ES2623480T3

ES2623480T3 - Uno o más extractos de Vigna marina, Cocos nucifera L. o Terminalia catappa L. para el tratamiento de heridas, trastornos de la piel y pérdida de cabello

Info

Publication number: ES2623480T3
Application number: ES10771898.3T
Authority: ES
Inventors: Graham Matheson
Original assignee: Cimtech Pty Ltd
Current assignee: Cimtech Pty Ltd
Priority date: 2009-05-04
Filing date: 2010-05-04
Publication date: 2017-07-11
Anticipated expiration: 2030-05-04
Also published as: CN104138487B; CN102458431A; CN104138487A; AU2010244969B2; JP6130441B2; EP2427202B1; US9649512B2; WO2010127396A1; KR20120014574A; HK1203821A1; JP2012526050A; US20120164246A1; CA2760812C; KR101798665B1; US20140294996A1; EP2427202A4; AU2016200876A1; AU2017248446A1; JP5834003B2; BRPI1007711A2

Abstract

Un extracto biológicamente activo que comprende una combinación de un extracto de Cocos nucifera L. y al menos un extracto seleccionado de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L., en el que el extracto de Cocos nucifera L. se obtiene de cáscara.

Description

DESCRIPCION

Uno o mas extractos de Vigna marina, Cocos nucifera L. o Terminalia catappa L. para el tratamiento de heridas, trastornos de la piel y perdida de cabello 5

CAMPO DE LA INVENCION

[0001] La presente invencion se refiere en general al uso de extractos de plantas y composiciones que comprenden los mismos para promover la cicatrizacion de heridas y para el tratamiento de trastornos de la piel.

10

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

[0002] La piel tiene una funcion importante de proteccion y es la primera defensa del cuerpo contra la enfermedad, proporcionando la epidermis una barrera contra la invasion microbiana. Por consiguiente, el primer

15 objetivo en el tratamiento de heridas, quemaduras, rozaduras y otro dano de la piel es el cierre y cicatrizacion rapidos de la herida para prevenir la infeccion.

[0003] La cicatrizacion de heridas es un proceso complejo que, en general, se considera que implica tres fases que se solapan: inflamacion, proliferacion y remodelado. La primera fase implica la coagulacion para obtener

20 hemostasia y el reclutamiento de neutrofilos para destruir bacterias y tejido necrotico, seguido del reclutamiento de macrofagos. Durante la segunda fase se produce angiogenesis en la que celulas endoteliales entran en el sitio de la herida, simultaneamente entran fibroblastos en el sitio de la herida y ayudan a producir tejido de granulacion. La formacion de tejido de granulacion permite que tenga lugar la reepitelizacion. Durante la fase final de remodelado, se igualan los niveles de produccion de colageno y degradacion y la herida cicatrizada es alterada lentamente para 25 lograr la resistencia maxima. La cicatrizacion de la herida se retrasa o altera cuando cualquiera de estos procesos no funciona adecuadamente o de manera oportuna. Esto puede conducir a una herida cronica que puede ser tanto un inconveniente importante para el individuo como un problema clinico costoso. Por lo tanto, una composicion que acelere el proceso natural del cuerpo de regeneracion del tejido dermico y epidermico es ventajoso.

30 [0004] Los autores de la presente invencion han encontrado sorprendentemente que extractos de plantas

descritos en el presente documento y composiciones que comprenden los mismos, promueven la cicatrizacion de heridas y reparacion de la piel, induciendo la proliferacion temprana del epitelio. Ademas, estas composiciones aumentan el espesor y la resistencia mecanica del sitio de la herida cicatrizada. Ademas, se ha descubierto que estas composiciones tambien pueden proporcionar otros beneficios terapeuticos.

35

RESUMEN DE LA INVENCION

[0005] De acuerdo con un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un extracto biologicamente activo que comprende una combinacion de un extracto de Cocos nucifera L. y al menos un extracto

40 seleccionado de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L., en el que el extracto de Cocos nucifera L. se obtiene de la cascara.

[0006] El extracto puede comprender ademas Hibiscus tiliaceus L.

45 [0007] Los extractos de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L. pueden ser de uno o mas de un

extracto de hoja, tallo o grano. Cuando se obtienen de Vigna marina (Burm.) Merr., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L., tipicamente el extracto es un extracto de hoja, tallo y/o grano. Cuando se obtiene de Cocos nucifera L., tipicamente el extracto es un extracto de cascara.

50 [0008] El extracto se puede preparar usando, y/o comprende, un aceite vegetal, un hidrocarburo y/o un

alcohol. El aceite vegetal se puede obtener, por ejemplo, de semillas o fruto. En una realizacion particular, el extracto se prepara usando, y/o comprende, aceite de coco. El aceite de coco puede ser aceite de coco virgen, aceite de coco refinado, aceite de coco hidrogenado o aceite de coco fraccionado.

55 [0009] Un segundo aspecto de la presente invencion proporciona una composicion que comprende dicho

extracto biologicamente activo, opcionalmente junto con uno o mas vehiculos, diluyentes o adyuvantes farmaceuticamente aceptables. La composicion puede tener ademas un extracto derivado de Hibiscus tiliaceus L.

[0010] Tipicamente la composicion se aplica por via topica a la piel o a un apendice epidermico de un sujeto.

Los apendices epidermicos incluyen cabello, foliculos pilosos, unas y cuticulas. En una realizacion, la composicion se usa de forma terapeutica y/o cosmetica para promover la cicatrizacion de heridas o en el tratamiento de trastornos de la piel. La herida puede ser una herida quirurgica o no quirurgica. Los ejemplos de heridas no quirurgicas incluyen quemaduras, rozaduras, cortes y abrasiones. Los trastornos de la piel incluyen, pero no se 5 limitan a atrofia cutanea asociada con la edad o atrofia cutanea asociada con esteroides. La atrofia cutanea asociada con la edad se puede asociar con la deficiencia de estrogenos.

[0011] En una realizacion adicional, la composicion se usa para la regeneracion del cabello. En otra realizacion mas, la composicion se usa para aumentar el espesor y/o la resistencia mecanica de la piel y/o un

10 apendice epidermico.

[0012] Un tercer aspecto de la presente invencion, proporciona un extracto de acuerdo con el primer aspecto o una composicion de acuerdo con el segundo aspecto, para usar para el tratamiento de heridas y/o para promover la cicatrizacion de heridas, comprendiendo el procedimiento aplicar a la piel de un sujeto una cantidad

15 terapeuticamente eficaz de dicho extracto o dicha composicion. Un cuarto aspecto de la presente invencion proporciona un extracto de acuerdo con el primer aspecto o una composicion de acuerdo con el segundo aspecto para usar para el tratamiento de un trastorno de la piel. Dichos usos comprenden aplicar una cantidad terapeuticamente eficaz de dicho extracto o composicion a la piel de un sujeto.

20 [0013] Tambien se describe el extracto de acuerdo con el primer aspecto o composicion de acuerdo con el

segundo aspecto para usar para la regeneracion del cabello.

[0014] Tambien se describe el extracto de acuerdo con el primer aspecto o composicion de acuerdo con el segundo aspecto para usar para promover el crecimiento del cabello.

25

[0015] Tambien se describe el extracto de acuerdo con el primer aspecto o composicion de acuerdo con el segundo aspecto para usar para aumentar el espesor y/o resistencia mecanica de la piel y/o un apendice epidermico.

30 [0016] La presente invencion proporciona el uso de un extracto de acuerdo con el primer aspecto o una

composicion de acuerdo con el segundo aspecto para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de trastornos de la piel y/o el tratamiento de heridas y/o la promocion de cicatrizacion de heridas.

