ES2568018T3 - Composición de vacuna - Google Patents

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Abstract

Una composición de vacuna para uso en medicina, en donde la composición se ha de administrar a la mucosa de la cavidad oral de una persona o un animal, comprendiendo la composición de vacuna: al menos un antígeno derivado de una enfermedad infecciosa, y al menos un elemento seleccionado entre el grupo consistente en: un agonista del receptor 4 de tipo toll (TLR4), en donde el agonista del receptor 4 de tipo toll (TLR4) comprende al menos un elemento elegido entre el grupo consistente en un lipopolisacárido o una sal del mismo, en donde el lipopolisacárido o la sal del mismo se deriva de Pantoea, Acetobacter, Zymomonas, Xanthomonas o Enterobacter.

Description

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La Fig. 2 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 1 a 6 y Ejemplos Comparativos 1 a 9.
La Fig. 3 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgG específica de HA de la gripe del suero de ratón en los Ejemplos 7 a 9 y Ejemplos Comparativos 10 a 12.
La Fig. 4 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de la HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 7 a 9 y Ejemplos Comparativos 10 a 12.
La Fig. 5 es una gráfica que muestra las tasas de supervivencia de ratones infectados con virus de la gripe en el Ejemplo 10, Ejemplos Comparativos 13 y 14.
La Fig. 6 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgG específica de la HA de la gripe del suero de ratón en los Ejemplos 11, Ejemplos Comparativos 1 y 14.
La Fig. 7 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 11, Ejemplos Comparativos 1 y 14.
La Fig. 8 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgG específica de la HA de la gripe de suero de ratón en los Ejemplos 12 y 13, Ejemplos Comparativos 15, 16 y 1.
La Fig. 9 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 12 y 13, Ejemplos Comparativos 15, 16 y 1.
La Fig. 10 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgG específica de la HA de la gripe del suero de ratón en los Ejemplos 12, 14 y 15, Ejemplos Comparativos 16 y 1.
La Fig. 11 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 12, 14 y 15, Ejemplos Comparativos 16 y 1.
La Fig. 12 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgG específica de HA de la gripe del suero de ratón en los Ejemplos 16 y 17, Ejemplos Comparativos 17 y 18.
La Fig. 13 es una gráfica que muestra los resultados del título de IgA específica de HA de la gripe del lavado nasal de ratón en los Ejemplos 16 y 17, Ejemplos Comparativos 17 y 18.
En adelante, la presente invención se describe con más detalle con referencia a los ejemplos que siguen, pero no está limitada a ellos.
Ejemplo 1.
Se añadió tampón de fosfato (Nacalai Tesque, Inc.) a 76,3 µL (236 µg/mL) de una solución que contiene antígeno HA de la gripe (A/IvPR8/34 (H1N1), The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University (Fundación para la Investigación de Enfermedades Microbianas de la Universidad de Osaka)) y 30 µL (1 mg/ml) de una solución que contiene lipopolisacárido de E. Coli (Nacalai Tesque, Inc.) para preparar 120 µL de una composición de vacuna.
Cinco ratones (ratones hembra C57BL/6 de 7 semanas de edad, Japan SLC, Inc.) preparados de antemano fueron anestesiados (Somnopentyl, Kyoritsu Seiyaku Corporation), y se administraron por vía sublingual 20 µL de la composición de vacuna preparada, a cada uno de los ratones.
1 semana después de la administración, los ratones fueron anestesiados de nuevo y se administraron por vía sublingual 20 µL de la composición de vacuna preparada a cada uno de los ratones.
Otra semana después de la segunda administración, se recolectaron el lavado nasal y el suero de los ratones, y se determinó el título de IgG específico de HA de la gripe del suero y el título de IgA específico de HA de la gripe del lavado nasal mediante ELISA. El método de medida se describe más adelante con detalle.
Ejemplos 2 a 6.
Las composiciones de vacuna se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 1, excepto que, en vez del lipopolisacárido de E. coli, se utilizó lipopolisacárido de Pantoea (MacrophiInc.) en el Ejemplo 2, se utilizó glucopiranosil lípido (MPLAs, InvivoGen) en el Ejemplo 3, se utilizó FSL-1 (InvivoGen) en el Ejemplo 4, se utilizó Pam2CSK4 (InvivoGen) en el Ejemplo 5 y se utilizó c-di-GMP (diguanosin monofosfato cíclico, Biolog Inc.) en el Ejemplo 6. El ensayo se llevó a cabo por el misma procedimiento que en el Ejemplo 1 en las dosis mostradas en la Tabla 1.
