ES2621833T3 - Métodos para la producción de una composición cosmética a partir de un fluido de eclosión de huevos de Salmonidae y usos de la misma para mejorar el aspecto cosmético de la piel - Google Patents

Abstract

Un método para reducir o prevenir el aspecto cosmético o predominio de arrugas, líneas finas, hiperpigmentación, laxitud, piel seca, formación de escamas y/o pérdida de agua transepidérmica en la piel de un animal mamífero, que comprende administrar una composición cosmética a dicho animal, en el que dicha composición se obtiene o se puede obtener con un método que comprende al menos las etapas de: a) suspender huevos de Salmonidae en un volumen mínimo de agua, preferentemente huevos de salmón; b) inducir una eclosión rápida, sincronizada de dichos huevos, preferentemente de modo que la eclosión se complete en menos de 2 horas para más de un 95 % de los embriones; c) filtrar los huevos eclosionados para obtener fluido de eclosión; y d) filtrar el fluido de eclosión para obtener la composición, en el que la etapa de filtrar el fluido de eclosión comprende al menos las etapas de: (i) filtrar el fluido de eclosión usando un filtro con un tamaño de poro de al menos 5 μm, y recoger el filtrado; (ii) filtrar el filtrado de la etapa (i) usando un filtro con un tamaño de poro de 0,30-0,60 μm, y recoger el filtrado; (iii) intercambiar el agua en el filtrado de la etapa (ii) con un tampón farmacéuticamente aceptable realizando diafiltración usando un filtro con un tamaño de exclusión de menos de 15 kDa; (iv) opcionalmente repetir la etapa de diafiltración de la etapa (iii); (v) opcionalmente diluir la solución de la etapa (iii) o (iv) de modo que la solución tenga una actividad enzimática de 3000-5000 mU/l, medida por la capacidad de la solución para escindir el sustrato cromogénico del Factor Xa (CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH); (vi) filtrar la solución de la etapa (iii), (iv), o (v) usando un filtro con un tamaño de poro de 0,15-0,30 μm, y recoger el filtrado; y (vii) preparar dicha composición cosmética a partir del filtrado de la etapa (vi).

Description

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DESCRIPCION

Metodos para la produccion de una composicion cosmetica a partir de un fluido de eclosion de huevos de Salmonidae y usos de la misma para mejorar el aspecto cosmetico de la piel

La presente invencion se refiere al uso de una composicion que comprende polipeptidos o porciones de polipeptidos, que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae, en diversas aplicaciones para la piel. En particular, la composicion es util para alterar, preferentemente mejorar, el aspecto cosmetico de la piel envejecida.

La piel es uno de los organos mas vulnerables del cuerpo. La piel esta en constante interaccion con estfmulos externos, directa o indirectamente, y esta expuesta frecuentemente a, y afectada por, agentes ambientales. De hecho, la piel puede ser vista como el primer punto de contacto con el mundo exterior. Esta exposicion constante puede dar como resultado cambios ffsicos y visibles desagradables y/o indeseables para la piel, en particular para el aspecto cosmetico de la piel. Aunque tales cambios no pueden amenazar la salud de un individuo, tales cambios pueden ser ffsicamente incomodos o visiblemente desagradables. De hecho, dado que la piel es tan visible, los cambios en el aspecto de la piel pueden conducir a estres psicologico. Por lo tanto, existe una necesidad y demanda continuas de tratamientos eficaces para mantener, restaurar o mejorar el estado de la piel, y en particular para restaurarel aspecto juvenil de la piel.

La piel forma el organo mas grande del cuerpo, representando aproximadamente un 12-16 por ciento del peso de una persona. Realiza muchas funciones vitales como una barrera y una influencia reguladora entre el mundo exterior y el ambiente controlado dentro de nuestros cuerpos.

La piel se compone de 3 capas, es decir, epidermis, dermis e hipodermis. La epidermis es la capa epitelial superior de la piel. Actua como una barrera ffsica, evitando la perdida de agua del cuerpo, y evitando la entrada de sustancias y organismos en el cuerpo. Su espesor vana de acuerdo con el sitio del cuerpo.

La epidermis se compone de epitelio escamoso estratificado, es decir, esta se compone de capas de celulas aplanadas. La piel, el cabello y las unas estan queratinizados, lo que significa que tienen una superficie hidrofoba muerta y endurecida formada a partir de una protema llamada queratina. La epidermis se hace impermeable debido a sus contenidos de lfpidos extracelulares asociados con queratinocitos, especialmente en la capa media de la epidermis (estrato lucido). Las membranas mucosas (por ejemplo, del esofago, cavidad farrngea oral, organos reproductores y otros) estan principalmente no queratinizadas y humedas. La epidermis tiene tres tipos principales de celulas, es decir, queratinocitos (celulas cutaneas), melanocitos (celulas productoras de pigmento) y celulas de Langerhans (celulas inmunitarias). La celula de Merkel es una cuarta celula epidermica, menos prevalente.

Los queratinocitos maduran y se diferencian con acumulacion de queratina a medida que se mueven hacia el exterior. En ocasiones se caen o se retiran frotando. Forman cuatro o cinco estratos distintos, que son, desde el mas superficial al mas profundo: (i) el estrato corneo (capa cornea) con celulas duras muertas, secas, sin nucleos, (ii) el estrato granuloso (capa granular) con celulas que contienen granulos basofilos y separadas hacia el exterior del estrato corneo por el estrato lucido fino, (iii) el estrato espinoso (capa de celulas espinosas, con espinas o puntiagudas), en el que las celulas se aplanan cada vez mas a medida que se mueven hacia arriba y (iv) el estrato basal (capa basal) con celulas regenerativas en columnas (altas).

Inmediatamente debajo de la epidermis esta la membrana basal, una estructura especializada que se encuentra entre la epidermis y la dermis.

La dermis es el tejido conectivo fibroso o capa de soporte de la piel. Las fibras principales son fibras de colageno y elastina que se entretejen.

La hipodermis es la capa de grasa inmediatamente debajo de la dermis y la epidermis. Tambien se denomina tejido subcutaneo, subcutis o parnculo. La hipodermis se compone principalmente de celulas grasas (adipocitos), nervios y vasos sangumeos.

Las nuevas celulas epiteliales cutaneas se crean en la capa inferior de la piel, el estrato granuloso. Con el tiempo, las celulas migran a la superficie de la piel y se vuelven mas acidas. Durante su viaje de 30 dfas, mueren y se saturan con queratina. La queratina y los lfpidos asociados son importantes porque protegen la piel de elementos externos.

Muchos factores pueden contribuir al deterioro en el aspecto cosmetico de la piel incluyendo enfermedades, lesiones, factores ambientales, edad, niveles hormonales, medicamentos, materiales aplicados por via externa o ingerida, condiciones geneticas o una combinacion de estos y otros factores. El deterioro relacionado con la edad en el aspecto cosmetico de la piel es un factor universal, en particular el fotoenvejecimiento, es decir, la Dermatoheliosis. Este deterioro se puede observar en irregularidades o anomalfas en la piel, que pueden aparecer como, por ejemplo, piel seca, arrugas, lmeas finas, aumento de laxitud (flacidez) o alteracion de la pigmentacion.

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Fotoenvejecimiento es un termino usado para los cambios caractensticos inducidos por la exposicion cronica a los rayos UVA y UVB. El deterioro de las funciones biologicas y la capacidad para controlar el estres metabolico es una de las principales consecuencias del proceso de envejecimiento. El envejecimiento es un proceso complejo y progresivo que tambien conduce a cambios funcionales y esteticos en la piel.

El fotoenvejecimiento es un proceso de envejecimiento de la piel atribuido a la exposicion continua, a largo plazo de la piel a la radiacion ultravioleta (UV) de aproximadamente 245-290 nm, que puede ser de luz natural o sintetica. Por lo tanto, el fotoenvejecimiento se conoce tambien como envejecimiento cutaneo, en particular de la cara, orejas, cuello y manos, causado por los rayos UVA y UVB.

La piel seca y/o con escamas es uno de los signos mas comunes de envejecimiento de la piel. Aunque ciertas personas son mas susceptibles a la sequedad de piel, la aparicion de sequedad de piel puede afectar a cualquiera, independientemente de su edad, genero o tipo de piel.

La piel seca aparece cuando la capa exterior de la piel (el estrato corneo con el estrato lucido) tiene agotamiento de agua, es decir, a traves de perdida de agua transepidermica (TEWL). Cuando esta capa esta bien humedecida, esta minimiza la perdida de agua a traves de la piel y ayuda a mantener fuera los agentes irritantes, alergenos y germenes. Sin embargo, cuando el estrato corneo se seca, su funcion protectora se reduce. Esto permite una mayor perdida de agua, dejando la piel vulnerable a factores ambientales.

De forma ideal, el estrato corneo tiene un contenido de agua de un 10 % a un 30 %. Este agua imparte a la piel su textura suave, lisa y flexible, es decir, las caractensticas asociadas con el aspecto juvenil de la piel. El agua proviene de la atmosfera, las capas subyacentes de la piel y el sudor. El aceite producido por las glandulas de la piel y las sustancias grasas producidas por las celulas de la piel actuan como cremas hidratantes naturales, permitiendo que el estrato corneo se selle en agua.

El cuerpo pierde agua de la superficie de la piel continuamente por evaporacion (TEWL). En condiciones normales, la tasa de perdida es lenta, y el agua se reemplaza adecuadamente. Los signos y smtomas caractensticos de la piel seca se producen cuando la perdida de agua supera el reemplazo de agua y el contenido de agua del estrato corneo disminuye por debajo de un 10 %.

Los agentes hidratantes que mejoran o erradican la piel seca y/o con escamas, mejorando de ese modo el aspecto cosmetico de la piel, son altamente deseables. Por ejemplo, el documento WO 2011/064384 A1 desvela protemas muy acidas (VAP) y coriolisina L purificadas del fluido de eclosion de huevos de Salmonidae como agentes humectantes y exfoliantes. Aunque en la tecnica se conocen muchos agentes hidratantes, sigue existiendo la necesidad de productos naturales que sean eficaces pero suaves.

Las celulas epidermicas que presentan una pigmentacion no deseada o excesiva, es decir, hiperpigmentacion, por ejemplo, manchas de hffgado, son otro signo comun de envejecimiento de la piel. De manera tradicional la exfoliacion se puede usar para eliminar celulas epidermicas que son perjudiciales para el aspecto cosmetico de la piel.

La exfoliacion elimina los estratos externos de la epidermis para revelar las nuevas celulas de la piel por debajo. La exfoliacion se puede conseguir por medios ffsicos (es decir, abrasion de la piel) o por medios qmmicos. Los exfoliantes qmmicos incluyen exfoliantes que contienen acido salidlico, acido glicolico, enzimas de frutas, acido dtrico o acido malico y un dermatologo los puede aplicar en altas concentraciones, o en concentraciones bajas en productos sin receta medica. La exfoliacion qmmica puede implicar el uso de productos que contienen alfa hidroxi acidos (AHA) o beta hidroxi acidos (BHA), o enzimas que actuan para aflojar las sustancias similares al pegamento que mantienen las celulas juntas en las uniones celulares, permitiendo que se alejen. Este tipo de exfoliacion esta recomendada para las personas con tratamiento para el acne.

El mayor inconveniente de la exfoliacion es el precio elevado de algunos de los productos y metodos usados para conseguirlos. La exfoliacion conducira a un cierto enrojecimiento inicial de la piel. Cerca del final de las exfoliaciones qmmicas, la piel se congelara, con colores que vanan de un color blanco brillante a gris en la superficie de la piel.

De este modo, son deseables por lo tanto metodos eficaces para reducir la hiperpigmentacion de la piel, que se han mas suaves en la piel que la exfoliacion.

Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de tratamientos adecuados para estimular el aspecto estetico estetica de la piel. En otras palabras, son deseables metodos para mejorar el aspecto cosmetico de la piel. En particular, existe una demanda de metodos para restaurar el aspecto juvenil a la piel envejecida y/o combatir los signos de envejecimiento de la piel.

En la actualidad se ha encontrado de manera sorprendente que una composicion que comprende moleculas, es decir, polipeptidos o porciones de polipeptidos, que se encuentran en el fluido de eclosion de Salmonidae es notablemente eficaz para mejorar el aspecto cosmetico de la piel, en particular para reducir los signos o smtomas ffsicos asociados con el envejecimiento de la piel.

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La eclosion de embriones de pescado se consigue con diversas enzimas, conocidas como enzimas de eclosion, que son capaces de degradar la cascara de huevo proteica. Los ovocitos de todos los vertebrados tienen envolturas extracelulares caractensticas, conocidas como sacos vitalinos, cascaras de huevo o corion, que se forman por la reticulacion de diversos polipeptidos. Las proteasas con diferentes especificidades actuan en el corion para romper la cascara del huevo y facilitar la liberacion del embrion de peces. Por lo tanto, el fluido en el que el embrion de eclosiona comprende una multitud de polipeptidos y porciones de polipeptidos, es decir, productos de degradacion.

