0P(0)(0Et)2

OP(0)(OEt)2

CCI4, Et3N, P(OH)OEt2

nBuLi. DIPA

c, TMSBr. DCM

K2OO3, DMF

c-021

A una solucion agitada de fenol (15 g, 159,5 mmol) en CCl4 anhidro (50 ml) se anadio trietilamina recien destilada (16,94 g, 24 ml, 167,48 mmol) seguido por fosfito de dietilo (23,129 g, 167,48 mmol) en una atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito durante 2 h a temperatura ambiente y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Se anadio agua despues a la mezcla de reaccion, que posteriormente se diluyo con DCM. La fase de DCM se separo, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un aceite incoloro. Este aceite se disolvio en DCM (20 ml), se cargo en una columna de gel de silice (malla 230, 275 g), y se eluyo en gradiente con EtOAc al 0-50% en hexano. Las fracciones se analizaron por TLC/UV, y las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto C puro (30,40 g, rendimiento del 89%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 30% en hexano y el compuesto C se visualizo con UV y PMA a Rf 0,40.

A una solucion agitada de DIPA (9,67 g, 95,53 mmol) en THF anhidro (200 ml) se anadio nBuLi (6,12 g, 95,53 mmol) a -20°C, y la reaccion se agito durante 30 minutos adicionales a -20°C. El compuesto C (20 g, 86,88 mmol) en THF (50 ml) se anadio despues a la mezcla de reaccion y se agito a temperatura ambiente durante 2 h. Cuando los materiales de partida habfan desaparecido (seguido por TLC), se anadio agua a la mezcla de reaccion y despues EtOAc. La fase de EtOAc se separo, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un aceite incoloro. Este aceite se disolvio en DCM (20 ml), se cargo en una columna de gel de sflice (malla 230, 275 g), y se eluyo en gradiente con EtOAc al 0-100% en hexano. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC/UV. Las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto D puro (16,12 g, rendimiento del 75%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 30% en hexano y el compuesto D se visualizo con UV y PMA a Rf 0,30.

A una solucion agitada de compuesto D (5 g, 95,53 mmol) en DMF anhidro (200 ml) se anadio K2CO3 (6,0 g, 43,44 mmol) y 1-bromo-1-cloroetano (3,11 g, 21,72 mmol) en una atmosfera de argon a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito durante 24 h y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Se anadio agua despues a la mezcla de reaccion seguido por EtOAc. La fase de EtOAc se separo, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un aceite incoloro. Este aceite se disolvio en DCM (20 ml), se cargo en una columna de gel de sflice (malla 230, 275 g), y se eluyo en gradiente con EtOAc al 0-100% en hexano. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC/UV. Las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto E puro (16,12 g, rendimiento del 75%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 50% en hexano y el compuesto E se visualizo con UV y PMA a Rf 0,25.

A una solucion agitada del compuesto E (5 g, 16,19 mmol) en DCM anhidro (50 ml) se anadio TBS-Br (15,69 g, 97,18 mmol) en una atmosfera de argon a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito durante 2 h y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Despues se anadio agua a la mezcla de reaccion y despues acetona. El solvente organico se elimino por evaporacion giratoria para dar un precipitado blanco insoluble en agua. El producto cristalino solido se filtro, lavo a fondo con agua, y se seco a alto vado para dar C-021 como un solido cristalino blanquecino (3,0 g, rendimiento del 75%). Se realizo TLC en EtOAc al 100% y C-021 se visualizo

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con UV y PMA a Rf 0,15. C-021 se caracterizo por 1H RMN y 31P RMN. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 3,9 (dd, J=6,0, 5,7 Hz, 2H), 4,28 (dd, 5,4, 5,7 Hz, 2H), 7,0 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,65 (m, 1H). 31P RMN (300, DMSO-d6): 11,669 (s). MS (m/z): calculada para C8H10CO5P, 252,59; determinada (M+-OH), 235,1.

