2DESCRIPCIÓNDERIVADOS DE 2-(1-FENIL-4,5,6,7-TETRAHIDRO-1H-INDAZOL-4-IL)ETILAMINAÚTILESCOMOINHIBIDORES DE RECEPTORES SIGMA5CAMPO DE LA INVENCIÓNLa presente invenciónse refiere acompuestosque tienenactividad farmacológicafrente al receptorsigma (),y másparticularmenteaalgunos derivados deindazol, aprocedimientosde preparación de talescompuestos, acomposiciones farmacéuticas que los 10comprenden,y a su uso en terapia o profilaxis,en particularpara eltratamientoo la profilaxisdeun estado o enfermedad mediado por receptores sigma.ANTECEDENTESLa búsqueda de nuevos agentes terapéuticos se ha visto enormemente favorecida 15en los últimos años por un mejor entendimiento de la estructura de proteínas y otras biomoléculas asociadas con enfermedades objetivo. Una clase importante de estas proteínas es el receptor sigma (), un receptor de superficie celular del sistema nervioso central (SNC) que puede estar relacionado con los efectos disfóricos, alucinógenos y estimulantes cardiacos de los opioides. A partir de estudios de la biología y la función de los 20receptores sigma, se han presentado evidencias de que los ligandos de receptor sigma pueden ser útiles en el tratamiento de psicosis y trastornos de movimiento tales como distonía y discinesia tardía, y alteraciones motoras asociadas con la corea de Huntington o el síndrome de Tourette y en la enfermedad de Parkinson (Walker, J. M. et al. Pharmacological Reviews, 1990, 42, 355). Se ha notificado que el ligando de receptor sigma 25conocido rimcazol clínicamente muestra efectos en el tratamiento de la psicosis (Snyder, S. H., Largent B. L. J. Neuropsichiatry 1989, 1, 7). Los sitios de unión sigma tienen afinidad preferencial por los isómeros dextrógiros de determinados benzomorfanos opiáceos, talescomo (+)SKF 10047, (+)ciclazocina y (+)pentazocina y también por algunos narcolépticos tales como haloperidol. 30El receptor sigma tiene al menos dos subtipos, que pueden diferenciarse en isómeros estereoselectivos de estos fármacos farmacoactivos. SKF 10047 tiene afinidad nanomolar por el sitio sigma 1 (-1), y tiene afinidad micromolar por el sitio sigma 2 (-2). Haloperidol tiene afinidades similares por ambos subtipos. No se conocen ligandos sigma 35P20139005703-06-2013
3endógenos, aunque se ha sugerido que la progesterona esuno de ellos. Posibles efectos farmacológicos mediados por el sitio sigma incluyen la modulación de la función del receptor de glutamato, respuesta neurotransmisora, neuroprotección, comportamiento y cognición (Quirion, R, et al. Trends Pharmacol. Sci., 1992, 13:85-86). La mayoría de estudios han dado a entender que los sitios de unión sigma (receptores) son elementos del plasmalema 5de la cascada de transducción de señales. Se han evaluado como antipsicóticos fármacos que se notifica que son ligandos sigmaselectivos (Hanner, M. et al. Proc. Natl. Acad. Sci., 1996, 93:8072-8077). La existencia de receptores sigma en el SNC, los sistemas inmunitario y endocrino ha sugerido una probabilidad que pudieran servir como conexión entre los tres sistemas. 10En vistade las aplicaciones terapéuticas potenciales de agonistas o antagonistas del receptor sigma, se ha dirigido un gran esfuerzo para encontrar ligandos selectivos. Por tanto, la técnica anterior da a conocer diferentes ligandos de receptor sigma. 15La solicitud de patente internacional WO 2006/021463 da a conocerunafamiliade inhibidores selectivosdelreceptor sigmaque presentaun grupo pirazolque se condensacon un anillo decicloalquiloque tiene5, 6ó7 átomosde carbono. Estos compuestosse abarcandentro de lasiguientefórmula general:NNR2R1NR3R4R5R6[]n[]m20A pesar de estos antecedentes, aún existe una necesidadde encontrarcompuestosque tenganactividad farmacológicafrente alreceptor sigma,que seanpreferiblementetantoeficacescomoselectivos,y que tenganbuenas propiedadesde “capacidad farmacológica”, es decir,buenaspropiedades farmacéuticas relacionadas conlaadministración,distribución,metabolismoy excreción.25P20139005703-06-2013
4BREVE DESCRIPCIÓN DELA INVENCIÓNLosinventoresde la presente invenciónhan encontrado sorprendentemente una familiade derivados de indazol que son inhibidores particularmenteselectivosdelreceptor 5sigma.En particular, loscompuestosde lainvenciónpresentanunaestructura de indazol sustituidaen laposición 4 con una cadena de etiloque contieneuna aminaen su extremoy en laposición 1 conun anillo de fenilo.Por tanto, unaspecto de lainvenciónse refiere acompuestosque tienen lafórmula10(I):NNN(R3)mR1R2(R4)n(I)en la queR1se selecciona dehidrógenoo –CHOy R2es hidroxietilo;o 15R1y R2juntocon elátomo de nitrógenoal que están unidos formanunanillo de morfoliniloo unanillo de 2,3-dihidro-[1,4]oxazin-4-ilo, estando dichosanillosopcionalmentesustituidos con unoo dos gruposseleccionados de grupos alquilo C1-C6, hidroxilo,alcoxilo C1-C6uoxo;R3es independientementehalógeno, -CF3, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;20R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;ny m se seleccionan independientemente de0, 1y 2;o unsolvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptabledelosmismos;con la condición de que se excluyen los compuestos25P20139005703-06-2013
5NNNO,NNClClNO,NNNOFyNNNOF5y sussales.Otroaspecto de esta invenciónse refiere aprocedimientospara la preparación de uncompuestode fórmula(I) tal como se definió anteriormente o unsolvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptabledel mismo.10Otroaspecto de esta invenciónse refiere aunmedicamentoo composición farmacéuticaque comprendeal menosuncompuestode fórmula(I) tal como se definió anteriormente,o unsolvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptabledel mismo y unvehículo, adyuvante o portadorfarmacéuticamente aceptable.15P20139005703-06-2013
6Otroaspecto de esta invenciónse refiere auncompuestode fórmula(I) tal como se definió anteriormente para su uso como medicamento, particularmentepara el tratamiento y/o la profilaxisdeun estado o enfermedad mediado por receptores sigma.Otroaspecto de esta invenciónse refiere alusode uncompuestode fórmula(I) tal 5como se definió anteriormente en la fabricaciónde unmedicamentopara el tratamiento y/o la profilaxisdeun estado o enfermedad mediado por receptores sigma.Otroaspecto de la presente invenciónse refiere aunmétodopara el tratamiento y/o la profilaxisdeun estado o enfermedad mediado por receptores sigma,comprendiendo el10métodoadministraral sujetoque necesitauntratamiento o profilaxisde este tipo unacantidad terapéuticamente eficazde uncompuestode fórmula(I) tal como se definió anteriormente.En unarealización, dichoestado o enfermedad mediado por receptores sigmase 15selecciona delgrupoque consiste endiarrea; migraña; obesidad; niveles de triglicéridoselevados; quilomicronemia; disbetalipoproteinemia; hiperlipoproteinemia; hiperlipidemia; hiperlipidemia mixta; hipercolesterolemia; trastornos