KR20230057788A

KR20230057788A - 멍 완화 또는 제거용 조성물

Info

Publication number: KR20230057788A
Application number: KR1020210141985A
Authority: KR
Inventors: 김남경; 김명주; 정우영
Original assignee: 주식회사 메디포
Priority date: 2021-10-22
Filing date: 2021-10-22
Publication date: 2023-05-02

Abstract

본 발명은 식균 작용 효과를 갖는 케르세틴과 정맥개선 효능을 갖는 에스신 등을 포함하는 조성물로서, 천연 성분을 포함함으로써 부작용의 위험이 낮고 피부 자극이 없으며, 멍의 완화 및 제거에 탁월환 효과를 가진다. 또한, 본 발명의 조성물은 비외상성 발적 감소, 비외상성 부종 감소, 피부 진정, 피부 항염, 피부 보습, 피부변색 및 착색을 감소시키거나 제거하는 효과도 우수하다.

Description

멍 완화 또는 제거용 조성물 {A COMPOSITION TO REMOVE OR TO RELIEVE BRUISE}

본 발명은 케르세틴 및 에스신을 포함하여 멍의 완화 및 제거를 위한 조성물로서, 바람직하게는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

피부는 인간의 건강과 생명유지에 필수적으로서, 내분비기능, 면역기능, 흡수 및 분비기능, 보호기능뿐만 아니라 땀과 피지, 노폐물을 분비하여 체온조절과 부표면의 산도를 유지함으로써 방수 역할 및 항균작용, 수분조절, 호흡기능, 비타민 D 합성기능, 영양소 저장기능 등 매우 다양한 기능을 수행하는 중요한 역할을 할 뿐만 아니라, 외관상으로 아름다움을 표현할 수 있는 수단으로서 매우 중요하게 여겨지고 있다.

특히, 근래에 외모(외형)와 관련한 다양한 외과적 수술 예를 들어, 성형수술이나 시술 등을 많이 받고 있으나, 수술이나 시술 후에 얼굴에 남아있는 멍이나 붓기(부종) 등으로 장기간 외출을 못하거나, 마스크 등으로 가리는 등의 불편함을 겪고 있다.

멍은 타박상(의학 용어)이라고도 하며, 외상에 의해 모세혈관 및 때때로 정맥이 손상되어 혈액이 주변 간질 조직으로 스며들거나, 출혈 또는 유출되는 일종의 조직 혈종이다. 멍이 생성될 정도의 타박상은 사고, 낙상, 수술 등 다양한 상황에서 발생할 수 있다.

타박상이 있는 경우, 조직이 손상되면 피부 아래에서 모세혈관이 파열되어 혈액이 빠져 나와 축적된다. 시간이 지남에 따라 혈액이 주변 조직으로 스며들어 멍이 더 짖어지고 확대된다. 상기 영향을 받은 조직 내의 신경 종말은 증가된 압력을 감지하며, 이는 중증도 및 위치에 따라 통증 또는 압력으로 인식될 수 있다.

이 경우, 손상된 모세혈관 내피는 출혈을 최소화하기 위해 혈관을 좁아지게 하는 호르몬인 엔도텔린을 방출한다. 또한, 내피가 파괴됨에 따라 근본적인 폰 빌레브란트 인자가 노출되고, 응고를 시작하여 일시적인 응고에 의해 상처를 막고 결국 정상 조직을 회복시킨다.

가벼운 타박상에 대한 치료는 최소한의 휴식, 얼음찜질, 압박, 거상, 진통제 및, 회복 후 가벼운 스트레칭 운동을 포함할 수 있다. 멍든 부위를 높이면서 즉시 얼음찜질을 하면 붓기를 줄이는 데 도움이 될 수 있다. 점액다당류 다황산(예: Hirudoid)이 포함된 약용 크림을 바르면 치유 과정이 빨라질 수 있다. 레티놀이나 알파 하이드록시산과 같은 피부 강화 성분을 함유한 다른 국소 크림은 멍이 저절로 낫도록 방치하는 경우보다 멍의 모양을 더 빨리 개선할 수 있다. 아르니카(Arnica) 계열의 항염증 치료제는 타박상 치료에도 사용되어 왔으나, 그 효능에 대한 정확한 문헌 및 데이터 자료가 부족하여 효과는 의심스럽다.

대한민국 공개특허 제2010-0005538호에는 스테로이드, 항히스타민 및 혈관수축제를 유효성분으로 함유하는 피부 손상 치료용 조성물이 기재되어 있으나, 종래의 피부 손상 치료용 조성물 보다 우수한 염증 완화 효과 및 콜라겐 합성 촉진 효과가 있는 반면, 스테로이드 또는 항히스타민에 민감한 사용자들에게는 적용이 불가능한 단점이 있다.

