ES2621123T3 - Oligonucleótidos inmunomoduladores en conexión con medidas quimioterapéuticas - Google Patents

Abstract

Un inmunomodulador a base de ADN, y dicho inmunomodulador a base de ADN está presente en la forma de moléculas de ácido desoxirribonucleico inmunomoduladoras, cerradas de modo covalente, con forma de mancuerna, que tienen una combinación de tallo bicatenario y bucles monocatenarios, y cada uno de los bucles comprende tres motivos de CpG y el inmunomodulador consiste en la secuencia mostrada en la figura 1b para usar en el tratamiento de enfermedades tumorales.

Description

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I. Estrógenos -dietilstilbesterol (Stilbesterol, Stilphostrol) -estradiol, estrógeno (many brands) -estrógeno esterificado (Estratab, Menest)

5 -estramustina (Emcyt)

II.

Antiestrógenos -tamoxifeno (Nolvadex) -toremifeno (Fareston)

II.

Inhibidores de aromatasa

10 -anastrozol (Arimidex) -letrozol (Femara)

III. Progestinas -17-OH-progesterona (muchas marcas) -medroxiprogesterona (muchas marcas)

15 -acetato de megestrol (Megace)

IV.

Agonistas de GnRH -goserelina (Zoladex) -leuprolide (Leupron)

V.

Andrógenos

20 -testosteronas (muchas marcas) -metiltestosterona (muchas marcas) -fluoxmesterona (Android-F, Halotestin)

VI. Antiandrógenos -flutamida (Eulexin)

25 -bicalutamida (Casodex) -nilutamida (Nilandron)

VII. Inhibidores de síntesis -aminoglutetimida (Cytadren) -ketoconazol (Nizoral)

30 El grupo de INMUNOMODULADORES comprende los siguientes agentes -rituximab (Rituxan) -trastuzumab (Herceptin) -denileuquina diftitox (Ontak) -levamisol (Ergamisol)

35 -bacilo Calmette-Guerin, BCG (TheraCys, TICE BCG) -interferón alfa-2a, alfa 2b (Roferon-A, Intron A) -interleuquina-2, aldesleuquina (ProLeukin)

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Se conocen otros varios quimioterapéuticos misceláneos y se muestran con la presente:

-I-aspariginasa (Elspar, Kidrolase)

-pegaspasgasa (Oncaspar)

-hidroxiurea (Hydrea, Doxia)

-leucovorina (Wellcovorin)

-mitotano (Lysodren)

-porfimer (Photofrin)

-tretinoin (Veasnoid)

Todos los quimioterapéuticos cancerosos precedentes son parte y objeto de la invención. Además, el alcance de la invención también incluye otros medicamentos citostáticos que se emplean en quimioterapia y no se han oxidado explícitamente antes. Se prefieren medicamentos citostáticos o combinaciones de los mismos que se aplican a un paciente en un solo ciclo.

Las composiciones y métodos suministrados en la presente son considerados particularmente útiles para el tratamiento de cáncer que incluye tumores sólidos tales como carcinomas de piel, mama, cerebro, cervical, carcinoma testicular, etcétera. Más particularmente, cánceres que pueden tratarse por las composiciones y métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a: cardiaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma; pulmón: carcinoma broncogénico (de células escamosas, de células pequeñas no diferenciadas, de células grandes no diferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: de esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), de estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), de intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), de intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); tracto genitourinario: de riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), de la vejiga y la uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células transicionales, adenocarcinoma), de la próstata (adenocarcinoma, sarcoma), de los testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrional, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); del hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; huesos: sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de célula reticular), mieloma múltiple, cordoma tumoral de células gigantes malignas, osteocronfroma (exostosis cartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma benigno, condromixofibroma, osteoma osteoide tumores de células gigantes; sistema nervioso: de cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteitis deformans), de meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), de cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de médula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); ginecológico: útero (carcinoma endometrial), cérvix (carcinoma cervical, displasia cervical pre-tumoral), ovarios (carcinoma de ovario [cistoadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma, carcinoma no clasificado], tumores de células de granulosa-thecal, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma malignao), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionario], trompas de Falopio (carcinoma); hematológico: de sangre (leucemia mieloide [aguda y crónica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico), enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin [linfoma maligno]; de la piel: melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Karposi, nevos displásicos de lunares, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis; y glándulas suprarrenales: neuroblastoma. Por lo tanto, el término “célula cancerosa” tal como se suministra en la presente incluye una célula aquejada por cualquiera de las condiciones identificadas antes.