lipoproteicos; hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia esporádica; hipertrigliceridemia hereditariay disbetalipoproteinemia; artritis; hipertensión; arritmia; úlcera; déficits de aprendizaje, memoria y atención; trastornos 20cognitivos; enfermedades neurodegenerativas; enfermedades desmielinizantes; adicción a fármacosy sustancias químicasincluyendococaína, anfetamina, etanoly nicotina; discinesia tardía; accidente cerebrovascular isquémico; epilepsia; accidente cerebrovascular; estrés; cáncer; estados psicóticos, en particular depresión, ansiedad o esquizofrenia; inflamación; y enfermedades autoinmunitarias.25En otrarealización, dichoestado o enfermedad mediado por receptores sigmaes dolor, preferiblementedolor neuropático, dolor inflamatorio uotrosestados de dolorque implican alodiniay/o hiperalgesia.30En otrarealización, se usa el compuestode fórmula(I) como unaherramienta farmacológica.Estosaspectosy realizaciones preferidasdelosmismostambién se definen adicionalmente en las reivindicaciones.35P20139005703-06-2013
7DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAINVENCIÓNEn el contextode la presente invención, los siguientes términostienenel significado detallado a continuación.5Tal como se usa en el presente documento alquilo C1-C6, como un grupo o partede ungrupo, definelosradicales hidrocarbonadossaturados de cadena linealo ramificadaque tienen desde1 hasta6 átomosde carbonotales comometilo, etilo, n-propilo,i-propilo,n-butilo,t-butilo,pentilo,hexiloy 2-metilbutilo. Asimismo, alquiloC1-4, como un grupoo partede ungrupo, define radicales hidrocarbonadossaturados de cadena lineal o ramificadaque 10tienendesde1 hasta4 átomosde carbono.La expresiónalcoxilo C1-C6significaalquiloxiloC1-C6o radical alquil C1-C6éter, en los quela expresiónalquilo C1-C6es tal como se definió anteriormente. Asimismo, la expresiónalcoxiloC1-4significaalquiloxilo C1-4o unradical alquil C1-4éter, en los quela 15expresiónalquiloC1-4es tal como se definió anteriormente. Los ejemplosde radicalesalquiléter adecuadosincluyenmetoxilo, etoxilo, n-propoxilo, iso-propoxilo, n-butoxilo, iso-butoxilo, sec-butoxilo, terc-butoxiloy hexanoxilo.El términooxo representaun átomo de oxígenodoblemente unido es decir=O.20Debe observarse quelasposiciones radicales en cualquier restomolecular usado en lasdefiniciones pueden estar en cualquier sitio en tal restosiempre que sea químicamente estable.25Los radicales usados en lasdefiniciones de cualquiervariable en el presente documentoincluyentodos losisómeros posibles a menos que se indique lo contrario. Por ejemplo, pentiloincluye1-pentilo,2-pentiloy 3-pentilo.El término “sal” debe entenderse como cualquier forma de un compuesto activo 30usado según esta invención en la que dicho compuesto está en forma iónica o está cargado y acoplado a un contraión (un catión o anión) o está en disolución. Esta definición también incluye sales de amonio cuaternario y complejos de la molécula activa con otras moléculas e iones, particularmente, complejos formados mediante interacciones iónicas. La definiciónincluye, en particular, sales fisiológicamente aceptables; este término debe entenderse como 35P20139005703-06-2013
8equivalente a “sales farmacológicamente aceptables” o “sales farmacéuticamente aceptables”.El término “sales farmacéuticamente aceptables” en el contexto de esta invención significa cualquier sal que se tolera fisiológicamente (lo que significa normalmente que no es 5tóxica, particularmente, como resultado del contraión) cuando se usa de manera apropiada para un tratamiento, se aplica o usa, particularmente, en seres humanos y/o mamíferos. Estas sales fisiológicamente aceptables pueden formarse con cationes o basesy, en el contexto de esta invención, se entiende que son sales formadas por al menos un compuesto usado según la invención, normalmente un ácido (desprotonado), tal como un anión, 10particularmente cuando se usan en seres humanos y/o mamíferos. Estas sales fisiológicamente aceptables pueden formarse también con aniones o ácidos y, en el contexto de esta invención, se entiende que son sales formadas por al menos un compuesto usado según la invención, normalmente protonado, por ejemplo en nitrógeno, tal como un catión y al menos un anión fisiológicamente tolerado, particularmente cuando se usa en seres 15humanos y/o mamíferos.Esta definición incluye específicamente en el contexto de esta invención una sal formada por un ácido fisiológicamente tolerado, es decir, sales de un compuesto activo específico con ácidos orgánicos o inorgánicos fisiológicamente tolerados, particularmente cuando se usan en seres humanos y/o mamíferos. Ejemplos de este tipo de sales son las formadas con: ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido 20metanosulfónico, ácido fórmico, ácido acético, ácido oxálico, ácido succínico, ácido málico, ácido tartárico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido láctico o ácido cítrico.El término “solvato” según esta invención debe entenderse que significa cualquier forma del compuesto activo según la invención en la que dicho compuesto se une mediante 25un enlace no covalente a otra molécula (normalmente un disolvente polar), incluyendo especialmente hidratos y alcoholatos, como por ejemplo, metanolato. Un solvato preferido es el hidrato.También está dentro del alcance de la invención, cualquier compuesto que es un 30profármaco de un compuestode fórmula (I). El término “profármaco” se usa en su sentido más amplio y abarca aquellos derivados que se convierten in vivoen los compuestos de la invención. Ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, derivados y metabolitos de los compuestos de fórmula I que incluyen restos biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos 35biohidrolizables, ureidos biohidrolizables y análogos de fosfato biohidrolizables. P20139005703-06-2013
