ES2556583T3 - Utilización de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina para el tratamiento de cáncer y en particular para la prevención y/o el tratamiento de las metástasis cancerosas - Google Patents

Abstract

3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para su utilización como medicamento destinado al tratamiento del cáncer.

Description

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DESCRIPCION

Utilizacion de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina para el tratamiento de cancer y en particular para la prevencion y/o el tratamiento de las metastasis cancerosas.

La invencion se refiere a la utilizacion de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5- benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables en el tratamiento del cancer y en particular en la prevencion y/o el tratamiento de metastasis cancerosas.

En la solicitud de patente WO 02/081464 se describen la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metil-propil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina representada por la formula:

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sus sales farmaceuticamente aceptables y su utilizacion en el tratamiento de la angina de pecho, de la insuficiencia cardiaca, del infarto de miocardio y de los trastornos del ritmo cardfaco,.

El cancer puede ser definido de manera muy amplia como una enfermedad relacionada con la proliferacion y la difusion incontrolada de celulas del organismo que se han convertido en anormales. Es una de las principales causas de mortalidad en los pafses desarrollados y el numero de casos nuevos esta en constante aumento. Sin embargo, gracias entre otras cosas a los progresos de los tratamientos anticancerosos, la tasa de mortalidad por cancer ha disminuido significativamente. Los tratamientos anticancerosos incluyen, dependiendo del tipo y grado de la evolucion de la enfermedad, la cirugfa, la radioterapia y la quimioterapia. En la mayorfa de los casos, se requiere una combinacion de dos o tres enfoques.

La radioterapia es un metodo de tratamiento regional local de los canceres, que usan radiaciones ionizantes para destruir las celulas cancerosas dejando al mismo tiempo la mayor cantidad posible del tejido sano circundante. La quimioterapia consiste en la utilizacion de sustancias que pueden matar o limitar la proliferacion de las celulas cancerosas.

Cuando se detecta un cancer en un estado precoz, es decir antes haya metastasis, el pronostico es relativamente bueno. En la practica, sin embargo, esto solo representa aproximadamente el 30% de los casos. El tumor, llamado tumor primario se trata entonces por lo general a nivel local por cirugfa y/o radioterapia; los pacientes pueden recibir quimioterapia adicional para reducir el riesgo de recurrencia y de aparicion de tumores secundarios, o metastasis.

Muchos tipos de cancer tienen la capacidad de formar metastasis que pueden estar distantes del tumor primario y pueden ocurrir varios anos despues del tratamiento de un tumor primario. Este fenomeno puede explicarse por la existencia de micrometastasis pre-angiogenicas o de celulas que no se dividen por un periodo de tiempo prolongado en la o las zonas secundarias. En cancerologfa el termino metastasis denota tumores secundarios que se forman a partir de celulas de un tumor primario, identificado o no. El termino micrometastasis se emplea cuando el tamano de estos tumores secundarios no excede de 2 mm.

Aunque las celulas metastasicas se originen del tumor primario, no son exactamente identicas a las celulas de este utlimo. De hecho, estas celulas deben adquirir un cierto numero de caracterfsticas que les permite la transicion de las celulas del fenotipo canceroso al metastasico. Sin embargo, la metastasis es un fenomeno complejo, abreviado en la presente memoria como "proceso metastasico", durante el cual las celulas cancerosas dejan el tumor primario y migran a otras partes del cuerpo utilizando el sistema linfatico y/o sangufneo. El proceso metastasico se puede dividir en una pluralidad de etapas: 1) las celulas cancerosas se desprenden del tumor primario y se unen degradandolas en las protefnas que componen la matriz extracelular que separa el tejido circundante del tumor, 2) una vez que rota la matriz, se infiltran en los tejidos circundantes, incluyendo los vasos linfaticos y/o sangufneos, 3) sobreviven entonces en la circulacion y son transportadas hasta los sitios secundarios en donde emergen por extravasacion, 4) se fijan en un tejido y proliferan despues de la activacion del microentorno de la induccion de la angiogenesis para formar una metastasis.

El termino angiogenesis denota el conjunto de procesos que conducen a la formacion de nuevos capilares sangufneos a partir del sistema vascular preexistente.