De manera sorprendente se ha encontrado que las composiciones que comprenden protemas y porciones de polipeptidos, que obtienen a partir del fluido de eclosion de Salmonidae, tienen efectos pronunciados en el aspecto cosmetico de la piel. Aunque no desea quedar vinculado a la teona, los Ejemplos demuestran que las composiciones que comprenden polipeptidos y porciones de polipeptidos de fluido de eclosion de Salmonidae son capaces de restablecer el aspecto juvenil de la piel. Se cree que la combinacion de polipeptidos y porciones de polipeptidos en las composiciones definidas en el presente documento (de las que se cree que comprenden al menos 50 polipeptidos o porciones de polipeptidos diferentes) puede interactuar con diferentes tipos de protemas presentes en la dermis y la epidermis de la piel. Se cree que la combinacion de polipeptidos y porciones de polipeptidos puede funcionar en sinergia y que estas interacciones pueden ser, al menos en parte, responsables de los efectos de la composicion en el aspecto cosmetico/estetico de la piel.

Por consiguiente, en su sentido mas amplio y de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 8, la invencion se puede contemplar para proporcionar un metodo para producir una composicion que comprende polipeptidos y porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae para su uso en, o en metodos para, transformar el aspecto estetico de la piel. En otras palabras, una composicion que comprende polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir del fluido de eclosion de Salmonidae como se describe en el presente documento para uso en, o en metodos para, mejorar el aspecto cosmetico de la piel. En un aspecto particularmente preferente, se puede considerar que la invencion proporciona una composicion que comprende polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir del fluido de eclosion de Salmonidae como se describe en el presente documento para uso en, o en metodos para, restaurar el aspecto juvenil de la piel envejecida y/o combatir los signos de envejecimiento cutaneo. La composicion a la que se ha hecho referencia anteriormente tambien se denomina en el presente documento "extracto de fluido de eclosion de Salmonidae". Ademas de polipeptidos y porciones de polipeptidos, dicho extracto puede comprender material nativo no proteico.

A partir de las siguientes divulgaciones sera evidente que, una composicion que comprende polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae, como se describe en el presente documento, se puede proporcionar como una composicion cosmetica, que comprende uno o mas excipientes y/o diluyentes farmaceuticamente aceptables.

Por lo tanto, en un aspecto la presente invencion proporciona un metodo para preparar una composicion cosmetica como se describe en el presente documento a partir de fluido de eclosion de Salmonidae (por ejemplo, fluido de eclosion de salmon) que comprende al menos las etapas de:

a) suspender huevos de Salmonidae en un volumen mmimo de agua (por ejemplo, equivalente al volumen de los huevos o inferior);

b) inducir una eclosion rapida, sincronizada de dichos huevos (preferentemente de modo que la eclosion se complete en menos de 2 horas para mas de un 95 % de los embriones);

c) opcionalmente filtrar los huevos eclosionados para obtener fluido de eclosion; y

d) filtrar el fluido de eclosion para obtener el polipeptido y/o composicion, en el que la etapa de filtrar el fluido de eclosion comprende al menos las etapas de:

(i) filtrar el fluido de eclosion usando un filtro con un tamano de poro de al menos 5 pm, preferentemente 515 pm, y de forma particularmente preferente un tamano de poro de 7 pm, y recoger el filtrado;

(ii) filtrar el filtrado de la etapa (i) usando un filtro con un tamano de poro de 0,30-0,60 pm, preferentemente un tamano de poro de 0,35-0,55 pm, de forma particularmente preferente 0,40-0,50 pm, lo mas preferentemente 0,45 pm, y recoger el filtrado;

(iii) intercambiar el agua en el filtrado de la etapa (ii) con un tampon farmaceuticamente aceptable realizando diafiltracion usando un filtro con un tamano de exclusion de menos de 15 kDa;

(iv) opcionalmente repetir la etapa de diafiltracion de la etapa (iii);

(v) opcionalmente diluir la solucion de la etapa (iii) o (iv) de modo que la solucion tenga una actividad enzimatica de 3000-5000 mU/l, medida por la capacidad de la solucion para escindir la sustancia cromogenica del Factor Xa (CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH);

(vi) filtrar la solucion obtenida a partir de la etapa (iii), o (iv) o (v) usando un filtro con un tamano de poro de 0,15-0,30 pm, preferentemente un tamano de poro de 0,22 pm y recoger el filtrado; y

(vii) preparar dicha composicion cosmetica a partir del filtrado de la etapa (vi).

La etapa de intercambiar el agua en el filtrado se realiza usando diafiltracion usando un filtro con un tamano de exclusion de menos de 15 kDa, preferentemente 10 kDa o inferior, por ejemplo 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 kDa o inferior.

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La diafiltracion usa membranas de ultrafiltracion para retirar por ejemplo sales u otros microsolutos que no se quieren o no se desean a partir de una solucion o como un medio para intercambiar el disolvente, por ejemplo tampon, de una solucion. Las moleculas pequenas se separan a partir de una solucion a la vez que se retienen moleculas mas grandes en la fraccion retenida (el material que no pasa a traves del filtro). Los microsolutos y disolventes, por ejemplo agua, por lo general se lavan facilmente a traves de la membrana. Por lo general aproximadamente 3 volumenes de disolvente de diafiltracion eliminaran un 95 % del microsoluto. Por lo tanto, el filtrado de la etapa (ii) mencionado anteriormente se procesa inicialmente por diafiltracion y esto da como resultado la concentracion de la fraccion retenida como una proporcion de la solucion (que contiene las impurezas solubles/fraccion no deseada del fluido de eclosion) que pasa a traves de la membrana. A continuacion, la fraccion retenida se diluye con un tampon farmaceuticamente aceptable, por ejemplo Fosfato sodico 0,5 mM y Cloruro sodico 1 mM, solucion salina tamponada con fosfato, etc. La fraccion retenida diluida se puede someter a rondas repetidas de diafiltracion, si fuera necesario. Por lo general, antes de la etapa (iv) la fraccion retenida se diluye de modo que el filtrado de la etapa (iv) tiene una actividad enzimatica de 3000-5000 mU/l, preferentemente 3000-4000 mU/l y lo mas preferentemente aproximadamente 3400 mU/l. La actividad enzimatica del filtrado se puede medir por la capacidad de la solucion para escindir el sustrato cromogenico del Factor Xa (CHaOCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH, numero de producto de Sigma Aldrich: F3301-25MG). Antes de la etapa de diafiltracion, el fluido de eclosion puede comprender una actividad enzimatica en el intervalo de 10 a 150.000 mU/l.

El sustrato cromogenico del Factor Xa (Sigma-Aldrich) se extinguen mediante una enzima presente en el fluido de eclosion proporcionando un producto de color amarillo que se puede medir de forma conveniente usando analisis espectrofotometrico, a una longitud de onda de 405 nm. Un ensayo habitual comprende la adicion de 100 pl de solucion de fluido de eclosion, que se puede obtener a partir de la etapa (iii) del metodo mencionado anteriormente, a 600 pl de solucion de sustrato, que comprende 10 pl de sustrato cromogenico del Factor Xa (10 mg/ml), 70 pl de Tris-HCl 0,2 M a pH 8,5 y 520 pl de dH2O. De forma conveniente, el cambio de absorbancia se puede medir durante 5-20 minutos, por lo general 10 minutos. El resultado se multiplica con un factor apropiado, por ejemplo 10 (para un ensayo de 10 minutos) para obtener la actividad enzimatica por 1 ml de muestra. Para determinar la actividad del fluido de eclosion se pueden usar otros sustratos apropiados y equivalentes.

La eclosion sincronizada se puede conseguir mediante cualquier metodo adecuado conocido en la tecnica. Por ejemplo, los huevos se pueden sincronizar usando fotomanipulacion, por ejemplo transferencia de huevos de la luz (que inhibe la eclosion) a condiciones sin luz. La manipulacion de la temperatura de la solucion, mediante desoxigenacion (Oppen-Berntsen et al., 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430), y estimulacion usando electricidad tambien se puede usar para producir la eclosion sincronizada. Como se ha indicado anteriormente, un volumen mmimo de agua puede ser equivalente al volumen de huevos o inferior, por ejemplo para cada 1 ml de huevos se puede usar un lfquido de suspension < 1, 0,75, 0,5, 0,25 ml, por ejemplo de 0,5 a 1 ml.

El metodo para preparar una composicion cosmetica descrita anteriormente da como resultado una preparacion enriquecida que de manera sustancial esta preferentemente libre de cualquier componente contaminante obtenido a partir del material de fuente o material usado en el procedimiento de aislamiento, por ejemplo componentes distintos de los polipeptidos o porciones de polipeptidos comprendidos en el fluido de eclosion sin procesar. En una realizacion preferente, la composicion se puede enriquecer hasta un grado de pureza de mas de un 30, 40, 50 o 60 %, por ejemplo > 70, 80 o un 90 %, de pureza tal como se evalua en p/p (peso seco) de los polipeptidos y porciones de polipeptidos en comparacion con el fluido de eclosion de partida, es decir, una pureza de un 90 % se refiere a una perdida de un 90 % del material de partida (componentes contaminantes) durante el transcurso del metodo de preparacion. Sin embargo, se pueden usar composiciones que tengan una pureza menor, por ejemplo, que retengan mas de un 40, 50, 60, 70, 80 o un 90 % del material de partida.

Aunque el propio filtrado forma la composicion cosmetica, opcionalmente el producto (el filtrado de la etapa (vi)) obtenido o que se puede obtener a partir del metodo mencionado anteriormente se puede diluir (o concentrar) hasta una concentracion apropiada antes de su uso en los metodos y usos de la invencion. Por lo tanto, el metodo puede comprender una etapa adicional de diluir (o concentrar) la composicion. Preferentemente, el filtrado se puede diluir (o concentrar) mediante un factor de al menos 1,5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 o 10000. En una realizacion particularmente preferente, la solucion de la etapa (iii) del metodo mencionado anteriormente se diluye o se concentra para conseguir una solucion con una actividad enzimatica de 1000-10000 mU/l tal como se mide con el metodo que se ha descrito anteriormente. Preferentemente, la solucion, y por lo tanto el filtrado de la etapa (iv) comprende una actividad de 2000-10000, 3000-9000, 3000-7000, 3000-6000, 3000-5000 o 3000-4000 mU/l. Mas preferentemente la solucion comprende una actividad de aproximadamente 3400 mU/l.

Opcionalmente, uno o mas excipientes y/o diluyentes farmaceuticamente aceptables se pueden anadir al producto obtenido o que se puede obtener a partir del metodo mencionado anteriormente. Por lo tanto, el metodo puede comprender una etapa adicional de anadir uno o mas excipientes y/o diluyentes farmaceuticamente aceptables a la composicion o combinar la composicion con uno o mas excipientes y/o diluyentes farmaceuticamente aceptables. Las etapas alternativas o adicionales del metodo de preparacion incluyen cambiar o modificar el disolvente, por ejemplo, pH, concentracion ionica, etc.

Otros componentes o ingredientes farmaceuticamente aceptables se pueden anadir al producto obtenido o que se

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puede obtener a partir del metodo mencionado anteriormente. El uno u otros componentes mas pueden ser componentes activos, es decir, componentes que tienen un efecto en la piel, preferentemente que tambien actuan para transformar el aspecto estetico de la piel o mejorar el aspecto cosmetico de la piel, por ejemplo en las indicaciones cosmeticas que se describen en el presente documento. Por lo tanto, como alternativa o adicionalmente, el metodo puede comprender una etapa adicional de anadir uno o mas componentes activos farmaceuticamente aceptables a la composicion o combinar la composicion con uno o mas componentes activos farmaceuticamente aceptables. Los componentes activos farmaceuticamente aceptables pueden incluir minerales, vitaminas, enzimas, protemas, peptidos, aminoacidos, lfpidos, antioxidantes, polisacaridos, sustancias adecuadas como filtros de pantalla solar, exfoliantes qmmicos, extractos y mezclas de los mismos, como se describe con mas detalle a continuacion.

La composicion cosmetica obtenida o que se puede obtener a partir de los metodos mencionados anteriormente es adecuada para su uso en los metodos de la invencion, como se describe en cualquier parte en el presente documento. En particular, la composicion cosmetica es para su uso para mejorar el aspecto cosmetico en la piel en un animal mairnfero.

La invencion tambien proporciona un metodo para mejorar el aspecto cosmetico de la piel de un animal marnffero en el que una composicion cosmetica como se ha definido anteriormente se administra a dicho animal.

Un aspecto adicional de la invencion es el uso de una composicion cosmetica como se ha definido anteriormente en la preparacion de un medicamento para mejorar el aspecto cosmetico de la piel de un animal mamnfero.

Los "polipeptidos", como se denominan en el presente documento, son moleculas preferentemente con mas de 50, 100, 150, 200 o 250 restos y/o menos de 500, 400, 300, 200 o 100 restos o un intervalo seleccionado a partir de los mismos. Como se denomina en el presente documento, una "porcion" comprende preferentemente al menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 o mas aminoacidos de la secuencia a partir de la que se obtiene. Dicha porcion se puede obtener a partir de una porcion central o porciones N-terminales o C-terminales de la secuencia.

Las composiciones, como se define en el presente documento, se pueden obtener a partir de cualquier huevo de Salmonidae, que se pueden visualizar como variaciones biologicas naturales del material de partida. Los huevos de Salmonidae particularmente preferentes son los de las subfamilias Salmo y Oncorhynchus. Un material de partida especialmente preferente para el metodo descrito anteriormente son los huevos de salmon del Atlantico (Salmo salar) o salmon del Padfico (Oncorhynchus masou).

Las composiciones cosmeticas que se describen en el presente documento son para su uso in vivo como se discute en el presente documento.

Por "farmaceuticamente aceptable" o "fisiologicamente aceptable" se hace referencia a que el ingrediente debe ser adecuado para aplicacion y composiciones cosmeticas. Los ingredientes tambien deben ser compatibles con otros ingredientes en la composicion asf como fisiologicamente aceptables para el receptor.