9Preferiblemente, los profármacos de compuestos con grupos funcionales carboxilo son los ésteres de alquilo inferior del ácido carboxílico. Los ésteres de carboxilato se forman convenientemente esterificando cualquiera de los restos de ácido carboxílico presentes en la molécula. Normalmente, pueden prepararse profármacos usando métodos bien conocidos, tales como los descritos en Burguer “Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6ª ed. (Donald 5J. Abraham ed. 2001, Wiley), “Design and Applications of Prodrugs” (H. Bundgaard ed.,1985, Harwood Academic Publishers) y Krogsgaard-Larsen et al. “Textbook of Drug design and Discovery” Taylor & Francis (abril de 2002).Los compuestos de formula (I) en los que uno o varios átomos de nitrógeno están 10oxidados a los correspondientes N-óxidos están también abarcados por la presente invención. Mientras que los compuestos N-óxido pueden actuar como profármacos en ciertas circunstancias, de manera inesperada los compuestos N-óxido dentro de la fórmula (I) de la presente invención son activos por sí mismos.15Loscompuestosde la presente invenciónrepresentadospor lafórmula(I) descrita anteriormente pueden incluir enantiómeros dependiendode la presencia de centros quiraleso isómeros dependiendode lapresenciade enlaces múltiples(por ejemploZ, E). Losisómeros, enantiómeroso diastereoisómerosindividuales y mezclasde los mismosse encuentran dentro del alcance de la presente invención.20Además, cualquier compuesto al que se hace referencia en el presente documento puede existir como tautómeros. Específicamente, el término tautómero se refiere a uno de dos o más isómeros estructurales de un compuesto que existen en equilibrio y que se convierten fácilmente de una forma isomérica a otra. Los pares tautoméricos comunes son 25amina-imina, amida-ácido imídico, ceto-enol, lactama-lactima, etc.A menos que se indique lo contrario, también se entiende que los compuestos de la invención incluyen formas isotópicamente marcadas, es decir, compuestos que sólo difieren en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, están 30dentro del alcance de esta invención compuestos que tienen las presentes estructuras excepto por la sustitución de al menos un átomo de hidrógeno por un deuterio o tritio, o la sustitución de al menos un carbono por un carbono enriquecido en 13C o 14C, o la sustitución de al menos un nitrógeno por nitrógeno enriquecido en 15N.35P20139005703-06-2013
10Los compuestos de fórmula (I), o sus sales o solvatos están preferiblemente en forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura. Por forma farmacéuticamente aceptable se entiende, entre otros, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y vehículos, y que no incluyen ningún material considerado tóxico a niveles de dosificación 5normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, lo más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, es superior al 95%del compuesto de fórmula (I), o sus sales, solvatos o profármacos.10Tal como se observó anteriormente, el término “sales, solvatos, profármacos farmacéuticamente aceptables” se refiere a cualquier sal, solvato o cualquier otro compuesto que, tras la administración al receptor puede proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto tal como se describe en el presente documento. Sin embargo, se apreciará que sales, solvatos y profármacos no farmacéuticamente aceptables también se encuentran 15dentro del alcance de la invención dado que pueden ser útiles en la preparación de sales, solvatos y profármacos farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales, solvatos y profármacos puede llevarse a cabo mediante métodos conocidos en la técnica.Tal como se usa en el presente documento, los términos “tratar”, “que trata” y 20“tratamiento” incluyen la erradicación, eliminación, inversión, alivio, modificación o control deunestado o enfermedad mediado por receptores sigma.Tal como se usa en el presente documento, los términos “prevención”, “que previene”, “preventivo”, “prevenir” y “profilaxis”se refieren a la capacidad de uncompuesto25de fórmula(I) de prevenir, minimizar o dificultar la aparición o el desarrollo de unestado oenfermedad mediado por receptores sigmaantes de su aparición.Por tanto, por “tratar” o “tratamiento” y “prevenir” o “prevención”, en su conjunto, se entiende al menos una supresión o una mejora de los síntomas asociados con el estado que 30afecta al sujeto, usándose supresión y mejora en un sentido amplio para referirse a al menos una reducción en la magnitud de un parámetro, por ejemplo, síntoma asociado con el estado que está tratándose. Como tal, el método de la presente invención también incluye situaciones en las que se inhibe completamente el estado, por ejemplo, se impide que se produzca, o se detiene, por ejemplo, se termina, de manera que el sujeto ya no experimenta 35el estado.P20139005703-06-2013
11Tal como se observó anteriormente, la presente invenciónse refiere acompuestosde indazol de fórmula general(I) que tienenactividad farmacológicafrentealreceptor sigma (). Se indica que elcompuesto4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1-fenil-1H-indazol (ejemplo1de la solicitud de patenteinternacional WO 2006/021463), el compuesto 1-(3,4-diclorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol (ejemplo 6 de la solicitud de 5patente internacional WO 2006/021463), el compuesto1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol (ejemplo 65 de la solicitud depatente internacional WO 2006/021463) y el compuestocis-1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(2,6-dimetilmorfolin-4-il)etil)-1H-indazol (ejemplo67de la solicitud de patente internacional WO 2006/021463)y sus sales,en cualquierpureza enantiomérica(es decirmezclas racémicas, mezclas 10enantioenriquecidasy enantiómeros (R)y (S)), que se encuentran dentro de lafórmula general(I), no formanpartede la presente invención.Segúnuna variantede la presente invención, R1y R2juntocon elátomo denitrógenoal que están unidos formanunanillo de morfoliniloo unanillo de 2,3-dihidro-[1,4]oxazin-4-ilo, 15estando dichosanillosopcionalmentesustituidoscon unoo dosgrupos alquilo C1-C6, hidroxilo,alcoxilo C1-C6uoxo. Por tanto,unarealización delainvenciónse refiere acompuestosque tienenlafórmula(Ia):NNN(R3)mO(R4)n(R5)o(R6)p(Ia)20en la quelalínea discontinua(representadapor-----) representaun doble enlace opcional;R3es independientementehalógeno, –CF3, hidroxilo oalcoxiloC1-C6;R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;R5es independientementealquilo C1-C6, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;25R6es oxo;n, my o se seleccionan independientemente de0, 1 y 2;p se selecciona de0, 1y 2,con la condición de queo + p es ≤ 2;P20139005703-06-2013
12o unsolvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptablede los mismos;con la condición de que se excluyen los compuestos4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1-fenil-1H-indazol,1-(3,4-diclorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol, 1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol y cis-1-(4-5fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(2,6-dimetilmorfolin-4-il)etil)-1H-indazol y sussales. LoscompuestosN-óxidode lospresentescompuestospretendencomprender loscompuestosde fórmula(I) en la queunoo variosátomosde nitrógenose oxidanpara dar eldenominadoN-óxido. Como tal, compuestospreferidos de fórmula(Ia)se seleccionan 10compuestosde fórmula(Iaa):NNN(R3)mOO(R4)n(R5)o(R6)p(Iaa)en la quelalínea discontinua(representada por -----) representaun doble enlace opcional;15R3es independientementehalógeno, –CF3, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;R5es independientementealquilo C1-C6, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;R6es oxo;n, my o se seleccionan independientemente de0, 1 y 2;20p se selecciona de0, 1y 2,con la condición de queo + p es ≤ 2;o un solvato, profármaco, isómero, sal farmacéuticamente aceptable delosmismos.Se prefieren más compuestosde fórmula(Iaa) en la quelalínea discontinua(representada por -----) no estépresente, es decirno existe ningún doble enlace25resultanteen unanillo de morfolinilo.P20139005703-06-2013
