ES2534066T3 - Polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican los mismos - Google Patents

Polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican los mismos Download PDF

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Abstract

Polipéptido aislado que tiene actividad de glucoamilasa, seleccionado del grupo que consiste en: (a) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, de forma más preferible al menos 81%, de forma más preferible al menos 82%, de forma más preferible al menos 83%, de forma más preferible al menos 84%, de forma más preferible al menos 85%, de forma más preferible al menos 86%, de forma más preferible al menos 87%, de forma más preferible al menos 88%, de forma más preferible al menos 89%, de forma más preferible al menos 90%, de forma más preferible al menos 91%, de forma más preferible al menos 92%, incluso de forma más preferible al menos 93%, de la forma más preferible al menos 94%, e incluso de la forma más preferible al menos 95%, tal como incluso al menos 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de identidad con los residuos de aminoácidos 19-573 de SEC ID nº: 2 o SEC ID nº: 4; (b) un polipéptido que incluye una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, de forma más preferible al menos 81%, de forma más preferible al menos 82%, de forma más preferible al menos 83%, de forma más preferible al menos 84%, de forma más preferible al menos 85%, de forma más preferible al menos 86%, de forma más preferible al menos 87%, de forma más preferible al menos 88%, de forma más preferible al menos 89%, de forma más preferible al menos 90%, de forma más preferible al menos 91%, de forma más preferible al menos 92%, incluso de forma más preferible al menos 93%, de la forma más preferible al menos 94%, e incluso de la forma más preferible al menos 95%, tal como incluso al menos 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de identidad con el dominio catalítico mostrado como los aminoácidos 22 a 472 de SEC ID nº: 2 o SEC ID nº: 4; (c) un polipéptido codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 80%, de forma más preferible al menos 81%, de forma más preferible al menos 82%, de forma más preferible al menos 83%, de forma más preferible al menos 84%, de forma más preferible al menos 85%, de forma más preferible al menos 86%, de forma más preferible al menos 87%, de forma más preferible al menos 88%, de forma más preferible al menos 89%, de forma más preferible al menos 90%, de forma más preferible al menos 91%, de forma más preferible al menos 92%, incluso de forma más preferible al menos 93%, de la forma más preferible al menos 94%, e incluso de la forma más preferible al menos 95%, tal como incluso al menos 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de identidad con la secuencia codificante de SEC ID nº: 1 o de SEC ID nº: 3 que codifica los aminoácidos 19-573 de SEC ID nº: 2 y SEC ID nº: 4.

Description

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resultantes se evalúan para actividad de glucoamilasa para identificar los residuos de aminoácidos que son críticos para la actividad de la molécula. Sitios de interacción enzima-sustrato también se pueden determinar por análisis de la estructura tridimensional, tal y como se determina por técnicas tales como análisis de resonancia magnética nuclear, cristalografía o marcaje por fotoafinidad (véase, por ejemplo, de Vos et al., 1992, supra; Smith et al., 1992, supra; Wlodaver et al., 1992, supra).
[0075] La presente divulgación también se refiere a polipéptidos de codificación de polinucleótidos aislados de la presente invención, que hibridan bajo condiciones de astringencia muy bajas, condiciones de astringencia preferiblemente bajas, de forma más preferible condiciones de astringencia medias, de forma más preferible condiciones de astringencia medio altas, de forma más preferible incluso condiciones de astringencia altas, y de la forma más preferible condiciones de astringencia muy altas con (i) la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº: 1
o de SEC ID nº: 3, (ii) la secuencia de ADNc contenida en SEC ID nº: 1 o SEC ID nº: 3, o (iii) una cadena complementaria en toda su longitud de (i) o (ii), o sus variantes alélicas y subsecuencias (Sambrook et al., 1989, supra), tal y como se define aquí. Preferiblemente, la cadena complementaria es la cadena complementaria en toda su longitud de la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº: 1 o de SEC ID nº: 3.
