ES2442294T3 - Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos - Google Patents
Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2442294T3 ES2442294T3 ES09007549.0T ES09007549T ES2442294T3 ES 2442294 T3 ES2442294 T3 ES 2442294T3 ES 09007549 T ES09007549 T ES 09007549T ES 2442294 T3 ES2442294 T3 ES 2442294T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptides
- cells
- peptide
- tumor
- hla
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 301
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 185
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 title description 15
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 title description 12
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 title 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 107
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims abstract description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 238000013035 low temperature curing Methods 0.000 description 83
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 55
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 49
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 description 45
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 32
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 30
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 28
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 28
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 27
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 27
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 26
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 25
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 22
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 22
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 14
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 14
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 13
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 13
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 9
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 9
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 9
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 8
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 8
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 7
- 238000001342 constant potential amperometry Methods 0.000 description 7
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 6
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 6
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 6
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 5
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 4
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003527 anti-angiogenesis Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 3
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000006427 angiogenic response Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 101100372760 Homo sapiens FLT1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010046117 N-palmitoyl-5,6-dipalmitoyl-S-glycerylcysteinyl-seryl-serine Proteins 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 210000004712 air sac Anatomy 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N tripalmitoyl-S-glyceryl-cysteinyl-seryl-serine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 240000002022 Anthriscus cerefolium Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100508409 Caenorhabditis elegans ifa-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000238586 Cirripedia Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 101100372766 Mus musculus Kdr gene Proteins 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 108010082093 Placenta Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 1
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000055590 human KDR Human genes 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 108700043516 mouse H-2Kb Proteins 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONSIBMFFLJKTPT-UHFFFAOYSA-L zinc;2,3,4,5,6-pentachlorobenzenethiolate Chemical compound [Zn+2].[S-]C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl.[S-]C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl ONSIBMFFLJKTPT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
Un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, o un fragmentoinmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el péptido, para su uso en eltratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores.
Description
Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos 5
La presente invención proporciona un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores.
La presente divulgación se refiere a péptidos que son extremadamente eficaces como vacunas contra el cáncer, y fármacos para el tratamiento y la prevención de tumores, que contienen estos péptidos.
15 El crecimiento tumoral en general está limitado a 1~2 mm3 en ausencia de un suministro de sangre vascularizada, y la angiogénesis tiene un papel crítico en la invasión, crecimiento y metástasis de tumores (Folkman, J. (2002) Semin. Oncol. 29: 15-8, Folkman, J. (1996) Nat. Med. 2: 167-8, Kerbel y Folkma, (2002). Nature Rev. Cancer. 2: 727-39, Brown et al., (1995) Hum. Pathol. 26: 86-91, Eberhard et al., (2000) Cancer Res. 60: 1388-93). También se ha mostrado que la inhibición de la angiogénesis tumoral se asocia con la supresión de la progresión tumoral. Para alcanzar la supresión de la angiogénesis, un número de investigadores han estado examinando estrategias terapéuticas que se dirigen al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y al receptor de VEGF (VEGFR), que desempeñan papeles críticos en la regulación del proceso de angiogénesis. Estos estudios han mostrado que el crecimiento tumoral se puede suprimir con éxito in vitro e in vivo usando anticuerpos monoclonales, receptores
25 recombinantes o inhibidores para la transducción de señales (El-Mousawi et al., (2003) J.Biol.Chem. 278: 46681-91, Stefanik et al., (2001) J. Neurooncol. 55: 91-100, Wood et al., (2000) Cancer Res. 60: 2178-89, Luttun et al., (2002) Nat. Med. 8: 831-40, Lyden et al., (2001) Nat. Med. 7: 1194-201, Lu et al., (2001) Cancer Res. 61: 7002-8). Sin embargo, estas estrategias requieren la administración frecuente o continua de los reactivos a niveles de dosis relativamente altos, que pueden estar asociados con inconveniencias y efectos secundarios significativos.
VEGF se une a dos receptores tirosina quinasa relacionados, VEGFR1 (Flt-1) y VEGFR2 (KDR), que se expresan intensamente en células endoteliales en tejido tumoral pero no en tejido normal (Risau, W. (1997) Nature. 386: 6714, Ferrara y Davis-Smyth, (1997) Endor. Rev. 18: 4-25, Shibuya et al., (1999) Curr. Topics. Microbiol. Immunol. 237: 59-83, Plate et al., (1994) Int. J. Cancer. 59: 520-9). VEGFR1 es el primer receptor de VEGF que se ha identificado
35 (Shibuya et al., (1990) Oncogene 5: 519-24), e interacciona con VEGF (VEGF-A) y con otros dos miembros de la familia de VEGF, VEGF-B (Olofsson et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2576-81) y el factor de crecimiento de placenta (PlGF) (Maglione et al., 1991. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 9267-71). Al desplazar a VEGF de VEGFR1, se espera que PlGF haga que más VEGF esté disponible para unirse y activar VEGFR2 y de esta manera aumentar la angiogénesis dirigida por VEGF (Park et al., (1994) J. Biol. Chem. 269: 25646-54). Otros estudios han mostrado que existe una sinergia entre VEGF y PlGF in vivo, especialmente durante situaciones patológicas, como se evidencia por la tumorigénesis alterada y la fuga vascular en ratones PlGF -/-(Carmeliet et al., (2001) Nat. Med.
7: 575-83).
Los documentos WO03/086450 y US2005/0175624 describen secuencias de oligonucleótidos y polipéptidos de
45 moléculas que perteneces a la familia del factor de permeabilidad vascular (VPF), sus receptores y correceptores y a sus modificaciones en inmunoterapia activa contra entidades patológicas cuyo curso se asocia con un aumento en la vasculatura. Dichos procedimientos se pueden usar, entre otros, en monoterapia o terapia combinada para el tratamiento de cáncer y su metástasis.
Los documentos WO2004/024766 y EP 1 548 032 describen nonapéptidos, decapéptidos y péptidos con inducibilidad de células T citotóxicas así como fármacos para tratar o prevenir tumores, donde los fármacos comprenden estos péptidos.
Artículos recientes han mostrado que la vacunación usando ADNc o proteína recombinante de VEGFR2 de ratón se
55 asocia con efectos antitumorales significativos en modelos tumorales de ratón (Li et al., (2002) J. Exp. Med. 195: 1575-84, Niethammer et al., (2002) Nat. Med. 8: 1369-75). Pero estos resultados no pueden garantizar directamente la aplicación clínica de esta estrategia, ya que usaron el homólogo de ratón de VEGFR2 humano en sistemas de ratón que se considera que son significativamente diferentes del equivalente humano.
Abreviaciones usadas en la presente solicitud:
LTC, linfocito T citotóxico
VEGF, factor de crecimiento endotelial vascular
PlGF, factor de crecimiento de placenta
65 VEGFR1, receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular VEGFR2, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular
RTG, ratones transgénicos
AAT, antígeno asociado a tumores
i.d., inyección intradérmica
s.c., inyección subcutánea
5 IFA, adyuvante de Freund incompleto
La presente invención proporciona un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, o un fragmento inmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el péptido, para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores.
La presente divulgación proporciona péptidos que inducen células T citotóxicas contra células endoteliales que expresan endógenamente VEGFR1. Los péptidos comprenden una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2,
15 13 o una secuencia en donde se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos. En ciertas formas de realización, el segundo aminoácido desde el extremo N es leucina o metionina. En algunas formas de realización, el aminoácido Cterminal es valina o leucina.
También se divulgan péptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, o una secuencia en donde se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos. En ciertas formas de realización, el segundo aminoácido a partir del extremo N es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano. En algunas formas de realización, el aminoácido C-terminal es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina.
La presente divulgación proporciona además composiciones farmacéuticas para el tratamiento o la prevención de 25 tumores, en donde la composición comprende los péptidos de la divulgación.
También se divulgan exosomas que presentan en su superficie un complejo que comprende el péptido de esta divulgación y un antígeno HLA. En algunas formas de realización, el antígeno HLA es HLA-A24 (por ejemplo, HLA A2402) o HLA-A02 (HLA-0201).
También se proporcionan métodos de inducir células presentadoras de antígeno que tienen alta inducibilidad de células T citotóxicas y métodos para inducir células T citotóxicas que comprenden administrar los péptidos de la divulgación a un paciente. En algunas formas de realización, los métodos pueden comprender transferir un gen que comprende un polinucleótido que codifica el péptido de la invención a células presentadoras de antígeno. La
35 divulgación proporciona células T citotóxicas y células presentadoras de antígeno aisladas que son inducidas por los métodos de la divulgación. También se divulgan células presentadoras de antígeno, que comprenden un complejo formado entre un antígeno HLA y el péptido de la divulgación.
También se divulgan vacunas para inhibir la angiogénesis en un área enferma, en donde la vacuna comprende el péptido de la divulgación como principio activo. La vacuna de la divulgación se puede pretender para la administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A24 o HLA-A02. En algunas formas de realización, la vacuna se usa para suprimir el crecimiento y/o la metástasis de tumores malignos.
También se divulgan métodos de tratamiento o prevención de tumores en un sujeto que comprenden la
45 administración a dicho sujeto de una vacuna que comprende un péptido de la divulgación o un fragmento inmunológicamente activo o un polinucleótido que codifica el péptido.
También se divulgan métodos de tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis en un sujeto que comprenden administrar una vacuna de la divulgación. En algunas formas de realización, la enfermedad mediada por angiogénesis es retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis o ateroesclerosis.
Se debe entender que tanto el anterior compendio de la invención como la siguiente descripción detallada son de una forma de realización preferida, y no son restrictivas de la invención u otras formas de realización alternativas de la invención.
La figura 1 es un gráfico que muestra el establecimiento de clones de LTC restringidos a HLA-A*0201 usando candidatos de epítopos derivados de VEGFR1. Citotoxicidad de cada clon de LCT contra células T2 pulsadas con cada péptido epítopo que se une a HLA-A*0201. Se usaron células T2 para las respuestas de LTC en presencia o ausencia de cada péptido. Los clones de LTC mostraron citotoxicidades específicas contra las células diana pulsadas con los péptidos correspondientes. Relación E/D indica efector/célula diana.
La figura 2 es un gráfico que muestra el establecimiento de clones de LTC restringidos a HLA-A*2402 usando
65 candidatos de epítopos derivados de VEGFR1. Se usaron células A24-LCL para las respuestas de LTC restringidas a HLA-A*2402 en presencia o ausencia de cada péptido que se une a HLA-A*2402. Los clones de LTC mostraron citotoxicidades específicas contra las células diana pulsadas con los péptidos correspondientes. Relación E/D indica efector/célula diana.