대한민국 등록특허 제0971629호에는 적하수오, 백하수오, 지골피, 백복령, 건지황, 숙지황, 천문동, 맥문동, 인삼을 혼합하여 증자(蒸煮) 후 건조한 약제혼합물과, 효모균(Saccharomyces cerevisiae) 및 누룩균(Aspergillus oryzae)이 함유되어 있는 화장료 조성물이 개시되어 있으나, 이러한 종래 기술은, 보습효과, 항염효과, 자유 라디칼 소거효과 등에서 우수한 효과를 나타낸다고 보고되어 있으나, 멍 제거에 직접적으로 효과적이지는 못하다.

따라서, 스테로이드 등 부작용이 많은 약물이 아닌 천연 성분을 사용하면서도 멍 완화 및 제거에 효과가 있는 피부 외용제 조성물의 개발이 요구되고 있다.

한국 특허공개번호 제10-2010-0005538호 한국 특허등록번호 제10-0971629호 한국 특허공개번호 제10-2019-0029851호 한국 특허공개번호 제10-2020-0061000호 미국 특허등록번호 제5,665,367호

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자 제안된 것으로, 본 발명의 목적은 천연 성분을 포함함으로써 멍 완화 및 제거에 효과적인 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 천연 성분을 포함함으로써 멍 완화 및 제거에 효과적인 조성물을 포함하는 크림과 로션, 팩, 밴드 또는 패치와 같은 피부 외용재를 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 멍 완화 또는 제거용 조성물은 케르세틴 및 에스신을 유효성분으로 포함하는 것이 바람직하다.

상기 케르세틴은 0.01~1중량%로, 상기 에스신은 0.01~2중량%로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 조성물은 베타시토스테롤을 추가로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 베타시토스테롤은 0.01~0.5중량%로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 조성물이 백미 추출물을 추가로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 조성물이 비타민 K 또는 비스테로이드성 항염증제(NSAID) 또는 이둘 모두를 추가로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 조성물은 정제수, 프로판디올, 마그네슘 설페이트, 다이프로필렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 글리세린, 카보머, 잔탄검, 글리세릴 스테아레이트, 카프릴릴/카프릭트리글리세라이드, 부틸렌글라이콜, 카프릴릴글라이콜, 폴리글리세린-3, 세틸 피이지/피피지-100 디메치콘, 싸이클로펜타실록산, 싸이클로헥사실록산, 디메치콘 크로스폴리머, 피이지/피피지-18/18 디메치콘, 디메치콘, 세테아릴올리베이트, 솔비탄올리베이트, 나이아신아마이드, 폴리아크릴레이트-13, 폴리아이소부텐 및 폴리솔베이트 20로부터 선택된 1종 이상을 추가로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 조성물은 에어로졸, 액체, 용액, 젤, 페이스트, 크림, 연고, 폼 및 분말 중 어느 하나의 제형으로 되는 것이 보다 바람직하다.

본 발명의 다른 측면으로서, 상기 조성물을 포함하는 팩, 밴드 또는 패치 중 어느 하나의 형태의 피부 외용재가 바람직하다.

상기 팩은 시트형, 국소형 패치, 거즈타입, 크림타입 및 젤타입 중 어느 하나인 것이 보다 바람직하다.

상기 팩은 마스크팩, 손팩, 발팩, 종아리팩, 헤어팩, 허벅지팩, 복부팩, 옆구리팩, 팔뚝팩, 턱팩 및 목팩 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 보다 바람직하다.

또다른 측면으로서, 상기 조성물을 포함하는 비외상성 발적 감소; 비외상성 부종 감소; 피부 진정; 피부 항염; 피부 보습; 또는, 피부변색 및 착색을 감소시키거나 제거하기 위한 조성물이 바람직하다.

도 1은 본 발명에 사용된 케르세틴의 세포독성시험 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 사용된 에스신의 세포독성시험 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 반상출혈 감소 효과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 4a 및 도 4b는 본 발명에 사용된 케르세틴의 CD36 활성화 평가 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 사용된 케르세틴의 식균작용 평가 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 6a 및 도 6b는 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 임상 실험 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시형태를 들어 상세히 설명한다. 본 발명의 실시형태는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서, 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함하는 것을 의미한다.

본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 단계가 다른 단계와 “상에” 또는 “전에” 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 단계가 다른 단계와 직접적 시계열적인 관계에 있는 경우뿐만 아니라, 각 단계 후의 혼합하는 단계와 같이 두 단계의 순서에 시계열적 순서가 바뀔 수 있는 간접적 시계열적 관계에 있는 경우와 동일한 권리를 포함할 수 있다.

본 발명의 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 “약”, “실질적으로” 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용 오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본 발명의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 용어 “~(하는) 단계” 또는 “~의 단계”는 “~를 위한 단계”를 의미하지 않는다.

본 발명은 멍제거용 조성물 및 이를 포함하는 피부 외용재에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유효성분으로서 케르세틴, 에스신을 포함하여 멍을 완화 및 제거하는데 탁월한 효과를 갖는 멍 완화 및 제거용 조성물 및 이를 포함하는 피부 외용재에 관한 것이다.

