ES2630026T3 - Derivados indazólicos sustituidos activos como inhibidores de cinasa - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de la fórmula (I),**Fórmula** en el que: Ar es arilo o heteroarilo sustituido con Ra y Rb, en que Ra es NH2, NH-G, O-G' o (CH2)n-A y Rb es hidrogeno, halógeno, NO2, NH2, NH-G o NH-CO-L, en que A es heterociclilo opcionalmente sustituido G es alquilo C1-C6 sustituido lineal o ramificado o un heterociclilo opcionalmente sustituido, G' es alquilo C1-C6 lineal o ramificado sustituido con N(alquilo C1-C6)2 o un heterociclilo opcionalmente sustituido y L es heteroarilo opcionalmente sustituido; Ar' es arilo, opcionalmente sustituido con halógeno; R1, R2 y R3 son hidrógeno; R' y R" son independientemente entre sí hidrógeno o metilo; 20 n es 0 o 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

Description

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DESCRIPCION
Derivados indazolicos sustituidos activos como inhibidores de cinasa
La presente invencion se refiere a determinados compuestos indazolicos sustituidos que modulan la actividad de protema-cinasas. Por lo tanto, los compuestos de esta invencion son utiles en el tratamiento de enfermedades causadas por una actividad de protema-cinasa desregulada. La presente invencion proporciona tambien metodos para la preparacion de estos compuestos y composiciones farmaceuticas que comprenden dichos compuestos.
La disfuncion de las protema-cinasas (PK) es el rasgo distintivo de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y protooncogenes implicados en canceres humanos codifican PK. El aumento de la actividad de las PK tambien esta implicado en muchas enfermedades no malignas, como la hiperplasia prostatica benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferacion de celulas lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis postoperatorias.
Las PK tambien estan implicadas en afecciones inflamatorias y en la multiplicacion de virus y parasitos. Las PK pueden desempenar tambien un papel fundamental en la patogenesis y la aparicion de trastornos neurodegenerativos.
Para una referencia general de la disfuncion o desregulacion de las PK veanse, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465 y Carcinogenesis 2008, 29, 1087-191.
Un subconjunto de las PK es un grupo de receptores de membrana con actividad intrmseca de protema-cinasa de tirosina (RPTK). Al unirse a factores de crecimiento, los RPTK se activan y se fosforilan a sf mismos y tambien fosforilan una serie de sustratos en el citoplasma. A traves de este mecanismo, pueden transducir senales intracelulares para la proliferacion, la diferenciacion u otros cambios biologicos. En los tumores humanos se observan frecuentemente anormalidades estructurales, sobreexpresion y activacion de los RTPK, lo que sugiere que la activacion constitutiva de la transduccion de senales conducente a la proliferacion celular puede resultar en una transformacion maligna. La cinasa del linfoma anaplasico (ALK) es un receptor con actividad de tirosina-cinasa que pertenece a la subfamilia de receptores de insulina de los RTK: el gen de la ALK se localiza en el cromosoma 2 y se expresa principalmente en las neuronas, especialmente durante el desarrollo. El gen de la ALK participa en una translocacion cromosomica equilibrada con el gen de la nucleofosmina (NPM) en el cromosoma 5 en gran parte de los linfomas anaplasicos de celulas grandes (LACG). En los LACG ALK+, como resultado de la translocacion, el promotor ubicuo de la NPM produce una expresion ectopica de la protema de fusion en la que la fraccion de NPM se dimeriza y el dominio cinasico de la ALK sufre una autofosforilacion y pasa a ser constitutivamente activo.
Numerosos datos de la bibliograffa han demostrado que la protema de fusion NPM-ALK tiene un fuerte potencial oncogenico y que su expresion ectopica es responsable de la transformacion celular. Ademas, la expresion constitutiva de la NPM-ALK humana en linfocitos T de raton es suficiente para la aparicion de una neoplasia linfoide en animales transgenicos con un breve periodo de latencia.
El LACG es una enfermedad definida que se caracteriza por la expresion superficial del antfgeno CD30 (Ki-1). Supone el 2 % de los linfomas no de Hodgkin en los adultos y el 13 % de los pediatricos y afecta predominantemente a pacientes masculinos jovenes. El LACG AKL+ representa el 70 % de todos los LACG y es una enfermedad agresiva con smtomas sistemicos y frecuente afectacion extraganglionar (medula osea, piel, hueso, tejidos blandos).
Se ha encontrado que aproximadamente el 15-20 % de los LACG que expresan la ALK contienen una translocacion cromosomica diferente que afecta a la porcion citoplasmica de la ALK, con fracciones N-terminales diferentes, todo lo cual resulta en una activacion constitutiva del dominio cinasico de la ALK.
Ademas, se ha encontrado que las lmeas celulares establecidas a partir de tumores solidos de origen ectodermico como melanomas, carcinomas de mama, asf como neuroblastomas, glioblastomas, sarcomas de Ewing y retinoblastomas, expresan el receptor ALK.
En conclusion, la interferencia con la senalizacion de la ALK representa probablemente una manera espedfica y eficaz de bloquear la proliferacion de las celulas tumorales en el LACG y posiblemente en otras indicaciones.
El receptor del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-1R, IGF1R) tambien es un miembro de la subfamilia de receptores de insulina de los RTK. Existen varias lmeas de evidencia que sugieren que la senalizacion del IGF- 1R puede contribuir a la tumorigenesis y que la interferencia con la funcion del IGF-1R representa una opcion terapeutica valida para el cancer. Para una vision general de la senalizacion de los IGF y el IGF-1R, su funcion fisiologica y una descripcion detallada de la evidencia que apoya la implicacion de este sistema en el cancer humano que se resume anteriormente, asf como en otras patologfas, se remite al lector a las numerosas revisiones del tema y las referencias contenidas en las mismas, por ejemplo, Baserga R. y col., Biochim. Biophys. Acta, vol. 1332, paginas F105-F126, 1997; Khandwala H. M. y col., Endocr. Rev., vol. 21, paginas 215-44, 2000; Le Roith D. y col.,
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Endocr. Rev., vol. 22, paginas 53-74, 2001; Valentinis B. y col., Mol. Pathol., vol. 54, paginas 133-7, 2001; Wang Y. y col., Curr. Cancer Drug Targets, vol. 2, paginas 191-207, 2002; Laron Z., J. Clin. Endocrinol. Metab., vol. 89, paginas 1031-1044, 2004; Hofmann F. y col., Drug Discov. Today, vol. 10, paginas 1041-7, 2005.
JAK 2 pertenece a la familia de las tirosina-cinasas Janus (JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2), que son protema-cinasas de tirosina citoplasmicas responsables de la senalizacion a continuacion de las citocinas y receptores de factores de crecimiento (Ihle J. N. (1995) Nature, 377, 591-594; Leonard W. J. y O'Shea J. J. (1998) Annu. Rev. Immunol., 16, 293-322). En particular, jAk2 es importante para la actividad de GM-CSF, IL-3, trombopoyetina (TPO) y eritropoyetina( EPO). Al unirse al ligando, los receptores forman oligomeros, de manera que las cinasas JAK asociadas pueden activarse entre sf por transfosforilacion. Las moleculas efectoras de las cinasas JAK, que incluyen STAT (transductores de senales y activadores de transcripcion), regulan la supervivencia, la proliferacion, la diferenciacion y la apoptosis (Bromberg J. (2002), J. Clin. Invest., 109, 1139-1142; Hou S. X. y col. (2002) Dev. Cell, 3, 765-768). Varios grupos han descubierto una mutacion activadora en el gen de JAK2 que parece ser responsable de diferentes trastornos mieloproliferativos, en particular policitemia vera (PV), trombocitopenia esencial (TE) y mielofibrosis idiopatica (MI). (Baxter y col. (2005) Lancet, 365, 1054-1061. James y col. (2005) Nature, 434, 11441148.; Kralovics y col. (2005) N. Engl. J. Med., 352, 1779-1790; Levine y col. (2005) Cancer Cell, 4, 387-397). En el dominio pseudocinasico de la JAK2, que se demostro previamente que era un regulador negativo de la actividad cinasica de la JAK2, se produce la mutacion de una valina a una fenilalanina en el codon 617 (V617F). De acuerdo con este resultado, JAK2(V617F) se comporta como una tirosina-cinasa activada constitutivamente cuando se expresa en lmeas celulares, aunque su actividad puede ser mas pronunciada en asociacion con el receptor de EPO. El analisis funcional demuestra que esta mutacion confiere un crecimiento in vitro independiente de citocinas, desregula las rutas de senalizacion a continuacion de la JAK2 y causa una enfermedad similar a policitemia vera en un modelo murino. Esta mutacion se encuentra en la mayona de los pacientes con PV (~90 %) y en aproximadamente la mitad de los pacientes con TE o MI. Esta mutacion ha podido identificarse tambien en otros tumores hematologicos como la leucemia mielomonodtica cronica (3-20 %), la leucemia mieloide cronica filadelfia negativa (19 %), la leucemia neutrofila cronica (16-33 %) y otros.
A partir de los datos recogidos, la activacion de la cinasa JAK2 parece ser el factor desencadenante de un grupo importante de enfermedades hematologicas, lo que sugiere que podna representar una buena diana terapeutica para el tratamiento de estas patologfas.
En los documentos W02003028720, W02005085206, W02008003396 y W02008074749, respectivamente a nombre de Pharmacia Italia spa., Hoffman La Roche AG, Merck GmbH y Nerviano Medical Sciences Srl., se han desvelado varios derivados indazolicos utiles para el tratamiento de diversas enfermedades como canceres, neurodegeneracion y aterosclerosis.
A pesar de estos desarrollos, todavfa se necesitan agentes mas eficaces.
Nosotros hemos descubierto ahora que una serie de indazoles son potentes inhibidores de protema-cinasas y por lo tanto utiles en el tratamiento contra el cancer.
Por consiguiente, un primer objetivo de la presente invencion es proporcionar un compuesto indazolico sustituido representado por la formula (I),
imagen1
en el que:
Ar es arilo o heteroarilo sustituido con Ra y Rb, en que Ra es NH2, NH-G, O-G' o (CH2)n-A y
Rb es hidrogeno, halogeno, NO2, NH2, NH-G o NH-CO-L, en que A es heterociclilo opcionalmente sustituido
G es alquilo C1-C6 sustituido lineal o ramificado o un heterociclilo opcionalmente sustituido,
G' es alquilo C1-C6 lineal o ramificado sustituido con N(alquilo C-i-C6)2 o un heterociclilo opcionalmente sustituido y
L es heteroarilo opcionalmente sustituido;
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Ar' es arilo, opcionalmente sustituido con halogeno;
R1, R2 y R3 son hidrogeno;
R' y R” son independientemente entre sf hidrogeno o metilo; n es 0 o 1,
o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
La presente invencion tambien proporciona metodos de smtesis de los derivados indazolicos sustituidos de la formula (I) preparados a traves de un proceso que consta de transformaciones sinteticas estandar.
La presente invencion proporciona tambien un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo para el tratamiento de enfermedades causadas por y/o asociadas con una actividad de protema-cinasa desregulada, en particular de la familia PLK, la procema-cinasa C en diferentes isoformas, Met, PaK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR- 2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, Chk1, Chk2, HER2, rafl, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, FLT3, JAK2, IGF-R, ALK, PIK3, cinasa Weel, Src, Abl, Akt, MAPK, ILK, MK-2, IKK- 2, Cdc7, Nek, la familia de cinasas de cdk/ciclina, mas en particular la actividad de JAK2, IGF-1R y ALK y aun mas en particular la actividad de la ALK, que comprende la administracion de una cantidad eficaz de un compuesto indazolico sustituido representado por la formula (I), segun se define anteriormente, a un mairnfero que lo necesita.
Un objetivo preferido de la presente invencion es proporcionar un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo de tratamiento de una enfermedad causada por y/o asociada con una actividad de protema-cinasa desregulada seleccionada del grupo que consta de cancer y trastornos proliferativos celulares.
Otro objetivo preferido de la presente invencion es proporcionar un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo para el tratamiento de tipos espedficos de cancer, como carcinoma, carcinoma de celulas escamosas, tumores hematopoyeticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatico, tumores del sistema nervioso central y periferico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratocantomas, cancer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.
Otro objetivo preferido de la presente invencion es proporcionar un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo para el tratamiento de tipos espedficos de cancer como, pero sin limitarse a cancer de mama, cancer de pulmon, cancer colorrectal, cancer de prostata, cancer de ovario, cancer de endometrio, cancer gastrico, carcinoma de celulas renales claras, melanoma uveal, mieloma multiple, rabdomiosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de Kaposi y meduloblastoma.
Otro objetivo preferido de la presente invencion es proporcionar un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo para el tratamiento de linfomas anaplasicos de celulas grandes (LACG) ALK+ y posiblemente otras indicaciones en las que la actividad de la ALK puede desempenar un papel como neuroblastoma, rabdomiosarcoma, glioblastoma, tumor miofibroblastico inflamatorio y algunos tipos de melanomas, carcinomas de mama, sarcomas de Ewing, retinoblastomas y carcinomas de celulas pulmonares no monodticos (CPNM).
Otro objetivo preferido de la presente invencion es proporcionar un compuesto de la formula (I) para uso en un metodo para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares como, pero sin limitarse a hiperplasia prostatica benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, aterosclerosis y afecciones que implican la proliferacion del musculo liso vascular o la formacion de una neomtima como la restenosis tras una angioplastia o postoperatoria, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis, retinopatfas, incluidas retinopatfas diabeticas y neonatales y degeneracion macular relacionada con la edad, vasculopatfa del injerto como la que puede producirse despues de un trasplante de vasos u organos, acromegalia y trastornos secundarios de la acromegalia, asf como otras afecciones hipertroficas en las que esta implicada la senalizacion del IGF/IGF-1R como la enfermedad pulmonar fibrotica, patologfas relacionadas con el estres oxidativo cronico o agudo o danos de los tejidos inducidos por hiperoxia y trastornos metabolicos en los que estan implicados altos niveles de actividad del IGF o IGF-1R como la obesidad.
Ademas, el compuesto de la formula (I) de la presente invencion proporciona tambien inhibicion de la angiogenesis y metastasis tumoral.
Adicionalmente, la invencion proporciona un metodo in vitro para la inhibicion de la actividad de la protema ALK que comprende la puesta en contacto de dicha protema con una cantidad eficaz de un compuesto de la formula (I).
La presente invencion proporciona asimismo una composicion farmaceutica que comprende uno o mas compuestos de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos y un excipiente, vehmulo o diluyente farmaceuticamente aceptable.
La presente invencion proporciona ademas una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula (I) en combinacion con tratamientos conocidos contra el cancer como radioterapia o un regimen de quimioterapia en combinacion con agentes citostaticos o citotoxicos, agentes de tipo antibiotico, agentes alquilantes, antimetabolitos, agentes hormonales, agentes inmunitarios, agentes de tipo interferon, inhibidores de
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ciclooxigenasas (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de metaloproteasas de la matriz, inhibidores de telomerasas, inhibidores de tirosina-cinasas, agentes contra receptores de factores de crecimiento, agentes anti- HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogenesis (por ejemplo, inhibidores de la angiogenesis), inhibidores de farnesil-transferasas, inhibidores de la ruta de transduccion de senales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdk, agentes de union a tubulina, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II y similares.
Adicionalmente, la invencion proporciona un producto o kit que comprende un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, segun se definen anteriormente, o composiciones farmaceuticas de estos y uno o mas agentes quimioterapeuticos como combinacion preparada para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento contra el cancer.
En otro aspecto mas, la invencion proporciona un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, segun se definen anteriormente, para uso como medicamento.
Finalmente, la invencion proporciona un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, segun se definen anteriormente, para uso en un metodo para el tratamiento del cancer.
Los compuestos de la formula (I) pueden tener uno o mas centros de asimetna y, por lo tanto, pueden existir como isomeros opticos individuales o mezclas racemicas.
Ademas de lo anterior, como saben los expertos en la tecnica, el nitrogeno sin sustituir del anillo de pirazol de los compuestos de la formula (I) se equilibra rapidamente en disolucion para formar una mezcla de tautomeros, segun se representa a continuacion:
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en los que n, Ar, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segun se definen anteriormente.
Por consiguiente, en la presente invencion, donde solo se indica un tautomero para los compuestos de la formula (I), el otro tautomero (Ia) tambien esta dentro del alcance de la invencion, a menos que se senale espedficamente lo contrario.
Los terminos generales segun se usan en este documento tienen el significado indicado a continuacion, a menos que se especifique lo contrario.
El termino “alquilo C1-C6” lineal o ramificado” se refiere a un radical de hidrocarburo alifatico saturado que incluye grupos de cadena lineal y de cadena ramificada de uno a seis atomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, isobutilo, ferc-butilo, pentilo y similares. El grupo alquilo puede estar sustituido o sin sustituir. Si esta sustituido, los grupos sustituyentes son preferentemente uno a tres, seleccionados independientemente del grupo que consta de halogeno, alquenilo, alquinilo, ciano, nitro, NHCOR7, COR7, NR4R5, NR4COR4, OR6, SR6, SOR10, SO2RIO, NHSOR10, NHSO2RIO, R8R9N-alquilo C1-C6, R8O-alquilo C1-C6 y un cicloalquilo C3-C6 heterociclilo, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituido adicionalmente, en que R4, R5, R6, R8, R9 y R10 son segun se definen anteriormente.
El termino “cicloalquilo C3-C6” se refiere a un anillo monodclico solo de carbono de tres a seis miembros que puede contener uno o mas enlaces dobles pero no tiene un sistema de electrones n totalmente conjugados. Algunos ejemplos de grupos cicloalquilo sin limitacion son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo y ciclohexadienilo. Un grupo cicloalquilo puede estar sustituido o sin sustituir. Si esta sustituido, los grupos sustituyentes son preferentemente uno o dos sustituyentes, seleccionados independientemente del grupo que consta de halogeno, alquenilo, alquinilo, ciano, nitro, NHCOR7, COR7, NR4R5, NR4COR4, OR6, SR6, SOR10, SO2R10, NHSOR10, NHSO2R10, R8R9N-alquilo C1-C6, R8O-alquilo C1-C6 y un alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituido adicionalmente, en que R4, R5, R6, R7, R8, R9 y R10 son segun se definen anteriormente.
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El termino “heterociclilo” se refiere a un anillo carbodclico saturado o parcialmente insaturado de tres a siete miembros, en que uno o mas atomos de carbono estan sustituidos por heteroatomos como nitrogeno, ox^geno y azufre. Algunos ejemplos no limitantes de grupos heterociclilo son, por ejemplo, oxiranilo, aziridinilo, oxetanilo, azetidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dihidrotiofenilo, pirrolidinilo, dihidropirrolilo, piranilo, dihidropiranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidinilo, pirazolinilo, isoxazolidinilo, isoxazolinilo, tiazolidinilo, tiazolinilo, isotiazolinilo, dioxanilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, exametileneiminilo, homopiperazinilo y similares. Un grupo heterociclilo puede estar sustituido o sin sustituir. Si esta sustituido, los grupos sustituyentes son preferentemente uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consta de halogeno, alquenilo, alquinilo, ciano, nitro, NHCOR7, COR7, NR4R5, nR4COR4, OR6, SR6, SOR10, SO2RIO, NHSOR10, NHSO2RIO, R8R9N-alquilo C1-C6, R8O-alquilo C1-C6 y un alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituido adicionalmente, en que R4, R5, R6, R8, R9 y R10 son segun se definen anteriormente.
El termino “arilo” se refiere a un hidrocarburo mono, bi o policarbodclico que tiene de uno a cuatro sistemas de anillo opcionalmente fusionados o unidos entre sf adicionalmente por enlaces sencillos, en que al menos uno de los anillos carbodclicos es “aromatico”, en que el termino “aromatico” se refiere a un sistema de enlaces de electrones n totalmente conjugados. Algunos ejemplos no limitantes de tales grupos arilo son los grupos fenilo, a o p-naftilo o bifenilo.
El termino “heteroarilo” se refiere a anillos heterodclicos aromaticos, tfpicamente de cinco a siete miembros heterodclicos con uno a tres heteroatomos seleccionados entre N, O o S; el anillo de heteroarilo puede estar ademas opcionalmente fusionado o unido a anillos carbodclicos y heterodclicos aromaticos y no aromaticos. Algunos ejemplos no limitantes de tales grupos heteroarilo son, por ejemplo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolilo, imidazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, fenilpirrolilo, furilo, fenilfurilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 1,2,3-triazolilo, 1-fenil-1,2,3- triazolilo, 2,3-dihidroindolilo, 2,3-dihidrobenzofuranilo, 2,3-dihidrobenzotiofenilo, benzopiranilo, 2,3- dihidrobenzoxazinilo, 2,3-dihidroquinoxalinilo y similares.
Los grupos arilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituidos con uno o mas, preferentemente uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halogeno, alquenilo, alquinilo, ciano, nitro, NHCOR7, COR7, NR4R5, NR4COR4, OR6, SR6, SOR10, SO2R10, NHSOR10, NHSO2R10, R8R9N-alquilo C1-C6, R8O-alquilo CrCa y un alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituido adicionalmente, en que R4, R5, R6, R7, R8, R9 y R10 son segun se definen anteriormente.
El termino “halogeno” indica fluor, cloro, bromo o yodo.
El termino “alquenilo” indica una cadena de hidrocarburo alifatico C2-C6 que contiene al menos un enlace doble carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificada. Algunos ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1 o 2-butenilo y similares.
El termino “alquinilo” indica una cadena de hidrocarburo alifatico C2-C6 que contiene al menos un enlace triple carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificada. Algunos ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1 o 2-butinilo y similares.
El termino “sal farmaceuticamente aceptable” de compuestos de la formula (I) se refiere a aquellas sales que retienen la eficacia y las propiedades biologicas del compuesto parental. Tales sales incluyen sales de adicion de acido con acidos inorganicos como los acidos clorhfdrico, bromlddrico, mtrico, fosforico, sulfurico, perclorico y similares o con acidos organicos como los acidos acetico, trifluoroacetico, propionico, glicolico, lactico, (D) o (L)- malico, maleico, fumarico, metanosulfonico, etanosulfonico, benzoico, p-toluenosulfonico, salidlico, cinamico, mandelico, tartarico, dtrico, sucdnico, malonico y similares; sales formadas cuando un proton acido presente en un compuesto de la formula (I) se sustituye por un ion metalico, por ejemplo, un ion de metal alcalino como sodio o potasio, o un ion alcalinoterreo como calcio o magnesio o coordinadas con una base organica como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina y similares.
Una clase preferida de compuestos de la formula (I) son los compuestos en los que Ar es un grupo de la formula:
imagen3
en el que Ra es (CH2)n-A o O-G', en que A, G' y n son segun se definen anteriormente y Rb es segun se define anteriormente.
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Otra clase mas preferida de compuestos de la formula (I) son los compuestos en los que Ar es un grupo de la formula:
imagen4
Ra
en el que Ra es (CH2VA y A y n son segun se definen anteriormente.
Los compuestos (cp.) espedficos de la invencion se listan a continuacion:
1. A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
2. A/-[5-(3-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
3. A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-2-(2-metoxietilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
4. A/-[5-(2-cloro-3,6-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
5. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-metoxietilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
6. A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
7. A/-[5-(3-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
8. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
9. A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-5-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
10. A/-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4- ilamino)benzamida,
11. A/-[5-(2,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
12. A/-[5-(2,3-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
13. A/-[5-(3,4-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
14. A/-[5-(2-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
15. A/-(5-benciloxi-1 H-indazol-3-il)-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-nitrobenzamida,
16. W-{5-[(R)-1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benza- mida,
17. W-{5-[(S)-1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benza- mida,
18. 2-amino-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida,
19. A/-[5-(2-cloro-5-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
20. W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)ben- zamida,
21. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-nitrobenzamida,
22. A/-[5-(3-cloro-5-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
23. A/-[5-(3-fluoro-5-metilbenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
24. A/-[5-(5-fluoro-2-metilbenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
25. {2-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1 H-indazol-3-ilcarbamoil]-5-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]fenil}amida del acido 1 H-pirrol-2-carbox^lico,
26. A/-[5-(2-metoxibenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
27. 2-amino-W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida,
28. A/-[5-(4-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
29. A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitrobenzamida,
30. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitrobenzamida,
31. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(3-metoxipropilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
32. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-((R)-2-metoxi-1-metiletilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-benzamida,
33. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
34. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-metoxi-1,1-dimetiletilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
35. ester etilico del acido 4-[2-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-ilcarbamoil]-5-(4-metilpiperazin-1-ilfenilamino] piperidin-1 -carbox^lico,
36. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-fluoroetilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
37. 2-bencilamino-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
38. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(1,2-dimetoxietilamino)-4-(4-metilperazin-1-il)benzamida,
39. 4-(4-metilpiperazin-1-il)-W-{5-[(3-fenoxibencil)oxi]-1H-indazol-3-il}benzamida,
40. 3-clorometil-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]benzamida
41. A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-3-piperidin-1-ilmetilbenzamida,
42. 3-(azetidin-1-ilmetil)-W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}benzamida,
43. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(pirrolidin-1-ilmetil)benzamida,
44. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[(2-metoxietil)(metil)amino]benzamida,
45. A/-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
46. A/-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
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47. /V-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1 W-indazol-3-il}-3-[(1 -metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida,
48. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-1-(1-metNpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida,
49. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida,
50. A/-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
51. A/-[5-(bencNoxi)-1H-indazol-3-il]-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida,
52. A/-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metNpiperazin-1-il)benzamida,
53. A/-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]-3-(piperazin-1-il)benzamida,
54. A/-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
55. A/-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobencN)oxi]-1H-indazol-3-il}-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
56. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
57. A/-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
58. A/-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobencN)oxi]-1H-indazol-3-il}-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
59. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
60. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-{[3-(dimetilamino)propil](metil)amino}benzamida,
61. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(piperidin-1-Nmetil)benzamida,
62. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(morfoNn-4-Nmetil)benzamida,
63. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida,
64. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-nitrobenzamida,
65. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-nitrobenzamida,
66. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida,
67. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida
68. A/-{5-[(2,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
69. A/-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
70. 4-(4-metilpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxMH-indazol-3-il)benzamida,
71. A/-[5-(3-fluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
72. A/-{5-[4-(benciloxi)fenoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
73. 4-(4-metilpiperazin-1-il)-W-[5-(4-fenoxifenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida,
74. A/-{5-[3-(benciloxi)fenoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
75. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
76. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)benzamida,
77. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida,
78. 2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxMH-indazol-3-il)benzamida
79. A/-{5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il}-1-(1-metNpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida,
80. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida,
81. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
82. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
83. 3-(4-metilpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxMH-indazol-3-il)benzamida,
84. clorhidrato de W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
85. clorhidrato de 2-metoxi-4-(4-metNpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida,
86. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida,
87. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-nitrobenzamida,
88. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-nitrobenzamida,
89. 3-amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida,
90. 4-amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida,
91. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida,
92. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida,
93. A/-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida,
94. A/-{5-[(3,5-difluorobenciloxi]-1H-indazol-3-il}-4-aminobenzamida,
95. A/-{5-[(3,5-difluorobenciloxi]-1H-indazol-3-il}-3-aminobenzamida y
96. 4-clorometil-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-benzamida.
La presente invencion proporciona asimismo un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (I) segun se define anteriormente, caracterizado porque el proceso comprende:
d) la condensacion de un compuesto de la formula (III):
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en el que n, Ar', R1, R2, R3, R' y R” son segun se definen anteriormente, con un compuesto de la formula (II):
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imagen6
en el que Ar es segun se define anteriormente e Y representa hidroxi o un grupo saliente adecuado como halogeno, con la separacion opcional del compuesto resultante de la formula (I), segun se define anteriormente, en los isomeros individuales y la conversion del compuesto de la formula (I) en un compuesto diferente de la formula (I) y/o en una sal farmaceuticamente aceptable si se desea.