La figura 3 es un gráfico que muestra la citotoxicidad contra células que expresan endógenamente VEGFR1. Se
5 examinó la citotoxicidad de clones de LTC HLA-A*2402 contra células que expresan VEGFR1 (AG1-G1-Flt1) y control (AG1-G1) con un ensayo de 4 horas de liberación de 51Cr. Estos clones de LTC mostraron citotoxicidades contra AG1-G1-Flt1, pero no contra AG1-G1. Relación E/D indica efector/célula diana.
La figura 4 es un gráfico que muestra los resultados de la respuesta de LTC in vivo asociada con la vacunación usando péptidos epítopos de VEGFR1 mediante ensayo ELISPOT de INF-γ. Se inyectaron los péptidos conjugados a IFA por vía i.d. en RTG A2/Kb el día 0 y el día 11. El día 21, se usaron los esplenocitos de los ratones vacunados como células respondedoras, y se usaron células T2 pulsadas con o sin péptidos como células estimuladoras para el ensayo ELISPOT. Se observó la producción específica de IFN-γ para el péptido correspondiente en los ratones vacunados con los péptidos VEGFR1-1087, -770, -417. (Relación E/D: x20).
15 La figura 5 es un gráfico que muestra los resultados de la inhibición in vivo de angiogénesis inducida por tumor. Las respuestas angiogénicas inducidas por células MC38 en RTG A2/Kb. Los ratones se vacunaron dos veces con HBSS, IFA solo y péptido de VEGFR1 conjugado con IFA (VEGFR1-1087, -770, -417). Las diferencias eran visibles macroscópicamente en las cámaras implantadas retiradas de la fascia s.c. de ratones vacunados. Cuantificación de vasos recientes formados en la respuesta angiogénica. Se observó una inhibición significativa de la angiogénesis inducida por el tumor en los ratones vacunados con los péptidos VEGFR1-1087, -770, -417. La barra de error indica el e.e.
La figura 6 es un gráfico que muestra los resultados del efecto antitumoral in vivo. Se inocularon i.d. RTG A2/Kb con
25 células MCA205. Se vacunaron con HBSS, IFA solo y los péptidos VEGFR1-1087, -770, -417 conjugados con IFA 4 días y 11 días después (la flecha indicada). Se observó supresión significativa del crecimiento tumoral con la vacunación usando los péptidos VEGFR1-1087, -770, conjugados con IFA.
Las palabras “un”, “una”, “el” y “la” como se usan en el presente documento significan “al menos uno” a menos que se indique específicamente de otra manera.
35 Se ha mostrado que la angiogénesis es un mecanismo crítico para la progresión tumoral. Estudios múltiples han sugerido que se puede suprimir el crecimiento tumoral si se puede inhibir la angiogénesis tumoral usando varios tipos de agentes antiangiogénicos. En la presente invención, examinamos la posibilidad de desarrollar una inmunoterapia nueva dirigida a VEGFR1. Primero identificamos los epítopos peptídicos de VEGFR1 de HLA-A2 y A24, y se establecieron con éxito clones de LTC con potente citotoxicidad contra células endoteliales que expresan endógenamente VEGFR1. En ratones transgénicos A2/Kb, la vacunación usando estos péptidos epítopos in vivo se asoció con supresión significativa de crecimiento tumoral en un modelo terapéutico. En ensayos de antiangiogénesis, la angiogénesis inducida por tumores se suprimió significativamente con la vacunación. Estos resultados in vitro e in vivo sugieren firmemente que VEGFR1 podría ser una diana prometedora, y apoyan la razón fundamental definitiva del desarrollo clínico para inmunoterapia antiangiogénica contra varios tipos de cánceres.
45 En la presente invención, examinamos la eficacia de esta nueva inmunoterapia en sistemas estrechamente relacionados a marcos clínicos. Identificamos los péptidos epítopos de VEGFR1 humano restringidos a HLA-A*0201 y A*2402 (Rammensee et al., 1995. Immunogenetics. 41: 178-228) y mostramos que los LTC inducidos por estos péptidos tienen citotoxicidad potente y específica contra no solo células diana pulsadas con los péptidos sino también células diana que expresan endógenamente VEGFR1 de una manera restringida por HLA de clase I. Además, examinamos los efectos antitumorales in vivo de la vacunación con estos péptidos epítopos usando un modelo de ratón único que se puede trasladar directamente al marco clínico. Nuestro sistema modelo usa ratones transgénicos (RTG) A2/Kb, que se ha mostrado que son útiles para el análisis de epítopos de LTC humanos. Hay aproximadamente un 71% de concordancia entre los seres humanos y los RTG A2/Kb en el repertorio de LTC
55 (Wentworth et al., (1996) Eur. J. Immunol. 26: 97-101). Para construir sistemas tumorales, trasplantamos células tumorales de ratón singénicas que se indujeron químicamente en ratones C57BL/6 (H-2Kb) que no expresan moléculas HLA-A*0201. Este sistema tumoral, que combina RTG A2/Kb y la línea celular de ratón H-2Kb, ofrece un marco único. Puesto que las células endoteliales en los RTG A2/Kb expresan la molécula HLA-A*0201, los LTC inducidos por la vacunación usando péptidos epítopos de VEGFR1 reconocen las células endoteliales que expresan tanto HLA-A*0201 como VEGFR1. Por tanto, los efectos antitumorales in vivo de una vacuna antiangiogénica se pueden evaluar de una manera restringida por HLA-A*0201. Sin embargo, no reconocen células tumorales incluso si expresan VEGFR1 porque no expresan HLA-A*0201. En este modelo tumoral in vivo, la vacunación usando estos péptidos epítopos se asoció con supresión significativa del crecimiento tumoral. En un ensayo antiangiogénesis, la angiogénesis inducida por tumor se suprimió significativamente con la vacunación usando estos péptidos epítopos.
65 Estos resultados muestran que la vacunación usando péptidos epítopos derivados de VEGFR1 induce una respuesta inmunitaria antitumoral.
La identificación de antígenos asociados a tumores (AAT) ha permitido el desarrollo clínico de vacunas contra el cáncer basadas en péptidos, que podrían inducir LTC y lisar células tumorales de una manera restringida por HLA de clase I (Bruggen et al., (1991) Science. 254: 1643-7, Boon et al., (1996) J. Exp. Med. 183: 725-9, Rosenberg et al., (1998) Nat. Med. 4: 321-7, Butterfield et al., (1999) Cancer Res. 59: 3134-42). Múltiples ensayos clínicos usando AAT han descrito que se observaron regresiones tumorales en pacientes de melanoma (Rosenberg et al., (1998) Nat. Med. 4: 321-7, Nestle et al., (1998) Nat. Med. 4: 328-32, Thurner et al., (1999) J. Exp. Med. 190: 1669-78, Belli et al., (2002) J. Clin. Oncol. 20: 4169-80, Coulie et al., (2002) Immunol. Rev. 188: 33-42). Se ha sugerido que la eficacia clínica se podría llevar a cabo por pérdida o disminución de moléculas de HLA de clase I en las células tumorales (Cormier et al., (1998) Int. J. Cancer. 75: 517-24, Paschen et al., (2003) Int. J. Cancer. 103: 759-67, Fonteneau et al., (1997) J. Immuol. 159: 2831-9, Reynolds et al., (1998) J. Immunol. 161: 6970-6). Se ha estimado que la frecuencia de tumores que muestran alguna alteración en la expresión de moléculas de HLA de clase I es mayor del 40% (Cormier et al., (1998) Int. J. Cancer. 75: 517-24, Paschen et al., (2003) Int. J. Cancer. 103: 759-67). Por tanto, una parte significativa de las células tumorales podrían escapar de los LTC específicos al epítopo de clase I, incluso si los LTC se pudieran inducir con éxito por vacunas contra el cáncer que se dirigen a las células tumorales mismas. El desarrollo de vacunas eficaces contra células endoteliales implicadas en la angiogénesis tumoral es un planteamiento alternativo. Las células endoteliales son genéticamente estables, no muestran disminución de moléculas de HLA de clase I, y están críticamente implicadas en la progresión de una variedad de tumores. Además, los LTC podrían causar directamente daño a las células endoteliales sin penetrar ningún otro tejido, y la lisis de incluso números bajos de células endoteliales en la vasculatura tumoral puede producir la destrucción de la integridad de los vasos lo que produce la inhibición de grandes números de células tumorales (Folkman, J. (1995) Nat. Med. 1: 27-31). Por tanto, las células endoteliales son una buena diana para la inmunoterapia contra el cáncer. Para prevenir específica y eficazmente la angiogénesis tumoral con la respuesta de LTC, se necesita seleccionar la diana apropiada entre las moléculas relacionadas con la angiogénesis.
VEGF se une a dos receptores tirosina quinasa relacionados, VEGFR1 (Flt-1) y VEGFR2 (KDR), que se expresan intensamente en células endoteliales en tejido tumoral pero no en tejido normal (Risau, W. (1997) Nature. 386: 6714, Shibuya et al., (1999) Curr. Topics. Microbiol. Immunol. 237: 59-83, Plate et al., (1994) Int. J. Cancer. 59: 520-9). La supresión de estos receptores mostró efectos antitumorales incluyendo anticuerpos neutralizantes, receptores recombinantes o inhibidores de quinasas (El-Mousawi et al., (2003) J. Biol. Chem. 278: 46681-91, Stefanik et al., (2001) J. Neurooncol. 55: 91-100, Wood et al., (2000) Cancer Res. 60: 2178-89, Luttun et al., (2002) Nat. Med. 8: 831-40, Lyden et al., (2001) Nat. Med. 7: 1194-201, Lu et al., (2001) Cancer Res. 61: 7002-8). Los anticuerpos neutralizantes anti-VEGFR1 atenuaron eficazmente el crecimiento tumoral y la neovascularización de una manera dependiente de la dosis (Luttun et al., (2002) Nat. Med. 8: 831-40). Además, el tratamiento de combinación con reactivos que bloquean tanto VEGFR1 como VEGFR2 o el uso de un anticuerpo bifuncional (‘diacuerpo’) contra VEGFR1 y VEGFR2, como tales estrategias produjeron una inhibición más potente del crecimiento de vasos que la monoterapia con un único anticuerpo o con el anticuerpo parental monofuncional (Lyden et al., (2001) Nat. Med. 7: 1194-201, Lu et al., (2001) Cancer Res. 61: 7002-8).
En la presente divulgación usando nuestros nuevos sistemas modelos in vitro e in vivo, hemos demostrado que una inmunoterapia que se dirige a la angiogénesis inducida por tumor es eficaz. Al principio, identificamos los péptidos epítopos de VEGFR1 restringidos a HLA-A*0201 y A*2402 que son alelos de HLA reconocidos con frecuencia (Rammensee et al., 1995. Immunogenetics. 41: 178-228). Los LTC se indujeron con éxito con estos péptidos, y mostraron actividades citotóxicas potentes contra no solo células diana pulsadas con péptidos sino también células que expresan VEGFR1 endógenamente. Nuestros descubrimientos demostraron claramente que el VEGFR1 humano es inmunogénico en el sistema humano.