En la mayorfa de los casos de cancer, la mortalidad no se debe al tumor primario, sino a las metastasis que se desarrollan y se multiplican a nivel de uno o varios organos.

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El tratamiento de los canceres metastasicos se basa principalmente en la quimioterapia; empleandose la radioterapia y/o la cirugfa generalmente como complemento para aliviar algunos sfntomas. En la practica, sin embargo, los tratamientos de quimioterapia sistemica son ineficaces en las metastasis y no tienen efecto sobre el propio proceso de metastasis.

Se ha desarrollado otra estrategia que consiste no en destruir las metastasis sino mas bien en impedir su crecimiento mas alla de unos pocos milfmetros frenando la angiogenesis tumoral por medio de sustancias que bloquean la proliferacion de las celulas del endotelio vascular.

Las sustancias anti-angiogenicas empleadas en los tratamientos anticancerosos incluyen bevacizumab, sorafenib y sunitinib. El bevacizumab es un anticuerpo monoclonal que se une a todas las isoformas del factor de crecimiento vascular (VEGF) e impide su union a los receptores del VEGF. El sorafenib y el sunitinib son unos inhibidores no selectivos de los receptores de tirosina quinasa, especialmente los del VEGF. Las sustancias antiangiogenicas tienen una actividad anti-metastasica indirecta ya que mejoran el suministro de los agentes quimioterapeuticos a pesar de que no interfieren con el propio proceso metastasico. Sin embargo dichos medicamentos tienen graves desventajas: 1) reducen la densidad de los microvasos tisulares e interfieren con procesos normales de reparacion, 2) agravan las enfermedades coronarias, causan hipertensiones arteriales y trombosis, 3) no existen factores predictivos de la respuesta o de la aparicion de resistencia, y 4) su coste es muy elevado.

Dadas las limitaciones de los tratamientos actuales, hay una necesidad medica real de sustancias que tengan la capacidad de prevenir las metastasis en pacientes que sufren de cancer. Ademas, es altamente deseable que estas sustancias tengan unas propiedades anti-metastasicas directas, por lo tanto complementarias a las de los medicamentos existentes.

Se han descrito los canales ionicos como implicados en los mecanismos de invasion y de migracion necesarios para la formacion de metastasis (Arcangeli et al., 2009, Curr. Med. Chem. 16, 66-93). Los canales anormalmente expresados en las celulas de cancer, incluyen el canal sodico dependiente de voltaje Nav1.5 (Onkal y Djamgoz 2009, Eur. J. Pharmacol. 625, 206-219). En la presente invencion, el termino "Nav1.5" designa los canales sodicos dependientes de voltaje cuya subunidad alfa que constituye el poro del canal esta codificada por el gen SNC5A (tambien conocido como Hi) localizado en el cromosoma 3. La subunidad alfa puede estar asociada a una o varias subunidades auxiliares (denominadas subunidad(es) beta) codificada(s) por los genes SNC1B SNC2B, SNC3B, SNC4B que se encuentran en los cromosomas 11 y 19.

Por lo tanto, se demostro que la expresion de canales Nav1.5 funcionales en las celulas de cancer de ovario aumenta en gran medida su potencial metastasico (Gao et al. 2010, Oncology Reports 23, 1293-1299). Del mismo modo, unos canales Nav1.5 funcionales se han detectado en biopsias de cancer de mama (Brisson et al., 2011 Oncogene 30, 2070-2076) o el colon (House et al., 2010, Cancer Res. 70, 6957-6967) altamente metastasicos, mientras que no se encuentran en celulas sanas de los tejidos correspondientes o en las de tumores poco o no metastasicos. Unos canales Nav1.5 tambien se han detectado en varias lfneas tumorales y biopsias de canceres de pulmon (Roger et al., 2007, Int. J. Biochem. Cell. Biol. 39, 774-786). La expresion o la sobreexpresion de los canales del tipo Nav1.5 se ha propuesto ademas como herramienta de diagnostico del potencial metastasico de las celulas cancerosas (Fraser et al., 2005, Clin. Cancer Res. 11, 5381-5389). Tambien se ha sugerido que el efecto beneficioso de los acidos grasos insaturados con cadenas largas en los canceres de mama, de colon y de prostata podrfa estar relacionado con sus propiedades inhibidoras de la corriente sodica Nav1.5, aunque su mecanismo de accion no se conozca (Gillet et al. 2011, Biochimie 93, 4-6). Unos experimentos in vitro indican que unos bloqueadores del canal Nav1.5, tales como la tetrodotoxina o unos anticuerpos policlonales dirigidos contra la forma neonatal del canal Nav1.5 atenuan el potencial metastasico en varias lfneas de celulas cancerosas (Chioni et al. 2005, J. Neurosci. Methods 147, 88-98).