El principio activo, es decir, la composicion que se puede obtener con el metodo descrito anteriormente, para su administracion se puede modificar de manera apropiada para su uso en una composicion cosmetica. Por ejemplo la composicion usada de acuerdo con la invencion se puede estabilizar frente a la degradacion, por ejemplo, con el uso de aditivos apropiados tales como sales o no electrolitos, acetato, SDS, EDTA, tampones citrato o acetato, manitol, glicina, HSA o polisorbato.

Las composiciones obtenidas con los metodos que se describen en el presente documento pueden estar presentes en las composiciones para los usos cosmeticos como el unico principio activo o se pueden combinar con otros ingredientes, en particular otros principios activos, por ejemplo para aumentar el efecto cosmetico (como se ha descrito anteriormente) o para hacer que la composicion sea mas atractiva para el consumidor.

Como se ha mencionado anteriormente, las composiciones que se describen en el presente documento presentan propiedades que son utiles para mejorar el aspecto cosmetico de la piel, en particular de la piel envejecida, por ejemplo piel fotoenvejecida.

La composicion descrita en el presente documento tambien puede comprender impurezas, por ejemplo despues de la preparacion de dicha composicion a partir de uno de las fuentes naturales descritas anteriormente. En las composiciones que se describen en el presente documento, los diversos polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae pueden estar presentes (en combinacion) en el intervalo de un 0,0001 a un 50 % p/p de la composicion cosmetica preparada de acuerdo con el metodo que se ha descrito anteriormente. Preferentemente dichos polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae estan presentes (en combinacion) en un intervalo de un 0,0001 a un 10 % p/p de la composicion cosmetica (o hasta un 10-40 %), por ejemplo de un 0,0001 a un 5 %, de un 0,0001 a un 3 %, de un 0,0001 a un 2%, de un 0,0001 a un 1 %, de un 0,0001 a un 0,5%, de un 0,0001 a un 0,1 % p/p de la

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composicion cosmetica preparada de acuerdo con el metodo mencionado anteriormente o son como se describe en lo sucesivo en el presente documento, por ejemplo despues de su dilucion. Por consiguiente, los polipeptidos o porciones de polipeptidos individuales que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae pueden estar presentes en el intervalo de un 1x10-6 a un 10 % p/p de la composicion cosmetica. En algunas realizaciones dichos polipeptidos o porciones de polipeptidos individuales que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae pueden estar presentes en el intervalo de un 1x10-6 a un 5% p/p de la composicion cosmetica, por ejemplo de un 1x10-6 a un 4 %, de un 1x10-6 a un 3 %, de un 1x10-6 a un 2 %, de un 1x10-6 a un 1 %, de un 1x10-6 a un 0,5 %, de un 1x10-6 a un 0,1 % o de un 1x10-6 a un 0,01 % p/p de la composicion cosmetica.

La proporcion de los polipeptidos o porciones de polipeptidos que se pueden obtener a partir de fluido de eclosion de Salmonidae en las composiciones cosmeticas se pueden definir con respecto a los otros solutos en la composicion, es decir, excluyendo disolventes, por ejemplo agua. Por lo tanto, dichos polipeptidos o porciones de polipeptidos, en combinacion, pueden estar presentes en el intervalo de un 1-100 % en p/p de la masa seca de la composicion. En algunas realizaciones los polipeptidos o porciones de polipeptidos, en combinacion, pueden estar presentes en el intervalo de un 1-90 % p/p de la masa seca de la composicion, por ejemplo 5-80 %, 10-70 %, 20-60 %, 30-50 % p/p de la masa seca de la composicion. En otras realizaciones the polipeptidos o porciones de polipeptidos, en combinacion, pueden estar presentes en el intervalo de un 1-40 %, 2-39 %, 3-38 %, 4-37 % etc., en p/p de la masa seca de la composicion. Por lo tanto, los polipeptidos o porciones de polipeptidos individuales pueden estar presentes en el intervalo de un 0,0001 a un 50 % p/p de la masa seca de la composicion, por ejemplo de un 0,0001 a un 40 %, de un 0,001 a un 30 %, de un 0,01 a un 25 % p/p de la masa seca de la composicion. Como se describe en lo sucesivo en el presente documento, la composicion se puede diluir para su uso de acuerdo con la invencion.

Aunque la invencion se refiere a metodos para mejorar el aspecto cosmetico de la piel, estos pueden incluir el tratamiento de un trastorno, anomalfa o afeccion, pero en todos los casos el tratamiento tiene una naturaleza cosmetica.

Como se denomina en el presente documento, "cosmetico" pretende hacer referencia a un tratamiento que no cura, trata o previene una enfermedad o trastorno, sino que en su lugar sirve como un producto para el cuidado de la piel o para modificar o mejorar el aspecto de la piel, por ejemplo el color, textura o contenido de humedad de la piel.

La base de los tratamientos que se describen en el presente documento es los efectos de antienvejecimiento de la piel de la composicion cosmetica como se desvela en el presente documento. Estos efectos se han mostrado en los Ejemplos proporcionados en el presente documento.

Por lo tanto, se contemplan tratamientos basados en las propiedades antienvejecimiento de la composicion cosmetica.

Por lo tanto la invencion proporciona un metodo cosmetico para mejorar el aspecto de la piel de un animal mairnfero, en el que una composicion cosmetica como se ha descrito anteriormente en el presente documento, se administra a dicho animal.

En una realizacion particularmente precedente, la piel es piel envejecida.

"Piel envejecida" se refiere a piel que presenta uno o mas signos o smtomas de envejecimiento, es decir, la aparicion de arrugas, lmeas finas, hiperpigmentacion, laxitud (flacidez), piel seca, formacion de escamas o perdida de agua transepidermica (TEWL). En particular, la "piel envejecida" se determina con respecto a la piel optima normal, es decir, piel sana, hidratada, normalmente cimentada y no envejecida. En este sentido, no es necesario que la piel envejecida se relacione con la edad del sujeto y se puede envejecer de manera prematura, por ejemplo mediante exposicion cronica a la luz solar (dano por la luz solar). Por lo tanto, los parametros relativos para "piel optima normal" se pueden determinar como las mediciones promedio de los signos de envejecimiento mencionados anteriormente a partir de un numero de sujetos de la misma edad similar con respecto al sujeto en cuestion, por ejemplo sujetos que no han recibido exposicion cronica a la luz solar. Como alternativa, los parametros relativos para "piel optima normal" se pueden tomar como las mediciones a partir de los sujetos que son mas jovenes que el sujeto en cuestion. En otras palabras, la composicion que se describe en el presente documento se puede usar para restablecer el aspecto juvenil de la piel, con respecto a la piel del sujeto a una edad mas temprana.

Por lo tanto, la invencion proporciona un metodo cosmetico para el tratamiento de dermatoheliosis en un animal mamffero en el que una composicion cosmetica, como se ha descrito anteriormente en el presente documento, se administra a dicho animal, preferentemente en el que dicha composicion se administra por via topica.

Visualizado de forma alternativa, la invencion proporciona una composicion cosmetica como se ha descrito anteriormente en el presente documento para su uso en el tratamiento de dermatoheliosis en un animal mamffero, preferentemente en el que dicha composicion cosmetica estara su administracion a la piel de dicho animal. En una realizacion en particular, la composicion es para administracion por via topica.

En una realizacion particularmente preferente, la mejora del aspecto cosmetico de la piel (por ejemplo, piel

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envejecida o danada por la luz solar) implica una reduccion o prevencion en el aspecto cosmetico o predominio de arrugas, lmeas finas, hiperpigmentacion, laxitud, piel seca, formacion de escamas y/o perdida de agua transepidermica. Uno o mas de estos parametros se puede mejorar. Preferentemente, las lmeas finas y/o arrugas se reducen.

La reduccion o prevencion en el aspecto cosmetico o predominio de los signos o smtomas de, por ejemplo, piel envejecida o dermatoheliosis, puede significar que existe una reduccion en el numero y/o la gravedad del signo o smtoma. Por ejemplo, el numero de lmeas finas y arrugas se puede reducir y/o el tamano, por ejemplo la profundidad, de las arrugas o lmeas finas se puede reducir o minimizar. Ademas, la reduccion o prevencion puede implicar detener o reducir la tasa de aparicion de nuevos signos o smtomas.

"Piel seca", como se denomina en el presente documento se refiere a una epidermis que carece de humedad o sebo, a menudo caracterizada por un patron de lmeas finas, formacion de escamas y una sensacion de picor y/o ardor. La piel seca puede ocurrir como una afeccion de la piel en sf misma (por ejemplo, debido a la edad) o puede ser el smtoma de un trastorno o afeccion de la piel tales como dano solar.

En este sentido, la reduccion de piel seca, formacion de escamas, lmeas finas o perdida de agua transepidermica se puede conseguir mediante los efectos hidratantes de la composicion que se ha descrito anteriormente.

Por lo tanto, se puede contemplar que la invencion proporciona un metodo cosmetico para hidratar la piel de un animal mairnfero, en el que una composicion cosmetica, como se define en el presente documento, se administra a dicho animal.

Como se indica de forma alternativa, la presente invencion proporciona una composicion cosmetica como se describe en el presente documento para su uso para hidratar la piel de un animal mamffero. (Como alternativa, la composicion se puede usar para preparar un medicamento cosmetico para ese fin).

"Hidratante", como se menciona en el presente documento, abarca agentes hidratantes que evitan la perdida de agua de la piel, (por ejemplo, TEWL) asf como agentes hidratantes (humectantes) que atraen y retienen agua cuando se aplican a la piel y emolientes (que mejoran la descamacion defectuosa).

Como se ha mencionado anteriormente, tales propiedades hidratantes son ventajosas para mejorar el aspecto cosmetico de la piel. En una realizacion particularmente preferente, la piel es la piel de la cara, orejas, cuello, manos o cuero cabelludo.

Las "arrugas" son pliegues, pliegues epidermicos o rayas en la piel. Por lo general, las arrugas de la piel aparecen como resultado de procesos de envejecimiento. En este sentido, la dermis comprende muchos de los elementos estructurales de la piel, que incluyen colageno, da a la piel su fuerza, glicosaminoglicanos que dan a la piel su turgencia, y fibras de elastina que dan a la piel su elasticidad o recuperacion.

A medida que la piel envejece, la capa dermica se hace mas delgada y la piel tambien produce menos colageno. Ademas, las fibras de elastina que proporcionan elasticidad se desgastan. Estos cambios en el andamiaje de la piel hacen que la piel se arrugue y se vuelva flacida. Las crestas interpapilares de la union dermo-epidermica se aplanan, haciendo la piel mas fragil y haciendo mas facil que la piel se desgarre. Este proceso tambien disminuye la cantidad de nutrientes disponibles para la epidermis al disminuir el area superficial en contacto con la dermis, interfiriendo tambien con el proceso de reparacion normal de la piel.

En la capa subcutanea las celulas adiposas se vuelven mas pequenas con la edad. Esto conduce a arrugas y flacidez (laxitud) mas perceptibles, ya que las celulas adiposas no pueden "reemplazar" el dano de las otras capas.

La exposicion a radiacion UVA y UVB, es decir luz solar, hace que el colageno se descomponga a una tasa mas elevada que simplemente el envejecimiento cronologico. La luz del sol dana las fibras de colageno y provoca la acumulacion anomala de elastina. Cuando esta elastina inducida por el sol se acumula, las metaloproteinasas de matriz (MMP) se producen en grandes cantidades. Normalmente, las metaloproteinasas remodelan la piel lesionada por el sol fabricando y reformando el colageno. Sin embargo, este proceso no siempre funciona bien y algunas de las metaloproteinasas realmente rompen el colageno. Esto da como resultado la formacion de fibras de colageno desorganizadas conocidas como cicatrices solares. La repeticion de este proceso imperfecto de reconstruccion/regeneracion hace que se produzcan arrugas y laxitud de la piel.

En otro aspecto preferente adicional, la afeccion cutanea a tratar o prevenir cosmeticamente es una afeccion, trastorno o anomalfa de la pigmentacion.

Los trastornos o anomalfas de pigmentacion de la piel, es decir hiperpigmentacion, se pueden producir como resultado de la edad o pueden resultar del envejecimiento prematuro debido por ejemplo al dano por el sol. La alteracion de la pigmentacion puede resultar de un exceso local de melanocitos o de aumentos en la actividad de los melanocitos, o ambos. Los trastornos de pigmentacion incluyen manchas de hngado, sol o edad (lentigo solar) y

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otras manchas tales como pecas.

Como se denomina en el presente documento, la "mejora" del aspecto cosmetico de la piel se determina en relacion con la piel optima normal, es decir piel sana, hidratada, normalmente pigmentada y no envejecida. Por lo tanto, con respecto a la piel envejecida, uno o mas de los signos o smtomas de envejecimiento se puede medir como se describe en los Ejemplos y comparado con los mismos signos de piel que es cronologica o fisiologicamente mas joven, preferentemente cuando una mejora es la reduccion en uno o mas de los signos o smtomas de envejecimiento.

En un aspecto preferente, los usos cosmeticos se consiguen mediante administracion topica a la piel.

Como se usa en el presente documento, "tratar" se refiere a la reduccion, alivio o eliminacion, preferentemente a niveles normales, de uno o mas de los smtomas o efectos cosmeticos de dicha afeccion o trastorno, por ejemplo presencia o extension de piel seca, extension o area de pigmentacion, etc., con respecto a los smtomas o efectos presentes en una parte diferente del cuerpo de dicho individuo en el que la piel no sufre dicho estado o trastorno y no esta sometida a dicho tratamiento o en un individuo normal no sometido a dicho tratamiento.

