ES2547348T3 - Tratamiento de enfermedades hiperproliferativas con un superantígeno en combinación con un agente citostático - Google Patents

Tratamiento de enfermedades hiperproliferativas con un superantígeno en combinación con un agente citostático Download PDF

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Abstract

El uso de un superantígeno dirigido a tumores que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 7 y un fármaco citostático para la producción de una preparación farmacéutica para reducir la respuesta de un anticuerpo al superantígeno dirigido a tumores en un mamífero en comparación con la administración del superantígeno solo, a la vez que no se inhibe o incluso se potencia la respuesta de células T del superantígeno dirigido a tumores en el mamífero, donde dicha preparación farmacéutica es para el tratamiento del cáncer.

Description

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Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a preparaciones farmacéuticas para tratar a mamíferos, por ejemplo, seres humanos, mediante la administración de un superantígeno y un agente anticancerígeno de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas. Los inventores han descubierto que la administración combinada de superantígenos (que puede denominarse una forma de inmunoterapia) con agentes anticancerígenos, tales como fármacos citostáticos, da como resultado un efecto anticáncer potenciado para ambos agentes, en comparación con cuando se administra cada agente por separado. Además, esta terapia combinada da como resultado una respuesta de anticuerpos reducida para el superantígeno, en comparación con la administración del superantígeno solo, que ayuda al tratamiento, especialmente en los casos donde se desea administrar superantígenos varias veces a lo largo de un ciclo de tratamiento.
I. Definiciones
A menos que se defina de otro modo, los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente una persona normalmente experta en la técnica a la cual pertenece la presente invención. Para los fines de la presente invención, se definen a continuación los siguientes términos.
Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, "un", "una" o "uno" pueden significar uno o más. Tal como se usa en el presente documento conjuntamente con la palabra "comprende", las palabras "un", "una" o "uno" significan uno o más de uno. Tal como se usa en el presente documento, "otro" significa al menos un segundo o más. Por ejemplo, una afirmación, tal como "tratamiento con un superantígeno y un agente citostático", ya se encuentre en la memoria descriptiva o en las reivindicaciones de la presente solicitud puede significar tratamiento: con un superantígeno y un agente anticancerígeno; con más de un superantígeno y un agente anticancerígeno; con un superantígeno y más de un agente anticancerígeno; con más de un superantígeno y más de un agente anticancerígeno; o con varias otras combinaciones de las mismas.
Tal como se usa en el presente documento, el término "anticuerpo" se refiere a una molécula de inmunoglobulina, que es capaz de unirse específicamente a un objeto específico, tales como, por ejemplo, un epítopo o un antígeno. Tal como se usa en el presente documento, se entiende que un anticuerpo se refiere ampliamente a cualquier agente de unión inmunogénica, tal como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, así como a anticuerpos sintéticos y modificados, así como a anticuerpos de o derivados de diversos animales, tales como, pero sin limitación, seres humanos, ratones y llamas. Los anticuerpos pueden ser inmunoglobulinas intactas derivadas de fuentes naturales o de fuentes recombinantes y pueden ser porciones inmunoactivas de inmunoglobulinas intactas. Los anticuerpos en la presente invención pueden existir en una diversidad de formas, incluyendo, por ejemplo, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales, Fv, Fab y F(ab)2, así como anticuerpos monocatenarios, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y anticuerpos completamente humanizados (Bird et al., 1988).
Tal como se usa en el presente documento, los términos "enfermedad", "trastorno" y "afección" describen cualquier afección o enfermedad de un mamífero, por ejemplo, pero sin limitación, un ser humano y se pretende que tengan una cobertura extensa, abarcando todos los tipos de enfermedades y trastornos, incluyendo, pero sin limitación, cánceres, neoplasias y otros tipos de enfermedades y trastornos hiperproliferativos.
Tal como se usa en el presente documento, los términos "agente" y "fármaco" pueden ser intercambiables. Por ejemplo, en los casos donde sea evidente a partir del contexto, las expresiones "agentes citostáticos" o "agentes anticancerígenos" pueden tener el mismo significado que las expresiones "fármacos citostáticos" y "fármacos anticancerígenos", respectivamente.
Tal como se usa en el presente documento, los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen la afección fisiológica en mamíferos se caracteriza típicamente por crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero sin limitación, melanoma, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o neoplasias linfoides malignas. Los ejemplos de cánceres más particulares incluyen cáncer de células escamosas (por ejemplo, cáncer de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón, incluyendo cáncer microcítico de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma del pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de cuello de útero, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, cáncer de endometrio o carcinoma uterino, carcinoma de las glándulas salivares, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer vulvar, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma del pene, así como cáncer de cabeza y cuello.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "enfermedad hiperproliferativa" se define como una enfermedad que es el resultado de una hiperproliferación de células. Las enfermedades hiperproliferativas ejemplares incluyen, pero sin limitación, cáncer o enfermedades autoinmunes. Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, cánceres, tales como melanoma, de pulmón no microcítico, microcítico de pulmón, pulmón, hepatocarcinoma, retinoblastoma, astrocitoma, glioblastoma, de encías, de lengua, leucemia, neuroblastoma, de
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principios activos usados para poner en práctica la presente invención para el tratamiento terapéutico de neoplasias (por ejemplo, cáncer) varía dependiendo del modo de administración, de la edad, del peso corporal y de la salud general del sujeto. La determinación de la cantidad adecuada y de la pauta de dosificación por parte de un médico o veterinario tratante se encuentra dentro de las capacidades de la técnica. Dichas cantidades pueden citarse como cantidades "eficaces". Estos términos incluyen, pero sin limitación, situaciones sinérgicas, tales como aquellas presentadas y descritas en la presente invención en las que un solo agente individualmente, tal como un superantígeno o un agente anticancerígeno, tal como un fármaco quimioterapéutico, pueden actuar débilmente o en absoluto, pero que cuando se combinan entre sí, por ejemplo, pero sin limitación, mediante dosificación secuencial, dos o más agentes actúan para producir un resultado sinérgico.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "inhibe el crecimiento de una neoplasia" se refiere a frenar, detener o revertir de manera medible la velocidad de crecimiento de la neoplasia o células neoplásicas in vitro o in vivo. De manera deseable, la velocidad de crecimiento se frena en un 20 %, 30 %, 50 % o 70 % o más, según se determina usando un ensayo adecuado para la determinación de las velocidades de crecimiento celular. Típicamente, la reversión de la velocidad de crecimiento se logra iniciando o acelerando los mecanismos necróticos
o apoptóticos de la muerte celular en células neoplásicas, dando como resultado una reducción de una neoplasia.
Tal como se usa en el presente documento, los términos "variante", "variantes", "modificado", "alterado", "mutado" y similares se refieren a proteínas o péptidos y/u otros agentes y/o compuestos que difieren de una proteína, péptido u otro compuesto de referencia. Las variantes, en este sentido, se describen a continuación y en otras partes en la presente divulgación en más detalle. Por ejemplo, los cambios en la secuencia de ácido nucleico de la variante pueden ser silentes, por ejemplo, pueden no alterar los aminoácidos codificados por la secuencia de ácido nucleico. En los casos donde las alteraciones se limiten a cambios silentes de este tipo, una variante codificará un péptido con la misma secuencia de aminoácidos que el péptido de referencia. Los cambios en la secuencia de ácido nucleico de la variante puede alterar la secuencia de aminoácidos de un péptido codificado por la secuencia de ácido nucleico de referencia. Dichos cambios de ácido nucleico pueden dar lugar a sustituciones, adiciones, eliminaciones, fusiones y truncamientos de aminoácidos en el péptido codificado por la secuencia de referencia, tal como se discute a continuación. En general, las diferencias en las secuencias de aminoácidos se limitan de tal forma que las secuencias de la referencia y la variante son estrechamente similares en general y, en muchas regiones, idénticas. Un péptido variante y de referencia puede diferir en la secuencia de aminoácidos en una o más sustituciones, adiciones, eliminaciones, fusiones y truncamientos, que pueden estar presentes en cualquier combinación. Una variante también puede ser un fragmento de un péptido de la invención que difiere de una secuencia peptídica de referencia por ser más corta que la secuencia de referencia, tal como mediante una eliminación terminal o interna. Otra variante de un péptido de la invención también incluye a un péptido que mantiene esencialmente la misma función o actividad que dicho péptido. Una variante también puede ser, pero sin limitación: (i) una en la que uno o más de los restos de aminoácidos se sustituyen con un resto de aminoácido conservado o no conservado y dicho resto de aminoácido sustituido puede ser o no uno codificado por el código genético o (ii) uno en el que uno o más de los restos de aminoácidos incluye un grupo sustituyente o (iii) uno en el que el péptido maduro se fusiona con otro compuesto, tal como un compuesto para aumentar la semivida del péptido (por ejemplo, polietilenglicol) o (iv) uno en el que los aminoácidos adicionales se fusionan al péptido maduro, tal como una secuencia líder o secretoria
o una secuencia que se emplea para la purificación del péptido maduro. Las variantes pueden producirse mediante técnicas de mutagénesis, y/o mecanismos de alteración, tales como alteraciones químicas, fusiones, adjuntos y similares, incluyendo aquellos aplicados a ácidos nucleicos, aminoácidos, células u organismos, y/o pueden producirse por medios recombinantes. Las variantes, incluyendo todas las de aquellos definidos anteriormente, se encuentran dentro del ámbito de los expertos en la materia, por ejemplo, a partir de las enseñanzas en el presente documento y de la técnica.