Asf, un haz de elementos indica que la corriente sodica producida por el canal Nav1.5 juega un papel principal en el proceso metastasico de las celulas cancerosas, por lo menos en ciertos tipos de canceres, en particular los canceres de mama, de pulmon, de prostata, de colon, de vesfcula, de ovario, de testfculos, de piel, de tiroides, o cancer gastrico. Los mecanismos por los cuales los canales Nav1.5 potencian la formacion de metastasis no han sido dilucidados pero se han propuesto varias hipotesis, por ejemplo, la modificacion de la adhesion, la regulacion de las enzimas proteolfticas. En conclusion, el canal Nav1.5 aparece por lo tanto como una diana potencial para la prevencion de la formacion de las metastasis.

Sin embargo, dado el papel ubiquitario del canal Nav1.5, su utilizacion como diana terapeutica para la puesta a punto de un agente anticanceroso y/o anti-metastasico es complicada. De hecho, el canal Nav1.5 se distribuye ampliamente en el organismo, en particular a nivel de las celulas cardfacas y vasculares (Goldin, 2001, Annu. Rev. Physiol. 63, 871-894).

En los cardiomiocitos, la apertura del canal Nav1.5 desencadena una corriente sodica entrante que puede desactivarse segun por lo menos dos modos, cada uno caracterizado por la cinetica de cierre del canal: la inactivacion rapida y la inactivacion lenta. La inactivacion rapida genera la corriente Nav1.5 "rapida" que dura solo

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unos pocos milisegundos, mientras que la inactivacion lenta produce la corriente llamada "lenta" que dura varias decenas de milisegundos. La corriente rapida Nav1.5 juega un papel fundamental en el funcionamiento normal del corazon donde activa y asegura la propagacion del potencial de accion cardfaca. Por el contrario, el de la corriente lenta de material no parece importante en el funcionamiento normal del corazon y solo se produce o se amplifica significativamente en las celulas cardfacas y vasculares sometidas a estres (Bocquet et al. 2010 Br. J. Pharmacol. 161, 405-415).

Sorprendentemente, los inventores han demostrado que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina que es un inhibidor selectivo de la corriente Nav1.5 lenta, tambien bloquea la corriente sodica generada por los canales sodicos Nav1.5 presentes en las celulas cancerosas, abreviado en la presente memoria como "corriente Nav1.5 metastasica".

Basandose en esta observacion, se desprende que la corriente Nav1.5 metastasica y la corriente Nav1.5 lenta tienen caracterfsticas bioffsicas suficientemente similares para ser reconocidas ambas por la 3-(R)-[3-(2- metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina.

Tambien se desprende que la corriente Nav1.5 metastasica y la corriente Nav1.5 rapida cardfaca son de hecho separables. En efecto, los inventores han demostrado que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina no afecta el funcionamiento normal del sistema cardiovascular bajo el control de la corriente Nav1.5 rapidas, incluso a altas dosis. La 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H- 1,5-benzoxatiepina tiene por lo tanto la selectividad de accion requerida para su utilizacion como un agente anti- metastasico porque bloquea la corriente Nav1.5 metastasica sin interferir con la corriente Nav1.5 rapida necesaria para el funcionamiento normal del corazon y de los vasos.

