ES2627677T3

ES2627677T3 - Combinación de un inhibidor de fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K) y un inhibidor de mTOR

Info

Publication number: ES2627677T3
Application number: ES09744391.5T
Authority: ES
Inventors: Carlos Garcia-Echeverria; Sauveur-Michel Maira
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2008-10-31
Filing date: 2009-10-29
Publication date: 2017-07-31
Anticipated expiration: 2029-10-29
Also published as: JP2018197243A; US20160136175A1; WO2010049481A1; JP2012506898A; CN105030784A; MX2011004585A; RU2014115188A; EP2349275A1; AU2009309616A1; US20180133226A1; BRPI0921802A8; RU2011121508A; CA2736361C; US20110195966A1; KR20110090911A; CA2736361A1; JP2015013883A; AU2009309616A2; AU2009309616B2; CN102202668A

Abstract

Una combinación farmacéutica que comprende a) el compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y b) un inhibidor de mTOR que es everolimus.

Description

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DESCRIPCION

Combination de un inhibidor de fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K) y un inhibidor de mTOR Campo de la invention

La presente invention se refiere a una combination farmaceutica que comprende un compuesto inhibidor de fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K) que es el compuesto 5-(2,6-dimorfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2- ilamina, o un estereoisomero, tautomero, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un inhibidor de mTOR que es everolimus, y los usos de tal combination en el tratamiento de enfermedades proliferativas, mas especlficamente de enfermedades dependientes de diana en mamlferos de rapamicina (mTOR) cinasa, tal como se describe en las reivindicaciones.

Antecedentes de la invention

Se ha demostrado que la inhibition de mTOR puede inducir la serialization corriente arriba del receptor 1 del factor de crecimiento tipo insulina (IGF-1R) que da como resultado la activation de AKT en celulas cancerosas. Se ha sugerido que este fenomeno juega un papel en la atenuacion de las respuestas celulares hacia la inhibition de mTOR y podrla atenuar la actividad cllnica de los inhibidores de mTOR. Por ejemplo, se ha descubierto un incremento en pAKT en aproximadamente el 50 % en los tumores de todos los pacientes en un estudio de Fase I en pacientes con tumores solidos avanzados (Taberno et al., Journal of Clinical Oncology, 26 (2008), pags. 1603-1610). A pesar de las numerosas opciones de tratamiento para pacientes con enfermedades proliferativas, sigue existiendo la necesidad de agentes terapeuticos eficaces y seguros y la necesidad respecto a su uso preferencial en terapia de combinacion.

El documento WO 2008/098058 divulga determinados derivados de pirimidina como compuestos inhibidores de PI3K y metodos de su uso solos o en combination con al menos un agente terapeutico adicional.

El documento WO 2006/044453 divulga analogos de 17-hidroxiwortmanina como inhibidores de PI3K y metodos de su uso.

El documento WO 2007/120897 divulga composiciones que contienen rapamicina o derivados de rapamicina en combination con un inhibidor de PI3 cinasa y/o un inhibidor de leptina, y metodos para el tratamiento y/o prevention de hiperplasia intimal, estenosis vascular y/o restenosis.

Winbanks et al., [“Role of the phosphatidylinositol 3-kinase and mTOR pathways in the regulation of renal fibroplast function and differentiation”, Internal Journal of Biochemistry and Cell Biology, EXETER, GB, vol. 39, n.° 1, 1 de enero de 2007, pags. 206-219] se refiere a inhibidores especlficos de mTOR (RAD) y fosfatidilinositol 3-cinasa (LY294002) y los mecanismos de fibrogenesis.

Sun Shi-Yong et al., [“Activation of Akt and eIF4E survival pathways by rapamycin-mediated mammalian target of rapamycin inhibition”, Cancer Research, vol. 65, n.° 16, agosto de 2005 (2005-08), pags. 7052-7058] divulga los efectos de LY294002 en combination con rapamicina en celulas NSCLC humanas.