[0017] Un aspecto adicional de la presente invencion proporciona un procedimiento cosmetico que 35 comprende administrar un extracto de acuerdo con el primer aspecto o una composicion de acuerdo con el segundo

aspecto. Dicho procedimiento es adecuado para aumentar el espesor y/o la resistencia mecanica de la piel y/o un apendice epidermico.

Breve descripcion de los dibujos

40

[0018] La presente invencion ahora se describira, solo a modo de ejemplo no limitante, con referencia a los dibujos que acompanan, en los que:

La figura 1 muestra cambios histologicos en sitios de heridas creados quirurgicamente tratados (A, C, E y G) y no 45 tratados (B, D, F y H) en ratas hembra sanas de 12 semanas de edad, a los 3, 5, 7 y 10 dias despues de la operacion. Las heridas tratadas se sometieron a una aplicacion diaria de extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco. Las muestras de piel se tineron con hematoxilina y eosina y se muestran con x400 aumentos.

50 La figura 2 muestra el aumento de la resistencia mecanica de la herida (A) y la resistencia mecanica media de la herida (B) para sitios de heridas de animales tratados (ensayo) y animales no tratados (control) frente al transcurso de 10 dias. Las heridas tratadas se sometieron a una aplicacion diaria de una combinacion de extracto de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco. La figura 2A muestra la correlacion lineal y la figura 2B se adapta al modelo de curva de cicatrizacion no lineal.

55

La figura 3 muestra diferencias histologicas en piel tratada (B, D y F) y no tratada (A, C y E) de ratas deficientes en estrogenos (ovarios retirados a las 6 semanas de edad) de 18 meses de edad. La piel tratada se sometio a una aplicacion diaria de extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco, durante 7 dias. Las muestras de piel se tineron con hematoxilina y eosina y

se muestran con x400 aumentos.

La figura 4 muestra el espesor epitelial de piel deficiente en estrogenos tratada (aplicacion diaria de un extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en aceite 5 de coco) y control (no tratada) despues de 7 dias de tratamiento (A), y de piel deficiente en estrogenos adyacente a la zona de tratamiento despues de 21 dias de tratamiento (B).

La figura 5 muestra el porcentaje de cambio en el espesor epitelial en piel deficiente en estrogenos despues de 7 dias de tratamiento que comprende la aplicacion diaria de un extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., 10 Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. Barra 1 (Pre-extraccion), el extracto esta en aceite de coco; Barra 2 (extracto en etanol), separacion del aceite de coco del extracto post-extraccion; Barra 3 (post- extraccion), la fraccion de aceite de coco residual despues de extraccion en etanol (Barra 2).

La figura 6 muestra perfiles histologicos de la piel de ratas de 10 a 14 semanas de edad despues de la aplicacion 15 diaria durante 7 dias de: A) sin tratamiento; B) aceite ce coco; C) Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco, D) Vigna marina (Burm.) Merr. en etanol; E) Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco despues de extraccion con etanol e isopentano; F) Terminalia catappa L. en aceite de coco; G) Terminalia catappa L. en hidrocarburo despues de extraccion en etanol; I) Terminalia catappa L. en aceite de coco despues de extraccion con etanol e hidrocarburo; y J) Terminalia catappa L. en aceite de coco despues de extraccion con etanol e hidrocarburo. Las muestras de piel 20 se tineron con hematoxilina y eosina y se muestra con x400 aumentos.

La figura 7 muestra el porcentaje de cambio en el espesor epitelial de la piel de ratas de 14 semanas de edad despues de 7 dias de tratamiento con A) extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco (Planta P); extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco (Planta N); extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco 25 (Planta K); e Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco (Planta A), y B) combinacion en parejas de los extractos mencionados antes.

La figura 8 muestra diferencias histologicas en la piel de ratas de 10 a 14 semanas de edad tratadas con un extracto de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L. y Terminalia catappa L. en aceite de coco (100%) preparado como 30 se describe en el ejemplo 10, en concentraciones de A) 0%; B) 1%; C) 5%; D) 10%; E) 50%; y F) 100%. Las muestras de piel se tineron con hematoxilina y eosina y se muestra con x400 aumentos.

La figura 9 muestra el espesor epitelial (A) y el porcentaje de cambio en el espesor epitelial (B) de la piel de ratas de 10 a 14 semanas de edad, tratadas con una aplicacion diaria de un extracto combinado de Vigna marina (Burm.) 35 Merr., Cocos nucifera L. y Terminalia catappa L. en aceite de coco (NPK en aceite), preparado como se describe en el ejemplo 10, en concentraciones de 0%, 1%; 5%; 10%, 50%, 100%.

La figura 10 muestra la histologia de la piel tratada con un extracto de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L. y Terminalia catappa L. en aceite de coco al A) 30% en clorhexidina; B) 5% en crema hidratante Hydroderm; C) 25% 40 en disolucion de cloranfenicol; D) 50% en pomada de cloranfenicol; y E) 0% en pomada de cloranfenicol.

Descripcion detallada de la invencion

[0019] Los articulos “un” y “una” se usan en el presente documento para referirse a uno o mas de uno (es 45 decir, a al menos uno) del objeto gramatical del articulo. A modo de ejemplo, “un elemento” significa un elemento o

mas de un elemento. A lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones que siguen, salvo que el contexto requiera otra cosa, la palabra “comprenden” y variaciones tales como “comprende” o “que comprende”, se entendera que implican la inclusion de un numero entero o etapa o grupo de numeros enteros o etapas expuestos, pero no la exclusion de cualquier otro numero entero o etapa o grupo de numeros enteros o etapas.

50

[0020] Como se usa en el presente documento, el termino “extracto” se refiere a una preparacion activa obtenida de una o mas plantas. En el contexto de la memoria descriptiva, por “activo” se entiende que el extracto es capaz de producir un beneficio terapeutico o cosmetico deseado como se describe en el presente documento. Un extracto se obtiene por un procedimiento de “extraccion” que los expertos en la materia entenderan, en terminos

55 generales, que comprende tratar materia vegetal con un disolvente, un liquido o un fluido supercritico para disolver la preparacion activa y separarla de la materia vegetal residual no deseada. Un extracto puede ser en forma liquida (por ejemplo, como una decoccion, solucion, infusion o tintura) o forma solida (por ejemplo, como un polvo o granulos). La expresion “extracto combinado” como se usa en el presente documento, se refiere a un extracto preparado a partir de mas de una especie de planta. En un extracto combinado, la materia vegetal de cada una de

las especies de planta se puede someter al procedimiento de extraccion junta o por separado. Es decir, la materia de algunas o de todas las especies se puede combinar antes de la adicion del disolvente, liquido o fluido supercritico, y/o la materia de algunas o de todas las especies se puede tratar independientemente con un disolvente, liquido o fluido supercritico y posteriormente se combinan las preparaciones asi obtenidas. Asi pues, se 5 pueden usar los mismos o diferentes disolventes (o liquidos o fluidos supercriticos) para extraer la preparacion activa de las diferentes especies. Los terminos “extracto” y “extracto combinado” se pueden usar de forma intercambiable a lo largo de esta memoria descriptiva.

[0021] Los terminos “promueve”, “promocion” y variaciones de los mismos como se usan en el presente

10 documento en el contexto de cicatrizacion de heridas, se refieren a la capacidad de un extracto o composicion de la invencion para potenciar o aumentar la velocidad o grado de accion del o de los procesos fisiologicos naturales implicados en la cicatrizacion de heridas y la capacidad de un extracto o composicion de la invencion para potenciar o aumentar la velocidad de crecimiento del cabello.