Tal como se usa en el presente documento, las expresiones "quimioterapia", "quimioterapéutico", "fármaco o agente quimioterapéutico", "fármaco o agente anticancerígeno", "agente o fármaco antiproliferativo", "agente o fármaco citotóxico", "agente o fármaco citocida" y "agente o fármaco citostático" incluyen cualquier cosa que sola o en combinación que tenga cualquier efecto en una enfermedad o afección hiperproliferativa en un mamífero, tal como un ser humano. Estos términos incluyen, pero sin limitación, agentes químicos, biológicos y físicos que actúan directamente sobre (por ejemplo, afecta) una célula hiperproliferativa (por ejemplo, cáncer o tumor) o en la vascularización de una hiperproliferación. En este contexto, el término "agente" incluye, pero sin limitación, un fármaco. Los agentes quimioterapéuticos (por ejemplo, fármacos) incluyen, pero sin limitación, agentes citostáticos, agentes citotóxicos (citocidas) y agentes antiangiogénesis. Las expresiones "quimioterapia", "quimioterapéutico", "fármaco o agente quimioterapéutico", "fármaco o agente anticancerígeno", "agente o fármaco antiproliferativo", "agente o fármaco citotóxico", "agente o fármaco citocida" y "agente o fármaco citostático", tal como se usan en el presente documento, no incluyen moduladores inmunitarios (agentes que actúan modulando el sistema inmunitario (de manera distinta a la acción citotóxica o citostática), tal como interleucina 2 (IL-2) y linomida.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "dosificación secuencial" y la terminología relacionada se refiere a la administración de al menos un superantígeno, con al menos un agente anticancerígeno, por ejemplo, pero sin limitación, un fármaco quimioterapéutico. Esta definición incluye dosis escalonadas de estos agentes (es decir, escalonadas en el tiempo) y variaciones en las cantidades de dosificación. Esto incluye que un agente se administre antes, solapante con (parcial o totalmente) o después de la administración de otro agente. Este término
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generados por una respuesta de anticuerpos en el animal tratado. Una realización para lograr este efecto se muestra en el régimen de tratamiento esquemático de la FIG. 1, en el que un agente quimioterapéutico, tal como un fármaco citostático, se administra brevemente después de la administración de cada dosis de TTS. Inesperadamente, se ha descubierto que dicha administración de un fármaco citotóxico, por ejemplo, inhibe la generación de una respuesta de células B/anticuerpos hacia la molécula de TTS, a la vez que no se inhibe o incluso se potencia, la respuesta inmunitaria de células T asociada con la terapia con TTS.
La FIG. 2 muestra un esquema de una realización de la presente invención. Por ejemplo, uno o más tratamientos de TTS van seguidos directamente por uno o más tratamientos de un agente quimioterapéutico, tal como un agente citostático. En la presente invención, por ejemplo, se ha descubierto inesperadamente que la administración, tal como administración sistémica, de un agente citostático, por ejemplo, poco tiempo después de la administración de TTS potencia, por ejemplo, de manera sinérgica, el efecto antitumoral del TTS y del agente citostático. Por ejemplo y tal como se muestra en la FIG. 1B, la presente invención ha demostrado que una realización de administración preferida de la presente invención es la administración de TTS en un ciclo de cuatro (4) días seguido de la administración de un agente citostático en el día cinco (5). Este ciclo de tratamiento combinado puede repetirse más de una vez, por ejemplo y tal como se muestra en la FIG. 2, mediante una segunda administración de TTS en los días 22-25 y la administración de un agente citostático en el día 26. Este ciclo de administración conjunta puede continuarse. Además, se muestra otro ejemplo en la FIG. 1C y/o en la FIG. 1D en la que la primera administración de TTS es bien antes o después de la administración de un agente citostático. Si el agente citostático se administra primeramente o antes del TTS, entonces se comienza con el TTS después de que la concentración eficaz del agente citostático se reduzca o caiga en el sujeto por debajo de un nivel inhibidor funcional. Este periodo de tiempo puede ser de aproximadamente 24 horas o menos, dependiendo del agente citostático. Por lo tanto, después de este periodo de tiempo, puede iniciarse la administración del TTS. El TTS puede administrarse por vía sistémica durante un periodo de tiempo para permitir la producción suficiente de células efectoras, pudiendo ser dicho periodo de tiempo de aproximadamente 1-2 días. Después de este periodo de tiempo, entonces puede producirse una administración simultánea del agente citostático y el TTS, tal como se muestra en la FIG. 1C y en la FIG. 1D.
Como ya se ha discutido anteriormente, también se ha descubierto en la presente invención que dicha combinación de superantígeno, tal como TTS y la administración de un fármaco citostático (por ejemplo, a dosis completa, por administración sistémica), da como resultado una inhibición inesperada en la generación de una respuesta de anticuerpos para el superantígeno (TTS), que, por lo tanto, da como resultado la capacidad inesperada para tratar a un paciente, tal como un ser humano, con múltiples rondas de superantígeno, (TTS) a la vez que se tiene una posibilidad reducida o eliminada de que el paciente genere una respuesta de anticuerpos hacia el superantígeno (TTS). Es inesperado que, por ejemplo, el tratamiento con el superantígeno (TTS) en combinación con un fármaco citostático, pueda inhibir la respuesta de células B/generadora de anticuerpos a la vez que no se inhibe o incluso se potencia, la respuesta de células T/antitumoral del superantígeno (TTS).
En ejemplos ilustrativos, el TTS en las FIG. 1 y 2 puede ser, por ejemplo, pero sin limitación, C215Fab-SEA (SEC ID Nº 5; referencia) 5T4Fab-SEA/E-120 (SEC ID Nº 7; de acuerdo con la invención) o 5T4Fab-SEAD227A (SEC ID Nº 6; referencia) administrado por vía sistémica, por ejemplo, mediante administración intravenosa, el agente citostático puede ser, por ejemplo, pero sin limitación, gemcitabina, docetaxel, cisplatino o pemetrexed, administrado por vía sistémica, por ejemplo, mediante administración intravenosa y en la dosis "completa" (es decir, la dosis administrada normalmente cuando el agente se administra solo) y el TTS y el agente citostático pueden administrarse a un animal, tal como un mamífero, tal como un ser humano.
III. Superantígenos
En todas las realizaciones de la invención, el superantígeno es como se define en las reivindicaciones.
Los superantígenos son proteínas bacterianas, proteínas virales y moléculas humanas modificadas por ingeniería genética, capaces de activar a los linfocitos T, por ejemplo, a concentraciones picomolares. Los superantígenos se caracterizan por su capacidad para activar a grandes subconjuntos de linfocitos T. Se unen al complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) sin procesarse. Los superantígenos se unen a regiones conservadas fuera del surco de unión a antígeno en las moléculas del CMH de clase II, evitando la mayor parte del polimorfismo en el sitio de unión a péptidos convencional. Los superantígenos se unen al receptor de células T (TCR) en la cadena Vβ, en vez de unirse a los bucles hipervariables del receptor de células T. Los ejemplos de superantígenos bacterianos incluyen, pero sin limitación, enterotoxina estafilocócica (SE), exotoxina de Streptococcus pyogenes (SPE), toxina del síndrome de choque séptico de Staphylococcus aureus (TSST-1), exotoxina mitogénica estreptocócica (SME), superantígeno estreptocócico (SSA), enterotoxina A estafilocócica (SEA) y enterotoxina E estafilocócica (SEE).
Las secuencias polinucleotídicas que codifican muchos superantígenos se han aislado y clonado y los superantígenos expresados a partir de estas secuencias polinucleotídicas se han usando en terapia anticáncer. Los superantígenos expresados por estas secuencias polinucleotídicas pueden ser superantígenos de tipo silvestre, superantígenos modificados o superantígenos de tipo silvestre o modificados conjugados o fusionados con restos que persiguen a dianas. Además, tal como se explica en las siguientes patentes y solicitudes de patente de Estados Unidos, se conoce en la técnica que los superantígenos pueden administrarse a un mamífero, tal como un ser
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humano, directamente, por ejemplo, mediante inyección o pueden administrarse, por ejemplo, mediante exposición de la sangre de un paciente al superantígeno fuera del cuerpo, o, por ejemplo, colocando un gen que codifica a un superantígeno dentro de un mamífero que va a tratarse (por ejemplo, mediante métodos de terapia génica conocidos y vectores tal como, por ejemplo, mediante células que contienen y son capaces de expresar, el gen) y expresar el gen en el mamífero. Otras rutas de administración de superantígenos se incluyen dentro del alcance de esta invención.