Chaisurapat Risa et al., [“Dual inhibition of PI3Kalpha and mTOR as an alternative treatment for Kaposi's sarcoma”, Cancer Research, 15 oCt 2008, vol. 68, n.° 20, 15 de octubre de 2008 (2008-10-15), pags. 8361-8368] describe el PI-103 como una option terapeutica para el tratamiento del sarcoma de Kaposi.

Sumario de la invencion

Se ha descubierto de acuerdo con la presente divulgation que un inhibidor de PI3K reduce o bloquea la fosforilacion y activation de AKT mediante los inhibidores de mTOR. Por consiguiente, la presente divulgation proporciona un metodo para reducir o bloquear la fosforilacion y activation de AKT mediante los inhibidores de mTOR que comprende administrar un inhibidor de PI3K a un animal de sangre caliente que lo necesite.

La presente invention proporciona una combination farmaceutica que comprende (a) el compuesto 5-(2,6-di- morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, o un estereoisomero, tautomero, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y (b) un inhibidor de mTOR que es everolimus.

En otra realization, la presente divulgation proporciona un metodo para tratar una enfermedad proliferativa dependiente de la fosforilacion y activation adquiridas de AKT durante el tratamiento con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un inhibidor de PI3K a un animal de sangre caliente que lo necesite.

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En otra realization, la presente divulgation se refiere a un metodo para tratar una enfermedad proliferativa que se ha vuelto resistente o que tiene una sensibilidad disminuida al tratamiento con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un inhibidor de PI3K a un animal de sangre caliente que lo necesite. La resistencia se debe, por ejemplo, a la fosforilacion y activation de AKT.

En un aspecto adicional, la presente divulgation proporciona un metodo para mejorar la eficacia del tratamiento de una enfermedad proliferativa con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una combination que comprende un inhibidor de PI3K y un inhibidor de mTOR a un animal de sangre caliente que lo necesite.

En un aspecto, la presente divulgation proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto inhibidor de PI3K y al menos un inhibidor de mTOR.

En otro aspecto, la presente divulgation proporciona el uso de un compuesto inhibidor de PI3K y al menos un inhibidor de mTOR para la fabrication de un medicamento para el tratamiento o prevention de una enfermedad proliferativa.

En otro aspecto, la presente divulgation proporciona un metodo para tratar o prevenir una enfermedad proliferativa mediante la administration de un compuesto inhibidor de PI3K y al menos un inhibidor de mTOR.

En otro aspecto, la presente invention proporciona una combination farmaceutica que comprende un compuesto inhibidor de PI3K 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, o un estereoisomero,

tautomero, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo y al menos un inhibidor de mTOR que es everolimus para su uso en el tratamiento o prevention de una enfermedad proliferativa dependiente de diana en mamlferos de rapamicina (mTOR) cinasa que se selecciona entre cancer de mama, carcinoma de las celulas renales, tumores gastricos, tumores neuroendocrinos, linfomas y cancer de prostata. En una realization de la presente invention, cada elemento de combination de la combination se administra simultanea o secuencialmente y en cualquier orden.

En un aspecto, la presente invention proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto inhibidor de PI3K 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, o un estereoisomero,

tautomero, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un inhibidor de mTOR que es everolimus.

Description detallada de las figuras

La figura 1 muestra los niveles de fosforilacion de AKT en presencia de everolimus (RAD001) y de everolimus (RAD001) en combination con el Compuesto I en celulas de tumor de mama BT474.

La figura 2 muestra los niveles de fosforilacion de AKT en presencia de everolimus (RAD001) y de everolimus (RAD001) en combination con el Compuesto I en celulas de tumor de mama MDA-MB-231.

Descripcion detallada de la invencion

El documento WO07/084786 describe derivados de pirimidina, que han descubierto la actividad de las cinasas llpidas, tales como las PI3-cinasas.