15 [0022] Como se usa en el presente documento, los terminos “tratar”, “tratamiento”, “prevenir” y “prevencion”

se refieren a todos y cada uno de los usos que curan una afeccion o sintomas, previenen el establecimiento de una afeccion o enfermedad, o de otra manera previenen, impiden, retrasan o invierten el progreso de una afeccion o enfermedad u otros sintomas no deseables en modo alguno. Por lo tanto, los terminos “tratar” y “prevenir” y similares, deben considerarse en su contexto mas amplio. Por ejemplo, el tratamiento no implica necesariamente

20 que un paciente sea tratado hasta la recuperacion total.

[0023] Como se usa en el presente documento, las expresiones “cantidad eficaz” y “dosis eficaz” incluyen en

su significado una cantidad o dosis no toxica pero suficiente de un agente o compuesto para proporcionar el efecto deseado. La cantidad o dosis exacta necesaria variara de un sujeto a otro dependiendo de factores tales como la

25 especie que se esta tratando, la edad y estado general del sujeto, la gravedad de la afeccion que se esta tratando, el agente particular que se administra y el modo de administracion etc. Por lo tanto, no se puede especificar una “cantidad eficaz” o “dosis eficaz” exacta. Sin embargo, para cualquier caso dado una “cantidad eficaz” o “dosis eficaz” adecuada la puede determinar en experto en la materia usando solo experimentacion rutinaria.

30 [0024] Como se usa en el presente documento, el termino “sujeto” incluyen seres humanos primates,

animales de ganaderia (p. ej., ovejas, cerdos, vacas, caballos, burros), animales de ensayo de laboratorio (p. ej., ratones, conejos, ratas, cobayas), animales de compania (p. ej., perros, gatos) y animales salvajes cautivos (p. ej., zorros, canguros, ciervos). Tipicamente, el sujeto es un ser humano o animal de ensayo de laboratorio. Incluso mas tipicamente, el sujeto es un ser humano.

35

[0025] La presente invencion se basa en el sorprendente descubrimiento de los autores de la invencion, como se ilustra en el presente documento, de que el uso de extractos de diferentes plantas de las islas del Pacifico tienen actividad biologica cuando se administran a la piel de mamiferos, promoviendo la cicatrizacion de heridas y la reparacion de la piel, aumentando el espesor epitelial y aumentando la resistencia mecanica de la piel. Sin querer

40 estar limitados por la teoria, se sugiere que estas actividades biologicas resultan de los extractos, sea directa o indirectamente, induciendo la proliferacion temprana del epitelio.

[0026] Por consiguiente, un aspecto de la presente invencion proporciona un extracto biologicamente activo de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. y/o Hibiscus tiliaceus L.

45

[0027] Los autores de la invencion han encontrado sorprendentemente que el o los extractos de Cocos nucifera L. de cascara, con uno o mas extractos de Vigna marina (Burm.) Merr. o Terminalia catappa L. promueven el proceso natural del cuerpo de regeneracion de tejido dermico y epidermico.

50 [0028] Por consiguiente, una combinacion de un extracto de Cocos nucifera L. obtenido de cascara, con al

menos un extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L., y composiciones que contienen la misma, son terapeutica y/o cosmeticamente utiles en la promocion de cicatrizacion de heridas o en el tratamiento de trastornos de la piel en un sujeto. La combinacion puede comprender ademas Hibiscus tiliaceus L. La herida puede ser una herida quirurgica o no quirurgica. Los ejemplos de heridas no quirurgicas incluyen cortes, quemaduras,

55 rozaduras y abrasiones. Los extractos de la invencion se pueden usar en la promocion post-quirurgica de la cicatrizacion de heridas inducidas quirurgicamente. Los trastornos de la piel que se pueden tratar de acuerdo con realizaciones de la invencion incluyen, pero no se limitan a atrofia cutanea asociada con la edad o atrofia cutanea asociada con esteroides. La atrofia cutanea asociada con la edad puede estar asociada con la deficiencia de estrogenos.

[0029] Los expertos en la materia apreciaran que los extractos y composiciones de la invencion tambien

tienen aplicacion en cualquier circunstancia en la que es deseable promover la generacion o regeneracion de tejido dermico o epidermico o un apendice epidermico. Para los fines de la presente invencion, apendices epidermicos 5 incluyen, pero no se limitan a cabello, foliculos pilosos, unas y cuticulas. A modo de ejemplo, se pueden usar extractos y composiciones de la invencion para promover la regeneracion de foliculos pilosos, cabello y unas. Los extractos y composiciones de la invencion tambien se pueden usar para aumentar el espesor y/o resistencia mecanica de la piel y/o un apendice epidermico.

10 [0030] Los extractos de la invencion pueden ser extractos acuosos, basados en aceite y/o disolvente

organico, obtenidos por extraccion unica, combinada y/o sucesiva de cualquier materia vegetal disponible tal como hojas, raices, corteza, frutos, brotes, nueces, semillas, flores y/o madera. Los expertos en la materia conocen los procedimientos de extraccion adecuados y los disolventes y liquidos adecuados para la extraccion. Los disolventes acuosos (por ejemplo, agua, acidos, bases); aceites (por ejemplo, de coco); y disolventes organicos, que pueden ser 15 polares (tales como alcoholes, por ejemplo, etanol), no polares (por ejemplo, hexano) y/o halogenados (por ejemplo, diclorometano), usados para la extraccion se pueden usar de forma secuencial para la extraccion o en mezcla en combinacion. Es importante, como se ilustra en el presente documento, que la actividad del extracto se mantiene cuando se extrae en aceite de coco, disolventes polares (p. ej., etanol) o disolventes no polares (p. ej., isopentano). La extraccion con fluidos supercriticos usando, por ejemplo, nitrogeno o dioxido de carbono supercritico, tambien se 20 puede usar de acuerdo con la invencion para obtener extractos.

[0031] Ademas, los expertos en la materia apreciaran que un extracto de la invencion se puede someter a una o mas etapas de post-extraccion para, por ejemplo, aumentar o mantener la estabilidad del extracto, modificar o cambiar la forma fisica del extracto o ayudar en la formulacion del extracto en una composicion para la

25 administracion a un sujeto. A modo de ejemplo, solo un extracto en forma liquida se puede liofilizar para producir una forma solida del extracto.

[0032] Los extractos de la presente invencion se pueden obtener de cualquier materia vegetal adecuada. La materia vegetal adecuada incluye hojas, raices, corteza, frutos, brotes, nueces, semillas, flores o madera. La materia

30 vegetal puede ser, por ejemplo, fresca, seca o liofilizada. Para cualquier especie de planta dada, se puede usar mas de una materia vegetal para la produccion de extractos. Cuando se obtiene de Vigna marina (Burm.) Merr., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L., tipicamente el extracto es un extracto de hojas, tallos y/o granos. Cuando se obtiene de Cocos nucifera L., tipicamente el extracto es un extracto de cascara fresca.

35 [0033] El o los extractos de la invencion se pueden administrar de acuerdo con la presente invencion en

forma de composiciones farmaceuticas, cuyas composiciones pueden comprender uno o mas vehiculos excipientes o diluyentes farmaceuticamente aceptables. Los extractos se pueden combinar ademas con otros agentes terapeuticos o cosmeticos, por ejemplo, pero no limitado a antibioticos, agentes antimicrobianos, antisepticos, anestesicos, cremas hidratantes o bases cosmeticas. Dichas composiciones se pueden administrar por cualquier via 40 conveniente o adecuada tal como por las vias parenteral, oral, nasal o topica. Tipicamente, para el proposito de lograr los beneficios terapeuticos y cosmeticos como se describen en el presente documento, la via de administracion puede ser topica. Alternativamente, la administracion por inyeccion, por ejemplo, inyeccion subcutanea, tambien puede ser adecuada dependiendo del resultado deseado.