La presente invencion proporciona ademas un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (I) segun se define anteriormente, caracterizado porque el compuesto de la formula (III) segun se define anteriormente se prepara de acuerdo con las etapas siguientes:
a) condensacion de un compuesto de la formula (VI):
imagen7
en el que R1, R2 y R3 son segun se definen anteriormente, con un derivado alcoholico de la formula (VII):
Ar'(CR'R”)nOH (VII)
en el que n, Ar', R' y R” son segun se definen anteriormente;
b) reduccion del grupo nitro del compuesto resultante de la formula (V):
imagen8
en el que n, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segun se definen anteriormente;
c) reduccion del grupo ciano del compuesto resultante de la formula (IV):
imagen9
en el que n, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segun se definen anteriormente, en presencia de un sistema de reactivos adecuado como, por ejemplo, NaNO2/HCl y SnCl2, para dar un compuesto de la formula (III) segun se define anteriormente.
Un compuesto de la formula (I) puede convertirse en otro compuesto de la formula (I), en que dicha conversion se lleva a cabo mediante una o mas de las reacciones siguientes:
1) reduccion de un compuesto de la formula (I), en el que Ar es un arilo sustituido y uno de los sustituyentes es NO2, para obtener un compuesto de la formula (I) en el que dicho sustituyente es NH2;
2) conversion de un compuesto de la formula (I) en el que n es 1 en otro compuesto de la formula (I) con un grupo
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Ar' diferente en un proceso multietapa que consta de:
2A) la proteccion de un compuesto de la formula (I);
2B) la reduccion del compuesto resultante de la formula (Xa):
imagen10
en el que Ar, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segun se definen anteriormente y PG es un grupo protector adecuado como etoxicarbonilo, metoxicarbonilo, ferc-butoxicarbonilo o trifluoroacetilo;
2C) el acoplamiento del compuesto resultante de la formula (XI):
imagen11
en el que Ar, R1, R2, R3 y PG son segun se definen anteriormente, con un compuesto de la formula (XII)
Ar'(CR'R”)W (XII)
en el que Ar', R' y R” son segun se definen anteriormente, pero Ar' es diferente del Ar' de la formula (Xa) y W representa un atomo de halogeno como cloro, bromo o yodo o un grupo saliente adecuado como un grupo hidroxi o sulfonatos como p-toluenosulfonato, metanosulfonato o trifluorometanosulfonato;
2D) la eliminacion del grupo protector del compuesto resultante de la formula (X):
imagen12
en el que Ar, Ar', R', R”, R1, R2, R3 y PG son segun se definen anteriormente, para dar un compuesto de la formula (I), en el que n es 1 y Ar, Ar', R1, R2, R3, R' y R” son segun se definen anteriormente, pero Ar' es diferente del Ar' de la formula (Xa).
La smtesis de un compuesto de la formula (I) de acuerdo con el proceso sintetico descrito anteriormente puede llevarse a cabo en etapas, en que cada intermedio se afsla y purifica por tecnicas de purificacion estandar como, por ejemplo, cromatograffa en columna, antes de llevar a cabo la reaccion siguiente. Alternativamente, pueden llevarse a cabo dos o mas etapas de la secuencia de smtesis en un procedimiento denominado “one pot” (una sola etapa), segun se conoce en la tecnica, en que solo se afsla y purifica el compuesto resultante de las dos o mas etapas.
El esquema 1 indicado muestra la preparacion de un compuesto de la formula (I), en el que n, Ar, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 tienen los significados anteriores.
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Esquema 1
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De acuerdo con la etapa d), un compuesto de la formula (I) puede obtenerse mediante la reaccion de un compuesto de la formula (III) con un compuesto de la formula (II) de diversas maneras y con diversas condiciones experimentales, conocidas ampliamente en la tecnica para reacciones de condensacion. Preferentemente, un compuesto de la formula (II) en el que Y es hidroxi se convierte en el acilo correspondiente en el que Y es cloro en presencia de cloruro de tionilo o cloruro de oxalilo en un disolvente adecuado como tolueno, diclorometano, cloroformo, eter dietilico, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano, a una temperatura desde aproximadamente -10 °C hasta la temperatura de reflujo, durante un periodo de tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. El cloruro de acilo se afsla por evaporacion del disolvente y se hace reaccionar posteriormente con (III) en presencia de una base como piridina, trietilamina o /V-etildiisopropilamina en un disolvente adecuado como tolueno, diclorometano, cloroformo, eter dietilico, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano, a una temperatura desde aproximadamente -40 °C hasta la temperatura de reflujo, durante un periodo de tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. Alternativamente, un compuesto de la formula
(II) se hace reaccionar con un compuesto de la formula (III) en presencia de un agente activante como hidroxibenzotriazol, diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida o clorhidrato de 1 -etil-3- (3'dimetilamino)carbodiimida. Preferentemente, esta reaccion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, diclorometano, tolueno o 1,4-dioxano y en presencia de un aceptor de protones como, por ejemplo, piridina, trietilamina o V,V-diisopropiletilamina, a una temperatura desde la temperatura ambiente hasta la temperatura de reflujo durante un tiempo que vana desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 96 horas.
De acuerdo con la etapa c), la transformacion de un compuesto de la formula (IV) en un compuesto de la formula
(III) puede llevarse a cabo de diversas maneras y con diversas condiciones experimentales, conocidas ampliamente en la tecnica para la preparacion de 3-aminoindazoles, por ejemplo, con el uso de acido nitroso/cloruro de estano o acido nitroso/hidrazina. Preferentemente, esta reaccion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, dimetilsulfoxido, acetonitrilo, agua, metanol, etanol o n-butanol, a una temperatura desde 0 °C hasta la temperatura de reflujo, durante un periodo de tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas.
De acuerdo con la etapa b), la reduccion de un compuesto de la formula (V) a un compuesto de la formula (IV) puede llevarse a cabo de diversas maneras de acuerdo con metodos convencionales bien conocidos de la bibliografia. Preferentemente, esta conversion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo diclorometano, metanol, etanol, agua, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, V,V-dimetilformamida, acido acetico o una mezcla de los mismos, en presencia de un agente reductor adecuado como, por ejemplo, hidrogeno y un catalizador de hidrogenacion o por tratamiento con ciclohexeno o ciclohexadieno o con acido formico o formiato de amonio y un catalizador de hidrogenacion o con un metal como hierro o cinc en presencia de un acido inorganico, como acido clorhfdrico, o por tratamiento con cloruro de estano(II) o hidrosulfito de sodio en presencia de cloruro de tetrabutilamonio, a una temperatura desde 0 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. Normalmente, el catalizador de hidrogenacion es un metal, principalmente paladio, que puede usarse como tal o con un soporte de carbono.
De acuerdo con la etapa a), la condensacion de un compuesto de la formula (VI) con un compuesto de la formula (VII) puede llevarse a cabo de diversas maneras, de acuerdo con metodos convencionales para la sustitucion
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nucleofila aromatica. Preferentemente, esta reaccion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, dioxano, N,N-dimetilformamida, dimetilsulfoxido, dimetoxietano, tolueno, xileno o una mezcla de los mismos, en presencia de una base adecuada como, por ejemplo, diisopropilamida de litio, bis(trimetilsilil)amida de litio, sodio o potasio, trietilamina, diisopropiletilamina, carbonato de sodio, potasio o cesio, hidruro de sodio, hidroxido de sodio o fluoruro de cesio, a una temperatura desde -20 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas.
De acuerdo con la conversion 1), la reduccion de un compuesto de la formula (I) en el que Ar es un arilo sustituido y uno de los sustituyentes es nitro a un compuesto de la formula (I) en el que dicho sustituyente es amino puede llevarse a cabo de diversas maneras, de acuerdo con metodos convencionales bien conocidos de la bibliograffa. Preferentemente, esta conversion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, metanol, etanol, agua, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N,N-dimetilformamida, acido acetico o una mezcla de los mismos, en presencia de un agente reductor adecuado como, por ejemplo, hidrogeno y un catalizador de hidrogenacion o por tratamiento con ciclohexeno o ciclohexadieno o con acido formico o formiato de amonio y un catalizador de hidrogenacion o con un metal como hierro o cinc en presencia de un acido inorganico, como acido clorhfdrico, o por tratamiento con cloruro de estano(II) o hidrosulfito de sodio en presencia de cloruro de tetrabutilamonio, a una temperatura desde 0 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. Normalmente, el catalizador de hidrogenacion es un metal, principalmente paladio, que puede usarse como tal o con un soporte de carbono.
De acuerdo con la conversion 2), etapa 2A), la proteccion de un compuesto de la formula (I) puede llevarse a cabo de diversas maneras y con diversas condiciones experimentales ampliamente conocidas en la tecnica para la proteccion del atomo de nitrogeno. Preferentemente, la reaccion se lleva a cabo por tratamiento con un exceso de anhfdrido trifluoroacetico o cloruro de trifluoroacetilo, cloroformiato de etilo o metilo o anhfdrido de terc- butoxicarbonilo en un disolvente adecuado como 1,4-dioxano, acetonitrilo, tetrahidrofurano, N,N-dimetilformamida, tolueno o diclorometano. Tfpicamente, la reaccion se lleva a cabo en condiciones basicas, por ejemplo, en presencia de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undeca-7-eno, N,N-dimetilaminopiridina, piridina o trietilamina, a una temperatura desde aproximadamente 0 °C hasta aproximadamente 110 °C y durante un tiempo que vana desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 96 horas.
De acuerdo con la conversion 2), etapa 2B), la reduccion de un compuesto de la formula (X) puede llevarse a cabo de diversas maneras de acuerdo con metodos convencionales bien conocidos de la bibliograffa. Preferentemente, se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, metanol, etanol, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N,N- dimetilformamida o una mezcla de los mismos, en presencia de un agente reductor adecuado como, por ejemplo, hidrogeno y un catalizador de hidrogenacion o por tratamiento con ciclohexeno o ciclohexadieno o con acido formico o formiato de amonio y un catalizador de hidrogenacion, a una temperatura desde 0 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. Normalmente, el catalizador de hidrogenacion es un metal, principalmente paladio, que puede usarse como tal o con un soporte de carbono.
De acuerdo con la conversion 2), etapa 2C), la condensacion de un compuesto de la formula (XI) con un compuesto de la formula (XII) puede llevarse a cabo de diversas maneras, de acuerdo con metodos convencionales para reacciones de O-alquilacion. Preferentemente, esta reaccion se lleva a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, N,N-dimetilformamida o dimetoxietano, en presencia de una base adecuada como, por ejemplo, trietilamina, diisopropiletilamina, carbonato de sodio, potasio o cesio o hidruro de sodio, a una temperatura desde -78 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas. El agente alquilante es normalmente un halogeno o un derivado de sulfonato; en la mayona de los casos el grupo saliente es yodo, bromo, triflato o mesilato. Tambien pueden usarse otros metodos convencionales para derivados alcoholicos, es decir, reacciones del tipo de Mitsunobu. Preferentemente, estas reacciones se llevan a cabo en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, dimetoxietano, tolueno, diclorometano, acetonitrilo, en presencia de un sistema de azodicarboxilato/fosfina como, por ejemplo, dietilazodicarboxilato/trifenilfosfina, a una temperatura desde -20 °C hasta la temperatura de reflujo y durante un tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 96 horas.
De acuerdo con la conversion 2), etapa 2D), la desproteccion de un compuesto de la formula (X) puede llevarse a cabo de acuerdo con metodos convencionales que permiten la hidrolisis selectiva de los grupos protectores terc- butoxicarbonilo, bencilo, 4-metoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo y trifenilmetilo. Preferentemente, esta reaccion se lleva a cabo en condiciones acidas, preferentemente en presencia de un acido inorganico u organico como los acidos clortndrico, trifluoroacetico o metanosulfonico, en un disolvente adecuado como diclorometano, 1,4-dioxano o un alcohol inferior como metanol o etanol, a una temperatura desde la temperatura ambiente hasta aproximadamente 80 °C y durante un periodo de tiempo que vana desde aproximadamente una hora hasta aproximadamente 48 horas. Como alternativa, esta reaccion se lleva a cabo en condiciones reductoras como, por ejemplo, en presencia de hidrogeno y un catalizador de hidrogenacion en un disolvente adecuado como etanol, metanol, acetato de etilo o una mezcla de los mismos. Normalmente, el catalizador es un metal, principalmente un derivado de paladio como, por ejemplo, hidroxido de paladio o negro de paladio. La hidrolisis de los grupos protectores como trifluoroaetilo,
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etoxicarbonilo o metoxicarbonilo puede llevarse a cabo de acuerdo con metodos convencionales bien conocidos. Preferentemente, la reaccion se lleva a cabo por tratamiento con una base organica o inorganica como carbonato de potasio, hidroxido de sodio, amonio, trietilamina o W,A/-diisopropiletilamina en un disolvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano, diclorometano, tolueno, 1,4-dioxano, metanol, etanol, agua o mezclas de los mismos, a una temperatura desde la temperatura ambiente hasta la temperatura de reflujo durante un tiempo que vana desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 96 horas.
El experto en la tecnica sabe que cuando un compuesto de la formula (II), la formula (VIII) o la formula (IX) contiene grupos funcionales que pueden interferir con las reacciones de acilacion, dichos grupos deben protegerse antes de llevar a cabo la reaccion. En particular, cuando un compuesto de la formula (II), la formula (VIII) o la formula (IX) esta sustituido con restos de la formula general NR4R5, OR6, SR6, R8R9N-alquilo C1-C6 o R8O-alquilo C1-C6, en que R6 o al menos uno de R4 y R5 o al menos uno de R8 y R9 representan hidrogeno, tales grupos pueden protegerse segun se conoce en la tecnica. Los expertos tambien saben que tales grupos protectores pueden eliminarse inmediatamente despues de la reaccion o en un momento posterior en el proceso de smtesis.
La desproteccion de un compuesto de la formula (I), en el que Ar es un arilo sustituido y uno de los sustituyentes es un grupo amino protegido puede realizarse de diversas maneras de acuerdo con metodos convencionales para la desproteccion de grupos amino. Segun el grupo aminoprotector, esta reaccion puede llevarse a cabo de distintas maneras. En un aspecto, esta reaccion puede llevarse a cabo por tratamiento con un acido inorganico como los acidos clortudrico, sulfurico o perclorico o un acido organico como los acidos trifluoroacetico o metanosulfonico, en un disolvente adecuado como agua, metanol, etanol, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano, eter dietflico, eter diisopropflico, acetonitrilo, A/,W-dimetilformamida, diclorometano o mezclas de los mismos, a una temperatura desde -20 °C hasta 80 °C y durante un periodo de tiempo que vana desde 30 minutos hasta 48 horas. En otro aspecto, esta reaccion puede llevarse a cabo por tratamiento con una base inorganica como hidroxido de litio, sodio o potasio o carbonato de sodio, potasio o cesio, con una base organica como trietilamina o W,A/-diisopropiletilamina o con hidrazina anhidra o hidrazina hidratada, en un disolvente adecuado como agua, metanol, etanol, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano, eter dietflico, eter diisopropflico, acetonitrilo, W,A/-dimetilformamida, diclorometano o mezclas de los mismos, a una temperatura desde -20 °C hasta 80 °C y durante un periodo de tiempo que vana desde 30 minutos hasta 72 horas.
Los derivados indazolicos sustituidos pueden prepararse mediante procedimientos estandar en smtesis organicas segun se describe, por ejemplo, en: Smith, Michael - March's Advanced Organic Chemistry: reactions mechanisms and structure - 5a edicion, Michael B. Smith y Jerry March, John Wiley & Sons Inc., Nueva York (NY), 2001. El experto sabe que la transformacion de una funcion qmmica en otra puede requerir la proteccion de uno o mas centros reactivos en el compuesto que contiene esta funcion para evitar reacciones secundarias no deseadas. La proteccion de tales centros reactivos y su subsiguiente desproteccion al termino de las transformaciones sinteticas pueden llevarse a cabo siguiendo los procedimientos estandar descritos, por ejemplo, en: Green, Theodora W. y Wuts, Peter G. M. - Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edicion, John Wiley & Sons Inc., Nueva York (NY), 1999.
En los casos en que un compuesto de la formula (I) contiene uno o mas centros de asimetna, dicho compuesto puede separarse en los isomeros individuales por procedimientos conocidos por los expertos en la tecnica. Tales procedimientos comprenden tecnicas cromatograficas estandar, incluida una cromatograffa con el uso de una fase estacionaria quiral, o cristalizacion. Los metodos generales para la separacion de compuestos que contienen uno o mas centros de asimetna se describen, por ejemplo en: Jacques, Jean; Collet, Andre; Wilen, Samuel H., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons Inc., Nueva York (NY), 1981.
Un compuesto de la formula (I) puede transformarse tambien en una sal farmaceuticamente aceptable de acuerdo con procedimientos estandar conocidos por los expertos en la tecnica. Alternativamente, un compuesto de la formula (I) obtenido como sal puede transformarse en la base o el acido libre de acuerdo con procedimientos estandar conocidos por el experto en la tecnica.
Los materiales de partida del proceso de la presente invencion, es decir, los compuestos de las formulas (VI), (VII), (VIII), (IX) y (XII) estan disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante metodos bien conocidos, tales como: B. M. Trost e I. Fleming, Comprehensive Organic Synthesis, 1991, Pergamon Press; A. R. Katritzky, O. Meth- Cohn y C. W. Rees, Comprehensive Organic Functional Group Transformations, 1995, Elsevier Pergamon; A. R. Katritzky y R. J. K. Taylor, Comprehensive Organic Functional Group Transformations II, 2005, Elsevier Pergamon.
Los compuestos de la formula (II) se preparan segun se describe en la seccion de Preparaciones de 3 a 9.
farmacologJa
Las formas abreviadas y abreviaturas usadas en este documento tienen el significado siguiente:
Ci curio
DMSO dimetilsulfoxido
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microgramo
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jl
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molar
mM
milimolar
jM
micromolar
nM
nanomolar
Ensayos
Los compuestos de la presente invencion se probaron en un ensayo bioqmmico segun se describe a continuacion. Preparacion del dominio citoplasmico de la ALK para uso en el ensayo bioqmmico Clonacion y expresion
El dominio citoplasmico de la ALK, correspondiente a los restos 1060-1620 (los numeros de los restos aminoaddicos se refieren al numero de acceso de Genbank NP 004295.2) se amplifico por PCR a partir de un banco de ADNc de testmulo humano.
La amplificacion se llevo a cabo con el oligonucleotido directo:
5'-
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTACTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCCCGCCGGAAGCACCAGGA GCTG-3' [SEQ ID NO: 1]
y el oligonucleotido inverso:
5'-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTCAGGGCCCAGGCTGGTTCATGCTATT-3' [SEQ ID NO: 2],
Para la clonacion, los oligonucleotidos incluyen sitios attB con el fin de obtener un producto de PCR flanqueado por attB adecuado para la clonacion mediante la tecnologfa Gateway (Invitrogen). Ademas, para la purificacion, el cebador directo incluye un sitio de corte para la enzima PreScission (Amersham Biosciences). El producto de PCR resultante se clono en el vector de expresion de baculovirus pVL1393 (Invitrogen) modificado por Gateway. Para la expresion y purificacion, se anadio una etiqueta GST al extremo N-terminal del dominio citoplasmico de la ALK. La clonacion se llevo a cabo de acuerdo con los protocolos descritos en el manual de Gateway (Invitrogen).
Los baculovirus se generaron por cotransfeccion del vector de expresion y el ADN vmco en celulas de insecto Sf9 mediante el kit de transfeccion BaculoGold™ (Pharmingen).
Despues de cinco dfas se recogio el sobrenadante vmco que se sometio a tres ciclos de amplificacion para aumentar el tttulo vmico.
La protema recombinante se produjo mediante la infeccion de celulas de insecto Sf21 a una densidad de 1 x 106 celulas/ml con 30 ml de sobrenadante vmico por mil millones de celulas con agitacion a 27 °C. A las 48 horas despues de las infecciones se recogieron las celulas, que se sedimentaron y congelaron a -80 °C.
Purificacion de la protema
Las celulas se resuspendieron en tampon de lisis (Tris-HCl 50 mM, pH 8, NaCl 150 mM, CHAPS al 0,2 %, DTT 20 mM, glicerol al 20 %, coctel de inhibidores de proteasas “Complete” (Roche Diagnostics), Na3VO41 mM) y se lisaron por extrusion de lfquido con un homogeneizador Gaulin (Niro Scavi, Italia). El lisado se clarifico por centrifugacion a 20.000 g durante 30 minutos y se cargo en una columna de Sepharose con glutation 4B (Amersham Biosciences).
Despues de un lavado exhaustivo, la protema recombinante se eluyo con glutation 10 mM en Tris-HCl 100 mM, pH 8, glicerol al 10 %.
La protema GST-ALK purificada por afinidad se cargo en una columna de Sepharose™ con heparina FF (Amersham Biosciences) y se eluyo con NaCl 50 mM, Tris 25 mM, pH 7,5, DTT 2mM, glicerol al 20 %.
Las fracciones eluidas se reunieron y dializaron contra NaCl 150 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, DTT 2 mM, glicerol al 20 %.
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La protema purificada se almaceno a -80 °C antes de su uso en el ensayo bioqmmico.
Ensayo bioqmmico para inhibidores de la actividad cinasica de la ALK
La enzima ALK necesita una preactivacion para una cinetica de reaccion lineal.
i. Tampon de cinasa (TC) para ALK
El tampon de cinasa estuvo compuesto de HEPES 50 mM, pH 7,5 con MnCh 1 mM, MgCh 5 mM, DTT 1 mM, Na3VO4 3 |jM y 0,2 mg/ml de BSA. TC 3X es un tampon de la misma composicion y pH que TC, pero con una concentracion triple de cada componente.
ii. Condiciones de ensayo
El ensayo de cinasa se llevo a cabo con una concentracion enzimatica final de 20 nM, en presencia de ATP 8 jM, 32P-Y-aTp 1 nM y MBP 2 jM. La MBP se adquirio de Sigma-Aldrich, San Luis, MO, EE. UU.).
Ensayos a base de celulas para inhibidores de la actividad cinasica de la ALK
Analisis de inmunotransferencia de la fosforilacion de las protemas ALK y STAT3 en las lineas celulares de linfoma anaplasico de celulas grandes Karpas-299, SR-786 y SUP-M2
Las celulas Karpas 299, SR-786 y SUP-M2 (DSMZ, Braunschweig, Alemania) se sembraron en placas de cultivo de tejidos de seis pocillos a 5 x 105 celulas/ml en medio RPMI-1640 + glutamina 2 mM + FCS 10-15 % (EuroClone, Italia) y se incubaron durante la noche a 37 °C, CO2 al 5 % y el 100 % de humedad relativa. Despues de esta incubacion, las celulas se trataron con las concentraciones deseadas del compuesto durante dos horas a 37 °C. Las celulas se recogieron por centrifugacion a 248 g durante cinco minutos, se lavaron con PBS fno, se volvieron a centrifugar a 248 g durante cinco minutos y despues se lisaron en Tris-HCl 100 mM, pH 7,4, SDS al 2 %, Na3VO4 1 mM, coctel de inhibidores de proteasas (Sigma-Aldrich, producto n° P8340), coctel de inhibidores de fosfatasas (Sigma-Aldrich, productos n° p2850 y n° P5726). Despues de un breve tratamiento con ultrasonidos los lisados celulares se clarificaron por centrifugacion a 10.000 g durante 20 minutos a temperatura ambiente y 20 jg de protema de lisado clarificado por carril se cargaron en geles NuPAGE (geles NuPAGE de Bis-Tris de 10 carriles al 412 %, Invitrogen) con MOPS como tampon de electroforesis y despues se transfirieron a filtros de nitrocelulosa Hybond-ECL (Amersham Biosciences, Little Chalfont, Buckinghamshire, Reino Unido) mediante camaras Mini PROTEAN II (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU.). Los filtros que conteman la protema transferida se incubaron durante una hora en tampon de bloqueo (TBS + leche en polvo desnatada (n° 1706404 Bio-Rad, Hercules, CA, EE. UU.) + Tween 20 al 0,1%) y despues durante la noche en TBS + BSA al 5 % + Tween 20 al 0,1 % a 4 °C con una dilucion 1/500 de un anticuerpo dirigido contra fosfo-ALK Tyr 1604 (producto n° 3341, Cell Signaling Technology, Beverly, MA, EE. UU.) para la deteccion de la ALK fosforilada, una dilucion 1/500 de un anticuerpo de raton dirigido contra ALK (producto n° 35-4300, Zymed Laboratories, South San Francisco, CA, EE. UU.) para la deteccion de la ALK total, una dilucion 1/500 de un anticuerpo de raton dirigido contra fosfo-STAT3 Tyr 505 (producto n° 612357, BD Transduction Laboratories, Canada) para la deteccion de la protema STAT3 fosforilada o una dilucion 1/1000 de un anticuerpo de raton dirigido contra STAT3 (producto n° 610190 BD Transduction Laboratories, Canada) para la deteccion de la STAT3 total.
En todos los casos, los filtros se lavaron despues durante 20 minutos con varios cambios de TBS + Tween 20 al 0,1 % y se incubaron durante una hora en TBS + leche en polvo desnatada al 5 % + Tween 20 al 0,1 % con una dilucion 1/10.000 de un anticuerpo dirigido contra IgG de conejo o raton conjugado con peroxidasa de rabano (Amersham, producto n° NA934) y despues se lavaron de nuevo y se revelaron con el sistema de luminiscencia ECL (Amersham) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. A menos que se indique lo contrario, los reactivos usados fueron de Sigma-Aldrich, San Luis, MO, EE. UU.).
Ensayo de proliferacion celular in vitro para inhibidores de la actividad cinasica de la ALK
Las lmeas celulares de LACG humano Karpas-299, SR-786 y SUP-M2 se sembraron en placas de 96 pocillos (PerkinElmer, Wellesley, MA, EE. UU.) a 1 x 105 celulas/ml en medio RPMI-1640 + glutamina 2 mM + FcS al 1015 % (EuroClone, Italia) (100 jl/pocillo) y se mantuvieron a 37 °C, con CO2 al 5 % y el 100 % de humedad relativa. Al dfa siguiente, las placas se trataron por duplicado con una dilucion apropiada de los compuestos, a partir de una disolucion madre 10 mM en DMSO (concentracion final de DMSO: 0,1 %). En cada placa se incluyeron ocho controles sin tratar. Despues de 72 horas de tratamiento se anadieron 50 jl de la disolucion de ensayo CellTiter-Glo (Promega, Madison, WI, EE. UU.) a cada pocillo y tras agitar, se midio la senal de quimioluminiscencia mediante un detector Envision (PerkinElmer, Wellesley, MA, EE. UU.).
Los valores de CI50 se calcularon mediante el sistema de analisis de datos LSW con el ajuste de una curva sigmoidea en Microsoft Excel.
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Ensayo bioquimico para inhibidores de la actividad cinasica de la JAK2
Principio general - Un sustrato peptidico espedfico de la JAK2 se transfosforila con la cinasa JAK2 en presencia de ATP marcado con 32P-y-ATP. Al termino de la reaccion de fosforilacion, el 98 % del ATP fno y radiactivo se captura mediante un exceso de la resina de intercambio ionico Dowex que finalmente se deposita por gravedad en el fondo de la placa de reaccion. Seguidamente, el retira el sobrenadante y se transfiere a una placa de recuento para su evaluacion por recuento p.