"Prevenir" o "reducir" se refiere a prevencion absoluta, o reduccion o alivio del alcance o sincronizacion (por ejemplo, retraso) de la aparicion de ese smtoma o efecto. Por ejemplo, las afecciones tipificadas como piel seca, pigmentada de forma anomala y arrugada se pueden prevenir mediante la aplicacion regular de las composiciones cosmeticas que se describen en el presente documento antes de la aparicion de tal afeccion.

Los metodos cosmeticos de tratamiento o prevencion de acuerdo con la invencion se pueden combinar de forma ventajosa con la administracion de uno o mas principios activos que son eficaces para tratar o prevenir los trastornos o afecciones y/o para conseguir, por ejemplo, hidratacion. Por lo tanto, las composiciones cosmeticas descritas en el presente documento pueden contener adicionalmente uno o mas de tales principios activos.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, los inventores proporcionan composiciones como se define en el presente documento y opcionalmente uno o mas principios activos adicionales como una preparacion combinada para el uso simultaneo, separado o secuencial en terapia animal de seres humanos o mairnferos, como se describe en el presente documento.

Las composiciones que se describen en el presente documento se pueden formular de manera convencional con uno o mas vehmulos, excipientes y/o diluyentes fisiologicamente aceptables, de acuerdo con tecnicas bien conocidas en la tecnica usando ingredientes facilmente disponibles.

Por lo tanto, las composiciones se pueden incorporar, opcionalmente junto con otras sustancias activas como una preparacion combinada, con uno o mas vehmulos, diluyentes y/o excipientes convencionales, para producir preparaciones galenicas convencionales tales como polvos, bolsitas, obleas, elixires, suspensiones (fluidos de infusion), emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (en forma de un solido o en un medio lfquido), pomadas, polvos envasados esteriles, y similares. Las composiciones se pueden estabilizar mediante el uso de liofilizacion, subenfriamiento o Permazyme.

Los excipientes, vehmulos o diluyentes adecuados son lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arabiga, fosfato calcico, carbonato calcico, lactosa calcica, almidon de mafz, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato calcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, jarabe acuoso, agua, agua/etanol, agua/glicol, agua/polietileno, glicol, propilenglicol, metil celulosa, metilhidroxibenzoatos, propil hidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceite mineral o sustancias grasas tales como grasa dura o mezclas adecuadas de los mismos. Para obtener formulaciones de liberacion sostenida tambien se pueden usar agentes, tales como carboxipolimetileno, carboximetil celulosa, acetato ftalato de celulosa, o acetato de polivinilo.

Las composiciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulgentes, agentes que aumentan la viscosidad, agentes de granulacion, agentes disgregantes, agentes aglutinantes, agentes activos osmoticos, agentes de suspension, agentes conservantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, potenciadores de la adsorcion (por ejemplo, agentes penetrantes de superficie, por ejemplo sales biliares, lecitinas, tensioactivos, acidos grasos, quelantes), agentes de oscurecimiento, disolvente organico, antioxidante, agentes estabilizantes, emolientes, silicona, alfa-hidroxiacido, demulcente, agente antiespumante, agente hidratante, vitamina, fragancia, espesantes ionicos o no ionicos, tensioactivos, agentes de carga, espesante ionico o no ionico, secuestrante, polfmero, propulsor, agente alcalinizante o acidificante, opacificante, agentes colorantes y compuestos grasos y similares. Algunos de estos componentes se describen con mas detalle a continuacion.

Otros principios o componentes activos en la composicion cosmetica se pueden seleccionar a partir de uno cualquiera o mas de minerales, vitaminas, enzimas, protemas, peptidos, aminoacidos, lfpidos, polisacaridos, sustancias adecuadas como filtros de pantalla solar, exfoliantes qmmicos, extractos, agentes acondicionadores de la piel, antioxidantes y mezclas de los mismos.

Los ejemplos de protemas que se pueden combinar con la composicion de la invencion incluyen colageno y/o un derivado del mismo (por ejemplo, porciones del mismo como se ha definido anteriormente), una protema o peptido que es capaz de estimular el crecimiento celular, glicoprotema 1, glicoprotema 2 y laminina.

5 La composicion de la invencion se puede combinar con enzimas que incluyen, pero no se limitan a, uno cualquiera o mas de, enzimas de frutas (por ejemplo, bromelama), superoxido dismutasa, peroxidasa, hialuronidasa y mucopolisacaridasa.

Los peptidos se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre uno cualquiera o mas de D,L-carnosina, D- 10 carnosina, L-carnosina, anserina y Matrixyl (derivado pentapeptfdico).

Los aminoacidos se pueden seleccionar entre, pero no se limitan a, uno cualquiera o mas de L-alanina, L-arginina, L- asparagina, acido L-aspartico, L-cistema, L-cistina, glicina, L-glutamina, acido L-glutamico, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofano, L-tirosina, y L-valina y 15 derivados de los mismos incluyendo aminoacidos de origen no natural como se define en la Tabla 1. Los aminoacidos particularmente preferentes como antioxidantes se pueden seleccionar entre uno o mas de glicina, lisina, arginina, cistema, cistina, histidina, tirosina y triptofano.

TABLA 1

Aminoacido Codigo Aminoacido Codigo

no convencional no convencional

acido a-aminobutmco

Abu L-N-metilalanina Nmala

a-amino-a-metilbutirato

Mgabu L-N-metilarginina Nmarg

aminociclopropano-

Cpro L-N-metilasparagina Nmasn

carboxilato

acido L-N-metil aspartico Nmasp

acido aminoisobutrnco

Aib L-N-metilcistema Nmcys

aminonorbornil-

Norb L-N-metilglutamina Nmgln

carboxilato

acido L-N-metilglutamico Nmglu

ciclohexilalanina

Chexa L-N-metilhistidina Nmhis

ciclopentilalanina

Cpen L-N-metilisoleucina Nmile

D-alanina

Dal L-N metilleucina Nmleu

D-arginina

Darg L-N-metillisina Nmlys

acido D-aspartico

Dasp L-N-metilmetionina Nmmet

D-cistema

Dcys L-N-metilnorleucina Nmnle

D-glutamina

Dgln L-N-metilnorvalina Nmnva

acido D-glutamico

Dglu L-N-metilornitina Nmorn

D-histidina

Dhis L-N-metilfenilalanina Nmphe

D-isoleucina

Dile L-N-metilprolina Nmpro

D-leucina

Dleu L-N-metilserina Nmser

D-lisina

Dlys L-N-metiltreonina Nmthr

D-metionina

Dmet L-N-metiltriptofano Nmtrp

D-ornitina

Dorn L-N-metiltirosina Nmtyr

D-fenilalanina

Dphe L-N-metilvalina Nmval

D-prolina

Dpro L-N-metiletilglicina Nmetg

D-serina

Dser L-N-metil-t-butilglicina Nmtbug

D-treonina

Dthr L-norleucina Nle

D-triptofano

Dtrp L-norvalina Nva

D-tirosina

Dtyr a-metil-aminoisobutirato Maib

D-valina

Dval a-metil-Y-aminobutirato Mgabu

Aminoacido no convencional

Codigo Aminoacido no convencional Codigo

D-a-metilalanina

Dmala a-metilciclohexilalanina Mchexa

D-a-metilarginina

Dmarg a-metilcylcopentilalanina Mcpen

D-a-metilasparagina

Dmasn a-metil-a-naftilalanina Manap

D-a-metilaspartato

Dmasp a-metil penicillamina Mpen

D-a-metilcistema

Dmcys N-(4-aminobutil)glicina Nglu

D-a-metilglutamina

Dmgln N-(2-aminoetil)glicina Naeg

D-a-metilhistidina

Dmhis N-(3-aminopropil)glicina Norn

D-a-metilisoleucina

Dmile N-amino-a-metilbutirato Nmaabu

D-a-metilleucina

Dmleu a-naftilalanina Anap

D-a-metillisina

Dmlys N-bencilglicina Nphe

D-a-metilmetionina

Dmmet N-(2-carbamiletil)glicina Ngln

D-a-metilornitina

Dmorn N-(carbamilmetil)glicina Nasn

D-a-metilfenilalanina

Dmphe N-(2-carboxietil)glicina Nglu

D-a-metilprolina

Dmpro N-(carboximetil)glicina Nasp

D-a-metilserina

Dmser N-ciclobutilglicina Ncbut

D-a-metiltreonina

Dmthr N-cicloheptilglicina Nchep

D-a-metiltriptofano

Dmtrp N-ciclohexilglicina Nchex

D-a-metiltirosina

Dmty N-ciclodecilglicina Ncdec

D-a-metilvalina

Dmval N-ciclododecilglicina Ncdod

D-N-metilalanina

Dnmala N-ciclooctilglicina Ncoct

D-N-metilarginina

Dnmarg N-ciclopropilglicina Ncpro

D-N-metilasparagina

Dnmasn N-cicloundecilglicina Ncund

D-N-metilaspartato

Dnmasp N-(2,2-difeniletil)glicina Nbhm

D-N-metilcistema

Dnmcys N-(3,3-difenilpropil)glicina Nbhe

D-N-metilglutamina

Dnmgln N-(3-guanidinopropil)glicina Narg

D-N-metilglutamato

Dnmglu N-(1-hidroxietil)glicina Nthr

D-N-metilhistidina

Dnmhis N-(hidroxietil))glicina Nser

D-N-metilisoleucina

Dnmile N-(imidazoliletil))glicina Nhis

D-N-metilleucina

Dnmleu N-(3-indolilietil)glicina Nhtrp

D-N-metillisina

Dnmlys N-metil-Y-aminobutirato Nmgabu

N-metilciclohexilalanina

Nmchexa D-N-metilmetionina Dnmmet

D-N-metilornitina

Dnmorn N-metilciclopentilalanina Nmcpen

N-metilglicina

Nala D-N-metilfenilalanina Dnmphe

N-metilaminoisobutirato

Nmaib D-N-metilprolina Dnmpro

N-(1-metilpropil)glicina

Nile D-N-metilserina Dnmser

N-(2-metilpropil)glicina

Nleu D-N-metiltreonina Dnmthr

D-N-metiltriptofano

Dnmtrp N-(1-metiletil)glicina Nval

D-N-metiltirosina

Dnmtyr N-metila-naftilalanina Nmanap

D-N-metilvalina

Dnmval N-metilpenicilamina Nmpen

Y-aminobutmco acido

Gabu N-(p-hidroxifenil)glicina Nhtyr

L-f-butilglicina

Tbug N-(tiometil)glicina Ncys

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Aminoacido no convencional

Codigo Aminoacido no convencional Codigo

L-etilglicina

Etg penicilamina Pen

L-homofenilalanina

Hphe L-a-metilalanina Mala

L-a-metilarginina

Marg L-a-metilasparagina Masn

L-a-metilaspartato

Masp L-a-metil-f-butilglicina Mtbug

L-a-metilcistema

Mcys L-metiletilglicina Metg

L-a-metilglutamina

Mgln L-a-metilglutamato Mglu

L-a-metilhistidina

Mhis L-a-metilhomofenilalanina Mhphe

L-a-metilisoleucina

Mile N-(2-metiltioetil)glicina Nmet

L-a-metilleucina

Mleu L-a-metillisina Mlys

L-a-metilmetionina

Mmet L-a-metilnorleucina Mnle

L-a-metilnorvalina

Mnva L-a-metilornitina Morn

L-a-metilfenilalanina

Mphe L-a-metilprolina Mpro

L-a-metilserina

Mser L-a-metiltreonina Mthr

L-a-metiltriptofano

Mtrp L-a-metiltirosina Mtyr

L-a-metilvalina

Mval L-N-metilhomofenilalanina Nmhphe

N-(N-(2,2-difeniletil)

Nnbhm N-(N-(3,3-difenilpropil) Nnbhe

carbamilmetil)glicina

carbamilmetil)glicina

1-carboxi-1-(2,2-difenil-

Nmbc L-O-metil serina Omser

etilamino)ciclopropano

L-O-metil homoserina Omhser

La composicion cosmetica puede comprender uno o mas Ifpidos que incluyen grasas, aceites, ceras y similares. Los aceites polares adecuados son, por ejemplo, los del grupo de lecitinas y trigliceridos de acido graso, en particular los esteres de triglicerol de acidos aIcanocarbox^Iicos saturados y/o insaturados, ramificados y/o no ramificados con una longitud de cadena de 8 a 24, en particular de 12 a 18, atomos de carbono. Por ejemplo, los trigliceridos de acido graso se pueden escoger de forma ventajosa entre el grupo de aceites sinteticos, semisinteticos y naturales, tales como, por ejemplo, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de soja, aceite de cacahuete, aceite de colza, aceite de almendra, aceite de palma, aceite de coco, aceite de ricino, aceite de germen de trigo, aceite de semilla de uva, aceite de cardo, aceite de onagra, aceite de nuez de macadamia y similares.

Como alternativa o adicionalmente el aceite se puede seleccionar entre aceites volatiles, aceites no volatiles o mezclas de los mismos. Los aceites no volatiles presentan aceites que cumplen al menos uno de las siguientes definiciones: (a) el aceite presenta una presion de vapor no superior a 2,7 x10-2 kPa a 25 °C y una presion atmosferica; (b) el aceite tiene un punto de ebullicion a 101 kPa de al menos 300 °C. Los aceites volatiles incluyen materiales que no son "no volatiles" como se ha definido anteriormente.