Después, demostramos efectos antitumorales in vivo usando múltiples líneas de células tumorales y RTG A2/Kb, un buen sistema modelo para evaluar las respuestas inmunitarias en seres humanos contra células tumorales con pérdida de expresión de HLA de clase I. Se ha mostrado que hay aproximadamente un 71% de concordancia entre el repertorio de LTC de seres humanos y RTG A2/Kb (Wentworth et al., (1996) Eur. J. Immunol. 26: 97-101). Por tanto, los LTC inducidos por la vacunación usando péptidos epítopos pudieron reconocer células endoteliales, que derivan de RTG A2/Kb y expresan VEGFR1 y HLA-A*0201, pero no reconocen las células tumorales que no tienen moléculas de MHC de clase I “humanas”. Usando este sistema modelo de tumores único, se observó inhibición significativa del crecimiento tumoral con la vacunación usando estos péptidos epítopos. Esta vacuna basada en péptidos también se asoció con supresión significativa de tumores antes de la vacunación. Estos resultados muestran que nuestra estrategia de vacunación es eficaz incluso para tumores con deficiencia en HLA, que se considera que es uno de los mecanismos de escape de tumores. También hemos mostrado en un ensayo DAS que la angiogénesis inducida por el tumor se inhibió significativamente con la vacunación usando estos péptidos epítopos. Este resultado muestra que la inhibición de angiogénesis tumoral se puede alcanzar con vacunación con péptidos que se dirigen a la molécula expresada en células endoteliales vasculares inducidas por el tumor.
Estos resultados, in vitro e in vivo, muestran que VEGFR1 es una diana útil de terapia inmunológica que usa inmunidad celular y apoya la razón fundamental definitiva del desarrollo clínico de esta estrategia contra una amplia gama de cánceres.
Respecto a los antígenos HLA, los datos presentados aquí muestran que los usos del tipo A-24 o el tipo A-02 (que se dice que se expresan mucho entre los japoneses) son favorables para obtener resultados eficaces. Los usos de subtipos tales como A-2402 y A-0201 son incluso más preferibles. Sin embargo, en clínica, el tipo de antígeno HLA del paciente que requiere tratamiento se investiga de antemano, lo que permite la selección apropiada de péptidos 5 que tienen niveles altos de afinidad de unión a este antígeno, o que tienen inducibilidad de células T citotóxicas (LTC) por presentación de antígenos. Además, para obtener péptidos que muestran alta afinidad de unión e inducibilidad de LTC, se puede llevar a cabo la sustitución o adición de 1, 2 o varios aminoácidos basándose en la secuencia de aminoácidos del péptido parcial de VEGFR1 natural. En el presente documento, el término “varios” significa 5 o menos, o preferiblemente 3 o menos. Asimismo, además de los péptidos que se muestran de forma natural, puesto que la regularidad de las secuencias de péptidos mostradas por la unión a antígenos HLA ya se conoce (Kubo RT, et al., (1994) J. Immunol., 152, 3913-24; Rammensee HG, et al., (1995) Immunogenetics. 41:178228; Kondo A, et al., (1994) J. Immunol. 155:4307-12), se pueden realizar modificaciones basadas en tal regularidad en los péptidos obtenidos. Por ejemplo, los péptidos que muestran alta afinidad de unión a HLA-24 tienen su segundo aminoácido a partir del extremo N sustituido con fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano, y los péptidos
15 cuyo aminoácido en el extremo C se sustituye con fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina también se pueden usar favorablemente. Por otro lado, los péptidos que muestran alta afinidad de unión a HLA-0201 tienen su segundo aminoácido a partir del extremo N sustituido con leucina o metionina, y los péptidos cuyo aminoácido Cterminal está sustituido con valina o leucina se pueden usar favorablemente. Además, se pueden añadir 1 o 2 aminoácidos al extremo N y/o al extremo C del péptido.
Sin embargo, cuando la secuencia peptídica es idéntica a una parte de la secuencia de aminoácidos de una proteína endógena o exógena que tienen una función diferente, se pueden inducir efectos secundarios tales como trastornos autoinmunitarios o síntomas alérgicos contra sustancias específicas, por tanto, preferiblemente, se evitan situaciones en que la secuencia coincide con la secuencia de aminoácidos de otra proteína realizando una
25 búsqueda de homología usando las bases de datos disponibles. Además, si está claro de las búsquedas de homología que ni siquiera existen péptidos en los que 1 o 2 aminoácidos son diferentes, no hay peligro de que modificaciones de la secuencia de aminoácidos anteriormente mencionada para aumentar la afinidad de unión con antígenos HLA y/o aumentar la inducibilidad de LTC produzcan tales problemas.
Aunque se espera que péptidos que tienen alta afinidad de unión a los antígenos HLA como se describe anteriormente sean muy eficaces como vacunas contra el cáncer, los péptidos candidatos, que se seleccionan según la presencia de alta afinidad de unión como un indicador, se deben examinar para la presencia real de inducibilidad de LTC. La confirmación de la inducibilidad de LTC se logra mediante inducción de células presentadoras de antígeno que tienen antígenos MHC humanos (por ejemplo, linfocitos B, macrófagos y células
35 dendríticas) o más específicamente células dendríticas derivadas de leucocitos mononucleares de sangre periférica humana, y después de la estimulación con los péptidos, mezcla con células CD8 positivas, y después medida de la actividad citotóxica contra las células diana. Como el sistema de reacción, se pueden usar animales transgénicos que se han producido para que expresen un antígeno HLA humano (por ejemplo, los descritos en BenMohamed et al., (2000) Hum. Immunol.; 61(8):764-79, artículos relacionados, libros, Linkout). Por ejemplo, las células diana se pueden radiomarcar con 51Cr y similares, y se puede calcular la actividad citotóxica a partir de la radioactividad liberada de las células diana. De forma alternativa, se puede examinar midiendo el IFN-γ producido y liberado por los LTC en presencia de células presentadoras de antígeno que tienen péptidos inmovilizados, y visualizando la zona de inhibición en el medio usando anticuerpos monoclonales anti-IFN-γ.
45 Como resultado de examinar la inducibilidad de los LTC de los péptidos como se describe anteriormente, los que tienen alta afinidad de unión a un antígeno HLA no tenían necesariamente una inducibilidad alta. Además, nonapéptidos o decapéptidos seleccionados de péptidos que comprenden las secuencias de aminoácidos indicadas por VLLWEIFSL (SEQ ID NO: 1), TLFWLLLTL (SEQ ID NO: 2), NLTATLIVNV (SEQ ID NO: 13), SYGVLLWEIF (SEQ ID NO: 32) mostraron inducibilidad de LTC particularmente alta.
Además, la presente divulgación proporciona péptidos inmunogénicos de menos de aproximadamente 40 aminoácidos, con frecuencia menos de aproximadamente 20 aminoácidos, habitualmente menos de aproximadamente 15 aminoácidos que tienen inducibilidad de células T citotóxicas, y que comprenden la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 32 en la que se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos. En algunas formas
55 de realización preferidas, el péptido inmunogénico tiene una secuencia de aminoácidos que comprende 10 aminoácidos indicados en SEQ ID NO: 32 en la que se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos pueden tener inducibilidad de LTC siempre que no coincida con la secuencia de aminoácidos de otras proteínas. En particular, la sustitución de aminoácidos a fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano en el segundo aminoácido a partir del extremo N, y a fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina en el aminoácido C-terminal, y la adición de aminoácidos de 1 o 2 aminoácidos en el extremo N y/o el extremo C son ejemplos favorables. El experto en la materia reconocerá que además de las sustituciones y adiciones de aminoácidos, también se pueden usar fragmentos inmunológicamente activos de los péptidos en los métodos de la divulgación. Los métodos para determinar fragmentos activos se conocen bien en la técnica.
65 También se divulgan péptidos que tienen inducibilidad de células T citotóxicas y comprenden la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2 o 13, en la que se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos. La secuencia de aminoácidos que comprende 9 o 10 aminoácidos indicada por SEQ ID NO: 1, 2 o 13, en la que se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos puede tener inducibilidad de LTC siempre que no coincida con la secuencia de aminoácidos de otras proteínas. En particular, la sustitución de aminoácido a leucina o metionina en el segundo aminoácido a partir del extremo N, y a valina o leucina en el aminoácido C-terminal, y la adición de aminoácidos de 1
5 o 2 aminoácidos en el extremo N y/o el extremo C son ejemplos favorables. El experto en la materia reconocerá que además de sustituciones y adiciones de aminoácidos, también se pueden usar fragmentos inmunológicamente activos de los péptidos en los métodos de la divulgación. Los métodos para determinar fragmentos activos se conocen bien en la técnica. Los clones de LTC obtenidos por estimulación de estos péptidos modificados pueden reconocer los péptidos originales y producir daño.
El péptido de la invención y los péptidos descritos en el presente documento se pueden preparar usando técnicas bien conocidas. Por ejemplo, los péptidos se pueden preparar sintéticamente, por tecnología de ADN recombinante
o síntesis química. Los péptidos de la invención se pueden sintetizar de forma individual o como polipéptidos más
largos que comprenden dos o más péptidos. Los péptidos preferiblemente están aislados, es decir, sustancialmente 15 libres de otras proteínas naturales de la célula huésped y fragmentos de las mismas.
Los péptidos pueden contener modificaciones tales como glicosilación, oxidación de la cadena lateral o fosforilación, siempre que las modificaciones no destruyan la actividad biológica de los péptidos como se describe en el presente documento. Otras modificaciones incluyen la incorporación de D-aminoácidos u otros miméticos de aminoácidos que se pueden usar, por ejemplo, para aumentar la semivida en suero de los péptidos.
Los péptidos de esta divulgación se pueden preparar en una combinación, que comprende 1 o más péptidos de la divulgación para su uso como vacuna contra el cáncer que puede inducir LTC in vivo o ex vivo. Los péptidos pueden estar en una mezcla o se pueden conjugar entre sí usando técnicas estándar. Por ejemplo, los péptidos se pueden
25 expresar como una única secuencia polipeptídica. Los péptidos en la combinación pueden ser iguales o diferentes. Al administrar los péptidos de esta divulgación, los péptidos se pueden presentar a una densidad alta en los antígenos HLA de las células presentadoras de antígeno, después se inducen los LTC que específicamente reaccionan hacia el complejo formado ente el péptido presentado y el antígeno HLA y se induce una respuesta inmunitaria fuerte contra las células vasculares endoteliales en las células tumorales. De forma alternativa, se pueden obtener células presentadoras de antígeno que tienen inmovilizados los péptidos de esta divulgación en su superficie celular retirando las células dendríticas de los sujetos, estas se estimulan ex vivo por los péptidos de esta divulgación, se inducen LTC en los sujetos mediante la readministración de estas células a los sujetos, y como resultado, se puede aumentar la agresividad hacia las células diana.