본 발명의 조성물에 있어서, 상기 케르세틴(quercetin)은 엘더베리, 사과, 양파, 감귤류 등에서 발견되는 항산화 성분이다. 케르세틴(quercetin)은 항염증제, 항 고혈압제, 혈관 확장제, 항콜린성 항염증제 및 항 아테롬성 경화증 치료제로 알려진 20가지 이상의 식물성 물질에 존재하는 바이오 플라보노이드 중 하나이다.

정확하게는, 3,3′,4′,5,7-Pentahydroxyflavone 구조를 가지는 분자량 302.236g/mol의 질량을 가지는 플라보노이드(flavonoid) 일종으로 폴리페놀 군에 속하며, 우리가 먹는 과일이나 야채에 많이 존재하는 항산화제로 알려져 있다. 우리가 먹는 플라보노이드 중 60-75%가 케르세틴이다. 케르세틴은 강력한 항산화 물질로서, 자유라디칼(Free radical)의 제거를 통해 ROS 와 NO로부터 우리 몸의 세포가 공격 당해 염증이 발생하는 것을 막아주는 효과적인 작용을 한다.

케르세틴은 관상동맥에 작용하여 혈압을 감소시키거나, 산화를 방지한다. 국립농업과학원 음식정보의 케르세틴 성분은 지방과 콜레스테롤이 혈관에 쌓이는 것을 억제 한다. 케르세틴은 피부로 흡수되는 경우, 혈액을 따라 순환하며, 혈액내의 섬유소와 항원-항체 결합체 및 필요없는 불순물들을 분해하여 염증을 가라앉히고, 혈액을 맑게 하는 등의 효과가 있으며, 특히 신체 상에 나타나는 멍을 없애는데 효과가 있다.

또한, 케르세틴은 PI3K/AKT 경로를 억제하여 항세포자멸 단백질(anti-apoptotic protein)인 Bcl-w의 하향을 유도 한다.

또한, 케르세틴은 체외(In-vitro)에서 다양한 단백질의 활동을 활성화 하거나 억제하는 작용을 통해 정확하게는, 비특이적 단백질인산화효소(protein kinase) 억제제로 G-단백질(G-protein)의 에스트로겐(estrogen) 수용체를 조절하여 혈전색전증 발생을 억제한다. 이러한 작용은 혈소판이 엉기는 것을 방지해주고, 혈관 내의 섬유소 용해 작용을 도와주어, 혈전을 효과적으로 감소시켜 준다.

본 발명의 조성물에 있어서, 상기 에스신(Escin)은 칠엽수(Aesculus turbinate)에서 추출된 유효성분으로 β-D-Glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→4)]-(22α-(acetyloxy)-16α,24,28-trihydroxy-21β-{[(2Z)-2-methylbut-2-enoyl]oxy}olean-12-en-3β-yl β-D-glucopyranosiduronic acid) 구조를 가지며, 분자량 1,131.26g/mol을 가지는 사포닌 혼합물로써, 항염, 혈관(정맥)수축, 해독작용, 정맥부전 개선 및 부종 개선 등의 효과가 있다.

칠엽수는 독성을 가지고 있어 식용을 할 수 없지만, 칠엽수 추출물에서 정제된 에스신은 우수한 모세혈관 투과성 감소기능으로 부기 완화/제거, 정맥울혈 개선 및 셀룰라이트 개선 효과, 세표접착분자-1(cell-adhesion molecule-1)을 조절하여 저산소증 유발 장애을 방지하는 역할을 보유하며, 그 효능에 대해서는 다수의 임상실험과 논문을 통해 입증되어 있다.

상기 케르세틴과 에스신을 포함하는 조성물은 정유, 알칼로이드, 전분, 이눌린, 사포닌 등이 들어 있으며, 보혈작용, 강장작용, 거담작용, 대식면역세포의 scavenger receptor CD36 의 활성화를 통한 탐식기능강화작용, 저항성을 높이는 작용, 적혈구와 혈색소량을 늘리는 작용, 혈압강하 작용을 한다.

상기 케르세틴은 0.01~1 중량 %로, 상기 에스신은 0.01 ~ 2중량%로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 케르세틴은 불수용성 물질로서 유기용매를 사용하여 용해시켜 제품에 적용된다. 통상 유기용매는 피부에 직접적으로 도포하는 제형에 과도하게 사용할 경우, 피부와 점막에 심한 자극을 줄 수 있는 다수의 실험결과가 있다. 이로 인해, 저함량 사용이 권장되며, 본 발명에서 제조하고자 하는 크림은 상처 도포 제품이므로 유기용매의 과도한 사용은 바람직하지 않다. 상기 케르세틴이 1중량%을 초과하여 제형에 함유될 경우, 용해되지 않은 케르세틴에 의해 불유쾌한 피부자극 등의 문제가 생길 수 있다. 또한, 상기 케르세틴이 0.01중량% 미만으로 포함될 경우, 바람직한 효과를 기대하기 어렵다.