45 [0034] Se entendera que el nivel de dosis especifico de una composicion de la invencion para cualquier

individuo particular, dependera de una variedad de factores que incluyen, por ejemplo, la actividad del o de los extractos especificos usados, la edad, peso corporal, salud general y dieta del individuo que se va a tratar, el tiempo de administracion, la estabilidad del o de los extractos, el sitio de aplicacion en el cuerpo, y la combinacion con cualquier otro tratamiento o terapia. Las administraciones individuales o multiples se pueden llevar a cabo con 50 niveles de dosis y un esquema determinado segun se requiera dependiendo de las circunstancias y el individuo que se va a tratar. Las posologias adecuadas las puede determinar facilmente el experto en la materia. Puede ser aplicable un amplio intervalo de dosis. Considerando un sujeto humano, por ejemplo, se puede administrar de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 1 mg de extracto por kilogramo de peso corporal al dia. Las posologias se pueden ajustar para proporcionar la respuesta terapeutica optima. Por ejemplo, se pueden administrar 55 varias dosis divididas cada hora, de forma diaria, semanal, mensual, o en cualquier otro intervalo de tiempo, o la dosis se puede reducir proporcionalmente segun indiquen las exigencias de la situacion.

[0035] En general, una dosis eficaz se espera que este en el intervalo de aproximadamente 0,0001 mg a

aproximadamente 1000 mg por kg de peso corporal por 24 horas; tipicamente, de aproximadamente 0,001 mg a

aproximadamente 750 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 500 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 500 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 250 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 250 mg por kg de peso corporal por 24 horas. Mas 5 tipicamente, un intervalo de dosis eficaz se espera que este en el intervalo de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 25 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de

10 aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 20 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 15 mg por kg de peso corporal por 24 horas.

[0036] Las formulaciones topicas tipicamente comprenden uno o mas extractos de la invencion junto con uno o mas vehiculos aceptables, y opcionalmente cualesquiera otros ingredientes terapeuticos. Las formulaciones

15 adecuadas para administracion topica pueden estar en cualquier forma adecuada, formuladas por ejemplo, como linimentos, lociones, cremas, geles, pomadas o pastas. Los ejemplos de vehiculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables son agua desmineralizada o destilada; solucion salina; aceites vegetales tales como aceite de cacahuete, aceite de cartamo, aceite de oliva, aceite de semilla de algodon, aceite de maiz, aceite de sesamo, aceite de arachis o aceite de coco; aceites de silicona, incluyendo polisiloxanos, tales como metilpolisiloxano, fenilpolisiloxano y

20 metilfenilpolisiloxano; siliconas volatiles; aceites minerales tales como parafina liquida, parafina blanda o escualeno; derivados de celulosa tales como metilcelulosa, etilcelulosa, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica o hidroxipropilmetilcelulosa; alcanoles inferiores, por ejemplo etanol o isopropanol; aralcanoles inferiores; polialquilenglicoles inferiores o alquilenglicoles inferiores, por ejemplo, polietilenglicol, polipropilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, 1,3-butilenglicol o glicerina; esteres de acidos grasos tales como palmitato de isopropilo, miristato de

25 isopropilo u oleato de etilo; polivinilpirrolidona; agar, carragenano; goma de tragacanto o goma arabiga, y vaselina. Tipicamente, el vehiculo o vehiculos formaran de 10% a 99,9% en peso de las composiciones.

[0037] Las lociones de acuerdo con la presente invencion incluyen las adecuadas para la aplicacion en la piel o en un apendice epidermico. Las lociones o linimentos para aplicar a la piel tambien pueden incluir un agente para

30 acelerar el secado y enfriar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o una crema hidratante tal como glicerol, o aceite tal como aceite de coco, aceite de ricino o aceite de arachis.

[0038] Las cremas, pomadas o pastas de acuerdo con la presente invencion son formulaciones semisolidas del extracto para la aplicacion externa. Se pueden hacer mezclando el extracto en forma finamente dividida o de

35 polvo, solo o en solucion o suspension en un fluido acuoso o no acuoso, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, blanda o liquida, glicerol, cera de abeja, un jabon metalico; un mucilago; un aceite de origen natural tal como aceite de coco, almendra, maiz, arachis, ricino u oliva; lanolina o sus derivados, o un acido graso tal como acido estearico u oleico con un alcohol tal como propilenglicol o Macrogol.

40

[0039] Los extractos y/o composiciones tambien pueden impregnar parches transdermicos, escayolas y apositos, tales como vendas o apositos hidrocoloides, preferiblemente en forma liquida o semiliquida. Solo a modo de ejemplo, aplicados de forma topica, los extractos y composiciones de acuerdo con la presente invencion se pueden formular en, o con, productos para el cuidado de las unas, mascarillas faciales y limpiadores, geles y

45 espumas para el cabello, tintes para el cabello, colorantes y blanqueantes, productos para ondular, alisar y fijar el cabello, productos de limpieza tales como champus, productos acondicionadores tales como lociones y cremas, aceites, productos para el afeitado tales como cremas y geles, lavados para la piel, espumas, preparaciones de bano y ducha tales como aceites y geles, productos hidratantes tales como lociones, cremas, geles y espumas, productos antiarrugas y productos antienvejecimiento.

50

[0040] En circunstancias particulares, por ejemplo, en la promocion post-quirurgica de la cicatrizacion de heridas o el tratamiento de trastornos de la piel particulares, la administracion de composiciones por inyeccion, tipicamente inyeccion subcutanea, puede ser adecuada, Las formas farmaceuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas esteriles (cuando son solubles en agua) o dispersiones y polvos esteriles para la

55 preparacion extemporanea de soluciones inyectables esteriles. Deben ser estables en las condiciones de fabricacion y almacenamiento y deben preservarse frente a la accion contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehiculo puede ser un disolvente o un medio de dispersion que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol liquido, y similares), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, usando un recubrimiento tal como lecitina,

manteniendo el tamano de particulas requerido en el caso de dispersion y mediante el uso de tensioactivos. La prevencion de la accion de microorganismos se puede llevar a cabo mediante diferentes agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, timerosal y similares. En muchos casos, sera preferible incluir agentes isotonicos, por ejemplo, azucares o cloruro sodico. La absorcion prolongada de las 5 composiciones inyectables se puede llevar a cabo mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

[0041] Las soluciones inyectables esteriles se preparan incorporando los compuestos activos en la cantidad requerida en el disolvente adecuado con varios de los otros ingredientes enumerados antes, segun se requiera,

10 seguido de esterilizacion por filtracion. En general, las dispersiones se preparan incorporando el o los diferentes extractos esterilizados en un vehiculo esteril que contiene el medio de dispersion basico y los otros ingredientes necesarios de los citados antes. En el caso de polvos esteriles para la preparacion de soluciones inyectables esteriles, los procedimientos de preparacion preferidos son secado con vacio y la tecnica de liofilizacion que da un polvo del extracto mas cualquier extracto deseado adicional de su solucion esterilizada por filtracion previamente.

15

[0042] La presente invencion contempla terapias de combinacion, en las que los extractos o composiciones como se describen en el presente documento, se coadministran con otros agentes o tratamientos adecuados que pueden facilitar el efecto terapeutico o cosmetico adecuado. Por ejemplo, se puede buscar ayudar a cicatrizar heridas con antibioticos, agentes antimicrobianos u otros agentes de cicatrizacion de heridas en combinacion con

20 extractos o composiciones de la invencion. Por “coadministrado” se entiende la administracion simultanea en la misma formulacion o en dos formulaciones diferentes por la misma o diferentes vias, o la administracion secuencial por la misma o diferentes vias. Por administracion “secuencial” se entiende una diferencia de tiempo de segundos, minutos, horas o dias entre la administracion de los dos tipos de agentes. Los agentes se pueden administrar en cualquier orden.