Los ejemplos de superantígenos y su administración a mamíferos pueden encontrarse en las siguientes patentes y solicitudes de patente de Estados Unidos: Patentes de Estados Unidos Nº 5.858.363, 6.197.299, 6.514.498, 6.713.284, 6.692.746, 6.632.640, 6.632.441, 6.447.777, 6.399.332, 6.340.461, 6.338.845, 6.251.385, 6.221.351, 6.180.097, 6.126.945, 6.042.837, 6.713.284, 6.632.640, 6.632.441, 5.859.207, 5.728.388, 5.545.716, 5.519.114, las Solicitudes de Patente de Estados Unidos con Nº de serie 08/765.695 (presentada el 25 de julio de 1997), 10/283.838 (presentada el 20 de octubre de 2002) (Publicación de Solicitud de Estados Unidos Nº 20030092894), 09/463.470 (presentada el 21 de enero de 2000) y 09/900.766 (presentada el 6 de julio de 2001) (Publicación de Solicitud de Estados Unidos Nº 20030039655), Solicitudes de Patente de Estados Unidos Nº 20040142464, 20030157113, 20030124142, 20030036644, 20030009015, 20020177551, 20020141981, 20020115190, 20020086813, 20020058032, 20020051765, 20020039585, 20020028211, 20020018781, 20010046501, 60/378.988, 60/389.366, 60/406.697, 60/406.750, 60/415.310, 60/415.400 y 60/438.686 y la Publicación Internacional PCT número WO/03/094846. Tal como se define en el presente documento, el término "superantígeno (o superantígenos)" incluye superantígenos de tipo silvestre y modificados así como superantígenos dirigidos (por ejemplo, conjugados o fusionados). Más preferentemente, la presente invención se refiere a superantígenos dirigidos (por ejemplo, conjugados o fusionados). La definición del término "superantígeno (o superantígenos)", tal como se usa en el presente documento, abarca cualquier molécula (o moléculas) capaz de interactuar con un TCR para activar a un subconjunto de células T.
A. Superantígenos modificados
Dentro del alcance de esta invención, los superantígenos pueden modificarse a partir del tipo silvestre de virtualmente cualquier manera. Los ejemplos de realizaciones preferidas incluyen modificaciones que mantienen o potencian la capacidad de un superantígeno para estimular a los linfocitos T y pueden, por ejemplo, alterar otros aspectos del superantígeno, tales como, por ejemplo, su serorreactividad o inmunogenicidad. Los superantígenos modificados incluyen moléculas sintéticas que tienen actividad de superantígeno (es decir, la capacidad para activar a subconjuntos de linfocitos T).
Por lo tanto los presentes inventores contemplan que pueden efectuarse diversos cambios en las secuencias polinucleotídicas que codifican a un superantígeno sin una pérdida apreciable de su utilidad o actividad biológica, tal como se discute a continuación. La actividad es la inducción de la respuesta de células T para dar como resultado citotoxicidad de las células tumorales. Además, la afinidad del superantígeno por la molécula de la clase II del CMH puede disminuirse con efectos mínimos en la citotoxicidad del superantígeno. Esto, por ejemplo, ayuda a reducir la toxicidad que de otro modo puede suceder si un superantígeno mantiene su capacidad de tipo silvestre para unirse a antígenos de la clase II del CMH (tal como en dicho caso, células que expresan la clase II, tales como células madre inmunitarias, podrían verse afectadas por la respuesta al superantígeno).
Las técnicas para modificar los superantígenos (por ejemplo, polinucleótidos y polipéptidos), incluyendo para la preparación de superantígenos sintéticos, se conocen bien en la técnica e incluyen, por ejemplo, mutagénesis por PCR, mutagénesis por barrido de alanina y mutagénesis de sitio específico (Patentes de Estados Unidos 5.220.007; 5.284.760; 5.354.670; 5.366.878; 5.389.514; 5.635.377; y 5.789.166).
En algunas realizaciones, puede modificarse un superantígeno de tal forma que se reduzca su serorreactividad en comparación con el tipo silvestre, pero se mantiene o se potencia su capacidad para activar a las células T en relación al tipo silvestre. Una técnica para preparar dichos superantígenos modificados es mediante la sustitución de determinados aminoácidos en determinadas regiones de un superantígeno a otro. Esto es posible porque muchos superantígenos, por ejemplo, pero sin limitación, SEA, SEE, SED comparten homología de secuencia en determinadas áreas que se han relacionado con determinadas funciones (Marrack y Kappler, 1990). Por ejemplo, en determinadas realizaciones de la presente invención, un superantígeno que tiene una respuesta de inducción de la activación de células T deseada, pero una serorreactividad no deseada, se modifica de tal forma que el superantígeno resultante mantiene su capacidad de activación de células T y aun así tiene serorreactividad reducida.
Los expertos en la materia saben y entienden que los sueros de seres humanos contienen normalmente varios títulos de anticuerpos contra superantígenos. Para los superantígenos estafilocócicos, por ejemplo, los títulos relativos son TSST-1 > SEB > SEC-1 > SE3 > SEC2 > SEA > SED > SEE. Como puede observarse, la serorreactividad de, por ejemplo, SEE (enterotoxina estafilocócica E) es menor que la de, por ejemplo, SEA (enterotoxina estafilocócica A). Basándose en estos datos, un experto en la materia preferirá administrar un superantígeno de título bajo, tal como, por ejemplo, SEE, en lugar de un superantígeno de un título mayor, tal como, por ejemplo, SEB (enterotoxina estafilocócica B). Sin embargo, como también han descubierto los presentes
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que puedan efectuarse diversos cambios en la secuencia de genes y proteínas divulgadas en el presente documento, a la vez que se cumplen los objetivos de la presente invención.
En términos de equivalentes funcionales, los expertos en la materia entienden que, de manera inherente en la definición de una proteína y/o polinucleótido "equivalente biológicamente funcional", está el concepto de que hay un límite en cuanto al número de cambios que pueden efectuarse en una porción definida de la molécula a la vez que se mantiene una molécula con un nivel aceptable de actividad biológica equivalente. Los equivalentes biológicamente funcionales se definen por lo tanto en el presente documento como aquellas proteínas (y polinucleótidos) en que pueden sustituirse aminoácidos (o codones) seleccionados. La actividad funcional es la inducción de la respuesta de células T para dar como resultado citotoxicidad de las células tumorales. Además, la afinidad del superantígeno por la molécula de la clase II del CMH se reduce con efectos mínimos en la citotoxicidad del superantígeno.
En general, cuanto más corta sea la molécula, podrán efectuarse menos cambios en la molécula a la vez que se mantiene la función. Los dominios más largos pueden tener un número intermedio de cambios. La proteína de longitud completa tendrá una tolerancia mayor para un número mayor de cambios. Sin embargo, tiene que apreciarse que determinadas moléculas o dominios que son elevadamente dependientes de su estructura tolerarán muy poca o ninguna modificación.
Las sustituciones de aminoácidos se basan generalmente en la similitud relativa de los sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido, por ejemplo, su hidrofobicidad, hidrofilidad, carga, tamaño, y/o similares. Un análisis del tamaño, forma y/o tipo de sustituyentes de cadena lateral de aminoácido revela que la arginina, lisina y/o histidina son todos restos cargados positivamente; que la alanina, glicina y/o serina son todos de un tamaño similar; y/o que la fenilalanina, triptófano y/o tirosina tienen todos una forma generalmente similar. Por lo tanto, basándose en estas consideraciones, la arginina, lisina y/o histidina; la alanina, glicina y/o serina; y/o la fenilalanina, triptófano y/o tirosina; se definen en el presente documento como equivalentes biológicamente funcionales.
Para efectuar cambios más cuantitativos, puede tenerse en cuenta el índice hidropático de los aminoácidos. Se ha asignado un índice hidropático a cada aminoácido basándose en sus características de hidrofobicidad y/o carga, siendo estas: isoleucina (+4,5); valina (+4,2); leucina (+3,8); fenilalanina (+2,8); cisteína (+2,5); metionina (+1,9); alanina (+1,8); glicina (-0,4); treonina (-0,7); serina (-0,8); triptófano (-0,9); tirosina (-1,3); prolina (-1,6); histidina (3,2); glutamato (-3,5); glutamina (-3,5); aspartato (-3,5); asparagina (-3,5); lisina (-3,9); y/o arginina (-4,5).
La importancia del índice hidropático de aminoácidos para conferir una función biológicamente interactiva en una proteína se entiende generalmente bien en la técnica (Kyte y Doolittle, 1982). Se sabe que pueden sustituirse determinados aminoácidos por otros aminoácidos que tienen un índice hidropático y/o puntuación similar y/o que aún mantienen una actividad biológica similar. Al efectuar cambios basados en el índice hidropático, se prefiere la sustitución de aminoácidos cuyos índices hidropáticos sean de ± 2, se prefieren particularmente aquellos que sean de ± 1, y/o son aún más preferidos aquellos que sean de ± 0,5.
También se entiende en la técnica que la sustitución de aminoácidos similares puede efectuarse de manera eficaz basándose en la hidrofilidad, particularmente en los casos donde la proteína y/o péptido equivalente biológicamente funcional creado de este modo esté previsto para su uso en realizaciones inmunológicas, como en determinadas realizaciones de la presente invención. La Patente de Estados Unidos 4.554.101, afirma que la mayor hidrofilidad media local de una proteína, regida por la hidrofilidad de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con su serorreactividad y/o antigenicidad, es decir, con una propiedad biológica de la proteína.