상기 에스신은 난용성물질의 사포닌 성분으로서 유화에 직접적으로 영향을 주는 물질이다. 사포닌 성분을 유화제형에 과도하게 사용할 경우 제형의 유화를 불가능하게 만들 수 있으며, 제조된 제형의 유화상태 유지를 방해할 수 있으므로, 장기 보관상의 문제가 발생할 수 있다. 이에 2중량%을 초과한 사용은 바람직하지 않다. 또한, 상기 에스신이 0.01중량% 미만으로 포함될 경우, 바람직한 효과를 기대하기 어렵다.

한편, 베타시토스테롤 (β-Sitosterol)은 Stigmast-5-en-3β-ol, 정확하게는 (1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-Ethyl-6-methylheptan-2-yl]-9a,11a-dimethyl-2,3,3a,3b,4,6,7,8,9,9a,9b,10,11,11a-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-7-ol 구조를 가지며, 분자량 414.718 g/mol을 가지는 동물과 식물의 세포 벽에서 발견되는 물질로 콜레스테롤과 화학적 구조가 매우 유사하다.

베타시토스테롤은 주로 식물성 기름, 정확하게는 견과류, 아보카도 등에 과량 함유되어 있다. 식물성 스테로이드 계열로, 단백동화의 전구체로 작용한다. 비타민D의 전구물질인 프로비타민D의 일종이다. 베타시토스테롤은 식물성 에스테르의 주요 구조를 가져 혈중 콜레스테롤 수치를 낮추며, 인체의 콜레스테롤 축적으로 인한 동맥경화증, 심근경색, 뇌혈관 질환 등의 치료에 주요 성분으로 쓰이고 있다. 베타시토스테롤은 혈관신생을 촉진시켜 혈액이 원할하게 되도록 공급해줄 뿐만 아니라, 상처치유, 탈모치유, 궤양치유 등에 다양하게 사용되고 있다.

상기 베타시토스테롤은 0.01 ~ 0.5중량%로 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 베타시토스테롤은 불용성물질이므로 상기 0.5중량%을 초과하여 제형에 추가될 경우, 베타시토스테롤이 제형에 완전히 용해될 수 없으며 잔여된 불용성 물질이 피부에 불유쾌한 자극을 유발할 수 있다. 또한, 상기 베타시토스테롤이 0.01중량% 미만으로 포함될 경우, 바람직한 효과를 기대하기 어렵다.

한편, 본 발명의 조성물은 바람직하게는 치료학적 유효량의 혈관수축제 및 항염증제를 배합제와 조합하여 포함할 수 있다. 조직이 손상되면 신체는 부종과 멍을 유발하는 혈관 확장제와 염증제를 모두 생성한다. 두 기전이 모두 존재하기 때문에 혈관수축제나 항염증제 단독으로는 활동성 타박상을 예방하거나 치료하는 데 이상적이지 않다. 본 발명에서는 혈관수축제 화합물과 항염증 화합물을 조합함으로써, 훨씬 더 효과적으로 타박상 및 부종의 예방 및 치료가 가능하다.

적합한 배합제의 선택은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 용액, 로션, 크림, 연고, 겔, 폼 또는 경피 패치로 제형화 되는지 여부에 어느 정도 의존할 것이다.

본 발명에서 사용될 수 있는 추가적인 첨가제로는 비타민 K(레티놀의 유무에 관계없이), 이부프로펜 및 아스피린과 같은 비스테로이드성 항염증제(NSAID)를 포함한다.

바람직하게는, 상기 백미(Cynanchum atratum)추출물을 사용하는 것이 좋다. 백미의 추출물 내 유효성분은 식물성 스테롤인 베타시토스테롤(Beta-sitosterol), 베타아미린 아세테이트(Beta-amyrin acetate)과 식물성 스테롤 중 C21 스테로이드 구조를 가지는 시납산(Sinapic acid), 시나트라토사이드(Cynatratoside) A (21), 글라우코제닌(Glaucogenin) C, 시나노사이드(Cynanoside)-F와 일반성분인 3,4-디하이드록시아세토페논(3,4-dihydroxyacetophenone), 4-하이드록시아세토페논(4-hydroxyacetophenone)과 같은 식물성 스테롤 을 추출물 내 함유하고 있으며, 이중 C21 스테로이드 구조를 가지는 추출물 내 유효 성분은 항산화, 항염증, 항혈전의 효능을 가지고 있다.

본 발명의 조성물에는, 필요에 따라, 일반적인 피부 외용제 조성물에 첨가되는 통상의 첨가제들, 예로서 일반적인 정제수, 프로판디올, 마그네슘 설페이트, 다이프로필렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 글리세린, 카보머, 잔탄검, 글리세릴 스테아레이트, 카프릴릴/카프릭트리글리세라이드, 부틸렌글라이콜, 카프릴릴글라이콜, 폴리글리세린-3, 세틸 피이지/피피지-100 디메치콘, 싸이클로펜타실록산, 싸이클로헥사실록산, 디메치콘 크로스폴리머, 피이지/피피지-18/18 디메치콘, 디메치콘, 세테아릴올리베이트, 솔비탄올리베이트, 나이아신아마이드, 폴리아크릴레이트-13, 폴리아이소부텐, 폴리솔베이트 20 등을 통상의 배합량으로 추가로 배합할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 에어로졸, 액체, 용액, 젤, 페이스트, 크림, 연고, 폼 및 분말 중 어느 하나의 제형일 수 있다.