Por lo tanto, tal como se usa en la presente, “cáncer” se refiere a todos los tipos de cáncer o neoplasma o tumores malignos encontrados en mamíferos, que incluyen carcinomas y sarcomas. Ejemplos de cánceres son cáncer del cerebro, mama, cérvix, colon, cabeza y cuello, riñones, pulmón, de pulmón de células no pequeñas, melanoma, mesotelioma, ovario, sarcoma, estómago, útero y meduloblastoma.

El término “leucemia” se refiere ampliamente a enfermedades malignas, progresivas de los órganos que forman sangre y generalmente se caracteriza por una proliferación distorsionada y un desarrollo de leucocitos y sus precursores en la sangre y en la médula. La leucemia generalmente se clase tica de modo clínico con base en (1) la duración y el carácter del enfermedad, aguda o crónica; (2) el tipo de célula involucrada; mieloide (mielógena), linfoide (linfógena), o monocítica; y (3) el incremento o no incremento en el número de células anormales en la leucémica de sangre o aleucémica (subleucémica). El modelo de leucemia P388 es ampliamente aceptado por ser predictivo de actividad anti-leucémica in vivo. Se cree que el compuesto que ensaya positivo en el ensayo P388 exhibirá generalmente algún nivel de actividad

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Por lo tanto, el otro objeto de la invención es un kit que comprende en medios de contenedor adecuados a los inmunomoduladores a base de ADN en la forma de moléculas de ácido desoxirribonucleico inmunomoduladoras, cerradas de modo covalente, con forma de mancuerna, y un medicamento citostático (quimioterapéutico) o composiciones del mismo y una información acerca del uso de las partes del kit. Dicha información también puede referirse a un diagnóstico o a un esquema terapéutico. Las partes esenciales del kit se usan secuencialmente, por lo cual las cantidades terapéuticas de las partes del kit se administran a un paciente con cáncer de modo secuencial dentro de 0 a 72 horas. El kit, respectivamente las partes del kit son útiles para el tratamiento de cáncer, angiogénesis.

En resumen puede declararse que la aplicación de la molécula de ácido desoxirribonucleico según la reivindicación 1 y se reivindicaciones en el tiempo que antecede a una quimioterapia conducirá a expresión incrementada de antígenos de superficie en células tumorales, por lo tanto, para las células tumorales más reconocibles para el sistema inmune. Además, se activan receptores para células inmunes importantes, entre ellas las células NK, que aumentan la capacidad del sistema inmune para combatir células tumorales. Además, puede observarse la síntesis incrementada de anticuerpos que también pueden destruir células tumorales. Las interacciones locales entre células que tienen antígeno y células efectoras, tales como las células asesinas naturales (células NK) y los linfocitos T son importantes para una reacción inmune efectiva contra tumores.

Otras formas ventajosa de la invención pueden derivarse de las reivindicaciones dependientes y de la descripción. El efecto sorprendente del producto farmacéutico de la invención para la terapia tumoral, así como también el método de la invención, se divulgan en las tablas y en los ejemplos; en detalles se muestra en

la figura 1a: una representación esquemática de oligodesoxinucleótidos inmunomoduladores, cerrados de modo covalente, que contienen motivos de CpG: estructura con forma de mancuerna con tres motivos de CpG representados como un círculo oscuro en la región de horquilla del bucle; los números significan I: bucle y II: tallo.

La figura 1b: la secuencia de ADN del inmunomodulador de acuerdo con la invención.