13Según una realización preferidaen los compuestos de fórmula (Iaa), m es cero. Alternativamente, si m es 1 o 2, R3 es preferiblemente e independientemente flúor, cloro o –CF3.Según una realización preferida en compuestos de fórmula (Iaa), n es 0 y/o p es 0.5Según una realización preferida en los compuestos de fórmula (Iaa), o es 0. Alternativamente, si o es 1 o 2, R5 es preferiblemente alquiloC1-6 y más preferiblemente metilo.10Un ejemploparticulary preferido es N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinaNNNOOUn ejemplo particular y preferido es N-óxido de 4-(2-(1-(4-(trifluorometil)fenil)-4,5,6,7-15tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil) morfolinaNNN+FFFOO-P20139005703-06-2013
14Otroscompuestospreferidos de fórmula(Ia) se seleccionan decompuestosde fórmula(Iab):NNN(R3)mO(R4)n(R5)o(Iab)en la que5lalínea discontinua(representada por -----) representaun doble enlace opcional;R3es independientementehalógeno, –CF3,hidroxilo o alcoxiloC1-C6;R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;R5es independientementealquilo C1-C6, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;n, my o se seleccionan independientemente de0, 1 y 2,con la condición de quen + 10m + o es ≥ 1;o unsolvato, profármaco, isómero, sal farmacéuticamente aceptable delosmismos;con la excepción de que se excluyen los compuestos 1-(3,4-diclorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol, 1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(morfolin-4-il)etil)-1H-indazol y cis-1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-4-(2-(2,6-15dimetilmorfolin-4-il)etil)-1H-indazol y sus salesLas subfórmulas representativas que se encuentrandentro delafórmula(Iab) se representan a continuación:P20139005703-06-2013
15NNNOHOOHNNNOHONNNOOHNNNOOHNNNONNNONNNOHalógenoHalógenoHalógenoAlquiloC1-6AlquiloC1-6NNNOAlquiloC1-6AlquiloC1-6NNNOAlquiloC1-6AlquiloC1-6HalógenoHalógenoHalógenoLos compuestos de fórmula (Iab) en los que la línea discontinua (representada por -----)no está presente, es decir no hay doble enlace resultante del anillo morfolinilo, son más preferidos cuando o es 0. Así mismo, los compuestos de fórmula (Iab) en los que la 5línea discontinua (representada por -----) está presente, es decir hay doble enlace, son más preferidos cuando o es 1 o2.Según una realización particular en los compuestos de fórmula (Iab), m es 0. Alternativamente, si m es 1 o 2, R3es preferiblemente OH. 10Según una realización particular en los compuestos de fórmula (Iab), n es 0. P20139005703-06-2013
16Alternativamente, si n es 1 o 2, R4es preferiblemente OH. Según una realización particular enlos compuestos de fórmula (Iab), o es 0. Alternativamente, si o es 1 o 2, R5es preferiblemente OH. 5Compuestospreferidos de fórmula(Ia) también se seleccionan decompuestosde fórmula(Iac):NNN(R3)mO(R4)nO(Iac)en la que10R3es independientementehalógeno, –CF3, hidroxilo o alcoxiloC1-C6;R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;ny m se seleccionan independientemente de0, 1 y 2;o unsolvato, profármaco, isómero, sal farmacéuticamente aceptable delosmismos.15Segúnuna realización preferida en los compuestos de fórmula (Iac), m es 0. Alternativamente, si m es 1 o 2, R3es preferiblemente flúor, cloro,–CF3u OH.Según una realización particular en los compuestos de fórmula (Iac), n es 0. Alternativamente, si n es 1o 2, R4es preferiblemente OH.20Segúnotravariantede la presente invención, R1se selecciona dehidrógenoo –CHOy R2es hidroxietilo. Por tanto,unarealización adicional de lainvenciónse refiere acompuestosque tienen lafórmula(Ib):P20139005703-06-2013
17NNN(R3)mR1(R4)nOH(Ib)en la queR1se selecciona dehidrógenoo –CHO;R3es independientementehalógeno, –CF3,hidroxilo o alcoxiloC1-C6;5R4es independientementehidroxilo o alcoxiloC1-C6;ny m se seleccionan independientemente de0, 1 y 2;o un solvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptablede los mismos.10Según una realización preferida en los compuestos de fórmula (Ib), m es 0. Alternativamente, si m es 1 o 2, R3es preferiblemente flúor, cloro,–CF3u OH.Según una realización particular en los compuestos de fórmula (Ib), n es 0. Alternativamente, si n es 1 o 2, R4es preferiblemente OH.15En términos generales, preferiblemente, el halógenose selecciona deflúor o cloroen las fórmulas anteriores. Asimismo, alcoxilo C1-4es unsubgrupo preferidodentro delalcoxilo C1-C6; ejemplos particularessonmetoxilo, etoxiloy n-propoxilo. Además, alquiloC1-4es unsubgrupo preferido dentro delalquilo C1-C6; ejemplos particularessonmetilo, etiloy n-20propilo,preferiblementemetilo. En loscompuestosde fórmula(I)o subfórmulasde los mismos, lossustituyentes R3, R4, R5y R6pueden estar unidos a cualquier átomo de carbonodel anillo correspondiente.25En realizaciones preferidas adicionales, se combinan las preferencias descritasanteriormentepara los diferentessustituyentes. La presente invencióntambién se refiere a tales combinaciones de sustituciones preferidas en las fórmulas anteriores. P20139005703-06-2013
18Los compuestos individuales particularde lainvenciónque se encuentrandentro delafórmula(I) incluyenloscompuestosenumeradosa continuación: -N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;-N-óxidode 4-(2-(1-(3,4-diclorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;-N-óxidode 2,6-dimetil-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;5-N-óxidode (2R,6S)-2,6-dimetil-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;-N-óxidode 4-(2-(1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;-N-óxidode (R)-4-(2-(1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;-N-óxidode (S)-4-(2-(1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina;10-N-óxidode 4-(2-(1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)-2,6-dimetilmorfolina;-N-óxidode (2R,6S)-4-(2-(1-(4-fluorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)-2,6-dimetilmorfolina;-4-(2-morfolin-4-il-etil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-5-ol;15-4-(2-morfolin-4-il-etil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-6-ol;-4-(2-morfolin-4-il-etil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-7-ol;-1-(2-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-5-ol;-1-(3-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-5-ol;-1-(4-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-5-ol;20-1-(2-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-6-ol;-1-(3-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-6-ol;-1-(4-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-6-ol;-1-(2-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-7-ol;-1-(3-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-7-ol;25-1-(4-hidroxi-fenil)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-7-ol;-2-[4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-indazol-1-il]-fenol;-(-)-2-(4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol;-(+)-2-(4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol;-3-[4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-indazol-1-il]-fenol;30-4-[4-(2-morfolin-4-il-etil)-4,5,6,7-tetrahidro-indazol-1-il]-fenol;-4-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-3,4-dihidro-2H-[1,4]oxazin-2-ol;-4-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-3,4-dihidro-2H-[1,4]oxazin-3-ol;-4-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-5,6-dihidro-4H-[1,4]oxazin-2-ol;-4-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-5,6-dihidro-4H-[1,4]oxazin-3-ol;35P20139005703-06-2013