Tal como se detalla en la Patente de Estados Unidos 4.554.101, se han asignado los siguientes valores de hidrofilidad a los restos de aminoácidos: arginina (+3,0); lisina (+3,0); aspartato (+3,0 ± 1); glutamato (+3,0 ± 1); serina (+0,3); asparagina (+0,2); glutamina (+0,2); glicina (0); treonina (-0,4); prolina (-0,5 ± 1); alanina (-0,5); histidina (-0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); leucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5); triptófano (-3,4). Al efectuar cambios basándose en valores de hidrofilidad similares, se prefiere la sustitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofilidad sean de ± 2, se prefieren particularmente aquellos que sean de ±, y/o son aún más preferidos aquellos que sean de ± 0,5.
2. Aminoácidos alterados
La presente invención, en muchos aspectos, se basa en la síntesis de péptidos y polipéptidos en células, mediante la transcripción y traducción de polinucleótidos adecuados. Estos péptidos y polipéptidos incluirán los vente aminoácidos "naturales" y modificaciones postraduccionales de los mismos. Sin embargo, la síntesis peptídica in vitro permite el uso de aminoácidos modificados y/o no habituales. A continuación en el presente documento se proporciona una tabla (Tabla 1) ejemplar, pero no limitante, de aminoácidos modificados y/o no habituales.
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Los ejemplos representativos de células hospedadoras adecuadas incluyen células bacterianas, tales como estreptococos, estafilococos, E. coli, Streptomyces y células de Bacillus subtilis; células fúngicas, tales como células de levaduras y células de Aspergillus; células de insecto, tales como células S2 de Drosophila y células Sf9 de Spodoptera; células animales, tales como células CHO, COS, HeLa, C127, 3T3, BHK, 293 y células de melanoma de Bowes.
Los ejemplos de sistemas de producción para superantígenos se encuentran, por ejemplo, en la Solicitud de Patente de Estados Unidos con Nº de Serie 09/463,470 (presentada el 21 de enero de 2000).
D. Purificación de proteínas
La purificación del superantígeno o de variantes del mismo será deseable. Las técnicas de purificación de proteínas son bien conocidas para los expertos en la materia. Estas técnicas implican, en un nivel, el fraccionamiento en bruto del medio celular en fracciones peptídicas y no peptídicas. Habiendo separado la proteína de otras proteínas, la proteína de interés puede purificarse adicionalmente usando técnicas cromatográficas y electroforéticas para lograr la purificación parcial o completa (o la purificación hasta la homogeneidad). Los métodos analíticos particularmente adecuados para la preparación de un péptido puro son cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de exclusión por tamaño; cromatografía de afinidad; electroforesis en gel de poliacrilamida; isoelectroenfoque. Un método particularmente eficaz para purificar péptidos es la cromatografía líquida rápida de proteínas o incluso HPLC.
Determinados aspectos de la presente invención se refieren a la purificación y en realizaciones particulares, la purificación sustancial de una proteína o péptido codificado. La expresión "proteína o péptido purificado", tal como se usa en el presente documento, pretende referirse a una composición, aislable a partir de otros componentes, donde la proteína o péptido se purifica hasta cualquier punto en relación a su estado obtenible naturalmente. Por lo tanto, una proteína o péptido purificado también se refiere a una proteína o a un péptido, libre del ambiente en el que puede aparecer de manera natural.
En general, "purificado" se referirá a una proteína o composición peptídica que se haya sometido a fraccionamiento para eliminar otros diversos componentes y manteniendo dicha composición su actividad biológica expresada. En los casos donde se use la expresión "sustancialmente purificado", esta denominación se referirá a una composición en la que la proteína o péptido forme el componente principal de la composición, tal como constituyendo aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 95 % o más de las proteínas en la composición.
Los expertos en la materia conocerán diversos métodos para cuantificar el grado de purificación de la proteína o péptido a la luz de la presente divulgación. Estos incluyen, por ejemplo, determinar la actividad específica de una fracción activa o evaluar la cantidad de polipéptidos en una fracción mediante análisis de SDS/PAGE. Un método preferido para evaluar la pureza de una fracción es calcular la actividad específica de la fracción, compararla con la actividad específica del extracto inicial y por lo tanto calcular el grado de pureza, evaluado en el presente documento como "número de veces de purificación". Las unidades reales usadas para representar la cantidad de actividad, por supuesto, dependerán de la técnica de ensayo concreta seleccionada para efectuar el seguimiento de la purificación y de si la proteína o péptido expresado muestra o no una actividad detectable.
Los expertos en la materia conocerán diversas técnicas adecuadas para su uso en la purificación de proteínas. Estos incluyen, por ejemplo, precipitación a partir de sulfato de amonio, PEG, anticuerpos y similares o mediante desnaturalización por calor, seguido de centrifugación; etapas cromatográficas, tales como intercambio iónico, filtración en gel, fase reversa, cromatografía de hidroxilapatita y de afinidad; isoelectroenfoque; electroforesis en gel; y combinaciones de estas y otras técnicas. Tal como se conoce generalmente en la técnica, se cree que el orden de ejecución de las diversas etapas de purificación puede cambiarse o que pueden omitirse determinadas etapas y aún así ser un método adecuado para la preparación de una proteína o péptido sustancialmente purificado.
Se sabe que la migración de un polipéptido puede variar, en ocasiones de manera significativa, con diferentes condiciones de SDS/PAGE (Capaldi et al., 1977). Por lo tanto, se apreciará que en diferentes condiciones de electroforesis, los pesos moleculares aparentes de productos de expresión purificados o parcialmente purificados pueden variar.
La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se caracteriza por una separación muy rápida con una resolución de los picos extraordinaria. Esto se logra mediante el uso de partículas muy finas y alta presión para mantener un caudal adecuado. La separación puede lograrse en cuestión de minutos o como mucho una hora. Además, solo se necesita un volumen muy pequeño de muestra debido a que las partículas son tan pequeñas y están tan densamente empaquetadas que el volumen vacío es una fracción muy pequeña del volumen del lecho. Asimismo, la concentración de la muestra no necesita ser muy elevada debido a que las bandas son tan estrechas que hay muy poca dilución de la muestra.
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1. Hormonas corticoesteroides
Las hormonas corticoesteroides son útiles para tratar algunos tipos de cáncer (linfoma, leucemias y mieloma múltiple). Aunque estas hormonas se han usado para el tratamiento de muchas afecciones no cancerosas, se consideran fármacos de quimioterapia cuando se implementan para eliminar o frenar el crecimiento de células cancerosas. Las hormonas corticoesteroides pueden aumentar la eficacia de otros agentes de quimioterapia y por consiguiente, se usan frecuentemente en tratamientos combinados, incluyendo con terapia de superantígeno. La prednisona y la dexametasona son ejemplos de hormonas corticoesteroides.
2. Agentes alquilantes
Los agentes alquilantes son fármacos que interactúan directamente con el ADN genómico para evitar que proliferen las células cancerosas. Esta categoría de fármacos citostáticos representa agentes que afectan a todas las fases del ciclo celular, es decir, no son específicos de fase. Más específicamente, los agentes alquilantes o sus intermedios reactivos, forman enlaces covalentes con el ácido desoxirribonucleico (ADN), con el ácido ribonucleico (ARN) y con proteínas para formar un aducto en el que se añade un grupo metilo o etilo. Se cree que los aductos de ADN juegan un papel importante en la mutagénesis y en la clastogénesis, así como en la carcinogénesis. Los aductos de ADN se forman en una serie de sitios reactivos en bases nucleotídicas. Las localizaciones comunes incluyen el N-7 y el O-6 de la guanina, que se ha demostrado que están asociados con la mutagénesis y la carcinogénesis. En general, parece que los agentes alquilantes que no son particularmente de naturaleza iónica se localizan más en los átomos de nitrógeno del anillo, mientras que aquellos que tienen un carácter iónico mayor muestran mayores preferencias por la reacción en los átomos de oxígeno en el ADN. Los agentes alquilantes pueden implementarse para tratar la leucemia crónica, linfoma no de Hodgkin, enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple y cánceres concretos de mama, pulmón y de ovario. Los agentes alquilantes ejemplares incluyen busulfán (Myleran), clorambucilo, ciclofosfamida (Cytoxan), dacarbazina (DTIC-Dome), fosfato de estramustina, ifosfamida, mecloretamina (mostaza de nitrógeno), melfalano (mostaza de fenilalanina), procarbazina, tiotepa y mostaza de uracilo.
Además, las nitrosoureas parecen funcionar como agentes alquilantes, así como a través de otros mecanismos, tales como carbamoilación, que es una reacción que sucede entre un isocianato y un reactivo capaz de perder un protón e implica la formación de un enlace covalente entre el isocianato y su reactivo. La alquilación es una reacción atribuida a la alquilación de ácidos nucleicos y la carbamoilación se atribuye a la carbamoilación de proteínas.