[0076] La presente divulgación también se refiere a polinucleótidos aislados obtenidos por (a) hibridación de una población de ADN bajo condiciones de astringencia muy bajas, bajas, medias, medio altas, altas o muy altas con (i) la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº: 1 o de SEC ID nº: 3, (ii) la secuencia de ADNc contenida en SEC ID nº: 1 o SEC ID nº: 3, o (iii) una cadena complementaria en toda su longitud de (i) o (ii); y (b) aislamiento del polinucleótido de hibridación, que codifica un polipéptido que tiene actividad de glucoamilasa. Preferiblemente, la cadena complementaria es la cadena complementaria en toda su longitud de la secuencia codificante del polipéptido maduro de SEC ID nº: 1 o de SEC ID nº: 3.
Enzimas híbridas
[0077] La presente divulgación también se refiere a enzimas híbridas que comprenden un dominio catalítico que tiene actividad enzimática (por ejemplo, actividad enzimática de degradación de almidón, tal como actividad de alfa-amilasa, amilopululanasa, beta-amilasa, CGTasa, glucoamilasa, isoamilasa, amilasa maltogénica o pululanasa), y un módulo de unión a carbohidratos (CBM). La enzima híbrida puede comprender además un enlazador.
[0078] El híbrido se puede producir por fusión de una primera secuencia de ADN que codifica un dominio catalítico y una segunda secuencia de ADN que codifica un módulo de unión a carbohidratos, o el híbrido se puede producir como un gen completamente sintético basado en el conocimiento de las secuencias de aminoácidos de CBMs, enlaces y dominios catalíticos adecuados.
[0079] El término "enzima híbrida" (también denominado, "proteína de fusión" "híbrido", "polipéptido híbrido" o "proteína híbrida") se utiliza en este caso para caracterizar los polipéptidos híbridos de la invención que comprenden un módulo catalítico que tiene actividad enzimática (por ejemplo, actividad de degradación de almidón, tal como actividad de alfaamilasa, amilopululanasa, beta-amilasa, CGTasa, glucoamilasa, isoamilasa, amilasa maltogénica y pululanasa) y un módulo de unión a carbohidratos donde el dominio catalítico y el módulo de unión a carbohidratos son derivados de distintas fuentes. El término "fuente" incluye, pero no está limitado a, una enzima original o una variante de la misma, por ejemplo, una amilasa o glucoamilasa, u otra actividad catalítica que comprenda un módulo catalítico adecuado y/o un CBM adecuado y/o un enlazador adecuado. No obstante el CBM también se puede derivar a partir de un polipéptido con ninguna actividad catalítica. El dominio catalítico y el módulo de unión a carbohidratos se puede derivar de la misma cepa microbiana, a partir de cepas en las mismas especies, de especies relacionadas de forma cercana u organismos menos relacionados. Preferiblemente, el dominio catalítico y el módulo de unión a carbohidratos de los híbridos son derivados a partir de distintas fuentes, por ejemplo, de distintas enzimas de la misma cepa y/o especies, o por ejemplo, de cepas dentro de especies diferentes.
[0080] En un aspecto la enzima híbrida comprende el CBM (también conocido como un dominio de unión a carbohidrato
o CBD) según la invención y un dominio catalítico. El dominio catalítico es en una forma de realización particular un dominio catalítico de glucoamilasa.
Constructos de ácidos nucleicos
[0081] La presente invención también se refiere a constructos de ácidos nucleicos que incluyen un polinucleótido aislado de la presente invención operativamente enlazado a una o varias (diferentes) secuencias de control que dirigen la expresión de la secuencia codificante en una célula huésped adecuada bajo condiciones compatibles con las secuencias de control.
[0082] Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de la presente invención se puede manipular de varias formas para proporcionar expresión del polipéptido. La manipulación de la secuencia del polinucleótidos antes de su inserción en un vector puede ser deseable o necesaria dependiendo del vector de expresión. Las técnicas para modificar secuencias de polinucleótidos que utilizan métodos de ADN recombinante se conocen bien en la técnica.
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[0133] La célula vegetal o planta transgénica que expresa un polipéptido de la presente invención se puede construir conforme a métodos conocidos en la técnica. En resumen, la planta o célula vegetal se construye por incorporación de uno o varios (diferentes) constructos de expresión que codifican un polipéptido de la presente invención en el genoma huésped vegetal o genoma de cloroplasto y que propaga la planta modificada resultante o célula vegetal en una planta transgénica o célula vegetal.