Los inhibidores/bloqueadores de canal Nav1.5 incluyen numerosos compuestos no-selectivos Nav1.5 tales como toxinas naturales, moleculas terapeuticas (por ejemplo, anestesicos, antiarrftmicos) e insecticidas (Anger et al., 2001, J. Med. Chem. 44, 115-137). Solo dos farmacos se describen como bloqueadores preferenciales de la corriente Nav1.5 lenta cardiaca: ranolazina (RN 95635-55-5) y riluzol (RN 1744-22-5), pero son relativamente ineficaces y poco selectivos con respecto a dicha corriente. Por otra parte, interaction con otras dianas moleculares diferentes al canal Nav1.5. De manera interesante, se ha reportado que el riluzol tiene actividad anti-metastasica en melanomas, sin embargo, esta actividad utiliza otros mecanismos distintos a la inhibicion de la corriente sodica Nav1.5 lenta (US 20100221246; Biechele et al., 2010, Chemistry and Biology 17, 1177-1182; Wu et al. 2009, NeuroToxicology 30, 677-685).

Por lo tanto, la presente invencion proporciona un nuevo medio para combatir el cancer y mas particularmente prevenir o tratar sus metastasis actuando directamente a nivel del proceso metastasico, lo cual ningun agente existente es capaz de realizar.

Aunque el canal Nav1.5 haya sido identificado en diversos tipos de canceres metastasicos como los de mama, de pulmon, de prostata, de colon, es evidente que la utilizacion de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino- 3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina no se limita a dichas formas de cancer sino que se extiende a todos los canceres cuyas celulas expresan, entre otras cosas, el canal Nav1.5.

Mas especfficamente y a modo de ejemplo, se muestra de acuerdo con la invencion que la 3-(R)-[3-(2- metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables bloquean la corriente Nav1.5 metastasica en una lfnea tumoral humana de cancer de mama altamente metastasica. Dada la relacion establecida entre la corriente producida por los canales Nav1.5 presentes en las celulas cancerosas y su propension a formar metastasis, detectar propiedades inhibidoras de dicha corriente es de esta manera equivalente a detectar propiedades anti-metastasicas. Ademas, los inventores han demostrado que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina no era citotoxica.

La presente invencion tiene por objeto la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5- benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables para su utilizacion como medicamento destinado al tratamiento del cancer y mas particularmente para prevenir o tratar sus metastasis.

En la presente invencion, la expresion "farmaceuticamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y a composiciones que no producen ningun efecto adverso o alergico o cualquier otra reaccion indeseable cuando se administran a un ser humano. Cuando se usa en la presente memoria, la expresion "excipiente farmaceuticamente aceptable" incluye cualquier diluyente, adyuvante o excipiente, tales como agentes conservantees, agentes de relleno, agentes disgregantes, humectante, emulsionante, dispersante, antibacteriano o antifungico, o tambien agentes que permitirfan retrasar la absorcion y la resorcion intestinal y digestiva. La utilizacion de estos medios o vectores es muy conocido por el experto en la materia.

Se designa por "sales farmaceuticamente aceptables" de un compuesto, unas sales que son farmaceuticamente aceptables, como se define en la presente memoria, y que poseen la actividad farmacologica deseada del compuesto precursor. Dichas sales comprenden: las sales de adicion de acido formadas con acidos minerales tales

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como el acido clorhfdrico, el acido bromhfdrico, el acido sulfurico, el acido nftrico, el acido fosforico y similares o formadas con acidos organicos tales como el acido acetico, el acido bencensulfonico, el acido benzoico, el acido canforsulfonico, el acido cftrico, el acido etanosulfonico, el acido fumarico, el acido glucoheptonico, el acido gluconico, el acido glutamico, el acido glicolico, el acido hidroxinaftoico, el acido 2-hidroxietansulfonico, el acido lactico, el acido maleico, el acido malico, el acido mandelico, el acido metansulfonico, el acido muconico, el acido 2- naftalensulfonico, el acido propionico, el acido salicflico, el acido succfnico, el acido dibenzoil-L-tartrico, el acido tartrico, el acido p-toluensulfonico, el acido trimetilacetico, el acido trifluoroacetico y similares.

Las sales farmaceuticamente aceptables tambien incluyen las formas de adicion de solventes (solvatos) o las formas cristalinas (polimorfos) como se definen en la presente memoria, de la misma sal de adicion de acido.

La invencion tambien se refiere la utilizacion de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H- 1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en pacientes que presentan uno(s) tumor(es) canceroso(s) cuyas celulas expresan, entre otras cosas, el canal sodico dependiente de voltaje Nav1.5.