Las nitrosoureas se convierten de manera no enzimática en un ión carbonio y una molécula de isotiocianato. El ión carbonio actúa como un agente alquilante típico y es probablemente responsable de la acción citotóxica de las nitrosoureas. El isotiocianato puede interactuar con proteínas y ser responsable de algunos de los efectos tóxicos de estos fármacos. Las nitrosoureas son elevadamente lipófilas, lo que las permite cruzar fácilmente membranas lipófilas, tales como aquellas encontradas en el sistema nervioso central y en la piel. Las nitrosoureas ejemplares incluyen carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), semustina (metil-CCNU) y estreptozocina.
Puede usarse un superantígeno para tratar un cáncer en combinación con uno cualquiera o más de estos agentes alquilantes, algunos de los cuales se describen a continuación.
a) Busulfán
El busulfán (también conocido como myleran) es un agente alquilante bifuncional. El busulfán se conoce químicamente como dimetanosulfonato de 1,4-butanodiol.
El busulfán no es un análogo estructural de las mostazas de nitrógeno. El busulfán está disponible en forma de comprimido para administración oral. Cada comprimido ranurado contiene 2 mg de busulfán y los ingredientes no activos son estearato de magnesio y cloruro de sodio. La semivida del busulfán es de aproximadamente 2,5 horas. El busulfán se absorbe rápidamente y probablemente por completo a través del tracto GI y se obtienen concentraciones en sangre medibles pasadas 0,5-2 horas después de la administración oral del fármaco. El busulfán se excreta lentamente en la orina, en forma de metabolitos. Se excreta aproximadamente un 10-50 % de una dosis en forma de metabolitos a las 24 horas.
El busulfán está indicado para el tratamiento paliativo de la leucemia mielógena crónica (mieloide, mielocítica, granulocítica). Aunque no es curativo, el busulfán reduce la masa total de granulocitos, alivia los síntomas de la enfermedad y mejora el estado clínico del paciente. Aproximadamente el 90 % de adultos con leucemia mielógena crónica no tratada previamente obtendrán una remisión hematológica con regresión o estabilización de la organomegalia después del uso de busulfán. Se ha demostrado que es superior a la irradiación esplénica respecto a los tiempos de supervivencia y al mantenimiento de los niveles de hemoglobina y que es equivalente a la irradiación para controlar la esplenomegalia.
En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con busulfán, por ejemplo, tratando en primer lugar con busulfán. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz del busulfán en el paciente por debajo de un nivel
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disponible en forma de comprimido para administración oral y se ha usado para tratar el mieloma múltiple.
Las pruebas disponibles sugieren que de aproximadamente un tercio a aproximadamente la mitad de los pacientes con mieloma múltiple muestran una respuesta favorable a la administración oral del fármaco.
El melfalano se ha usado en el tratamiento del carcinoma ovárico epitelial. Un régimen usado normalmente para el tratamiento del carcinoma de ovario ha sido administrar melfalano a una dosis de 0,2 mg/kg a diario durante cinco días como un solo ciclo. Los ciclos se repiten cada cuatro a cinco semanas dependiendo de la tolerancia hematológica (Smith y Rutledge, 1975; Young et al., 1978). Como alternativa, la dosis de melfalano usada puede ser tan baja como 0,05 mg/kg/día o tan alta como 3 mg/kg/día o cualquier dosis intermedia o por encima de estas dosis. Será necesario efectuar alguna variación en la dosificación dependiendo del estado del paciente que se esté tratando. La persona responsable de la administración, en cualquier caso, determinará la dosis adecuada para el sujeto individual.
La absorción del melfalano a través del tracto gastrointestinal es variable; se ha comunicado que la biodisponibilidad media es del 56 % pero puede variar desde el 25 hasta el 89 %. La absorción se reduce por la presencia de alimento. Después de la absorción se distribuye rápidamente por todo el agua corporal con un volumen de distribución de aproximadamente 0,5 litros por kg de peso corporal y se ha comunicado se inactiva principalmente por hidrólisis espontánea. Se ha comunicado que la semivida en plasma terminal del melfalano es del orden de 40 a 140 minutos. El melfalano se excreta por la orina, aproximadamente un 10 % como fármaco no cargado. Se ha comunicado que aproximadamente de un 50 a un 60 % de una dosis absorbida está inicialmente unida a proteínas, aumentando a entre un 80 a 90 % después de 12 horas.
En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con melfalano, por ejemplo, tratando en primer lugar con melfalano. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz del melfalano en el paciente por debajo de un nivel inhibidor funcional, puede administrarse el superantígeno al paciente.
e) Carmustina
La carmustina (carmustina estéril) es una de las nitrosoureas usadas en el tratamiento de determinadas enfermedades neoplásicas. Es 1,3bis(2-clorofenil)-1-nitrosourea. Se encuentra en forma de copos liofilizados de color amarillo pálido o una masa congelada con un peso molecular de 214,06. Es elevadamente soluble en alcohol y lípidos y muy poco soluble en agua. La carmustina se administra por infusión intravenosa después de su reconstitución, según se recomienda. La carmustina estéril está fácilmente disponible en viales monodosis de 100 mg de material liofilizado.
Aunque se admite generalmente que la carmustina alquila al ADN y ARN, no es resistente de manera cruzada con otros alquilantes. Como con otras nitrosoureas, también puede inhibir diversos procesos enzimáticos clave mediante la carbamoilación de aminoácidos en proteínas.
La carmustina está indicada como terapia paliativa como agente único o en terapia combinada establecida con otros agentes quimioterapéuticos aprobados en tumores cerebrales, tales como glioblastoma, glioma del tallo cerebral, meduloblastoma, astrocitoma, ependimoma y tumores cerebrales metastásicos. También se ha usado en combinación con prednisolona para tratar el mieloma múltiple. Se ha demostrado que la carmustina es útil en el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin y en linfomas no de Hodgkin, como terapia secundaria en combinación con otros fármacos aprobados en pacientes con recaída mientras están en tratamiento con la terapia principal o que no responden a la terapia principal.
La dosis recomendada de carmustina como agente único en pacientes no tratados previamente es de 150 a 200 mg/m2 por vía intravenosa cada 6 semanas. Esto puede administrarse como una sola dosis o dividirse en inyecciones diarias, tales como de 75 a 100 mg/m2 en 2 días consecutivos. La semivida terminal media es de aproximadamente 22 minutos.
Cuando se usa carmustina en combinación con otros fármacos mielosupresores o en pacientes en los que la reserva de médula ósea está agotada, las dosis deben ajustarse consecuentemente. Las dosis posteriores a la dosis inicial deben ajustarse de acuerdo con la respuesta hematológica del paciente a la dosis anterior. Por supuesto, se entiende que pueden usarse otras dosis en la presente invención, por ejemplo, 10 mg/m2, 20 mg/m2, 30 mg/m2, 40 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 70 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2. Se remite al experto en la materia a "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15ª Edición, Capítulo 61. Será necesario efectuar alguna variación en la dosificación dependiendo del estado del paciente que se esté tratando. La persona responsable de la administración, en cualquier caso, determinará la dosis adecuada para el sujeto individual.
En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con carmustina, por ejemplo, tratando en primer lugar con carmustina. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz de la carmustina en el paciente por debajo
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de un nivel inhibidor funcional, puede administrarse el superantígeno al paciente.
f) Lomustina
La lomustina es una de las nitrosoureas usadas en el tratamiento de determinadas enfermedades neoplásicas. Es 1(2-cloro-etil)-3-ciclohexil-1-nitrosourea. Es un polvo de color amarillo con la fórmula empírica de C9H16ClN3O2 y un peso molecular de 233,71. La lomustina es soluble en etanol al 10 % (0,05 mg por ml) y en alcohol puro (70 mg por ml). La lomustina es relativamente insoluble en agua (<0,05 mg por ml). Está relativamente no ionizada a un pH fisiológico. Los ingredientes inactivos en las cápsulas de lomustina son: estearato de magnesio y manitol.
Aunque se admite generalmente que la lomustina alquila al ADN y ARN, no es resistente de manera cruzada con otros alquilantes. Como con otras nitrosoureas, también puede inhibir diversos procesos enzimáticos clave mediante la carbamoilación de aminoácidos en proteínas.
La lomustina puede administrarse por vía oral. Después de la administración por vía oral de lomustina radioactiva a dosis en el intervalo de 30 mg/m2 a 100 mg/m2, se excretó aproximadamente la mitad de la radioactividad administrada en forma de productos de degradación trascurridas 24 horas.
La semivida en suero de los metabolitos se encuentra en el intervalo de 16 horas a 2 días. Los niveles en tejido son comparables a los niveles plasmáticos a los 15 minutos después de la administración intravenosa.
Se ha demostrado que la lomustina es útil como agente único además de para otras modalidades de tratamiento o en terapia combinada establecida con otros agentes quimioterapéuticos aprobados, en tumores cerebrales tanto primarios como secundarios, en pacientes que ya se han sometido a procedimientos quirúrgicos y/o radioterapéuticos adecuados. También ha demostrado ser eficaz en la terapia secundaria contra la enfermedad de Hodgkin en combinación con otros fármacos aprobados en pacientes que tienen recaídas mientras están tratándose con la terapia primaria o que no responden a la terapia principal.