35 Más específicamente, la presente divulgación describe composiciones inmunogénicas para el tratamiento de tumores o prevención de la proliferación, metástasis, y similares, de tumores. Las composiciones comprenden 1 o más péptidos de esta divulgación. Los péptidos pueden ser iguales o diferentes en las composiciones. Además, la angiogénesis en el sitio patológico está estrechamente vinculada a tumores, así como a enfermedades tales como retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis y ateroesclerosis, y también a metástasis de tumores sólidos (Folkman, J., (1995) Nature Med. 1:27-31; Bicknell et at, (1996) Curr. Opin. Oncol. 8:60-5). Por tanto, los péptidos de esta divulgación se pueden usar para el tratamiento de tumores, enfermedad mediada por angiogénesis tal como retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis y ateroesclerosis, así como metástasis de tumores sólidos.
45 Se encontró que los péptidos de esta divulgación inhibían la formación de vasos sanguíneos tortuosos, que son morfológicamente diferentes de los vasos sanguíneos normales y se forman en tejidos tumorales malignos, y los resultados de analizar la cicatrización y fertilidad en ratones vacunados confirmó que no son efectos adversos en angiogénesis fisiológica normal. Además, cuando se probó la citotoxicidad contra células endoteliales no proliferativas o proliferativas in vitro usando clones de LTC que reconocen los péptidos de esta divulgación, se encontró que estos clones mostraban actividad más intensa hacia células endoteliales proliferativas que hacia células endoteliales no proliferativas. Más específicamente, funcionan muy específicamente hacia trastornos en los que se observan células endoteliales proliferativas y en particular cáncer.
Se puede realizar fácilmente la estimulación in vivo e in vitro de células dendríticas por los péptidos de esta
55 divulgación exponiendo las células a una alta concentración de los péptidos de modo que estos péptidos se intercambian con péptidos que estaban originalmente inmovilizados en las células. Por tanto, los péptidos usados en esta divulgación deben tener al menos cierto nivel de afinidad de unión a antígenos HLA.
Los péptidos de esta divulgación se pueden administrar directamente o como una composición farmacéutica que se ha formulado por métodos convencionales de formulación. En tales casos, además de los péptidos de esta divulgación, se pueden incluir soportes, excipientes y similares que habitualmente se usan para fármacos según sea apropiado sin limitaciones particulares. Las composiciones inmunogénicas de esta divulgación se pueden usar para el tratamiento o prevención de varios tumores tales como cáncer gástrico, cáncer duodenal, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata y tumor cerebral. Los péptidos de esta divulgación se dirigen a las 65 células endoteliales de vasos sanguíneos que se forman de nuevo en tejidos tumorales y no se dirigen a las células
tumorales mismas, por tanto, una gran variedad de tumores se vuelven dianas de tratamiento, y no hay limitaciones particulares a su uso.
Las composiciones inmunogénicas para el tratamiento y/o la prevención de tumores, que comprenden los péptidos de esta divulgación como los principios activos, se pueden administrar con un adyuvante de modo que se establezca eficazmente la inmunidad celular, o se pueden administrar con otros principios activos tales como agentes antitumorales, y se pueden administrar mediante formulación en gránulos. Un adyuvante que se puede aplicar incluye los descritos en la bibliografía (Johnson AG. (1994) Clin. Microbiol. Rev., 7:277-89). Los adyuvantes ejemplares incluyen, fosfato de aluminio, hidróxido de aluminio o alumbre. Además, se pueden usar convenientemente formulaciones de liposomas, formulaciones granulares en las que el fármaco está unido a bolas de unos pocos μm, y formulaciones en las que un lípido se une al fármaco. El método de administración puede ser oral, intradérmico, subcutáneo, inyección intravenosa, o similares, y es posible la administración sistémica o la administración local en la vecindad del tumor diana. La dosis de los péptidos de esta divulgación se puede ajustar apropiadamente según la enfermedad que se va a tratar, la edad del paciente, peso, método de administración, y similares, y es habitualmente de 0,001 mg a 1000 mg, preferiblemente de 0,01 mg a 100 mg, más preferiblemente de 0,1 mg a 10 mg, y preferiblemente se administra una vez en unos pocos días a unos pocos meses. El experto en la materia puede seleccionar de forma apropiada la dosis adecuada.
De forma alternativa, también se divulgan vesículas llamadas exosomas, que presentan complejos formados entre los péptidos de esta invención y antígenos HLA en su superficie. Los exosomas se pueden preparar, por ejemplo, usando los métodos descritos en detalle en la traducción japonesa publicada de las publicaciones internacionales No. Hei 11-510507 y 2000-512161, y preferiblemente se preparan usando células presentadoras de antígenos obtenidas de sujetos que son dianas de tratamiento y/o prevención. Los exosomas de esta divulgación se pueden inocular como vacunas contra el cáncer, de forma similar a los péptidos de esta invención.
El tipo de antígenos HLA usado debe coincidir con el del sujeto que requiere el tratamiento y/o prevención. Por ejemplo, para un japonés HLA-A24 o HLA-A02, particularmente HLA-A2402 o HLA-A0201 pueden ser apropiados.
En algunas formas de realización, las composiciones vacunas de esta divulgación pueden comprender un componente que sensibiliza linfocitos T citotóxicos. Se han identificado lípidos como agentes capaces de sensibilizar LTC in vivo contra agentes víricos. Por ejemplo, se pueden unir residuos de ácido palmítico a los grupos ε-y αamino de un residuo de lisina y después unirse a un péptido inmunogénico de la divulgación. El péptido lipidado se puede administrar después directamente en una micela o partícula, incorporado en un liposoma, o emulsionado en un adyuvante. Como otro ejemplo de sensibilización lipídica de respuestas de LTC, se pueden usar lipoproteínas de
E. coli, tal como tripalmitoil-S-glicerilcisteinilseril-serina (P3CSS), para sensibilizar LTC cuando se unen covalentemente a un péptido apropiado (véase, por ejemplo, Deres, et al., (1989) Nature 342:561-4).
Las composiciones inmunogénicas de la divulgación también pueden comprender ácidos nucleicos que codifican los péptidos inmunogénicos divulgados aquí. Véase, por ejemplo, Wolff et al., (1990) Science 247:1465-8; las patentes en EE UU Nos. 5.580.859; 5.589.466; 5.804.566; 5.739.118; 5.736.524; 5.679.647; y el documento WO 98/04720. Los ejemplos de tecnologías de administración basadas en ADN incluyen “ADN desnudo”, administración facilitada (bupivicaína, polímeros, mediada por péptidos), complejos lipídicos catiónicos y administración mediada por partículas (“bombardeo de genes”) o mediada por presión (véase, por ejemplo, la patente en EE UU No. 5.922.687).
Los péptidos inmunogénicos de la divulgación también se pueden expresar mediante vectores víricos o bacterianos. Los ejemplos de vectores de expresión incluyen huéspedes víricos atenuados, tales como vaccinia o viruela aviar. Este planteamiento implica el uso del virus vaccinia, por ejemplo, como un vector para expresar secuencias de nucleótidos que codifican el péptido. Tras la introducción en un huésped, el virus vaccinia recombinante expresa el péptido inmunogénico y de esta manera provoca una respuesta inmunitaria. Se describen vectores vaccinia y métodos útiles en protocolos de inmunización en, por ejemplo, la patente en EE UU No. 4.722.848. Otro vector es BCG (Bacilo Calmette Guerin). Los vectores BCG se describen en Stover, et al., (1991) Nature 351:456-60. Serán aparentes una amplia variedad de otros vectores útiles para la administración terapéutica o inmunización, por ejemplo, vectores de adenovirus y virus adenoasociados, vectores retrovíricos, vectores Salmonella typhi o vectores de la toxina del carbunco detoxificada. Véase, por ejemplo, Shata, et al., (2000) Mol. Med. Today 6:66-71; Shedlock, et al, (2000) J. Leukoc. Biol. 68:793-806; y Hipp, et al., (2000) In vivo 14:571-85.
La presente divulgación también métodos de inducir células presentadoras de antígeno usando los péptidos de esta divulgación. Las células presentadoras de antígeno se pueden inducir mediante inducción de células dendríticas a partir de monocitos de sangre periférica y después poniéndolas en contacto (estimulándolas) con los péptidos de esta divulgación in vitro o in vivo. Cuando los péptidos de esta divulgación se administran a los sujetos, se inducen en el cuerpo del sujeto células presentadoras de antígeno que tienen los péptidos de esta divulgación inmovilizados en ellas. De forma alternativa, después de inmovilizar los péptidos de esta divulgación a las células presentadoras de antígeno, las células se pueden administrar al sujeto como una vacuna.
Esta divulgación también proporciona un método para inducir células presentadoras de antígeno que tienen un nivel alto de inducibilidad de células T citotóxicas, en el que el método comprende el paso de transferir genes que
comprenden polinucleótidos que codifican los péptidos de esta divulgación a células presentadoras de antígeno in vitro. Los genes introducidos pueden estar en forma de ADN o ARN. Para el método de introducción, sin limitaciones particulares, se pueden usar varios métodos convencionalmente realizados en este campo, tales como lipofección, electroporación y método del fosfato de calcio. Más específicamente, se puede realizar como se describe en Reeves ME, et al., (1996) Cancer Res., 56:5672-7; Butterfield LH, et al., (1998) J. Immunol., 161:5607-13; Boczkowski D, et al., (1996) J. Exp. Med., 184:465-72; traducción japonesa publicada de la publicación internacional No. 2000509281. Al transferir el gen a las células presentadoras de antígeno, el gen experimenta transcripción, traducción y similar, en la célula, y después la proteína obtenida se procesa y une a MHC de clase I o clase II, y sigue a través de una vía de presentación para presentar péptidos parciales.
Además, la presente divulgación proporciona métodos para inducir LTC usando los péptidos de esta invención. Cuando los péptidos de esta divulgación se administran a un sujeto, se inducen LTC en el cuerpo del sujeto, y la fuerza del sistema inmunitario que se dirige a las células endoteliales angiogénicas en los tejidos tumorales aumenta. De forma alternativa, se pueden usar para un método terapéutico ex vivo, en el que se ponen en contacto (estimulan) células presentadoras de antígeno derivadas del sujeto y células CD8 positivas o leucocitos mononucleares de sangre periférica con los péptidos de esta divulgación in vitro, y después de inducir los LTC, las células se devuelven al sujeto.