Un compuesto preferido de la presente combination inventiva es un compuesto que se describe especlficamente en el documento WO07/084786 y que es 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina (Compuesto I). La slntesis de 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina se describe en el documento WO07/084786 como Ejemplo 10.

Las combinaciones de la presente divulgacion incluyen compuestos que se dirigen, disminuyen o inhiben la actividad/funcion de la serina/treonina mTOR cinasa. Dichos compuestos se denominaran como "inhibidores de mTOR" e incluyen, pero no se limitan a, compuestos, protelnas o anticuerpos que se dirigen/inhiben a los miembros de la familia de mTOR cinasa, por ejemplo, RAD, rapamicina (sirolimus) y derivados/analogos de los mismos tales como everolimus o RAD001 o compuestos que inhiben la actividad de cinasa de mTOR uniendose directamente a la hendidura de union al ATP de la enzima. El sirolimus tambien es conocido con el nombre RAPAMUNE y el everolimus o RAD001 con el nombre CERTICAN. Otros compuestos, protelnas o anticuerpos que se dirigen/inhiben a los miembros de la familia de mTOR cinasa incluyen CCI-779, ABT578, SAR543, y ascomicina que es un analogo etllico de FK506. Tambien estan incluidos AP23573, AP23841, KU-0063794, INK-128, EX2044, EX3855, EX7518, AZD08055 y OSI027. Un compuesto particularmente preferido de acuerdo con la presente invention es RAD001.

Los inhibidores de mTOR adecuados incluyen, por ejemplo:

I. Rapamicina, que es un macrolido de tipo lactama inmunosupresor que es producida por Streptomyces

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hyqroscopicus.

II. Derivados de rapamicina tales como:

a. rapamicina sustituida, por ejemplo, una rapamicina 40-O-sustituida, por ejemplo, como la descrita en los documentos US 5.258.389, WO 94/09010, WO 92/05179, US 5.118.677, US 5.118.678, US 5.100.883, US 5.151.413, US 5.120.842, WO 93/11130, WO 94/02136, WO 94/02485 y WO 95/14023;

b. una rapamicina 16-O-sustituida, por ejemplo, como la descrita en los documentos WO 94/02136, WO 95/16691 y WO 96/41807;

c. una rapamicina 32-hidrogenada, por ejemplo, como la descrita en los documentos WO 96/41807 y US 5 256 790.

d. Los derivados de rapamicina preferidos son compuestos de la formula (II)

imagen1

en la que

R1 es CH3 o alquinilo C3-6,

R2 es H o -CH2-CH2-OH, 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metil-propanoilo o tetrazolilo, y X es =O, (H,H) o (H,OH) con la condicion que R2 sea diferente de H cuando X es =O y R1 es CH3,

o un profarmaco del mismo cuando R2 es -CH2-CH2-OH, por ejemplo, un eter fisiologicamente hidrolizable del mismo.

Los compuestos de la formula (II) se divulgan, por ejemplo, en los documentos WO 94/09010, WO 95/16691 o WO 96/41807. Estos se pueden preparar en la forma divulgada o mediante analogla a los procedimientos descritos en dichas referencias.

Los compuestos adecuados son 32-desoxorapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32-desoxorapamicina, 16-pent-2-iniloxi- 32(S)-dihidro-rapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32(S)-dihidro-40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina y, mas preferentemente, 40- O-(2-hidroxietil)-rapamicina, divulgado como Ejemplo 8 en el documento WO 94/09010.

Los derivados de rapamicina particularmente adecuados de la formula (II) son 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, 40-[3- hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoato]-rapamicina (tambien llamado CCI779), 40-epi-(tetrazolil)-rapamicina (tambien llamado ABT578), 32-desoxorapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32(S)-dihidro-rapamicina, o TAFA-93.

e. Los derivados de rapamicina tambien incluyen los denominados rapalogos, por ejemplo, como los divulgados en los documentos WO 98/02441 y WO 01/14387, por ejemplo, AP23573, AP23464, o AP23841.