Preparacion de la resina Dowex - Se pesan 500 g de resina humeda (SIGMA, resina Dowex preparada a medida, 1x8, malla 200-400, 2,5 kg) y se diluyen 2 a 1 en formiato de sodio 150 mM, pH 3,00. La resina se deja sedimentar durante la noche y despues se descarta el sobrenadante. Despues de tres lavados como anteriormente durante varios dfas, la resina se deja sedimentar y se le anaden dos volumenes (con respecto al volumen de resina) del tampon de formiato de sodio 150 mM.
Enzima - El ensayo se realiza con el dominio cinasico de la JAK2 disponible comercialmente (Invitrogen, Eugene, OR, EE. UU.). El dominio cinasico de la JAK2 mostro una cinetica lineal sin prefosforilacion.
Tampon de cinasa (TC) para JAK2 - El tampon de cinasa estuvo compuesto de HEPES 50 mM, pH 7,5 con MgCh 10 mM, DTT 2,5 mM, Na3VO4 10 |jM y 0,2 mg/ml de BSA. TC 3X es un tampon de la misma composicion y pH que TC, pero con una concentracion triple de cada componente.
Condiciones de ensayo - El ensayo de actividad cinasica de la JAK2 se llevo a cabo con una concentracion enzimatica final de 1 nM, en presencia de ATP 60 jM, 32P-y-ATP 3 nM y el sustrato Jaktide 64 jM (secuencia aminoaddica LPLDKDYYWREPGQ). El sustrato Jaktide se adquirio de American Peptide Company (Sunnyvale, CA, EE. UU.).
Dilucion de los compuestos - Para la determinacion de la CI50, los compuestos de prueba se reciben como disolucion 1 mM en DMSO al 100 %, distribuidos en placas de 96 pocillos: los compuestos se transfieren a la primera columna de una placa de microtitulacion (A1 a G1), 100 jl/pocillo.
Se usa una estacion automatica para diluciones seriadas (Biomex FX, Beckman) para producir diluciones 1:3 en DMSO al 100 % desde la lmea A1 hasta la A10 y para todos los compuestos en la columna. Ademas, se preparan 45 copias de placas hijas pasando 5 jl de esta primera serie de placas de dilucion en DMSO al 100 % a placas de 384 pocillos hondos: una de estas placas con las diluciones seriadas de los compuestos de prueba se descongelara el dfa de los experimentos, se reconstituira a la concentracion de 3X con agua y se usara en los ensayos de determinacion de la CI50. En un experimento estandar, la mayor concentracion (3X) de todos los compuestos es 30 jM, mientras que la menor es 1,5 nM.
Cada placa de 384 pocillos contendra al menos una curva del inhibidor estandar estaurosporina y pocillos de referencia (actividad enzimatica total con respecto a falta de actividad enzimatica) para la evaluacion Z' y de senal con respecto a fondo.
Esquema del ensayo - Se preparan placas de 384 pocillos de fondo en V (placas de prueba) con 5 jl de la dilucion del compuesto (3X) y se colocan en una estacion robotizada PlateTrak 12 (PerkinElmer; el robot tiene un cabezal con 384 puntas de pipeta para comenzar el ensayo mas un cabezal de 96 puntas para distribuir la resina) junto con un reservorio para la mezcla enzimatica (3X) y otro para la mezcla de ATP (3X).
Al principio del experimento, el robot aspira 5 jl de la mezcla de ATP, deja un espacio de aire dentro de las puntas (3 jl) y aspira 5 jl de la mezcla de JAK2. La distribucion posterior en las placas mas tres ciclos de mezclado llevados a cabo por el robot mismo inician la reaccion de la cinasa. En este momento se restablecen las concentraciones correctas de todos los reactivos.
El robot incuba las placas durante 60 minutos a temperatura ambiente y entonces detiene la reaccion por pipeteo de 60 jl de la suspension de la resina Dowex en la mezcla de reaccion. Para evitar obstrucciones se usan puntas de boca ancha para distribuir la suspension de la resina. Inmediatamente despues de la adicion de la resina se llevan a cabo tres ciclos de mezclado.
Una vez que la reaccion se ha detenido, se lleva a cabo otro ciclo de mezclado, esta vez con puntas normales; a continuacion, las placas se dejan reposar durante aproximadamente una hora para maximizar la captura de ATP. En este momento, se transfieren 27 jl del sobrenadante a placas OptiPlate de 384 pocillos (PerkinElmer) con 50 jl de Microscint 40 (PerkinElmer); despues de cinco minutos de agitacion orbital, las placas se leen en un contador de radiactividad PerkinElmer Top Count.
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Ajuste de datos - Los datos se analizan mediante una version adaptada internamente del software “Assay Explorer” que proporciona un ajuste sigmoideo de las curvas de diluciones decimales para la determinacion de la CI50 en las rutinas de ensayos secundarios/confirmacion de aciertos.
Preparacion del receptor IGF-1R para su uso en el ensayo bioqmmico
Clonacion y expresion
Se uso ADNc humano como molde para la amplificacion por reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) de la porcion citoplasmica predicha para el IGF-1R (restos aminoaddicos 960-1367 de la protema precursora; vease el numero de acceso de protema Entrez del NCBI P08069) que incluye todo el dominio cinasico. La PCR se llevo a cabo con la secuencia del cebador directo
5'-CTCGGATCCAGAAAGAGAAATAACAGCAGGCTG-3' [SEQ ID NO: 3] y la secuencia del cebador inverso
5'-CTCGGATCCTCAGCAGGTCGAAGACTGGGGCAGCGG-3' [SEQ ID NO: 4],
Con el fin de facilitar las etapas de clonacion subsiguientes, ambos cebadores contienen en la secuencia un sitio para la endonucleasa de restriccion BamHI. Este producto de PCR se clono en el marco de lectura usando extremos adhesivos BamHI en un vector de transferencia para el sistema de expresion de baculovirus, pVL1392 (Pharmingen), previamente modificado por insercion en el sitio de clonacion multiple de dicho pVL1392 de secuencias codificantes de la protema de fusion glutation-S-transferasa (GST), un sitio de corte para la proteasa PreScission y una casete MSC parcial derivada del plasmido pGex-6P (Amersham Biosciences). La insercion del producto de PCR de IGF-1R descrito anteriormente en el sitio BamHI derivado de pGex-6P del vector pVL1392 modificado resulta en un marco abierto de lectura que corresponde a la protema pGEX-6P GST y el peptido PreScission fusionados con el dominio citoplasmico del IGF-1R humano. Para obtener la protema de fusion, se cotransfectan 2 |jg del plasmido purificado y 1 |jg de ADN vmco (kit de transfeccion BaculoGold™, Pharmingen) en celulas de insecto Sf21 segun se describe en el manual de instrucciones de baculovirus (Pharmingen). Se lleva a cabo una primera ampliacion del virus a partir de 600 jl del virus cotransfectado en 6 x 106 celulas Sf21 en un cultivo monocapa, en 12 ml de medio (medio TNM-FH de Grace, Pharmingen). Despues de tres dfas, el medio se recoge, se centrifuga y transfiere a un tubo esteril. Se prepara una segunda amplificacion por el mismo metodo con 2 ml sobre 3 x 107 celulas diluidas en 40 ml de medio. Para la tercera amplificacion del virus, se usa 1 ml del sobrenadante de la segunda tanda por 3 x 107 celulas, diluidas en 40 ml de medio.
La expresion de la protema se lleva a cabo en celulas de insecto H5 infectadas con 14 ml del virus por 1 x 109 celulas de insecto (MDI = 1,5) durante 65 horas con agitacion a 27 °C. Las celulas se recogen por centrifugacion a 1200 g durante 10 minutos.
Purificacion de la protema
Las celulas se resuspendieron en disolucion salina tamponada con fosfato (PBS), ditiotreitol (DTT) 20 mM, CHAPS al 0,2 %, glicerol al 20 %, ovoalbumina 1 mM, coctel de inhibidores de proteasas “Complete” (1 comprimido/50 ml de tampon, Roche Diagnostics, Milan, Italia) y se lisaron por extrusion de lfquido con un homogeneizador de Gaulin (Biro Soavi, Italia). El lisado se centrifugo a 14.000 g durante 14 minutos y el sobrenadante se cargo en una columna que contema 10 ml de Sepharose con glutation (Amersham Biosciences). La columna se lavo primeramente con cinco volumenes de columna de tampon PBS, despues con cinco volumenes de columna de Tris 100 mM, pH 8,0, glicerol al 20 % y finalmente se eluyo con glutation 10 mM en Tris 100 mM, pH 8,0, glicerol al 20 %. Se recogieron fracciones de 10 ml y se reunieron aquellas fracciones ricas en protema. Tfpicamente, se obtuvieron 20 mg de la protema de fusion a partir de1 x 109 celulas y esta presento una pureza mayor del 85 %, segun valoracion por SDS- PAGE mas tincion con Coomassie. La protema purificada se almaceno a -80 °C antes de su uso en el ensayo bioqmmico.
Ensayo bioqmmico para inhibidores de la actividad cinasica del IGF-1R
La actividad inhibidora de potenciales inhibidores de cinasa y la potencia de los compuestos seleccionados se determino mediante un ensayo de transfosforilacion.
Se incubo un sustrato espedfico con la cinasa en las condiciones de tampon adecuadas en presencia de ATP marcado con 32P-y-ATP (marcado en el fosfato y, Redivue™ numero de codigo AH9968, 1000-3000 Ci/mmol, Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, EE. UU.), los cofactores adecuados y el compuesto de prueba.
Al termino de la reaccion de fosforilacion, se capturo mas del 98 % del ATP fno y radiactivo mediante un exceso de la resina de intercambio ionico Dowex. La resina se dejo depositar por gravedad en el fondo de los pocillos de
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reaccion. Seguidamente, el retiro el sobrenadante y se transfirio a una placa de recuento para evaluacion de la radiactividad (correspondiente al fosfato incorporado en el peptido) por recuento p.
Reactivos y condiciones de ensayo
i. Preparacion de la resina Dowex
Se pesaron 500 g de resina humeda (SIGMA, resina Dowex preparada a medida, 1x8, malla 200-400, 2,5 kg) y se diluyeron hasta 2 l en formiato de sodio 150 mM, pH 3,00.
La resina se dejo sedimentar durante varias horas y despues se descarto el sobrenadante. Este procedimiento de lavado se repitio tres veces en dos dfas. Finalmente, la resina se dejo sedimentar, se descarto el sobrenadante y se anadieron dos volumenes (con respecto al volumen de resina) del tampon de formiato de sodio 150 mM. El pH final fue de aproximadamente 3,0. La resina lavada se almaceno a 4 °C antes de su uso y se mantuvo estable durante mas de una semana.
ii. Tampon de cinasa (TC)
El tampon de cinasa estuvo compuesto de HEPES 50 mM, pH 7,9 con MnCh 3 mM, DTT 1 mM, Na3VO4 3 pM y 0,2 mg/ml de BSA. TC 3X es un tampon de la misma composicion y pH que TC, pero con una concentracion triple de cada componente.
iii. Preactivacion de la enzima y preparacion de la mezcla enzimatica 3X.
Antes de iniciar el ensayo de inhibicion de la cinasa, IGF-1R se prefosforilo para obtener una cinetica de reaccion lineal. Para ello, se preparo la cantidad total de enzima deseada a una concentracion enzimatica de 360 nM en TC que contema ATP 100 pM y esta preparacion se incubo durante 30 minutos a 28 °C. La mezcla enzimatica 3X se obtuvo por dilucion de esta enzima preactivada 20 veces en TC 3X.
iv. Condiciones de ensayo
El ensayo de cinasa se llevo a cabo con una concentracion enzimatica final de 6 nM en presencia de ATP 6 pM, 32P- Y-ATP 1 nM y el sustrato 10 pM, un peptido biotinilado en el extremo carboxilo con la secuencia siguiente: KKKSPGEYVNlEFGGGGGK-biotina. El peptido se obtuvo en lotes con una pureza superior al 95 % de American Peptide Company, Inc. (Sunnyvale, CA, Ee. UU.).
Ensayo robotizado con resina Dowex
Las reacciones de prueba se llevaron a cabo en un volumen final total de 21 pl compuesto de:
a) 7 pl/pocillo de la mezcla enzimatica 3X (enzima preactivada 18 nM en tampon de cinasa 3X),
b) 7 pl/pocillo de sustrato 3X/mezcla de ATP (sustrato 30 pM, ATP 18 pM, 32P-y-ATP 3 nM en agua doblemente destilada (ddH2O),
c) 7 pl/pocillo de los compuestos de prueba 3X diluidos en ddH2O-DMSO al 3 %.
Dilucion de los compuestos y esquema del ensayo descrito a continuacion
i. Dilucion de los compuestos
Se distribuyeron disoluciones madre 10 mM de los compuestos de prueba en DMSO al 100 % en placas de microtilulacion de 96 pocillos en formato 12 x 8. Para los estudios de porcentaje de inhibicion se prepararon placas de dilucion a concentraciones de 1 mM, 100 pM y 10 pM en DMSO al 100 % y despues se diluyeron hasta la concentracion final deseada 3X (30, 3 y 0,3 pM) en ddH2O, DMSO al 3 %. Para pipetear los compuestos en las placas de prueba se uso un aparato Multimek 96 (Beckman Coulter, Inc. Harbor Boulevard, P.O. Box 3100, Fullerton, CA 92834-3100, EE. UU.).
Para la determinacion de la CI50 se prepararon disoluciones de partida de los compuestos 30 pM en DMSO al 3 % a partir de disoluciones madre 1 mM en DMSO al 100 %. Estas disoluciones de partida 30 pM se usaron para la generacion de otras nueve diluciones 1/3 seriadas en ddH2O/DMSO al 3 %, para obtener una curva de dilucion de diez puntos a la concentracion de ensayo final de 3X. La dilucion seriada se llevo a cabo en placas de 96 pocillos con un sistema Biomek 2000 (Beckman Coulter). Se prepararon curvas de dilucion de siete compuestos por placa y cada placa incluyo ademas una curva de dilucion de diez puntos de estaurosporina, asf como varios pocillos como controles negativos y positivos.
ii. Esquema del ensayo
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Se pipetearon 7 |jl de cada dilucion de los compuestos de prueba (o controles) en ddH2O, DMSO al 3 % en cada pocillo de una placa de ensayo de 384 pocillos de fondo en V, que despues se transfirio a una estacion robotizada PlateTrak 12 (PerkinElmer, 45 William Street, Wellesley, MA 02481-4078, EE. UU.), equipada con un cabezal de pipeteo de 384 puntas para comenzar el ensayo, mas un cabezal de 96 puntas para la distribucion de la resina y preparada con reservorios que conteman suficiente mezcla enzimatica 3X y mezcla de ATP 3X para llevar a cabo el ensayo.
Al principio del experimento, el sistema de manejo de lfquido aspira 7 jl de la mezcla de ATP, deja un espacio de aire dentro de las puntas (5 jl) y despues aspira 7 jl de la mezcla enzimatica 3X. Para comenzar la reaccion, el contenido de las puntas se distribuye en los pocillos de prueba que ya contienen 7 jl del compuesto de prueba (a la concentracion final deseada 3X), a lo que siguen tres ciclos de mezclado, para restablecer las concentraciones finales deseadas de todos los componentes de la reaccion.
Las placas se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente y despues la reaccion se detuvo por pipeteo de 70 jl de la suspension de la resina Dowex en la mezcla de reaccion, seguido de tres ciclos de mezclado. Una vez detenida la reaccion, las placas se dejaron reposar durante una hora para maximizar la captura de ATP. En este momento, se transfirieron 20 jl del sobrenadante de cada pocillo a placas OptiPlate de 384 pocillos (PerkinElmer) que conteman 70 jl de Microscint 40 (PerkinElmer); despues de cinco minutos de agitacion orbital, las placas se leyeron en un contador de radiactividad PerkinElmer Top Count.
iii. Analisis de datos
Los datos se analizaron mediante una version adaptada del software “Assay Explorer” (Elsevier MDL, San Leandro, CA 94577, EE. UU.). Para las concentraciones individuales de los compuestos, la actividad inhibidora se expreso tfpicamente como % de inhibicion en presencia del compuesto, en comparacion con la actividad total de la enzima obtenida al omitir el inhibidor.
Los compuestos que mostraban la inhibicion deseada se analizaron posteriormente con el fin de estudiar la potencia del inhibidor a traves del calculo de la CI50. En este caso, los datos de inhibicion obtenidos usando diluciones seriadas del inhibidor se ajustaron por regresion no lineal con la ecuacion siguiente:
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en la que Vb es la velocidad de referencia, v es la velocidad de reaccion observada, V0 es la velocidad en ausencia del inhibidor e [I] es la concentracion del inhibidor.
Ensayos a base de celulas para inhibidores de la actividad cinasica del IGF-1R
Analisis de inmunotransferencia de la fosforilacion del receptor despues de la estimulacion con IGF-1 en las celulas de cancer de mama humano MCF-7
Las celulas MCF-7 (ATCC, n° HTB-22) se sembraron en placas de cultivo de tejidos de 12 pocillos a 2 x 105 celulas/pocillo en medio E-MEM (MEM + BSS de Earle + glutamina 2 mM + aminoacidos no esenciales 0,1 mM) + FCS al 10 % y se incubaron durante la noche a 37 °C, CO2 al 5 % y el 100 % de humedad relativa. Las celulas se privaron de suero sustituyendo el medio E-MEM + FCS al 10 % por E-MEM + BSA al 0,1 % y se incubaron durante la noche. Despues de esta incubacion, los pocillos se trataron con las concentraciones deseadas del compuesto durante una hora a 37 °C y a continuacion se estimularon con IGF-1 recombinante humano (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE. UU.) 10 mM durante 10 minutos a 37 °C. Las celulas se lavaron con PBS y se lisaron en 100 jl/pocillo de tampon de lisis celular (reactivo de extraccion de protemas de mairnferos M-PER (producto n° 78501, Pierce, Rockford, IL, EE. UU.) + EDTA 10 mM + coctel de inhibidores de proteasas (Sigma-Aldrich, producto n° P8340) + coctel de inhibidores de fosfatasas (Sigma-Aldrich, productos n° P2850 y n° P5726). Los lisados celulares se clarificaron por centrifugacion a 10.000 g durante cinco minutos y 10 jg de protema de lisado clarificado por carril se cargaron en geles NuPAGE (geles NuPAGE de Bis-Tris de 10 carriles al 4-12 %, Invitrogen) con MOPS como tampon de electroforesis y despues se transfirieron a filtros de nitrocelulosa Hybond-ECL (Amersham Biosciences, Little Chalfont, Buckinghamshire, Reino Unido) mediante camaras Mini PROTEAN II (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU.). Los filtros que conteman la protema transferida se incubaron durante una hora en tampon de bloqueo (TBS + BSA al 5 %+ Tween 20 al 0,15%) y despues durante dos horas en el mismo tampon que contema una dilucion 1/1000 de un anticuerpo de conejo dirigido contra fosfo-IGF-1R Tyr1131/InsR Tyr 1146 (producto n° 3021, Cell Signaling Technology, Beverly, MA, EE. UU.), para la deteccion del IGF-1R fosforilado o una dilucion 1/1000 de un anticuerpo de raton dirigido contra IGF-1Rp(H60) (producto n° sc-9038, ZSanta Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, EE. UU.), para la deteccion de la cadena p total del IGF-1R. En ambos casos,
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los filtros se lavaron despues durante 30 minutes con varios cambios de TBS + Tween 20 al 0,15 % y se incubaron durante una hora en tampon de lavado con una dilucion 1/5000 de un anticuerpo dirigido contra IgG de conejo conjugado con peroxidasa de rabano (Amersham, producto n° NA934) y despues se lavaron de nuevo y se revelaron con el sistema de quimioluminiscencia ECL (Amersham) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. A menos que se indique lo contrario, los reactivos usados fueron de Sigma-Aldrich, San Luis, MO, EE. UU.
Fosforilacion de la proteina ribosomica S6 inducida por factores de crecimiento en fibroblastos primarios humanos
La fosforilacion de la proteina ribosomica S6 en respuesta a la estimulacion por factores de crecimiento de fibroblastos dermicos humanos normales (NHDF) se uso para evaluar la potencia de los compuestos en la inhibicion de la transduccion de senales inducida por IGF-1 en celulas y la selectividad frente a los estfmulos EGF y PDGF. Las celulas NHDF obtenidas de PromoCell (Heidelberg, Alemania) se mantuvieron a 37 °C en una atmosfera humidificada con CO2 al 5 % en medio de crecimiento de fibroblastos completo (PromoCell). Para el ensayo, las celulas NHDF se sembraron en placas de cultivo de tejidos de 384 pocillos (placas negras de fondo plano transparente; Matrix Technologies Inc. Hudson, NH, EE. uU.) a una densidad de 5000 celulas/pocillo en un medio sin suero con albumina de suero bovino (BSA) al 0,1 % y se incubaron durante cinco dfas. Las celulas privadas de suero se trataron durante una hora con las dosis deseadas de los compuestos y despues se estimularon durante otras dos horas con IGF-1 (Invitrogen Corp., CA, EE. UU.) 10 nM, EGF (Gibco BRL, EE. UU.) 10 nM o PDGF-B/B (Roche Diagnostics GmbH, Alemania) 1 nM. A continuacion, las celulas se fijaron en PBS/paraformaldel'Hdo al 3,7 % durante 20 minutos a temperatura ambiente, se lavaron dos veces con PBS y se permeabilizaron con PBS/Triton X- 100 al 0,3 % durante 15 minutos. Despues, los pocillos se saturaron con PBS/ leche en polvo desnatada al 1 % (BioRad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU.) durante una hora y seguidamente se incubaron durante una hora a 37 °C con un anticuerpo dirigido contra fosfo-S6 (Ser 235/236) (Cell Signaling Technology, Berverly, MA, EE. UU., n° 2211) a una dilucion 1/200 en PBS/ leche al 1%/Tween 20 al 0,3 %. A continuacion, los pocillos se lavaron dos veces con PBS y las placas se incubaron durante una hora a 37 °C en PBS/ leche al 1%/Tween 20 al 0,3 % con 1 pg/ml de DAPI (4,6-diamino-2-fenilindol) mas una dilucion 1/500 de un anticuerpo secundario de cabra dirigido contra IgG de conejo conjugado con Cy5TM (Amersham Biosciences, Little Chalfont, Buckinghampshire, Reino Unido). Los pocillos se lavaron dos veces con PBS y en cada uno de estos se dejaron 40 pl de PBS para el analisis de inmunofluorescencia. Las imagenes de fluorescencia en los canales de DAPI y Cy5TM se obtuvieron, almacenaron y analizaron automaticamente mediante un instrumento Cellomics ArrayScan™ IV (Cellomics, Pittsburgh, EE. UU.); se uso el algoritmo de citotoxicidad de Cellomics para cuantificar la fluorescencia citoplasmica asociada con fosfo-S6 (parametro de la senal de Cy5TM: “Mean Lyso Mass-pH”) para cada celula en 10 campos por pocillo que finalmente se expreso como un valor poblacional medio. A menos que se indique lo contrario, los reactivos se obtuvieron de Sigma-Aldrich, San Luis, MO, EE. UU.
Los compuestos de la formula (I) probados segun se describe anteriormente resultaron tener una notable actividad inhibidora de ALK, IGF-1R y JAK2. Tfpicamente, la actividad inhibidora en ensayos bioqmmicos es inferior a 0,3 pM.
Vease como ejemplo la tabla 1 siguiente que contiene los datos experimentales de algunos compuestos representativos de la invencion probados en un ensayo bioqmmico como inhibidores de las cinasas ALK, IGF-1R y jAK2 (CI50 pM), en comparacion con el compuesto mas proximo de la tecnica anterior (compuesto de referencia), descrito en el documento WO 03/028720, pagina 72, tabla XI, compuesto A07-M1-B01.
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Tabla 1
Compuesto n°
Ensayo bioqmmico de CI50 (pM) para ALK Ensayo bioqmmico de CI50 (pM) para IGF-1R Ensayo bioqmmico de CI50 (pM) para JAK2
8
0,02 0,14 0,02
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0,01 0,20 0,01
Compuesto de referencia
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Los compuestos de la presente invencion pueden administrarse como agentes individuales o, alternativamente, en combinacion con tratamientos conocidos contra el cancer como radioterapia o un regimen de quimioterapia en combinacion con agentes citostaticos o citotoxicos, agentes de tipo antibiotico, agentes alquilantes, antimetabolitos, agentes hormonales, agentes inmunitarios, agentes de tipo interferon, inhibidores de ciclooxigenasas (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de metaloproteasas de la matriz, inhibidores de telomerasas, inhibidores de tirosina-cinasas, agentes contra receptores de factores de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogenesis (por ejemplo, inhibidores de la angiogenesis), inhibidores de farnesil-transferasas, inhibidores de la ruta de transduccion de senales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdk, agentes de union a tubulina, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II y similares.
Si se formulan como dosis fija, tales productos combinados emplean los compuestos de esta invencion dentro del intervalo de dosificacion descrito a continuacion y el otro agente farmaceuticamente activo dentro del intervalo de dosificacion aprobado.
Los compuestos de la formula (I) pueden usarse secuencialmente con agentes conocidos contra el cancer cuando una formulacion combinada es inapropiada.
Los compuestos de la formula (I) de la presente invencion adecuados para su administracion a un mairnfero, por ejemplo, a humanos, pueden administrarse por las vfas habituales y los niveles de dosificacion dependen de la edad, el peso, el estado del paciente y la via de administracion.
Por ejemplo, una dosificacion adecuada adoptada para la administracion por via oral de un compuesto de la formula (I) puede variar desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 500 mg por dosis de una a cinco veces al dfa. Los compuestos de la invencion pueden administrarse en formas de dosificacion diversas, por ejemplo, por via oral en forma de comprimidos, capsulas, comprimidos recubiertos con azucar o pelfcula, disoluciones o suspensiones lfquidas; por via rectal en forma de supositorios; por via parenteral, por ejemplo, intramuscular o mediante inyeccion o infusion intravenosa y/o intratecal y/o intrarraqmdea.
La presente invencion tambien incluye composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en asociacion con un excipiente farmaceuticamente aceptable, que puede ser un vehfculo o diluyente.
Las composiciones farmaceuticas que contienen los compuestos de la invencion se preparan normalmente de acuerdo con metodos convencionales y se administran en una forma farmaceutica adecuada. Por ejemplo, las formas orales solidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidon de mafz o almidon de patata; lubricantes, por ejemplo, sflice, talco, acido estearico, estearato de magnesio o de calcio y/o polietilenglicoles; aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arabiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; disgregantes, por ejemplo, almidon, acido algmico, alginatos o glicolato de almidon sodico; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes, humectantes como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias farmacologicamente inactivas no toxicas usadas en formulaciones farmaceuticas. Estas preparaciones farmaceuticas pueden fabricarse de manera conocida, por ejemplo, mediante procesos de mezclado, granulacion, preparacion de comprimidos, recubrimiento con azucar o recubrimiento con pelfcula.
Las dispersiones lfquidas para administracion por via oral pueden ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones. Como ejemplo, los jarabes pueden contener como vehfculo sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.
Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de vehfculos, goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o alcohol polivimlico. Las suspensiones o disoluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehfculo farmaceuticamente aceptable, por ejemplo, agua esteril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de lidocama o clorhidrato de lidocama.
Las disoluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener agua esteril como vehmulo o, preferentemente, pueden estar en forma de disoluciones salinas isotonicas acuosas esteriles o pueden contener propilenglicol como vehmulo.
Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehmulo farmaceuticamente aceptable, por ejemplo, aceite de coco, polietilenglicol, un tensioactivo de ester de acido graso de polioxietileno y sorbitan o lecitina.
