ES2553628T3 - Compuestos como moduladores de una proteína CFTR mutante y su uso para el tratamiento de enfermedades asociadas con el mal funcionamiento de la proteína CFTR - Google Patents

Compuestos como moduladores de una proteína CFTR mutante y su uso para el tratamiento de enfermedades asociadas con el mal funcionamiento de la proteína CFTR Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula general (I):**Fórmula** sus tautómeros, los isómeros geométricos E y Z, las formas ópticamente activas, tales como enantiómeros, diastereómeros y sus formas racemato o una mezcla de formas estereoisoméricas o sus sales farmacéuticamente aceptables de los mismos o complejos de los mismos; en la que Z1 se selecciona independientemente del grupo que consiste en: -CnH(2n)-, que está ramificado o no ramificado en el que n es un número entero de 1 a 5; -CnH(2n-2)- en E o Z conformación geométrica que está ramificada o no ramificada en la que n es un número entero de 2 a 5; -CnH(2n- 4)- que está ramificada o no ramificada en la que n es un número entero de 2 a 5; -CR'H-, -C2H3R'-, E o Z -C2HR'- , -C3H5R'-, E or Z -C3H3R'-,-OCH2-, -CH2O-, NR"CH2-,-CH2NR"-; en los que R' se selecciona independientemente del grupo que consiste en: -H, halógeno, -NH2, -OH, -CN, CF3, -CHF2, -CH2F, -SH, - SCN, -CH3, -C2H5; en el que R" se selecciona independientemente del grupo que consiste en: -H, -CH3, -C2H5; en el que R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en anillo aromático o anillo heteroaromático, como un modulador de una proteína CFTR mutante para su uso en el tratamiento de la fibrosis quística.

Description

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dirigido a aumentar el AMPc intracelular forskolina 10μM y 30μM genisteína) se utilizó para las próximas alícuotas para activar los canales de cloruro CFTR. Al final de la incubación, el medio se recuperó y las células se solubilizaron en NaOH 1 N. La radiactividad se determinó utilizando un contador G (LKB). La cantidad total de 125I (en cpm a tiempo 0 se calculó como la suma de cpm contadas en cada muestra de 1 min más las cpm en la fracción de NaOH. La fracción de 125I intracelular inicial perdida durante cada punto de tiempo se determinó y las tasas de flujo de salida de 125I dependientes del tiempo se calcularon de acuerdo con Becq y col., (22) de
In(125It1/125It2)/(t1 -t2),
en la que
125It es el 125I intracelular a tiempo t;
y t1 y t2 son los puntos de tiempo sucesivos.
Las curvas se construyeron representando la tasa del flujo de salida de 125I en función del tiempo. Los datos se presentan como la media ± S.E. de n experimentos separados.
Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas utilizando la prueba t de Student cuando el valor de p fue inferior a 0,05.
Registros de fijación de voltaje en células enteras
La técnica para los registros de fijación de voltaje en la configuración de célula entera se ha descrito en otra parte (23,24). Las células transfectadas se sembraron de forma estable en placas Petri de plástico de 35 mm de cultivo celular que se montaron en la etapa de un microscopio invertido. Los experimentos de fijación de voltaje se realizaron a temperatura ambiente con un amplificador Axopatch 200A controlado por un ordenador a través de una interfaz digitada 1440 (AXON Instrumentos, EE.UU.). Las pipetas se sacaron de vidrio duro (Kimax 51) con un extractor micropipeta Setter y su punta se pulió con fuego. Los registros de corriente realizaron utilizando la configuración de fijación de voltaje perforado con nistatina. La solución madre de nistatina (50 mg / ml) se preparó a diario en DMSO. La solución madre se diluyó (1: 250) en la solución interna que después se sometió a ultrasonidos durante 1 minuto. La solución interna contenía lo siguiente (en mM) 131 NaCl, 2 MgCl2 y 10 Hepes-Na +, pH 7,3, ajustado con NaOH. La solución de baño contenía (en mM): 150 NaCl, 1 CaCl2, 1 MgCl2, 35 sacarosa y 10 Hepes-Na+, pH 7,3, ajustado con NaOH.