Los aceites no volatiles se pueden seleccionar entre aceites de silicona no volatiles, aceites de hidrocarburos no volatiles y mezclas de los mismos. Los aceites de silicona no volatiles adecuados incluyen polimetilsiloxanos lineales y, preferentemente, los aceites de silicona no volatiles son dimeticonas de alto peso molecular. Los ejemplos de polimetilsiloxanos lineales disponibles en el mercado incluyen DC 200 Fluid 20Cst, DC 200 Fluid 100Cst, DC 200 Fluid 350Cst de Dow Corning Corporation.

Los aceites de hidrocarburos no volatiles adecuados incluyen esteres ramificados de diglicerina o triglicerina o los esteres o 1,2,3,4 butano triol o eritritol, di eritritol o tri eritritol. Preferentemente, los aceites de hidrocarburos no volatiles comprenden trietil-hexanoato de eritritilo (disponible como Salacos E-38 de Nisshin Oilio) y triisoestearato de Poligliceril-2 (disponible, Cosmol 43V de Nisshin Oilio), carbonato de dietil hexilo (disponible como Tegosoft DEC de Degussa), dicapril Eter (disponible como Cetiol OE de Cognis AG), Carbonato de dicaprilo (disponible como Cetiol CC de Cognis AG), isononanoato de isononilo (disponible como Lanol 99 de Seppic), Neopentanoato de tridecilo (proporcion, Ceraphyl 55 de International Speciality Products), o una mezcla de los mismos.

Los aceites volatiles se pueden seleccionar entre aceites de silicona volatiles, tanto funcionalizados como no funcionalizados, aceites de hidrocarburos volatiles y mezclas de los mismos. El aceite volatil util en la presente invencion puede ser saturado o insaturado, puede tener una cadena lineal o ramificada o una estructura dclica o puede tener una o mas de estas caractensticas.

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Los ejemplos de aceites de hidrocarburos volatiles incluyen polidecanos tales como isododecano e isodecano (por ejemplo, Permetil-99A que esta disponible en Presperse Inc.) y las isoparafinas C7-C15 (tales como la Serie Isopar de Exxon Chemicals).

El aceite de silicona volatil se puede seleccionar entre ciclopentasiloxano, ciclohexasiloxano o una mezcla de los mismos. Los ejemplos de aceites de silicona dclicos volatiles disponibles en el mercado incluyen DC 244, DC 245, DC 344, y DC 345 de Dow Corning Corp.; Fluidos de Silicona SF-1204 y SF-1202 de Momentive Performance Materials; GE 7207 y 7158 de General Electric Co.); y, SWS-03314 de SWS Silicones Corp.

El aceite de silicona volatil lineal puede ser un polimetilsiloxano lineal. Un ejemplo de polimetilsiloxanos lineales disponibles en el mercado incluye Fluido DC 200, 5Cst de Dow Corning Corp.

La composicion cosmetica de la invencion puede comprender adicionalmente uno o mas polisacaridos que se seleccionan entre, pero no se limitan a, uno cualquiera o mas de polisacaridos anionicos (por ejemplo, acido algmico, pectina, goma de xantano, acido hialuronico, sulfato de condroitina, goma arabiga, goma de karaya, goma de tragacanto, carboximetil-quitina, goma de celulosa, glicosaminoglicanos), polisacaridos cationicos (por ejemplo, quitosano, quitosano acetilado, goma guar cationica, hidroxietilcelulosa cationica (HEC)), polisacaridos no ionicos (por ejemplo, almidon, dextrinas, goma guar, eteres de celulosa tales como hidroxietilcelulosa, metilcelulosa y nitrocelulosa), polisacaridos anfoteros (por ejemplo, carboximetilquitosano, N-hidroxi-dicarboxietil-quitosano, almidon de patata modificado) y polisacaridos hidrofobos (por ejemplo, cetil hidroxietilcelulosa, policuaternio 24).

La composicion cosmetica puede comprender adicionalmente una sustancia adecuada como filtro de pantalla solar tal como un protector solar organico, por ejemplo un derivado cinamico. El protector solar organico activo se puede seleccionar entre protector solar organico hidrofilo, protector solar organico hidrofobo, o mezclas de los mismos. Los ejemplos adecuados de filtros de pantalla solar se pueden encontrar en el CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7a edicion, volumen 2, pp. 1672, editado por Wenning y Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997).

El protector solar organico se puede seleccionar entre derivados de p,p-difenilacrilato de alquilo, derivados de a- ciano p,p-difenilacrilato, derivados de antranilato, derivados de benzofenona, derivados de canfor, derivados de dibenzoilmetano, derivados de acido p-aminobenzoico, derivados salidlicos, derivados de triazina, o mezclas de los mismos. Por ejemplo, el protector solar organico hidrofobo se puede seleccionar entre 4-(1,1-dimetiletil)-4'- metoxidibenzoilmetano; 4-isopropildibenzoilmetano; 4-(1,1-dimetiletil)-4'-metoxidibenzoilmetano, 2-etilhexil-2-ciano- 3,3-difenilacrilato, o una mezcla de los mismos.

Un ejemplo de 4-(1,1-dimetiletil)-4'-metoxidibenzoilmetano disponible en el mercado, tambien conocido como butil metoxidibenzoilmetano o Avobenzona, incluye Parsol TM 1789 de Givaudan Roure S. A. y Eusolex TM 9020 de Merck & Co., Inc. Un ejemplo de 4-isopropildibenzoilmetano disponible en el mercado, tambien conocido como isopropildibenzoilmetano, incluye Eusolex TM 8020 de Merck & Co., Inc. Los ejemplos de 2-etilhexil-2-ciano-3,3- difenilacrilato disponible en el mercado, tambien conocido como Octocrileno, incluyen Uvinul N539 SG de BASF; y Eusolex OCR de Rona/Merck.

En algunas realizaciones el protector solar organico hidrofilo puede ser acido 2-fenilbenzoimidazol-5-sulfonico. Un ejemplo de acido 2-fenilbenzoimidazol-5-sulfonico disponible en el mercado, tambien conocido como PBSA, incluye Eusolex 232 de Rona/Merck.

Los ejemplos adecuados de filtros de pantalla solar obtenidos a partir del acido cinamico se pueden encontrar en el CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7a edicion, volumen 2, pp. 1672, editado por Wenning y Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997). El derivado del acido cinamico se puede seleccionar entre p-metoxicinamato de 2-etilhexilo, metoxicinamato de dietanolamina, p-metoxicinamato de 2-etoxietilo, o una mezcla de los mismos. Por ejemplo, el derivado del acido cinamico puede ser p-metoxicinamato de 2-etilhexilo.

La composicion cosmetica se puede combinar con un exfoliante qmmico que se selecciona, pero no se limita a, entre cualquiera de los alfa hidroxi acidos (AHA), beta hidroxi acidos (BHA) o poli-hidroxi acidos, tales como acido salidlico, acido glicolico, acido dtrico y acido malico.

Los extractos que se pueden incorporar en la composicion cosmetica incluyen, pero no se limitan a, extractos de plantas, que pueden comprender compuestos fenolicos tales como, por ejemplo, flavonoides (por ejemplo, glicosil rutina, acido ferulico, acido cafeico), furfuriliden glucitol, hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, resina del acido nordihidroguaiaretico, acido nordihidroguaiaretico, trihidroxibutirofenona y derivados de los mismos. Los extractos de plantas en particular para su uso en la composicion de la invencion incluyen extracto de aloe vera, extracto de extracto de ginseng y extracto de cola de caballo.

El extracto de ginseng se puede obtener mediante extraccion, en un disolvente hidrofilo (en particular, agua, etanol, glicol, o cualquier mezcla de los mismos), de la rafz de Panax ginseng. El extracto contiene saponinas, esteroles,

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carbohidratos, pectina, vitaminas, minerales y Ifpidos.

El extracto de cola de caballo se puede obtener mediante extraccion, con un disolvente hidrofilo (por ejemplo, agua, etanol, glicol, o cualquier mezcla de los mismos), de toda la hierba Equisetum arvense. El extracto contiene silicatos, flavonoides, saponosidos, acido cafeico y acido ferulico.

La composicion cosmetica puede comprender adicionalmente un agente acondicionador de la piel. El agente acondicionador de la piel se puede seleccionar entre humectantes, exfoliantes, emolientes o mezclas de los mismos. Los humectantes incluyen alcoholes politndricos tales como glicerina, propilenglicol, dipropilenglicol, polipropilenglicol, polietilenglicol, sorbitol, hidroxipropil sorbitol, hexilen glicol, 1,3-butilen glicol, 1,2,6-hexanotriol, glicerina etoxilada, glicerina propoxilada o mezclas de los mismos.

Los ejemplos de antioxidantes que se pueden combinar con la composicion de la invencion incluyen, pero no se limitan a, aminoacidos, vitaminas, minerales, carotenoides, peptidos, tioles, compuestos de sulfoximina, agentes quelantes, acidos grasos insaturados, compuestos fenolicos, extractos de plantas, estilbenos, acido urico, manosa, acido clorogenico, imidazoles (por ejemplo, acido urocanico), furfurilidensorbitol, ubiquinona, ubiquinol, plastoquinona, fitoesteroles y derivados de los mismos (por ejemplo, sales, esteres, eteres, azucares, nucleotidos, nucleosidos, peptidos y/o derivados lipfdicos), algunos de los cuales se han descrito anteriormente.

Las vitaminas se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre una cualquiera o mas de vitamina A y derivados de la misma (por ejemplo, retinoide o retinol o sus derivados tales como palmitato de retinilo o proprionato de retinilo), biotina, acido folico, pantotenato calcico, nicotinamida, piridoxina HCl, piridoxal HCl, riboflavina, tiamina HCl, timidina, vitamina B12, vitamina B3 (por ejemplo, niacinamida), vitamina B5 (por ejemplo, pantenol), vitamina C y derivados de la misma (por ejemplo, palmitato de ascorbilo, fosfato de ascorbilo y Mg, acetato de ascorbilo), tocoferoles y derivados (por ejemplo, acetato de vitamina E).

Los minerales se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre una cualquiera o mas sales de molibdenato (por ejemplo, (NH4)OMo7O24) aluminio (por ejemplo, AlCh), calcio (por ejemplo, CaCh), cobalto (por ejemplo, CoCh), cromo (por ejemplo, CrK(SO4)), cobre (por ejemplo, CuSO4), hierro (por ejemplo, Fe(NO3)3, FeSO4), potasio (por ejemplo, KCI), magnesio (por ejemplo, MgCh), manganeso (por ejemplo, MnCh, MnSO4), fosfato (por ejemplo, Na2HPO4, NaH2PO4), carbonato (por ejemplo, NaHCO3), silicato (por ejemplo, Na2SiO3), sodio (por ejemplo, NaCl), vanadato (por ejemplo, NH4VO3), rnquel (por ejemplo, NiCh), estano (por ejemplo, SnCh), cinc (por ejemplo, ZnO, ZnSO4), selenio (por ejemplo, selenometionina, ebseleno, H2SeO3, Na2SeO3), sulfato y nitrato.

Los carotenoides, se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre una cualquiera o mas de carotenos, por ejemplo a-caroteno, p-caroteno, ^-licopeno, fitoeno etc., y derivados de los mismos.

Los tioles se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre uno o mas de aurotioglucosa, propiltiouracilo, tiorredoxina, acido lipoico, glutation, cistema, cistina, cistamina y sus esteres de glicosilo, N-acetilo, metilo, etilo, propilo, amilo, butilo y laurilo, palmitoflo, oleflo, Y-linoleflo, colesterilo y glicerilo y las sales de los mismos, tiodipropionato de dilaurilo, tiodipropionato de diestearilo, acido tiodipropionico y derivados de los mismos.

Los compuestos de sulfoximina se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre uno cualquiera o mas de homocistema sulfoximina, butionina sulfonas, penta-, hexa-, heptationina sulfoximina, que se pueden incluir en la composicion, de modo que se proporcionan en dosificaciones muy bajas (por ejemplo, pmol a pmol/kg) .

Los agentes quelantes se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre una cualquiera o mas de apoferritina, desferral, lactoferrina, acidos grasos a-hidroxi, acido palmttico, acido fftico, a-hidroxi acidos (por ejemplo, acido cftrico, acido lactico, acido malico), acido humico, acidos biliares, extractos biliares, bilirrubina, biliverdina, EDTA, EGTA y derivados de los mismos.

Los acidos grasos insaturados se pueden seleccionar, pero no se limitan a, entre uno cualquiera o mas de acido y- linolenico, acido linoleico, acido oleico y derivados de los mismos.

Los estilbenos y derivados de los mismos incluyen, por ejemplo, oxido de estilbeno y oxido de transestilbeno.

Una diversidad de principios activos opcionales adicionales se puede incorporar en las composiciones cosmeticas de la presente invencion. Los ejemplos no limitantes de estos ingredientes adicionales incluyen agentes activos adicionales para el cuidado de la piel tales como farnesol, bisabolol, fitantriol, urea, guanidina (por ejemplo, amino guanidina); compuestos de hexaminidina, sales o derivados de los mismos; aminas de azucar; agentes autobronceadores (por ejemplo, deshidroxiacetona); agentes estructurantes; esporas gelificantes hidrofilos; medicamentos antiacne (resorcinol, acido salidlico, y similares); agentes calmantes y curativos para la piel tales como alantoma y similares; y agentes adecuados para fines esteticos tales como aceites esenciales, fragancias, dos refrescantes de la piel, agentes de opacidad, compuestos aromaticos (por ejemplo, aceite de clavo, mentol, canfor, aceite de eucalipto y eugenol). Las composiciones que se describe presente documento se pueden formular para proporcionar una liberacion rapida, sostenida o retardada de los principios activos despues de la administracion al

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cuerpo empleando tecnicas bien conocidas en la tecnica.