La dosis recomendada de lomustina en adultos y niños como agente único en pacientes no tratados previamente es de 130 mg/m2 como una sola dosis oral cada 6 semanas. En individuos con la función de la médula ósea comprometida, la dosis debe reducirse a 100 mg/m2 cada 6 semanas. Cuando se usa lomustina en combinación con otros fármacos mielosupresores, las dosis deben ajustarse consecuentemente. Se entiende que pueden usarse otras dosis, por ejemplo, 20 mg/m2, 30 mg/m2, 40 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 70 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2 o cualquier dosis entre estas cifras según determine necesario el clínico para el individuo al que se esté tratando.
En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con lomustina, por ejemplo, tratando en primer lugar con lomustina. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz de la lomustina en el paciente por debajo de un nivel inhibidor funcional, puede administrarse el superantígeno al paciente.
3. Antimetabolitos
Los antimetabolitos detienen la síntesis del ADN y del ARN. A diferencia de los agentes alquilantes, los antimetabolitos influencian específicamente al ciclo celular durante la fase S. Los antimetabolitos que son análogos estructurales de nucleótidos se incorporan en los componentes celulares como su fuesen la pirimidina o purina esencial y por consiguiente, detiene la síntesis de ácidos nucleicos. Otros antimetabolitos detienen procesos enzimáticos esenciales del metabolismo. Un ejemplo es el antagonista de folato, 5-fluorouracilo, que detiene el metabolismo vital del ácido fólico. Los antimetabolitos ejemplares incluyen cladribina, citarabina (arabinósido de citosina), floxuridina (FUDR, 5-fluorodesoxiuridina), fludarabina, 5-fluorouracilo (5FU), gemcitabina, hidroxiurea, 6mercaptopurina (6MP), metotrexato (ametopterina), 6-tioguanina, pentostatina, pibobromano, tegafur, trimetrexato, glucuronato.
Los antimetabolitos se han usado para combatir leucemias crónicas además de tumores de mama, ovario y del tracto gastrointestinal. Los superantígenos pueden usarse en combinación con uno o más de los antimetabolitos descritos a continuación en el presente documento.
a) 5-fluorouracilo y compuestos relacionados
El 5-fluorouracilo (5-FU) es el nombre químico de 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pirimidindiona. Se cree que su mecanismo de acción es mediante el bloqueo de la reacción de metilación del ácido desoxiuridílico a ácido timidílico. Por lo tanto, el 5-FU interfiere con la síntesis del ácido desoxirribonucleico (ADN) y en menor medida inhibe la formación de ácido ribonucleico (ARN). Ya que el ADN y el ARN son esenciales para la división y proliferación celular, se cree que el efecto del 5-FU es crear una deficiencia de timidina que da lugar a la muerte celular. Por lo tanto, el efecto del 5-FU se encuentra en células que se dividen rápidamente, una característica de los cánceres metastásicos.
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En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con actinomicina D, por ejemplo, tratando en primer lugar con actinomicina D. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz de actinomicina D en el paciente por debajo de un nivel inhibidor funcional, puede administrarse el superantígeno al paciente.
e) Bleomicina
La bleomicina es una mezcla de antibióticos glucopeptídicos citotóxicos aislados de una cepa de Streptomyces verticillus. Aunque se desconoce el mecanismo de acción exacto de la bleomicina, las pruebas disponibles parecen indicar que el modo principal de acción es la inhibición de la síntesis de ADN con algunas evidencias de inhibición menor de la síntesis de ARN y proteína.
En ratones, se encuentran concentraciones elevadas de bleomicina en la piel, pulmones, riñones, peritoneo y conductos linfáticos. Se ha descubierto que las células tumorales de la piel y de los pulmones tienen elevadas concentraciones de bleomicina en comparación con las bajas concentraciones encontradas en el tejido hematopoyético. Las bajas concentraciones de bleomicina encontradas en la médula ósea pueden relacionarse con niveles elevados de enzimas degradantes de la bleomicina que se encuentran en este tejido.
En pacientes con un aclaramiento de creatinina > 35 ml por minuto, la semivida de eliminación terminal en suero o plasma de bleomicina es de aproximadamente 115 minutos. En pacientes con un aclaramiento de creatinina < 35 ml por minuto, la semivida de eliminación terminal en plasma o suero aumenta exponencialmente a medida que disminuye el aclaramiento de creatinina. En seres humanos, se recupera en la orina del 60 % al 70 % de una dosis administrada en forma de bleomicina activa. La bleomicina puede administrarse por vía intramuscular, intravenosa o subcutánea. Es altamente soluble en agua.
La bleomicina debe considerarse como un tratamiento paliativo. Se ha demostrado que es útil para el control de las siguientes neoplasias, bien como un agente único o en combinaciones probadas con otros agentes quimioterapéuticos aprobados en carcinomas de células escamosas, tales como de cabeza y cuello (incluyendo de boca, lengua, amígdalas, nasofaringe, orofaringe, senos, paladar, labio, mucosa bucal, encías, epiglotis, laringe), de piel, de pene, de cuello de útero y de vulva. También se ha usado en el tratamiento de linfomas y de carcinoma testicular.
Debido a la posibilidad de una reacción anafiláctica, los pacientes con linfoma deben tratarse con dos unidades o menos durante las dos primeras dosis. Si no aparecen reacciones agudas, puede seguirse la siguiente pauta de dosis regular.
La mejora en la enfermedad de Hodgkin y en tumores testiculares es rápida y se percibe en 2 semanas. Si no se observa mejora trascurrido este tiempo, es improbable que haya mejora. Los cánceres de células escamosas responden más lentamente, necesitando en ocasiones hasta 3 semanas antes de que se perciba ninguna mejora.
En la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con bleomicina, por ejemplo, tratando en primer lugar con bleomicina. Una vez que ha disminuido la concentración citostática eficaz de bleomicina en el paciente por debajo de un nivel inhibidor funcional, puede administrarse el superantígeno al paciente.
5. Inhibidores mitóticos
Los inhibidores mitóticos o inhibidores de la mitosis, incluyen alcaloides de plantas y otros agentes naturales que pueden inhibir bien la síntesis de proteínas necesaria para la división celular o la mitosis. Funcionan durante una fase específica durante el ciclo celular. Los inhibidores mitóticos incluyen entre otros los alcaloides de la vinca (vincristina y vinblastina) que son inhibidores del huso mitótico y las epipodofilotoxinas (tenipósido y etopósido) que son inhibidores de la ADN topoisomerasa II. Los inhibidores del huso mitótico se unen a proteínas microtubulares y bloquean su capacidad para polimerizarse y despolimerizarse, un proceso que detiene la división nuclear. Los inhibidores de la ADN topoisomerasa II bloquean la religación de las roturas del ADN bicatenario (por ejemplo, la separación de cromátidas hermanas o ADN escindido). Los ejemplos incluyen etopósido (VP-16, VePesid), paclitaxel (TAXOL®), docetaxel (Taxotere), tenipósido (VM-26, Vumon), vinblastina, vincristina, vindesina, topotecán, e irinotecán. Los superantígenos pueden usarse en combinación con uno o más de los inhibidores mitóticos descritos a continuación en el presente documento.
a) Paclitaxel
El paclitaxel (TAXOL®) es un agente antimitótico experimental, aislado de la corteza del fresno, Taxus brevifolia. Se une a la tubulina (en un sitio distinto al usado por los alcaloides de la vinca) y promueve el ensamblaje de los microtúbulos. Se sabe que el paclitaxel tiene actividad contra el melanoma maligno y el carcinoma de ovario. Las dosis máximas son 30 mg/m2 por día durante 5 días o de 210 a 250 mg/m2 administrados una vez cada 3 semanas. Por supuesto, todas estas dosis son ejemplares y también se espera que cualquier dosificación entre medias de
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La distribución temporal del régimen terapéutico puede relacionarse con la semivida del agente anticáncer, tal como un agente citostático. La semivida de un agente citostático puede determinarse usando la ecuación a continuación
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CL se define como la eliminación del agente o la eliminación de fármaco, que es el volumen de plasma libre de fármaco por unidad de tiempo. Vd se define como el volumen de distribución, que es la cantidad o concentración del agente en el plasma o en la sangre en relación a la cantidad total en el cuerpo. La semivida puede usarse para determinar el tiempo para la administración secuencial de un agente citostático seguido de la terapia con superantígeno. Por lo tanto, en la práctica de la presente invención, un experto en la materia sabrá que la terapia con superantígeno puede administrarse secuencialmente en combinación con un citostático, por ejemplo, tratando en primer lugar con el agente citostático. Una vez que la concentración eficaz del agente haya disminuido en el paciente por debajo de un nivel inhibidor funcional basado en la semivida del agente, puede administrarse el superantígeno al paciente.
Además se prevé que la presente invención pueda usarse en combinación con una intervención quirúrgica. En caso de intervención quirúrgica, la presente invención puede usarse preoperativamente, por ejemplo, para hacer que un tumor inoperable pueda someterse a resección. Como alternativa, la presente invención puede usarse en paralelo a la cirugía, y/o posteriormente, para tratar la enfermedad residual o metastásica. Por ejemplo, puede inyectarse o perfusionarse en el lecho del tumor reseccionado una formulación que comprende el superantígeno dirigido a tumores y/o el agente anticáncer (por ejemplo, un agente citostático o un agente radioterapéutico). La perfusión puede continuar después de la resección, por ejemplo, dejando un catéter implantado en el sitio de la cirugía. También se prevé el tratamiento post-quirúrgico periódico.