Las corrientes se registraron mediante la aplicación de pulsos de voltaje regulares de 60 mV de amplitud durante 1 segundo, a partir de un potencial de retención de de 0 mV, con un intervalo de 3 segundos.
Para establecer curvas I-V, pulsos regulares de tensión se interrumpieron por la serie de 9 saltos de tensión (de 1 segundo de duración cada uno), hacia los potenciales de membrana entre -100 y +80 mV. Las corrientes de Cl-CFTR se activaron con 200 µm de la sal de sodio de 8-(4-clorofeniltio)-AMPc (CPT-AMPc) más 100μM de 3-isobutil1-metilxantina (IBMX).
Cuando se alcanzó la máxima estimulación, las células se bañaron con 5 µM del de CFTR específico, CFTRinh-172, añadido a la solución de CPT-AMPc. Las corrientes de CFTR se definieron como las diferencias en las amplitudes de corriente registradas durante la estimulación máxima con CPT-AMPc y después de la inhibición por CFTRinh-172.
Mediciones de la diferencia de potencial nasal (NPD)
Se adoptó el procedimiento de medición de potencial nasal y se miniaturizó a partir de la técnica desarrollada por los inventores para niños pequeños (25). Se anestesió a ratones mediante una inyección intraperitoneal de ketamina (133 mg / kg; IMALGENE 1000, MERIAL, Francia) y xilazina (13,3 mg / kg; Rompun al 2 %, BayerPharma, Francia). Se colocó a los ratones en un tablero con inclinación de 45 ° y se colocó una almohadilla de papel debajo de la nariz para evitar sofocar a los ratones. Una aguja subcutánea estaba conectado a un electrodo de referencia de Ag+/AgCl por un puente de agar. Un catéter de polietileno de doble lumen (0,5 mm de diámetro) se insertó en una fosa nasal a 4 mm de profundidad. En una luz se perfundió una solución de Ringer (en mM: 140 NaCl, 6 KCl, 10 Hepes, 10 Glucosa, 1 MgCl2, 2 CaCl2, pH ajustado a 7,4 con NaOH) a 0,15 mL/h está conectado a un electrodo de Ag+/AgCl de medición. Los dos electrodos de Ag+/AgCl se conectaron a un voltímetro de alta impedancia (LOGAN Research Ltd, Reino Unido). En la segunda luz se prefundió una solución con la siguiente secuencia: (1) solución de Ringer, (2) solución de Ringer contiene amilorida (inhibidor de la conductancia de Na+, 100μM), solución de Ringer baja en cloruro (3), para desenmascarar las conductancias de Cl-(en mM: 140 gluconato sódico, 6 K gluconato, 10 Hepes, 10 Glucosa, 1 MgCl2, 6 gluconato de calcio, pH ajustado a 7,4 con NaOH), (4) Solución de Ringer baja en cloruro que contiene inhibidor de CFTR-172 (5 µM, Calbiochem, Alemania) para evaluar la participación de CFTR. Cada solución se perfundió al menos 3 minutos, y se necesitaron 30 segundos de estabilidad antes de realizar la perfusión. El potencial transepitelial estado estacionario, VTE, ΔVTEAmil (diferencia entre VTE y el potencial transepitelial registrado después de la perfusión de la solución que contiene amilorida), ΔVTEamilLowCl (diferencia entre VTE y el potencial transepitelial registrado después de la perfusión con la solución que contiene poco Cl-más amilorida) y ΔVTEamilLowClInh-172 (diferencia entre VTE y después de la adición del inhibidor de CFTR con la solución previa) fueron las medias de 30 valores registrados durante la estabilidad.
7
Ensayo de viabilidad celular MTT (26)
Para determinar la viabilidad celular se utilizó el ensayo típico MTT. Las células HeLa se cultivaron en una placa de 96 pocillos y se expusieron a concentraciones variables de compuestos de la invención durante 24 horas. Después del lavado, se introdujeron a continuación solución de MTT y medio. Después de la incubación, los cristales de
5 formazán resultantes se disolvieron en sulfóxido de dimetilo y la intensidad de la absorbancia se midió con un lector de microplacas a 570 nm.