La figura 2: muestra la secreción de gamma interferón citocinas en interleuquina-6 después de estimulación in vitro de monocitos de sangre periférica (PBMCs) mediante:

A: control negativo, regulador de pH

B: inmunomodulador de la invención

C: oligonucleótidos de CpG, protegidos con tioato, lineales.

El control negativo conduce a la no secreción de gamma interferón o interleuquina-6 tal como se esperaba. Ambas moléculas B y C son capaces de estimular PBMCs para secretar citocinas. La secreción de gamma interferón se incrementa en 2,5 veces por B en comparación con C. También puede observarse esta tendencia de una secreción significativamente aumentada en comparación con C para la citosina interleuquina-6.

La figura 3: muestra la expresión de las moléculas de superficie inmuno-relevantes HLA-DR y ICAM-1 después de estimulación in-vitro de linfocitos B por parte de:

A: control negativo, regulador de pH

B: inmunomodulador de la invención

C: oligonucleótidos de CpG protegidos con tioato, lineales.

El control negativo conduce a la no secreción de HLA-DR o ICAM-1, tal como se esperaba. Los valores enunciados de 9,7% y 209.6, respectivamente, se emplean como valores base para la determinación de la intensidad de fluorescencia mediana para las células positivas no estimuladas. Ambas moléculas B y C conducen a una estimulación de ambas moléculas superficiales, lo cual da resultados aproximadamente similares para B y C.

La figura 4: muestra producción de anticuerpo incrementada después de la estabilización in vitro de monocitos de sangre periférica (PBMCs) por parte de:

A: control negativo, regulador de pH

B: inmunomodulador de la invención

C: oligonucleótidos de CpG, protegidos con tioato, lineales.

El control negativo conduce a la no secreción de IgM, IgA, IgG1 y IgG2, tal como se esperaba. B y C conducen a una estimulación significativamente incrementada de la producción de anticuerpos, donde la secreción de IgA se incrementa 3 veces para B en comparación con C. Los títulos relativos de isótopos IgG1 y IgG2 pueden tomarse como un indicador para el tipo dominante de respuesta inmune. La relación de IgG2 y IgG1 muestra que el inmunomodulador de la presente invención puede provocar una respuesta inmune citotóxica (Th1) en adición a una respuesta humoral.

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carcinoma pancreático, carcinoma de vejiga urinaria y carcinoma de ovarios, con edades entre 18 y 70 años y un índice de 70 -100 were fueron aptos para incluirse. Los criterios para rechazo fueron: un tratamiento previo con citocinas o quimioterapia de menos de 28 días antes, valores de creatina por encima de 265 µmol/L, valores de bilirrubina por encima de 51 µmol/L, insuficiencia cardiaca no compensada, dice ritmo ventricular, desorden psiquiátrico severo, hepatitis activa A, B o C, infección con VIH.

Tratamiento: aparte de anamnesis, se determinaron los siguientes parámetros antes del tratamiento: examen físico, hematología (hemoglobina, hematocrito, leucocitos y conteo de plaquetas), y análisis químico de la sangre y análisis de la orina. La sangre se tomó para determinar el estatus inmune. Se realizaron ensayos de DHT (hipersensibilidad de tipo retrasada) en la piel con el ensayo Multitest Merieux (Leimen, Alemania). Fueron realizados barridos con rayos X y tomografía por computador del cuerpo superior y abdomen. Se realizaron repetidamente un examen inmunológico completo, ensayos hematológicos y examen clínico superficial (examen físico, examen con ultrasonido y examen del cuerpo inferior, cuando fue apropiado). Se realizó un examen clínico e inmunológico completo comparable con el examen realizado antes del registro al final de cada ciclo de tratamiento.

Se provee de acuerdo con la invención que los pacientes reciban inyecciones de 500 µg de la molécula de ácido desoxirribonucleico de acuerdo con la reivindicación 1 y las siguientes reivindicaciones en la piel, de modo subcutáneo y en el músculo. Los pacientes reciben cinco veces dos inyecciones de 500 µg de la molécula de ácido desoxirribonucleico de acuerdo con la reivindicación 1 y las siguientes reivindicaciones en el período alrededor del ciclo respectivo de quimioterapia, en intervalos pre definidos de dos a ocho días. La cantidad total de moléculas de ácido desoxirribonucleico aplicadas de acuerdo con la reivindicación 1 y las siguientes reivindicaciones varía entre 1 y 10 mg.