Se ha descubierto que la rapamicina y los derivados de la misma, con base a la actividad observada, por ejemplo, union a macrofilina-12 (tambien conocida como protelna de union a FK-5G6 o FKBP-12), por ejemplo, como se divulga en los documentos WO 94/09010, WO 95/16691 o WO 96/41807, son utiles, por ejemplo, como inmunosupresores, por ejemplo, en el tratamiento de rechazo agudo de aloinjerto.

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III. Ascomicina, que es un analogo etllico de FK506.

IV. AZD08055 y OSI127, que son compuestos que inhiben la actividad de cinasa de mTOR uniendose directamente a la hendidura de union al ATP de la enzima.

De igual manera quedan comprendidas las sales farmaceuticas de los mismos, los racematos, diastereoisomeros, enantiomeros, tautomeros, correspondientes, as! como las modificaciones de cristal correspondientes de los compuestos divulgados anteriormente en casos en los que esten presentes, por ejemplo, solvatos, hidratos y polimorfos, que se divulgan en los mismos. Los compuestos usados como principios activos en las combinaciones de la invencion se pueden preparar y administrar como se describe en los documentos citados, respectivamente. Tambien dentro del alcance de la presente invencion esta la combination de mas de dos principios activos separados como se indico anteriormente, es decir, una combinacion farmaceutica dentro del alcance de la presente invencion podrla incluir tres o mas principios activos.

En un aspecto, la presente invencion proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto inhibidor de PI3k 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina como se describio anteriormente y al menos un inhibidor de mTOR que es everolimus.

En otro aspecto se proporciona el uso de un compuesto inhibidor de PI3K 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4- trifluorometil-piridin-2-ilamina y al menos un inhibidor de mTOR para la fabrication de un medicamento para el tratamiento o prevention de una enfermedad proliferativa.

En un aspecto adicional, la presente divulgation proporciona un compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4- trifluorometil-piridin-2-ilamina y al menos un inhibidor de mTOR para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad proliferativa.

En otro aspecto, la presente divulgacion proporciona un metodo para tratar o prevenir una enfermedad proliferativa administrando un compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina y al menos un inhibidor de mTOR.

En otro aspecto, la presente divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina y al menos un inhibidor de mTOR para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad proliferativa.

En otro aspecto, la presente divulgacion proporciona una combinacion de un compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il- pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina (Compuesto I) y un inhibidor de mTOR seleccionado entre el grupo que consiste en RAD rapamicina (sirolimus) y derivados/analogos del mismo tales como everolimus o RAD001; cCI-779, ABT578, SAR543, ascomicina (un analogo etllico de FK506), AP23573, AP23841, KU-0063794, INK-128, EX2044, EX3855, EX7518, AZD08055 y OSI027, en la que los principios activos estan presentes en cada caso en forma libre o en forma de una sal farmaceuticamente aceptable, y opcionalmente al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable, para uso simultaneo, separado o secuencial para el tratamiento de enfermedades dependientes de diana en mamlferos de rapamicina (mTOR) cinasa.

La presente divulgacion proporciona un metodo para reducir o bloquear la fosforilacion y activation de AKT mediante los inhibidores de mTOR que comprende administrar un compuesto de la formula (II) a un animal de sangre caliente que lo necesite. En otra realization, la presente divulgacion proporciona un metodo para tratar una enfermedad proliferativa dependiente de fosforilacion adquirida y activacion de AKT durante el tratamiento con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto (I) a un animal de sangre caliente que lo necesite.

En otra realizacion, la presente divulgacion se refiere a un metodo para tratar una enfermedad proliferativa que se ha vuelto resistente o tiene una sensibilidad disminuida al tratamiento con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto (I) a un animal de sangre caliente que lo necesite. La resistencia se debe, por ejemplo, a fosforilacion y activacion de AKT.