A continuacion se presentan los ejemplos siguientes con el fin de ilustrar mejor la presente invencion sin que ello suponga ninguna limitacion de la misma.
SECCION EXPERIMENTAL
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Para una referencia a cualquier compuesto espedfico de la formula (I) de la invencion, opcionalmente en forma de una sal farmaceuticamente aceptable, vease la seccion experimental y las reivindicaciones. En relacion a los ejemplos que siguen, los compuestos de la presente invencion se sintetizaron usando los metodos descritos en este documento u otros metodos bien conocidos en la tecnica.
Las formas abreviadas y abreviaturas usadas en este documento tienen el significado siguiente:
g (gramos ml (mililitros)
|jM (micromolar) h (horas) mm (miffmetros)
M (molar) mol (moles)
t. a. (temperatura ambiente)
TFA (acido trifluoroacetico)
DIPEA (W,A/-diisopropil-A/-etilamina)
THF (tetrahidrofurano)
MeoH (metanol)
EtOAc (acetato de etilo)
TBDMS (dimetil-terc-butilsililo)
Boc (terc-butiloxicarbonilo)
NaH (hidruro de sodio, al 60 % en aceite mineral) RP-HPLC (cromatograffa ffquida de alto rendimiento
mg (miligramos) mM (milimolar) mmol (milimoles)
MHz (megahercios)
Hz (hercios) min (minutos)
TLC (cromatograffa en capa fina) TEA (trietilamina)
DMF (W,A/-dimetilformamida) DCM (diclorometano)
Hex (hexano)
DMSO (Dimetilsulfoxido) s. a. (singlete ancho)
Ac (acetilo)
Ac2O (anddrido acetico)
ESI (ionizacion por electrospray) de fase inversa)
A continuacion se presentan los ejemplos siguientes con el fin de ilustrar mejor la presente invencion sin que ello suponga ninguna limitacion de la misma.
Segun se usa en este documento, los sfmbolos y convenciones usados en los procesos, esquemas y ejemplos son coherentes con los usados en la bibliograffa cienfffica actual, por ejemplo, el Journal of the American Chemical Society o el Journal of Biological Chemistry.
A menos que se indique lo contrario, todos los materiales se obtuvieron de proveedores comerciales, fueron de la mejor calidad y se usaron sin purificaciones adicionales. Los disolventes anhidros como DMF, THF, CH2Cl2 y tolueno se obtuvieron de la empresa Aldrich Chemical. Todas las reacciones con participacion de compuestos sensibles al aire o la humedad se llevaron a cabo en atmosferas de nitrogeno o de argon.
Metodos generales de purificacion y analiticos
La cromatograffa rapida se llevo a cabo en gel de sflice (Merck calidad 9395, 60 A). La HPLC se llevo a cabo en una columna XTerra RP 18 (4,6 x 50 mm, 3,5 jm) de Waters con un sistema de HPLC Waters 2790 equipado con un detector PDA 996 de Waters y un espectrometro de masas de cuadrupolo simple Micromass modelo ZQ equipado con una fuente de iones de electrospray (ESI). La fase movil A fue un tampon de acetato de amonio 5 mM (pH 5,5 con acido acetico-acetonitrilo 95:5) y la fase movil B fue agua-acetonitrilo (5:95). Gradiente del 10 al 90 % de B en ocho minutos, mantenido en el 90 % de B durante 2 minutos. Deteccion UV a 220 nm y 254 nm. Tasa de flujo de 1 ml/min. Volumen de inyeccion de 10 jl. Intervalo de masas de 100 a 800 uma, con barrido completo. Tension capilar de 2,5 kV; temperatura de la fuente de 120 °C; tension de cono de 10 V. Los tiempos de retencion (HPLC t.r.) se indican en minutos a 220 nm o a 254 nm. Las masas se indican como relacion m/z.
En caso necesario, los compuestos se purificaron por HPLC preparativa en una columna Symmetry C18 (19 x 50 mm, 5 jm) de Waters o en una columna XTerra RP 18 (30 x 50 mm, 5 jm) de Waters con un sistema de HPLC preparativa Waters 600 equipado con un detector PDA 996 de Waters y un espectrometro de masas de cuadrupolo simple Micromass modelo ZMD equipado con ionizacion por electrospray, en modo positivo. La fase movil A fue agua-acido trifluoroacetico al 0,01 % y la fase movil B fue acetonitrilo. Gradiente del 10 al 90 % de B en ocho minutos, mantenido en el 90 % de B durante 2 minutos. Tasa de flujo de 20 ml/min. Como alternativa, la fase movil A fue agua-NH3 al 0,1 % y la fase movil B fue acetonitrilo. Gradiente del 10 al 90 % de B en ocho minutos, mantenido en el 100 % de B durante 2 minutos. Tasa de flujo de 20 ml/min.
La espectrometna RMN 1H se llevo a cabo en un aparato Mercury VX 400 operado a 400,45 MHz y equipado con una sonda de resonancia doble de 5mm (1H(15N-31P) ID_PFG Varian).
Preparacion 1
Etapa a
Preparacion de 5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo
5
10
15
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30
35
40
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50
55
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65
Una disolucion de 5-fluoro-2-nitrobenzonitrilo (60 g, 354 mmol), (3,5-difluorofenil)metanol (52,14 ml, 460 mmol) y carbonato de cesio (155 g,460 mmol) en DMF anhidra (720 ml) se agito a 70 °C durante seis horas. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se vertio en agua (7 l) en agitacion. El precipitado asf obtenido se filtro, se lavo con agua y se seco al vado a 50 °C para dar 95 g (rendimiento del 92 %) del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,37 (s, 2H) 7,18-7,30 (m, 3H) 7,55 (dd, J = 9,27 y 2,80 Hz, 1H) 7,86 (d, J = 2,80 Hz, 1H) 8,39 (d, J = 9,27 Hz, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5-(benciloxi)-2-nitrobenzonitrilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,32 (s, 2H) 7,36-7,56 (m, 6H) 7,82 (d, J = 2,82 Hz, 1H) 8,35 (d, J = 9,31 Hz, 1H)
5-[(2,5-difluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,38 (s, 2H) 7,34 (m, 2H) 7,50 (m, 1H) 7,59 (dd, J =,9.33 y 2,87 Hz, 1H) 7,91 (d, J = 2,80 Hz, 1H) 8,40 (d, J = 9,27 Hz, 1H)
5-[(3-fluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 273 (MH+)
5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 325 (MH+)
5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-2-nitrobenzonitrilo ESI (+) MS m/z 305 (MH+)
2-nitro-5-[(3-fenoxibencil)oxi]benzonitrilo
ESI (+) MS m/z 347 (MH+)
Etapa b
Preparacion de 2-amino-5-[(3,5-difluorobencil)oxi]benzonitrilo
Una mezcla de 5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo (1 g, 3,44 mmol) y paladio al 5 % sobre carbono (150 mg) en 1,4 dioxano (20 ml) se trato en atmosfera de hidrogeno (40 psi o 0,28 MPa) a temperatura ambiente. Despues de cuatro horas, la mezcla se filtro a traves de una almohadilla de Celite y se evaporo a sequedad para dar 770 mg (rendimiento del 86 %) del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,03 (s, 2H) 5,63 (s, 2H) 6,77 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 7,04-7,06 (m, 1H) 7,077,12 (m, 1H) 7,11-7,15 (m, 2H) 7,16-7,22 (m, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
2-amino-5-(benciloxi)benzonitrilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 4,97 (s, 2H) 5,57 (s. a., 2H) 6,74 (d, J = 8,92 Hz, 1H) 7,03 (m, 2H) 7,30-7,40 (m, 5H)
2-amino-5-[(2,5-difluorobencil)oxi]benzonitrilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,03 (s, 2H) 5,65 (s, 2H) 6,76-6,79 (m, 1H) 7,08-7,12 (m, 2H) 7,22-7,27 (m, 1H) 7,28-7,34 (m, 1H) 7,35-7,41 (m, 1H)
2-amino-5-[(3-fluorobencil)oxi]benzonitrilo
ESI (+) MS m/z 243 (MH+)
2-amino-5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]benzonitrilo
5
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15
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50
55
60
65
ESI (+) MS m/z 295 (MH+)
2-amino-5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]benzonitrilo
ESI (+) MS m/z 275 (MH+)
2-amino-5-[(3-fenoxibencil)oxi]benzonitrilo
5 ESI (+) MS m/z 317 (MH+)
Etapa c
Preparacion de 2-amino-5-[(3,5-difluorobencil)oxi]benzonitrilo
Una disolucion de hidrosulfito de sodio al 85 % (38,1 g, 186 mmol) en agua (200 ml) se anadio gota a gota a una mezcla de 5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-2-nitrobenzonitrilo (9 g, 31 mmol) y cloruro de tetrabutilamonio (5,86 g, 21,1 mmol) en diclorometano (200 ml) con agitacion vigorosa. Despues de dos horas, la mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C y se le anadio NaOH 2 N (200 ml) para alcanzar un pH de 12. Se separo la fase organica y la fase acuosa se lavo con diclorometano. Se recogieron las fases organicas y se trataron durante tres horas con acido clorhndrico 4 M en dioxano (50 ml). La mezcla de reaccion se lavo con agua, una disolucion saturada de NaHCO3 y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo a sequedad para dar 7,6 g (rendimiento del 94 %) del compuesto del tttulo.
Etapa d
Preparacion de 5-[(3,5-difluorbencil)oxi]-1H-indazol-3-amma
Una disolucion de nitrito de sodio (13 g, 190 mmol) en agua (15 ml) se anadio gota a gota a una mezcla fna (0°C) de 2-amino-5-[(3,5-difluorobencil)oxi]benzonitrilo (42,9, 165 mmol) en acido clorhndrico al 37 % (340 ml). Despues de dos horas, la mezcla de reaccion resultante se anadio durante un periodo de una hora a una suspension fna preparada previamente de cloruro de estano(II) (250 g, 1,32 mol) en acido clorhndrico al 37 % (286 ml), tratando de mantener la temperatura por debajo de 10 °C. Despues de una hora, la mezcla de reaccion resultante se diluyo con agua (400 ml) y se le anadio NaOH al 35 % (735 ml) para obtener un pH de 9-10. La mezcla de reaccion se extrajo con EtOAc (1 l) y se lavo con EtOAc (2 x 0,5 l). Las fases organicas recogidas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El residuo crudo se purifico por cromatograffa en gel de sflice con diclorometano/NH3 7M en MeOH, 96:4, como eluyente para dar 34,7 g del compuesto del tttulo (rendimiento del 76 %).
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,11 (s, 2H) 5,14 (s, 2H) 6,95 (dd, J =8,90 y 2,44 Hz, 1H) 7,14-7,24 (m, 4H) 7,26 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 11,21 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5-(benciloxi)-1H-indazol-3-amma
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,04 (s, 2H) 5,15 (s, 2H) 7,01 (dd, J =8,93 y 2,36 Hz, 1H) 7,13 (dd, J = 8,92 y 0,65 Hz, 1H) 7,26-7,47 (m, 6H)
5-[(2,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-amma
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,11 (s, 2H) 5,14-5,28 (m, 2H) 7,01 (dd, J = 8,90, 2,44 Hz, 1H) 7,16-7,20 (m, 1H) 7,22-7,29 (m, 1H) 7,29-7,36 (m, 1H) 7,32 (d, J =1,83 Hz, 1H) 7,43 (ddd, J=8,87, 5,64 y 3,17 Hz, 1H) 11,23 (s. a., 1H)
5-[(3-fluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-amma
ESI (+) MS m/z 258 (MH+)
5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-amina
ESI (+) MS m/z 310 (MH+)
5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-amina
5
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40
45
50
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,55 (d, J = 6,46 Hz, 3H) 5,39 (c, J = 6,46 Hz, 1H) 6,96 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 7,05-7,19 (m, 5H) 11,22 (s. a., 1H)
5-[(3-fenoxybencN)oxi]-1H-indazol-3-amina
ESI (+) MS m/z 332 (MH+)
Preparacion 2 Etapa a
Preparacion de 5-(3,5-difluorofenoxi)-2-nitrobenzonitrilo
El compuesto 5-fluoro-2-nitrobenzonitrilo (5 g, 30,1 mmol) en DMF anhidra (60 ml) se trato primeramente con carbonato de cesio (11,77 g, 36,12 mmol) y despues con 3,5-difluorofenol. La reaccion se agito a temperatura ambiente durante una hora y despues se vertio en agua helada (600 ml). Despues de agitar durante dos horas, se filtro con succion un solido amarillo palido que se lavo con agua y despues se seco al vado a 50 °C para dar 7,73 g del compuesto del tttulo con un rendimiento del 93 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,05-7,13 (m, 2H) 7,22 (tt, J=9,39 y 2,32 Hz, 1H) 7,56 (dd, J = 9,27 y 2,80 Hz, 1H) 7,96 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 8,41 (d, J = 9,15 Hz, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
2-nitro-5-fenoxibenzonitrilo ESI (+) MS m/z 241 (MH+)
5-(3-fluorofenoxi)-2-nitrobenzonitrilo ESI (+) MS m/z 259 (MH+)
5-[4-(benciloxi)fenoxi]-2-nitrobenzonitrilo ESI (+) MS m/z 347 (MH+)
2-nitro-5-(4-fenoxifenoxi)benzonitrilo ESI (+) MS m/z 333 (MH+)
5-[3-(benciloxi)fenoxi]-2-nitrobenzonitrilo ESI (+) MS m/z 347 (MH+)
Etapa b
Preparacion de 2-amino-5-(3,5-difluorofenoxi)benzonitrilo
El compuesto 5-(3,5-difluorofenoxi)-2-nitrobenzonitrilo (7,65 g, 27,7 mmol) en dioxano (80 ml) se trato con Pd/C al 10 % (765 mg) y se hidrogeno a 45 psi (0,31 MPa). Despues de seis horas, la reaccion se filtro a traves de un embudo de Celite y se lavo con MeOH. Se evaporaron las sustancias volatiles. Despues de la purificacion en gel de sflice (eluyente hexano:EtOAc 7:3), se obtuvieron 4,82 g del compuesto del tftulo como un solido amarillo palido con un rendimiento del 71 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 6,07 (s, 2H) 6,57-6,66 (m, 2H) 6,85 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 6,91 (tt, J = 9,33, 2,32 Hz, 1H) 7,16 (dd, J =9,02 y 2,93 Hz, 1H) 7,27 (d, J = 2,80 Hz, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
2-amino-5-fenoxibenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 211 (MH+)
5-(3-fluorofenoxi)-2-aminobenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 229 (MH+)
5
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25
30
35
40
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55
60
5-[4-(benciloxi)fenoxi]-2-aminobenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 317 (MH+)
2-amino-5-(4-fenoxifenoxi)benzonitrilo ESI (+) MS m/z 303 (MH+)
5-[3-(benciloxi)fenoxi]-2-aminobenzonitrilo
ESI (+) MS m/z 317 (MH+)
Etapa c
Preparacion de 5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-rndazol-3-amina
El compuesto 2-amino-5-(3,5-difluorofenoxi)benzonitrilo (4,78 g, 19,45 mmol) se suspendio en acido clorhndrico al 36 % (45 ml), se enfrio en un bano de hielo y se trato gota a gota con nitrito de sodio (1,54 g, 22,37 mmol) en agua (2 ml). La mezcla de reaccion se agito a 4 °C durante tres horas y despues se anadio cuidadosamente a esta temperatura a cloruro de estano (29,51 g, 155,62 mmol) en acido clorhndrico al 36 % (45 ml) a 4 °C con agitacion. Despues de dos horas, se anadio hidroxido de sodio al 35 % (110 ml) con enfriamiento (pH final: 10). La mezcla gris se resuspendio en EtOAc (100 ml), se agito durante una hora y se filtro. A continuacion, el solido gris se lavo exhaustivamente con EtOAc fresco (400 ml). Se separo la fase organica que se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo para dejar 4,5 g de un solido amarillo palido. El solido se trato con 25 ml de hexano:EtOAc 7:3 y se calento a la temperatura de reflujo, se enfrio y se filtro para dar, despues de secarlo al vacfo a 50 °C, 3,17 g del compuesto del tttulo como un solido blanquecino con un rendimiento del 62 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,33 (s, 2H) 6,57-6,67 (m, 2H) 6,92 (tt, J = 9,33 y 2,32 Hz, 1H) 7,06 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,32 (dd, J = 8,84 y 0,55 Hz, 1H) 7,48 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 11,50 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5-fenoxi-1H-rndazol-3-amina
ESI (+) MS m/z 226 (MH+)
5-(3-fluorofenoxi)-1H-indazol-3-amma
ESI (+) MS m/z 244 (MH+)
5-[4-(benciloxi)fenoxi]-1H-mdazol-3-amma
ESI (+) MS m/z 332 (MH+)
5-(4-fenoxifenoxi)-1H-indazol-3-amma
ESI (+) MS m/z 318 (MH+)
5-[3-(benciloxi)fenoxi]-1H-mdazol-3-amma
ESI (+) MS m/z 332 (MH+)
Ejemplo 1
Etapa d
5
10
15
20
25
30
imagen16
El clorhidrato del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]benzoico (590 mg, 1,31 mmol) en DCM anhidro (10 ml) y en atmosfera de nitrogeno se enfrio en un bano de hielo y se trato primeramente con una gota de DMF y despues con cloruro de oxalilo (2,62 mmol, 0,228 mmol). Despues de agitar durante cuatro horas a temperatura ambiente, la disolucion se evaporo y el solido se seco al vado. El cloruro del acido crudo se disolvio en 20 ml de piridina anhidra, se enfrio en un bano de hielo y se trato gota a gota con 5-[(2,5- difluorobencil)oxi)-1H-indazol-3-amina (300 mg, 1,09 mmol) en 15 ml de piridina. La reaccion se dejo durante la noche a 4 °C. Las sustancias volatiles se evaporaron y el residuo se diluyo con agua (300 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 300 ml). Se recogieron las fases organicas, que se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El producto crudo se diluyo con MeOH (10 ml) y se calento a 80 °C en presencia de trietilamina (2,5 ml). Despues de tres horas, se evaporaron las sustancias volatiles y el residuo se disolvio en DCM (100 ml), se lavo con una disolucion saturada de NaHCO3, agua y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo al vado. El producto crudo se purifico por cromatograffa rapida en gel de silice (DCM/MeOH 92:8) para dar 470 mg (rendimiento del 75 %) del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,29-1,44 (m, 2H) 1,88-1,99 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,46 (s.a. 4H) 3,24-3,29 (m, 4H) 3,45-3,55 (m, 2H) 3,64-3,73 (m, 1H) 3,78-3,86 (m, 2H) 5,11 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 9,08 y 2,13 Hz, 1H) 7,09-7,14 (m, 2H) 7,21-7,27 (m, 1H) 7,27-7,34 (m, 1H) 7,42 (dd, J = 8,54 y 0,73 Hz, 1H) 7,407,45 (m, 1H) 7,80 (d, J =9,15 Hz, 1H) 8,28 (d, J =7,80 Hz, 1H) 10,06 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
W-[5-(bencMoxi)-1H-mdazol-3-M]-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 1)
imagen17
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,28 (s, 3H) 2,43-2,59 (m, 4H) 3,24-3,35 (m, 4H) 5,06 (s, 2H) 7,04 (d, J = 9,14 Hz, 2H) 7,11 (dd, J = 9,02 y 2,07 Hz, 1H) 7,18 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,31-7,36 (m, 1H) 7,37-7,43 (m, 3H) 7,467,50 (m, 2H) 7,98 (m, 2H) 10,35 (s. a.,1H) 12,60 (s, 1H)
imagen18
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,35 (s. a., 3H) 2,55-2,67 (m, 4H) 3,27-3,40 (m, 4H) 5,09 (s, 2H) 7,04 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 7,10-7,20 (m, 3H) 7,26-7,35 (m, 2H) 7,39-7,47 (m, 2H) 7,98 (d, J = 8,90 Hz, 2H) 10,36 (s, 1H) 12,62 (s, 5 1H)
W-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metMpiperazm-1-il)benzamida (cp. 4)
imagen19
10
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 3H) 2,44-2,48 (m, 4H) 3,30 (m, 4H) 5,14 (d, J = 1,46 Hz, 2H) 7,02 (d, J = 9,15 Hz, 2H) 7,06 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,24 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,34-7,43 (m, 1H) 7,39-7,45 (m, 1H) 7,57 (d, J = 4,76 Hz, 1H) 7,98 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,37 (s, 1H) 12,64 (s, 1H)
15 N-[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-il]-2-[(2-metoxietil)ammo]-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 3)
imagen20
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 3,26 (s, 3H) 3,55 (t, J = 5,30 Hz, 2H) 5,06 (s, 2H) 6,13 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 20 6,28 (dd, J = 8,96 y 2,13 Hz, 1H) 7,06-7,12 (m, 2H) 7,30-7,35 (m, 1H) 7,36-7,43 (m, 2H) 7,45-7,49 (m, 2H) 7,81 (d, J
= 9,02 Hz, 1H) 8,26 (t, J = 5,12 Hz, 1H) 10,07 (s, 1H) 12,57 (s, 1H)
5
10
15
20
25
imagen21
RMN 1H (400 MHz), 5 (ppm, DMSO-de): 2,23 (s, 3H) 2,40-2,47 (m, 4H) 3,25 (s, 3H) 3,25-3,31 (m, 6H) 3,53 (t, J =
5,30 Hz, 2H) 5,10 (s, 2H) 6,08 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 6,24 (dd, J = 9,02 y 2,19 Hz, 1H) 7,08 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,12 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,15-7,23 (m, 3H) 7,41 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,77 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,22 (t, J = 5,24 Hz, 1H) 10,02 (s, 1H) 12,58 (s, 1H)
W-{5-[(3-fluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-N}-4-(4-metNpiperazm-1-M)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo)benzamida (cp. 7)
imagen22
RMN 1H (400 MHz), 5 (ppm, DMSO-de): 1,29-1,42 (m, 2H) 1,90-1,97 (m, 2H) 2,23 (s, 3H) 2,42-2,46 (m, 4H) 3,25 (d, J = 5,24 Hz, 4H) 3,46-3,53 (m, 2H) 3,64-3,73 (m, 1H) 3,81 (ddd, J = 11,58, 3,90 y 3,78 Hz, 2H) 5,09 (s, 2H) 6,14 (d, 1H) 6,24 (dd, 1H) 7,07 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,09-7,12 (m, 1H) 7,12-7,16 (m, 1H) 7,27 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,30 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 7,39 (d, 1H) 7,41-7,45 (m, 1H) 7,79 (d, 1H) 8,28 (d, 1H) 10,04 (s, 1H) 12,57 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metMpiperazm-1-N)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo)benza- mida (cp. 8)
imagen23
RMN 1H (400 MHz), 5 (ppm, DMSO-de): 1,30-1,42 (m, 2H) 1,89-1,99 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,46 (s. a., 4H) 3,26 (s. a., 4H) 3,44-3,55 (m, 2H) 3,63-3,76 (m, 1H) 3,78-3,86 (m, 2H) 5,12 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 9,02, 2,19 Hz, 1H) 7,07 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,12-7,15 (m, 1H) 7,15-7,21 (m, 3H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,79 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,28 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,60 (s, 1H)
5
10
15
20
25
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,31-1,46 (m, 2H) 1,95 (dd, J = 13,66 y 2,80 Hz, 2H) 2,24 (s, 3H) 2,42-2,47 (m, 4H) 3,23-3,31 (m, 4H) 3,46-3,54 (m, 2H) 3,66-3,75 (m, 1H) 3,78-3,87 (m, 2H) 5,07 (s, 2H) 6,15 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 8,84 y 2,26 Hz, 1H) 7,07-7,12 (m, 2H) 7,29-7,35 (m, 1H) 7,36-7,42 (m, 3H) 7,45-7,49 (m, 2H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,31 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,04 (s, 1H) 12,57 (s, 1H)
4-(4-metilpiperazm-1-il)-W-{5-[(3-fenoxibencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}benzamida (cp. 39)
imagen25
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,27 (s, 3H) 2,52 (m, 4H) 3,35 (m, 4H) 5,07 (s, 2H) 6,96 (m, 1H) 7,03 (m, 4H) 7,11 (m, 4H) 7,25 (m, 1H) 7,40 (m, 4H) 7,96 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,34 (s, 1H) 12,61 (m, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-2-[(3-metoxipropil)ammo]-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp.
31)
imagen26
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,80 (q, J = 6,29 Hz, 2H) 2,23 (s, 3H) 2,42-2,47 (m, 4H) 3,15-3,21 (m, 2H) 3,22 (s, 3H) 3,25-3,29 (m, 4H) 3,42 (t, J = 6,29 Hz, 2H) 5,11 (s, 2H) 6,07 (d, J = 2,04 Hz, 1H) 6,24 (dd, J = 8,93 y 2,04 Hz, 1H) 7,09 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,13 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,15-7,23 (m, 3H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 8,93 Hz, 1H) 8,19 (t, J = 5,18 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,58 (s, 1H)
imagen27
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 3H) 2,46 (s. a., 4H) 3,26-3,34 (m, 4H) 5,12 (s, 2H) 6,79-6,85 (m, 1H) 6,84-6,88 (m, 1H) 7,14 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,16-7,20 (m, 1H) 7,21 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,21-7,25 (m, 2H) 5 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,68 (t, J = 8,84 Hz, 1H) 10,04 (d, J = 3,54 Hz, 1H) 12,63 (s, 1H)
4-{[2-({5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}carbamoM)-5-(4-metilpiperazm-1-il)feml]ammo}piperidm-1- carboxilato de etilo (cp.35)
10
imagen28
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,15 (t, J = 7,07 Hz, 3H) 1,22-1,33 (m, 2H) 1,89-1,97 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,42-2,49 (m, 4H) 3,09-3,19 (m, 2H) 3,26-3,31 (m, 4H) 3,66-3,72 (m, 1H) 3,72-3,81 (m, 2H) 4,01 (c, J = 7,07 Hz, 2H) 5,11 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,97 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 8,99 y 1,97 Hz, 1H) 7,06 (d, J = 2,42 Hz, 1H) 7,13 (dd, J = 9,02 y 15 2,42 Hz, 1H) 7,13-7,16 (m, 1H) 7,16-7,22 (m, 2H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 8,99 Hz, 1H) 8,29 (d, J = 7,93
Hz, 1H) 10,06 (s, 1H) 12,60 (s, 1H)
20
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-2-[(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)ammo]-4-(4-metilpiperazm-1-il) benzamida (cp. 34)
imagen29
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,31 (s, 6H) 2,25 (s, 3H) 2,44-2,49 (m, 4H) 3,22-3,26 (m, 4H) 3,27 (s, 3H) 25 3,36 (s, 2H) 5,12 (s, 2H) 6,28 (dd, J = 8,87 y 2,26 Hz, 1H) 6,31 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,10 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,14
(dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,16-7,23 (m, 3H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,75 (d, J = 8,87 Hz, 1H) 8,21 (s, 1H) 10,11 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
5
10
15
20
25
imagen30
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,28-1,42 (m, 2H) 1,89-1,96 (m, 2H) 2,24 (s, 3H) 2,46-2,50 (m, 4H) 3,033,08 (m, 4H) 3,41-3,49 (m, 2H) 3,51-3,63 (m, 1H) 3,77-3,87 (m, 2H) 5,08 (s, 2H) 6,81 (d, J = 9,27 Hz, 1H) 7,06-7,14 (m, 3H) 7,30-7,44 (m, 6H) 7,47 (d, J = 6,83 Hz, 2H) 10,53 (s, 1H) 12,65 (s, 1H)
W-{5-[1-(3,5-difluorofeml)etoxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo)ben- zamida (cp. 10)
imagen31
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,30-1,42 (m, 2H) 1,54 (d, J = 6,34 Hz, 3H) 1,91-1,98 (m, 2H) 2,27 (s. a., 3H) 2,44-2,50 (m, 4H) 3,24-3,31 (m, 4H) 3,46-3,54 (m, 2H) 3,63-3,74 (m, 1H) 3,83 (d, J = 10,73 Hz, 2H) 5,50 (c, J =
6,30 Hz, 1H) 6,15 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 6,24 (dd, J = 8,96 y 2,13 Hz, 1H) 7,01 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,04-7,12 (m, 2H)
7,12-7,17 (m, 2H) 7,37 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,77 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 8,27 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,01 (s, 1H) 12,55 (s, 1H)
Los enantiomeros individuales (cp. 16 y cp. 17) se obtuvieron por HPLC quiral preparativa con un sistema de columna Daicel Chiralpak AD 250 x 20 mm, 10 pm y hexano/etanol 30:70 como eluyente.