25

[0043] La referencia en esta memoria descriptica a cualquier publicacion previa (o informacion derivada de la misma), o a cualquier asunto que es conocido, no es y no debe considerarse como un reconocimiento o admision o cualquier forma de sugerencia de que la publicacion previa (o informacion derivada de la misma) o asunto conocido, forma parte del conocimiento general comun en el ambito de trabajo al que se refiere esta memoria descriptiva.

30

[0044] La presente invencion ahora se describira con referencia a los siguientes ejemplos especificos, que no deben considerarse de ninguna forma limitantes del alcance de la invencion.

EJEMPLOS

35

Ejemplo 1 - Preparacion de un extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco

[0045] Se anadio aceite de coco (200 ml) a hojas frescas molidas de Vigna marina (Burm.) Merr. (100 g) y 40 hojas frescas molidas de Terminalia catappa L. (100 g). La mezcla se puso en un crisol en un bano de agua a 100°C

durante 20 min. La mezcla se retiro del calor y se filtro inmediatamente y se prenso para extraer el aceite de coco. El aceite de coco resultante, que contenia extractos de Vigna marina (Burm.) Merr., y Terminalia catappa L., se anadio a la cascara fresca machacada de una nuez verde de Cocos nucifera L. (100 g) y la corteza raspada de Hibiscus tiliaceus L. (100 g). La mezcla se dejo reposar durante 4 h y despues se filtro y prenso para extraer el aceite de 45 coco.

[0046] El aceite de coco despues se invirtio y se almaceno a menos de 20°C hasta que el aceite de coco solidifico. Cualquier resto de humedad o solido en la mezcla se separo por decantacion del aceite de coco solidificado. Despues, el aceite de coco se calento en un bano de agua caliente a aproximadamente 56°C y se filtro.

50 El filtrado resultante contenia un extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L.

Ejemplo 2 - Promocion de la cicatrizacion de heridas

55 [0047] Se llevo a cabo un estudio para evaluar la capacidad de cicatrizacion de heridas de extractos de Vigna

marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. preparados como se describe en el ejemplo 1. Para el estudio, se usaron ratas hembra sanas de 12 semanas de edad como modelo de cicatrizacion optima. Las heridas se crearon quirurgicamente con anestesia y en condiciones esteriles, y se cerraron por primera intencion (se administro material de sutura a todos los tejidos incluyendo la piel) con antibioticos

intraoperatorios y alojamiento higienizado. Se aplico una dosis diaria de 1 ml del extracto por via topica al sitio quirurgico. El extracto se aplico diariamente durante un total de 10 dias. Los animales de control no recibieron tratamiento. A los 3, 5, 7 y 10 dias despues de crear el sitio, se evaluo la histologia de la herida y se ensayo en la herida la resistencia mecanica por traccion hasta fallo del ensayo.

5

[0048] La histologia de la herida de las heridas no tratadas (control) y las heridas tratadas (ensayo) se muestra en las figuras 1A a 1H. La histologia de las heridas tratadas muestra una proliferacion temprana del epitelio que cubre la herida en los 3 primeros dias, seguido de una infiltracion de celulas en la herida para empezar la regeneracion y cicatrizacion completa el dia 7 con pruebas minimas de herida el dia 10. Tambien se observaron

10 pruebas de la cicatrizacion de la herida en las heridas no tratadas el dia 10, pero esto ocurrio a una velocidad mas lenta que la observada en las heridas tratadas, demostrando asi que el extracto potencia la velocidad del proceso de cicatrizacion natural.

[0049] Se muestra una representacion grafica del cambio en la resistencia mecanica del sitio de la herida 15 durante el tratamiento en la figura 2A. Se encontro que los sitios de heridas tratados tenian una resistencia mecanica

un 22% mas alta que los sitios de heridas no tratados. La figura 2B muestra que cuando los datos de resistencia mecanica se adaptaron a una curva de cicatrizacion no lineal (para reflejar el patron de cicatrizacion) se mantienen las diferencias.

20 [0050] Los resultados del estudio muestran que el tratamiento de una herida con el extracto combinado del

ejemplo 1, promueve la cicatrizacion de la herida y aumenta la resistencia mecanica de la piel en el sitio de la herida.

Ejemplo 3 - Tratamiento de piel deficiente en estrogenos

25 [0051] Se llevo a cabo un estudio para evaluar el efecto de un extracto de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos

nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. preparado como se describe en el ejemplo 1, en piel deficiente en estrogenos. En el estudio se aplico una dosis diaria de 1 ml de extracto por via topica a la superficie epitelial de los lomos de ratas (10 animales) deficientes en estrogenos (ovarios retirados a las 6 semanas de edad), de 18 meses de edad. El extracto se aplico diariamente durante un total de 7 dias. Los animales de control eran 30 ratas deficientes en estrogenos (ovarios retirados a las 6 semanas de edad) sin aplicacion topica del extracto (10 animales). A los 7 dias se evaluo la histologia de la piel tratada y de control y el espesor epitelial.

[0052] El perfil histologico de la piel tratada y de control de animales individuales a los 7 dias, se muestra en

las figuras 3A a 3F. La histologia de la piel tratada comparada con el control muestra un epitelio grueso altamente

35 celular y un aumento relativo en la celularidad de la matriz de colageno.

[0053] Se muestra en la figura 4A una representacion grafica del espesor epitelial de la piel de animal tratado

y no tratado. Se observo un aumento medio de 145% en el espesor epitelial de la piel en los animales tratados comparado con los no tratados.

40

[0054] Se llevo a cabo un estudio identico con excepcion de que el extracto se aplico diariamente durante 3 semanas (10 animales). A los 21 dias, se determino el espesor epitelial de la piel tratada (sitio de aplicacion y sitio adyacente) y no tratada (control). Este estudio demuestra que el aumento del espesor epitelial y la celularidad de la matriz de colageno observados a los 7 dias (vease antes) se mantenia a los 21 dias de tratamiento. El espesor

45 epitelial despues de 21 dias de tratamiento se muestra en la figura 4B. Los resultados en la figura 4B muestran que el efecto no se ve solo en la zona de aplicacion sino tambien en las zonas adyacentes a la zona aplicada, lo que implica que solo se requiere una pequena dosis para producir los efectos a la piel deficiente en estrogenos envejecida.

50 [0055] Tambien se demostro que la actividad biologica del extracto basado en aceite de coco es soluble en

etanol. El extracto en aceite de coco (pre-extraccion) se mezclo energicamente con etanol 1:1 durante 5 min hasta que la mezcla era homogenea y despues se dejo reposar durante 5 min, despues la mezcla se congelo y se separo el etanol (extracto en etanol) para dejar solo el aceite de coco (post-extraccion). A los 7 dias, se determino el espesor epitelial. La figura 5 muestra el porcentaje de cambio en el espesor epitelial de piel deficiente en estrogenos 55 despues de tratamiento. Los resultados demuestran que la actividad del extracto se mantiene cuando se extrae en etanol.

Ejemplo 4 - Preparacion de extractos de Vigna marina (Burm.) Merr.