En un aspecto adicional, la presente divulgacion proporciona un metodo para mejorar la eficacia del tratamiento de una enfermedad proliferativa con un inhibidor de mTOR que comprende administrar una combinacion que comprende un compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina y un inhibidor de mTOR a un animal de sangre caliente que lo necesite.

El inhibidor de mTOR usado de acuerdo con la presente divulgacion se puede seleccionar entre RAD rapamicina (sirolimus) y derivados/analogos del mismo tales como everolimus o RAD001; CCI-779, ABT578, SAR543, ascomicina (un analogo etllico de FK506), AP23573, AP23841, KU-0063794, INK-128, EX2044, EX3855, EX7518, AZD08055 y OSI027. Los inhibidores de mTOR particularmente preferidos de acuerdo con la presente divulgacion

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son sirolimus y/o everolimus.

La expresion "enfermedades dependientes de mTOR cinasa" incluye pero no esta restringida a los siguientes slntomas:

• rechazo de trasplante de organo o tejido, por ejemplo, para el tratamiento de receptores de, por ejemplo, trasplantes de corazon, pulmon, corazon-pulmon combinado, hlgado, rinon, pancreatico, piel o cornea; enfermedad de injerto contra huesped, tal como despues del trasplante de medula osea;

• reestenosis

• slndromes de hamartoma, tales como esclerosis tuberosa o enfermedad de Cowden

• linfoangioleiomiomatosis

• retinitis pigmentosa

• enfermedades autoinmunitarias incluyendo encefalomielitis, diabetes mellitus dependiente de insulina, lupus, dermatomiositis, artritis y enfermedades reumaticas

• leucemia linfoblastica aguda resistente a esteroides

• enfermedades fibroticas incluyendo escleroderma, fibrosis pulmonar, fibrosis renal, fibrosis qulstica

• hipertension pulmonar

• inmunomodulacion

• esclerosis multiple

• slndrome de VHL

• complejo de Carney

• poliposis adenomatosa familiar

• slndrome de poliposis juvenil

• slndrome de Birt-Hogg-Duke

• cardiomiopatla hipertrofica familiar

• slndrome de Wolf-Parkinson-White

• trastornos neurodegenerativos tales como enfermedad de Parkinson, de Huntington, de Alzheimer y demencias ocasionadas por mutaciones de tau, ataxia espinocerebelar de tipo 3, enfermedad de neurona motora causada por mutaciones de SOD1, lipofuscinosis ceroide neuronal/enfermedad de Batten (neurodegeneracion pediatrica)

• degeneracion macular humeda y seca

• consuncion muscular (atrofia, caquexia) y miopatlas tales como enfermedad de Danon

• infecciones bacterianas y vlricas incluyendo infecciones por M. tuberculosis, Streptococcus del grupo A, VSH tipo I, VIH

• neurofibromatosis incluyendo neurofibromatosis tipo 1

• slndrome de Peutz-Jeghers.

Asimismo, “enfermedades dependientes de mTOR cinasa” incluyen canceres y otros tumores malignos relacionados. Una lista no limitante de los canceres asociados con cascadas de serialization de mTOR patologicas incluye cancer de mama, carcinoma de celulas renales, tumores gastricos, tumores neuroendocrinos, linfomas y

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cancer de prostata.

Los ejemplos para una enfermedad proliferativa son, por ejemplo, tumores benignos o malignos, carcinoma del cerebro, rinon, hlgado, glandulas adrenales, vejiga urinaria, mama, estomago, tumores gastricos, ovarios, colon, recto, prostata, pancreas, pulmon, vagina o tiroides, sarcoma, glioblastomas, mieloma multiple o cancer gastrointestinal, en especial carcinoma de colon o adenoma colorrectal o un tumor de la cabeza y cuello, una hiperproliferacion epidermica, psoriasis, hiperplasia prostatica, una neoplasia, una neoplasia de caracter epitelial, linfomas, un carcinoma mamario o una leucemia.