La composicion puede estar en cualquier forma de dosificacion apropiada para permitir su administracion o para dirigirse a celulas o tejidos en particular, por ejemplo en forma de una emulsion o en liposomas, niosomas, microesferas, nanopartmulas o similares con las que el principio activo se puede absorber, adsorber, incorporar o unir. Esto puede convertir el producto de manera eficaz en una forma insoluble. Estas formas en partmulas pueden superar los problemas tanto de estabilidad (por ejemplo, degradacion) como de administracion.

El uso de soluciones, suspensiones, geles y emulsiones son preferentes, por ejemplo el principio activo se puede llegar en agua, un gas, un lfquido basado en agua, un aceite, un gel, una emulsion, una emulsion de aceite en agua o de agua en aceite, una dispersion o una mezcla de los mismos.

El agente emulgente se puede seleccionar entre emulgentes no ionicos, emulgentes anionicos, emulgentes cationicos, emulgentes zwitterionicos, emulgentes anfoteros o mezclas de los mismos. Los emulgentes se conocen en la tecnica. Vease, por ejemplo, McCutcheon's, Detergents and Emulsifiers, North American Edition (1986), publicado por Allured Publishing Corporation.

Cuando el vehmulo cosmeticamente aceptable es una emulsion de agua en silicona, los agentes emulgentes se seleccionan preferentemente entre copolfmeros de polioxialquileno, copolfmeros de poliglicerilo o mezclas de los mismos. Los copolfmeros de polioxialquileno, tambien conocidos como polieteres de silicona, se describen con detalle en el documento de patente de Estados Unidos N.° 4.268.499. Un ejemplo de copolfmeros de polioxialquileno disponibles en el mercado incluye DC5225C o DC2-5185C (PEG/PPG-18/18 dimeticona disponible como mezcla con ciclopentasiloxano) de Dow Corning Corp.; y, KF6017 o KF6028 (PEG-9 dimeticona) de Shin-Etsu Inc. Los ejemplos de agentes emulgentes de poliglicerilo disponibles en el mercado incluyen KF6100 y KF6104 de Shin-Etsu Inc.

Las composiciones son preferentemente para administracion topica (es decir, a la piel).

Las composiciones topicas que incluyen geles, cremas, pomadas, pulverizaciones, lociones, balsamos, barras, jabones, polvos, pelmulas, aerosoles, gotas, espumas, soluciones, emulsiones, suspensiones, dispersiones por ejemplo dispersiones de vesmulas no ionicas, leches y cualquier otra forma cosmetica convencional en la tecnica.

Las pomadas geles y cremas se pueden formular, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adicion de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y, en general, tambien contienen uno o mas agentes emulgentes, dispersantes, de suspension, espesantes o colorantes. Los polvos se pueden formar con la ayuda de cualquier base en polvo adecuada. Las gotas y soluciones se pueden formular con una base acuosa o no acuosa que comprende tambien uno o mas agentes dispersantes, solubilizantes o de suspension. Los aerosoles se suministran convenientemente desde envases presurizados, con el uso de un propulsor adecuado.

En algunas realizaciones las composiciones cosmeticas que se describen en el presente documento se pueden administrar por via topica a la piel a traves de un producto, dispositivo o material al que se ha aplicado, impregnado o unido qmmicamente el polipeptido o composicion. Con esta finalidad, se pueden revestir, impregnar o unir de manera qmmica vendajes, apositos (por ejemplo, parches adhesivos), gasa, cinta quirurgica, hisopos de algodon u otros materiales absorbentes, por ejemplo un material absorbente, vellon, o esponja, o matrices de soporte como se describe en el presente documento. Por ejemplo, se pueden aplicar muchas composiciones a la piel usando parches dermicos que se describen bien en la tecnica, por ejemplo en los documentos US 2008/0038300, US 2009/0043236, WO 2005/067499 y WO 2009/085302. En algunas realizaciones, el material que comprende la composicion como se describe en el presente documento se puede presentar en forma de un dispositivo que, por ejemplo, puede ser puede ser usado por el sujeto a tratar. Por ejemplo, la composicion tal como se describe en el presente documento se preve aplicar, impregnar o unir de forma qmmica sobre un material o matriz de soporte que forme todo o parte de un panal, guante, calcetm, etc.

Las composiciones cosmeticas se pueden incluir en un envase, paquete, o dispensador junto con instrucciones para su administracion.

Por lo tanto, un aspecto adicional de la invencion comprende la provision de un producto, material o dispositivo que esta revestida, impregnado o unido de forma qmmica con una composicion como se describe en el presente documento. La invencion tambien se extiende a tales productos, materiales o dispositivos para usos como se describen en el presente documento. Preferentemente dicho producto es un vendaje, aposito (por ejemplo, parche adhesivo), gasa, cinta quirurgica o hisopo de algodon o dicho dispositivo es un panal, guante o calcetm.

La concentracion de los principios activos en las composiciones que se describen en el presente documento puede depender de la fuente de la composicion (es decir, el material de partida para el metodo descrito anteriormente), el modo de administracion, la duracion del tratamiento, la edad y peso del paciente, la indicacion cosmetica, el cuerpo o zona del cuerpo a tratar y se puede variar o ajustar de acuerdo con la eleccion. Sin embargo, por lo general los intervalos de concentracion para la composicion que se describe en el presente documento son un 0,001, 0,005,

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0,01 o de un 0,1 a un 50 %, por ejemplo un 0,005-40 %, por ejemplo de un 0,1 a un 25 %, tal como un 0,1 o de un 0,5 a un 5, por ejemplo un 1-5 % (p/p o v/v de la preparacion final para la administracion, en particular para la administracion topica) por ejemplo una solucion al 1 % 1% de la composicion mencionada preparada de acuerdo con el metodo de la invencion.

Cuando se anaden componentes adicionales a la composicion preparada con el metodo que se ha descrito anteriormente, por ejemplo agentes hidratantes adicionales como se describe en el presente documento, el componente adicional puede estar presente en las cantidades de un 0,0001, 0,0005, 0,001 o de un 0,01 a un 50 %, por ejemplo un 0,0005-40 %, por ejemplo de un 0,01 a un 25 %, tal como un 0,1 o de un 0,5 a un 5, por ejemplo un 1-5% (p/p de la preparacion final para su administracion, en particular para administracion topica). Las dosis individuales eficaces para la composicion se pueden situar en el intervalo de 0,0001-100 mg/cm2/dfa (protema total en la composicion), por ejemplo 0,1-100 mg/cm2/dfa, preferentemente 0,0001-10 mg/cm2/dfa, por ejemplo 0,110 mg/cm2/dfa, cuando se aplica por via topica, dependiendo del animal mairnfero que se esta tratando, tomado como una dosis unica.

Para administracion topica se podffan usar preferentemente soluciones, cremas o suspensiones lfquidas.

Los animales a los que se pueden aplicar o administrar las composiciones se limitan a mamfferos. Preferentemente los mamfferos son primates, animales domesticos, animales de granja y laboratorio. Por lo tanto los animales marnfferos preferentes incluyen ratones, ratas, conejos, cobayas, gatos, perros, monos, cerdos, vacas, ovejas y caballos. De manera especialmente preferente las composiciones se aplican, o se administran, a seres humanos.

Los siguientes Ejemplos se proporcionan solamente a modo de ilustracion en los que las Figuras a las que se hace referencia son las que siguen a continuacion:

Figura 1 muestra una fotograffa de un sujeto tratado con la composicion de fluido de eclosion de la invencion antes del tratamiento (Medida inicial), despues de 2 semanas y despues de 12 semanas de tratamiento. La reduccion de los diversos signos de piel envejecida es evidente tanto despues de 2 como de 12 semanas. Los valores proporcionados indican los cambios medios para 35 participates.

Figura 2 muestra una fotograffa en primer plano del sujeto en la Figura 1 para enfatizar la reduccion de lmeas finas y arrugas observadas despues de 2 y 12 semanas de tratamiento con la composicion de fluido de eclosion de la invencion.

Figura 3 muestra una fotograffa en primer plano de un sujeto tratado con la composicion de fluido de eclosion de la invencion antes del tratamiento (Medida inicial) y despues de 12 semanas de tratamiento. El area dentro del cffculo muestra una clara reduccion de arrugas despues de 12 semanas de tratamiento.

Figura 4 muestra un grafico de barras que representa el porcentaje de sujetos de los que se considero que presentaban una mejora de diversos signos del envejecimiento basandose en una clasificacion clmica tactil/visual en ambos lados de la cara.

Figura 5 muestra microfotograffas electronicas de barrido (aumento de x400, x5000 y x15000) de epidermis humana reconstruida tratada con agua, acido glicolico al 5 %, 1 mU/ml de Bromelama o composicion de fluido de eclosion al 1 % durante 12 horas.

Figura 6 muestra microfotograffas electronicas de barrido (aumento de x400, x5000 y x15000) de epidermis humana reconstruida tratada con agua, acido glicolico al 5 %, 1 mU/ml de Bromelama o composicion de fluido de eclosion al 1 % durante 48 horas.

Figura 7 muestra microfotograffas de luz de secciones de epidermis humana reconstruida sin tratar o tratada con acido glicolico al 5 %, 1 mU/ml de Bromelama o composicion de fluido de eclosion al 1 % durante 12 o 24 horas. La flecha (A) nuestra proliferacion y diferenciacion celular y la flecha (B) muestran estrato granuloso mas denso y una concentracion mas elevada de granulos lamelares.

Ejemplo 1: Preparacion de la composicion

La composicion se preparo a partir de fluido de eclosion de salmon. Para mejorar la concentracion de protema del fluido de eclosion, los huevos de salmon se transfirieron a volumenes mmimos de agua antes de la eclosion. La eclosion altamente sincronizada se puede inducir mediante temperaturas elevadas (ambiente), o mediante desoxigenacion (Oppen-Berntsen et al., 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430), que proporciona un pequeno volumen de preparacion altamente concentrada de polipeptidos y porciones de polipeptidos en bruto. La eclosion debeffa estar completa en 2 horas para mas de un 95 % de los embriones.

El fluido de eclosion se filtro usando un filtro convencional con un tamano de poro de 7 pm, para retirar el material que puede obstruir con facilidad los filtros en etapas posteriores de filtracion. Este filtrado, el fluido de eclosion procesado, se puede congelar durante anos sin una degradacion significativa, antes de su descongelacion y siete de usar para una purificacion de protemas adicional. Este hecho simplifica en gran medida la produccion de un material de partida para purificar la composicion de fluido de eclosion.

El fluido de eclosion procesado se sometio a filtracion usando un filtro con un tamano de poro de 0,45 pm y el filtrado se recogio. A continuacion con el filtrado se sometio a diafiltracion con un filtro de tamano de exclusion de 8 kDa

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para intercambiar el agua del fluido de eclosion por tampon. En este caso, el tampon contema fosfato 0,5 mM y NaCI 1 mM, aunque otros tampones son igualmente adecuados. Por ejemplo, son adecuados la solucion salina tamponada con fosfato o tampones que contengan Tris milimolar (por ejemplo, 10 mM) a pH cercano a la neutralidad o ligeramente alcalino (pH 7,5 - 8,5), que contenga NaCl 5 mM. La fraccion retenida de la etapa de diafiltracion se recogio y se diluyo mediante la adicion del tampon de modo que la actividad enzimatica del filtrado, como se ha definido anteriormente, era igual a 3400 mU/litro.

Por ultimo, el filtrado se sometio a filtracion a traves de un filtro con un tamano de poro de 0,22 pm y el filtrado final se recogio. Este filtrado es una preparacion enriquecida de los polipeptidos y porciones de polipeptidos, encontrada en el fluido de eclosion en bruto.

Ejemplo 2: Efectos in vivo de la composicion de fluido de eclosion en piel envejecida

La composicion de fluido de eclosion se preparo como se ha descrito en el Ejemplo 1. La composicion se preparo como una locion cutanea al 1 % y al 3 % [v/v] (volumen total de composicion por unidad de volumen de locion), las dos lociones para la piel activas en el ensayo, y se comparo con una locion para la piel de control que no conteman el componente activo, es decir, la composicion de fluido de eclosion. La locion cutanea era una emulsion de aceite en agua (A/A). La fase oleosa representa un 9 % de la composicion total y estar emocionada con lecitina hidrogenada.

Un ensayo clmico controlado con placebo, con doble ocultacion se realizo para evaluar la eficacia y la tolerancia de los tratamientos en la piel por via topica en hembras con fotoenvejecimiento de leve a moderado, es decir, la piel facial envejecida. La duracion de este ensayo fue de 12 semanas con visitas en la medida inicial, Semana 2, Semana 6 y Semana 12. La eficacia se evaluo usando clasificacion visual, instrumentacion, fotograffas digitales de VISIA CR y cuestionarios de autoevaluacion del sujeto.

Numero de Sujetos

La participacion en el estudio (N > 30 para los tres tratamientos, es decir, un placebo y dos composiciones que comprendfan el componente de fluido de eclosion a diferentes concentraciones) la completaron ciento un (101) sujetos hembra.