4.1: Vigna marina (Burm.) Merr., extracto en aceite de coco

[0056] Hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (100 g) se sumergieron en aceite de coco (100 ml). El extracto se preparo por prensado en frio de la mezcla de Vigna marina (Burm.) Merr. y

5 aceite de coco; o por calentamiento de la mezcla. El prensado en frio se llevo a cabo poniendo la mezcla de Vigna marina (Burm.) Merr. y aceite de coco dentro de una cafetera de embolo nueva y dejando asentar la mezcla durante 1 h, despues se bajo el embolo extrayendo asi el aceite. La mezcla se dejo asentar durante 5 min mas y se volvio a bajar el embolo para liberar mas aceite. Este procedimiento se repitio 5 veces, hasta que ya no se obtuvo mas aceite. Cuando el extracto se preparo por calentamiento, la mezcla de Vigna marina (Burm.) Merr. y aceite de coco 10 se calento en un crisol en un bano de aceite a 100°C durante 20 min, se retiro del calor y despues se filtro y prenso inmediatamente para extraer el aceite de coco. Cualquier humedad o solido restante en el extracto despues del prensado en frio o calentamiento y filtracion se separaron por inversion del extracto de aceite de coco y almacenamiento a menos de 20°C hasta que el aceite de coco solidifico y despues decantacion del aceite de coco solidificado; o por decantacion en un embudo de separacion.

15

4.2: Extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco despues de extraccion en etanol

[0057] Las hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (1000 g) se sumergieron en etanol al 95-100% (2000 ml) y se dejaron en remojo durante 24 h. La extraccion en etanol de Vigna marina (Burm.)

20 Merr. se agito con aceite de coco (250 ml). El aceite de coco se decanto de la disolucion despues de dejar en reposo durante al menos 2 h en un recipiente de decantacion; o por dilucion de la disolucion de etanol del 95% a una concentracion menor, teoricamente pero no necesariamente etanol al 50% y despues se decanto tras asentamiento de las capas. Cualquier humedad o solido restante en la mezcla se separaron por inversion del extracto de aceite de coco y almacenamiento a menos de 20°C hasta que el aceite de coco solidifico y despues decantacion del aceite de 25 coco solidificado; o por decantacion en un embudo de separacion.

4.3: Extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco despues de extraccion en etanol e isopentano

[0058] Las hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (1000 g) se sumergieron en 30 etanol al 95-100% (2000 ml) y se dejaron en remojo durante 6 h, despues se separo el etanol y la Vigna marina

(Burm.) Merr. se dejo en remojo en una segunda parte alicuota de etanol (2000 ml) durante 6 h adicionales.

[0059] El etanol resultante se agito con hexano, pentano, metilbutano o un hidrocarburo equivalente o fluoro/cloro/bromo-hidrocarburo (250 ml). El hidrocarburo se decanto de la disolucion despues de reposar durante al

35 menos 2 h en un recipiente de decantacion; o por dilucion de la disolucion de etanol del 95% a una concentracion menor, teoricamente pero no necesariamente etanol al 50% y despues se decanto despues de asentamiento de las capas.

[0060] Se anadio aceite de coco (250 ml) a la disolucion de hidrocarburo y se calento por encima del punto 40 de ebullicion del hidrocarburo (por ejemplo, cuando se uso hexano la disolucion se calento a 67°C) para evaporar el

hidrocarburo. Se anadio etanol al 95% (250 ml) a la disolucion de hidrocarburo y se calento por encima del punto de ebullicion del hidrocarburo.

4.4: Extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en hidrocarburo despues de extraccion en etanol 45

[0061] Las hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (1000 g) se sumergieron en etanol al 95-100% (2000 ml) y se dejaron en remojo durante 6 h, despues se separo el etanol y la Vigna marina (Burm.) Merr. se dejo en remojo en una segunda parte alicuota de etanol (2000 ml) durante 6 h adicionales. La disolucion de etanol resultante se agito en hexano, pentano, metilbutano o un hidrocarburo equivalente o

50 fluoro/cloro/bromo-hidrocarburo (250 ml). El hidrocarburo se decanto de la disolucion despues de reposar durante al menos 2 h en un recipiente de decantacion; o por la dilucion de la disolucion de etanol del 95% a una concentracion menor, teoricamente pero no necesariamente etanol al 50% y despues se decanto despues de asentamiento de las capas.

55 4.5: Extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en etanol despues de extraccion en etanol e hidrocarburo

[0062] Las hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (1000 g) se sumergieron en etanol al 95-100% (2000 ml) y se dejaron en remojo durante 6 h, despues se separo el etanol y la Vigna marina (Burm.) Merr. se dejo en remojo en una segunda parte alicuota de etanol (2000 ml) durante 6 h adicionales. La

disolucion de etanol resultante se agito hexano, pentano, metilbutano o un hidrocarburo equivalente o fluoro/cloro/bromo-hidrocarburo (250 ml). El hidrocarburo se decanto de la disolucion despues de reposar durante al menos 2 h en un recipiente de decantacion; o por la dilucion de la disolucion de etanol del 95% a una concentracion menor, teoricamente pero no necesariamente etanol al 50% y despues se decanto despues de asentamiento de las 5 capas. Se anadio etanol al 95% (250 ml) a la disolucion de hidrocarburo y se calento por encima del punto de ebullicion del hidrocarburo (por ejemplo, cuando se uso hexano la disolucion se calento a 672C) para evaporar el hidrocarburo.

Ejemplo 5 - Preparacion de extractos de Cocos nucifera L.

10

5.1: Extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco

[0063] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.1 con la excepcion de que se uso la cascara fresca de nuez joven de Cocos nucifera L. (100 g).

15

5.2: Extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco despues de extraccion en etanol

[0064] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.2 con la excepcion de que se uso la cascara fresca de nuez joven de Cocos nucifera L. (1000 g).

20

5.3: Extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco despues de extraccion en etanol e hidrocarburo

[0065] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.3 con la excepcion de que se uso la cascara fresca de nuez joven de Cocos nucifera L. (1000 g).

25

5.4: Extracto de Cocos nucifera L. en hidrocarburo despues de extraccion en etanol

[0066] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.4 con la excepcion de que se uso la cascara fresca de nuez joven de Cocos nucifera L. (1000 g).

30

5.5: Extracto de Cocos nucifera L. en etanol despues de extraccion en etanol e hidrocarburo

[0067] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.5 con la excepcion de que se uso la cascara fresca de nuez joven de Cocos nucifera L. (100 g).

35

Ejemplo 6 - Preparacion de extractos de Terminalia catappa L.

6.1: Extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco

40 [0068] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.1 con la

excepcion de que se usaron hojas, tallos y granos frescos triturados de Terminalia catappa L. (100 g).

6.2: Extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco despues de extraccion en etanol

45 [0069] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.2 con la

excepcion de que se usaron hojas, tallos y granos frescos triturados de Terminalia catappa L. (1000 g).

6.3: Extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco despues de extraccion en etanol e hidrocarburo

50 [0070] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.3 con la

6.4: Extracto de Terminalia catappa L. en hidrocarburo despues de extraccion en etanol

55 [0071] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.4 con la

6.5: Extracto de Terminalia catappa L. en etanol despues de extraccion en etanol e hidrocarburo

[0072] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.5 con la excepcion de que se usaron hojas, tallos y granos frescos triturados de Terminalia catappa L. (1000 g).

Ejemplo 7 - Preparacion de extractos de Hibiscus tiliaceus L.

5

7.1: Extracto de Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco

[0073] El extracto se preparo como se ha descrito para Vigna marina (Burm.) Merr. en el ejemplo 4.1 con la excepcion de que se usaron hojas, tallos y granos frescos triturados de Hibiscus tiliaceus L. (100 g).