Ejemplo de referencia 10: Preparacion del compuesto 022 (esquema 5)

Esquema 5

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DMF. rt

DIPEA, dppb. Pd{OAc)2

(HO)P(OEt)2, DMSO

K2CO3

OEt

O.-J

P-OEt

i) TMS-Br/DCM

n) Acetona/Agua

C-022

A una suspension de 2-bromofenol (25 g, 0,144 mol) y carbonato de potasio (60 g, 0,433 mol) en DMF (175 ml), se anadio 1,3-dibromopropano (7,0 ml, 0,069 mol) gota a gota a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 5 h. Despues de completar la reaccion (seguida por TLC), la mezcla de reaccion se diluyo con agua (820 ml) y se agito durante 15 min. El solido blanco precipitado se filtro, se lavo con agua, y se seco al aire para dar el compuesto F (25 g, rendimiento del 89%). 1H rMn (200 MHz, DMSO-d6): 8 2,21 (p, J = 6,4 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 6,87 (dt, J = 7,4, 1,4 Hz, 2H), 7,14 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 2H), 7,32 (dt, J= 8,0, 1,4 Hz, 2H), 7,55 (dt, J= 7,8, 1,4 Hz, 2H).

A una solucion de compuesto F (23 g, 59,0 mol) en DMSO (160 ml), se anadieron DIPEA (83 ml), dppb (4,05 g, 9,4 mmol), acetato de paladio(II) (2,1 g, 9,4 mmol) y fosfito de dietilo (38,2 ml, 295 mmol) a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se calento durante la noche a 100°C. La mezcla de reaccion se enfrio despues a temperatura ambiente, se diluyo con HCl 2 N (300 ml), y se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml). La fase organica se lavo con agua (250 ml), se seco con salmuera (200 ml), se seco sobre sulfato de sodio, y se evaporo a presion reducida. La masa cruda resultante se purifico por cromatograffa en columna usando MeOH/DCM como el eluyente para dar el compuesto G (11,9 g, rendimiento del 40%). 1H RMN (200 MHz, CDCh): 8 1,24 (t, J= 7,4 Hz, 12H), 2,33 (p, J= 6,0 Hz, 2H), 3,96-4,17 (m, 8H), 4,34 (t, J= 6,0 Hz, 4H), 6,94-7,04 (m, 4H), 7,48 (t, J= 8,6 Hz, 2H), 7,80 (dd, J= 15,0, 7,6 Hz, 2H); Masa: 500,9 (M++1).

A una solucion de compuesto G (10 g, 0,02 mol) en DCM (40 ml), se anadio TMS-Br (15,8 ml, 0,12 mol) lentamente en una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 4 h. Despues de la desaparicion completa del compuesto G (en masa), los volatiles se eliminaron a presion reducida. Se anadio acetona-agua (50 ml, 1:1) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 min. Los solidos precipitados se filtraron, se lavaron con acetona y re-precipitaron de DMF-EtOH-EtOAc (1:3:4) para dar C-022 (6,0 g, rendimiento del 77%). Se hizo una precipitacion final usando DMSO-agua (1:3) para eliminar restos de DMF y EtOH. 1H RMN (200 MHz, DMSO-d6): 8 2,16 (p, J= 6,0 Hz, 2H), 4,24 (t, J= 6,0 Hz 4H), 6,94 (dt, J= 7,6, 3,2 Hz, 2H), 7,05 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,63 (dd, J = 14,2, 7,4 Hz, 2H); 13C RMN (75 MHz, DMSO-d6): 28,3, 64,7, 112,3, 112,4, 119,6, 119,7, 120,5, 122,0, 133,1, 133,2, 133,3, 160,0; Masa: 388,9 (M++1). Se determino que la pureza de C-022 era del 99,5% por HPLC.

Ejemplo de referencia 11: Preparacion del compuesto 023 (esquema 6)

Esquema 6

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A una solucion agitada de benzaldelddo (3,34 g, 31,50 mmol) y bis-dietilfosfonato (9,08 g, 31,50 mmol) en DCM anhidro (50 ml) se anadio NaOH acuoso al 50% en una atmosfera de argon a temperatura ambiente durante 2 h. Despues de la desaparicion de los materiales de partida (seguido por TLC), se anadio agua a la mezcla de reaccion seguido por DCM adicional. La fase de DCM se separo, se lavo con HCl diluido, se lavo con agua, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un producto crudo. El producto crudo se disolvio en DCM (10 ml), se cargo en una columna de gel de silice (malla 230, 200 g), y se eluyo en gradiente con acetato de etilo al 0-75% en hexano. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC/UV, y las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto H (6,4 g, rendimiento del 55%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 40%/hexano y el compuesto H se visualizo con UV y PMA a Rf 0,45.