예를 들어, 연고는 균질한 반고형 제제로, 가장 일반적으로 피부나 점막에 외용으로 사용되는 고점도의 기름기가 많고 두꺼운 오일(예: 오일 80%-물 20%)이다. 연고는 피부 분비물과 섞이지 않거나, 섞이거나, 유화될 수 있는 제제를 제공하기 위해 소수성, 친수성 또는 물-유화 베이스를 사용하여 제형화된다. 연고는 또한 탄화수소(지방), 흡수성, 물 제거성 또는 수용성 염기에서 파생될 수 있다.

예를 들어, 겔은 종종 알코올 또는 아세톤 베이스의 셀룰로오스와 같은 반고체 에멀젼으로 제공될수 있다.

예를 들어, 국소 용액은 점도가 낮고 종종 물이나 알코올을 베이스로 사용한다. 국소 용액은 일반적으로 물, 알코올 및 때로는 오일에 분말을 용해하여 형성된다. 알코올을 베이스로 사용하면 피부가 건조해질 수 있다.

예를 들어, 로션은 용액과 유사하지만 용액보다 더 진하고 본질적으로 더 완화시키는 경향이 있다. 로션에는 일반적으로 물과 오일이 혼합되어 있으며 용액보다 알코올이 적은 경우가 많다.

예를 들어, 크림은 거의 같은 비율의 오일과 물의 에멀젼을 가지고 있다. 피부의 각질층 외층까지 잘 침투한다. 크림은 로션보다 두껍고 용기에서 꺼낼 때 모양이 유지된다. 보습 성향은 보통이다.

또한, 본 발명은 상기 멍 완화 및 제거용 조성물을 포함하는 팩, 밴드 또는 패치 중 어느 하나의 형태의 피부 외용재 역시 제공한다.

상기 팩은 시트형, 국소형 패치, 거즈타입, 크림타입 및 젤타입 중 어느 하나의 형태일 수 있다.

상기 팩은 마스크팩, 손팩, 발팩, 종아리팩, 헤어팩, 허벅지팩, 복부팩, 옆구리팩, 팔뚝팩, 턱팩 및 목팩 중에서 선택되는 어느 하나의 팩일 수 있다.

본 발명의 조성물의 제형은 바람직하게는 타박상 전 또는 후에 피부에 적용된다. 외과적 시술의 경우, 수술 직전 또는 직후에 피부 외용제를 바르면 멍의 예방 및 감소는 물론 부기의 상당한 개선도 가능하다. 본 발명에 따른 조성물의 주요 목적은 타박상을 줄이고 치료하는 것이지만, 다른 예기치 않은 효과로서 비외상성 발적(주사증으로 알려진 상태에서와 같이)의 감소와 비외상성 부종(예: 눈 밑의 붓기)의 감소 효과도 있다.

이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예 또는 실험예를 통해 예시적으로 보다 상세히 설명하고자 한다.

실시예 1. 크림의 제조 방법

No.	명칭 (성분)	함유량
1	정제수	up to 100g
2	보습제	10.00g
3	유화안정제	2.00g
4	에스신	0.50g
5	베타시토스테롤	0.25g
6	레시틴	0.50g
7	오일	13.00g
8	유화제	4.00g
9	백미추출물	2.00g
10	살리실산	0.30g
11	케르세틴	0.02g
12	에탄올	2.00g

상기 표 1에 기재된 바와 같이, 1~6까지의 원료와 7~8까지의 원료를 각각 비커에 계량한다. 50℃까지 가열하며 호모게나이저를 사용하여 각 비커의 원료를 10분간 교반하고 다시 80℃까지 가열한다. 80℃까지 가열된 두 비커의 원료를 서서히 섞으며 5분간 유화한다. 9~12까지의 원료를 교반하며 유화가 완료된 제형에 추가한다.

실시예 2~4. 크림의 제조 방법

아래 표 2에 기재된 함량과 같이 변경하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1의 제조방법에 따라 실시예 2~4의 크림을 제조하였다.