El amarillo MTT se reduce a formazán púrpura en las células vivas. La absorbancia de esta solución de color puede cuantificarse mediante la medición a una longitud de onda determinada con un espectrofotómetro. Esta conversión puede estar directamente relacionado con el número de células viables (vivas).
10 Detección selectiva virtual -Identificación de compuestos moduladores
Una base de datos de un compuesto de bajo peso molecular se utilizó en el proceso de detección selectiva virtual como fuente de aciertos. Se usó el programa de acoplamiento molecular Dock 6.1 para analizar un espacio conformacional de moléculas pequeñas dentro de dos posibles sitios de unión en la superficie de la proteína. Posteriormente, todos los ligandos seleccionados y complejos enteros se minimizaron completamente en campo de
15 fuerza. En cada etapa se utilizó un conjunto de funciones de puntuación para la clasificación de los complejos potenciales y las moléculas apropiadas se seleccionaron para las pruebas experimentales.
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118208/NOP1.6/Pok 1c 2-[(3-nitrofenil)metilsulfanil]-3,7-dihidropurin-6-ona
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407882/NOP2.6/Pok 2f Ácido 2-[hidroxi(fenil)fosforil]etil-fenilfosfínico
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130813/NOP1.2/Pok1b 4-((6-cloro-2-metoxi-9-acridinil)amino)-2-((4-metil-1-piperazinil)metil)fenol
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Resultados
Efecto de fármacos sobre el flujo de salida de yoduro, I-
Para analizar la corrección del tránsito de ΔF508-CFTR y la función, los inventores evaluaron la permeabilidad a haluro por un ensayo macroscópico utilizando una metodología basada en la célula robotizada mediante la técnica de flujo de salida de I-. En la primera serie de experimentos, los potenciales efectos correctores se analizaron mediante un pretratamiento de 24 horas de células HeLa ΔF508-CFTR con todos los compuestos a 1μM, seguido de mediciones del flujo de salida de yoduro radiomarcado dependiente de AMPc. Los tratamientos con los compuestos 130813 y 118208 en el bolsillo 1 y 73100 y 407882 en el bolsillo 2 conducen a un aumento significativo de del flujo de salida de yoduro radiomarcado estimulado con AMPc (Fig. 1a), siendo el más potente 407882. A esta dosis baja (1 μM), el aumento del flujo de salida estimulado por AMPc fue menor que el observado usando 100 μM del conocido corrector miglustat (27). En la Figura 1b se muestran ejemplos de flujo de salida de I-después del tratamiento con cada uno de los cuatro compuestos activos. El flujo de salida de I-estimulado por AMPc se impidió por completo cuando los experimentos se realizaron en presencia del bloqueador de los canales de CFTR CFTRinh
172.
Los inventores analizaron también el efecto de los cuatro compuestos en un amplio intervalo de concentraciones y se determinó la CE50 para el compuesto del bolsillo 1 130 813, y dos compuestos del bolsillo 2 407882 y 73100 a 1 µM, 10μM y 844nM, respectivamente (Fig. 1c). La CE50 para el bolsillo 1 -118208 no se pudo determinar con precisión ya que no se alcanzó el máximo flujo de salida de yoduro incluso a 100 μM (Fig. 1d). En particular, el efecto del compuesto 407882 se podría multiplicar por 3 cuando se utiliza a 10μM, alcanzando un flujo de salida estimulado comparable al valor observado para la WT-CFTR (Fig. 2).