10

Ejemplo 8 - Efecto de extractos individuales de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L. en el espesor epitelial de la piel

[0074] Se llevo a cabo una evaluacion del efecto de cada uno de los extractos (preparados como se describe 15 en los ejemplos 4 a 7) en el espesor epitelial de la piel. Se aplico una dosis diaria de 1 ml del extracto por via topica

a la superficie epitelial de los lomos de ratas hembra de 10 a 14 semanas de edad durante 7 dias. Un primer control se trato con una dosis diaria de 1 ml de aceite de coco. Un segundo control era la superficie no tratada de los lomos de ratas hembra de 10-14 semanas de edad. A los 7 dias se evaluo la histologia de la piel tratada y de control.

20 [0075] Las figuras 6A a 6J muestran la histologia de la piel tratada y de control. Los resultados muestran que

el aceite de coco solo (figura 6B) no tenia efecto obvio en el perfil histologico de la piel. La histologia de la piel tratada con aceite de coco solo es comparable a la piel no tratada (figura 6A).

[0076] Las figuras 6C a 6E muestran la histologia despues de una aplicacion diaria de un extracto de Vigna 25 marina (Burm.) Merr. en aceite de coco (figura 6C); en etanol (figura 6D); y en aceite de coco despues de extraccion

con etanol e hidrocarburo (figura 6E). Los resultados muestran un cambio notable en el espesor de celulas epiteliales. Ademas, hay pruebas de estructuras vasculares en la dermis y no hay infiltrado inflamatorio. En resumen, se observo el efecto de Vigna marina (Burm.) Merr. en la piel en todas las disoluciones de extraccion, indicando la capacidad de concentrar el extracto en alcohol, y extracciones en hidrocarburo.

30

[0077] Las figuras 6F a 6J muestran la histologia despues de una aplicacion diaria de una preparacion de extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco (figura 6F); en hidrocarburo (figura 6G); en etanol (figura 6H); aceite de coco despues de extraccion con etanol (figura 6I); y aceite de coco despues de extraccion con etanol e hidrocarburo (figura 6J). Los perfiles histologicos muestran que los extractos tienen actividad limitada en el extracto

35 en etanol o hidrocarburo solos, pero la actividad se mantiene si Terminalia catappa L. se extrae directamente en aceite de coco, o en etanol o hidrocarburo y despues se extrae en aceite de coco.

Ejemplo 9 - Efecto de extractos individuales y combinados de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L., Terminalia catappa L. e Hibiscus tiliaceus L. en el espesor epitelial de la piel

40

[0078] Se llevo a cabo una evaluacion de la actividad de cada uno de los extractos preparados como se ha descrito en los ejemplos 4.1, 5.1, 6.1 y 7.1. Se administro por via topica una dosis diaria de 1 ml de extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco (ejemplo 4.1); 1 ml de extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco (ejemplo 5.1); 1 ml de extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco (ejemplo 6.1); y/o 1 ml de extracto de

45 Hibiscus tiliaceus L. en aceite de coco (ejemplo 7.1). Cada extracto se aplico solo o en combinacion con un segundo extracto, por ejemplo 0,5 ml de extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco + 0,5 ml de extracto de Cocos nucifera L. en aceite de coco para dar una dosis de 1 ml. Los extractos se aplicaron por via topica a la superficie epitelial de los lomos de ratas hembra de 10-14 semanas de edad. A los 7 dias se determino el espesor epitelial de la piel.

50

[0079] Las figuras 7B y 7B muestran el porcentaje de cambio del espesor epitelial a los 7 dias comparado con la piel de control no tratada en el mismo animal. La figura 7A muestra que la aplicacion topica de extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. en aceite de coco y extracto de Terminalia catappa L. en aceite de coco, produce el mayor aumento de espesor epitelial a lo largo de un periodo de 7 dias cuando el extracto se aplica solo. La figura 7B

55 detalla el porcentaje de cambio en el espesor epitelial cuando se aplica cada extracto en combinacion con otro extracto. Los resultados muestran que el extracto de Cocos nucifera L. tiene un efecto sinergico tanto con el extracto de Vigna marina (Burm.) Merr. como con el extracto de Terminalia catappa L. y que Hibiscus tiliaceus L. tiene un efecto sinergico con Vigna marina (Burm.) Merr.

[0080] Se llevo a cabo una evaluacion adicional (no se muestran los datos) usando cada uno de los extractos preparados como se ha descrito en los ejemplos 4 a 7, y se confirmaron los resultados mostrados en las figuras 6A a 6J y 7A y 7B. La evaluacion uso 303 ratas hembra Sprague Dawley y 34 conejos blancos de Nueva Zelanda. Los extractos se aplicaron por via topica en la superficie epitelial de los lomos de ratas de 18 meses de edad sometidas

5 a ovariectomia y a ovariectomia simulada, y ratas de 12 semanas de edad durante hasta 21 dias y a la piel de conejos blancos de Nueva Zelanda de 12 semanas de edad durante 7 dias.

[0081] En un estudio paralelo se aplicaron una crema hidratante (Hydroderm), el antibiotico topico cloromicetina (cloranfenicol), aceite de coco o aceite de coco extraido en etanol, en la superficie epitelial de los

10 lomos de ratas de 18 meses de edad sometidas a ovariectomia y a ovariectomia simulada, y se comparo con la superficie epitelial de un sitio adyacente no tratado. No se registraron diferencias significativas entre el espesor de la piel tratada comparada con la piel adyacente no tratada para los animales tratados con Hydroderm, cloromicetina (cloranfenicol), aceite de coco o aceite de coco extraido en etanol. Los resultados indican que los cambios observados en el epitelio se deben a la aplicacion de los extractos, y no estan relacionados con los efectos de 15 hidratacion de, por ejemplo, el aceite de coco en los extractos. Los resultados tambien indican que los cambios observados en el epitelio no estan relacionados con ninguna capacidad antimicrobiana de los extractos, ya que los cambios no eran reproducibles por el cloranfenicol.

[0082] Todos los animales toleraron bien el tratamiento. No hubo muertes o enfermedad asociada con los 20 tratamientos topicos. La region de la piel de la aplicacion no aparecia inflamada macroscopica o microscopicamente

en ninguno de los tratamientos activos. Se observaron cambios histologicos en el epitelio en la region de la aplicacion de los extractos. La diferencia entre las regiones de aplicacion y las regiones de control puso de manifiesto un cambio en la estructura epitelial con hipertrofia de muchas capas del epitelio y un aumento en el aspecto estratificado. El aumento del espesor del epitelio era mayor de 100% y era tanto reproducible como 25 estadisticamente cuantificable.

[0083] El efecto observado en el epitelio de la piel a la que se aplicaron los extractos, era el mismo en animales jovenes que en los animales envejecidos y animales deficientes en estrogenos envejecidos. Esto es a pesar de las diferencias en la histologia inicial de los animales no tratados en cada uno de estos grupos. El efecto de

30 los extractos en la piel de conejos era similar al visto en las ratas con cambios similares observados en el epitelio y las estructuras epiteliales tales como foliculos pilosos.

Ejemplo 10 - Preparacion de extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr. y Cocos nucifera L.

35 [0084] Las hojas, tallos y granos frescos triturados de Vigna marina (Burm.) Merr. (2,5 kg), cascara fresca de

nuez joven de Cocos nucifera L. (2,5 kg) y las hojas, tallos y granos frescos triturados de Terminalia catappa L. (1 kg) se maceraron por separado.

[0085] Vigna marina (Burm.) Merr. se anadio a etanol al 95% (5 litros) y se agito, y la mezcla se dejo reposar 40 durante 12 h. La materia macerada de Vigna marina (Burm.) Merr. se separo y se anadio un segundo deposito de

etanol al 95% (5 litros) y la mezcla se dejo reposar durante 12 h. Los primeros 5 litros de etanol se anadieron a un deposito grande.