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-M}-2-[(2-fluoroetil)ammo]-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 36)
imagen32
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,23 (s, 3H) 2,44 (s. a., 4H) 3,28 (s. a., 4H) 3,42-3,54 (m, 2H) 4,52-4,66 (m, 2H) 5,10 (s, 2H) 6,12 (d, J = 2,12 Hz, 1H) 6,27 (dd, J = 8,98 y 2,12 Hz, 1H) 7,07 (d, J = 2,26 Hz, 1H) 7,12 (dd, J =
5
10
15
20
25
9,05 y 2,26 Hz, 1H) 7,15-7,22 (m, 3H) 7,41 (d, J = 9,05, 1H) 7,80 (d, J = 8,98 Hz, 1H) 8,38 (t, J = 5,49 Hz, 1H) 10,10 (s, 1H) 12,61 (s, 1H)
2-(bencilammo)-W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 37)
imagen33
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-cfe): 2,23 (s, 3H) 2,39-2,44 (m, 4H) 3,19-3,24 (m, 4H) 4,40 (d, J = 5,37 Hz, 2H) 5,10 (s, 2H) 6,09 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 6,26 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,09 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,10-7,17 (m, 1H) 7,17-7,21 (m, 3H) 7,21-7,26 (m, 1H) 7,29-7,35 (m, 2H) 7,36-7,40 (m, 2H) 7,41 (d, J = 9,27 Hz, 1H) 7,81 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,62 (t, J = 5,55 Hz, 1H) 10,09 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-2-{[(2R)-1-metoxipropan-2-il]ammo}-4-(4-metilpiperazm-1-il)ben- zamida (cp. 32)
imagen34
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-cfe): 1,14 (d, J = 6,46 Hz, 3H) 2,23 (s, 3H) 2,42-2,47 (m, 4H) 3,24-3,28 (m, 4H) 3,27 (s, 3H) 3,29-3,33 (m, 1H) 3,35-3,40 (m, 1H) 3,74-3,84 (m, 1H) 5,12 (s, 2H) 6,13 (d, J = 2,13 Hz, 1H) 6,24 (dd, J = 9,02 y 2,13 Hz, 1H) 7,08 (d, J = 2,29 Hz, 1H) 7,13 (dd, J = 8,99 y 2,29 Hz, 1H) 7,16-7,24 (m, 3H) 7,42 (d, J = 8,99 Hz, 1H) 7,77 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 8,19 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,01 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-M}-2-[(1,3-dimetoxipropan-2-il)ammo]-4-(4-metilpiperazm-1- il)benza-mida (cp. 38)
imagen35
5
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15
20
25
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,25 (s, 3H) 2,47 (m, 4H) 3,27-3,35 (m, 10H) 3,42 (d, J = 5,12 Hz, 4H) 3,793,90 (m, 1H) 5,11 (s, 2H) 6,19 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 6,26 (dd, J = 9,02 y 2,19 Hz, 1H) 7,08 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,14 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,16-7,22 (m, 3H) 7,43 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,77 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,31 (d, J = 8,05 Hz, 1H) 10,02 (s, 1H) 12,60 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-M}-3-[(2-metoxietil)(metM)ammo]benzamida (cp. 44)
imagen36
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 3,00 (s, 3H) 3,27 (s, 3H) 3,50-3,62 (m, 4H) 5,12 (s, 2H) 6,94 (m, 1H) 7,137,22 (m, 5H) 7,31 (m, 2H) 7,36 (s, 1H) 7,41-7,46 (m, 1H) 10,56 (s, 1H) 12,68 (s, 1H)
W-{5-[1-(3,5-difluorofeml)etoxi]-1H-mdazol-3-N}-4-(4-metilpiperazm-1-N)benzamida (cp. 45)
imagen37
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,54 (d, J = 6,34 Hz, 3H) 2,24 (s, 3H) 2,45-2,49 (m, 4H) 3,28-3,34 (m, 4H) 5,48 (c, J = 6,34 Hz, 1H) 7,02 (d, J = 9,15 Hz, 2H) 7,05-7,18 (m, 5H) 7,34-7,39 (m, 1H) 7,94 (d, J = 8,90 Hz, 2H)
10,30 (s, 1H) 12,57 (s, 1H)
W-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida (cp. 46)
imagen38
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,55 (d, J = 6,34 Hz, 3H) 2,26 (s, 3H) 2,47-2,53 (m, 4H) 3,21-3,28 (m, 4H) 5,49 (c, J = 6,10 Hz, 1H) 7,05-7,20 (m, 6H) 7,32-7,40 (m, 2H) 7,45 (d, J = 7,44 Hz, 1H) 7,60 (s, 1H) 10,55 (s, 1H) 12,63 (s, 1H)
5
10
15
20
25
imagen39
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,85 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,09-3,26 (m, 4H) 3,58 (s. a., 2H) 3,95-4,00 (m, 2H) 5,07 (s, 2H) 7,12 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,19-7,22 (m, 1H) 7,25-7,50 (m, 8H) 7,58 (d, J = 7,44 Hz, 1H) 7,68 (s, 1H) 10,66 (s, 1H) 12,69 (s. a.,1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 59)
imagen40
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,29-2,38 (m, 3H) 2,57 (d, J = 18,17 Hz, 4H) 3,22-3,35 (m, 4H) 5,12 (s, 2H)
7,12-7,27 (m, 6H) 7,37 (t, J = 7,93 Hz, 1H) 7,44 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 7,47-7,51 (m, 1H) 7,63 (s, 1H) 10,62 (s, 1H) 12,69 (s, 1H)
W-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 52)
imagen41
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,83 (m, 3H) 3,18 (m, 4H) 3,58 (m, 2H) 3,99 (m, 2H) 5,15 (d, J = 1,22 Hz, 2H) 7,09 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,20-7,33 (m, 3H) 7,37-7,46 (m, 2H) 7,55-7,61 (m, 2H) 7,69 (m, 1H) 10,68 (s, 1H) 12,76 (s, 1H)
imagen42
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-cfe): 2,85 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,10-3,29 (m, 4H) 3,48-3,56 (m, 2H) 4,04 (s, 3H) 5 4,11 (d, J = 11,83 Hz, 2H) 5,17 (d, J = 1,46 Hz, 2H) 6,71-6,77 (m, 2H) 7,08 (dd, J = 9,15 y 2,32 Hz, 1H) 7,36-7,44 (m,
3H) 7,58 (td, J = 8,99 y 4,82 Hz, 1H) 7,92 (d, 1H) 10,02 (s, 1H) 12,66 (s. a., 1H)
W-[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-il]-2-metoxi-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 57)
10
imagen43
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-cfe): 2,85 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,09-3,28 (m, 4H) 3,49-3,58 (m, 2H) 4,04 (s, 3H) 4,07-4,15 (m, 2H) 5,08 (s, 2H) 6,73 (s, 1H) 6,74-6,77 (m, 1H) 7,11 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,31-7,35 (m, 1H) 7,35-7,43 (m, 4H) 7,47-7,51 (m, 2H) 7,92 (d, J = 8,66 Hz, 1H) 10,00 (s, 1H) 12,61 (s. a., 1H)
15
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 56)
imagen44
20 RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 3H) 2,47 (s. a., 4H) 3,30 (m, 4H) 5,10 (s, 2H) 7,02 (d, J = 9,15 Hz, 2H) 7,12-7,22 (m, 5H) 7,42 (dd, J = 8,90 y 0,73 Hz, 1H) 7,96 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,35 (s, 1H) 12,61 (s, 1H)
imagen45
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,26 (s, 6H) 2,70 (t, J = 5,43 Hz, 2H) 4,16 (t, J = 5,73 Hz, 2H) 5,11 (s, 2H)
7,12-7,21 (m, 6H) 7,43 (m, 2H) 7,64 (m, 2H) 10,65 (s, 1H) 12,70 (s, 1H)
5
W-{5-[(2,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 68)
imagen46
10 RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,23 (s, 3H) 2,45 (t, J = 4,80 Hz, 4H) 3,30 (t, J = 4,70 Hz, 4H) 5,09 (s, 2H) 7,01 (d, J = 8,91 Hz, 2H) 7,10 (dd, J = 9,03 y 2,32 Hz, 1H) 7,20 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,24 (ddd, J = 9,03, 7,57 y 3,70 Hz, 1H) 7,30 (td, J = 9,09 y 4,58 Hz, 1H) 7,43 (ddd, J = 8,79, 5,74 y 3,17 Hz, 1H) 7,41 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 7,96 (d, J = 8,91 Hz, 2H) 10,35 (s, 1H) 12,61 (s, 1H)
15 N-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-[(1-metilpiperidm-4-il)oxi]benzamida (cp. 47)
imagen47
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,68 (s. a., 2H) 1,98 (s. a., 2H) 2,10-2,30 (m, 2H) 2,20 (s, 3H) 2,57-2,73 (m, 20 2H) 4,42-4,56 (m, 1H) 5,11 (s, 2H) 7,13-7,21 (m, 6H) 7,41 -7,45 (m, 2H) 7,62 (m, 2H) 10,63 (s, 1H) 12,70 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidm-4-il)oxi]benzamida (cp. 49)
5
10
15
20
25
imagen48
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,70 (m, 2H) 1,98 (m, 2H) 2,23 (d, J = 0,49 Hz, 3H) 2,28 (m, 2H) 2,67 (m, 2H) 4,53 (tt, J =7,70 y 3,50 Hz, 1H) 5,10 (s, 2H) 7,08 (d, J = 8,90 Hz, 2H) 7,11-7,23 (m, 5H) 7,42 (dd, J = 8,60 y 1,04 Hz, 1H) 8,03 (d, J = 8,78 Hz, 2H) 10,49 (s, 1H) 12,65 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 69)
imagen49
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 3H) 2,48 (t, J = 4,80 Hz, 4H) 3,24 (t, J = 4,80 Hz, 4H) 5,10 (s, 2H) 7,11 (dd, J = 8,97 y 2,38 Hz, 1H) 7,16 (dd, J = 8,36 y 2,01 Hz, 1H) 7,22 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,23- 7,28 (m, 1H) 7,30 (td, J = 9,03 y 4,64 Hz, 1H) 7,36 (t, J = 7,87 Hz, 1H) 7,42 (dd, J = 9,03 y 0,37 Hz, 1H) 7,44 (ddd, J = 8,90, 5,50 y 3,42 Hz, 1H) 7,47 (d, J = 7,20 Hz, 1H) 7,61 (s. a., 1H) 10,61 (s, 1H) 12,68 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-1-(1-metilpiperidm-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida (cp. 48)
imagen50
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,05 (m, 6H) 2,24 (s, 3H) 2,89 (d, J = 11,34 Hz, 2H) 4,20 (tt, J = 11,10 y 4,50 Hz, 1H) 5,09 (s, 2H) 7,13 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,16-7,22 (m, 4H) 7,41 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 8,10 (s, 1H) 8,45 (s, 1H) 10,33 (s, 1H) 12,63 (s, 1H)
4-(4-{[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]carbamoil}-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
imagen51
ESI (+) MS: m/z 517 (MH+)
5
4-(3-{[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-M]carbamoil}feml)piperazm-1-carboxilato de ferc-butilo
imagen52
10
ESI (+) MS: m/z 528 (MH+)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-{[3-(dimetilammo)propil](metil)ammo}benzamida (cp. 60)
15
imagen53
RMN 1H (400 MHz), 8 (ppm, DMSO-cfe): 1,67 (q, J = 6,95 Hz, 2H) 2,16 (s, 6H) 2,25 (t, J = 6,89 Hz, 2H) 2,98 (s, 3H) 3,44 (t, J = 7,19 Hz, 2H) 5,09 (s, 2H) 6,76 (d, J = 9,15 Hz, 2H) 7,10-7,22 (m, 5H) 7,41 (dd, 1H) 7,93 (d, J = 9,15 Hz, 2H) 10,23 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
imagen54
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,47 (s, 3H) 2,84 (s, 3H) 3,07-3,20 (m, 4H) 3,46-3,55 (m, 2H) 3,93-4,01 (m, 2H) 5,08 (s, 2H) 6,88-6,95 (m, 2H) 7,11 (dd, J = 8,96y2,38 Hz, 1H) 7,21 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,30-7,36 (m, 1H) 7,375 7,43 (m, 3H) 7,45-7,51 (m, 2H) 7,56 (d, J = 8,17 Hz, 1H) 10,29 (s, 1H) 12,56 (s, 1H)
W-{5-[(2-cloro-3,6-difluorobendl)oxi]-1H-mdazol-3-M}-2-metN-4-(4-metNpiperazm-1-M)benzamida (cp. 55)
imagen55
10 RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,48 (s, 3H) 2,84 (s, 3H) 3,07-3,21 (m, 4H) 3,44-3,55 (m, 2H) 3,97 (d, J = 9,76 Hz, 2H) 5,17 (d, J = 1,34 Hz, 2H) 6,88-6,96 (m, 2H) 7,08 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,28 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,36- 7,42 (m, 1H) 7,40-7,44 (m, 1H) 7,58 (td, J = 8,99 y 4,82 Hz, 2H) 10,32 (s, 1H) 12,61 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-4-(4-metNpiperazm-1-N)benzamida (cp. 75)
15
imagen56
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,26 (s, 3H) 2,49 (s, 4H) 3,31 (s, 4H) 6,64 (dd, J = 8,84 y 2,26 Hz, 2H) 6,93 (tt, J = 9,31 y 2,27 Hz, 1H) 7,01 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 7,20 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,48 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,58 20 (dd, 15 J = 8,90 y 0,49 Hz, 1H) 7,95 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,53 (s, 1H) 12,88 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-4-(4-metNpiperazm-1-N)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Nammo)benzamida (cp. 76)
5
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imagen57
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,23-1,40 (m, 2H) 1,91 (dd, J = 12,50 y 2,87 Hz, 2H) 2,27 (s. a., 3H) 2,422,56 (m, 4H) 3,24-3,34 (m, 4H) 3,43-3,52 (m, 2H) 3,66 (d, J = 11,95 Hz, 1H) 3,75-3,83 (m, 2H) 6,13 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 6,23 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 6,62-6,73 (m, 2H) 6,89-6,97 (m, 1H) 7,19 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,34 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,57 (dd, J = 8,90 y 0,61 Hz, 1H) 7,78 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,21 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,20 (s, 1H) 12,83 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-3-[(1-metMpiperidm-4-il)oxi]benzamida (cp. 77)
imagen58
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,58-1,74 (m, 2H) 1,88-2,01 (m, 2H) 2,10-2,28 (m, 2H) 2,18 (s, 3H) 2,572,66 (m, 2H) 4,48 (tt, J = 8,30 y 3,90 Hz, 1H) 6,58-6,68 (m, 2H) 6,92 (tt, J = 9,33 y 2,32 Hz, 1H) 7,16 (ddd, J = 8,20, 2,41 y 0,85 Hz, 1H) 7,20 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,41 (t, J = 8,17 Hz, 1H) 7,49 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,59 (dd, J = 8,90 y 0,49 Hz, 1H) 7,60 (m, 2H) 10,80 (s, 1H) 12,95 (s, 1H)
4-(4-metilpiperazm-1-il)-W-(5-fenoxi-1H-mdazol-3-il)benzamida (cp. 70)
imagen59
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,26 (s, 3H) 2,49 (m, 4H) 3,31 (m, 4H) 6,93-7,02 (m, 4H) 7,07 (tt, J = 7,44 y 1,10 Hz, 1H) 7,15 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,32-7,38 (m, 3H) 7,53 (td, J = 8,90 y 0,61 Hz, 1H) 7,93 (d, J = 8,90 Hz, 2H) 10,46 (s, 1H) 12,80 (s, 1H)
imagen60
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,25 (s, 3H) 2,52 (m, 4H) 3,34 (m, 4H) 6,65-6,80 (m, 2H) 6,90 (tdd, J = 8,66, 2,44 y 0,85 Hz, 1H) 7,01 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 7,18 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,34-7,42 (m, 2H) 7,56 (dd, J = 8,90 y 5 0,49 Hz, 1H) 7,94 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,50 (s, 1H) 12,84 (s, 1H)
W-{5-[4-(bencNoxi)fenoxi]-1H-mdazol-3-N}-4-(4-metNpiperazm-1-M)benzamida (cp. 72)
imagen61
10
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,26 (s, 3H) 2,50 (m, 4H) 3,32 (m, 4H) 5,07 (s, 2H) 6,91-6,96 (m, 2H) 6,987,02 (m, 4H) 7,12 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,20 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,30-7,52 (m, 6H) 7,93 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 10,41 (s, 1H) 12,75 (s, 1H)
15 4-(4-metilpiperazm-1-N)-W-[5-(4-fenoxifenoxi)-1H-mdazol-3-N]benzamida (cp. 73)
imagen62
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,27 (s, 3H) 2,52 (m, 4H) 3,34 (m, 4H) 6,95-7,05 (m, 8H) 7,10 (tt, J = 7,32 y 1,10 Hz, 1H) 7,17 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,30-7,38 (m, 3H) 7,52 (t, J = 9,02 Hz, 1H) 7,95 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 20 10,46 (s, 1H) 12,79 (s, 1H)
5
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imagen63
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,26 (s, 3H) 2,49 (m, 4H) 3,34 (m, 4H) 5,07 (s, 2H) 6,50 (ddd, J = 8,15, 2,32 y 0,61 Hz, 1H) 6,61 (t, J = 2,32 Hz, 1H) 6,72 (ddd, J = 8,29, 2,32 y 0,61 Hz, 1H) 7,01 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 7,14 (dd, J = 8,90 y 2,20 Hz, 1H) 7,24 (t, J = 8,17 Hz, 1H) 7,30-7,43 (m, 6H) 7,53 (d, J = 8,54,1H) 7,95 (d, J = 9,02, 2H) 10,47 (s, 1H) 12,80 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-4-[(1-metMpiperidm-4-N)oxi]benzamida (cp. 80)
imagen64
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,67 (s. a., 2H) 1,96 (s. a., 2H) 2,21 (s. a., 3H) 2,24 (s. a., 2H) 2,65 (s. a., 2H) 4,51 (tt, J = 7,90 y 3,50 Hz, 1H) 6,58-6,67 (m, 2H) 6,91 (tt, J = 9,31 y 2,33 Hz, 1H) 7,05 (d, J = 9,02 Hz, 2H) 7,19 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,47 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,57 (dd, J = 8,96 y 0,55 Hz, 1H) 8,01 (d, J = 8,90 Hz, 2H) 10,65 (s, 1H) 12,90 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-3-(4-metNpiperazm-1-N)benzamida (cp. 81)
imagen65
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,84 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,13 (m, 4H) 3,52 (d, J = 12,07 Hz, 2H) 3,96 (d, J =
12,07 Hz, 2H) 6,58-6,68 (m, 2H) 6,92 (tt, J = 9,30 y 2,35 Hz, 1H) 7,21 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,24 (dd, J = 8,54
y 2,32 Hz, 1H) 7,40 (t, J = 7,93 Hz, 1H) 7,50 (dd, J = 2,32 y 0,49 Hz, 1H) 7,54 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 7,59 (dd, J = 8,90
y 0,61 Hz, 1H) 7,64 (t, J = 2,01 Hz, 1H) 10,82 (s, 1H) 12,97 (s. a., 1H)
5
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imagen66
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,83 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,05-3,24 (m, 4H) 3,50 (t, J = 10,85 Hz, 2H) 3,95 (d, J = 11,22 Hz, 2H) 6,94 (dd, J = 8,66 y 0,98 Hz, 2H) 7,06 (tt, J = 7,36 y 0,99 Hz, 1H) 7,15 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 7,23 (dd, J = 8,11 y 2,01 Hz, 1H) 7,34 (m, 3H) 7,39 (t, J =7,93 Hz, 1H) 7,51 (d, 1H) 7,53-7,57 (m, 1H) 7,61-7,66 (m, 1H) 10,76 (s, 1H) 12,89 (s. a.,1H)
clorhidrato de 2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)-A/-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida (cp. 85)
imagen67
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,85 (d, J = 4,63 Hz, 3H) 3,02-3,26 (m, 4H) 3,47-3,55 (m, 2H) 4,01 (s, 3H) 4,04-4,13 (m, 2H) 6,67-6,74 (m, 2H) 6,96 (dd, J = 8,72 y 1,04 Hz, 2H) 7,07 (dt, J = 14,75 y 1,04 Hz, 1H) 7,15 (dd, J = 9,02 y 2,19 Hz, 1H) 7,36 (dd, J = 8,66 y 7,32 Hz, 2H) 7,51-7,55 (m, 2H) 7,85 (d, J = 8,66 Hz, 1H) 10,09 (s, 1H) 10,36 (s. a., 1H) 12,82 (s. a.,1H)
clorhidrato de W-[-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M)-2-metoxi-4-(4-metilpiperazm-1-il)benzamida (cp. 84)
imagen68
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,84 (d, J = 4,51 Hz, 3H) 3,06-3,24 (m, 4H) 3,51 (d, J = 10,97 Hz, 2H) 4,02 (s, 3H) 4,10 (d, J = 11,58 Hz, 2H) 6,59-6,68 (m, 2H) 6,70 (s, 1H) 6,72 (m, 1H) 6,92 (tt, J = 9,33 y 2,32 Hz, 1H) 7,19 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,56 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,66 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 7,87 (d, J = 8,54 Hz, 1H) 10,14 (s, 1H) 10,32 (s. a.,1H) 12,77-13,08 (m, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-3-[2-(dimetilammo)etoxi]benzamida (cp. 86)
imagen69
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 6H) 2,67 (t, J = 5,61 Hz, 2H) 4,14 (t, J = 5,79 Hz, 2H) 6,57-6,69 (m, 2H) 6,92 (tt, J = 9,34 y2,30 Hz, 1H) 7,15 (ddd, J = 8,26, 2,41 y 0,91 Hz, 1H) 7,20 (dd, J = 8,90 y2,32 Hz, 1H) 7,42 (t, 5 J = 8,17 Hz, 1H) 7,50 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,59 (dd, J = 8,90 y 0,49 Hz, 1H) 7,62 (m, 2H) 10,81 (s, 1H) 12,95 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-4-[2-(dimetNammo)etoxi]benzamida (cp. 93)
10
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 6H) 2,67 (t, J = 5,55 Hz, 2H) 4,14 (t, J = 5,80 Hz, 2H) 6,63 (dd, J =
8,79 y 2,20 Hz, 2H) 6,91 (tt, J = 9,28 y 2,26 Hz, 1H) 7,05 (d, J = 8,91 Hz, 2H) 7,19 (dd, J = 8,91 y 2,32 Hz, 1H) 7,48 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 8,91 Hz, 1H) 8,02 (d, J = 8,91 Hz, 2H) 10,66 (s, 1H) 12,91 (s, 1H)
15 W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-M]-1-(1-metNpiperidm-4-M)-1H-pirazol-4-carboxamida (cp. 79)
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imagen71
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,89-2,08 (m, 4H) 2,15 (s. a., 2H) 2,26 (s. a., 3H) 2,91 (d, J = 7,80 Hz, 2H) 20 4,19 (tt, J = 10,50 y 3,80 Hz, 1H) 6,58-6,67 (m, 2H) 6,92 (tt, J =9,31 y 2,27 Hz, 1H) 7,19 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H)
7,51 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,56 (dd, J =8,96 y 0,55 Hz, 1H) 8,09 (s, 1H) 8,45 (s, 1H) 10,51 (s, 1H) 12,88 (s, 1H)
5
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25
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imagen72
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,39 (s, 3H) 2,83 (s, 3H) 3,02-3,21 (m, 4H) 3,48 (m, 2H) 3,87-4,04 (m, 2H) 6,87 (dd, J = 8,78 y 2,20 Hz, 1H) 6,90 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 6,96 (dd, J = 8,66 y 0,98 Hz, 2H) 7,07 (t, J = 7,38 Hz, 1H) 7,14 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,35 (m, 3H) 7,52 (d, J = 8,54 Hz, 1H) 7,52 (dd, J = 8,90 y 0,61 Hz, 1H) 10,39 (s, 1H) 12,77 (s. a., 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida (cp. 82)
imagen73
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,42 (s, 3H) 2,82 (s, 3H) 3,03-3,20 (m, 4H) 3,43-3,53 (m, 2H) 3,88-4,03 (m, 2H) 6,61-6,70 (m, 2H) 6,90 (m, 2H) 6,93 (tt, J = 9,27, 2,32 Hz, 1H) 7,19 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 7,49 (d, J = 2,30 Hz, 1H) 7,54 (d, J = 9,00 Hz, 1H) 7,57 (dd, J = 9,02 y 0,49 Hz, 1H) 10,47 (s, 1H) 12,84 (s. a., 1H)
Ejemplo 2 Etapa d
N-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]ben-
zamida
El compuesto cloruro de 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]benzono (10,04 mmol) en piridina anhidra (100 ml) en atmosfera de nitrogeno y enfriado a 4 °C se trato con 5-benciloxi-1H-indazol-3- ilamina (2 g, 8,37 mmol) en piridina (35 ml) y se agito durante tres horas. La mezcla se concentro al vado. El residuo se anadio a agua helada (350 ml) y se extrajo con EtOAc (400 ml y 2 x 200 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. Despues de eliminar las sustancias volatiles, se obtuvo un solido marron que se resuspendio en Et2O (200 ml), se agito durante dos horas a temperatura ambiente, se filtro y se seco a 50 °C al vado para dar 4 g del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,24-1,40 (m, 1H) 1,57 (cd, J = 12,38 y 3,96 Hz, 1H) 1,72 (s. a., 1H) 1,95 (d, J = 12,56 Hz, 1H) 2,29 (s. a., 3H) 2,42-2,61 (m, 4H) 3,25-3,45 (m, 6 H) 3,75-3,92 (m, 2H) 4,40-4,54 (m, 1H) 5,02 (s, 2H) 6,91 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,07-7,13 (m, 3H) 7,30-7,37 (m, 1H) 7,37-7,43 (m, 3H) 7,45-7,49 (m, 2H) 7,86 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 10,54 (s, 1H) 12,62 (s, 1H)
Conversion 4, etapa 4A
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Preparacion de ester ferc-butflico del acido 5-benciloxi-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)- (2,2,2-trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazol-1-carboxflico
El compuesto A/-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-trifluoroacetil)
amino]benzamida (3,8 g, 5,97 mmol) en DMF anhidra (40 ml) se trato con DIPEA (4,1 ml, 23,88 mmol) y (Boc)2O (1,92 g, 8,79 mmol). Despues de tres dfas a temperatura ambiente, se anadio mas (Boc)2O (360 mg). Al dfa siguiente, la mezcla de reaccion se vertio en agua fna (600 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 300 ml). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo para dejar un aceite que se purifico por cromatograffa rapida en gel de sflice (eluyente: DCM:EtOH:NH4OH al 35 %, 95:5:0,5) para dar 2,64 g del compuesto del tftulo con un rendimiento del 60 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,22-1,33 (m, 1H) 1,51-1,60 (m, 1H) 1,61-1,63 (m, 1H) 1,64 (s, 9 H) 1,911,97 (m, 1H) 2,25 (s, 3H) 2,44-2,50 (m, 4H) 3,28-3,42 (m, 6H) 3,74-3,82 (m, 1H) 3,83-3,91 (m, 1H) 4,42-4,53 (m, 1H) 5,05 (s, 2H) 6,92 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,10 (dd, J = 9,02 y 2,56 Hz, 1H) 7,26 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,30-7,34 (m, 1H) 7,35-7,39 (m, 1H) 7,38-7,43 (m, 2H) 7,44-7,48 (m, 2H) 7,90 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 8,00 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 11,13 (s, 1H)
Conversion 4, etapa 4B
Preparacion de ester ferc-butflico del acido 5-hidroxi-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2- trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazoM-carboxflico
El ester ferc-butflico del acido 5-benciloxi-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-
trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazol-1-carboxflico (2,3 g, 3,13 mmol) en dioxano (46 ml) se trato con ciclohexeno (18 ml) y Pd/C al 10 % (1,6 g). La mezcla se agito a la temperatura de reflujo. Despues de una hora y media se filtro a traves de un embudo de Celite y se lavo con dioxano. La evaporacion del disolvente dejo un solido que se lavo con Et2O. Despues de un secado a 45 °C al vacfo, se obtuvieron 1,92 g del compuesto del tftulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,23-1,33 (m, 1H) 1,46-1,59 (m, 1H) 1,60-1,66 (m, 1H) 1,63 (s, 9H) 1,871,95 (m, 1H) 2,29 (s. a., 3H) 2,44-2,60 (m, 4H) 3,28-3,44 (m, 6H) 3,81 (dd, J = 11,58, 4,15 Hz, 1H) 3,88 (dd, J = 10,67 y 4,33 Hz, 1H) 4,38-4,53 (m, 1H) 6,90 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 6,97 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,07-7,11 (m, 1H) 7,097,12 (m, 1H) 7,84 (d, J =8,78 Hz, 1H) 7,90 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 9,64 (s, 1H) 11,01 (s, 1H)
Conversion 4, etapa 4C
Preparacion de ester ferc-butflico del acido 5-(2-cloro-5-fluorobenciloxi)-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2- [(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazoM-carboxflico
El compuesto trifenilfosfina (146 mg, 0,557 mmol) en DCM (2 ml), enfriado a 4 °C en una atmosfera de nitrogeno, se trato con azodicarboxilato de diisopropilo puro (0,106 ml, 0,5208 mmol) en agitacion. Despues de 20 minutos, la disolucion incolora se trato con el ester ferc-butflico del acido 5-hidroxi-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-
4- il)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazol-1-carboxflico (82 mg, 0,5108 mmol) en DCM (2 ml). Despues de dos horas, el producto crudo se purifico por cromatograffa rapida en gel de sflice (DCM:EtOH:NH4OH al 35 %, 95:5:0,5) y se obtuvieron 108 mg del compuesto del tftulo como un solido blanco con un rendimiento del 59 %.