También puede aplicarse administración continua en los casos en los que sea adecuado, por ejemplo, en los casos donde se extirpe el tumor y se trate el lecho tumoral para eliminar la enfermedad residual, microscópica. Se prefiere la administración mediante jeringa o cateterización. Dicha perfusión continua puede tener lugar durante un periodo de aproximadamente 1-2 horas, a aproximadamente 2-6 horas, a aproximadamente 6-12 horas, a aproximadamente 12-24 horas, a aproximadamente 1-2 días, a aproximadamente 1-2 semanas o más después de iniciar el tratamiento. En general, la dosis de la composición terapéutica a través de perfusión continua será equivalente a la administrada por una sola o por múltiples inyecciones, ajustada a lo largo de un periodo de tiempo durante el cual tiene lugar la perfusión. Se contempla además que pueda usarse la perfusión en extremidades para administrar composiciones terapéuticas de la presente invención, particularmente en el tratamiento de melanomas y sarcomas.
En determinadas realizaciones, el tumor que se está tratando puede no ser, al menos inicialmente, reseccionable. Los tratamientos con superantígeno en combinación con al menos un agente anticáncer puede aumentar la posibilidad de resección del tumor debido a la reducción en los márgenes o mediante la eliminación de determinadas porciones particularmente invasivas. Después de los tratamientos, puede ser posible la resección. Los tratamientos adicionales posteriores a la resección servirán para eliminar la enfermedad residual en el sitio del tumor.
Un ciclo de tratamiento típico, para un tumor primario o para un lecho tumoral después de la escisión puede implicar múltiples dosis. El tratamiento de tumores primarios típico puede implicar una aplicación de 6 dosis durante un periodo de dos semanas. El régimen de dos semanas puede repetirse una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más veces. Durante el trascurso del tratamiento, puede volver a evaluarse la necesidad de completar las dosificaciones planeadas.
Los tratamientos pueden incluir varias "dosis unitarias". La dosis unitaria se define como aquella que contiene una cantidad predeterminada de la composición terapéutica. La cantidad que va a administrarse y la ruta y la formulación particulares se encuentran dentro de las capacidades de los expertos en la técnica clínica. Una dosis unitaria no se administra necesariamente como una sola inyección, pero puede comprender infusión continua durante un periodo de tiempo predeterminado.
Tal como se usa en la presente invención, un régimen de tratamiento combinado consiste en administrar un superantígeno y al menos un agente anticáncer, por ejemplo, un fármaco citostático o un agente radioterapéutico. Además, puede ser deseable combinar el régimen de tratamiento combinado con otros agentes eficaces para el tratamiento de enfermedades neoplásicas o cánceres, tales como otros agentes anticáncer, tales como otros, incluyendo agentes biológicas (bioterapia) y/o terapia hormonal, etc.
Dentro del alcance de la presente invención se incluye la administración sistémica (por ejemplo, por vía intravenosa) de los superantígenos, por ejemplo, TTS y/o agentes anticáncer, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, fármacos citostáticos. También se incluye la administración local (por ejemplo, mediante administración directa del agente al tumor, por ejemplo, mediante administración intratecal) de los superantígenos, por ejemplo, TTS y/o agentes anticáncer, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, fármacos citostáticos. También se incluye la combinación de administración local y sistémica de superantígenos, por ejemplo, TTS y/o agentes anticáncer, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, fármacos citostáticos (por ejemplo, administración
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Células
Se cultivó la línea celular de tumor humano Colo 205 (obtenida a través de la ATCC) en medio de crecimiento celular. La línea celular se preparó mediante el desprendimiento de células cultivadas in vitro con solución de disociación celular, se resuspendieron en PBS, se contaron y se diluyeron en PBS con suero de ratón SCID al 1 %. Se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de donantes de sangre en el Hospital Universitario de Lund. Las PBMC se aislaron mediante centrifugación de densidad en Ficoll-Paque. Las células se cultivaron entonces en medio R10 y se estimularon con TTS para obtener linfocitos T efectores activados. Los linfocitos T se prepararon desprendiendo las células cultivadas in vitro, se resuspendieron en PBS, se contaron y se diluyeron en PBS con suero de ratón SCID al 1 %.
Animales
Se usaron ratones SCID hembra. Los ratones se usaron de manera rutinaria a la edad de 8 a 12 semanas y recibieron dieta para roedores granulada estéril y agua estéril a voluntad.
Terapia tumoral en ratones SCID: Masa tumoral intraperitoneal
Se inyectó a de siete a 8 ratones SCID por grupo de tratamiento por vía intraperitoneal con células tumorales humanas en 0,2 ml de vehículo. Los ratones recibieron una inyección intraperitoneal con linfocitos activados en 0,2 ml de vehículo y recibieron adicionalmente 4-5 inyecciones intravenosas con sustancia de ensayo de TTS en 0,2 ml de vehículo, la primera inyección se administró a la vez que los linfocitos activados. El tratamiento con TTS se combinó con inyecciones intraperitoneales (i.p.) o intravenosas (i.v.) del agente quimioterapéutico. Después de 3-10 semanas, se sacrificó a los ratones mediante dislocación del cuello y se determinó la masa tumoral.
Regímenes de tratamiento
Se administraron cincuenta µg/ratón de ABR-217620 en los días 6-10 después de la inyección del tumor y se administraron 0,2 mg/ratón de docetaxel por vía i.p. en el día 4 como monoterapias o en combinación, respectivamente.
Resultados
Como puede observarse a partir de la Tabla 14, la terapia combinada fue superior y sinérgica en comparación con el tratamiento con docetaxel o con TTS solos en la reducción de la masa tumoral. El tratamiento con docetaxel solo dio como resultado efectos antitumorales significativos. Sin embargo, el tratamiento con TTS en combinación con gemcitabina ejerció efectos antitumorales máximos.

Tabla 14. Terapia de tumores humanos: Masa tumoral por animal después de tratamiento con los fármacossolos o en combinación.
Tratamiento
Media/mediana de masa tumoral (mg)
Control*
321/282
TTS
315/316
Docetaxel
176/103
TTS + Docetaxel
52/46
*animales inoculados con tumor no tratados
Por lo tanto, la combinación de TTS con agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, docetaxel dio como resultado efectos antitumorales sinérgicos cuando se usa el agente quimioterapéutico justo antes del ciclo de TTS.
Ejemplo 14
Terapia combinada de TTS -quimioterapéutico (por ejemplo, docetaxel): modelo de ratón SCID humanizado
in vivo
Se evaluó el efecto del tratamiento con TTS (ST4Fab-SEA/E-120, ABR-217620) en combinación con el agente quimioterapéutico docetaxel sobre el crecimiento tumoral en un modelo de tumor humano experimental. Se trasplantó a ratones con inmunodeficiencia combinada severa (SCID) con linfocitos humanos y células tumorales humanas creciendo intraperitonealmente como tumores sólidos. ABR-217620 es un TTS desarrollado para uso en seres humanos y por lo tanto se ensayó en el modelo de SCID humanizado. Los efectos antitumorales del TTS son dependientes de linfocitos humanos activados.
Células
Se cultivó la línea celular de tumor humano Calu-1 (obtenida a través de la ATCC) en medio de crecimiento celular. La línea celular se preparó mediante el desprendimiento de células cultivadas in vitro con solución de disociación
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controló la absorbancia a 405 nm en un espectrofotómetro de ELISA. Se determinó la concentración desconocida de anticuerpos anti-SEA en las muestras a partir de la curva patrón de IgG anti-SEA de mono purificada por afinidad. El límite de cuantificación del método fue 0,8 µg/ml (5 pmol/ml) a una dilución de la muestra de 1:100.
5 Los resultados de los niveles de anticuerpo anti-SEA en plasma se presentan en la Tabla 19. En el día 1, los niveles de anticuerpo anti-SEA en todos los animales estaban por debajo o ligeramente por encima del LDC (0,80 mg/l). En el día 29, los niveles de anticuerpo anti-SEA estaban elevados en los animales que recibieron solo 5T4Fab-SEAD227A (Grupo 1). En los grupos 3 y 4 (la combinación secuencial de 5T4Fab-SEAD227A y gemcitabina), no se observaron cambios o solo una elevación menor en el nivel de anticuerpos anti-SEA en el día 29. Por lo tanto, esto demostró
10 que la administración de gemcitabina en combinación con TTS redujo la concentración de producción de anticuerpos anti-SEA en los animales desde el día 1 hasta el día 29.
Tabla 19. Niveles de anticuerpos anti-SEA en muestras de plasma obtenidas de monos cinomolgos después de la administración de 5T4Fab-SEAD227A (días 1-5, días 29-33) solo o en combinación secuencial con 15 gemcitabina (días 8, 15, 22).