19-4-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-morfolin-3-ona;-2-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etilamino]-etanol; -N-(2-hidroxi-etil)-N-[2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)-etil]-formamida;y-N-óxido de 4-(2-(1-(4-(trifluorometil)fenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil) morfolin 5ounsolvato, profármaco, isómero, sal o N-óxidofarmacéuticamente aceptablede los mismos.Compuestos individuales preferidosde lainvenciónsonN-óxidode (R)y (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinaasí como sus sales, siendo la sal de 10clorhidratoparticularmentepreferida. Además, clorhidrato de N-óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinarepresentaunarealización máspreferida.Loscompuestosde fórmula(I) definidosanteriormentepueden obtenerse mediante procedimientos sintéticos disponibles. Por ejemplo, éstos pueden prepararse mediante el 15acoplamientode uncompuestode fórmula(II):NN(R3)m(R4)nX(II)en la queR3-R4, my n son tal como se definióen la fórmula(I),y X es ungrupo saliente, preferiblementecloroo piridinio,con uncompuestode fórmula(III):20HNR1R2(III)en la queR1y R2son tal como se definió anteriormente en la fórmula(I).25Lareacción de compuestosde formulas (II)y (III) se lleva a cabo preferiblementeen un disolvente aprótico tal como, pero sin limitarse a,dimetilformamida(DMF)en presencia P20139005703-06-2013
20de una baseinorgánica, tal comoK2CO3. Los compuestosde fórmula(III) están disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante métodos convencionales. Los compuestosobtenidos, cuando es necesario, pueden recogerse de la mezcla de reacciónsegúnlos métodos conocidosen la técnica. Por ejemplo, cuando los materiales 5insolubles están presentes, puede obtenerse el compuestodeseado,tras eliminarlosmateriales insolubles mediantefiltración, eliminando el disolvente, por ejemploeliminandoel disolventea presión reducida, y/o añadiendoaguaal residuoy extrayendolamezclacon undisolvente orgánico inmiscible con aguatal comoacetato de etilo, etc. Opcionalmente, puede obtenerse el compuestodeseadotras secarsobre sulfato de sodio anhidro, por 10ejemplo,y adicionalmente,si es necesario, purificandocon cualquiermétodo convencional, tal comorecristalización,cromatografía en columna uotras técnicas.Es evidentequeen lo anteriory en las reacciones mostradas a modo deejemplo,pueden aislarse los productos dereacción del medio dereaccióny, si es necesario, 15purificarse de manera adicional mediante métodosgeneralmenteconocidos en la técnica, talescomoextracción,cristalización,trituración y cromatografía. Cuando los procedimientos descritos anteriormente para la preparación de compuestosde la invencióndan lugar amezclasde estereoisómeros, estosisómeros pueden separarse mediante técnicas convencionales tales comocromatografía preparativa.Si existen centros quirales pueden 20prepararse loscompuestosen forma racémica,o pueden prepararse enantiómeros individualeso bien mediante síntesisenantioespecíficaso bien medianteresolución.Muchoscompuestoscomprendidospor lafórmula(I) pueden convertirse unos en otros siguiendoreacciones de transformación de grupo funcionalbien conocidas en la 25técnica. Preferiblemente, éstos se obtienen utilizando materiales de parida adecuados, comopor ejemplo, compuestosde fórmula(II)e(III) que incluyen ya lossustituyentesdeseados. En particular,en loscompuestoscon sustituyentes hidroxilocomoR3, R4o R5, tales restoshidroxilo pueden convertirse en elcorrespondientealcoxilo C1-6haciendo reaccionar 30loscompuestoscon un haluro de alquilo C1-C6en presencia de unabase, tal comoun álcalide hidruro de metal alcalino, comohidruro de litioo hidruro de sodio,o un alcóxido de metal alcalino, comometóxido de potasio o sodioo etóxido, terc-butóxido de potasio,o carbonato de potasio, trietilamina, piridina, yoduro de sodio, carbonato de cesio, etc. El haluro dealquilo C1-C6puede seleccionarse, por ejemplo, deyoduro de etilo o metilo.35P20139005703-06-2013
21Además, en loscompuestoscon sustituyentes alcoxilo C1-C6como R3, R4o R5, tales restosalcoxilo C1-C6pueden convertirse en el correspondientehidroxilosometiendolos compuestos pertinentesa condicionesácidas, tales como con ácido clorhídrico, ácido bromhídricoo ácido yodhídrico.5Los compuestosde fórmula(I)de la presente invenciónpueden convertirse en las correspondientes formas deN-óxidosiguiendoprocedimientosconocidos en la técnicapara convertir unnitrógeno trivalenteen su forma deN-óxido. Las formas deN-óxidode lospresentescompuestospretenden comprenderloscompuestosde fórmula(I) en la queuno o varios átomosde nitrógenose oxidanpara dar el denominadoN-óxido. Dicha reacción deN-10oxidación puede llevarse a cabo generalmentehaciendo reaccionar elcompuestode fórmula(I)con un peroxido orgánico o inorgánico apropiado. Los peróxidosinorgánicos apropiadoscomprenden, por ejemplo, peroxido de hidrógeno, peróxidosde metal alcalinotérreo o metal alcalino, por ejemploperoxido de sodio, peroxido de potasio; los peróxidosorgánicos apropiadospueden comprenderperoxiácidos tales como, por ejemplo, ácido bencenocarbo-15peroxoicoo ácido bencenocarboperoxoico sustituido con halógeno, por ejemploácido 3-clorobenceno-carboperoxoico, ácidos peroxoalcanoicos, por ejemploácido peroxoacético, alquilohidroperóxidos, por ejemplohidro-peróxido de terc-butilo. Disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, alcoholes inferiores, porejemploetanoly similares, hidrocarburos, por ejemplotolueno, cetonas, por ejemplo2-butanona, hidrocarburos halogenados, por ejemplo20diclorometano,y mezclasde tales disolventes.Se ha encontrado que loscompuestosde fórmula general(I) tienenaltaafinidadcon respecto a losreceptoressigma, es decir,son ligandos selectivospara elreceptor sigmay actúancomomoduladores, por ejemploantagonistas, agonistas inversoso agonistas, en 25estosreceptores.La presente invenciónproporciona además medicamentoso composiciones farmacéuticasque comprendenuncompuestode esta invención,o unN-óxido, sal, derivado, profármaco o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismojuntocon 30unvehículo, adyuvante, portador farmacéuticamente aceptable, paralaadministración a un paciente. Los materiales auxiliares o aditivos de una composición farmacéutica según la presente invención pueden seleccionarse entre portadores, excipientes, materiales de 35soporte, lubricantes, cargas, disolventes, diluyentes, colorantes, acondicionadores de sabor P20139005703-06-2013