7
Ejemplo Comparativo 1.
Se anestesiaron cinco ratones (ratones hembra C57BL/6 de 7 semanas de edad, Japan SLC, Inc.) preparados de antemano, se prepararon 120 µL de tampón de fosfato (Nacalai Tesque, Inc.) y 20 µL del mismo se administraron por vía sublingual a cada uno de los ratones. La prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el
5 Ejemplo 1 subsiguiente.
Ejemplo Comparativo 2.
En vez del tampón de fosfato, se añadió tampón de fosfato (Nacalai Tesque, Inc.) a 76,3 µL (236 µg/mL) de una solución que contiene antígeno HA de la gripe (A/IvPR8/34 (H1N1), The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University), para preparar 120 µL de una composición de vacuna. La prueba se llevó a cabo por el mismo
10 procedimiento que en el Ejemplo 1 subsiguiente en la dosis mostrada en la Tabla 1.
Ejemplos Comparativos 3 a 9.
Se prepararon composiciones de vacuna de la misma manera que en el Ejemplo Comparativo 2, excepto que, además de la solución que contiene el antígeno HA de la gripe (A/IvPR8/34(H1N1), The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University), se usó peptidoglicano (PGN derivado de Salmonella, InvivoGen) en el
15 Ejemplo Comparativo 3, se utilizó zymosan (Nacalai Tesque, Inc.) en el Ejemplo Comparativo 4, se usó Pam3CSK4 (InvivoGen) en el Ejemplo Comparativo 5, se utilizó Poly (I : C) (InvivoGen) en el Ejemplo Comparativo 6, se usó flagelina (InvivoGen) en el Ejemplo Comparativo 7, se usó imiquimod (InvivoGen) en el Ejemplo Comparativo 8 y se usó CpG (InvivoGen) en el Ejemplo Comparativo 9. El ensayo se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en las dosis que se indican en la Tabla 1.
20 Tabla 1
Nº
antígeno coadyuvante
dosis (µg/cuerpo/tiempo)
Ligando Nombre de la sustancia
dosis (µg/cuerpo/tiempo)
Ejemplo 1
3 TLR4 LPS de E. coli 5
Ejemplo 2
3 TLR4 LPS de Pantoea 5
Ejemplo 3
3 TLR4 GLA 5
Ejemplo 4
3 TLR 2/6 FSL-1 5
Ejemplo 5
3 TLR 2/6 Pam2CSK4 5
Ejemplo 6
3 no claro c-di-GMP 138
Ejemplo Comparativo 1
- - - -
Ejemplo Comparativo 2
3 - - -
Ejemplo Comparativo 3
3 TLR 2 PGN 100
Ejemplo Comparativo 4
3 TLR 2/dectina 1 zymosan 5
Ejemplo Comparativo 5
3 TLR2/1 Pam2CSK4 5
Ejemplo Comparativo 6
3 TLR3 poli I : C 5
Ejemplo Comparativo 7
3 TLR5 flagelin 5
Ejemplo Comparativo 8
3 TLR7 imiquimod 5
Ejemplo Comparativo 9
3 TLR9 CpG 5
8
imagen6
imagen7
que en el Ejemplo 12. La prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en la dosis mostrada en la Tabla 5.
Ejemplo Comparativo 15.
En vez del lipopolisacárido derivado de Pantoea utilizado en el Ejemplo 12, se utilizó imiquimod (InvivoGen) en el 5 Ejemplo Comparativo 15 y la prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en la dosis mostrada en la Tabla 5.
Ejemplo Comparativo 16.
En vez del lipopolisacárido derivado de Pantoea utilizado en el Ejemplo 12, se preparó una solución que contiene solamente la solución que contiene el antígeno HA de la gripe (A/IvPR8/34(H1N1), The Research Foundation for 10 Microbial Diseases of Osaka University) sin adición de ningún otro componente en el Ejemplo Comparativo 16. La prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en la dosis mostrada en la Tabla 5.
[Tabla 5]
Nº
Antígeno Coadyuvante
Tipo
Dosis (µg/cuerpo/tiempo) Ligando Nombre de la sustancia Dosis (µg/cuerpo/tiempo)
Ejemplo 12
(A/California/7/2009(H1N1)) 3 TLR4 LPS de Pantoea 5
Ejemplo 13
(A/California/7/2009(H1N1)) 3 no claro c-di-GMP 5
Ejemplo Comparativo 15
(A/California/7/2009(H1N1)) 3 TLR7 imiquimod 5
Ejemplo Comparativo 16
(A/California/7/2009(H1N1)) 3 - - -
Ejemplo Comparativo 1
- - - - -
Ejemplo 14.
15 Se añadieron tampón de fosfato (Nacalai Tesque, Inc.) y 30 µL (1 mg/mL) de lipopolisacárido derivado de Pantoea (Macrophi Inc.) a 33,7 µL (534 µg/mL) de la solución que contiene el antígeno HA de la gripe (A/Victoria/361/2009 H3N2), The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University) para preparar 120 µL de una composición de vacuna. La prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en la dosis mostrada en la Tabla 6.
20 Ejemplo 15.
Se añadieron tampón de fosfato (Nacalai Tesque, Inc.) y 30 µL (1 mg/mL) de lipopolisacárido derivado de Pantoea (Macrophi Inc.) a 47,4 µL (380 µg/mL) de la solución que contiene el antígeno HA de la gripe (B/Brisbane/60/2008), The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University) para preparar 120 µL de una composición de vacuna. La prueba se llevó a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1 en la dosis mostrada en la Tabla
25 6.
11
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