[0134] El constructo de expresión es convenientemente un constructo de ácidos nucleicos que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención operativamente enlazado a las secuencias reguladoras apropiadas necesarias para la expresión de la secuencia de nucleótidos de la planta o parte de planta elegida. Además, el constructo de expresión puede comprender una etiqueta seleccionable útil para identificar células huésped en las que el constructo de expresión se haya integrado y secuencias de ADN necesarias para la introducción del constructo en la planta en cuestión (depende del método de introducción de ADN que se vaya a usar).
[0135] La elección de secuencias reguladoras, tales como secuencias promotoras y terminadoras y opcionalmente secuencias señal o de tránsito se determina, por ejemplo, basándose en cuándo, dónde y cómo se desea que sea expresado el polipéptido. Por ejemplo, la expresión del gen que codifica un polipéptido de la presente invención puede ser constitutiva o inducible, o puede ser desarrollable, fase o tejido específica, y el producto génico puede estar dirigido a un tejido específico o parte de planta tal como semillas u hojas. Secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Tague et al., 1988, Plant Physiology 86: 506.
[0136] Para la expresión constitutiva, el 35S-CaMV, la ubiquitina 1 de maíz, y el promotor de actina 1 de arroz se puede utilizar (Franck et al., 1980, Cell 21: 285-294, Christensen et al., 1992, Plant Mol. Biol. 18: 675-689; Zhang et al., 1991, Plant Cell 3: 1155-1165). Promotores específicos de órgano pueden ser, por ejemplo, un promotor de tejidos sumidero de almacenamiento tales como semillas, tubérculos de patata y frutos (Edwards & Coruzzi, 1990, Ann. Rev. Genet. 24: 275-303) o de tejidos sumidero metabólicos tales como meristemas (Ito et al., 1994, Plant Mol. Biol. 24: 863-878), un promotor específico de semilla como la glutelina, prolamina, globulina o promotor de albúmina de arroz (Wu et al., 1998, Plant and Cell Physiology 39: 885-889), un promotor de Vicia faba de la legúmina B4 y el gen de proteína de semilla desconocida de Vicia faba (Conrad et al., 1998, Journal of Plant Physiology 152: 708-711), un promotor de una proteína del cuerpo oleaginoso de semillas (Chen et al., 1998, Plant and Cell Physiology 39: 935-941), el promotor napa de la proteína de almacenamiento de Brassica napus, o cualquier otro promotor específico de semilla conocido en la técnica, por ejemplo, como se describe en la WO 91/14772. Además, el promotor puede ser un promotor específico de hoja tal como el promotor rbcs de arroz o tomate (Kyozuka et al., 1993, Plant Physiology 102: 991-1000), el promotor del gen de adenina metiltransferasa del virus de chlorella (Mitra and Higgins, 1994, Plant Molecular Biology 26: 85-93), o el promotor del gen aldP de arroz (Kagaya et al., 1995, Molecular and General Genetics 248: 668-674), o un promotor inducible por daño como el promotor pin2 de patata (Xu et al., 1993, Plant Molecular Biology 22: 573-588). Asimismo, el promotor puede ser inducible por tratamientos abióticos tales como temperatura, sequía o alteraciones en la salinidad o inducido por sustancias exógenamente aplicadas que activen el promotor, por ejemplo, etanol, estrógenos, hormonas vegetales tales como etileno, ácido abscísico y ácido giberélico, y metales pesados.
[0137] Un elemento intensificador del promotor también se puede usar para conseguir expresión más alta de un polipéptido de la presente invención en la planta. Por ejemplo, el elemento potenciador del promotor puede ser un intrón que se coloca entre el promotor y la secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de la presente invención. Por ejemplo, Xu et al., 1993, supra, revelan el uso del primer intrón del gen de actina 1 de arroz para mejorar la expresión.
[0138] El gen marcador seleccionable y cualquiera de las otras partes del constructo de expresión se pueden elegir de lo disponible en la técnica.
[0139] El constructo de ácidos nucleicos se incorpora en el genoma de planta según técnicas convencionales conocidas en la técnica, incluyendo transformación mediada por Agrobacterium, transformación mediada por virus, microinyección, bombardeo de partícula, transformación biolística y electroporación (Gasser et al., 1990, Science 244: 1293; Potrykus, 1990, Bio/Technology 8: 535; Shimamoto et al., 1989, Nature 338: 274).