Poblacion de Sujetos e identificacion

Los sujetos eran hembras sanas con edades de 40 a 65 y se les asigno un numero de tres dfgitos que, cuando se usa en conjunto con el numero del estudio clmico, unicamente identificaba a cada sujeto en estudio. Este numero permanecio con el sujeto durante todo el estudio para mantener el anonimato del experimento.

Criterios de Eleccion

Criterios de Inclusion

1. Hembras, con edades de 40 a 65, inclusive, que en general teman buena salud tal como se determino de acuerdo con el cuestionario de salud e idoneidad.

2. Disposicion para cooperar y participar siguiendo los requisitos del estudio durante el periodo de duracion del estudio e informar de cualquier smtoma adverso inmediatamente.

3. Fotoenvejecimiento de leve a moderado clmicamente determinado (lmeas finas, arrugas, hiperpigmentacion, laxitud y aspereza) en la cara correspondiente a la escala de clasificacion de Griffith modificada con puntuaciones de 3-7.

4. Libre de cualquier patologfa o afecciones cutaneas faciales ffsicas (por ejemplo, dermatitis atopica, eccema, psoriasis, dermatitis seborreica) que podna alterar las evaluaciones de los sitios de ensayo o aumentar el riesgo para la salud del sujeto mediante participacion en el estudio.

5. Disposicion para evitar periodos prolongados de exposicion al sol y todos usando camaras de bronceado durante el periodo de duracion del estudio. Se decfa tener un cuidado extra en usar ropa protectora, incluyendo gafas de sol, y evitar una exposicion al sol de 10 AM a 4 PM.

6. Disposicion para continuar usando marcas regulares de cosmeticos de color, limpiador, tonico (si fuera aplicable) y limpiador de maquillaje durante el periodo de duracion del estudio. Los individuos tuvieron que abstenerse de usar cualquier producto antienvejecimiento o productos para aclarar la piel distintos del material de ensayo asignado.

7. Disposicion para retirartodo el maquillaje al menos 20 minutos antes de cada visita clmica programada. No se iba a aplicar ningun otro producto topico a la cara o en la zona de los ojos hasta que se completara la visita del estudio. Si un sujeto llegara sin eliminar todo el maquillaje, se le pedfa que retirara el maquillaje residual en la clmica y que esperara al menos 20 minutos antes de los procedimientos.

8. Los individuos que tomaban terapias de reemplazo hormonal u hormonas para el control de la natalidad teman que estar en un regimen estable durante al menos un mes antes del inicio del estudio y teman que estar dispuestos a continuar y no cambiar esta medicacion durante el periodo de duracion del estudio. Los individuos

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que no estaban tomando HRT u hormonas al comienzo del estudio teman que estar dispuestos a no comenzar con su uso durante el periodo del estudio.

9. Disposicion para cooperar y participar siguiendo los requisitos del estudio e informar de cualquier smtoma adverso inmediatamente.

Criterios de Exclusion

1. Individuos con una historia de intolerancia o alergia a cualquier producto para el cuidado personal.

2. Individuos que hubieran usado cualquier prescripcion o productos para aclaramiento de la piel sin receta medica (OTC) menos de 30 dfas antes de la entrada en el estudio.

3. Individuos que presentaban una afeccion y/o enfermedad de la piel que el Investigador que examina considera inapropiada para la participacion.

4. Individuos que estuvieran amamantando, embarazadas, o planeando quedar embarazadas durante el estudio.

5. Individuos que hubieran usado de manera rutinaria cualquier agente antienvejecimiento, antiarrugas, antioxidantes topicos, menos de 30 dfas antes de la entrada en el estudio.

6. Individuos que hubieran usado un tratamiento cutaneo facial enzimatico dentro de 6 meses del inicio del estudio.

7. Uso de Retin-A®, Retin-A Micro®, Renova®, Avita®, Tazorac®, Avage® o Differin® u otros retinoides topicos dentro de 3 meses del inicio del estudio, o que hubieran tomado Accutane o un retinoide oral dentro de los ultimos 6 meses.

8. Uso rutinario de productos que contuvieran alfa-, beta- o poli-hidroxiacido (incluyendo acido salidlico y Lachydrin), retinol o derivados de retinol u otros productos 'antienvejecimiento' en la cara dentro de 30 dfas del inicio del estudio.

9. Individuos que hubieran recibido una dermoabrasion facial o tratamiento exfolian de qmmico dentro de 3 meses del tratamiento o durante el estudio.

10. Individuos que hubieran recibido tratamiento con RF de luz, u otros dispositivos en la zona tratada dentro de la zona tratada dentro de 6 meses de tratamiento o durante el estudio.

11. Individuos que hubieran recibido Botox, colageno, inyecciones de grasa u otros metodos de relleno con material inyectado o implantado en la zona tratada dentro de 9 meses de tratamiento o durante el estudio.

12. Individuos que hubieran experimentado un procedimiento de reepitelizacion, estiramiento facial o cirugfa ocular o palpebral dentro de los 12 meses antes del inicio de este ensayo.

13. Individuos que presentaran afecciones dermatologicas preexistentes y/o latentes en la cara (por ejemplo, vitiligo, dermatitis atopica, psoriasis, rosacea, eccema, dermatitis seborreica, escoriaciones graves, etc.) o afeccion/enfermedad medica que, en opinion del Investigador, pudiera haber interferido con el resultado del estudio.

14. Individuos que presentaran antecedentes de trastornos inmunosupresores/inmunodeficiencia (incluyendo infeccion por VIH o SIDA) o que usaran en la actualidad medicamentos inmunosupresores.

15. Individuos que estuvieron participando en cualquier otro estudio de uso clmico (los estudios de parche son aceptables).

16. Individuos que presentaran una enfermedad incontrolada tal como diabetes, hipertension, hipertiroidismo o hipotiroidismo. Algunos individuos que presentaban multiples afecciones de salud fueron excluidos de la participacion, incluso si las condiciones estuvieran controladas por la dieta, medicamentos, etc.

17. Individuos que hubieran participado en cualquier ensayo clmico dentro de 28 dfas antes de la inclusion en el estudio.

Los individuos fueron admitidos en el estudio de acuerdo con el criterio del investigador o su designado basandose en la historia clmica y los resultados de la entrevista y el examen previos al estudio.

Diseno del Estudio

El ensayo clmico controlado con placebo, con doble ocultacion se realizo para evaluar la eficacia y la tolerancia de los tratamientos en la piel por via topica en hembras con fotoenvejecimiento de leve a moderado, es decir, la piel facial envejecida. La duracion de este ensayo fue de 12 semanas con visitas en la medida inicial, Semana 2, Semana 6 y Semana 12. La eficacia se evaluo usando clasificacion visual, instrumentacion, fotograffas digitales de VISIA CR y cuestionarios de autoevaluacion del sujeto.

Tres grupos de N > 30 por grupo completaron el estudio. Los sujetos recibieron un tratamiento activo de la piel, a saber la composicion de fluido de eclosion descrita anteriormente, o un control de vehmulo (agua) para aplicar a la cara durante doce semanas. La clasificacion al azar de sujetos en los 3 grupos se realizo de acuerdo con una asignacion al azar determinara previamente.

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25

30

35

Visita:

Visita 1 Medida inicial Visita 2 Semana 2 Visita 2 Semana 6 Visita 2 Semana 12

Consentimiento Informado, documentacion de idoneidad, identificacion sistematica facial

X

Puntuacion clmica del lado derecho e izquierdo para lmeas, arrugas, hiperpigmentacion moteada, laxitud, claridad y aspereza

X X X X

Puntuacion clmica del lado derecho e izquierdo para irritacion objetiva y subjetiva (eritema, sequedad, quemazon/escozor*, picor*, sensacion de firmeza/sequedad*) *informado por el panelista.

X X X X

Formacion de imagenes con VISIA-CR del lado derecho e izquierdo

X X X X

Mediciones de Cutometro en el lado derecho e izquierdo

X X X X

Mediciones de perdida de agua transepidermica (TEWL) en el lado derecho e izquierdo.

X X X X

Distribucion del material de ensayo, vehmulo, instrucciones de uso, diario y calendario

X X

Finalizacion de los cuestionarios de autoevaluacion para el lado derecho e izquierdo.

X X X

Revision diaria y peso del producto para el cumplimiento

X X X

Evaluaciones de Eficacia y Tolerabilidad

Un clasificador clmico experto evaluo el lado derecho e izquierdo de la cara para los parametros que se muestran a continuacion. Se uso una escala de Griffith modificada, en la que 0 = nada, 1-3 = leve, 4-6 = moderado y 79 = grave. Cuando era necesario describir mejor la afeccion cutanea se usaron puntos medios.

Lmeas Finas

Arrugas

Hiperpigmentacion

Laxitud

Apagada/Mate (Claridad)

Aspereza al Tacto.

Un clasificador clmico experto evaluo el lado derecho e izquierdo de la cara para los parametros que se muestran a continuacion. Se uso una escala de cuatro 4 puntos, en la que 0 = nada, 2 = leve, 3 = moderado y 4 = grave. Cuando era necesario describir mejor la afeccion cutanea se usaron puntos medios.

Eritema

Sequedad/ formacion de escamas Sensacion de quemazon/escozor Picor

Sensacion de firmeza/sequedad Fotograffa Digital de VISIA CR

La formacion de imagenes de VISIA-CR se tomo en los lados derecho e izquierdo de la cara. Se formaron imagenes de los sujetos de modo que su pelo se retiro, la joyena se retiro, los ojos se cerraron, el sujetos centro dentro del marco y presentaba una expresion facial neutra.

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Perdida de Agua Transepidermica (TEWL)

Antes de las mediciones instrumentales, se hizo que los sujetos se equilibraran a las condiciones ambientales de la clmica durante al menos 20 minutos. Las condiciones ambientales se registraron cada hora durante las visitas del estudio. Durante este periodo de tiempo, los sujetos se clasificaron, completaron cuestionarios y/o se les hicieron imagenes de VISIA CR.

El Tewameter se uso para tomar una medicion de la perdida de agua transepidermica (TEWL) en todas las visitas. Las mediciones se realizaron en la mejilla derecha e izquierda en la interseccion de las lmeas que se extienden por debajo de la esquina del ojo y de forma horizontal a traves de la parte baja de la nariz.

Las medidas de TEWL con Tewameter usaban un sistema de camara abierta. Una sonda mantenida a mano colocada en la superficie de la piel tomaba muestras de la humedad relativa en dos puntos por encima de la superficie, permitiendo que la tasa de perdida de agua se calculara a partir del gradiente de humedad medido.

Cutometro MPA 580

A todos los sujetos se les hicieron mediciones de Cutometro en todas las visitas. El Cutometro se uso para evaluar las propiedades viscoelasticas (es decir, capacidad de extension y elasticidad) de la piel. El instrumento aplica un vado a una pequena zona de piel y mide la respuesta elastica de la piel (movimiento de la piel en y fuera de la abertura) mediante una tecnica optica.

Para este estudio, se uso la sonda de 2 pm, se aplico un vacm de 30 kPa y se realizaron dos ciclos de succion y liberacion. Los tiempos del ciclo fueron de 5 segundos de encendido y 10 segundos apagado.

Las mediciones se realizaron en la mejilla derecha e izquierda en la interseccion de las lmeas que se extienden por debajo de la esquina del ojo y de forma horizontal a traves de la parte baja de la nariz, o en una ubicacion alternativa acerca de la mandfbula.

Evaluacion de la Piel y Cuestionarios de Autoevaluacion

Los sujetos completaron un cuestionario de autoevaluacion de la piel que contema preguntas que describfan como percibe el sujeto su aspecto cutaneo facial y el estado en los lados derecho e izquierdo de la cara.

Resultados

Lmeas finas

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de las lmeas finas (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 5,59 % (solucion al 1 %) y un 5,65 % (solucion al 3 %)) en comparacion con el placebo (4,58 %), Reduccion de las lmeas finas continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 14,34 % (solucion al 1 %), 14,86 % (solucion al 3 %) y 8,98 % (placebo)) y en la semana 12 (por ejemplo, 23,43 % (solucion al 1 %), 25,99 % (solucion al 3 %) y 14,68 % (placebo)). Las Figuras 1 y 2 muestran un sujeto con una reduccion de lmeas finas de un 28 %.

Arrugas

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de arrugas (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 2,15% (solucion al 1 %) y un 1,75% (solucion al 3%)) en comparacion con el placebo (0,70%). La reduccion de las arrugas continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 6,13 % (solucion al 1 %), 7,32 % (solucion al 3 %) y 3,70 % (placebo)) y en la semana 12 (por ejemplo, 14,72% (solucion al 1 %), 15,15% (solucion al 3%) y 9,57% (placebo)). La Figura 1 muestra un sujeto con una reduccion de las arrugas de un 12,5%. La Figura 3 muestra un sujeto con una reduccion de las arrugas de un 26,32 %.

Hiperpigmentacion

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de la hiperpigmentacion (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 2,11 % (solucion al 1 %) y un 2,68 % (solucion al 3 %)) en comparacion con el placebo (0,40 %). La reduccion de la hiperpigmentacion continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 5,61 % (solucion al 1 %), 7,91 % (solucion al 3 %) y 3,16 % (placebo)) y en la semana 12 (por ejemplo, 10,53 % (solucion al 1 %), 15,35 % (solucion al 3 %) y 5,73 % (placebo)). La Figura 1 muestra un sujeto con una reduccion de la pigmentacion de una mancha producida por la edad de un 15 % despues de 12 semanas.