Nº de grupo
Administración 5T4Fab-SEAD227A Gemcitabina Nº de animal y sexo Niveles de anticuerpo anti-SEA (mg/l) Día 1 Día 14 Día 21 Día 29
1
18 µg/kg - 761M 766F <LDC 0,96 30,3 58,8 20,7 18,3 73,1 41,0
2
- 65 mg/kg 757M 762F <LDC <LDC <LDC <LDC <LDC <LDC 0,87 <LDC
3
6 µg/kg 65 mg/kg 759M 764F <LDC <LDC <LDC 22,0 <LDC <LDC 8,04 6,86
4
18 µg/kg 65 mg/kg 755M 760F <LDC 2,05 <LDC 14,2 <LDC <LDC 7,80 5,94
Determinación de la concentración de TTS después del régimen de tratamiento combinado
Se recogieron muestras de sangre a través de una vena adecuada (diferente de la usada para dosificación) en tubos
20 que contenían heparina litiada y se pusieron inmediatamente en un baño de hielo-agua o Criorack. Las muestras de sangre se usaron para determinar la concentración de 5T4Fab-SEAD227A.
Se usó un método ELISA para determinar la concentración de 5T4Fab-SEAD227A en muestras de plasma. El método se basó en el hecho de que una parte de 5T4Fab-SEAD227A es el fragmento Fab de un anticuerpo monoclonal de
25 ratón y la otra parte es el superantígeno estafilocócico SEA.
Se recubrieron placas de microtitulación con un anticuerpo de cabra anti-kappa de ratón en 50 mM NaHCO3, pH 9,6. Las placas se lavaron en suero salino tamponado con fosfato que contenía Tween 20 entre cada etapa de incubación. Después de bloquear los pocillos con albúmina sérica bovina, se añadieron las muestras diluidas y los
30 patrones en el intervalo de 0,024-6,25 ng/ml. La etapa siguiente fue la adición de un anticuerpo biotinilado de conejo anti-SEA. En la etapa posterior, se añadió peroxidasa de rábano picante y estreptavidina conjugada a una estructura de dextrano. La etapa final fue la adición de sustrato, kit de sustrato EIA de peroxidasa TBM. La reacción enzimática se detuvo mediante la adición de H2SO4 1 N y se controló la absorbancia a 450 nm mediante un espectrofotómetro de ELISA. Las muestras se cuantificaron a partir de la curva patrón de 5T4Fab-SEAD227A.
35 Los resultados del bioanálisis de la concentración de 5T4FAB-SEAD227A en plasma se presentan en la Tabla 20.
Tabla 20. Concentraciones de 5T4Fab-SEAD227A en muestras de plasma obtenidas de monos cinomolgos después de la administración de 5T4Fab-SEAD227A (Días 1-5, días 29-33) solo o en combinación secuencial 40 con gemcitabina (días 8, 15, 22).
5T4Fab-SEAD227A Grupo de gemcitabina
18 µg/kg 0 mg/kg 1 0 µg/kg 65 mg/kg 2 6 µg/kg 65 mg/kg 3 18 µg/kg 65 mg/kg 4
Nº de animal y sexo
761M 766F 757M 762F 759M 764F 755M 760F
Día
Tiempo (h) Concentración de 5T4Fab-SEAD227A (µg/l) en plasma
1
0 0,083 1 3 8 < LDC 385 284 239 97,0 < LDC 399 309 276 74,9 < LDC < LDC n.a. n.a. n.a. < LDC < LDC n.a. n.a. n.a. < LDC 159 110 70,6 25,7 < LDC 158 123 89,0 46,6 < LDC 392 293 204 71,5 < LDC 255 244 231 200
5
0 0,083 1 21,2 418 314 10,2 399 266 < LDC < LDC n.a. < LDC < LDC n.a. 3,42 156 118 32,2 165 142 10,7 436 293 255 590 501
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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6124886A (en) 1997-08-25 2000-09-26 Donnelly Corporation Modular rearview mirror assembly
US20040214783A1 (en) * 2002-05-08 2004-10-28 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
SE0102327D0 (sv) * 2001-06-28 2001-06-28 Active Biotech Ab A novel engineered superantigen for human therapy
SE0402025D0 (sv) 2004-08-13 2004-08-13 Active Biotech Ab Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
GB0519303D0 (en) * 2005-09-21 2005-11-02 Oxford Biomedica Ltd Chemo-immunotherapy method
US20100303895A1 (en) * 2007-02-16 2010-12-02 Arthur Louie Fixed drug ratios for treatment of hematopoietic cancers and proliferative disorders
EP3124046B1 (en) * 2007-07-12 2019-12-25 GITR, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
US20090076042A1 (en) * 2007-09-15 2009-03-19 Protia, Llc Deuterium-enriched erlotinib
US9272034B2 (en) * 2007-10-04 2016-03-01 The Regents Of The University Of California Treatment of conditions related to shock
WO2011038417A2 (en) 2009-09-28 2011-03-31 The Regents Of The University Of California Methods to accelerate tissue and wound healing rates and reduce swelling and scar formation
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CA2813466A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids that disrupt major groove binding partner interactions
EP2621521A4 (en) 2010-10-02 2014-04-23 Univ California MINIMAL REDUCTION OF INTESTINAL DYSFUNCTION
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CN110511939A (zh) 2011-10-03 2019-11-29 现代泰克斯公司 修饰的核苷、核苷酸和核酸及其用途
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2833923A4 (en) 2012-04-02 2016-02-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
CN104797267A (zh) 2012-06-26 2015-07-22 德玛医药 使用卫康醇、二乙酰二脱水卫矛醇、二溴卫矛醇或类似物或其衍生物治疗具有基因多型性或ahi1失调或突变患者的抗酪氨酸激酶抑制剂的恶性肿瘤的方法
PT2922554T (pt) 2012-11-26 2022-06-28 Modernatx Inc Arn modificado nas porções terminais
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014168986A1 (en) 2013-04-08 2014-10-16 Brown Dennis M Therapeutic benefit of suboptimally administered chemical compounds
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CA3010678A1 (en) 2016-01-10 2017-07-20 Neotx Therapeutics Ltd. Methods and compositions for enhancing the potency of superantigen mediated cancer immunotherapy
CN109998488B (zh) * 2019-04-13 2022-08-02 中国医学科学院北京协和医院 克罗恩病和肠道溃疡型淋巴瘤的鉴别模型及构建方法
JP2022531978A (ja) 2019-05-15 2022-07-12 ネオティーエックス セラピューティクス リミテッド 癌治療
JP2023517011A (ja) 2020-03-05 2023-04-21 ネオティーエックス セラピューティクス リミテッド 免疫細胞を用いて癌を治療するための方法および組成物
US20230357427A1 (en) * 2020-08-19 2023-11-09 Shanghai Immunohead Biotechnology Co., Ltd Humanized antibody, chimeric antigen receptor, nucleic acid, vector, cell and use

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002117A (en) * 1934-08-07 1935-05-21 Bruce Watson J Artificial bait
US5194596A (en) * 1989-07-27 1993-03-16 California Biotechnology Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor
US6126945A (en) * 1989-10-03 2000-10-03 Pharmacia Ab Tumor killing effects of enterotoxins, superantigens, and related compounds
US5350836A (en) * 1989-10-12 1994-09-27 Ohio University Growth hormone antagonists
US5858363A (en) * 1990-07-20 1999-01-12 Pharmacia & Upjohn Ab Target specific antibody-superantigen conjugates and their preparation
US6197299B1 (en) * 1990-07-20 2001-03-06 Pharmacia & Upjohn Ab Antibody conjugates
WO1993024136A1 (en) * 1991-01-17 1993-12-09 Terman David S Tumor killing effects of enterotoxins, superantigens, and related compounds
US7220724B2 (en) * 1993-10-22 2007-05-22 University Of Southern California Contortrostatin CN and methods for its use in preventing metastasis and other conditions
SE9402430L (sv) * 1994-07-11 1996-01-12 Pharmacia Ab Konjugat mellan modifierat superantigen och en målsökande förening samt användning av konjugaten
SE9601245D0 (sv) * 1996-03-29 1996-03-29 Pharmacia Ab Chimeric superantigens and their use
TW517061B (en) * 1996-03-29 2003-01-11 Pharmacia & Amp Upjohn Ab Modified/chimeric superantigens and their use
CA2216622A1 (en) * 1996-11-25 1998-05-25 Smithkline Beecham P.L.C. Novel compounds
US6713284B2 (en) * 1997-06-25 2004-03-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Bacterial superantigen vaccines
NZ502745A (en) * 1997-07-21 2003-02-28 Pharmacia & Upjohn Ab Use of superantigen conjugates for the directed cytolysis of target cells
SE9902989D0 (sv) 1999-08-24 1999-08-24 Active Biotech Ab Novel compounds
US20020177551A1 (en) * 2000-05-31 2002-11-28 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US20040214783A1 (en) 2002-05-08 2004-10-28 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US6706505B1 (en) * 2000-03-08 2004-03-16 Amgen Inc Human E3α ubiquitin ligase family
SE0102327D0 (sv) * 2001-06-28 2001-06-28 Active Biotech Ab A novel engineered superantigen for human therapy
DE10210312A1 (de) 2002-03-10 2003-12-24 Frank Perabo Superantigentherapie
SE0402025D0 (sv) 2004-08-13 2004-08-13 Active Biotech Ab Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent
US7776800B2 (en) 2005-12-09 2010-08-17 Afton Chemical Corporation Titanium-containing lubricating oil composition

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