A una solucion agitada del compuesto H (3 g, 12,48 mmol) en DCM anhidro (50 ml) se anadio TMS-Br (11,47 g, 94,92 mmol) en una atmosfera de argon a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito durante 2 h y el progreso de la reaccion se siguio por TLC. Despues se anadio agua a la mezcla de reaccion, seguido por acetona. El solvente organico se elimino a presion reducida para producir un precipitado blanco insoluble en agua. El precipitado se filtro, se lavo a fondo con agua y se seco a alto vado para producir C-023 como un solido cristalino (1,83 g, rendimiento del 80%). Se realizo TLC en EtOAc al 100% y C-023 se visualizo con UV y PMA a Rf 0,15. C- 023 se caracterizo por 1H RMN y 31P RMN. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 8 6,5 (dd, J= 18,0, 16,2 Hz, 1H), 7,2 (dd, J= 17,7, 17,4 Hz, 1H), 7,4 (m, 3H), 7,6 (m, 2H), 9,6 (bs, 2H). 31P RMN (300 MHz, DMSO-d6): 14,707 (s). MS (m/z): calculada para C8H9O3P, 184,13; determinada (m+), 184.1.

Ejemplo de referencia 12: Preparacion del compuesto 28 (esquema 7)

Esquema 7

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A una solucion agitada de acido heptafluorobutmco (17 g, 79,42 mmol) en THF anhidro (200 ml) se anadio PhMgBr (17,28 g, 95,30 mmol) en una atmosfera de argon a -20°C. La reaccion se agito durante 1 h a -20°C y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Una solucion de NH4Cl saturado se anadio lentamente a la mezcla de reaccion y la mezcla se diluyo posteriormente con Et2O. La fase de Et2O se separo, se lavo con HCl diluido, se lavo con agua, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un aceite incoloro. El aceite se disolvio en DCM (20 ml), se cargo en una columna de gel de sflice (malla 230, 500 g), y se eluyo en gradiente con acetato de etilo al 0-20% en hexano. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC/UV. Las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto I puro (5,44 g, rendimiento del 25%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 15%/hexano y el compuesto I se visualizo con UV y PMA a Rf 0,70.

A una solucion agitada del compuesto I (5,44 g, 19,84 mmol) en MeOH anhidro (50 ml) se anadio NaBH4 (0,9 g, 23,81 mmol) en una atmosfera de argon a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito durante 15 min y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Despues de que los materiales de partida desaparecieran, una solucion saturada de NH4Cl se anadio a la mezcla de reaccion, y posteriormente se diluyo con EtOAc. La fase de EtOAc se separo, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un aceite incoloro. Este aceite se disolvio en DCM (10 ml), se cargo en una columna de gel de sflice (malla 230, 100 g), y se eluyo en gradiente con acetato de etilo al 0-30% en hexano. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC/UV. Las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado a sequedad para dar compuesto J puro (4,65 g, rendimiento del 85%) como un aceite incoloro. Se realizo TLC en EtOAc al 15%/hexano y el compuesto J se visualizo con UV y PMA a Rf 0,45.

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A una solucion agitada del compuesto J (3 g, 10,86 mmol) en THF anhidro (50 ml) en una atmosfera de argon a temperatura ambiente se anadio Et3N (1,64 g, 16,29 mmol) y tetrazol (0,91 g, 10,03 mmol), seguido por fosfonato de diclorofenilo. La mezcla de reaccion se agito durante 2 h y la desaparicion de los materiales de partida se siguio por TLC. Despues de que desaparecieran los materiales de partida, se anadio agua al matraz de reaccion, se agito durante 30 min, y la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc. La fase de EtOAc se separo, se lavo con agua, se seco con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro, se filtro y concentro al vado para dar un producto crudo. El producto crudo se purifico por cromatograffa en columna en fase inversa (malla C18, 50 g), y se eluyo en gradiente con acetonitrilo al 0-100% en agua. Las fracciones de la columna se analizaron por TLC usando acetato de etilo al 75% en hexano, y el producto se visualizo con UV y PMA a Rf 0,15. las fracciones puras se combinaron y concentraron al vado para dar un solido cristalino insoluble en agua. El solido se filtro y se seco a alto vado para dar C-028 como un solido blanco cristalino puro (3,7 g, rendimiento del 82%). C-028 se caracterizo por 1H rMn y 31P RMN. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 7,2-7,6 (m, 10H), 6,0 (m, 1H), 5,4 (bs, 1H). 31P RMN (300 MHz, DMSO-d6): 15,99 (s). MS (m/z): calculada para C16H12F7O3P, 416,23; determinada 415,1.