ESI (+) MS: m/z 790 (MH+)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5- [(2-fluorobencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fenil}carbo- nil)amino]-1H-indazoM-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 755 (MH+)
5-[(4-fluorobencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fenil}carbo- nil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 755 (MH+)
5-[(2-metoxibencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fenil}car- bonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 767 (MH+)
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5-[(2,3-difluorobencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fenil} carbonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 773 (MH+)
5-[(3,4-difluorobencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fenil} carbonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 773 (MH+)
5-[(3-cloro-5-fluorobencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fe- nil}carbonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 790 (MH+)
5-[(5-fluoro-2-metilbencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fe- nil}carbonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 769 (MH+)
5-[(5-fluoro-3-metilbencil)oxi]-3-[({4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]fe- nil}carbonil)amino]-1H-indazol-1-carboxilato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 769 (MH+)
Conversion 4, etapa D
Preparacion de W-[5-(2-cloro-5-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4- ilamino]benzamida (cp. 19)
imagen74
El ester ferc-butilico del acido 5-(2-cloro-5-fluorobenciloxi)-3-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2- trifluoroacetil)amino]benzoilamino}indazol-1-carbox^lico (100 mg, 0,1269 mmol) en DCM (1,3 ml) se trato a temperatura ambiente con TFA (0,195 ml, 2,538 mmol). Despues de dos horas se evaporaron las sustancias volatiles y el residuo se trato con MeOH (3 ml) y TEA (0,357 ml, 2,538 mmol) y se calento a reflujo durante tres horas. Despues de la evaporacion de los componentes volatiles, el producto crudo se diluyo con dCm (25 ml), se lavo con agua, NaHCO3 acuoso, agua y finalmente salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se evaporo y se purifico por cromatograffa rapida en gel de silice (eluyente: DCM:NH3 7 N en MeOH, 93:7) para dar 40 g del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,29-1,42 (m, 2H) 1,90-1,98 (m, 2H) 2,24 (s, 3H) 2,43-2,48 (m, 4H) 3,25
3,29 (m, 4H) 3,45-3,54 (m, 2H) 3,64-3,74 (m, 1H) 3,82 (dt, J = 11,61 y 3,95 Hz, 2H) 5,13 (s, 2H) 6,14 (d, J = 1,83 Hz, 1H) 6,24 (dd, J = 8,96 y 2,13 Hz, 1H) 7,13-7,17 (m, 2H) 7,26 (td, J = 8,54 y 3,17 Hz, 1H) 7,43 (d, J = 9,51 Hz, 1H) 7,47-7,51 (m, 1H) 7,56 (dd, J = 8,84 y 5,06 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,31 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,07 (s, 1H) 12,60 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
W-{5-[(2-fluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)benzamida (cp. 14)
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,29-1,43 (m, 2H) 1,95 (dd, J = 13,78 y 2,44 Hz, 2H) 2,23 (s, 3H) 2,42-2,47 (m, 4H) 3,23-3,30 (m, 4H) 3,45-3,54 (m, 2H) 3,70 (m, 1H) 3,82 (dt, J = 11,65 y 3,87 Hz, 2H) 5,11 (s, 2H) 6,15 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 7,08 (dd, J = 8,96 y2,38 Hz, 1H) 7,13 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,21-7,27 (m, 2H) 7,39-7,45 (m, 2H) 7,58 (td, J = 7,65 y 1,65 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,30 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,58 (s, 1H)
W-{5-[(4-fluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-N}-4-(4-metNpiperazm-1-M)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Mammo)benzamida
(cp. 28)
imagen76
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,28-1,43 (m, 2H) 1,90-2,00 (m, 2H) 2,24 (s, 3H) 2,41-2,47 (m, 4H) 3,24
3,30 (m, 4H) 3,45-3,55 (m, 2H) 3,64-3,76 (m, 1H) 3,77-3,86 (m, 2H) 5,05 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,83 Hz, 1H) 6,25 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 7,07-7,11 (m, 2H) 7,21 (t, J = 8,78 Hz, 2H) 7,41 (d, J = 9,75 Hz, 1H) 7,52 (dd, J = 7,74 y 5,06 Hz, 2H)
7,80 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 8,30 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,57 (s, 1H)
W-{5-[(2-metoxibencN)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metMpiperazm-1-M)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Mammo)benzamida
(cp. 26)
imagen77
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,31-1,42 (m, 2H) 1,91-1,98 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,46 (s. a., 4H) 3,25-3,29 (m, 4H) 3,45-3,54 (m, 2H) 3,63-3,75 (m, 1H) 3,79 (s, 3H) 3,80-3,87 (m, 2H) 5,03 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,95 Hz, 1H)
6,25 (dd, J = 9,08 y 2,13 Hz, 1H) 6,96 (td, J = 7,44 y 0,85 Hz, 1H) 7,03 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 7,05-7,09 (m, 2H) 7,297,35 (m, 1H) 7,38-7,41 (m, 1H) 7,44 (dd, J = 7,50 y 1,65 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,30 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,55 (s, 1H)
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W-{5-[(2,3-difluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metMpiperazm-1-N)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Nammo)benza- mida (cp. 12)
imagen78
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,30-1,43 (m, 2H) 1,88-2,00 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,46 (s. a., 4H) 3,25-3,31 (m, 4H) 3,45-3,54 (m, 2H) 3,65-3,73 (m, 1H) 3,77-3,86 (m, 2H) 5,17 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,83 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 8,96 y 2,13 Hz, 1H) 7,09 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,14 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,19-7,28 (m, 1H) 7,36-7,47 (m, 3H)
7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,29 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,06 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
W-{5-[(3,4-difluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metMpiperazm-1-N)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Nammo)benza- mida (cp. 13)
imagen79
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,28-1,42 (m, 2H) 1,89-1,98 (m, 2H) 2,25 (s. a., 3H) 2,46 (s. a., 4H) 3,24
3,31 (m, 4H) 3,45-3,55 (m, 2H) 3,67 (s. a., 1H) 3,78-3,86 (m, 2H) 5,07 (s, 2H) 6,15 (d, J = 1,95 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 9,02 y 2,07 Hz, 1H) 7,08 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,09-7,13 (m, 1H) 7,29-7,36 (m, 1H) 7,40-7,43 (m, 1H) 7,40-7,48 (m, 1H) 7,54 (ddd, J = 11,52, 7,99 y 1,95 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,29 (d, J = 7,56 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
W-{5-[(3-cloro-5-fluorobencN)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metMpiperazm-1-N)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-Nammo) benzamida (cp. 22)
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25
30
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,31-1,42 (m, 2H) 1,89-1,98 (m, 2H) 2,26 (s. a., 3H) 2,47 (s. a., 4H) 3,253,30 (m, 4H) 3,46-3,54 (m, 2H) 3,64-3,74 (m, 1H) 3,78-3,85 (m, 2H) 5,12 (s, 2H) 6,15 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 6,25 (dd, J = 8,96 y 2,13 Hz, 1H) 7,07 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,14 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,30-7,34 (m, 1H) 7,35-7,40 (m, 1H) 7,40 (s, 1H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,28 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,60 (s, 1H)
W-{5-[(5-fluoro-2-metoxibencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo) benzamida (cp. 24)
imagen81
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,32-1,41 (m, 2H) 1,90-1,98 (m, 2H) 2,24 (s, 3H) 2,30 (s, 3H) 2,43-2,47 (m, 4H) 3,25-3,30 (m, 4H) 3,45-3,53 (m, 2H) 3,66-3,74 (m, 1H) 3,79-3,85 (m, 2H) 5,06 (s, 2H) 6,15 (d, J = 2,07 Hz, 1H)
6,25 (dd, J = 9,02 y 2,32 Hz, 1H) 7,06 (td, J = 8,57 y 2,87 Hz, 1H) 7,10-7,15 (m, 2H) 7,22-7,30 (m, 2H) 7,40-7,44 (m, 1H) 7,80 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,32 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 10,06 (s, 1H) 12,59 (s, 1H)
W-{5-[(3-fluoro-5-metilbencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(4-metilpiperazm-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo)ben- zamida (cp. 23)
imagen82
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,30-1,44 (m, 2H) 1,90-1,98 (m, 2H) 2,25 (s, 3H) 2,32 (s, 3H) 2,44-2,48 (m, 4H) 3,24-3,29 (m, 4H) 3,46-3,54 (m, 2H) 3,67-3,72 (m, 1H) 3,78-3,85 (m, 2H) 5,05 (s, 2H) 6,15 (d, J = 2,20 Hz, 1H)
6,25 (dd, J = 8,96 y 2,26 Hz, 1H) 6,95-6,99 (m, 1H) 7,05-7,09 (m, 1H) 7,07 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,09-7,12 (m, 1H) 7,12-7,13 (m, 1H) 7,41 (d, J = 9,27 Hz, 1H) 7,79 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 8,28 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 10,05 (s, 1H) 12,58 (s, 1H)
Ejemplo 3 Etapa d
Preparacion de W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-mdazol-3-il]-4-[(3-dimetilammopropil)metilammo]-2-mtroben- zamida (cp. 21)
5
10
15
20
25
30
imagen83
El clorhidrato del acido 4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-nitrobenzoico (500 mg, 1,57 mmol) en THF anhidro (15 ml) se trato con una gota de DMF y con SoCl2 puro (0,34 ml, 4,69 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 0,5 horas y se evaporo. El residuo se resuspendio en tolueno (10 ml) y se evaporo a sequedad para dar un solido amarillo que se suspendio en piridina anhidra (15 ml), se enfrio a 4 °C y se trato con 5-(3,5- difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-ilamina (360 mg, 1,31 mmol) en piridina (5 ml). La disolucion se dejo a 4 °C durante la noche y se evaporo. El residuo se disolvio en DCM (250 ml) y se lavo con una disolucion saturada de NaHCO3, agua y salmuera. Despues del secado sobre sulfato de sodio y la eliminacion del disolvente, el producto crudo se purifico en gel de silice (DCM:NH3 7 N en MeOH, 93:7) para dar 45 mg del compuesto del titulo como un solido amarillo amorfo (rendimiento del 64 %).
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,63-1,72 (m, 2H) 2,16 (s, 6H) 2,25 (t, J = 6,10 Hz, 2H) 3,02 (s, 3H) 3,453,51 (m, 2H) 5,11 (s, 2H) 6,99 (d, J = 9,27 Hz, 1H) 7,10-7,24 (m, 6H) 7,42 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,67 (d, J = 5,61 Hz, 1H) 10,70 (s. a., 1H) 12,64 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
W-[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-M]-4-(4-metilpiperazm-1-il)-2-mtrobenzamida (cp. 29)
imagen84
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,24 (s, 3H) 2,43-2,48 (m, 4H) 3,34-3,41 (m, 4H) 5,07 (s, 2H) 7,11 (dd, J = 9,02 y 2,19 Hz, 1H) 7,26 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,29 (s. a., 1H) 7,31-7,36 (m, 1H) 7,38-7,42 (m, 3H) 7,45 (s, 1H) 7,49 (d, J = 7,68 Hz, 2H) 7,71 (d, J = 4,88 Hz, 1H) 10,78 (s. a., 1H) 12,64 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-M}-4-(4-metilpiperazm-1-il)-2-mtrobenzamida (cp. 30)
imagen85
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,25 (s, 3H) 2,43-2,48 (m, 4H) 3,34-3,39 (m, 4H) 5,12 (s, 2H) 7,10-7,24 (m, 5H) 7,28 (d, J = 10,85 Hz, 1H) 7,42 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,45 (s. a., 1H) 7,70 (d, J = 5,85 Hz, 1H) 10,79 (s. a., 1H) 12,66 (s, 1H)
5 W-[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-il]-4-{[3-(dimetilammo)propil](metil)ammo}-2-mtrobenzamida (cp. 15)
imagen86
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,63-1,74 (m, 2H) 2,17 (s, 6H) 2,26 (t, J = 6,83 Hz, 2H) 3,02 (s, 3H) 3,48 (t, J 10 = 6,40 Hz, 2H) 5,07 (s, 2H) 6,99 (d, J = 8,17 Hz, 1H) 7,10 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,20 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 7,24
(d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,31-7,36 (m, 1H) 7,37-7,43 (m, 3H) 7,47-7,50 (m, 2H) 7,69 (d, J = 11,22 Hz, 1H) 10,69 (s. a., 1H) 12,62 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-mtrobenzamida (cp. 64)
15
imagen87
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,12 (s, 2H) 7,13-7,24 (m, 5H) 7,45 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 8,26-8,31 (m, 2H) 8,36-8,41 (m, 2H) 11,05 (s, 1H) 12,78 (s, 1H)
20
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-mtrobenzamida (cp. 65)
imagen88
25 RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,11 (s, 2H) 7,12-7,25 (m, 5H) 7,45 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 7,86 (t, J = 8,06 Hz, 1H) 8,47 (dd, J = 8,18 y 1,46 Hz, 1H) 8,50 (d, J = 7,69 Hz, 1H) 8,90 (s, 1H) 11,10 (s, 1H) 12,77 (s, 1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-mdazol-3-il]-3-mtrobenzamida (cp. 87)
imagen89
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 6,57-6,68 (m, 2H) 6,87-6,98 (m, 1H) 7,22 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 7,56 (s, 1H) 7,61 (d, J = 8,67 Hz, 1H) 7,80-7,88 (m, 1H) 8,42-8,50 (m, 2H) 8,87 (s, 1H) 11,25 (s, 1H) 13,03 (s, 1H)
10
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-nitrobenzamida (cp. 88)
imagen90
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 6,60-6,68 (m, 2H) 6,92 (tt, J = 9,34 y 2,32 Hz, 1H) 7,22 (dd, J = 8,97 y 2,26 Hz, 1H) 7,55 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,60 (d, J = 8,91 Hz, 1H) 8,26 (d, J = 8,54 Hz, 2H) 8,33-8,39 (m, 2H) 11,19 (s, 1H) 13,03 (s, 1H)
Conversion 1
Preparacion de 2-amino-W-[5-(3,5-difluorobencMoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropM)metilamino] benzamida (cp. 18)
15
imagen91
El compuesto W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-nitrobenzamida (424 mg, 0,79 mmol) en DCM (5 ml) se trato con nBu4NCl (149 mg, 0,54 mmol). Se anadio Na2S2O4 (969 mg, 4,73 mmol) 20 en agua (5 ml) gota a gota en agitacion. Despues de una hora se eliminaron las sustancias volatiles por evaporacion y el residuo se resuspendio dos veces en agua, se filtro y se trato con HCl 4 N en dioxano (12 ml). Los componentes volatiles se eliminaron por evaporacion. El solido se disolvio en DCM (100 ml) y se lavo con una solucion saturada de NaHCO3 y salmuera. Despues del secado sobre sulfato de sodio y la eliminacion del disolvente, el producto crudo se purifico en gel de silice (DCM:NH3 7 N en MeOH, 9:1) para dar 260 mg del compuesto del titulo con un 25 rendimiento del 65 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,59-1,71 (m, 2H) 2,17 (s, 6H) 2,25 (t, 2H) 2,91 (s, 3H) 3,30-3,39 (m, 2H) 5,11 (s, 2H) 5,95 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 6,05 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 6,54 (s, 2H) 7,10-7,14 (m, 2H) 7,14-7,19 (m, 1H) 7,19-7,24 (m, 2H) 7,38-7,43 (m, 1H) 7,70 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 9,88 (s, 1H) 12,53 (s, 1H)
30
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
2-amino-W-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-M]-4-{[3-(dimetilamino)propil](metil)amino}benzamida (cp. 27)
imagen92
5
10
15
20
25
30
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,62-1,73 (m, 2H) 2,18 (s, 6H) 2,28 (t, J = 6,71 Hz, 2H) 2,91 (s, 3H) 3,28 3,39 (m, 2H) 5,06 (s, 2H) 5,95 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 6,05 (dd, J = 9,08 y 2,50 Hz, 1H) 6,54 (s, 2H) 7,08 (dd, J = 8,96 y 2,38 Hz, 1H) 7,11-7,13 (m, 1H) 7,30-7,35 (m, 1H) 7,36-7,41 (m, 3H) 7,45-7,49 (m, 2H) 7,70 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 9,87 (s, 1H) 12,50 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencN)oxi]-1H-indazol-3-M}-4-aminobenzamida (cp. 94)
imagen93
ESI (+) MS: m/z 395 (MH+),
W-{5-[(3,5-difluorobencN)oxi]-1H-indazol-3-M}-3-aminobenzamida (cp. 95)
imagen94
ESI (+) MS: m/z 395 (MH+),
4-amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-N]benzamida (cp. 90)
imagen95
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,74 (s, 2H) 6,58 (d, J = 8,79 Hz, 2H) 6,62 (dd, J = 8,79 y 2,20 Hz, 2H) 6,91 (tt, J = 9,29 y 2,36 Hz, 1H) 7,18 (dd, J = 8,91 y 2,32 Hz, 1H) 7,45 (dd, J = 2,38 y 0,43 Hz, 1H) 7,55 (dd, J = 8,97 y 0,55 Hz, 1H) 7,77 (d, J = 8,67 Hz, 2H) 10,30 (s, 1H) 12,82 (s. a., 1H)
3-amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-N]benzamida (cp. 89)
imagen96
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 5,26 (s, 2H) 6,59-6,68 (m, 2H) 6,75 (ddd, J = 7,78, 2,17 y 1,28 Hz, 1H) 6,92 (tt, J = 9,29 y 2,30 Hz, 1H) 7,13 (t, J = 7,87 Hz, 1H) 7,19 (dd, J = 8,91 y 2,44 Hz, 2H) 7,20 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,45 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,57 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 10,54 (s, 1H) 12,89 (s, 1H)
Conversion 2
5
10
15
20
25
30
35
40
Preparacion de W-[2-({5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}carbamoil)-5-{[3-(dimetilamino)propil](metil) amino}fenil]-1H-pirrol-2-carboxamida (cp. 25)
imagen97
El compuesto 2-amino-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida (115 mg, 0,23 mmol) en piridina (2,2 ml) enfriado a 4 °C se trato con cloruro de 1H-pirrol-2-carbonilo solido (34 mg, 0,27 mmol). La reaccion se agito hasta que se clarifico y se dejo a temperatura ambiente durante la noche. Despues de eliminar las sustancias volatiles, el producto crudo se purifico en gel de sflice para dar 90 mg del compuesto del tttulo con un rendimiento del 66 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,70-1,81 (m, 2H) 2,24 (s. a., 6H) 2,31-2,42 (m, 2H) 3,03 (s, 3H) 3,47 (t, J = 7,01 Hz, 2H) 5,09 (s, 2H) 6,09 (dt, J = 3,63 y 2,39 Hz, 1H) 6,51 (dd, J = 9,08 y 2,62 Hz, 1H) 6,67 (dt, J = 3,66 y 1,83 Hz, 1H) 6,96 (td, J = 2,62 y 1,46 Hz, 1H) 7,07-7,20 (m, 5H) 7,44-7,49 (m, 1H) 8,01 (d, J = 9,27 Hz, 1H) 8,19 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 10,49 (s, 1H) 11,75 (s. a., 1H) 12,65 (s, 1H) 12,73 (s, 1H)
Conversion 3
Preparacion de N-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-
(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida (cp. 20)
imagen98
El compuesto 2-amino-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida (150 mg, 029 mmol) en DCM (4 ml) se trato a 4 °C en atmosfera de nitrogeno con tetrahidro-4H-piran-4-ona (0,34 ml, 0,37 mmol), TFA (0,23 ml, 2,95 mmol) y finalmente con triacetoxiborohidruro de tetrametilamonio (204 mg, 0,74 mmol). Despues de una hora y media, se anadio DCM (25 ml) y la fase organica se lavo con agua (25 ml), una disolucion saturada de NaHCO3 (25 ml) y salmuera. Despues del secado sobre sulfato de sodio anhidro, la eliminacion del disolvente y la purificacion del producto crudo en gel de silice (DCM:NH3 7N en MeOH, 9:1), se obtuvieron 80 mg del compuesto del tttulo con un rendimiento del 46 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,37 (m, J = 13,18, 9,75, 9,75 y 4,02 Hz, 2H) 1,67 (q, J = 6,95 Hz, 2H) 1,95 (dc, J = 13,34 y 2,95 Hz, 2H) 2,20 (s. a., 6 H) 2,30 (s. a., 2H) 2,95 (s, 3H) 3,39 (t, J = 7,13 Hz, 2H) 3,47 (ddd, J = 11,83, 9,94 y 2,26 Hz, 2H) 3,58-3,68 (m, 1H) 3,82 (dt, J = 11,61 y 3,83 Hz, 2H) 5,11 (s, 2H) 5,87 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 6,04 (dd, J = 9,08 y 2,26 Hz, 1H) 7,06 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,12 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,19 (m, 3H) 7,41 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,76 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 8,33 (d, J =7,56 Hz, 1H) 9,93 (s, 1H) 12,56 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5
10
15
20
25
imagen99
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): ppm 1,46 (c, J = 10,94 Hz, 2H) 1,95 (d, J = 13,67 Hz, 2H) 2,29 (s. a., 5H) 2,87 (s. a., 2H) 3,31 (m, 1H) 5,10 (s, 2H) 5,72 (d, J = 7,32 Hz, 1H) 6,80 (dt, J = 7,11 y 2,06 Hz, 1H) 7,10-7,25 (m, 8H) 7,43 (d, J = 9,64 Hz, 1H) 10,44 (s, 1H) 12,66 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidm-4-il)ammo]benzamida (cp. 67)
imagen100
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,43 (cd, J = 11,50 y 3,80 Hz, 2H) 1,90 (dd, J = 13,30 y 2,69 Hz, 2H) 2,03 (td, J = 11,47 y 2,08 Hz, 2H) 2,18 (s, 3H) 2,74 (dt, J = 11,78 y 3,14 Hz, 2H) 3,31 (m, 1H) 5,09 (s, 2H) 6,15 (d, J = 7,81 Hz, 1H) 6,63 (d, J = 8,79 Hz, 2H) 7,08-7,22 (m, 5H) 7,40 (dd, J = 8,79 y 0,61 Hz, 1H) 7,84 (d, J = 8,79 Hz, 2H) 10,16 (s, 1H) 12,57 (s,1H)
W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il}-3-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida (cp. 91)
imagen101
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,40 (cd, J = 11,70 y 3,50 Hz, 2H) 1,89 (d, J = 13,06 Hz, 2H) 2,02 (t, J = 12,33 Hz, 2H) 2,17 (s, 3H) 2,73 (dt, J = 11,66 y 3,75 Hz, 2H) 3,31 (m, 1H) 5,65 (d, J = 8,06 Hz, 1H) 6,57-6,69 (m, 2H) 6,77 (ddd, J = 5,58, 3,11 y 2,90 Hz, 1H) 6,92 (tt, J =9,32 y 2,27 Hz, 1H) 7,13-7,18 (m, 3H) 7,19 (dd, J = 8,91 y 2,32 Hz, 1H) 7,45 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 9,40 Hz, 1H) 10,60 (s, 1H) 12,91 (s, 1H)
5
10
15
20
25
30
imagen102
RMN 1H (400 MHz), 5 (ppm, DMSO-de): 1,51 (c, J = 11,00 Hz, 2H) 1,96 (d, J = 12,21 Hz, 2H) 2,39 (s. a., 5H) 2,97 (s. a., 2H) 3,39 (s. a., 1H) 6,24 (d, J = 7,81 Hz, 1H) 6,56-6,68 (m, 4H) 6,91 (tt, J =9,29 y 2,30 Hz, 1H) 7,18 (dd, J = 8,97, 2,38 Hz, 1H) 7,45 (d, J = 2,20 Hz, 1H) 7,56 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 7,83 (d, J = 8,79 Hz, 2H) 10,34 (s, 1H) 12,83 (s, 1H)
Ejemplo 4
Etapa d
Preparacion de 3-clorometil-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]benzamida (cp. 40)
imagen103
El compuesto 5-(3,5-diflurobenciloxi)-1H-indazol-3-ilamina (550 mg, 2 mmol) se disolvio en sym-colidina, se enfrio a 4 °C y se trato con cloruro de 3-clorometilbenzoilo puro (0,34 ml, 2,4 mmol). Despues de una hora, la mezcla de reaccion se anadio gota a gota sobre agua helada en agitacion y se produjo la separacion de un aceite amarillo. A continuacion se anadieron EtOAc (50 ml) y HCl 2 N (25 ml). La fase organica se separo, se lavo con NaHCO3 acuoso (50 ml) y salmuera, se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad. Despues de la purificacion en gel de silice (eluyente: DCM:MeOH, 95:5), se obtuvieron 378 mg del compuesto del tttulo como un solido blanquecino con un rendimiento del 56 %.