Además, la presente divulgación describe células T citotóxicas aisladas que se inducen usando los péptidos de esta divulgación. Las células T citotóxicas, que se han inducido mediante estimulación de células presentadoras de antígeno que presentan los péptidos de esta divulgación, preferiblemente derivan de los sujetos que son dianas de tratamiento y/o prevención, y se pueden administrar por ellas mismas o en combinación con otros fármacos incluyendo los péptidos de esta divulgación o exosomas para el fin de efectos antitumorales. Las células T citotóxicas obtenidas actúan específicamente contra células diana que presentan los péptidos de esta divulgación o preferiblemente los mismos péptidos usados para la inducción. Las células diana pueden ser células que expresan VEGFR1 endógenamente o células que se transfectan con un gen que codifica VEGFR1, y las células que presentan los péptidos de esta divulgación en la superficie celular debido a la estimulación por estos péptidos también se pueden convertir en dianas de ataque.
La presente divulgación también proporciona células presentadoras de antígeno que comprenden la presentación de complejos formados entre antígenos HLA y los péptidos de esta invención. Las células presentadoras de antígeno que se obtienen poniendo en contacto los péptidos de esta divulgación o los nucleótidos que codifican los péptidos de esta divulgación preferiblemente derivan de los sujetos que son dianas del tratamiento y/o prevención, y se pueden administrar como vacunas por ellas mismas o en combinación con otros fármacos incluyendo los péptidos de esta divulgación, exosomas o células T citotóxicas.
En la presente divulgación, la frase “vacuna” (también denominada una composición inmunogénica) se refiere a una sustancia que tiene la función de inducir inmunidad contra células endoteliales tumorales para suprimir tumores tras la inoculación en animales. Según la presente divulgación, se sugirió que los polipéptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2, 13 eran péptidos epítopos restringidos a HLA-A02 y se sugirió que SEQ ID NO: 32 era un péptido epítopo restringido a HLA-A24 que pueden inducir una respuesta inmunitaria potente y específica contra células endoteliales tumorales que expresan VEGFR1. Por tanto, la presente divulgación también abarca un método de inducción de inmunidad antitumoral usando polipéptidos que comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2, 13, 32. En general, la inmunidad antitumoral incluye respuestas inmunitarias tales como las siguientes:
- -
- inducción de linfocitos citotóxicos contra células endoteliales en tumores;
- -
- inducción de anticuerpos que reconocen células endoteliales en tumores, e
- -
- inducción de la producción de citoquinas antitumorales.
Por tanto, cuando una cierta proteína induce cualquiera de estas respuestas inmunitarias tras la inoculación en un animal, se decide que la proteína tiene efecto inductor de inmunidad antitumoral. La inducción de la inmunidad antitumoral por una proteína se puede detectar observando in vivo o in vitro la respuesta del sistema inmunitario en el huésped contra la proteína.
Por ejemplo, se conoce bien un método para detectar la inducción de linfocitos T citotóxicos. Una sustancia exógena que entra el cuerpo vivo se presenta a células T y células B mediante la acción de las células presentadoras de antígeno (CPA). Las células T que responden al antígeno presentado por las CPA de una manera específica de antígeno se diferencian a células T citotóxicas (o linfocitos T citotóxicos; LTC) debido a la estimulación por el antígeno y después proliferan (esto se denomina activación de células T). Por tanto, la inducción de LTC por un cierto péptido se puede evaluar presentando el péptido a una célula T por CPA, y detectando la inducción de LTC. Además, las CPA tienen el efecto de activar células T CD4+, células T CD8+, macrófagos, eosinófilos y células NK. Puesto que las células T CD4+ también son importantes en inmunidad antitumoral, la acción inductora de inmunidad antitumoral del péptido se puede evaluar usando el efecto de activación de estas células como indicadores.
En la técnica se conoce bien un método para evaluar la acción inductora de LTC usando células dendríticas (CD) como CPA. La CD es una CPA representativa que tiene la acción inductora de LTC más fuerte entre las CPA. En este método, el polipéptido de prueba inicialmente se pone en contacto con la CD y después esta CD se pone en contacto con células T. La detección de células T que tienen efectos citotóxicos contra las células de interés después del contacto con las CD muestra que el polipéptido de prueba tiene una actividad de inducción de células T citotóxicas. La actividad de LTC contra tumores se puede detectar, por ejemplo, usando la lisis de células tumorales marcadas con 51Cr como el indicador. De forma alternativa, también se conoce bien el método de evaluar el grado de daño de células tumorales usando la actividad de captación de 3H-timidina o liberación de LDH (lactosa deshidrogenasa) como el indicador.
Aparte de las CD, también se pueden usar células mononucleares de sangre periférica (PBMC) como CPA. Se describe que la inducción de LTC aumenta al cultivar PBMC en presencia de GM-CSF e IL-4. De forma similar, se ha mostrado que los LTC se inducen al cultivar PBMC en presencia de hemocianina de lapa californiana (KLH) e IL
7.
Los polipéptidos de prueba confirmados que poseen actividad inductora de LTC por estos métodos son polipéptidos que tienen efecto de activación de CD y posterior actividad inductora de LTC. Por tanto, los polipéptidos que inducen LTC contra células endoteliales tumorales son útiles como vacunas contra tumores. Además, las CPA que adquirieron la capacidad de inducir LTC contra células endoteliales tumorales poniéndolas en contacto con los polipéptidos son útiles como vacunas contra tumores. Además, los LTC que adquirieron citotoxicidad debido a la presentación de los antígenos del polipéptidos por las CPA también se pueden usar como vacunas contra tumores. Tales métodos terapéuticos para tumores que usan inmunidad antitumoral debido a CPA y LTC se denominan inmunoterapia celular.
En general, cuando se usa un polipéptido para inmunoterapia celular, se sabe que la eficacia de la inducción de LTC aumenta al combinar una pluralidad de polipéptidos que tienen diferentes estructuras y poniéndolos en contacto con CD. Por tanto, cuando se estimulan CD con fragmentos de proteínas, es ventajoso usar una mezcla de múltiples tipos de fragmentos.
De forma alternativa, la inducción de inmunidad antitumoral por un polipéptido se puede confirmar observando la inducción de la producción de anticuerpos contra tumores. Por ejemplo, cuando se inducen anticuerpos contra un polipéptido en un animal de laboratorio inmunizado con el polipéptido, y cuando esos anticuerpos suprimen el crecimiento, proliferación o metástasis de células tumorales, se puede determinar que el polipéptido tiene una capacidad de inducir inmunidad antitumoral.
También se divulga un método de tratamiento o prevención de tumores en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una vacuna que comprende un polipéptido codificado por un ácido nucleico seleccionado del grupo que consiste en VEGFR1 o un fragmento inmunológicamente activo de dicho polipéptido, o un polinucleótido que codifica el polipéptido o el fragmento del mismo. La administración del polipéptido induce inmunidad antitumoral en un sujeto. Por tanto, la presente divulgación proporciona además un método para inducir inmunidad antitumoral. El polipéptido
- o los fragmentos inmunológicamente activos del mismo pueden ser útiles como vacunas contra tumores. En algunos casos las proteínas o fragmentos de las mismas se pueden administrar en una forma unidas al receptor de células T (TCR) o presentadas en una célula presentadora de antígeno (CPA), tal como un macrófago, célula dendrítica (CD)
- o células B. Debido a la fuerte capacidad presentadora de antígenos de las CD, el uso de CD es el más preferible entre las CPA.
La inmunidad antitumoral se induce administrando la vacuna de esta divulgación, y la inducción de inmunidad antitumoral permite el tratamiento y prevención de tumores. La terapia contra o la prevención del inicio de tumores incluye cualquiera de los pasos, tales como inhibición del crecimiento de células tumorales, involución de células tumorales y supresión de la aparición de células tumorales. El descenso en la mortalidad de individuos que tienen tumores, el descenso de marcadores tumorales en la sangre, el alivio de los síntomas detectables que acompañan a los tumores y similares también se incluyen en la terapia o prevención de tumores. Tales efectos terapéuticos y preventivos preferiblemente son estadísticamente significativos. Por ejemplo, en observación, a un nivel de significancia del 5% o menos, en donde el efecto terapéutico o preventivo de una vacuna contra tumores se compara a un control sin la administración de la vacuna. Por ejemplo, se pueden usar la prueba de la t de Student, la prueba U de Mann-Whitney o ANOVA para los análisis estadísticos.
La proteína mencionada anteriormente que tiene actividad inmunológica, o un polinucleótido o vector que codifica la proteína se puede combinar con un adyuvante. Un adyuvante se refiere a un compuesto que aumenta la respuesta inmunitaria contra la proteína cuando se administra junto (o sucesivamente) con la proteína que tiene actividad inmunológica. Los ejemplos de adyuvantes incluyen toxina del cólera, toxina de salmonella, alumbre y similares, pero no están limitados a los mismos. Además, la vacuna de esta divulgación se puede combinar de forma apropiada con un soporte farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de tales soportes son agua esterilizada, solución salina fisiológica, tampón fosfato, líquido de cultivo y similares. Además, la vacuna puede contener según sea necesario, estabilizantes, suspensiones, conservantes, tensioactivos y similares. La vacuna se administra
sistémica o localmente. La administración de la vacuna se puede llevar a cabo por un única administración o estimulada por múltiples administraciones.
Cuando se usan CPA o LTC como la vacuna descrita en el presente documento, los tumores se pueden tratar o prevenir, por ejemplo, mediante el método ex vivo. Más específicamente, se recogen PBMC del sujeto que recibe el tratamiento o prevención, las células se ponen en contacto con el polipéptido ex vivo, y después de la inducción de CPA o LTC, las células se pueden administrar al sujeto. También se pueden inducir las CPA introduciendo un vector que codifica el polipéptidos en las PBMC ex vivo. Las CPA o LTC inducidos in vitro se pueden clonar antes de la administración. Al clonar y hacer crecer células que tienen alta actividad de dañar células diana, la inmunoterapia celular se puede realizar de forma más eficaz. Además, las CPA y LTC aislados de esta manera se pueden usar para inmunoterapia celular no solo contra individuos de los que derivan las células, sino también contra tipos similares de enfermedades en otros individuos.
A menos que se definan de otra manera, todos los términos científicos y técnicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende el experto en la materia a la que pertenece esta invención.
La presente invención se ilustra en detalle mediante los siguientes ejemplos, pero no está restringida a estos ejemplos.
Líneas celulares
La línea celular T2 fue generosamente suministrada por el Dr. Shiku (Escuela de Medicina de la Universidad de Mie). Las líneas celulares AG1-G1-Flt-1 y AG1-G1-Neo fueron amablemente suministradas por el Dr. M. Shibuya (Instituto de Ciencia Médica, Universidad de Tokio). La línea celular AG1-G1 se estableció de hemangioma benigno humano, y se generó AG1-G1-Flt-1 infectando las líneas celulares AG1-G1 con el vector plásmido BCMGS que lleva el ADNc de VEGFR1. MCA205, una línea celular de fibrosarcoma murino inducido por metilcolantreno, fue un generoso regalo del Dr. S.A. Rosenberg (Instituto Nacional del Cáncer, Bethesda, MD). B16, un melanoma murino, y MC38, un adenocarcinoma de colon murino, se compraron de la ATCC.