La descripcion anterior se da para claridad de entendimiento solo, y no se deben entender limitaciones innecesarias de la misma, ya que modificaciones dentro del ambito de la invencion pueden ser aparentes para los expertos en la materia.

A lo largo de la especificacion, donde se describen composiciones como que incluyen componentes de materiales, se contempla que las composiciones tambien puedan consistir esencialmente en, o consistir en, cualquier combinacion de los componentes o materiales recitados, a menos que se describa de otra manera.

La practica de un metodo divulgado en el presente documento, y las etapas individuales del mismo, se pueden realizar manualmente y/o con la ayuda de equipo electronico. Aunque se han descrito procesos con referencia a formas de realizacion particulares, un experto en la materia apreciara facilmente que se pueden usar otras maneras de realizar los actos asociados con los metodos. Por ejemplo, el orden de varias etapas se puede cambiar sin separase del ambito del metodo, a menos que se describa de otra manera. Ademas, algunas de las etapas individuales se pueden combinar, omitir, o subdividir adicionalmente en etapas adicionales.

Claims

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REIVINDICACIONES

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

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y combinaciones cualquiera de los anteriores;

en donde

X es O, S, NH o N-alquilo;

R1 es halogeno, OH, O-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo en posiciones unicas o multiples; y R2 es H, alquilo o bencilo sustituido;

para uso en:

un metodo para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia.

El compuesto para uso en un metodo para tratamiento segun la reivindicacion 1, en donde se administra una combinacion de al menos dos compuestos diferentes.

El compuesto para uso en un metodo para tratamiento segun la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en donde el compuesto se administra en una dosis de aproximadamente 0,001 hasta aproximadamente 1 gramo por kilogramo de peso corporal al dfa.

El uso de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

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y una combinacion de cualquiera de los anteriores;

en donde

X es O, S, NH o N-alquilo;

R1 es halogeno, OH, O-alquilo, N-dialquilo o NHCO-alquilo en posiciones unicas o multiples; y

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R2 es H, alquilo o bencilo sustituido;

en la fabricacion de un medicamento para tratar, retrasar o prevenir hiperfosfatemia.
5. El compuesto para uso en un metodo de tratamiento segun la reivindicacion 1 o el uso de la reivindicacion 4, en donde

(i) la hiperfosfatemia es el resultado de una intervencion farmaceutica, que es una terapia basada en vitamina D; o

(ii) la enfermedad es hiperparatiroidismo secundario.
6. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento segun la reivindicacion 1 o 2, en donde el compuesto se administra en una formulacion farmaceuticamente aceptable, o el uso de la reivindicacion 4, en donde el compuesto esta comprendido en una formulacion farmaceuticamente aceptable, o el compuesto para uso en un metodo de tratamiento segun la reivindicacion 5, en donde el compuesto esta comprendido en una formulacion farmaceuticamente aceptable.
7. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento o uso de la reivindicacion 6, en donde la formulacion farmaceuticamente aceptable comprende un portador, un diluyente, un excipiente farmaceuticamente aceptable, o una mezcla de cualquiera de los anteriores.
8. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento o uso de la reivindicacion 7, en donde la formulacion se administra por via oral o por inyeccion.
9. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento o uso de la reivindicacion 8, en donde la formulacion se administra

(a) por via oral como un elixir, lfquido, gel, jarabe, papilla, capsula, comprimido o pfldora; o

(b) por inyeccion por via subcutanea, intravenosa o intraperitoneal.
10. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento o uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

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11. El compuesto para uso en un metodo para tratamiento o uso de la reivindicacion 10, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

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