La presente invencion se refiere ademas a una composicion farmaceutica que contiene como agente activo la 3-(R)- [3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptable y por lo menos un excipiente farmaceuticamente aceptable, para su utilizacion en el tratamiento del cancer y mas particularmente para prevenir o tratar la metastasis cancerosas. De una manera preferida, los canceres afectados por la composicion de la presente invencion son los de: mama, pulmon, prostata, colon, vesfcula, ovario, testfculos, piel, tiroides o gastrico.

De una forma preferida, la composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion esta dirigida a los pacientes cuyas celulas tumorales expresan, entre otras cosas, el canal Nav1.5. La presencia de dicho canal en las celulas tumorales del paciente puede ser revelada por la presencia del ARN mensajero del gen SCN5A y/o la protefna del canal en si. El ARN mensajero y/o la protefna se pueden detectar por medio de tecnicas bien conocidas por el experto en la materia tales como, por ejemplo, la PCR (Polymerase Chain Reaction), transferencia de Western o hibridacion in situ. Las celulas se pueden obtener a partir de extracciones efectuadas a nivel del tumor primario, de metastasis, de ganglios linfaticos o sangufneos y pueden ser analizadas directamente o puestas en cultivo in vitro antes de ser analizadas.

La composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion se puede administrar con uno u otros agente(s) activo(s), tal como un agente anticanceroso, o en asociacion con un tratamiento radioterapeutico o quirurgico, o con una combinacion de estos ultimos. La administracion puede entonces ser simultanea, separada o escalonada con respecto a los otros tratamientos. Tambien se puede utilizar en toda la duracion o en un periodo mas corto o mas largo que el del otro tratamiento anticanceroso.

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion se formulan para la administracion al ser humano. Las composiciones de acuerdo con la invencion se pueden administrar por via oral, sublingual, subcutanea, intramuscular, intravenosa, transdermica, local o rectal o tambien intranasal. En este caso, el principio activo se puede administrar en formas unitarias de administracion, mezclado con soportes farmaceuticos clasicos, a los seres humanos. Las formas unitarias de administracion apropiadas comprenden las formas por via oral tales como los comprimidos, las capsulas, los polvos, los granulos y las soluciones o suspensiones orales, las formas de administracion sublingual y bucal, las formas de administracion subcutanea o transdermica, topica, intramuscular, intravenosa, intranasal o intraocular, las formas de administracion rectal.

Cuando se prepara una composicion solida en forma de comprimidos, el ingrediente activo principal se mezcla con un vehfculo farmaceutico tal como la gelatina, el almidon, la lactosa, el estearato de magnesio, el talco, la goma arabiga, la sflice o similares. Las tabletas pueden estar recubiertas con sacarosa o con otros materiales adecuados o tambien pueden ser tratadas para que tengan una actividad prolongada o retardada y liberen de forma continua una cantidad predeterminada de principio activo.

Una preparacion en capsulas se obtiene mezclando el ingrediente activo con un diluyente y vertiendo la mezcla obtenida en unas capsulas de gelatina blandas o duras.

Una preparacion en forma de un jarabe o de elixir puede contener el ingrediente activo conjuntamente con un edulcorante, un antiseptico, asf como un junto con un agente saborizante y un colorante apropiado.

Los polvos o los granulos dispersables en agua pueden contener el ingrediente activo mezclado con unos agentes dispersantes o unos agentes humectantes, o unos agentes de puesta en suspension, asf como con unos correctores del sabor o unos edulcorantes.

Para la administracion rectal, se recurre a supositorios que se preparan con unos aglutinantes que se funden a temperatura rectal, por ejemplo manteca de cacao o polietilenglicoles.

Para administracion parenteral (intravenosa, intramuscular, intradermica, subcutanea), intranasal o intraocular, se

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utilizan unas suspensiones acuosas, unas soluciones salinas isotonicas o unas soluciones esteriles e inyectables que contienen unos agentes de dispersion y/o unos agentes humectantes farmacologicamente compatibles.

El principio activo tambien se puede formular en forma de microcapsulas, opcionalmente con uno o varios soportes aditivos.