22tales como azúcares, antioxidantes, ligantes, adhesivos, disgregantes, antiadherentes, deslizantes y/oaglutinantes. En el caso de supositorios, estos pueden implicar ceras o ésteres de ácidos grasos o conservantes, emulsionantes y/o vehículos para aplicación parenteral. La selección de estos materiales auxiliares y/o aditivos y las cantidades que van a usarse dependerán de la forma de aplicación de la composición farmacéutica.5El medicamentoo la composición farmacéuticasegúnla presente invenciónpueden estar en cualquierformaadecuada para la aplicación a seres humanosy/o animales, preferiblementeseres humanos incluyendolactantes, niñosy adultosy pueden producirse mediante procedimientos convencionalesconocidospara los expertos en la técnica. Por 10tanto, la formulación según la invención puede adaptarse para la aplicación tópica o sistémica, particularmente para la aplicación dérmica, transdérmica, subcutánea, intramuscular, intra-articular, intraperitoneal, intravenosa, intra-arterial, intravesical, intraósea, intracavernosa, pulmonar, bucal, sublingual, ocular, intravitreal, intranasal, percutánea, rectal, vaginal, oral, epidural, intratecal, intraventricular, intracerebral, 15intracerebroventricular, intracisternal, intraespinal, periespinal, intracraneal, suministro mediante agujas o catéteres con o sin dispositivos de bombeo, u otras vías de aplicación.En una realización preferidalascomposiciones farmacéuticasestánen forma oral, o bien sólidao bien líquida. Las formas de dosis adecuadaspara la administración oral 20pueden ser comprimidos, píldoras, comprimidos oblongos, cápsulas de gel, chicles, cápsulas, gránulos, gotas,jarabeso disoluciones y pueden contener excipientes convencionales conocidosen la técnica tal comoagentes de unión, por ejemplojarabe, goma arábica, gelatina, sorbitol, tragacanto,o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplolactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitolo glicina; lubricantes para la 25preparación de comprimidos, por ejemploestearato de magnesio; disgregantes, por ejemploalmidón, polivinilpirrolidona, glicolatosódico dealmidón o celulosa microcristalina;o agentes humectantes farmacéuticamente aceptablestales comolaurilsulfato de sodio.Lascomposiciones orales sólidas pueden prepararse mediante métodos30convencionalesde mezclado, llenadoo preparación de comprimidos. Pueden usarse operacionesde mezclado repetidaspara distribuirel principioactivopor todas partesde las composiciones que empleangrandescantidadesde cargas. Talesoperaciones sonconvencionalesen la técnica. Loscomprimidospueden prepararse por ejemplomediantegranulación en seco o en húmedoy opcionalmenterecubrirse segúnmétodos bien 35conocidos en la práctica farmacéutica normal,en particularcon unrecubrimientoentérico.P20139005703-06-2013
23Lascomposiciones farmacéuticastambién pueden adaptarse para la administraciónpor vía parenteral,tal comodisoluciones,suspensionesestériles, o preparaciones secas reconstituibles,aerosoleso pulverizacionesen la forma farmacéutica unitariaapropiada. Pueden usarse excipientes adecuados, talescomoagentes de carga, agentes de tamponamiento o tensioactivos.5La composición de la invención puede formularse como depósitos en forma disuelta o en parches,para la aplicación percutánea.Las aplicaciones en la piel incluyen pomadas, geles, cremas, lociones, suspensiones 10o emulsiones.La forma adecuada de aplicación rectal es por medio de supositorios.Lasformulaciones mencionadas se prepararán usandométodos convencionales 15tales comolos descritoso mencionados en las FarmacopeasEspañola y Estadounidense y textos de referencia similares.En una realización de la invención, se prefiere que el compuesto de fórmula (I) se use en cantidades terapéuticamenteeficaces. El médico determinará la dosificación de los 20presentes agentes terapéuticos que será la más adecuada y variará con la forma de administración y el compuesto particular elegido, y además, variará con el paciente en tratamiento, la edad del paciente, el tipo de estado o enfermedad que está tratándose.Cuando la composición se administra por vía oral, se requerirán mayores cantidades del principio activo para producir el mismo efecto que una cantidad menor administrada por vía 25parenteral. Los compuestos son útiles de la misma manera que agentes terapéuticos comparables y el nivel de dosificación es del mismo orden de magnitud que se emplea generalmente con estos otros agentes terapéuticos. Los compuestosactivos se administrarán normalmente unao másvecesaldíapor ejemplo1, 2, 3ó4 vecesdiarias,con dosis diarias totalestípicas en el intervalo de desde0,1 hasta1000 mg/kg/día.30Loscompuestosy las composiciones de esta invenciónpueden usarse con otros fármacos para proporcionar unaterapia de combinación. Los otros fármacos pueden formar partede la misma composición, o proporcionarse como una composición separada para la administración al mismo tiempo o en un momentodiferente.35P20139005703-06-2013
24Los siguientes ejemplos son simplemente ilustrativos de ciertas realizaciones de la invención y no puede considerarse que la restrinjan de ninguna manera.EJEMPLOS5Ejemplo1: Síntesisde N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.NNNONNN+OMCPBACH2Cl2,0ºCO-Se secó unadisoluciónde ácido m-cloroperbenzoico(MCPBA)(70% de pureza, 0,67 g, 2,75 mmoles)en CH2Cl2(40 ml) sobresulfato de sodioy se filtró y luego se añadió a 10unadisoluciónde 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(0,78 g, 2,5mmoles)en CH2Cl2(10 ml) enfriadaen un baño de hielo. Se dejó que la mezcla alcanzarala temperatura ambientey se monitorizó lareacción medianteCCF. Se lavó la mezclacon unadisoluciónde NaOHy se extrajo la fase acuosacon CH2Cl2varias veces. Se secó la faseorgánicacon sulfato de sodio, se filtró y se eliminó a presión reducida. Se purificó el15producto bruto resultante(0,32 g) mediantecromatografía ultrarrápida(CH2Cl2:MeOH 8:2) produciendoN-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(0,19 g, 0,60 mmoles, 24%) como un sólido beige.1H RMN(300 MHz, CDCl3) : 7,55 (s, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,34 (m, 1H), 4,50 (t, 2H), 3,79 (d, 2H), 3,26-3,42 (m, 4H), 3,13 (t, 2H), 2,89 (m, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,43 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 201,99 (m, 2H), 1,72 (m, 1H), 1,52 (m, 1H).1H RMN(300 MHz, CDCl3+ TFA) : 8,28 (s, 1H), 7,63 (m, 3H), 7,42 ( d, J= 7,3Hz, 2H), 4,28 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,80-4,00 (m, 4H), 3,70 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,02-2,32 (m, 3H), 1,80 (m, 1H), 1,50 (m, 1H).25Ejemplo2: Clorhidrato de N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.A unadisolución de N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(1,19 g, 3,64 mmoles) disueltaen acetona(8 ml) se le añadióHCl 4Nen dioxano(0,91 ml) produciendoclorhidrato de N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-30indazol-4-il)etil)morfolinacomo un sólido(0,40 g, 1,10 mmoles, 30%). P20139005703-06-2013