[0086] La materia macerada de Vigna marina (Burm.) Merr. se separo de la segunda parte alicuota de etanol 45 y se anadio a una tercera parte alicuota de etanol al 95% (5 litros). La materia macerada de Cocos nucifera L. se

anadio al segundo recipiente de etanol al 95% (5 litros) y se dejo reposar durante 12 h. La materia macerada de Vigna marina (Burm.) Merr. (ahora casi incoloro) se separo de la tercera parte alicuota de etanol al 95% y se descarto. La materia macerada de Cocos nucifera L. se separo del segundo recipiente y se puso en la tercera parte alicuota de etanol al 95%. La tercera parte alicuota se dejo reposar durante 12 h. La segunda parte alicuota de 50 etanol al 95% se anadio a la primera parte alicuota.

[0087] La materia macerada de Cocos nucifera L. se separo de la tercera parte alicuota de etanol al 95% y se puso en una cuarta parte alicuota de etanol al 95% (5 litros). La materia macerada de Terminalia catappa L. se anadio a la tercera parte alicuota de etanol al 95%. Tanto la tercera como la cuarta parte alicuota se dejaron reposar

55 durante 12 h.

[0088] La materia macerada de Cocos nucifera L. se separo de la cuarta parte alicuota y se descarto. La materia macerada de Terminalia catappa L. se separo de la tercera parte alicuota de etanol al 95% y se puso en la cuarta parte alicuota de etanol al 95% y se dejo reposar durante 12 h. La tercera parte alicuota de etanol al 95% se

anadio a la primera y segunda partes alicuotas.

[0089] La materia macerada de Terminalia catappa L. se separo de la cuarta parte alicuota, se anadio a una quinta parte alicuota de etanol al 95% (5 litros) y se dejo reposar durante 12 h. La materia macerada de Terminalia

5 catappa L. (ahora incoloro) se separo de la quinta parte alicuota. Tanto la cuarta como la quinta partes alicuotas de etanol al 95% se anadieron a las tres primeras partes alicuotas. A la mezcla extraida resultante se anadio aceite de coco virgen (1 litro). La mezcla se mezclo energicamente durante 5 min cada 15 min durante un periodo de 4 h. Despues la mezcla se calento a ebullicion y se mantuvo a mas de 80°C hasta que el volumen de la mezcla se redujo de 26 litros a 3 litros. La mezcla resultante se dejo enfriar y asentar. El aceite de coco se decanto de la parte 10 superior de la mezcla y se puso en recipientes sellados invertidos en un frigorifico. El aceite de coco se dejo solidificar y los componentes acuosos restantes se separaron y descartaron. El aceite de coco despues se calento en un bano de agua caliente a aproximadamente 56°C y se filtro.

Ejemplo 11 - Dependencia de la dosis del extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera 15 L. y Terminalia catappa L.

[0090] Para evaluar la dependencia de la dosis del extracto combinado preparado como se ha descrito en el ejemplo 10, se aplico por via topica una dosis diaria de 1 ml del extracto a la superficie epitelial de los lomos de ratas hembra de 10-14 semanas de edad. La concentracion del extracto era 100%. El extracto tambien se aplico al 50%,

20 10%, 5% y 1%. Los extractos se prepararon por dilucion del extracto al 100% con aceite de coco. La piel se trato con una aplicacion topica diaria durante 7 dias. Los animales de control eran ratas hembra de 10-14 semanas de edad no tratadas. Las figuras 8A a 8F muestran la histologia de la piel a los 7 dias. Los resultados demuestran la relacion dependiente de la dosis del extracto con el espesor epitelial y la celularidad, mas evidente despues de una aplicacion diaria del extracto al 50% o 100%. Las figuras 9A y 96 muestran el espesor epitelial y el porcentaje de 25 cambio en el espesor epitelial de la piel a los 7 dias. Se observo un aumento de mas de 130% en el espesor epitelial de la piel para animales tratados con el extracto combinado al 50% o 100%.

Ejemplo 12 - Efecto del extracto combinado de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L. y Terminalia catappa L. en mezclas

30

[0091] El extracto de Vigna marina (Burm.) Merr., Cocos nucifera L. y Terminalia catappa L. en aceite de coco (100%) preparado como se ha descrito en el ejemplo 10, se mezclo con clorhexidina; crema hidratante Hydroderm, cloranfenicol al 15% y cloranfenicol al 50%. Cada mezcla se aplico (1 ml) por via topica a la superficie epitelial de los lomos de ratas hembra de 10-14 semanas de edad durante 7 dias. A los 7 dias se evaluo la histologia de la piel

35 tratada.

[0092] Los perfiles histologicos se muestran en las figuras 10A a 10E y muestran que la eficacia del extracto no es atenuada por la presencia de pomadas o soluciones comerciales y que el extracto es compatible con aplicaciones de antiseptico y antibiotico.

40

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un extracto biologicamente activo que comprende una combinacion de un extracto de Cocos nucifera

L. y al menos un extracto seleccionado de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa L., en el que el extracto

5 de Cocos nucifera L. se obtiene de cascara.
2. El extracto de la reivindicacion 1, en el que los extractos de Vigna marina (Burm.) Merr. y Terminalia catappa se obtienen de uno o mas de una hoja, tallo o grano.

10 3. Un extracto de la reivindicacion 1 o 2, en el que el extracto se prepara usando y/o comprende un

aceite vegetal, un hidrocarburo y/o un alcohol.
4. Un extracto de la reivindicacion 3, en el que el aceite vegetal se obtiene de semillas o fruto.

15 5. Un extracto de la reivindicacion 4, en el que el aceite vegetal es aceite de Cocos nucifera L.,

opcionalmente aceite de Cocos nucifera L. virgen, aceite de Cocos nucifera L. refinado, aceite de Cocos nucifera L. hidrogenado o Cocos nucifera L. fraccionado.
6. Una composicion que comprende un extracto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un 20 vehiculo, diluyente y/o excipiente farmaceuticamente aceptable.
7. Una composicion de la reivindicacion 6, en la que la composicion se aplica por via topica a la piel o a un apendice epidermico, opcionalmente cabello, foliculos pilosos, unas o cuticulas de un sujeto.

25 8. Una composicion de la reivindicacion 6 o reivindicacion 7, para usar en el tratamiento terapeutico de

un trastorno de la piel.
9. Una composicion segun la reivindicacion 6 o 7, para usar en el tratamiento de una herida y/o para usar en la promocion terapeutica y/o cosmetica de cicatrizacion de heridas, en el que la herida es herida quirurgica o no

30 quirurgica, opcionalmente una quemadura, corte, rozadura o abrasion.
10. Un extracto biologicamente activo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar en el tratamiento de una herida y/o para usar en la promocion terapeutica de la cicatrizacion de una herida, en el que la herida es una herida quirurgica o no quirurgica, opcionalmente una quemadura, rozadura, corte o abrasion.

35
11. Un extracto biologicamente activo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar en el tratamiento terapeutico de un trastorno de la piel.
12. El uso de un extracto o una composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la 40 preparacion de un medicamento para curar un trastorno de la piel o para la cicatrizacion de heridas.
13. Un procedimiento cosmetico para curar trastornos de la piel y/o promover la cicatrizacion de heridas, que comprende administrar un extracto o una composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

45 14. El procedimiento de la reivindicacion 13, en el que el trastorno de la piel es atrofia cutanea asociada

con la edad o atrofia cutanea asociada con esteroides.
15. El procedimiento de la reivindicacion 13 o reivindicacion 14, en el que el extracto o composicion

aumenta el espesor y/o la resistencia mecanica de la piel.