[0140] Actualmente, la transferencia de gen mediada por Agrobacterium tumefaciens es el método elegido para generar dicotiledóneas transgénicas (para una revisión, véase Hooykas y Schilperoort, 1992, Plant Molecular Biology 19: 15-38) y también se pueden usar para transformar monocotiledóneas, aunque otros métodos de transformación se usan frecuentemente para estas plantas. Actualmente, el método elegido para generar monocotiledóneas transgénicas es el bombardeo de partícula (oro microscópico o partículas de tungsteno recubiertos con el ADN de transformación) de callos embrionarios o embriones en desarrollo (Christou, 1992, Plant Journal 2: 275-281; Shimamoto, 1994, Current Opinion Biotechnology 5: 158-162; Vasil et al., 1992, Bio/Technology 10: 667-674). Un método alternativo para la transformación de monocotiledóneas se basa en la transformación de protoplasto como describen Omirulleh et al., 1993, Plant Molecular Biology 21: 415-428.
[0141] Tras la transformación, los transformantes que han incorporado el constructo de expresión se seleccionan y regeneran en plantas enteras según métodos bien conocidos en la técnica. Frecuentemente, el procedimiento de transformación se diseña para la eliminación selectiva de genes de selección bien durante la regeneración o en las
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puede efectuar típicamente a una temperatura entre 25°C y 40°C, tal como entre 29°C y 35°C, tal como entre 30°C y 34°C, tal como alrededor de 32°C. Según la invención la temperatura se puede subir o bajar durante la fermentación.
[0160] Conforme a la presente invención, el paso de fermentación (c) incluye, sin limitación, procesos de fermentación usados para producir alcoholes (por ejemplo, etanol, metanol, butanol); ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido cítrico, ácido acético, ácido itacónico, ácido láctico, ácido glucónico); cetonas (por ejemplo, acetona); aminoácidos (por ejemplo, ácido glutámico); gases (por ejemplo, H2 y CO2); antibióticos (por ejemplo, penicilina y tetraciclina); enzimas; vitaminas (por ejemplo, riboflavina, B12, beta-caroteno); y hormonas. Procesos de fermentación preferidos incluyen procesos de fermentación alcohólica, como se conocen en la técnica. Procesos de fermentación preferidos son procesos de fermentación anaeróbicos, como se conocen bien en la técnica.
Procesos para producir productos de fermentación a partir de material que contiene almidón no gelatinizado
[0161] En este aspecto, la invención se refiere a procesos para producir un producto de fermentación a partir de material que contiene almidón sin gelatinización del material que contiene almidón (es decir, material que contiene almidón crudo). En una forma de realización solo una glucoamilasa de la invención se usa durante la sacarificación y la fermentación. Según la invención, el producto de fermentación deseado, tal como etanol, se puede producir sin licuar el lodo acuoso con el material que contiene almidón. En una forma de realización, un proceso de la invención incluye sacarificación material que contiene almidón (molido), por ejemplo, almidón granulado, por debajo de la temperatura de gelatinización en presencia de una glucoamilasa de la invención para producir azúcares que pueden ser fermentados en el producto de fermentación deseado por un organismo fermentador adecuado.
[0162] Por consiguiente, en este aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para producir un producto de fermentación de material que contiene almidón que comprende:
(a)
sacarificación de material que contiene almidón con una glucoamilasa madura comprendida en SEC ID nº: 2 o SEC ID nº: 4, preferiblemente la secuencia mostrada como los aminoácidos 19 a 573 en SEC ID nº: 2 o de SEC ID nº: 4, o una glucoamilasa que tiene al menos 80%, de forma más preferible al menos 85%, de forma más preferible al menos 90%, de forma más preferible al menos 91%, de forma más preferible al menos 92%, incluso de forma más preferible al menos 93%, de la forma más preferible al menos 94%, e incluso de la forma más preferible al menos 95%, tal como incluso al menos 95%, al menos 97%, al menos 98%, o incluso al menos 99% de identidad con la misma, a una temperatura inferior a la temperatura de gelatinización inicial de dicho material que contiene almidón,
(b)
fermentación utilizando un organismo fermentador.