25Sólido beige. p.f.174,5-175,5ºC1H RMN(300 MHz, DMSO-d6) : 12,44 (b a, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,52 (m, 4H), 7,35 (m, 1H), 3,96 (m, 4H), 3,89 (m, 2H), 3,74 (m, 4H), 2,74 (m, 3H), 2,27 (m, 1H), 1,93 (m, 3H), 1,64 (m, 1H), 1,41 (m, 1H).5Ejemplo3: Síntesisde N-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.(R)NNNO(R)NNN+OMCPBACH2Cl2,0ºCO-10A unadisoluciónde (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(390 mg, 1,25 mmoles)en CH2Cl2(20 ml) se le añadióen porcionesácido m-cloroperbenzoico(70% de pureza, 367 mg, 1,49 mmoles)y se agitó a temperatura ambientedurante4 horas, monitorizando lareacción medianteCCF. Se lavó ladisolucióndos veces con NaOH 1Ny aguay se secó la fase orgánicay se eliminó a presión reducida. 15Se purificó elproducto bruto resultantemediantecromatografía ultrarrápidaproduciendoN-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinacomo un aceite (171 mg, 0,52 mmoles, 41,7%).1H RMN(300 MHz, CDCl3) : 7,54 (s, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,33 (m, 1H), 4,49 (t, J = 11,2Hz, 202H), 3,79 (d, J = 12,3Hz, 2H), 3,41 (m, 2H), 3,32 (td, J = 11,6, 3,5Hz, 2H), 3,17 (t, J = 9,8Hz, 2H), 2,90 (m, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,42 (m, 1H), 1,73-2,09 (m, 3H), 1,52 (m, 1H).[]20436= -7,8(c=1, MeOH)Tiempo de retención= 16,78 min.Pureza enantiomérica= 97,5%deee25Condiciones de HPLC quiral:Fase móvil: EtOH/n-Heptano75/25 v/vColumna: CHIRALPAK AD-H 5 m, 0,46*25 cmFlujo: 0,35 ml/min.(44 bar)Detector UV: longitud de ondafijada a280 nm30P20139005703-06-2013
26Ejemplo4: Clorhidrato de N-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.A unadisolución de N-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(0,26 g, 0,80 mmoles) disueltaen acetona(4 ml) se le añadió HCl 4Nen dioxano(0,19 ml) produciendo clorhidrato de N-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-51H-indazol-4-il)etil)morfolinacomo un sólido(0,15 g, 0,40 mmoles, 50%). Sólidobeige. p.f.169-174ºC1H RMN(300 MHz, DMSO-d6) : 12,40 (s a, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,52 (m, 4H), 7,36(m, 1H), 3,96 (m, 4H), 3,89 (m, 2H), 3,74 (m, 4H), 2,74 (m, 3H), 2,26 (m, 1H), 1,93 (m, 3H), 1,63 (m, 101H), 1,42 (m, 1H).Ejemplo5: N-óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.(S)NNNO(S)NNN+OMCPBACH2Cl2,0ºCO-A unadisoluciónde (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina15(277 mg, 0,89 mmoles)en CH2Cl2(20 ml) se le añadióen porcionesácido m-cloroperbenzoico(70% de pureza, 261 mg, 1,06 mmoles)y se agitó a temperatura ambientedurante5 horas, monitorizando la reacción medianteCCF. Se lavó la disolucióndos veces con NaOH 1Ny agua y se secó la fase orgánicay se eliminóa presión reducida. Se purificó el producto bruto resultante mediantecromatografía ultrarrápidaproduciendoN-20óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinacomo un aceite (97 mg, 0,30 mmoles, 33,0%).[]20436= +9,8(c=1, MeOH)Tiempo de retención= 66,40 min.Pureza enantiomérica= 99,5% de ee25Condiciones de HPLC quiral:Fase móvil: EtOH/n-Heptano75/25 v/vColumna: CHIRALPAK AD-H 5 m, 0,46*25 cmFlujo: 0,35 ml/min.(44 bar)Detector UV: longitud de ondafijada a 280 nm30P20139005703-06-2013
27Ejemplo6: Síntesisde clorhidrato de N-óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.(S)NNN+OHCl4N,dioxanoO-acetona(S)NNN+OO-HClA unadisolución de N-óxido(S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(0,48 g, 1,48 mmoles) disueltaen acetona(4 ml) se le añadió HCl 4Nen 5dioxano(0,37 ml) produciendoclorhidrato de N-óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolinacomo un sólido (0,26 g, 0,72 mmoles, 49%). Sólido beige.p.f.158-162ºC1H RMN(300 MHz, DMSO-d6) : 12,37 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,53 (m, 4H), 7,37 (m, 1H), 3,96 10(m, 4H), 3,93 –3,84 (m, 2H), 3,74 (s a, 4H), 2,75 (m, 3H), 2,28 (m, 1H), 1,95 (m, 3H), 1,65 (m, 1H), 1,43 (m, 1H). Ejemplo7: Síntesisde 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-ona.NNNNNOClOHNOHNa,DMFMW,100ºC,10min.O15Se añadió NaH (38 mgde dispersión al 55-65%, 0,96 mmoles) a una disoluciónde morfolin-3-ona(42,5mg, 0,42 mmoles)en DMF (2 ml) bajo argón a 0ºCy se agitó la mezcla durante 30 minutosy se añadió 4-(2-cloroetil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol (100 mg, 0,38 mmoles) a la mezclaanterior y se dejó alcanzar temperatura ambiente. Se irradió con microondas la mezcla a 100ºC (punto de ajuste de potencia150 W; tiempo de reposo10 20min.). Se eliminó eldisolventea presión reduciday se diluyó elproducto bruto resultanteen acetato deetilo. Se lavó la fase orgánica con agua ácida y luegocon agua básica. Se secó la fase orgánicay se eliminó el disolventea presión reducida. Se purificó el producto bruto mediantecromatografía ultrarrápidaproduciendo4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-onacomo un aceite naranja(37 mg, 0,113 mmoles, 29%).25P20139005703-06-2013
281H RMN(400 MHz, CDCl3) 7,55 (s, 1H), 7,52-7,39 (m, 4H), 7,35-7,27 (m, 1H), 4,18 (s, 2H), 3,90 (t, J= 5,1Hz, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,41 (q, J= 5,2Hz, 2H),2,77 (m, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,10-1,95 (m, 3H), 1,76-1,65 (m, 2H), 1,47 (m, 1H).Ejemplo8: Síntesisde (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-5ona.(R)NN(R)NNNOClOHNOHNa,DMFMW,100ºC,10min.OSe preparó el compuesto del tituloa partir de(R)-4-(2-cloroetil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol(200 mg, 0,77 mmoles), NaH (76 mgde dispersiónal 55-65%, 1,91 10mmoles)y morfolin-3-ona(85 mg, 0,84 mmoles)en DMF (2ml)y se irradió con microondas la mezclaa 100ºC (punto de ajuste de potencia150 W; tiempo de reposo10 min.). Se purificó el producto bruto mediantecromatografía ultrarrápidaproduciendo (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-ona(70,1mg, 0,21 mmoles, 28%).151H RMN(300 MHz, CDCl3) 7,54 (s,1H), 7,47 (m, 4H), 7,32 (m, 1H), 4,18 (s, 2H), 3,90 (t, J= 5,1Hz, 2H), 3,67 (m, 1H), 3,55-3,35 (m, 3H), 2,71 (m, 3H), 2,02 (m, 3H), 1,70 (m, 2H), 1,48 (m, 1H)[]20D= +1,6(c=0,5, MeOH)Pureza enantiomérica= 92% de ee20Columna: (Chiralcel OD-H)Ejemplo9: Síntesisde (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-ona.25P20139005703-06-2013