	케르세틴	에스신	베타시토스테롤	백미추출물	살리실산
실시예 1	0.02g	0.50g	0.25g	2.00g	0.30g
실시예 2	0.02g	0.50g	0.25g	0g	0g
실시예 3	0.02g	0.50g	0g	0g	0g
실시예 4	0.02g	0g	0g	0g	0g

[실험예 1 : L-929 세포의 배양]

L-929 세포는 마우스 섬유세포(mouse fibroblast)로서 한국세포주은행(KCLB)에서 분양 받아 실험에 사용하였다. 세포 배양은 10%의 소태아혈청 FBS (Fetal Bovine Serum)과 100unit/me의 페니실린/스트렙토마이신 1%을 첨가한 DMEM 배지를 사용하였다. 37℃ 및 5% CO₂의 배양기 내에서 배양 하였으며, 배양액은 2일마다 교환 하였다. 배양된 세포는 배양액을 제거한 후, 1xTrypsin-EDTA 1 ml을 부착된 세포에 처리하여 인큐베이터에서 3분간 방치한 후, 세포를 부유 상태로 만들어 주었다. 세포를 1xPBS 5 ml가 있는 15 ml의 원뿔형 튜브에 회수하여 1xTrypsin-EDTA를 중화시켜 L-929 세포의 DNA 산화를 방지하였다. 원심분리기를 사용하여 1,300 RPM에서 3분간 세포를 침강시킨 후, 0.4% 트리판블루(trypan blue)로 염색하여 혈구계(Hemocytometer)로 세포수를 계수하여, 총 세포수를 계산하였다.

[실험예 2 : 케르세틴의 세포독성측정]

본 실험에서는 Sigma사에서 제공되는 케르세틴(Q4951, Purity≥95%, MW: 302.24) 분말을 이용하여 MTT 에세이를 수행하여 세포독성을 측정하였다.

실험예 1에서 얻어진 마우스 섬유세포 L-929를 96-well에 5x10⁴ cell/well이 되도록 배양배지를 100㎕씩 분주하여 배양한 후, 케르세틴을 하기 표 3에 기재된 농도가 될 수 있도록 배양 배지에 희석하였다.

시료명	분자량	Stock 농도	처리농도
			25uM	50uM	100uM
케르세틴	302.236 g/mol	1 mM	2.5 ㎕	5 ㎕	10 ㎕

상기의 농도의 케르세틴을 상기 L-929 세포가 5x10⁴ cell/well로 분주되어 있는 96-well 플레이트의 배양액에 첨가하고, 24hr 동안 37℃ 및 5% CO₂의 배양기에서 배양하였다. 이후, 케르세틴 용해물이 포함된 배양액을 제거한 후, 1xPBS 100μℓ를 각 well에 부착된 L-929 세포가 떨어지지 않도록 주의하며 처리하여 잔여 배양액을 제거하였다. 이후, MTT 에세이 용액을 3mg/ml의 농도로 제작하여 각 well에 넣고, 37℃ 및 5% CO₂의 배양기에서 2시간 동안 배양한 후, MTT 용액을 제거하고, 100 μℓ의 DMSO를 처리하여 검출된 포르마잔을 용해시킨 후, 흡광도를 측정하여 세포의 독성을 평가하였다. 상기 평가 결과를 도 1에 개략적으로 나타내었다.

도 1에서 보는 바와 같이, 케르세틴으로 처리한 경우, 대조군(control)과 유사한 세포 생존율을 나타내었다.

[실험예 3 : 에스신의 세포독성측정]

본 실험에서는 Givaudan사에서 제공되는 Aesin(escin, Origin:Vegetal Aesculus hippocastanum L. 침엽수에서 추출) 건조 분말을 이용하여 MTT 에세이를 수행하여 세포독성을 측정하였다.

실시예 1에서 얻어진 마우스 섬유세포 L-929를 96-well에 5x10⁴ cell/well이 되도록 배양배지를 100μℓ 씩 분주하여 배양한 후, 에스신을 하기 표 4의 농도가 되도록 희석하였다.

시료명	분자량	Stock 농도	처리농도
시료명	분자량	Stock 농도	12.5 ㎍/ml	6.25 ㎍/ml	3.12 ㎍/ml	1.56 ㎍/ml
에스신	1,131.26 g/mol	0.1 mg/ml	12.5 ㎕	6.25 ㎕	3.12 ㎕	1.56 ㎕

상기 농도의 에스신을 상기 L-929 세포가 5x10⁴ cell/well로 분주되어 있는 96-well 플레이트의 배양액에 첨가하고, 24시간 동안 37℃ 및 5% CO²의 배양기에서 배양하였다. 이후, 에스신 용해물이 포함된 배양액을 제거한 후, 1xPBS 100㎕를 각 well에 부착된 L-929 세포가 떨어지지 않도록 주의하며 처리하여 잔여 배양액을 제거하였다. 이후, MTT 에세이 용액을 3mg/ml의 농도로 제작하여 각 well에 넣고, 37℃ 및 5% CO₂의 배양기에서 2시간 동안 배양한 후, MTT 용액을 제거하고, 100㎕의 DMSO를 처리하여 검출된 포르마잔을 용해시킨 후, 흡광도를 측정하여 세포의 독성을 평가 하였다. 상기 평가 결과를 도 2에 개략적으로 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 에스신 12.5 ㎍/ml에 노출된 L-929 세포 생존률은 65%의 생존률을 가지므로 이는 세포독성 기준인 생존률 70%를 만족하지 못하는 것을 확인하였다. 추가로, 세포 사멸이 관측된 농도의 절반인 6.25 ㎍/ml에 노출된 L-929 세포에서 76.17%의 세포 생존률을 보여주고 있으나, 실험적 오차를 고려하였을 때 세포 생존률은 보다 높은 것이 바람직하다. 에스신 3.12 ㎍/ml 및 1.56 ㎍/ml 농도에서는 강한 세포사멸은 관찰되지 않았다.