Las composiciones o combinacion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion se pueden someter a ensayo en estudios cllnicos. Los estudios cllnicos adecuados pueden ser, por ejemplo, estudios de aumento gradual de dosis, abierto, en pacientes con enfermedades proliferativas. Dichos estudios demuestran, en particular, el sinergismo de los principios activos de la combinacion de la invencion. Los efectos beneficiosos sobre las enfermedades proliferativas se pueden determinar directamente a traves de los resultados de estos estudios que son conocidos como tal por el experto en la materia. Dichos estudios pueden ser, en particular, adecuados para comparar los efectos de una monoterapia usando los principios activos y una combinacion de la invencion. Preferentemente, la dosis del agente (a) se escala hasta que se alcanza la Dosificacion Maxima Tolerada, y el agente (b) se administra con una dosis fija. Como alternativa, el agente (a) se puede administrar en una dosis fija y la dosis del agente (b) se puede escalar. Cada paciente puede recibir dosis del agente (a) ya sea diariamente o de manera intermitente. La eficacia del tratamiento se puede determinar en dichos estudios, por ejemplo, despues de 12, 18 o 24 semanas mediante evaluacion de las puntuaciones de los slntomas cada seis semanas.

La administracion de una combinacion farmaceutica de la invencion puede dar como resultado no solo un efecto beneficioso, por ejemplo, un efecto terapeutico sinergico, con respecto a, por ejemplo, aliviar, retrasar el avance de o inhibir los slntomas, sino tambien efectos beneficiosos adicionales sorprendentes, por ejemplo, menos efectos secundarios, una calidad de vida mejorada o una morbilidad disminuida, en comparacion con una monoterapia que aplica solamente uno de los principios farmaceuticamente activos usados en la combinacion de la invencion.

Un beneficio adicional puede ser que se pueden usar dosis mas bajas de los principios activos de la combinacion de la invencion, por ejemplo, que con frecuencia las dosificaciones no solo necesitan ser mas pequenas sino que tambien se podrlan aplicar menos frecuentemente, lo cual puede disminuir la incidencia o gravedad de los efectos secundarios. Esto es de acuerdo con los deseos y necesidades de los pacientes a ser tratados.

Un objetivo de la presente invencion es proporcionar una composition farmaceutica que comprende una cantidad, que puede ser una combinacion de la invencion conjuntamente eficaz terapeuticamente para dirigirse a o para prevenir enfermedades proliferativas. En esta composicion, el agente (a) y el agente (b) se pueden administrar juntos, uno despues del otro o por separado en una forma de dosificacion unitaria combinada o en dos formas de dosificacion separadas. La forma de dosificacion unitaria tambien puede ser una combinacion fija.

Las composiciones farmaceuticas para administracion por separado del agente (a) y del agente (b) o para la administracion en una combinacion fija, es decir, una composicion galenica individual que comprende al menos dos elementos de combinacion (a) y (b), segun la invencion se pueden preparar en una manera conocida per se y son aquellas adecuadas para administracion por via enterica, tal como oral o rectal, y parenteral a mamlferos (animales de sangre caliente), incluyendo humanos, que comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de al menos un elemento de combinacion farmacologicamente activo solo, por ejemplo, como se indico anteriormente, o en combinacion con uno o mas vehlculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables, especialmente adecuados para aplicacion enterica o parenteral.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas pueden contener, por ejemplo, desde aproximadamente el 0,1 % hasta aproximadamente el 99,9 %, preferentemente desde aproximadamente el 1 % hasta aproximadamente el 60 %, del o los principios activos. Las preparaciones farmaceuticas para la terapia de combinacion para administracion por via enterica o parenteral son, por ejemplo, aquellas en formas de dosificacion unitaria, tales como comprimidos recubiertos con azucar, comprimidos, capsulas o supositorios, o ampollas. Si no se indica lo contrario, estas se preparan en una manera conocida per se, por ejemplo, por medio de procesos convencionales de mezclado, granulation, recubrimiento con azucar, disolucion o liofilizacion. Se apreciara que el contenido unitario de un elemento de combinacion contenido en una dosis individual de cada forma de dosificacion no necesita constituir por si mismo una cantidad eficaz puesto que la cantidad eficaz necesaria se puede alcanzar mediante administracion de una pluralidad de unidades de dosificacion.