[0163] Los pasos (a) y (b) del proceso de la invención se pueden realizar consecutiva o simultáneamente. En una forma de realización, un lodo que comprende agua y material que contiene almidón se prepara antes del paso (a).
[0164] El proceso de fermentación se puede llevar a cabo durante un periodo de 1 a 250 horas, preferiblemente es de 25 a 190 horas, de forma más preferible de 30 a 180 horas, de forma más preferible de 40 a 170 horas, incluso de forma más preferible de 50 a 160 horas, aún de forma más preferible de 60 a 150 horas, incluso aún de forma más preferible de 70 a 140 horas, y de la forma más preferible de 80 a 130 horas.
[0165] El término "temperatura inicial de gelatinización" se refiere a la temperatura mínima en la que la gelatinización del almidón comienza. Almidón calentado en agua empieza a gelatinizar entre 50°C y 75º, la temperatura exacta de gelatinización depende del almidón específico, y puede ser fácilmente determinada por el experto en la materia. Así, la temperatura de gelatinización inicial puede variar según la especie de planta, la variedad particular de las especies de planta al igual que con las condiciones de crecimiento. En el contexto de esta invención, la temperatura de gelatinización inicial de un material que contiene almidón dado es la temperatura en la que birrefringencia se pierde en 5% de los gránulos de almidón utilizando el método descrito por Gorinstein y Lii, 1992, Starch/Stärke 44(12): 461-466.
[0166] Antes del paso (a) un lodo de material que contiene almidón, tal como almidón granulado, que tiene 10-55% en peso de sólidos secos, preferiblemente 25-40 peso% en peso de sólidos secos, de forma más preferible 30-35% en peso de sólidos secos de material que contiene almidón se puede preparar. El lodo puede incluir agua y/o aguas de proceso, tal como vinaza (contracorriente), agua del depurador, agua del separador lateral condensad o destilada del evaporador u otra agua de proceso vegetal de producto de fermentación. Debido a que el proceso de la invención se realiza por debajo de la temperatura de gelatinización y por tanto no se produce ningún aumento de viscosidad significativo, niveles altos de vinaza se pueden utilizar si se desea. En una forma de realización, el lodo acuoso contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 70 vol. % vinaza, preferiblemente 15-60% vol. % vinaza, especialmente de aproximadamente 30 a 50 vol. % vinaza.
[0167] El material que contiene almidón se puede preparar reduciendo el tamaño de partícula, preferiblemente por molienda en húmedo o en seco, a 0,05 a 3,0 mm, preferiblemente 0,1-0,5 mm. Después de ser sometidos a un proceso de la invención, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, o
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preferiblemente al menos 99% de los sólidos secos del material que contiene almidón se convierte en un hidrolizado de almidón soluble.
[0168] El proceso de la invención se realiza a una temperatura inferior a la temperatura de gelatinización inicial. Preferiblemente la temperatura en la que se realiza el paso (a) es entre 30-75°C, preferiblemente entre 45-60°C.
[0169] En una forma de realización preferida, el paso (a) y el paso (b) se realizan como una sacarificación secuencial o simultánea y un proceso de fermentación. En tal forma de realización preferida, el proceso se lleva a cabo típicamente a una temperatura entre 25°C y 40°C, tal como entre 29°C y 35°C, tal como entre 30°C y 34°C, tal como alrededor de 32°C. Según la invención, la temperatura se puede subir o bajar durante la fermentación.
[0170] En una forma de realización, la sacarificación y la fermentación simultánea se realiza de modo que el nivel de azúcar, tal como el nivel de glucosa, se mantenga en un nivel bajo tal como por debajo de 6% en peso, preferiblemente por debajo de aproximadamente 3% en peso, preferiblemente por debajo de aproximadamente 2% en peso, más preferiblemente por debajo de aproximadamente 1% en peso, más preferiblemente incluso por debajo de aproximadamente 0,5% en peso, o más preferiblemente incluso por debajo de 0,25% en peso, tal como por debajo de aproximadamente 0,1% en peso. Tales bajos niveles de azúcar se pueden conseguir utilizando simplemente cantidades ajustadas de enzima y organismo fermentador. Un experto en la materia de la técnica puede determinar fácilmente qué cantidades de enzima y organismo fermentador hay que usar. Las cantidades empleadas de enzima y organismo fermentador también se puede seleccionar para mantener bajas concentraciones de maltosa en el caldo de fermentación. Por ejemplo, el nivel de maltosa se puede mantener por debajo de aproximadamente 0,5% en peso o debajo aproximadamente 0,2% en peso.