Ventajosamente, la composicion farmaceutica de la presente invencion esta destinada a la administracion por via oral o intravenosa.

La composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion puede comprender otros principios activos que conducen a un efecto complementario o eventualmente sinergico.

Las dosificaciones de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables en las composiciones de la invencion, se pueden ajustar para obtener una cantidad de sustancia que es eficaz para obtener la respuesta terapeutica deseada para una composicion particular al metodo de administracion. La dosis eficaz del compuesto de la invencion varfa en funcion de muchos parametros, tales como, por ejemplo, la via de administracion elegida, el peso, la edad, el sexo y la sensibilidad del individuo a tratar. En consecuencia, la dosis optima la debe determinar el experto en la materia en funcion de los parametros que considere pertinentes. Aunque las dosis efectivas puedan variar dentro de amplias proporciones, las dosis diarias podrfan variar entre 1 mg y 1000 mg por 24 horas, y preferentemente entre 1 y 200 mg, para un adulto de un peso medio de 70 kg, en una o varias tomas.

El ejemplo siguiente permite comprender mejor la invencion.

A tftulo puramente ilustrativo, los inventores han optado por utilizar en el experimento la lfnea MDA-MB-231 que es una lfnea adenocarcinoma de mama humano altamente metastasico. En efecto, se ha demostrado que dichas celulas expresan, entre otras, unos canales sodicos dependientes de voltaje Nav1.5 funcionales y que el bloqueo de dicho canal por medio de diversas herramientas farmacologicas reducfa su potencial metastasico (Brackenbury et al. 2007, Breast Cancer Res. Treat. 101, 149-160). Sin embargo, las herramientas farmacologicas en cuestion no permiten caracterizar con precision la naturaleza de la corriente sodica Nav1.5 implicada en el proceso metastasico. Ahora bien, los inventores han demostrado mediante unos experimentos de patch-clamp en configuracion de "celula entera", realizados en unas celulas MDA-MB-231, que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina reducfa de una forma dependiente de la concentracion la corriente Nav1.5 metastasica (IC50 = 1.5 mM). Por eso, los inventores creen que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino- 3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina tiene propiedades anti-metastasicas con respecto a las celulas cancerosas que expresan el canal Nav1.5. A este respecto, es importante tener en cuenta que muchos tipos de canceres metastasicos se han reportado como que expresan el canal Nav1.5.

Metodo

Cultivo celular: Las celulas MDA-MB-231 se cultivaron en un medio de cultivo de tipo de Eagle, modificado por Dulbecco (Life Technologies LTD, Paisley, Reino Unido) suplementado con L-glutamina 4 mM y 10% de suero de ternera fetal. Las celulas se siembran en unas placas de cultivo de 100 mm y se colocan en una incubadora a 37°C, 100% de humedad y 5% de CO2.

Mediciones electrofisiologicas en configuracion de "celula entera": la pipeta de parche (resistencia 5-15 MQ) contiene una solucion de: NaCl 5 mM, CsCl 145 mM, MgCh 2 mM, CaCl2 1 mM, HEPES 10 mM y EGTA 11 mM, el pH se ajusta a 7.4 con CsOH. El electrodo de referencia se sumerge en el medio extracelular constituido por una solucion de: NaCl 140 mM, KCl 4 mM, MgCh 2 mM, glucosa 11 mM, HEPES 10 mM, pH se ajusta a 7.4 con NaOH. Estos dos electrodos se conectan a un amplificador Axopatch 200B (Axon Instrument). Las corrientes son filtradas por medio de un filtro Bessel a una frecuencia de 5 kHz y se muestrean a una frecuencia de 5 kHz utilizando la interfaz Digidata (1200). La adquisicion y el analisis de los datos se realizaron con el programa pClamp (Axon Instrument). El potencial de retencion se ajusta a -110 mV para registrar la actividad maxima del canal Nav.

Se utilizaron dos protocolos:

1/ Protocolo "corriente iNa dependiente de voltaje" que permite observar la amplitud maxima de iNa en funcion del voltaje aplicado. Unas despolarizaciones por incrementos de 5 mV se realizan a una frecuencia de 0.2 Hz, desde -110 a +60 mV. El intervalo de despolarizacion dura 600 ms (vease figura adjunta).