Péptidos sintéticos
Los candidatos de péptidos epítopos derivados de VEGFR1 restringidos a HLA-A*0201 (A2) y -A*2402 (A24) se seleccionaron basándose en las afinidades de unión de los HLA correspondientes. Las afinidades de unión se predijeron con el sitio web de Biolnformatics & Molecular Analysis Section (BIMAS) (Kuzushima et al., (2003) Blood.
101: 1460-8, Parker et al., (1994) J. Immunol. 152: 163-75). Estos péptidos candidatos fueron sintetizados por Sawady Techonology, Japón según el método estándar de síntesis en fase sólida y purificados por HPLC de fase reversa. La pureza (>95%) y la identidad de los péptidos se determinó por HPLC analítica y análisis de espectrometría de masas, respectivamente. Los péptidos usados en la presente invención se enumeran en la tabla 1 y 2.
El péptido CEA (DVLYGPDTPI (SEQ ID NO: 41)) se usó como control positivo para un modelo de ratón in vivo. Los péptidos de CMV (A02; NLVPMVATV (SEQ ID NO: 42), A24; QYDPVAALF (SEQ ID NO: 43)) se usaron como controles positivos para la inducción de LTC humanos in vitro (Solache et al., (1999) J. Immunol. 163: 5512-8, Kuzushima et al., (2001) Blood. 98: 1872-81).
Animales
Los RTG A2/Kb, cuyo MHC de clase I consiste en dominios α1 y α2 de HLA-A*0201 y el dominio α3 de H-2Kb de ratón, se prepararon como se describe en otro lugar (Wentworth et al., (1996) Eur. J. Immunol. 26: 97-101). Los animales se mantuvieron en el animalario sin patógenos específicos del Instituto de Ciencia Médica, Universidad de Tokio, y todos los protocolos para experimentos animales fueron aprobados por el comité ético del instituto.
Generación de líneas y clones de LTC
Se usaron células dendríticas (CD) derivadas de monocitos para inducir respuestas de LTC contra péptidos presentados en HLA como se ha descrito previamente (Nukaya et al., (1999) Int. J. Cancer. 80: 92-7, Tsai et al., (1997) J. Immunol. 158: 1796-802, Nakahara et al., (2003) Cancer Res. 63: 4112-8). Brevemente, se obtuvieron PBMC de voluntarios sanos con HLA correspondientes y se cultivaron en presencia de GM-CSF (suministrado por Kirin Brewery Company, Japón) e IL-4 (Genzyme/Techne, Minneapolis). Después de cultivar durante 5 días, se añadió al cultivo OK-432 (Chugai Pharmaceutical Corporation, Japón) para obtener CD maduras (Nakahara et al., (2003) Cancer Res. 63: 4112-8). El día 7, las CD maduras generadas se pulsaron con cada péptido para la estimulación de células T. Usando estas CD pulsadas con péptidos cada vez, se estimularon las células T CD8+
autólogas durante tres veces los días 0, 7 y 14, y después se probaron las actividades citotóxicas de las células linfoides resultantes el día 21.
Para generar clones de LTC, las líneas de LTC establecidas se sembraron en placas de 96 pocillos a 0,3, 1 y 3 células por pocillo con PBMC alógenas y A3-LCL como células estimuladoras. Se probaron las actividades citotóxicas de los clones de LTC resultantes el día 14.
Ensayo de citotoxicidad
Se midieron las actividades citotóxicas usando un ensayo estándar de 4 horas de liberación de 51Cr. Se usaron células T2 y A24-LCL como células diana pulsadas con péptidos candidatos. Se calculó el porcentaje de lisis específica como sigue:
% de lisis específica = [(liberación experimental – liberación espontánea)/ (liberación máxima-liberación espontánea)] x 100
Inmunogenicidad de péptidos epítopos en RTG A2/Kb
Para la sensibilización de los LTC específicos de péptido, se dio inmunización usando 200 μl de mezcla de vacuna, que contiene 100 μg de un péptido restringido a HLA-A2 y 100 μl de IFA por ratón. La vacuna se inyectó por vía intradérmica en el flanco derecho para la primera inmunización el día 0 y en el otro flanco para la segunda el día 11. El día 21, se usaron los esplenocitos de los ratones vacunados como las células respondedoras, y se usaron células T2 pulsadas con o sin péptidos como las células estimuladoras para el ensayo ELISPOT.
Ensayo de angiogénesis in vivo
Examinamos los efectos de la vacunación con péptidos usando el ensayo de saco aéreo dorsal (DAS) que se diseñó para medir la angiogénesis in vivo inducida por células tumorales como se ha descrito previamente (Oikawa et al., (1997) Anticancer Res.17: 1881-6). Brevemente, se vacunaron los RTG A2/Kb dos veces con un intervalo de 1 semana en el flanco izquierdo usando los péptidos correspondientes conjugados con IFA como se ha descrito previamente con alguna modificación (Schuler et al., (1997) J. Exp. Med. 186: 1183-7, Song et al., (1997) J. Exp. Med. 186: 1247-56, Specht et al., (1997) J. Exp. Med. 186: 1213-21). Se llenó una cámara Millipore (Millipore Corporation, Bedford, MA) con PBS que contenía células MC38 (1x106 células) y se implantó en el dorso de ratones anestesiados el día 0. Las cámaras implantadas se retiraron de la fascia s.c. el día 6 y después se colocaron anillos negros en los sitios expuestos a un contacto directo con la cámara. Se evaluó la respuesta angiogénica con fotografías tomadas usando un microscopio de disección. El grado de angiogénesis se determinó con el número de vasos sanguíneos recién formados de >3 mm de longitud y se puntuó de forma semicuantitativa usando un índice que variaba desde 0 (ninguno) hasta 5 (muchos).
Efectos antitumorales in vivo
Examinamos los efectos antitumorales de esta vacunación con un modelo terapéutico. Se inyectaron i.d. las 1x105 células MCA205 o las 5x105 células B16 en el flanco derecho el día 0, y la vacunación se realizó el día 4 y el día 14 usando los correspondientes péptidos conjugados con IFA.
Análisis estadístico
Cada experimento se realizó en triplicado para confirmar la reproducibilidad de los resultados, y se muestran resultados representativos. Se usó la prueba de la t de Student para examinar la significación de los datos, cuando fue aplicable. La diferencia se consideró que era estadísticamente significativa cuando el valor de P era menor de 0,05.
Resultados
Péptidos que se predice se unen a HLA de clase I de la proteína VEGFR1
Los candidatos de los péptidos epítopos derivados de VEGFR1 restringidos a HLA-A*0201 (A2) y -A*2402 (A24) se seleccionaron basándose en las afinidades de unión a los correspondientes HLA. Las afinidades de unión se predijeron con el sitio web de Biolnformatics & Molecular Analysis Section (BIMAS).
Software de predicción de unión de péptidos a HLA:
(http://bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform)
Kuzushima, K. et al., (2003) Blood. 101: 1460-8.
Parker, K.C. et al., (1994) J. Immunol. 152: 163-75).
Establecimiento de clones de LTC usando candidatos epítopos derivados de VEGFR1 Primero probamos la inmunogenicidad de VEGFR1 para determinar los péptidos epítopos. Los péptidos epítopos candidatos se seleccionaron en el orden de las puntuaciones de unión que reflejan la afinidad de unión del péptidos a las molécula de HLA de clase I (tabla 1, tabla 2).
Tabla 1. Péptidos de unión predicha a HLA-A*0201 de la proteína VEGFR1
Posición Secuencia SEQ ID Afinidad de inicial (9-mero) NO. unión
1087 770 1028 766 874 861 875 881 1027 220
VLLWEIFSL
TLFWLLLTL
ILLSENNVV
CVAATLFWL
ALMTELKIL
KMLKEGATA
LMTELKILT
ILTHIGHHL
NILLSENNV
YLTHRQTNT
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1793 182 179 137 75 47 38 36 35 34 Posición Secuencia SEQ ID Afinidad de inicial (10-mero) NO. unión
1153 1029 417 1094 1104 1086 797 1004 220 590
KLGDLLQANV
LLSENNVVKI
NLTATLIVNV
SLGGSPYPGV
QMDEDFCSRL
GVLLWEIFSL
IIMDPDEVPL
FQVARGMEFL
YLTHRQTNTI
ILLRTVNNRT
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
998 167 160 104 96 92 76 62 48 47
Tabla 2. Péptidos de unión predicha a HLA-A*2402 de la proteína VEGFR1
Posición Secuencia SEQ ID Afinidad de inicial (9-mero) NO. unión
913 919 871 1212 1084 1146 821 754 819 814
KYGNLSNYL
NYLKSKRDL
EYKALMTEL
RYVNAFKFM
SYGVLLWEI
RFAELVEKL
EFARERLKL
KSNLELITL
KWEFARERL
PYDASKWEF
21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
576 300 264 90 66 64 22 12 12 11 Posición inicial
919 1084 1001 880 1003 1212 700 873 1149 1079
Secuencia SEQ ID Afinidad de (10-mero) NO. unión
NYLKSKRDLF
SYGVLLWEIF
SYSFQVARGM
KILTHIGHHL
SFQVARGMEF
RYVNAFKFMS
KIQQEPGIIL
KALMTELKIL
ELVEKLGDLL
KSDVWSYGVL
31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
150
120
35
17
17
15
12
12
9
8
Generamos LTC usando estos péptidos y PBMC dadas de voluntarios sanos con HLA-A*0201 y HLA-A*2402 como se describe en “Materiales y Métodos”, y se establecieron con éxito clones de LTC.
15 Estos clones de LTC mostraron citotoxicidad específica contra las células diana pulsadas con los péptidos correspondientes (figura 1, figura 2).
También examinamos la capacidad de los clones de LTC establecidos inducidos con estos péptidos para lisar las células diana que también expresan endógenamente VEGFR1.
20 Se examinó la citotoxicidad del clon de LTC HLA-A*2402 contra células que expresan VEGFR1 (AG1-G1-Flt-1) y control (AG1-G1) en un ensayo de liberación de 51Cr de 4 horas. Estos clones de LTC mostraron las citotoxicidades contra AG1-G1-Flt-1 pero no contra AG1-G1 (figura 3). La citotoxicidad se bloqueó significativamente con Acm contra CD8 y HLA de clase I, pero no se bloqueó usando Acm contra CD4 ni HLA de clase II (datos no mostrados).
25 Efectos antiangiogénesis y antitumorales in vivo asociados con la vacunación usando péptidos epítopos de VEGFR1
Probamos los efectos antiangiogénesis y los efectos antitumorales in vivo de la vacunación con péptidos epítopos de VEGFR1 usando RTG A2/Kb.