[실험예 4 : H&E 조직염색]

본 실험에서는 상기 핵심성분인 에스신과 케르세틴 외에 베타시토스테롤을 포함하는 실시예 1에서 얻어진 크림 제형의 혈전 용해를 통한 멍의 완화 효능을 검증하기 위해, 약효 시험에 광범위 하게 사용되는 설치류 중 6주령 SD rat (Sprague-Dawley)을 이용하였다. 멍의 발생 모델을 제작하기 위해 6주령 SD rat을 마취하고, 대퇴부의 털을 제모한 후, 70% EtOH를 이용하여 제모부를 세척 및 소독한 후, 미세침을 활용하여 대퇴부의 혈전을 유도 하였다. 이후, 진피 외부에 고인 혈액을 닦아주기 위해 70% EtOH을 사용하여 세척 및 소독을 하였고, 상기 실시예 1의 크림을 대조군과 동시에 혈전 발생 부위에 도포하였다. 혈전 발생후 시료의 도포 과정은 (시험 과정)에 나타내었다.

(시험 과정)

상기의 Sample A는 대조군으로서 시중에 판매 중인 제품인 Cebelia 멍 크림을 사용하였으며, Sample B는 실시예 1에서 얻어진 크림을 사용하여 5일간 도포한 일정이다.

실험결과를 도 3에 개략적으로 나타내었으며, 멍의 발생유무 정확하게는 모세혈관 파열로 인한 혈전의 생성은 조직내 반상출혈의 발생을 통해 결정지어진다. 5일간의 Sample A와 Sample B의 도포 결과, Sample B가 붉은색 삼각형으로 표시되는 반상출혈의 발생빈도가 Sample A에 비해 크게 감소되어 짐을 확인할 수 있었다.

[실험예 5 : 케르세틴의 스캐빈저 수용체 CD36 활성화 평가]

본 실험에서는 마우스 유래 대식세포인 raw 264.7 세포를 활용하여 상기 표 3의 케르세틴의 농도별 처리에 의한 스캐빈저 수용체(scavenger receptor)인 CD36의 세포내 발현 증가를 확인하였다.

본 실험에서는 Sigma사에서 제공되는 케르세틴(Q4951, Purity≥95%, MW: 302.24) 분말을 사용하였다. raw 264.7 세포를 6 well에 1x10⁵ cell/well로 배양하고, 표 3의 농도로 케르세틴을 세포에 직접 처리하여 주었다. 또다른 실험으로, raw 264.7 세포의 활성화를 유도하기 위해, 활성제로서 10ng/ml의 PMA로 처리하여 raw 264.7 세포의 활성을 유도한 후, 케르세틴을 표 3의 농도별로 처리하여 CD36을 확인하였다.

도 4에 개략적으로 나타낸 실험 결과를 보면, 케르세틴을 처리한 후에 농도 의존적인 CD36의 발현 증가를 확인하였으며, 이때 대식세포의 활성화를 유도한 후에 케르세틴을 처리한 경우에 CD36의 발현이 더 강해지는 것을 확인할 수 있었다.

[실험예 6 : 케르세틴의 대식세포의 식균작용 유도 평가]

본 실험에서는 마우스 유래 대식세포인 raw 264.7 세포를 이용하고, 상기 표 3의 케르세틴의 농도별 처리에 의해 활성화된 대식세포의 케르세틴 농도 의존적 식균작용 증가를 확인하기 위해 적혈구의 수를 개수하여 정량적 감소를 확인하였다.

대식세포의 적혈구 식균작용을 확인하기 위한 적혈구의 채혈은 강원대학교 실험동물 센터에서 제공받은 B6 마우스의 채혈을 통해 확보하였으며, 채혈은 안와정맥총 채혈법으로 진행하였다. 마우스의 평균체중(25g)의 10%만을 채혈할 수 있으므로, 적혈구는 각 안구당 0.1 ml씩 좌우 총 0.2 ml을 채혈하였다. 혈액의 응고를 방지하기 위해 혈액은 헤파린 튜브에 저장하였다. 채취된 혈액은 순수한 RBC만을 사용하기 위해, 1xPBS에 혈액 5 ㎕를 희석하여, 400g x 30min 동안 원심분리한 후, 침강된 혈액의 상층액을 제거하고, 1xPBS로 세척하며, 재 원심분리를 총 3회 진행하여, 혈구계로 순수 RBC의 분리를 확인한 후 사용하였다. Raw 264.7 세포를 6 well에 1x10⁵ cell/well로 배양하고, 케르세틴을 상기 표 2의 농도별로 세포에 직접 24시간 처리한 후, 분리된 적혈구를 1x10⁵ cell이 될 수 있도록 계수하여 케르세틴이 처리된 Raw 264.7 세포에 넣고 24시간 공배양한 후, 배지를 회수하여 적혈구의 수를 계수하였다.