En particular, una cantidad terapeuticamente eficaz de cada uno de los elementos de combinacion de la combinacion de la invencion se puede administrar simultanea o secuencialmente y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar por separado o como una combinacion fija. Por ejemplo, el metodo para prevenir o tratar enfermedades proliferativas de segun la invencion puede comprender (i) administracion del primer agente (a) en forma libre o de sal farmaceuticamente aceptable y (ii) administracion de un agente (b) en forma libre o de sal farmaceuticamente aceptable, simultanea o secuencialmente en cualquier orden, en cantidades

conjuntamente eficaces terapeuticamente, preferentemente en cantidades sinergicamente eficaces, por ejemplo, en dosificaciones diarias o de manera intermitente que correspondan a las cantidades descritas en el presente documento. Los elementos de combination individuales de la combination de la invention se pueden administrar por separado en tiempos diferentes durante el curso de la terapia o en forma concurrente en formas de combinacion 5 dividid o individual. Asimismo, el termino administrar tambien abarca el uso de un profarmaco de un elemento de combinacion que se convierte in vivo en el elemento de combinacion como tal. Por lo tanto, se debe entender que la presente invencion abarca todos de dichos reglmenes de tratamiento simultaneo o alternante y que el termino "administrar" se debe interpretar en forma correspondiente.

La dosificacion eficaz de cada uno de los elementos de combinacion empleados en la combinacion de la invencion 10 puede variar en funcion del compuesto o composition farmaceutica particular empleados, del modo de administracion, la condicion a ser tratada, la gravedad de la enfermedad que esta siendo tratada. Por tanto, el regimen de dosificacion de la combinacion de la invencion se selecciona de acuerdo con una diversidad de factores que incluyen la via de administration y la funcion renal y hepatica del paciente. Un facultativo o medico experto habitual puede determinar y prescribir facilmente la cantidad eficaz de los principios activos individuales requerida 15 para aliviar, contrarrestar o detener el avance de la enfermedad. La precision optima para lograr la concentration de los principios activos dentro del intervalo que produzca eficacia sin toxicidad requiere un regimen basado en la cinetica de la disponibilidad de los principios activos hacia los sitios diana.

Ejemplo 1: Efecto de la combinacion de RAD001 (everolimus) con el Compuesto I en celulas BT474 y MDA- MB-231 de tumor de mama

20 Materiales y metodos

1. Preparation de los compuestos

El compuesto RAD001 es sintetizado por Novartis Pharma AG. Se prepara una solution madre 20 mM en DMSO y se almacena a -20 °C. Se prepara una solucion madre 10 mM del Compuesto I en DMSO y se almacena a -20 °C.

2. Celulas y condiciones de cultivo celular

25 Se obtienen celulas de carcinoma de mama de humano BT474 (ATCC HTB-26) y MDA-MB-231 (ATCC HTB-20) a partir de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockvilte, MD, EE.UU.). Las celulas BT474 se mantienen en medio Hybri-Care (ATCC) complementado con suero fetal de bovino al 10 % v/v y L-glutamina 2 mM. Las celulas MDA-MB-231 se cultivan en medio RPMI 1640 (Amimed, Allschwil, Suiza) complementado con suero fetal de bovino al 10 % v/v y L-glutamina 2 mM. Todos los medios se complementan con 100 pg/ml de penicilina/estreptomicina y 30 las celulas se mantienen a 37 °C en CO2 al 5 %.