RMN 1H (400 MHz), 5 (ppm, DMSO-de): 4,88 (s, 2H) 5,12 (s, 2H) 7,14-7,17 (m, 1H) 7,18-7,25 (m, 4H) 7,45 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,57 (t, J = 7,68 Hz, 1H) 7,69 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 8,06 (d, J = 8,05 Hz, 1H) 8,14 (s, 1H) 10,75 (s, 1H) 12,72 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvo el compuesto siguiente:
4-clorometM-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-mdazol-3-N]benzamida (cp. 96)
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ESI (+) MS: m/z 428 (MH+).
Preparacion de N-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-mdazol-3-M]-3-pipendm-1-Mmetilbenzamida (cp. 41)
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El compuesto 3-clorometil-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]benzamida (100 mg, 02342 mmol) en etanol absoluto (2,5 ml) se trato con DIPEA (0,12 ml, 0,7026 mmol) y piperidina (0,069 ml, 0,7026 mmol) y se calento a la temperatura de reflujo. Despues de una hora, la mezcla de reaccion se diluyo con agua, se filtro con succion y se seco a 50 °C al vado. La purificacion por cromatograffa rapida en gel de s^lice (eluyente: DCM:MeOH:NH3 7N en MeOH, 95:5:0,5) dio 74 mg del compuesto del tttulo con un rendimiento del 66 %.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,34-1,45 (m, 2H) 1,51 (q, J = 5,40 Hz, 4H) 2,36 (s. a., 4H) 3,50 (s, 2H) 5,11 (s, 2H) 7,14 (dd, J = 8,90 y 2,32 Hz, 1H) 7,18-7,22 (m, 4H) 7,43 (dd, J = 8,90 y 0,49 Hz, 1H) 7,48 (t, J = 7,45 Hz, 1H) 7,53 (dt, J = 7,56 y 1,50 Hz, 1H) 7,95 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 7,96 (s, 1H) 10,65 (s, 1H) 12,69 (s, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-3-(pirrolidm-1-ilmetil)benzamida (cp. 43)
imagen106
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,64-1,80 (m, 4H) 2,47 (s. a., 4H) 3,66 (s, 2H) 5,11 (s, 2H) 7,14 (dd, J = 8,90 y 2,44 Hz, 1H) 7,17 (d, J = 2,40 Hz, 1H) 7,21 (m, 3H) 7,43 (dd, J = 8,90 y 0,49 Hz, 1H) 7,47 (t, J = 7,62 Hz, 1H) 7,54 (dt, J = 7,68 y 1,40 Hz, 1H) 7,95 (d, J = 7,68 Hz, 1H) 7,99 (s, 1H) 10,66 (s, 1H) 12,69 (s, 1H)
3-(azetidm-1-ilmetil)-W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}benzamida (cp. 42)
imagen107
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,00 (q, J = 6,95 Hz, 2H) 3,16 (t, J = 6,95 Hz, 4H) 3,60 (s, 2H) 5,11 (s, 2H) 7,14 (dd, J = 8,90 y 2,44 Hz, 1H) 7,17 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,21 (m, 3H) 7,44 (dd, J = 8,90 y 0,61 Hz, 1H) 7,46 (t, J = 7,30 Hz, 1H) 7,50 (dt, J = 7,40 y 1,70 Hz, 1H) 7,93 (dt, J = 7,56 y 1,71 Hz, 1H) 7,95 (d, J = 1,22 Hz, 1H) 10,65 (s, 1H) 12,69 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(piperidm-1-ilmetil)benzamida (cp. 61)
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,31-1,45 (m, 2H) 1,45-1,61 (m, 4H) 2,35 (s. a., 4H) 3,51 (s. a., 2H) 5,10 (s, 2H) 7,13-7,22 (m, 5H) 7,43 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 7,45 (d, J = 8,17 Hz, 2H) 8,02 (d, J = 7,93 Hz, 2H) 10,61 (s, 1H) 12,68 (s, 1H)
W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-mdazol-3-il}-4-(morfolm-4-ilmetil)benzamida (cp. 62)
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,39 (t, J = 5,00 Hz, 4H) 3,56 (s, 2H) 3,60 (t, J = 4,50 Hz, 4H) 5,10 (s, 2H) 7,12-7,22 (m, 5H) 7,43 (dd, 1H) 7,47 (d, J = 8,29 Hz, 2H) 8,03 (d, J = 8,17 Hz, 2H) 10,62 (s, 1H) 12,68 (s, 1H)
Ejemplo 5
Preparacion de clorhidrato de W-[5-(benciloxi)-1H-mdazol-3-il]-1-(piperidm-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida (cp. 51)
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A una disolucion de 4-(4-{[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]carbamoil}-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (100 mg, 0,19 mmol) en dioxano (4 ml) se le anadio HCl 4 M en dioxano (0,72 ml, 2,88 mmol). La mezcla se agito a temperature ambiente durante 18 horas. El disolvente se elimino a presion reducida y el producto crudo se diluyo con Et2O y se decanto para dar, despues de una filtracion, el compuesto final como sal clorhidrato (80 mg, 93 %).
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 2,15 (s. a., 2H) 2,25 (s. a., 2H) 3,03-3,17 (m, 2H) 3,38-3,46 (m, 2H) 4,544,63 (m, 1H) 5,06 (s, 2H) 7,11 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,23 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,31-7,36 (m, 1H) 7,37-7,43 (m, 3H) 7,46-7,50 (m, 2H) 8,16 (s, 1H) 8,49 (s, 1H) 8,67-8,81 (m, 1H) 8,94 (d, J = 8,17 Hz, 1H) 10,40 (s, 1H) 12,65 (s. a., 1H)
De manera analoga se obtuvo el compuesto siguiente:
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RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 3,27 (s. a., 4H) 3,46-3,52 (m, 4H) 5,06 (s, 2H) 7,12 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,20 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,25 (dd, J = 8,29 y 1,83 Hz, 1H) 7,31-7,36 (m, 1H) 7,37-7,41 (m, 2H) 7,44 (m, 2H) 7,46-7,50 (m, 2H) 7,58 (d, J = 7,56 Hz, 1H) 7,67 (s, 1H) 9,02 (s. a., 2H) 10,66 (s, 1H) 12,70 (s. a., 1H)
Preparacion 3
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-nitrobenzoico
Una disolucion de acido 4-fluoro-2-nitrobenzoico (10 g, 54 mmol), (Boc)2O (2 eq., 23,6 g, 108 mmol) y 4-(N,N- dimetilamino)piridina (0,3 eq., 1,98 g, 16,2 mmol) en ferc-butanol (100 ml) y diclorometano (100 ml) se agito a temperatura ambiente durante 20 horas. A continuacion, la mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo (500 ml), se lavo con HCl 1N (500 ml), agua (500 ml) y salmuera (500 ml), se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad. El compuesto del titulo se obtuvo (cuantitativamente) como un aceite amarillo palido que se uso en la etapa siguiente sin purificacion adicional.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 8,04 (dd, J = 8,47 y 2,50 Hz, 1H) 7,95 (dd, J = 8,66 y 5,37 Hz, 1H) 7,71 (ddd, J = 8,66, 8,17 y 2,56 Hz, 1H) 1,51 (s, 9H)
De manera analoga se obtuvo el compuesto siguiente:
5-fluoro-2-nitrobenzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,53 (s, 9H) 7,66 (m, 1H) 7,73 (dd, J = 8,29 y 2,80 Hz, 1H) 8,18 (dd, J = 9,15 y 4,76 Hz, 1H)
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitrobenzoico
Una disolucion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-nitrobenzoico (13 g, 54 mmol) y N-metilpiperazina (17 ml) se agito a temperatura ambiente durante seis horas. Despues, la mezcla de reaccion se diluyo con agua (800 ml) y se mantuvo con agitacion magnetica durante 20 horas. El solido resultante se filtro, se lavo exhaustivamente con agua y se seco al vacfo a 40 °C. El compuesto del titulo se obtuvo como un solido amarillo (16,4 g, rendimiento del 94 %)
y se uso en la etapa siguiente sin purificacion adicional.
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,69 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,29 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 7,15 (dd, J1 = 8,90 Hz, J2 = 2,56 Hz, 1H) 3,37 (m, 4H) 2,44 (m, 4H), 1,46 (s, 9H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
5-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitrobenzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,52 (s, 9H) 2,22 (s, 3H) 2,39-2,44 (m, 4H) 3,43-3,49 (m, 4H) 6,96 (d, J =
2,93 Hz, 1H) 7,05 (dd, J = 9,46 y 2,87 Hz, 1H) 7,96 (d, J = 9,40 Hz, 1H)
ester ferc-butilico del acido 4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-nitrobenzoico
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 1H) 7,02 (d, J = 2,6 Hz, 1H) 6,90 (dd, J1 = 9,0 Hz, J2 =
2,6 Hz, 1H) 3,46 (m, 2H) 3,00 (s, 3H) 2,22 (m, 2H) 2,14 (s, 6H) 1,65 (m, 2H) 1,45 (s, 9H)
4-{[3-(dimetilamino)propil](metil)amino}benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,51 (s, 9H) 1,65 (q, J = 7,04 Hz, 2H) 2,15 (s, 6H) 2,24 (t, J = 6,77 Hz, 2H) 2,96 (s, 3H) 3,42 (t, J = 7,19 Hz, 2H) 6,64-6,75 (m, 2H) 7,65-7,74 (m, 2H)
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 2-amino-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
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Una mezcla de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitrobenzoico (13,3 g, 41,5 mmol), ciclohexeno (45 ml), etanol (300 ml) y Pd/C al 10 % (0,4 g) se agito a 80 °C durante siete horas. Se anadio mas Pd/C al 10 % (0,9 g) y la mezcla se agito a 80 °C durante cuatro horas mas. La mezcla de reaccion se filtro a traves de una almohadilla de Celite, lavando exhaustivamente con etanol y el filtrado se evaporo a sequedad para dar el compuesto del titulo como un solido amarillo palido (11,5 g, rendimiento del 95 %).
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,47 (d, J = 9,0Hz, 1H), 6,40 (s. a., 2H) 6,18 (dd, J1 = 9,0 Hz, J2 = 2,4Hz, 1H) 6,11 (d, J = 2,4Hz, 1H) 3,16 (m, 4H) 2,41 (m, 4H) 2,21 (s, 3H) 1,49 (s, 9H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
2-amino-5-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 1,53 (s, 9H) 2,20 (s, 3H) 2,40-2,46 (m, 4H) 2,84-2,95 (m, 4H) 6,13 (s, 2H) 6,68 (d, J = 9,03 Hz, 1H) 7,04 (dd, J = 8,97 y 2,99 Hz, 1H) 7,15 (d, J = 2,93 Hz, 1H)
ester ferc-butilico del acido 2-amino-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzoico
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,45 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,36 (s. a., 2H) 5,99 (dd, J1 = 9,0 Hz, J2 = 2,6 Hz, 1H) 5,86 (d, J = 2,6 Hz, 1H) 3,31 (m, 2H) 2,87 (s, 3H) 2,22 (m, 2H) 2,15 (s, 6H) 1,62 (m, 2H) 1,48 (s, 9H),
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzoico
A una disolucion de ester ferc-butilico del acido 2-amino-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico (11,5 g, 39,5 mmol) en diclorometano (340 ml) se le anadieron tetrahidropiran-4-ona (4,5 ml, 49,3 mmol), acido trifluoroacetico (8,2 ml) y triacetoxiborohidruro de tetrametilamonio (15,57 g, 59,2 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante dos horas y despues se lavo con acido clorltidrico 0,5 N, con NaOH 0,5 N y con una disolucion saturada de NaHCO3. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad para dar el compuesto del titulo como un solido amarillo palido (13,3 g, rendimiento del 90 %).
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,72 (d, J = 7,7 Hz, 1H) 7,58 (d, J = 9,1 Hz, 1H) 6,20 (dd, J1 = 9,1 Hz, J2 =
2,2 Hz, 1H) 6,08 (d, J = 2,2 Hz, 1H) 3,85 (m, 2H), 3,70 (m, 1H) 3,50 (m, 2H) 3,27 (m, 4H) 2,47 (m, 4H) 2,26 (t. a., 3H) 1,96 (m, 2H) 1,51 (s, 9H) 1,39 (m, 2H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
ester ferc-butilico del acido 4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzoico
RMN 1H (400 MHz), 6 (ppm, DMSO-de): 7,70 (d. a., J = 7,4 Hz, 1H) 7,54 (d, J = 9,0 Hz, 1H) 5,99 (dd, J1 = 9,0 Hz, J2 = 2,3 Hz, 1H) 5,79 (d, J = 2,3 Hz, 1H) 3,86 (m, 2H) 3,62 (m, 1H) 3,47 (m, 2H) 3,36 (m, 2H) 2,93 (s, 3H) 2,28 (m, 2H) 2,18 (s. a., 6 H) 1,97 (m, 2H) 1,64 (m, 2H) 1,49 (s, 9H) 1,39 (m, 2H)
2-(ciclohexilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 374 (MH+)
2-[(1,3-dimetoxipropan-2-il)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 394 (MH+)
2-(bencilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 382 (MH+),
5-(4-metilpiperazm-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilammo)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 376 (MH+),
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2- trifluoroacetil)amino]benzoico
A una disolucion de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzoico (13,3 g, 35,4 mmol) en diclorometano anhidro (350 ml) en atmosfera de argon a 0 °C se anadieron trietilamina (7,5 ml, 53,1 mmol) y anhtidrido trifluoroacetico (6,5 ml, 46,1 mmol). La mezcla se agito a 0 °C durante 20 minutos y despues se le anadio agua (350 ml) gota a gota. Las fases se separaron y la fase organica se lavo con salmuera, se seco
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sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad. El residuo crudo se purifico por cromatogratia en gel de s^lice con diclorometano/etanol 95:5 como eluyente para dar 12,1 g del compuesto del titulo como un solido amarillo palido (rendimiento del 73 %).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,83 (d, J = 9,0Hz, 1H) 7,06 (dd, J1 = 9,0 Hz, J2 = 2,5 Hz, 1H) 6,82 (J = 2,5 Hz, 1H) 4,48 (m, 1H) 3,85 (m, 2H) 3,5-3,3 (m, 6 H) 2,49 (m, 4H) 2,26 (s. a., 3H) 2,0 (m, 1H) 1,59 (m, 1H) 1,51 (m, 1H) 1,46 (s, 9H) 1,03 (m, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
ester ferc-butilico del acido 4-[(3-dimetilammopropil)metilammo]-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-
trifluoroacetil)amino]benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,79 (d, J = 9,1 Hz, 1H) 6,79 (dd, J1 = 9,1 Hz, J2 = 2,6 Hz, 1H) 6,52 (d, J =
2,6 Hz, 1H) 4,48 (m, 1H) 3,87 (m, 1H) 3,79 (m, 1H) 3,51-3,32 (m, 4H) 2,98 (s, 3H) 2,22 (m, 2H) 2,12 (s, 6 H) 1,99 (m, 1H) 1,70-1,46 (m, 4H) 1,44 (s, 9H) 1,03 (m, 1H)
2-[ciclohexil(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 470 (MH+)
2-[(1,3-dimetoxipropan-2-il)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 490 (MH+)
2-[bencil(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
ESI (+) MS: m/z 478 (MH+)
5-(4-metilpiperazm-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)ammo]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 0,91-1,03 (m, 1H) 1,43-1,53 (m, 1H) 1,48 (s, 9H) 1,90-1,97 (m, 1H) 2,24 (s, 3H) 2,43-2,49 (m, 4H) 3,26 (dd, J = 5,73 y 4,27 Hz, 4H) 3,33-3,46 (m, 2H) 3,80 (dd, J = 11,16 y 3,96 Hz, 1H) 3,833,90 (m, 1H) 4,43-4,53 (m, 1H) 7,16-7,19 (m, 1H) 7,20-7,23 (m, 1H) 7,39 (d, J = 2,07 Hz, 1H)
Preparacion de trifluoroacetato del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2- trifluoroacetil)amino]benzoico
Una mezcla de ester ferc-butilico del acido 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2-
trifluoroacetil)amino]benzoico (12,1 g, 25,7 mmol), acido trifluoroacetico (48,5 ml) y diclorometano (195 ml) se agito a temperatura ambiente durante dos horas. Despues se evaporaron las sustancias volatiles, el residuo se resuspendio en eter dietilico y se evaporo de nuevo. El procedimiento se repitio cinco veces y despues el solido se trituro en eter dietilico, se filtro y se seco en un horno a 40 °C para dar el compuesto del titulo como solido marron palido (13,4 g).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 12,78 (s. a., 1H) 9,74 (s. a., 1H) 7,93 (d, J = 8,8 Hz, 1H) 7,13 (dd, J1 = 8,8 Hz, J2 = 2,5 Hz, 1H) 6,98 (d, J = 2,5 Hz, 1H) 4,49 (m, 1H) 4,11 (m, 2H) 3,84 (m, 2H) 3,6-3,0 (m, 8H) 2,89 (s, 3H) 1,98 35 (m, 1H) 1,59 (m, 1H) 1,53 (m, 1H) 1,08 (m, 1H)
De manera analoga se obtuvieron los compuestos siguientes:
trifluoroacetato del acido 4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-[(tetrahidropiran-4-il)-(2,2,2- trifluoroacetil)amino]benzoico
ESI (+) MS: m/z 432 (MH+),
clorhidrato del acido 2-[ciclohexil(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
ESI (+) MS: m/z 414 (MH+),
cloridrato del acido 2-[(1,3-dimetoxipropan-2-il)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
ESI (+) MS: m/z 434 (MH+),
clorhidrato del acido 2-[bencil(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
ESI (+) MS: m/z 422 (MH+),
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trifluoroacetato del acido 5-(4-metilpiperazin-1-il)-2-[tetrahidro-2H-piran-4-il(trifluoroacetil)amino]benzoico
ESI (+) MS: m/z 416 (MH+),
clorhidrato del acido 4-{[3-(dimetilamino)propil](metil)amino}benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,86-1,96 (m, 2H) 2,75 (s, 3H) 2,76 (s, 3H) 2,99 (s, 3H) 3,03-3,13 (m, 2H) 3,47 (s. a., 2H) 6,73-6,78 (m, 2H) 7,73-7,78 (m, 2H) 9,92 (s. a., 1H)
Preparacion 4
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 2,4-difluorobenzoico
A una disolucion de acido 2,4-difluorobenzoico (5 g, 31,62 mmol) en una mezcla de diclorometano (100 ml) y f-BuOH (50 ml) se le anadieron (Boc)2O (13,8 g, 63,24 mmol) y W,A/-dimetilaminopiridina (1,16 g, 9,49 mmol). La disolucion se agito a temperatura ambiente durante 24 horas y despues se diluyo con diclorometano y se lavo dos veces con HCl 1 N, una disolucion saturada de NaHCO3, agua (tres veces) y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para dar el compuesto del titulo (5,70 g, 84 %) como un aceite amarillento.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,91 (m, 1H) 7,36 (m, 1H) 7,20 (m, 1H) 1,53 (s, 9H)
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-((R)-2-metoxM-metiletilamino)benzoico
Una mezcla de ester ferc-butilico del acido 2,4-difluorobenzoico (30 g, 140,05 mmol) y (R)-2-metoxi-1-metiletilamina (100 ml) se agito a 65 °C durante dos dfas. Se le anadio una disolucion saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con diclorometano (tres veces). La fase organica se lavo dos veces con agua y despues con salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo a sequedad para obtener un producto crudo que se purifico por cromatogratia en columna de gel de sflice (hexano/acetato de etilo, 9:1). El compuesto del titulo (33,38 g, 84 %) se obtuvo como aceite.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,87 (d, J = 7,80 Hz, 1H) 7,80 (t, J = 7,19 Hz, 1H) 6,60 (dd, J1 = 13,05 Hz, J2 = 2,44 Hz, 1H) 6,36 (m, 1H) 3,80 (m, 1H) 3,40 (d, J = 4,76 Hz, 2H) 3,30 (s, 3H) 1,53 (s, 9H) 1,17 (d, J = 6,58 Hz, 3H)
De manera analoga a la descrita anteriormente se obtuvieron los compuestos siguientes:
ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-(2-metoxietilamino)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,89 (t, J = 5,00 Hz, 1H) 7,80 (t, J = 7,07 Hz, 1H) 6,56 (dd, J1 = 12,80 Hz, J2 = 2,56 Hz, 1H) 6,37 (m, 1H) 3,55 (t, J = 5,37 Hz, 2H) 3,33 (m, 2H) 3,29 (s, 3H) 1,53 (s, 9H)
4-fluoro-2-[(3-metoxipropil)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,51-1,53 (m, 9H) 1,76-1,85 (m, 2H) 3,18-3,23 (m, 2H) 3,25 (s, 3H) 3,38-3,44 (m, 2H) 6,32-6,39 (m, 1H) 6,49 (dd, J = 12,80 y 2,44 Hz, 1H) 7,79 (dd, J = 8,90 y 7,07 Hz, 1H) 7,88 (s. a., 1H)
4-fluoro-2-[(2-fluoroetil)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,54 (s, 9H) 3,50 (dd, J = 27,00 y 5,00 Hz, 2H) 4,63 (dt, J = 47,56 y 4,88 Hz, 2H) 6,41 (td, J = 8,57 y 2,50 Hz, 1H) 6,62 (dd, J = 12,62 y 2,38 Hz, 1H) 7,82 (dd, J = 8,90 y 7,07 Hz, 1H) 8,05 (t, J = 4,82 Hz, 1H)
4-fluoro-2-[(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,34 (s, 6H) 1,53 (s, 9H) 3,33 (s. a., 3H) 3,40 (s, 2H) 6,31-6,39 (m, 1H) 6,67 (dd, J = 13,29 y 2,44 Hz, 1H) 7,82 (dd, J = 8,84 y 7,38 Hz, 1H) 8,22 (s, 1H)
Preparacion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-[((R)-2-metoxi-1-metiletil)-(2,2,2-
trifluoroacetil)amino]benzoico
Una disolucion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-((R)-2-metoxi-1-metiletilamino)benzoico (1,54 g, 5,44 mmol) en diclorometano (30 ml) se enfrio a 0-5 °C. Se le anadieron trietilamina (1,11 ml, 8,16 mmol) y anltidrido trifluoroacetico (1,15 ml, 8,16 mmol). Despues de tres horas a 0-5 °C, la mezcla se lavo con una disolucion saturada de NaHCO3, agua y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para dar el compuesto del titulo como un aceite amarillento (2 g, 99 %).