도 5에 나타낸 실험 결과와 같이, 케르세틴의 처리농도에 의존적으로 감소된 적혈구를 확인할 수 있었다. 이는 상기 실험예 5에서 확인된 케르세틴에 의한 농도 의존적인 스캐빈저 수용체 CD36의 활성화로 인해 식세포의 식균작용이 증가된 것으로 판단된다.

[실험예 7] : 멍크림 임상 실험 진행

본 실험에서는 임상실험을 진행하여 멍 크림의 효능을 확인 하였다.

상기 실시예 1에 해당하는 멍크림을 제작하고, 시중에 판매중인 제품(Cebelia LCE Balm)을 대조군으로 사용하였으며, 두 제품을 7일간 도포한 후에 멍의 완화를 확인 하였다.

멍의 유발을 위해, 상세하게는 멍의 병태생리학적 특성을 고려하여 육안으로 관찰 가능한 병변의 형태를 갖추기 위해, A~D그룹의 피험자의 등 부위에 부황을 형성하였다. 구체적으로, 피부 표면을 정리하고 흡착기를 부착시킨 후 진공 펌프를 사용하여 피부를 잡아당긴다. 정확하게는 5회의 펌프 후 1분간 흡착으로 인한 진공 상태를 유지하여 피부 표면에 혈전이 발생하도록 하고, 1분 후 공기 배기부의 상단 코크를 돌려 흡착기를 제거하여 주었다.

이후, 본 발명의 크림(실시예1)과 대조군(Cebelia LCE Balm)을 7일간 일정량을 도포였다. 구체적으로, 1일 2회, 아침과 저녁에 도포하여 멍의 색상변화를 통해 효능을 테스트 하였다.

결과에 대한 해석은, 멍빠짐 효과에 대해 사진 촬영한 도 6a의 실험 결과에 대해 아래 표 5의 측정기준 및 점수에 따라, 총 12명의 맹검 확인을 통해 각 점수 기준을 제시하여 육안 평가 결과를 완료하였다. 이러한 평가 결과를 도 6b에 개략적으로 나타내었다.

도 6a 및 도 6b에서 보는 바와 같이, 양성대조군(A그룹) 보다 본 발명의 실시예 1을 도포한 경우에, 멍의 색상이 현저히 감소되는 것을 확인하였다. B그룹 및 D그룹은 무처리군에 해당한다.

이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.

Claims

케르세틴 및 에스신을 유효성분으로 포함하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 케르세틴을 0.01~1중량%로, 상기 에스신을 0.01~2중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 베타시토스테롤을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 베타시토스테롤을 0.01~0.5중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 백미 추출물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 비타민 K 또는 비스테로이드성 항염증제(NSAID) 또는 이둘 모두를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 정제수, 프로판디올, 마그네슘 설페이트, 다이프로필렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 글리세린, 카보머, 잔탄검, 글리세릴 스테아레이트, 카프릴릴/카프릭트리글리세라이드, 부틸렌글라이콜, 카프릴릴글라이콜, 폴리글리세린-3, 세틸 피이지/피피지-100 디메치콘, 싸이클로펜타실록산, 싸이클로헥사실록산, 디메치콘 크로스폴리머, 피이지/피피지-18/18 디메치콘, 디메치콘, 세테아릴올리베이트, 솔비탄올리베이트, 나이아신아마이드, 폴리아크릴레이트-13, 폴리아이소부텐 및 폴리솔베이트 20로부터 선택된 1종 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 에어로졸, 액체, 용액, 젤, 페이스트, 크림, 연고, 폼 및 분말 중 어느 하나의 제형으로 되는 것을 특징으로 하는 멍 완화 또는 제거용 조성물.
제 1 항에 따른 조성물을 포함하는 팩, 밴드 또는 패치 중 어느 하나의 형태의 피부 외용재.
제 9 항에 있어서, 상기 팩이 국소형 패치, 시트타입, 거즈타입, 크림타입 및 젤타입 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 외용재.
제 9 항에 있어서, 상기 팩이 마스크팩, 손팩, 발팩, 종아리팩, 헤어팩, 허벅지팩, 복부팩, 옆구리팩, 팔뚝팩, 턱팩 및 목팩 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 것을 특징으로 하는 피부 외용재.
제 1 항에 따른 조성물을 포함하는 비외상성 발적 감소; 비외상성 부종 감소; 피부 진정; 피부 항염; 피부 보습; 또는, 피부변색 및 착색을 감소시키거나 제거하기 위한 조성물.