3. Tratamiento celular y extraction celular

Las celulas BT474 y MDA-MB-231 se siembran a una densidad de 3,3 X 104 celulas/cm2 y 1,6 X 104 celulas/cm2, respectivamente, y se incuban durante 48 horas a 37 °C y CO2 al 5 %, antes del tratamiento con vehlculo de DMSO, RAD001 20 nM y/o diversas concentraciones del Compuesto I durante 24 horas. Los lisados celulares se preparan 35 de la siguiente manera. Las placas de cultivo se lavan una vez con PBS enfriada con hielo que contiene PMSF 1mM y una vez con tampon de extraccion enfriado con hielo [Hepes 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, p-glicerofosfato 25 mM, NaF 25 mM, EgTA 5 mM, EDTA 1 mM, PPi 15 mM, ortovanadato de sodio 2 mM, molibdato de sodio 10 mM, leupeptina (10 pg/ml), aprotinina (10 pg/ml), DTT 1 mM y PMSF 1 mM]. Los inhibidores de proteasa se obtienen a partir de SIGMA Chemical, St. Louis, Mo. Las celulas se extraen en el mismo tampon, que contiene NP-40 al 1 % 40 (SIGMA Chemicals). Los extractos se vuelven a homogenizar, se limpian mediante centrifugation, se dividen en allcuotas y se congelan a -80 °C. Las concentraciones de protelna se determinan con el Analisis de la Protelna BCA (Pierce, Rockford, IL, EE.UU.).

4. Inmunotransferencia

Veinte microgramos de los extractos celulares se resuelven mediante electroforesis en geles de poliacrilamida- 45 dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) desnaturalizantes al 12 % y se transfieren a filtros de difluoruro de polivinilideno (PVDF; Millipore Corporation, Bedford, MA, EE.UU.) mediante transferencia en humedo (1 hora a 250 mA) y se sondan durante la noche a 4 °C con los siguientes anticuerpos primarios:

anti-fosfo-Akt (Ser473) (clon 14-05; 1:2000) obtenido a partir de DAKO (Glostrup, Dinamarca) y diluido en PBS, Tween al 0,5 % v/v.

50 anti-fosfo-Akt (T308) (cat n.° 9275; 1:1000) obtenido a partir de Cell Signaling Technology (Beverly, MA, EE.UU.) y diluido en PBS, Tween al 0,1 % v/v.

anti-Akt (cat n.° 1085-1; 1:5000) obtenido a partir de Epitomics (Burlingame, CA, EE.UU.) y diluido en PBS, Tween al 0,5 % v/v.

Anti-actina (cat n.° MAB1501; 1:20,000) obtenido a partir de Chemicon (Billerica, MA, EE.UU.) y diluido en PBS, Tween al 0,1 % v/v.

5 Despues de la incubacion con el anticuerpo primario adecuado (anterior), las protelnas decoradas se manifiestan usando inmunoglobulinas anti-raton o anti-conejo conjugadas con peroxidasa de rabano picante seguido por quimioluminiscencia mejorada (kit ECL Plus; Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, Reino Unido) y se cuantifican usando el software Quantity One (Bio-Rad, Munich, Alemania).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una combinacion farmaceutica que comprende

a) el compuesto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, o un estereoisomero, tautomero o sal farmaceuticamente aceptable del mismo y

5 b) un inhibidor de mTOR que es everolimus.
2. Una combinacion farmaceutica segun la reivindicacion 1 para su uso en el tratamiento o prevencion de una enfermedad dependiente de diana en mamlferos de rapamicina (mTOR) cinasa que se selecciona entre cancer de mama, carcinoma de celulas renales, tumores gastricos, tumores neuroendocrinos, linfomas y cancer de prostata.
3. Una combinacion farmaceutica segun la reivindicacion 1 para su uso segun la reivindicacion 2 en la que cada 10 elemento de combinacion de la combinacion segun la reivindicacion 1 se administra simultanea o secuencialmente y

en cualquier orden.
4. Una composition farmaceutica que comprende la combinacion farmaceutica segun la reivindicacion 1.