2/ Protocolo "despolarizacion repetida" que permite medir el efecto del producto de ensayo en la amplitud de la corriente. Para esto, se suceden unas despolarizaciones a -20 mV a una frecuencia de 0.5 Hz. El intervalo de despolarizacion dura 25 ms.

Resultados

Las celulas de prueba expresan una corriente de amplitud maxima en el orden de 900 pA. El umbral de activacion de la corriente se situa en -50 mV, el pico de corriente en aproximadamente -20 mV y el potencial inverso en +30 mV 5 (figura adjunta). La corriente se cancela en ausencia de iones Na+ en el medio, lo que confirma que la corriente en cuestion es una corriente de sodio. La inhibicion de la corriente de pico por la tetrodotoxina (Sigma) es solo parcial, es decir: 30 ± 7% a 1 pM y 54 ± 8% a 5 pM, lo que indica que la corriente en cuestion es resistente a la tetrodotoxina.

10 Los inventores tambien han demostrado in vivo que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro- 2H-1,5-benzoxatiepina no interfiere con el funcionamiento normal del corazon, incluso a dosis altas.

La presente invencion se distingue por lo tanto: 1) por que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina actua directamente sobre el proceso metastasico y, a este respecto, es 15 complementaria a los tratamientos existentes, 2) por que la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4- dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina actua selectivamente a nivel de las celulas cancerosas sin interferir, a las dosis antimetastaticas, con las otras funciones en las que estan implicados los canales sodicos Nav1.5 como el funcionamiento normal del corazon y de los vasos.

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   REIVINDICACIONES

   1. 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales

   farmaceuticamente aceptables, para su utilizacion como medicamento destinado al tratamiento del cancer.
2. 2. 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales

   farmaceuticamente aceptables, para utilizacion segun la reivindicacion 1, para prevenir o tratar metastasis cancerosas.
3. 3. 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales

   farmaceuticamente aceptable, para su utilizacion segun la reivindicacion 1 o 2, en pacientes que presentan uno(s) tumor(es) canceroso(s), cuyas celulas expresan, entre otras cosas, el canal sodico dependiente de voltaje Nav1.5.
4. 4. 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)-metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales

   farmaceuticamente aceptables, para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en pacientes que padecen cancer de mama, de pulmon, de prostata, de colon, de vesfcula, de ovario, de testfculos, de piel, de tiroides o cancer gastrico.
5. 5. Composicion farmaceutica caracterizada por que contiene como agente activo la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)- metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables y por lo menos un excipiente farmaceuticamente aceptable, para su utilizacion como medicamento destinado al tratamiento del cancer.
6. 6. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion 5, para su utilizacion para prevenir o tratar metastasis cancerosas.
7. 7. Composicion farmaceutica segun una de las reivindicaciones 5 o 6, para su utilizacion en pacientes que presentan uno(s) tumor(es) canceroso(s), cuyas celulas expresan, entre otras cosas, el canal sodico dependiente de voltaje Nav1.5.
8. 8. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, para su utilizacion en pacientes que padecen cancer de mama, de pulmon, de prostata, de colon, de vesfcula, de ovario, de testfculos, de piel, de tiroides o cancer gastrico.
9. 9. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, para su utilizacion en pacientes sometidos a un tratamiento quimioterapeutico.
10. 10. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, para su utilizacion en pacientes sometidos a un tratamiento radioterapeutico y/o quirurgico.
11. 11. Composicion farmaceutica segun una de las reivindicaciones 9 o 10 para su utilizacion simultanea, separada o escalonada con respecto al (a los) otro(s) tratamiento(s) quimioterapeutico(s), radioterapeutico(s) y/o quirurgico(s).
12. 12. Composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, para su utilizacion por via oral o intravenosa.
13. 13. Composicion farmaceutica, para su utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, caracterizada por que se presenta en forma de una unidad de dosificacion diaria de la 3-(R)-[3-(2-metoxifeniltio)-2-(S)- metilpropil]amino-3,4-dihidro-2H-1,5-benzoxatiepina o una de sus sales farmaceuticamente aceptables comprendida entre 1 y 1000 mg.