Las dos inyecciones se realizaron el primer día de inyección en los sitios típicos de vacunación en la piel (intradérmica) lateralmente en la parte superior del brazo izquierdo o derecho, el segundo día intradérmica en la porción superior del muslo izquierdo y derecho, al tercer día por vía subcutánea aproximadamente 30 mm al izquierda y a la derecha del ombligo, el día cuatro en los sitios descritos en la parte superior del brazo, ero por vía subcutánea, y el día cinco por vía intramuscular en el lado frontal de la parte superior del muslo izquierdo y derecho.

El esquema de inyección para el tratamiento de carcinoma de mama que hace metástasis:

Tiempo de Compuesto Sitio de aplicación Método de

inyección aplicación

2 x 0,5 mg parte superior

1 mg del inmunomodulador a base de ADN

-10 del brazo derecho e intradérmica

(1 mg/ml)

izquierdo

1 mg del inmunomodulador a base de ADN 2 x 0,5 mg muslo derecho

-7 intradérmica

(1 mg/ml) e izquierdo 1 mg del inmunomodulador a base de ADN 2 x 0,5 mg izquierda y

-4 Vía subcutánea

(1 mg/ml) derecha del ombligo

2 x 0,5 mg parte superior

1 mg del inmunomodulador a base de ADN

-2 del brazo derecho e Vía subcutánea

(1 mg/ml)

izquierdo

1 mg del inmunomodulador a base de ADN 2 x 0,5 mg muslo derecho

-1 Vía intramuscular

(1 mg/ml) e izquierdo

0 1 mg de Gemcitabina

El tiempo de inyección se da en relación con el inicio de la quimioterapia (día cero) con Gemcitabina.

Se toman hasta 50 ml de sangre para procedimientos diagnósticos concurrentes antes de comenzar el tratamiento y antes de cada inyección.

Se trataron pacientes con carcinoma cervical que hacía metástasis con radiación después de inyección de la molécula de ácido desoxirribonucleico de acuerdo con la reivindicación 1 y las siguientes reivindicaciones.

Se trataron pacientes con carcinoma de mama que hacía metástasis con los medicamentos quimioterapéuticos comunes Gemcitabina o Xeloda después de la inyección de la molécula de ácido desoxirribonucleico de acuerdo con la reivindicación 1 y las reivindicaciones siguientes. También se suministra el uso de antraciclinas (Epirubicina, Doxorubicina, Mitoxantrano) en combinación con la molécula de ácido desoxirribonucleico de acuerdo con la reivindicación 1 y las reivindicaciones siguientes.

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Modelo 3LL de murino singenéico

Establecimiento del modelo animal de carcinoma hepatocelular (HCC): Modelo Hep22 de murino singenéico Establecimiento de modelo animal de melanoma:

Modelo B16 de murino singenéico Establecimiento de modelo animal de carcinoma de células renales (RCC):

Modelo Renca de murino singenéico:

Establecimiento del modelo animal de carcinoma colorrectal (CRC): Modelos C26 de murino singenéico

Establecimiento del modelo animal de CRCl: Xenografo • modelo HT-29 de murino

Establecimiento de modelo animal de sarcoma: modelo S180 de murino singenéico

Abreviatura: CTX -ciclofosfamida; DITC -Dacarbacina; 5-FU -5-Fluorouracilo

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Quimioterapia (CTX, Taxol, Gemcitabina, Cisplatino) evaluación

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Hep22 titulación finalizada

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Quimioterapia (5-FU) evaluación

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B16 titulación finalizada

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Quimioterapia (DITC) evaluación

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Renca titulación finalizada

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Quimioterapia (5-FU) evaluación

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C26 titulación finalizada

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HT-29 titulación finalizada

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S180 titulación finalizada

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Quimioterapia (CTX) evaluación

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Claims (1)

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