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RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): (mezcla de tautomeros) 8,07 (m, 1H) 7,53 (m, 1H) 7,29 (dd, J1 = 9,39 Hz, J2 = 2,68 Hz, 1H) 4,83 (m, 1H) 3,44 (m, 1H) 3,30 (s, 3H) 1,49 (s, 9H) 0,86 (d, 3H)
De manera analoga a la descrita anteriormente se obtuvieron los compuestos siguientes:
ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-[(2-metoxietil)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 8,07 (m, 1H) 7,50 (m, 1H) 7,41 (dd, J1 = 9,39 Hz, J2 = 2,56 Hz, 1H) 4,28 (m, 1H) 3,55 (m, 1H) 3,46 (m, 1H) 3,38 (m, 1H) 3,18 (s, 3H) 1,49 (s, 9H)
4-fluoro-2-[(3-metoxipropil)(trifluoroacetil)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,48 (s, 9H) 1,68-1,83 (m, 2H) 3,18 (s, 3H) 3,21-3,29 (m, 1H) 3,33-3,38 (m, 2H) 4,06-4,18 (m, 1H) 7,46-7,52 (m, 1H) 7,56 (dd, J = 9,27, 2,68 Hz, 1H) 8,06 (dd, J = 8,84, 6,40 Hz, 1H)
4-fluoro-2-[(2-fluoroetil)(trifluoroacetil)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,50 (s, 9H) 3,54-3,74 (m, 1H) 4,26-4,45 (m, 1H) 4,50-4,80 (m, 2H) 7,47-7,55 (m, 2H) 8,08 (dd, J = 9,27, 6,46 Hz, 1H)
4-fluoro-2-[(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)(trifluoroacetil)amino]benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,09 (s, 3H) 1,47 (s, 3H) 1,52 (s, 9H) 3,17 (s, 3H) 3,19 (d, J = 9,75 Hz, 1H) 3,80 (d, J = 9,63 Hz, 1H) 7,36 (dd, J = 9,45 y 2,62 Hz, 1H) 7,47 (td, J = 8,41 y 2,68 Hz, 1H) 7,93 (dd, J = 8,78 y 6,46 Hz, 1H)
Preparacion de ester ferc-butflico del acido 2-[((R)-2-metoxM-metiletil)-(2,2,2-trifluoroacetil)ammo]-4-(4- metilpiperazin-1 -il)benzoico
Una disolucion de ester ferc-butilico del acido 4-fluoro-2-[((R)-2-metoxi-1-metiletil)-(2,2,2-
trifluoroacetil)amino]benzoico (2 g, 5,28 mmol) y A/-metilpiperazina (5,86 ml, 52,8 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) se agito a 60 °C durante siete dfas. Despues, la disolucion se evaporo, se le anadio una disolucion saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con diclorometano (tres veces). La fase organica se lavo con agua y salmuera, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se evaporo para obtener un producto crudo que se purifico por cromatogratia en columna de gel de sflice (diclorometano/metanol, 93:7). El compuesto del titulo (2,04 g, 84 %) se obtuvo como un solido amarillento.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): (mezcla de tautomeros) 7,81 (d, J = 9,15 Hz, 1H) 7,06 (dd, J1 = 9,15 Hz, J2 = 2,56 Hz, 1H) 6,79 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 4,80 (m, 1H) 3,39 (m, 2H) 3,34-3,28 (m, 7H) 2,55 (m, 4H) 2,29 (s. a., 3H) 1,46 (s, 9H) 0,83 (d, 3H)
De manera analoga a la descrita anteriormente se obtuvieron los compuestos siguientes:
ester ferc-butilico del acido 2-[(2-metoxietil)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): (mezcla de tautomeros) 7,83 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,05 (dd, J1 = 9,02 Hz, J2 = 2,68 Hz, 1H) 6,86 (d, J = 2,68 Hz, 1H) 4,31 (m, 1H) 3,55 (m, 1H) 3,40 (m, 1H) 3,32 (m, 4H) 3,25 (m, 1H) 3,21 (s, 1H) 2,44 (t, J = 5,12 Hz, 4H) 2,22 (s. a., 3H) 1,46 (s, 9H),
2-[(3-metoxipropil)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,45 (s, 9H) 1,68-1,84 (m, 2H) 2,26 (s. a., 3H) 2,44-2,60 (m, 4H) 3,12-3,23 (m, 1H) 3,18 (s, 3H) 3,25-3,48 (m, 6H) 4,08 (d, J = 22,92 Hz, 1H) 6,92 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,02 (dd, J = 9,02 y 2,44 Hz, 1H) 7,81 (d, J = 9,02 Hz, 1H)
2-[(2-fluoroetil)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,46 (s, 9H) 2,22 (s, 3H) 2,43 (t, J = 4,76 Hz, 4H) 3,25-3,31 (m, 4H) 3,413,59 (m, 1H) 4,27-4,46 (m, 1H) 4,46-4,78 (m, 2H) 6,90 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 7,05 (dd, J = 9,02 y 2,68 Hz, 1H) 7,83 (d, J = 9,02 Hz, 1H)
2-[(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,04 (s, 3H) 1,45 (s, 3H) 1,49 (s, 9H) 2,22 (s, 3H) 2,44 (t, J = 4,94 Hz, 4H) 3,20 (d, J = 9,51 Hz, 1H) 3,23 (s, 3H) 3,25-3,30 (m, 4H) 3,93 (d, J = 9,51 Hz, 1H) 6,89 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,00 (dd, J = 8,96 y 2,62 Hz, 1H) 7,70 (d, J = 8,90 Hz, 1H)
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Preparacion de trifluoroacetato del acido 2-[((R)-2-metoxi-1-metiletil)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]-4-(4- metilpiperazin-1 -il)benzoico
A una disolucion de ester ferc-butilico del acido 2-[((R)-2-metoxi-1-metiletil)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]-4-(4- metilpiperazin-1-il)benzoico (2,03 g, 4,42 mmol) en clorometano (15 ml) se le anadio acido trifluoroacetico (3,4 ml,
44.2 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 15 horas y despues la disolucion se evaporo a sequedad para dar el compuesto del tftulo como un aceite que se uso para la etapa siguiente sin purificacion adicional.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): (mezcla de tautomeros) 12,10 (s. a., 1H) 9,74 (s. a., 1H) 7,90 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 7,15 (dd, J1 = 8,90 Hz, J2 = 2,56 Hz, 1H) 6,89 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 4,76 (m, 1H) 4,03 (t, 2H) 3,55 (m, 2H) 3,37 (m, 2H) 3,30 (s, 3H) 3,18 (m, 2H) 2,88 (s. a., 3H) 0,85 (d, 3H)
De manera analoga a la descrita anteriormente se obtuvieron los compuestos siguientes:
trifluoroacetato del acido 2-[(2-metoxietil)-(2,2,2-trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): (mezcla de tautomeros) 12,76 (s. a, 1H) 9,73 (s. a, 1H) 7,91 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 7,10 (dd, J1 = 8,78 Hz, J2 = 2,68 Hz, 1H) 7,01 (d, J = 2,68 Hz, 1H) 4,15 (m, 1H) 4,04 (m, 2H) 3,54 (m, 2H) 3,42 (m, 2H) 3,38 (m, 2H) 3,33 (m, 2H) 3,19 (s, 3H) 3,14 (m, 2H) 2,86 (s. a., 3H),
clorhidrato del acido 2-[(3-metoxipropil)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,70-1,81 (m, 2H) 2,84 (d, J = 2,93 Hz, 3H) 3,06-3,40 (m, 7H) 3,19 (s, 3H) 3,52 (d, J = 10,36 Hz, 2H) 3,96-4,06 (m, 1H) 4,09 (s. a., 2H) 7,07 (d, J = 2,56 Hz, 1H) 7,10 (dd, J = 8,90 y 2,68 Hz, 1H) 7,93 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 10,27 (s. a., 1H) 12,76 (s. a., 1H)
clorhidrato del acido 2-[(2-fluoroetil)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 2,84 (s. a., 3H) 3,04-3,30 (m, 4H) 3,47-3,56 (m, 2H) 3,54-3,67 (m, 1H) 4,06 (d, 2H) 4,18-4,40 (m, 1H) 4,46-4,79 (m, 2H) 7,07 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 7,12 (dd, J = 8,96 y 2,62 Hz, 1H) 7,91-7,97 (m, 1H) 10,33 (s. a., 1H) 12,83 (s. a., 1H)
clorhidrato del acido 2-[(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)(trifluoroacetil)amino]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,07 (s, 3H) 1,43 (s, 3H) 2,84 (s, 3H) 3,10-3,38 (m, 5H) 3,25 (s, 3H) 3,473,57 (m, 2H) 3,92 (d, J = 9,51 Hz, 1H) 3,95-4,02 (m, 2H) 7,00 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,10 (dd, J = 8,84 y 2,50 Hz, 1H) 7,84 (d, J = 8,78 Hz, 1H) 10,25 (s. a., 1H) 12,77 (s. a., 1H)
Preparacion 5
Preparacion de 4-{[2-(ferc-butoxicarbonM)-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]amino}piperidin-1-carboxilato de etilo
El compuesto 2-amino-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de ferc-butilo (1,5 g, 5,15 mmol) se disolvio en dioxano anhidro (25 ml) en atmosfera de nitrogeno. Se le anadio W-etoxicarbonilpiperidona (1,06 g, 0,932 ml, 6,18 mmol, 1,2 eq.) y despues acido trifluoroacetico (1,03 ml, 13,39 mmol, 2,6 eq.) y triacetoxiborohidruro de sodio (1,72 g, 7,73 mmol, 1,5 eq.). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante cuatro horas, A continuacion, se le anadio una disolucion acuosa saturada de NaHCO3, la mezcla se concentro a presion reducida y se extrajo con diclorometano (3 x 40 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida. Despues de la purificacion por cromatograffa en gel de sflice (DCM/EtOH, 93:7), se obtuvieron 2,187 g del compuesto del tftulo como un solido blanco (rendimiento del 95 %).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,19 (t, J = 7,50 Hz, 3H) 1,24-1,34 (m, 2H) 1,50 (s, 9H) 1,89-2,00 (m, 2H) 2,22 (s, 3H) 2,39-2,45 (m, 4H) 3,03-3,16 (m, 2H) 3,20-3,29 (m, 4H) 3,66-3,76 (m, 1H) 3,80-3,90 (m, 2H) 4,05 (c, J =
7,07 Hz, 2H) 6,07 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 6,20 (dd, J = 9,15 y 2,19 Hz, 1H) 7,57 (d, J = 9,02 Hz, 1H) 7,70 (d, J = 7,93 Hz, 1H)
Preparacion de 4-{[2-(ferc-butoxicarbonil)-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil](trifluoroacetil)amino}piperidin-1-
carboxilato de etilo
El compuesto 4-{[2-(ferc-butoxicarbonil)-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]amino}piperidin-1-carboxilato de etilo (2,18 g, 4,88 mmol) se disolvio en diclorometano anhidro (20 ml) en atmosfera de nitrogeno y la disolucion se enfrio a 0 °C. Se le anadio trietilamina (1,02 ml, 7,32 mmol, 1,5 eq.) y despues anhftdrido trifluoroacetico (0,827 ml, 5,856 mmol,
1.2 eq.) y la mezcla se agito a 0 °C. Despues de tres horas se llevo a cabo una nueva adicion de trietilamina (0,815 ml, 5,86 mmol, 1,2 eq.) y anhfdrido trifluoroacetico (0,415 ml, 2,93 mmol, 0,6 eq.) y la mezcla se dejo calentar a
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temperature ambiente durante la noche. La mezcla se diluyo con diclorometano y se lavo dos veces con NaHCO3 acuoso saturado. La fase acuosa volvio a extraerse con diclorometano. Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida. El producto crudo se purifico por cromatograffa en gel de s^lice (DCM/EtOH, 95:5) para dar 2,15 g del compuesto del tftulo como un aceite amarillo que solidifica al secarse (rendimiento del 81 %).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 0,77-0,93 (m, 1H) 1,13 (t, J = 7,07 Hz, 3H) 1,34-1,44 (m, 1H) 1,46 (s, 9H) 1,56-1,63 (m, 1H) 2,01-2,10 (m, 1H) 2,22 (s, 3H) 2,40-2,44 (m, 4H) 2,78-2,97 (m, 2H) 3,27-3,36 (m, 4H) 3,91-4,06 (m, 2H) 3,94-4,01 (m, 2H) 4,37-4,47 (m, 1H) 6,78 (d, J = 2,44 Hz, 1H) 7,04 (dd, J = 9,02 y 2,56 Hz, 1H) 7,81 (d, J =
9,02 Hz, 1H)
Preparacion de clorhidrato del acido 2-{[1-(etoxicarbonM)piperidin-4-M](trifluoroacetil)amino}-4-(4-
metilpiperazin-1 -il)benzoico
El compuesto 4-{[2-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenil](trifluoroacetil)amino}piperidin-1-carboxylato de etilo (2,15 g, 3,960 mmol) se disolvio en diclorometano anhidro (8 ml) en atmosfera de nitrogeno. A continuacion se le anadio gota a gota una disolucion de HCl 4 M en dioxano (9,9 ml, 39,6 mmol, 10 eq.) y la mezcla se agito a temperatura ambiente. Despues de cinco horas se le anadieron cinco equivalentes mas de HCl y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se evaporo a sequedad y se lavo dos veces con DCM. Despues se resuspendio en DCM/dioxano, 1:3, y se dejo formar una lechada durante una hora. El solido se filtro, se lavo con eter y se seco al vado a 50 °C durante una hora. Se obtuvieron 1,78 g del compuesto del tftulo como un polvo beige (rendimiento del 86 %).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 0,83-0,98 (m, 1H) 1,13 (t, J = 7,01 Hz, 3H) 1,34- 1,47 (m, 1H) 1,63 (d, J = 10,85 Hz, 1H) 2,04 (d, J = 13,66 Hz, 1H) 2,84 (s, 3H) 2,88 (m, 2H) 3,16 (m, 4H) 3,52 (m, 2H) 3,94-4,02 (m, 2H) 4,05 (m,4H) 4,34-4,48 (m, 1H) 6,96 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 7,11 (dd, J = 8,90 y 2,56 Hz, 1H) 7,91 (d, J = 8,90 Hz, 1H) 10,26 (s. a., 1H) 12,79 (s. a., 1H)
Preparacion 6
Preparacion de 2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de metilo
El compuesto 2-metoxi-4-fluorobenzoato de metilo (1,6 g, 9,7 mmol), K2CO3 (1,3 g, 9,7 mmol) y W-metilpiperazina (1,3 ml, 11,7 mmol) se calentaron a 100 °C en DMSO (5 ml) durante 20 horas. La mezcla de reaccion se diluyo con DCM y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad. La purificacion por cromatograffa en columna de gel de sflice con diclorometano/metanol, 95:5, como eluyente dio 1,7 g (rendimiento del 66 %) del compuesto del tftulo.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 2,25 (s, 3H) 2,45 (s. a., 4H) 3,26-3,34 (m, 4H) 3,70 (s, 3H) 3,80 (s, 3H)
6,49 (d, J = 2,32 Hz, 1H) 6,53 (dd, J = 8,84 y 2,38 Hz, 1H) 7,61 (d, J =8,78 Hz, 1H)
Preparacion de clorhidrato del acido 2-metoxi-4-(4-meiylpiperazin-1-il)benzoico
El compuesto 2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de metilo (1,9 g, 7,2 mmol) se calento a 40 °C en una mezcla de NaOH 2 N (10 ml) y MeOH (10 ml) durante dos horas. El MeOH se evaporo y la fase acuosa se acidifico a pH 6 con HCl al 25 % y se extrajo con n-BuOH. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo a sequedad para dar 1,0 g (rendimiento del 61 %) del compuesto del tftulo.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 2,82 (s. a., 3H) 2,99-3,31 (m, 4H) 3,47 (s. a., 2H) 3,83 (s, 3H) 4,04 (s. a., 2H) 6,61 (d, 1H) 6,59 (s, 1H) 7,66 (d, J =8,78 Hz, 1H) 10,49 (s. a., 1H) 11,91 (s. a., 1H)
Preparacion 7
Preparacion de 4-fluoro-2-metilbenzoato de metilo
En un tubo cilrndrico de cuarzo se puso acido 4-fluoro-2-metilbenzoico (1,5 g, 9,7 mmol) en MeOH (15 ml) y se le anadieron dos gotas de H2SO4 concentrado. El tubo se introdujo en un reactor de microondas Smith Creator® de Personal Chemistry. La irradiacion de microondas se llevo a cabo a 130 °C durante una hora, hasta que el analisis de HPLC demostro la desaparicion del material de partida. La mezcla se dejo enfriar y se elimino el disolvente a presion reducida. El producto crudo se diluyo con DCM y se lavo con NaHCOa saturado. La fase organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y la concentracion de la disolucion dio el compuesto final (1,3 g, 78 %) como un aceite incoloro.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 7,91 (dd, J = 6,2 y 8,7 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 2,6 y 10,2 Hz, 1H), 7,15 (td, J = 2,4 y 8,4 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,54 (s, 3H)
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Preparacion de 2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoato de metilo
En un tubo cilmdrico de cuarzo se puso ester metflico del acido 4-fluoro-2-metilbenzoico (1,2 g, 7,14 mmol), N- metilpiperazina (0,95 ml, 8,5 mmol), K2CO3 (990 mg, 7,14 mmol) y DMSO (4 ml). La reaccion se calento durante 20 horas a 110 °C, hasta que el analisis de HPLC demostro la desaparicion del material de partida. Se anadio DCM (15 ml) y la disolucion se lavo dos veces con agua y despues la fase organica se seco sobre Na2SO4 anhidro. El producto crudo se purifico por cromatograffa rapida (DCM/MeOH, 95:5) para dar el compuesto deseado (670 mg, 38 %).
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-cfe): 7,72-7,79 (m, 1H) 6,75-6,84 (m, 2H) 3,75 (s, 3H) 3,29 (s. a., 4H) 2,44 (d, J = 5,0 Hz, 4H) 2,24 (s, 3H)
Preparacion de acido 2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico
A una disolucion de ester metilico de acido 2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoico (660 mg, 2,66 mmol) en MeOH (4 ml), se le anadio NaOH 2 M (4 ml, 8 mmol). La reaccion se calento durante tres horas a 40 °C hasta que el analisis de HPLC demostro la desaparicion del material de partida. El disolvente se elimino a presion reducida y la disolucion se diluyo con agua y se neutralizo a pH 7 con HCl acuoso al 25 %. El precipitado se filtro y se lavo con Et2O para dar el compuesto final deseado como un solido blanco (400 mg, 64 %).
ESI (+) MS: m/z 235 (MH+)
Preparacion 8
Preparacion de acido 1-[1-(ferc-butoxicarbonil)piperidin-4-M]-1H-pirazol-4-carboxflico
Una mezcla de 1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (700 mg, 5 mmol) y NaH al 60 % (6 mmol) se agito en atmosfera de nitrogeno a 0 °C durante una hora en DMF anhidra (15 ml). Se anadio 4-[(metilsulfonil)oxi]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,53 g, 5,5 mmol) disuelto en 4 ml de DMF anhidra y la disolucion resultante se calento a 100 °C durante la noche. La mezcla de reaccion se inactivo con agua y se extrajo (3 veces) con acetato de etilo. Las fases organicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El residuo se disolvio en MeOH (20 ml) y agua (5 ml) y se le anadio KOH (1,12 g, 20 mmol). La disolucion resultante se agito a temperatura ambiente durante 24 horas y despues se eliminaron los disolventes a presion reducida. El residuo se resuspendio en AcOEt y una disolucion de KHSO4 al 5 %. La fase acuosa se extrajo varias veces con EtOAc. Las fases organicas recogidas se secaron con Na2SO4, se filtraron y evaporaron a sequedad para dar 600 mg del compuesto del tttulo.
RMN 1H (400 MHz) 6 (ppm, DMSO-de): 1,42 (s, 9H) 1,73-1,87 (m, 2H) 1,96-2,03 (m, 2H) 2,82-2,99 (m, 2H) 4,04 (d, J = 12,93 Hz, 2H) 4,34-4,47 (m, 1H) 7,81 (s, 1H) 8,29 (s, 1H) 12,26 (s. a., 1H)
Preparacion de acido 1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxnico
De acuerdo con el procedimiento descrito previamente, antes de la hidrolisis basica (KOH/MeOH/agua), el ester ferc-butilico del acido 4-(4-etoxicarbonil-pirazoli-1-il)piperidin-1-carboxflico (776 mg, 2,4 mmol) se disolvio en DCM (24 ml) y se trato con TFA (1,85 ml, 24 mmol) durante tres horas. La reaccion se vertio en una disolucion saturada de NaHCO3 (100 ml) y se extrajo con DCM (2 x 200 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron a sequedad para dar 550 mg de producto crudo que se disolvieron en DCM (20 ml) y se trataron primeramente con TEA (1,058 ml, 7,595 mmol), despues con una disolucion de formaldehndo al 37 % en peso en agua (0,22 ml, 2,95 mmol) y finalmente con triacetoxiborohidruro de sodio (782 mg, 3,69 mmol) a temperatura ambiente, en agitacion y en atmosfera de nitrogeno. Despues de una hora se anadio DCM (20 ml) y la fase organica se lavo con una disolucion saturada de NaHCO3 (25 ml), se seco sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporo para dejar un aceite que se empleo en la etapa de hidrolisis basica sin purificacion adicional para dar el compuesto del tttulo.
ESI (+) MS: m/z 210 (MH+)
Preparacion 9
Preparacion de acido 3-[4(ferc-butoxicarbonil)piperazin-1-il]benzoico
A una disolucion de 1-Boc-4-[3-(etoxicarbonil)fenil]piperazina (200 mg, 0,6 mmol) en EtOH (1 ml) se le anadio NaOH 2M (1 ml, 2 mmol). La reaccion se calento durante dos horas a 40 °C hasta que el analisis de HPLC demostro la desaparicion del material de partida. La disolucion se neutralizo a pH 7 con HCl acuoso al 25 %. El precipitado se filtro y se lavo con Et2O para dar el compuesto final deseado como un solido beige (80 mg, 40 %)
ESI (+) MS: m/z 307 (MH+)
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LISTADO DE SECUENCIAS
<110> Nerviano Medical Sciences Srl
<120> Derivados indazolicos sustituidos activos como inhibidores de cinasa
<130> NMS 056
<150> EP08172091 <151> 18-12- 2008
<160> 4
<170> PatentIn, version 3.3
<210> 1 <211> 76 <212>ADN <213> Artificial
<220>
<223> Cebador directo <400> 1
ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt actggaagtt ctgttccagg ggccccgccg 60 gaagcaccag gagctg 76
<210> 2 <211> 57 <212> ADN <213> Artificial
<220>
<223> Cebador inverso <400> 2
ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt tcagggccca ggctggttca tgctatt 57
<210> 3 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial
<220>
<223> Cebador directo <400> 3
ctcggatcca gaaagagaaa taacagcagg ctg 33
<210> 4 <211> 36 <212> ADN <213> Artificial
<220>
<223> Cebador inverso <400> 4
ctcggatcct cagcaggtcg aagactgggg cagcgg 36

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de la formula (I),
    imagen1
    en el que:
    Ar es arilo o heteroarilo sustituido con Ra y Rb, en que 10 Ra es NH2, NH-G, O-G' o (CH2)n-A y
    Rb es hidrogeno, halogeno, NO2, NH2, NH-G o NH-CO-L, en que A es heterociclilo opcionalmente sustituido
    G es alquilo C1-C6 sustituido lineal o ramificado o un heterociclilo opcionalmente sustituido,
    G' es alquilo C1-C6 lineal o ramificado sustituido con N(alquilo Ci-Ca)2 o un heterociclilo opcionalmente 15 sustituido y
    L es heteroarilo opcionalmente sustituido;
    Ar' es arilo, opcionalmente sustituido con halogeno;
    R1, R2 y R3 son hidrogeno;
    R' y R” son independientemente entre sf hidrogeno o metilo;
    20 n es 0 o 1,
    o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
  2. 2. Un compuesto de la formula (I) segun se define en la reivindicacion 1, en el que Ar es un grupo de la formula:
    25
    en el que Ra es (CH2)n-A o O-G', en que A, G' y n son segun se definen en la reivindicacion 1 y Rb es segun se define en la reivindicacion 1.
    30 3. Un compuesto de la formula (I) segun se define en la reivindicacion 1, en el que Ar es un grupo de la formula:
    imagen2
    imagen3
    en el que Ra es (CH2VA, en que A y n son segun se definen en la reivindicacion 1.
    35
  3. 4. Un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo que se selecciona del grupo que consta de:
    W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    40 W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-2-(2-metoxietilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(2-cloro-3,6-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-metoxietilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    5
    10
    15
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    25
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    W-[5-(3-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-5-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(2,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(2,3-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(3,4-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(2-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-mtrobenzamida,
    W-{5-[(R)-1-(3,5-difluorofeml)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-{5-[(S)-1-(3,5-difluorofeml)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    2-amino-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida,
    W-[5-(2-cloro-5-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benza-
    mida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]-2-mtrobenzamida,
    W-[5-(3-doro-5-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(3-fluoro-5-metilbenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(5-fluoro-2-metilbenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    {2-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1 H-indazol-3-ilcarbamoil]-5-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]feml}amida del acido 1H-
    pirrol-2-carboxflico,
    W-[5-(2-metoxibenciloxi)-1H-mdazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    2-amino-W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-[(3-dimetilaminopropil)metilamino]benzamida,
    W-[5-(4-fluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)benzamida,
    W-(5-benciloxi-1H-indazol-3-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-mtrobenzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-mtrobenzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(3-metoxipropilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-((R)-2-metoxi-1-metiletilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-metoxi-1,1-dimetiletilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, ester etflico del acido 4-[2-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-ilcarbamoil]-5-(4-metilpiperazin-1-il)fenilamino] piperidin-1 -carboxilico,
    W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(2-fluoroetilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    2- bencilamino-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-2-(1,2-dimetoxietilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, 4-(4-metilpiperazin-1-il)-A/-{5-[(3-fenoxibencil)oxi]-1H-indazol-3-il}benzamida,
    3- dorometil-A/-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]benzamida W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-3-pipendin-1-ilmetilbenzamida,
    3-(azetidin-1-ilmetil)-A/-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(pirrolidin-1-ilmetil)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[(2-metoxietil)(metil)amino]benzamida, W-{5-[1-(3,5-difluorofenil)etoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[1-(3,5-difluorofeml)etoxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-1-(1-metilpipendin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida, W-[5-(bendloxi)-1H-indazol-3-il]-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(bendloxi)-1H-indazol-3-il]-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida, W-{5-[(2-doro-3,6-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(benciloxi)-1H-indazol-3-il]-3-(piperazin-1-il)benzamida, W-[5-(bendloxi)-1H-indazol-3-il]-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(2-doro-3,6-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(bendloxi)-1H-indazol-3-il]-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(2-doro-3,6-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-{[3-(dimetilammo)propil](metil)amino}benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(pipendin-1-ilmetil)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(morfolin-4-ilmetil)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-mtrobenzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-mtrobenzamida, W-{5-[(3,5-difluorobencil)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida W-{5-[(2,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobendl)oxi]-1H-indazol-3-il}-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    4-(4-metilpiperazin-1-il)-A/-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida,
    W-[5-(3-fluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida W-{5-[4-(benciloxi)fenoxi]-1H-indazol-3-il}-4- (4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    4-(4-metilpiperazin-1-il)-A/-[5-(4-fenoxifenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida,
    W-{5-[3-(benciloxi)fenoxi]-1H-indazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)benzamida,
    W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida,
    2- metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida W-{5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il}-1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida,
    3- (4-metilpiperazin-1-il)-W-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida,
    clorhidrato de W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida, clorhidrato de 2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)-A/-(5-fenoxi-1H-indazol-3-il)benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-nitrobenzamida,
    W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-nitrobenzamida,
    3- amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida,
    4- amino-W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-3-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[(1-metilpiperidin-4-il)amino]benzamida, W-[5-(3,5-difluorofenoxi)-1H-indazol-3-il]-4-[2-(dimetilamino)etoxi]benzamida, W-{5-[(3,5-difluorobenciloxi]-1H-indazol-3-il}-4-aminobenzamida, W-{5-[(3,5-difluorobenciloxi]-1H-indazol-3-il}-3-amino-benzamida y
    4-clorometil-W-[5-(3,5-difluorobenciloxi)-1H-indazol-3-il]-benzamida.
  4. 5. Un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (I) segun se define en la reivindicacion 1, caracterizado porque el proceso comprende:
    d) la condensacion de un compuesto de la formula (III):
    imagen4
    en el que n, Ar', R1, R2, R3, R' y R” son segun se definen en la reivindicacion 1, con un compuesto de la formula (II):
    imagen5
    en el que Ar es segun se define en la reivindicacion 1 e Y representa hidroxi o un grupo saliente adecuado, para dar un compuesto de la formula (I) segun se define anteriormente, con la separacion opcional del compuesto resultante en los isomeros individuales y la conversion del compuesto de la formula (I) en un compuesto diferente de la formula (I) y/o en una sal farmaceuticamente aceptable si se desea.
  5. 6. Un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 5, caracterizado en que el compuesto de la formula (III) segun se define en la reivindicacion 5 se prepara de acuerdo con las etapas siguientes:
    a) condensacion de un compuesto de la formula (VI):
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    imagen6
    en el que R1, R2 y R3 son segun se definen en la reivindicacion 1, con un derivado alcoholico de la formula (VII):
    Ar'(CR'R”)nOH (VII)
    en el que n, Ar', R' y R” son segUn se definen en la reivindicaciOn 1;
    b) reducciOn del grupo nitro del compuesto resultante de la formula (V):
    imagen7
    en el que n, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segUn se definen anteriormente;
    c) reducciOn del grupo ciano del compuesto resultante de la formula (IV):
    imagen8
    en el que n, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segUn se definen anteriormente, en presencia de un sistema de reactivos adecuado para dar un compuesto de la formula (III) segUn se define anteriormente.
  6. 7. Un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 5, caracterizado porque la conversion opcional de un compuesto de la formula (I) en otro compuesto de la formula (I) se lleva a cabo mediante una o mas de las reacciones siguientes:
    1) reduccion de un compuesto de la formula (I), en el que Ar es un arilo sustituido y uno de los sustituyentes es NO2, para obtener un compuesto de la formula (I) en el que dicho sustituyente es NH2;
    2) conversion de un compuesto de la formula (I) en el que n es 1 en otro compuesto de la formula (I) con un grupo Ar' diferente en un proceso multietapa que consta de:
    2A) la proteccion de un compuesto de la formula (I);
    2B) la reduccion del compuesto resultante de la formula (Xa):
    imagen9
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    en el que Ar, Ar', R', R”, R1, R2 y R3 son segun se definen en la reivindicacion 1 y PG es un grupo protector adecuado;
    2C) el acoplamiento del compuesto resultante de la formula (XI):
    imagen10
    en el que Ar, R1, R2, R3 y PG son segun se definen anteriormente, con un compuesto de la formula (XII)
    Ar'(CR'R”)W (XII)
    en el que Ar', R' y R” son segun se definen en la reivindicacion 1, pero Ar' es diferente del Ar' de la formula (Xa) y W representa un atomo de halogeno o un grupo saliente adecuado;
    2D) eliminacion del grupo protector del compuesto resultante de la formula (X):
    imagen11
    en el que Ar, Ar', R', R”, R1, R2, R3 y PG son segun se definen anteriormente, para dar un compuesto de la formula (I), en el que n es 1 y Ar, Ar', R1, R2, R3, R' y R” son segun se definen anteriormente, pero Ar' es diferente del Ar' de la formula (Xa).
  7. 8. Un metodo in vitro para inhibir la actividad de la ALK que comprende la puesta en contacto de dicho receptor con una cantidad eficaz de un compuesto segun se define en la reivindicacion 1.
  8. 9. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun se definen en la reivindicacion 1 y al menos un excipiente, vehuculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.
  9. 10. Un producto o kit que comprende un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun se definen en la reivindicacion 1 o composiciones farmaceuticas del mismo segun se definen en la reivindicacion 9 y uno o mas agentes quimioterapeuticos como preparacion combinada para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento contra el cancer.
  10. 11. Un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun se definen en la reivindicacion 1 para uso como medicamento.
  11. 12. Un compuesto de la formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun se definen en la reivindicacion 1 para uso en un metodo para el tratamiento de una enfermedad causada por y/o asociada con una actividad cinasica desregulada de ALK, IGF-1R y JAK2.
  12. 13. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 12, en que la enfermedad es cancer.
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