30 Al principio, evaluamos la inmunogenicidad de los péptidos epítopos para RTG A2/Kb para examinar la producción específica de IFN-γ de los LTC inducidos con estos péptidos mediante ensayo ELISPOT (figura 4). Se inyectó s.c. el péptido conjugado con IFA en RTG A2/Kb el día 0 y el día 11. El día 21, se recogieron los esplenocitos de los ratones vacunados y se usaron como células respondedoras, y se usaron células T2 pulsadas con o sin péptidos
35 como las células estimuladoras para el ensayo ELISPOT. Se observó la producción específica de IFN-γ para el péptido correspondiente en los ratones vacunados con los péptidos VEGFR1-1087, -770, -417. En este ensayo ELISPOT usando el sistema de RTG A2/Kb, se mostraron resultados positivos para los péptidos epítopos identificados usando PBMC humanas.
40 Examinamos si la vacunación usando péptidos derivados de VEGFR1 suprimía la angiogénesis inducida por tumor. Para confirmar los efectos de la vacunación con péptidos sobre la angiogénesis inducida por las células tumorales, empleamos un ensayo de saco aéreo dorsal (ensayo DAS) que visualiza el grado de neovascularización in vivo. En este ensayo semicuantitativo, se observó una inhibición significativa de la angiogénesis en los ratones vacunados con los péptidos VEGFR1-1087, -770, -417 (figura 5).
5 La vacunación usando el péptido epítopo mostró un fuerte efecto antitumoral en el modelo terapéutico. Se inyectaron
i.d. MCA205, una línea de células de fibrosarcoma murino inducido por metilcolantreno, en RTG A2/Kb el día 0, y la vacunación se realizó en estos ratones 4 y 14 días después de la exposición tumoral usando los péptidos VEGFR11087, -770, -417 conjugados con IFA (figura 6). Se observó supresión significativa del crecimiento tumoral con la vacunación usando los péptidos VEGFR1-1087, -770 conjugados con IFA. Además, se observaron inhibiciones significativas de crecimiento tumoral en varias células tumorales (datos no mostrados).
Estos resultados sugieren firmemente que los efectos antitumorales inducidos con la vacunación usando los péptidos derivados de VEGFR1 podrían estar mediados por la inhibición de la angiogénesis tumoral. Por tanto, la vacunación con péptidos epítopos derivados de VEGFR1 podría afectar al crecimiento de las células tumorales a
15 través de los efectos sobre las células endoteliales que expresan VEGFR1 de los vasos que apoyan el crecimiento tumoral in vivo en este sistema de tumores en RTG A2/Kb.
La identificación de antígenos asociados a tumores (AAT) ha permitido el desarrollo clínico de vacunas contra el cáncer basadas en péptidos, que podrían inducir LTC y lisar células tumorales de una manera restringida por HLA de clase I (Bruggen et al., (1991) Science. 254: 1643-7, Boon et al., (1996) J. Exp. Med. 183: 725-9, Rosenberg et al., (1998) Nat. Med. 4: 321-7, Butterfield et al., (1999) Cancer Res. 59: 3134-42). Hasta ahora, múltiples ensayos clínicos usando péptidos de AAT han descrito que se observaron regresiones tumorales en aproximadamente un 25 índice del 20% en pacientes de melanoma. Sin embargo, la respuesta completa raramente se ha descrito (Rosenberg et al., (1998) Nat. Med. 4: 321-7. Nestle et al., (1998) Nat. Med. 4: 328-32, Thurner et al., (1999) J. Exp. Med. 190: 1669-78, Belli et al., (2002) Parmiani. J. Clin. Oncol. 20: 4169-80, Coulie et al., (2002) Immunol. Rev. 188: 33-42). Una de las posibles razones para la modesta eficacia clínica podría ser la pérdida o disminución de las moléculas de HLA de clase I en las células tumorales (Cormier et at, (1998) Int. J. Cancer. 75: 517-24, Paschen et at, (2003) Int. J. Cancer. 103: 759-67, Fonteneau et al., (1997). J. Immuol. 159: 2831-9, Reynolds et at, (1998) J. Immunol. 161: 6970-6). Se ha estimado que la frecuencia de tumores que muestran alguna alteración en la expresión de moléculas de HLA de clase I es de más del 40% (Cormier et at, (1998) Int. J. Cancer. 75: 517-24, Paschen et al., (2003) Int. J. Cancer. 103: 759-67). Por tanto, una parte significativa de las células tumorales podría escapar de los LTC específicos para el epítopo de clase I, incluso si los LTC se pudieran inducir con éxito por
35 vacunas contra el cáncer que se dirigen a las células tumorales mismas. Estos problemas se pueden salvar con el desarrollo de vacunas eficaces contra la angiogénesis tumoral, ya que las células endoteliales son genéticamente estables, no muestran disminución de moléculas de HLA de clase I y están críticamente implicadas en la progresión de una variedad de tumores. Además, los LTC podrían causar daño directamente a las células endoteliales sin penetrar en ningún otro tejido, y la lisis de incluso números bajos de células endoteliales en la vasculatura del tumor produciría la destrucción de la integridad del vaso lo que produce la inhibición de grandes números de células tumorales (Folkman, J. (1995) Nat. Med. 1: 27-31). Por tanto, las células endoteliales son una buena diana para inmunoterapia contra el cáncer. Para prevenir específica y eficazmente la angiogénesis tumoral con respuesta de LTC, se necesita seleccionar la diana apropiada entre las moléculas relacionadas con la angiogénesis.
45 Los resultados presentados aquí, in vitro e in vivo, demuestran que se puede usar VEGFR1 como diana de terapia inmunológica usando inmunidad celular y apoya la razón fundamental definitiva del desarrollo clínico de esta estrategia contra una amplia gama de cánceres.
La presente invención proporciona péptidos nuevos, que inducen células T citotóxicas dirigiéndose a células endoteliales en una amplia gama de tejidos tumorales, y son extremadamente eficaces como vacunas contra el cáncer. La presente invención también proporciona composiciones inmunogénicas que comprenden estos péptidos para el tratamiento y prevención de tumores.
Además, la presente solicitud divulga los siguientes puntos:
- 1.
- Un péptido aislado de menos de aproximadamente 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2, 13.
- 2.
- Un péptido aislado que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 2, 13, en donde se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos.
- 3.
- El péptido del punto 2, en donde el segundo aminoácido a partir de extremo N es leucina o metionina.
- 4.
- El péptido del punto 2 o 3, en donde el aminoácido C-terminal es valina o leucina.
5. Un péptido aislado de menos de aproximadamente 15 aminoácidos que comprende la secuencia de 5 aminoácidos de SEQ ID NO: 32.
- 6.
- Un péptido aislado que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 32, en donde se sustituyen o añaden 1, 2 o varios aminoácidos.
- 7.
- El péptido del punto 6, en donde el segundo aminoácido a partir de extremo N es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano.
- 8.
- El péptido del punto 6 o 7, en donde el aminoácido C-terminal es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o
metionina. 15
- 9.
- Una composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores, en donde la composición comprende 1 o más péptidos del punto 1, 2, 5 o 6.
- 10.
- Un exosoma que presenta en su superficie un complejo que comprende el péptido del punto 1, 2, 5 o 6 y un antígeno HLA.
- 11.
- El exosoma del punto 10, en donde el antígeno HLA es HLA-A24 o HLA-A02.
12. El exosoma del punto 11, en donde el antígeno HLA es HLA-A2402 o HLA-A0201. 25
- 13.
- Un método de inducir células presentadoras de antígeno que tienen alta inducibilidad de células T citotóxicas en un paciente, el método comprende administrar al paciente el péptido del punto 1, 2, 5 o 6.
- 14.
- Un método de inducir célula T citotóxicas en un paciente, el método comprende administrar al paciente el péptido del punto 1, 2, 5 o 6.
- 15.
- El método de inducir células presentadoras de antígeno que tienen alta inducibilidad de células T citotóxicas, en donde el método comprende transferir un gen que comprende un polinucleótido que codifica el péptido del punto 1, 2, 5 o 6 a células presentadoras de antígeno.
- 16.
- Una célula T citotóxica aislada, que se induce administrando el péptido del punto 1, 2, 5 o 6.
- 17.
- Una célula presentadora de antígeno, que comprende un complejo formado entre un antígeno HLA y el péptido del punto 1, 2, 5 o 6.
- 18.
- La célula presentadora de antígeno del punto 17, que se induce por el método del punto 13.
- 19.
- Una vacuna para inhibir la angiogénesis en un sitio de enfermedad, en donde la vacuna comprende el péptido
del punto 1, 2, 5 o 6 como principio activo. 45
- 20.
- La vacuna del punto 19, que se pretende para la administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A24 o HLA-A02.
- 21.
- La vacuna del punto 19, que se usa para suprimir el crecimiento de y/o la metástasis de tumores malignos.
- 22.
- Un método de tratar o prevenir tumores en un sujeto que comprende administrar al sujeto una vacuna que comprende un péptido del punto 1, 2, 5 o 6, o un fragmento inmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el polipéptido.
55 23. Un método de tratar o prevenir una enfermedad mediada por angiogénesis en un sujeto que comprende administrar al sujeto una vacuna que comprende un péptido del punto 1, 2, 5 o 6, o un fragmento inmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el polipéptido.
24. El método del punto 23, en donde la enfermedad mediada por angiogénesis se selecciona del grupo que consiste en retinopatía diabética, artritis reumatoide crónica, psoriasis y ateroesclerosis.
<110> LA UNIVERSIDAD DE TOKIO
ONCOTERAPHY SCIENCE, INC.