[0171] El proceso de la invención se puede llevar a cabo a un pH en la gama entre 3 y 7, preferiblemente de pH 3,5 a 6,
o de la forma más preferible de pH 4 a 5.
Materiales que contienen almidón
[0172] Cualquier materia prima que contenga almidón adecuado, incluyendo almidón granulado, se puede utilizar según la presente invención. La materia prima se selecciona generalmente basada en el producto de fermentación deseado. Ejemplos de materias primas que contienen almidón, adecuadas para su uso en un proceso de la presente invención, incluyen tubérculos, raíces, tallos, granos enteros, granos, mazorcas, trigo, cebada, centeno, millo, sagú, mandioca, tapioca, sorgo, arroz, guisantes, alubias o patatas dulces, o mezclas de los mismos, o cereales, materias primas que contienen azúcar, tales como melaza, materiales de fruta, caña de azúcar o remolacha azucarera, patatas, y materiales que contienen celulosa, tales como madera o residuos vegetales, o mezclas derivadas. Se contemplan ambos tipos cerosos y no cerosos de maíz y cebada.
[0173] El término "almidón granulado" se refiere a almidón no cocinado crudo, es decir, almidón en su forma natural como se encuentra en los cereales, tubérculos o granos. El almidón se forma dentro de células vegetales como ínfimos gránulos insolubles en agua. Cuando se ponen en agua fría, los gránulos de almidón pueden absorber una pequeña cantidad del líquido e hincharse. A temperaturas de hasta 50°C a 75°C la hinchazón pueden ser reversible. No obstante, con temperaturas más altas comienza una hinchazón irreversible llamada "gelatinización". El almidón granulado que se va a procesar puede ser una calidad de almidón altamente refinado, preferiblemente al menos 90%, al menos 95%, al menos 97% o al menos 99,5% puro o puede ser un material que contiene almidón más crudo que incluye grano entero molido incluyendo fracciones no amiláceas tales como residuos de germen y fibras. La materia prima, tal como el grano entero, se muele para descubrir la estructura y permitir más tratamiento. Dos procesos de molienda se prefieren según la invención: molienda en seco y en húmedo. En la molienda en seco, avellanas enteras se muelen y usan. La molienda en húmedo da una buena separación de germen y la harina (gránulos de almidón y proteína) y frecuentemente se aplica en lugares donde el hidrolizado de almidón se usa para la producción de jarabes. Tanto la molienda en húmedo como en seco son bien conocidas en la técnica de tratamiento de almidón y están igualmente contempladas para el proceso de la invención.
[0174] El material que contiene almidón se reduce en tamaño de partícula, preferiblemente por molienda en húmedo o en seco, para exponer más área de superficie. En una forma de realización, el tamaño de partícula es entre 0,05 a 3,0 mm, preferiblemente 0,1-0,5 mm, o de modo que al menos 30%, preferiblemente al menos 50%, de forma más preferible al menos 70%, incluso de forma más preferible al menos 90% del material que contiene almidón pase a través de una criba con una pantalla de 0,05 a 3,0 mm, preferiblemente una pantalla de 0,1-0,5 mm.
Productos de fermentación
[0175] El término "producto de fermentación" se refiere a un producto producido por un proceso que incluye un paso de fermentación que utiliza un organismo fermentador. Los productos de fermentación contemplados según la invención incluyen alcoholes (por ejemplo, etanol, metanol, butanol); ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido cítrico, ácido acético, ácido itacónico, ácido láctico, ácido glucónico); cetonas (por ejemplo, acetona); aminoácidos (por ejemplo, ácido glutámico); gases (por ejemplo, H2 y CO2); antibióticos (por ejemplo, penicilina y etraciclina); enzimas; vitaminas (por ejemplo, riboflavina, B12, beta-caroteno); y hormonas. En una forma de realización preferida, el producto de
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