Para probar si los compuestos presentan actividad potenciadora independiente de su efecto sobre el tránsito de CFTR, los inventores analizaron el lujo de salida de yoduro en las células WT-CFTR HeLa no tratadas. Los compuestos se añadieron junto con forskolina y sus efectos se compararon con los de forskolina sola o forskolina más genisteína. A diferencia de la genisteína, todas las moléculas analizadas indujeron un flujo de salida de I-mayor que el de forskolina sola (Fig. 2). La potenciación también se analizó en células HeLa ΔF508-CFTR tratadas durante 2 horas con miglustat para rescatar ΔF508-CFTR. El flujo de salida de I-se estimuló con forskolina sola, con forskolina más genisteína o con forskolina más los diferentes compuestos. Como se muestra en la figura 3, solamente la genisteína fue capaz de aumentar el flujo de salida, lo que demuestra la ausencia de actividad de potenciación por los fármacos de los inventores.
Efecto de los fármacos sobre la maduración de CFTR
La eficacia de los cuatro compuestos como correctores para el tránsito de ΔF508-CFTR se validó adicionalmente por inmunotransferencia. Los inventores han asumido que la detección de una banda C totalmente glicosilada sugiere un procesamiento correcto de ΔF508-CFTR. Una inmunotransferencia representativa se muestra en la Figura 4a. Los anticuerpos anti-CFTR detectan dos bandas de proteínas derivadas de células-WT CFTR, (línea WT-CFTR en la (Figura 4a). La banda difusa de aproximadamente 170kDa (banda C) corresponde a una proteína madura totalmente glicosilada que se ha procesado a través del aparato de Golgi. La banda de debajo de aproximadamente 145 kDa corresponde a la proteína del núcleo glucosilada inmadura situada en el retículo endoplásmico. En las células que expresan ΔF508-CFTR, solo la proteína inmadura es detectable (línea ΔF508 en la Figura 4a). La banda C era claramente detectable en las células tratadas con 1 μM de compuesto 407882 en comparación con las células no tratadas, mientras que la señal en 170 kDa no fue diferente del tratamiento de DMSO en las células tratadas con 1 μM de los compuestos 118208, o 130813 o muy ligeramente mayor en las células tratadas con 1 μM del compuesto 73100. Ninguno de los compuestos modificó la expresión de proteína total. La abundancia relativa de CFTR madura, expresada como la relación entre la banda C y la banda C + banda B se muestra en la Figura 4b. Solo el compuesto 407882 aumentó significativamente la abundancia relativa de CFTR madura.
Efecto de los fármacos sobre la inmunolocalización de CFTR
La Figura 4c muestra la tinción típica de CFTR en la membrana plasmática en células HeLa que expresan WT-CFTR, mientras que ΔF508-CFTR se encontró en todo el citoplasma. El tratamiento de las células durante 24 horas con 1 μM de 407882dio lugar a una clara tinción de CFTR en o cerca de la membrana plasmática, lo que indica rescate del tránsito de ΔF508-CFTR de acuerdo con los experimentos de inmunotransferencia. Cuando se trató a las células con cada uno de los otros tres compuestos, 118208, 73100 o 130813, se observó una tinción por puntos discreta en la membrana plasmática en una pequeña fracción de las células, como se ilustra para el compuesto 118208 en la Figura 4c.