<120> PÉPTIDOS EPÍTOPOS DERIVADOS DEL RECEPTOR 1 DEL FACTOR DE CRECIMIENTO ENDOTELIAL VASCULAR Y VACUNAS QUE CONTIENEN ESTOS PÉPTIDOS
<130> N2664 EP/1 S3
<140> EP 06 71 4491.5
<141>
<150> US 60/657.527
<151>
<160> 45
<170> PatentIn versión 3.1
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 1
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 2
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 3
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
10 <220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 6
<211> 9
<212> PRT 20 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 25
<400> 6
<210> 7 30 <211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 35 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 7
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 45
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
50 <400> 8
<210> 9
<211> 9 55 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 10
<211> 9
<212> PRT 10 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 15
<400> 10
<210> 11 20 <211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 25 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 11
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 35
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
40 <400> 12
<210> 13
<211> 10 45 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 50 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 13
55 <210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 14
<210> 15 10 <211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 15 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 15
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 25
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
30 <400> 16
<210> 17
<211> 10 35 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 40 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 17
45 <210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
50 <220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 18
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 20
<211> 10
<212> PRT 15 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 20
<400> 20
<210> 21 25 <211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 30 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 21
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 40
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
45 <400> 22
<210> 23
<211> 9 50 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 55 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 23
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
5 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 10
<400> 24
<210> 25 15 <211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 20 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 25
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 30
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
35 <400> 26
<210> 27
<211> 9 40 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 45 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
55 <220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 28
<210> 29
<211> 9
5 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 10 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 29
15 <210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
20 <220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 31
<211> 10
<212> PRT 30 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 35
<400> 31
<210> 32 40 <211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 45 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 32
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 55
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 33
5 <210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
10 <220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 35
<211> 10
<212> PRT 20 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 25
<400> 35
<210> 36 30 <211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 35 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 36
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 45
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
50 <400> 37
<210> 38
<211> 10 55 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<210> 39
<211> 10
<212> PRT 10 <213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente” 15
<400> 39
<210> 40 20 <211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 25 <221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 40
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial 35
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
40 <400> 41
<210> 42
<211> 9 45 <212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente 50 <223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<221> fuente
<223> /nota = “Descripción de la secuencia artificial: Una secuencia peptídica sintetizada artificialmente”
<400> 43
<210> 44 10 <211> 5777
<212> ADN
<213> Homo sapiens
<400> 44
<210> 45
<211> 1338
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 45
Claims (2)
- REIVINDICACIONES1. Un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, o un fragmentoinmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el péptido, para su uso en el 5 tratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por angiogénesis o tumores.
- 2. Uso de un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, o un fragmento inmunológicamente activo del péptido, o un polinucleótido que codifica el péptido, para la fabricación de una composición farmacéutica o vacuna para tratar o prevenir una enfermedad mediada por angiogénesis o10 tumores.Fig.1 Fig. 2 Fig. 3 Fig. 4 Fig. 5 Fig. 6
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US65752705P | 2005-02-28 | 2005-02-28 | |
| US657527P | 2005-02-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2442294T3 true ES2442294T3 (es) | 2014-02-11 |
Family
ID=36581423
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06714491T Active ES2385396T3 (es) | 2005-02-28 | 2006-02-17 | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
| ES09007549.0T Active ES2442294T3 (es) | 2005-02-28 | 2006-02-17 | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
| ES10177960T Active ES2435650T3 (es) | 2005-02-28 | 2006-02-17 | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06714491T Active ES2385396T3 (es) | 2005-02-28 | 2006-02-17 | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10177960T Active ES2435650T3 (es) | 2005-02-28 | 2006-02-17 | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US7919099B2 (es) |
| EP (4) | EP2289533B1 (es) |
| JP (3) | JP4931154B2 (es) |
| CY (1) | CY1112867T1 (es) |
| DK (3) | DK2289533T3 (es) |
| ES (3) | ES2385396T3 (es) |
| HK (3) | HK1133601A1 (es) |
| PL (3) | PL2289533T3 (es) |
| PT (3) | PT1855707E (es) |
| SI (3) | SI2095822T1 (es) |
| WO (1) | WO2006093030A1 (es) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2327040T3 (es) * | 2002-09-12 | 2009-10-23 | Oncotherapy Science, Inc. | Peptidos kdr y vacunas que los contienen. |
| AU2008215432B2 (en) * | 2007-02-16 | 2013-03-21 | Oncotherapy Science, Inc. | Vaccine therapy for choroidal neovascularization |
| TW201109029A (en) * | 2009-06-11 | 2011-03-16 | Oncotherapy Science Inc | Vaccine therapy for choroidal neovascularization |
| CN104168917A (zh) * | 2012-03-09 | 2014-11-26 | 肿瘤疗法科学股份有限公司 | 含有肽的医药组合物 |
| US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
| RU2744860C2 (ru) | 2015-12-30 | 2021-03-16 | Кодиак Сайенсиз Инк. | Антитела и их конъюгаты |
| JP7168228B2 (ja) * | 2017-05-19 | 2022-11-09 | 慶應義塾 | 脳神経疾患に対するペプチドワクチン及びペプチドワクチン組成物 |
| CA3157509A1 (en) | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| JPH0418667A (ja) * | 1989-07-05 | 1992-01-22 | Tohoku Nippon Denki Software Kk | 自動配送システム |
| JPH0350140A (ja) * | 1989-07-18 | 1991-03-04 | Seiko Epson Corp | 分布屈折率レンズの製造方法 |
| CA2158745C (en) | 1993-03-25 | 2007-06-19 | Richard L. Kendall | Inhibitor of vascular endothelial cell growth factor |
| US5804566A (en) | 1993-08-26 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides |
| US5679647A (en) | 1993-08-26 | 1997-10-21 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host against tumor-associated antigens through administration of naked polynucleotides which encode tumor-associated antigenic peptides |
| US5739118A (en) | 1994-04-01 | 1998-04-14 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
| US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
| US5922687A (en) | 1995-05-04 | 1999-07-13 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Intracellular delivery of nucleic acids using pressure |
| CA2225553A1 (en) | 1995-08-03 | 1997-02-20 | Rijksuniversiteit Te Leiden | Cell derived antigen presenting vesicles |
| US5853719A (en) | 1996-04-30 | 1998-12-29 | Duke University | Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA |
| US6100071A (en) | 1996-05-07 | 2000-08-08 | Genentech, Inc. | Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production |
| US6294378B1 (en) | 1996-07-26 | 2001-09-25 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
| FR2766205B1 (fr) | 1997-07-16 | 2002-08-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveau procede de sensibilisation de cellules presentatrices d'antigene et nouveaux moyens pour la mise en oeuvre du procede |
| US6200954B1 (en) * | 1998-09-04 | 2001-03-13 | National University Of Singapore | Small peptides having potent anti-angiogenic activity |
| WO2002072627A2 (en) * | 2001-03-09 | 2002-09-19 | Callistogen Ag | Induction of anti-tumor cytotoxic t-lymphocytes in humans using peptide epitopes found by computer based algorithms for vaccination |
| FI110549B (fi) | 2001-06-29 | 2003-02-14 | Nokia Corp | Menetelmä ja järjestely liikkeen määrittämiseksi |
| US20030157101A1 (en) * | 2001-11-15 | 2003-08-21 | Carlo Gambacorti-Passerini | Immunogenic ALK peptides |
| JP4035845B2 (ja) | 2001-12-10 | 2008-01-23 | 株式会社グリーンペプタイド | 腫瘍抗原 |
| CU23178A1 (es) * | 2002-04-15 | 2006-09-22 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | INMUNOTERAPIA ACTIVA ANTIANGIOGéNICA |
| JP2004018667A (ja) | 2002-06-17 | 2004-01-22 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 高分子化合物膜の表面における炭酸カルシウム被膜の製造方法 |
| TW200413406A (en) | 2002-08-26 | 2004-08-01 | Kirin Brewery | Peptides and drugs containing the same |
| ES2327040T3 (es) | 2002-09-12 | 2009-10-23 | Oncotherapy Science, Inc. | Peptidos kdr y vacunas que los contienen. |
| TW201109029A (en) | 2009-06-11 | 2011-03-16 | Oncotherapy Science Inc | Vaccine therapy for choroidal neovascularization |
-
2006
- 2006-02-17 PL PL10177960T patent/PL2289533T3/pl unknown
- 2006-02-17 EP EP10177960.1A patent/EP2289533B1/en active Active
- 2006-02-17 SI SI200631689T patent/SI2095822T1/sl unknown
- 2006-02-17 PT PT06714491T patent/PT1855707E/pt unknown
- 2006-02-17 PT PT101779601T patent/PT2289533E/pt unknown
- 2006-02-17 EP EP09007549.0A patent/EP2095822B1/en not_active Not-in-force
- 2006-02-17 ES ES06714491T patent/ES2385396T3/es active Active
- 2006-02-17 ES ES09007549.0T patent/ES2442294T3/es active Active
- 2006-02-17 SI SI200631668T patent/SI2289533T1/sl unknown
- 2006-02-17 DK DK10177960.1T patent/DK2289533T3/da active
- 2006-02-17 PT PT90075490T patent/PT2095822E/pt unknown
- 2006-02-17 US US11/816,893 patent/US7919099B2/en active Active
- 2006-02-17 DK DK06714491.5T patent/DK1855707T3/da active
- 2006-02-17 ES ES10177960T patent/ES2435650T3/es active Active
- 2006-02-17 WO PCT/JP2006/303352 patent/WO2006093030A1/en active Application Filing
- 2006-02-17 DK DK09007549.0T patent/DK2095822T3/da active
- 2006-02-17 EP EP10177956A patent/EP2289532A1/en not_active Withdrawn
- 2006-02-17 EP EP06714491A patent/EP1855707B1/en not_active Not-in-force
- 2006-02-17 JP JP2007529685A patent/JP4931154B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-02-17 PL PL09007549T patent/PL2095822T3/pl unknown
- 2006-02-17 PL PL06714491T patent/PL1855707T3/pl unknown
- 2006-02-17 SI SI200631350T patent/SI1855707T1/sl unknown
-
2008
- 2008-05-06 HK HK10101587.5A patent/HK1133601A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-05-06 HK HK08105026.9A patent/HK1110529A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-05-06 HK HK11106949.6A patent/HK1152873A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-06-04 JP JP2010129158A patent/JP4843095B2/ja active Active
-
2011
- 2011-03-03 US US13/040,177 patent/US8257711B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-12-05 JP JP2011265649A patent/JP5789820B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-06-12 CY CY20121100533T patent/CY1112867T1/el unknown
- 2012-08-03 US US13/566,933 patent/US8663647B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-01-21 US US14/160,436 patent/US20140186381A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2545818T3 (es) | Vacunas de péptidos para cánceres que expresan los polipéptidos DEPDC1 | |
| ES2375299T3 (es) | Péptidos kdr y vacunas que los contienen. | |
| ES2435194T3 (es) | Vacunas peptídicas para cánceres que expresan antígenos asociados a tumores | |
| ES2459492T3 (es) | Vacunas de péptidos para cánceres de pulmón que expresan polipéptidos TTK, URLC10 o KOC1 | |
| US8663647B2 (en) | Epitope peptides derived from vascular endothelial growth factor receptor 1 and vaccines containing these peptides | |
| ES2541325T3 (es) | Péptido de epítopo RAB6KIFL/KIF20A y vacunas que contienen el mismo | |
| BR122020021065B1 (pt) | Composição farmacêutica e vacina à base de peptídeos para antígenos associados a tumores expressando câncer, exossomo, método in vitro para induzir células apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica e uso de um peptídeo | |
| BRPI0808421B1 (pt) | Composição farmacêutica para tratar câncer, exossomo, uso de um peptídeo, métodos in vitro para induzir uma célula apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica ou para induzir células t citotóxicas e vacina para inibir a proliferação de uma célula |