ES2542732T3 - Composición farmacéutica que comprende rimeporide para tratar enfermedades asociadas con la disfunción de células beta. - Google Patents

Abstract

2-Metil-4,5-di-(metilsulfonil)-benzoil-guanidina, y/o una sal y/o solvato fisiológicamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de enfermedades que están asociadas con la disfunción de las células ß.

Description

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E09741802

15-07-2015

Grupo 1: ratas ZF (fa/fa) (n = 6), compuesto A (150mg/kg a través de alimentación forzada)

Grupo 2: ratas ZF (fa/fa) (n = 6), compuesto B (40 mg/kg/día en forma de mezcla con la comida)

Grupo 3; ratas ZF (fa/fa) (n = 6), tratamiento con vehículo (comida de control, vehículo alimentación forzada)

Los animales del grupo 1 y 3 fueron tratados con el compuesto A o el vehículo (agua) durante 4 semanas (de 8-12 semanas) mediante alimentación forzada, dos veces al día. La comida que contiene el compuesto B se suministró al Grupo 2 ad lib. El Grupo 1 y el Grupo 3 fueron alimentados con comida equilibrada sin el compuesto B ad lib. El Compuesto A corresponde a Cariporide. El compuesto B corresponde a hidrato clorhidrato de 2-Metil-4,5-di(metilsulfonil)-benzoil-guanidina.

Toma de muestras de sangre y ensayos de glucosa e insulina plasmática

Se extrajo sangre por la mañana de forma aleatoria de ratas alimentadas ad libitum, mediante un pequeño corte en el extremo de la cola. La sangre se recogió en tubos con heparina. Las concentraciones de glucosa en sangre se midieron según el diseño del estudio utilizando un glucómetro One-Touch (Lifescan Inc. Milptias, CA). Las muestras de sangre se colocaron en hielo y se centrifugaron, y el plasma se almacenó a -20°C hasta que la insulina se sometió a ensayo. La concentración de insulina plasmática se midió con un kit ELISA específico para ratas (Crystal Chem Inc, Downers Grove, IL).

2H-GDT

Las ratas sufrieron un ayuno de 4 horas. Una hora antes de la prueba de provocación de 2H-GDT, las ratas recibieron 1,75 mg/g de peso corporal de H2O18 (10 % 18O, Spectra, X XX) mediante alimentación forzada oral para permitir la determinación del agua corporal total, según se ha descrito previamente. En el t=0, las concentraciones de glucosa en sangre fueron determinadas con un glucómetro, y se obtuvo una muestra de sangre para la determinación de la insulina de referencia y la dilución de H2O18 . A continuación, los animales recibieron [6,6’2H]glucosa (2 g/kg de peso corporal, 50 % en agua, Cambridge Isotope Laboratory, Inc., Andover, MA) por alimentación forzada oral. La carga de glucosa oral de 2 g/kg utilizada en el protocolo para las ratas logró niveles de glucosa dentro o cerca del rango dinámico deseado. Una segunda muestra de sangre recogida en el t=30 min para la determinación de las concentraciones de glucosa e insulina y el contenido de 2H2O.

Protocolo de marcaje de agua pesada

Los animales recibieron un bolo IP (0,35 ml/g de peso corporal) de 99 % de agua pesada en NaCl al 0,9 % para lograr un enriquecimiento de agua en el organismo de aproximadamente un 5 % (utilizando un 60 % de peso corporal como agua) y a continuación recibieron 8 % de 2H2O en agua para beber durante las últimas 4 semanas de estudio. El enriquecimiento con 2H2O logra valores en estado en reposo estables dentro de un periodo de pocos días en los roedores en este protocolo.

Análisis por IRMS

Cien microlitros de alícuotas de muestras de plasmas, dentro del extremo de un vial invertido, se colocaron en un bloque de calentamiento relleno con perlas de vidrio a 70 ºC durante la noche y se recogió el agua destilada del interior del vial. Las relaciones isotópicas del deuterio y el oxígeno-18 de la sangre de las muestras de plasma se determinaron utilizando un Analizador de Conversión a alta temperatura/Elemental Thermo Finnigan acopladop con un espectrómetro MAT 253 IRMS de Thermo Finnigan a través de una interfaz Conflo-III. Las primeras dos mediciones fueron descartadas para minimizar los efectos de la histéresis de la muestra previa. La abundancia del isótopo deuterio se calcula en primer lugar en valores de δ 2H en relación al estándar internacional VSMOW, y a continuación se transforma en APE utilizando una curva de calibración de estándares con enriquecimientos conocidos. El enriquecimiento con 2H2O se calculó para ratas a los 30 min después de la carga de glucosa. El enriquecimiento con 2H2O se convirtió a mmoles multiplicando el enriquecimiento por el tamaño del depósito de TBW y dividiendo por 20 (MW 2H2O). El 2H2O total producida se calculó como un porcentaje de la carga de [6,6’2H2]glucosa proporcionada. Las áreas bajo las curvas de la insulina plasmática (INS AUC) y de la glucosa (GLU AUC) se calcularon utilizando el método trapezoidal. Se calcularon dos parámetros de 2H-GDT: 1) Producción de 2H2O (% carga) / INS AUC*GLU AUC y 2) la tasa absoluta de la producción de 2H2O (% carga).

Resultados

Peso corporal

No hubo diferencias significativas en el peso corporal (Figura 1) entre los grupos tratados con el vehículo, Compuesto A o Compuesto B.

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