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Laxitud

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de la laxitud (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 2,64 % (solucion al 1 %) y un 1,62% (solucion al 3%)) en comparacion con el placebo (0,87%). La reduccion de la laxitud continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 6,33 % (solucion al 1 %) y 6,61 % (solucion al 3 %), 2,51 % (placebo)) y en la semana 12 (por ejemplo, 10,55% (solucion al 1 %) y 11,33% (solucion al 3%), 5,18% (placebo)). La Figura 1 muestra un sujeto con una reduccion de la laxitud (flacidez) de un 7,69 % despues de 12 semanas.

Apagada/Mate (Claridad)

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una mejora en la claridad de la piel (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 12,95 % (solucion al 1 %) y un 16,00 % (solucion al 3 %)) en comparacion con el placebo (10,67 %). La mejora continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 29,26 % (solucion al 1 %), 28,50 % (solucion al 3 %) y 19,07 % (placebo)) y en la semana 12 (por ejemplo, 37,17 % (solucion al 1 %), 39,18 % (solucion al 3 %) y 26,72 % (placebo)). La Figura 1 muestra un sujeto con una reduccion de la palidez de un 33,33 %.

Aspereza al Tacto

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de la aspereza al tacto de la piel (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 16,51 % (solucion al 1 %) y un 20,24 % (solucion al 3 %)) en comparacion con el placebo (13,38 %). La mejora continuaba en la semana 6 (por ejemplo, 24,77 % (solucion al 1 %), 26,65 % (solucion al 3 %) y 16,79 % (placebo)), pero no se produjo una reduccion adicional en la semana 12 (por ejemplo, 26,61 % (solucion al 1 %), 29,19 % (solucion al 3 %), y 15,79 % (placebo)). La Figura 1 muestra un sujeto con una reduccion de la aspereza al tacto de un 12,5 %.

Sequedad/formacion de escamas

En la semana 2 los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de la sequedad/formacion de escamas de la piel (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 72,09 % (solucion al 1 %) y un 100,00 % (solucion al 3%)) en comparacion con el placebo (64,71 %). Sin embargo, en la semana 6 (por ejemplo, 86,05 % (solucion al 1 %), 84,62% (solucion al 3%) y un 100,00% (placebo)), y en la semana 12 no se produjo una reduccion adicional cuando se compara con el placebo (por ejemplo, 90,70 % (solucion al 1 %), 100,00 % (solucion al 3 %) y un 89,47 % (placebo)).

TEWL

Aunque los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una reduccion de TEWL en la semana 2, esta no era claramente diferente de la del placebo (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 15,35% (solucion al 1 %) y un 14,53% (solucion al 3%)) en comparacion con el placebo (17,26 %). Sin embargo, en la semana 6 (por ejemplo, 29,46 % (solucion al 1 %), 26,66 % (solucion al 3 %) y con 22,96 % (placebo)), y en la semana 12 se produjo reduccion una adicional superior a la del placebo (por ejemplo, 37,46 % (solucion al 1 %), 40,04 % (solucion al 3 %), y un 34,21 % (placebo)).

Capacidad de extension

Aunque los sujetos tratados con una locion cutanea que comprende una de las composiciones activas presentaban una mejora de la capacidad de extension de la piel en la semana 2, esta solo era ligeramente diferente a la del placebo (por ejemplo, porcentaje de cambio de un 16,18% (solucion al 1 %) y un 17,21 % (solucion al 3%)) en comparacion con el placebo (10,82 %). En la semana 6 no habfa una diferencia clara entre los tres tratamientos (por ejemplo, 18,04% (solucion al 1 %), 17,18% (solucion al 3%) y un 19,90% (placebo)), pero en la semana 12 se produjo una mejora adicional para el tratamiento cutaneo con las composiciones que comprenden el componente activo, que era superior que la del placebo (por ejemplo, 31,84 % (solucion al 1 %), 33,57 % (solucion al 3 %), y un 16,48% (placebo)).

Una comparacion de la clasificacion clmica tactil/visual en ambos lados de la cara realizada al comienzo del estudio (medida inicial) y despues de 12 semanas de tratamiento muestra que todos los sujetos presentaban mejoras de la palidez y aspereza de su piel siguiendo el tratamiento con la composicion de fluido de eclosion de la invencion y la mayona de los sujetos presentaban mejoras en las lmeas finas (97 % de los sujetos), arrugas (91 % de los sujetos), hiperpigmentacion (87 % de los sujetos) y flacidez (80 % de los sujetos) (Figura 4).

Los cuestionarios revelan que desde de las 6 semanas de uso se encontraban diferencias estadfsticamente significativas para puntuaciones medias de declaraciones sobre aspecto general, sensacion general, uniformidad, suavidad, claridad y elasticidad entre el placebo y la composicion cosmetica que comprende la composicion del fluido de eclosion de la invencion.

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Por lo tanto, a partir de los resultados mencionados anteriormente es evidente que la composicion de extracto de fluido de eclosion demostraba un efecto en cada aspecto de piel envejecida en comparacion con el placebo.

Ejemplo 3: Estudio in vitro comparativo de efectos de la composicion de fluido de eclosion en epidermis humana reconstruida con respecto a tratamientos cutaneos cosmeticos conocidos

La epidermis humana reconstruida in vitro consiste en queratinocitos humanos normales cultivados en un filtro de policarbonato inerte en la superficie de contacto o aire-lfquido, en un medio qmmicamente definido. Este modelo in vitro es histologicamente similar al de la epidermis humana in vivo.

La Epidermis Humana Reconstruida (SkinEthic) se expuso en el lado del estrato corneo durante o 12 horas, 24 horas o 48 horas con respecto a 200 pl de una de las siguientes soluciones:

Composicion de fluido de eclosion al 1 %;

Acido Glicolico al 5 % (AHA);

1 mU/ml de Bromelama (enzima de frutas); o dH2O (control).

Despues de la exposicion, los cultivos se fijaron en paraformaldelffdo al 4 % (p/v) en PBS a 4 °C y se analizaron mediante microscopfa de barrido electronico o de luz.

La evaluacion de las microfotograffas de barrido electronico de la epidermis humana reconstituida tratada despues de 12 horas (Figura 5) muestra que el tratamiento con una solucion al 5 % de acido glicolico da como resultado un dano en el estrato corneo y corrosion de la piel. El tratamiento con Bromelama da como resultado descamacion por digestion de la envoltura de las celulas. Por el contrario, el tratamiento con la composicion de fluido de eclosion de la invencion da como resultado una descamacion mediante el desprendimiento de corneocitos intactos debido a que solo los sitios de union celular se han degradado. Por lo tanto, la solucion de fluido de eclosion proporciona una microexfoliacion suave de la piel.

Despues de exposicion durante 48 horas, las microfotograffas de barrido electronico de la epidermis humana reconstituida (Figura 6) muestran que el acido glicolico da como resultado una piel altamente danada, en la que la envoltura celular se ha roto y el citoesqueleto celular es claramente visible. Aunque el tratamiento con Bromelama da como resultado una superficie de piel bastante lisa, todavfa hay evidencias de parches asperos. Sin embargo, el tratamiento con la composicion del fluido de la eclosion de la invencion da como resultado una superficie ultra lisa de la piel que es mejor que la piel del control (es decir, sin tratar). Por lo tanto, se preve contemplar que la composicion del fluido de eclosion proporciona un efecto suavizante de la piel.

La microscopfa optica de secciones de epidermis humana reconstruida (Figura 7) muestra que la exposicion al acido glicolico durante 24 horas da como resultado la destruccion de las celulas vivas, incluyendo las celulas madre epidermicas del estrato basal. Todo lo que queda despues del tratamiento con acido glicolico son unos pocos nucleos picnoticos (en los que la cromatina se ha condensado de manera irreversible) y celulas anucleadas. La exposicion a Bromelama durante 24 horas produce alteraciones mmimas en el estrato basal y en el estrato espinoso. Por el contrario, despues de la exposicion a la composicion del fluido de eclosion de la invencion durante 24 horas, la piel reconstruida muestra evidencias de proliferacion y diferenciacion celular (vease la flecha A de la Figura 7). Despues de 48 horas de exposicion a la composicion del fluido de eclosion, la piel muestra evidencias de un estrato granuloso mas denso y una mayor concentracion de granulos lamelares (vease la flecha B de la Figura 7). Por lo tanto, la composicion del fluido de la eclosion de la invencion tiene un efecto de rejuvenecimiento de la piel y da como resultado una mejora de la funcion de la barrera cutanea.

Claims (10)

1. 5

   10

   15

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   REIVINDICACIONES

   1. Un metodo para reducir o prevenir el aspecto cosmetico o predominio de arrugas, lmeas finas, hiperpigmentacion, laxitud, piel seca, formacion de escamas y/o perdida de agua transepidermica en la piel de un animal mairnfero, que comprende administrar una composicion cosmetica a dicho animal, en el que dicha composicion se obtiene o se puede obtener con un metodo que comprende al menos las etapas de:

   a) suspender huevos de Salmonidae en un volumen mmimo de agua, preferentemente huevos de salmon;

   b) inducir una eclosion rapida, sincronizada de dichos huevos, preferentemente de modo que la eclosion se complete en menos de 2 horas para mas de un 95 % de los embriones;

   c) filtrar los huevos eclosionados para obtener fluido de eclosion; y

   d) filtrar el fluido de eclosion para obtener la composicion, en el que la etapa de filtrar el fluido de eclosion comprende al menos las etapas de:

   (i) filtrar el fluido de eclosion usando un filtro con un tamano de poro de al menos 5 pm, y recoger el filtrado;

   (ii) filtrar el filtrado de la etapa (i) usando un filtro con un tamano de poro de 0,30-0,60 pm, y recoger el filtrado;

   (iii) intercambiar el agua en el filtrado de la etapa (ii) con un tampon farmaceuticamente aceptable realizando diafiltracion usando un filtro con un tamano de exclusion de menos de 15 kDa;

   (iv) opcionalmente repetir la etapa de diafiltracion de la etapa (iii);

   (v) opcionalmente diluir la solucion de la etapa (iii) o (iv) de modo que la solucion tenga una actividad enzimatica de 3000-5000 mU/l, medida por la capacidad de la solucion para escindir el sustrato cromogenico del Factor Xa (CHsOCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH);

   (vi) filtrar la solucion de la etapa (iii), (iv), o (v) usando un filtro con un tamano de poro de 0,15-0,30 pm, y recoger el filtrado; y

   (vii) preparar dicha composicion cosmetica a partir del filtrado de la etapa (vi).
2. 2. El metodo de la reivindicacion 1, en el que:

   a) el tamano de poro del filtro en la etapa (i) es 5-15 pm, en el que preferentemente el tamano de poro es 7 pm;

   b) el tamano de poro del filtro en la etapa (ii) es 0,35-0,55 pm, en el que preferentemente el tamano de poro es 0,45 pm; y/o

   c) el tamano de poro del filtro en la etapa (v) es 0,22 pm.
3. 3. El metodo de la reivindicacion 1 o 2, en el que los huevos de Salmonidae son de salmon del Atlantico o salmon del Padfico.
4. 4. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha piel es piel envejecida.
5. 5. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la piel de dicho animal esta hidratada.
6. 6. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicha composicion cosmetica es para administracion topica a la piel.
7. 7. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha preparacion en la etapa (vii) comprende la adicion de uno o mas excipientes, diluyentes, componentes y/o ingredientes farmaceuticamente aceptables.
8. 8. Un metodo para preparar una composicion cosmetica que comprende al menos las etapas de:

   a) suspender huevos de Salmonidae en un volumen mmimo de agua, preferentemente huevos de salmon;

   b) inducir una eclosion rapida, sincronizada de dichos huevos, preferentemente de modo que la eclosion se complete en menos de 2 horas para mas de un 95 % de los embriones;

   c) filtrar los huevos eclosionados para obtener fluido de eclosion; y

   d) filtrar el fluido de eclosion para obtener la composicion, en el que la etapa de filtrar el fluido de eclosion comprende al menos las etapas de:

   (i) filtrar el fluido de eclosion usando un filtro con un tamano de poro de al menos 5 pm, y recoger el filtrado;

   (ii) filtrar el filtrado de la etapa (i) usando un filtro con un tamano de poro de 0,30-0,60 pm, y recoger el filtrado;

   (iii) intercambiar el agua en el filtrado de la etapa (ii) con un tampon farmaceuticamente aceptable realizando diafiltracion usando un filtro con un tamano de exclusion de menos de 15 kDa;

   (iv) opcionalmente repetir la etapa de diafiltracion de la etapa (iii);

   (v) opcionalmente diluir la solucion de la etapa (iii) o (iv) de modo que la solucion tenga una actividad enzimatica de 3000-5000 mU/l, medida por la capacidad de la solucion para escindir el sustrato cromogenico del Factor Xa (CHsOCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH);

   (vi) filtrar la solucion de la etapa (iii), o (iv), o (v) usando un filtro con un tamano de poro de 0,15-0,30 pm, y

   recoger el filtrado; y

   (vii) preparar dicha composicion cosmetica a partir del filtrado de la etapa (vi).
9. 9. Un metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicha composicion cosmetica esta revestida, 5 impregnada o qmmicamente unida en un producto, material o dispositivo.
10. 10. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1a 7, en el que dicho metodo es para reducir o prevenir el aspecto cosmetico o predominio de arrugas y/o laxitud.