Efecto combinado de la unión de compuestos a diferentes bolsillos
Si dos compuestos son capaces de corregir ΔF508-CFTR mediante la unión a la misma conformación de la proteína pero en diferentes cavidades de la superficie, sus efectos podrían ser aditivos o sinérgicos. Los inventores analizaron esta hipótesis mediante dos tipos independientes de ensayos, es decir flujo de salida de yoduro y fijación de voltaje. Los resultados de los ensayos de permeabilidad al yoduro (Fig. 5) mostraron que el tratamiento combinado de las células con los compuestos 118208 más 407882 (Fig. 5a) o con 118208 más 73100 (Fig. 5b) a 1
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2816035A3 (en) * 2010-09-14 2015-02-25 Instytut Biochemii I Biofizyki Polskiej Akademii Nauk Compounds as modulators of a mutant CFTR protein and their use for treating diseases associated with CFTR protein malfunction
ITMI20122065A1 (it) 2012-12-03 2014-06-04 Univ Padova Uso dei correttori del cftr nel trattamento delle patologie del muscolo striato
EA034922B1 (ru) 2013-03-15 2020-04-07 Глобал Блад Терапьютикс, Инк. Соединения и их применения для модуляции гемоглобина
EA202092627A1 (ru) 2013-11-18 2021-09-30 Глобал Блад Терапьютикс, Инк. Соединения и их применения для модуляции гемоглобина
SG11201802932VA (en) * 2015-10-09 2018-05-30 Abbvie Sarl N-sulfonylated pyrazolo[3,4-b]pyridin-6-carboxamides and method of use
US20190391160A1 (en) * 2016-04-29 2019-12-26 Institut Pasteur Methods and compositions for modifying cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activity
WO2017196843A1 (en) * 2016-05-09 2017-11-16 Proteostasis Therapeutics, Inc. Methods of identifying cftr modulators
US11191747B2 (en) 2019-04-03 2021-12-07 Aligos Therapeutics, Inc. Pyrrole compounds
WO2020248075A1 (en) * 2019-06-12 2020-12-17 The Governors Of The University Of Alberta Targeting dna repair in tumor cells via inhibition of ercc1-xpf
BR112022000325A2 (pt) 2019-07-11 2022-03-15 Escape Bio Inc Indazois e azaindazois como inibidores de lrrk2

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3770514A (en) * 1972-06-08 1973-11-06 American Cyanamid Co Chemical treatment of metal
US5434086A (en) * 1989-08-22 1995-07-18 The Regents Of The University Of Michigan Method of testing potential cystic fibrosis treating compounds using cells in culture
US5948814A (en) 1997-02-20 1999-09-07 The Curators Of The University Of Missouri Genistein for the treatment of cystic fibrosis
GB9909135D0 (en) * 1999-04-22 1999-06-16 Univ Wales Medicine Cystic fibrosis medicaments
GB2359078A (en) * 2000-02-11 2001-08-15 Astrazeneca Uk Ltd Pharmaceutically active pyrimidine derivatives
GB0017083D0 (en) 2000-07-13 2000-08-30 Univ Bristol Activation of the cystic fibrosis transmembrane conductive regulator chloride channel
US7939558B2 (en) 2004-06-04 2011-05-10 The Regents Of The University Of California Compounds having activity in increasing ion transport by mutant-CFTR and uses thereof
CA2810655C (en) * 2004-06-24 2013-12-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
WO2006015369A2 (en) * 2004-08-03 2006-02-09 The Johns Hopkins University Assays for identification of topoisomerase inhibitors
CA2600869A1 (en) 2005-03-18 2006-09-28 The Regents Of The University Of California Compounds having activity in correcting mutant-cftr processing and uses thereof
CN101374849A (zh) * 2005-12-24 2009-02-25 沃泰克斯药物股份有限公司 作为abc转运蛋白调控剂的喹啉-4-酮衍生物
US20100047783A1 (en) * 2006-06-20 2010-02-25 El-Diery Wafik S Small molecule modulators of p53 family signaling
EP2826778B1 (en) * 2006-11-03 2017-09-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azaindole derivatives as CFTR modulators
WO2008122038A1 (en) * 2007-04-02 2008-10-09 President And Fellows Of Harvard College Regulating autophagy
US20110177999A1 (en) * 2007-08-09 2011-07-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Therapeutic Combinations Useful in Treating CFTR Related Diseases
WO2009051910A1 (en) 2007-10-16 2009-04-23 The Regents Of The University Of California Compounds having activity in increasing ion transport by mutant-cftr and uses thereof
US8389736B2 (en) 2007-10-16 2013-03-05 The Regents Of The University Of California Compounds having activity in correcting mutant-CFTR processing and uses thereof
WO2010059215A1 (en) * 2008-11-20 2010-05-27 Glsynthesis Inc. Novel antithrombotic diadenosine tetraphosphates and related analogs
EP2816035A3 (en) * 2010-09-14 2015-02-25 Instytut Biochemii I Biofizyki Polskiej Akademii Nauk Compounds as modulators of a mutant CFTR protein and their use for treating diseases associated with CFTR protein malfunction

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