29(S)NN(S)NNNOClOHNOHNa,DMFMW,100ºC,10min.OSe preparó el compuesto del titulo a partir de(S)-4-(2-cloroetil)-1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol(200 mg, 0,77 mmoles), NaH (76 mgde dispersiónal 55-65%, 1,91 mmoles)y morfolin-3-ona(85 mg, 0,84 mmoles)en DMF (2ml)y se irradió con microondas lamezclaa100ºC (punto de ajuste de potencia150 W; tiempo de reposo10 min.). Se 5purificó el producto brutomediante cromatografía ultrarrápidaproduciendo (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolin-3-ona(47 mg, 0,14 mmoles, 19%).Los datos espectroscópicos de 1H RMNson idénticos a losdelejemplo8[]20D= -0,9(c=0,5, MeOH)Pureza enantiomérica= 99% de ee10Columna: (Chiralcel OD-H)Ejemplo10: Síntesisde 2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.NNNHOHLiAlH4,THFNNNHOHOSe añadió N-(2-hidroxietil)-2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)acetamida15(0,85 g, 2,98mmoles) a una suspensión agitadade LiAlH4 (0,57 g, 14,8mmoles)en THF seco(10 ml) a0ºCy se sometió a reflujo lamezcladurante5 h. Se enfrió la mezcla de reaccióny se descompuso elexcesode hidrurocon aguae hidróxidode sodio. Se filtró la mezclay se lavó con acetato de etilo. Se lavó la fase orgánica con aguar, se secó y se eliminó a presión reducidaproduciendo2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-20il)etilamino)etanol (0,78 g, 2,74 mmoles, 92%) como un aceite amarillento.1H RMN(400 MHz, CDCl3) 7,52 (s, 1H), 7,50-7,41 (m, 4H), 7,31 (m, 1H), 3,69 (t, J= 5,1Hz, 2H), 2,90-2,76 (m, 5H), 2,70 (m, 2H), 1,97 (m, 3H), 1,69 (m, 2H), 1,42 (m, 1H).P20139005703-06-2013
30Ejemplo11: Síntesisde clorhidrato de 2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.NNNHOHHClA una disolución de2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (0,78 g, 2,74 mmoles) disueltaen isopropanol (4 ml) se le añadió HCl 4Nen dioxano(0,68 5ml) produciendoclorhidrato de 2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol como un sólido beige (0,41 g, 1,28 mmoles, 47%). p.f.158-161ºC.Ejemplo12: Síntesisde (R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.10(R)NNNHOHLiAlH4,THF(R)NNNHOHOSe preparó el compuesto del titulosegúnel procedimiento general proporcionadoen el ejemplo9 a partir de(R)-N-(2-hidroxietil)-2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-15il)acetamida(0,52 g, 1,73 mmoles), LiAlH4 (0,40 g, 10,93 mmoles)en THF seco(80 ml). Se obtuvo (R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol como unaceite ámbar(0,42 g, 1,49 mmoles, 86%). 1H RMN(300 MHz, CDCl3) 7,52 (s, 1H), 7,50-7,41 (m, 4H), 7,31 (m, 1H), 3,67 (t, J= 5,2Hz, 202H), 2,85-2,84 (m, 5H), 2,71 (m, 2H), 1,96 (m, 3H), 1,67 (m, 2H), 1,44 (m, 1H).[]20D= +7,1(c=1, MeOH).Ejemplo13: Síntesisde clorhidrato de (R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.25P20139005703-06-2013
31(R)NNNHOHHClA una disolución de(R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (0,53 g, 1,88 mmoles) disueltaen isopropanol (3 ml) se le añadió HCl 4Nen dioxano(0,47 ml) produciendoclorhidrato de(R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol como un sólido beige (0,26 g, 1,21 mmoles, 64%). p.f.174-5176ºC.[]20D+4,8(c=1, MeOH).Pureza enantiomérica:97%de ee Columna: (Chiralpak AD-H)10Ejemplo14: Síntesisde (S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.(S)NNNHOHLiAlH4,THF(S)NNNHOHOSe preparó el compuesto del titulosegúnel procedimientogeneral proporcionadoen el ejemplo9 a partir de(S)-N-(2-hidroxietil)-2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-15il)acetamida(1,01 g, 3,39 mmoles), LiAlH4 (0,64 g, 16,6mmoles)enTHF seco (100 ml). Se obtuvo (S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol como un aceite amarillento(0,81 g, 2,82 mmoles, 83%). Los datos espectroscópicos de 1H RMNson idénticos a los del ejemplo11[]20D= -4,4(c=0,5, MeOH)20Columna: (Chiralpak AD-H).Ejemplo15: Síntesisde clorhidrato de (S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol.P20139005703-06-2013
32(S)NNNHOHHClA una disolución de (S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (56 mg, 0,19 mmoles) disueltaen isopropanol (1 ml) se le añadióHCl 4Nen dioxano(0,047 ml) produciendoclorhidrato de (S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol como un sólido blanco(31,1mg, 0,096 mmoles, 48%). p.f.174-175ºC.5[]20D= -5,1(c=1, MeOH)Pureza enantiomérica= 99%de ee Columna: (Chiralpak AD-H)Ejemplo16: Síntesisde N-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-10il)etil)formamida.NNNOHNNNHOHHOOReflujoHOSe sometió a reflujo unamezclade 2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (0,14 g, 0,49 mmoles)y un excesode formiato de etilodurante2 horas. Se eliminó el excesode formiato de etiloa presión reducida. Se diluyó el residuocon acetato 15de etiloy se lavó con agua, se secó y se eliminó a presión reduciday se purificó el material resultante mediantecromatografía ultrarrápidaproduciendoN-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)formamida (128 mg, 0,41 mmoles, 28%) como una pasta espesa.20Ejemplo17: Síntesisde (R)-N-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)formamida.P20139005703-06-2013
33(R)NNNOH(R)NNNHOHHOOReflujoHOSe preparó el compuesto del titulosegúnelprocedimiento general proporcionado en el ejemplo15 a partir de (R)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (350 mg, 1,22 mmoles)y un excesode formiato de etilo. Se obtuvo (R)-N-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)formamida(136 mg, 0,43 mmoles, 36%) como 5una pasta espesa. Pureza enantiomérica>98%de ee. Se determinó el exceso enantioméricomedianteRMNusando(R)-(-)-2,2,2-trifluoro-1-(9-antril)-etanol como agente de solvatación quiral en CDCl3. 10Ejemplo18: Síntesisde(S)-N-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)formamida.(S)NNNOH(S)NNNHOHHOOReflujoHOSe preparó el compuesto del titulosegúnel procedimiento general proporcionadoen 15el ejemplo15 a partir de(S)-2-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etilamino)etanol (410 mg, 1,44 mmoles)y un excesode formiato de etilo. Se obtuvo (S)-N-(2-hidroxietil)-N-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)formamida(110 mg, 0,35 mmoles, 24%) como una pasta espesa. 20Purezaenantiomérica>98%de ee.Se determinó el excesoenantioméricomedianteRMNusando(R)-(-)-2,2,2-trifluoro-1-(9-antril)-etanol como agente de solvatación quiral en CDCl3. Ejemplo19: Síntesisde 4-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol.25P20139005703-06-2013
34NNNONNNOBBr3,CH2Cl2OHO-60ºCA unadisoluciónde 4-(2-(1-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(60 mg, 0,176 mmoles)en diclorometano(3 ml) enfriada hasta-60ºC se le añadió BBr3(0,53 mmoles, 0,53 mlde BBr31M en diclorometano)y se agitó la mezclaa 5temperatura ambientedurante24 horas. Se enfrió la mezcla de reacción, se diluyócon aguay diclorometano. Se separó la fase orgánica, se lavó con bicarbonato de sodio(disolución saturada), aguay se evaporó. Se purificó el material resultante mediantecromatografía ultrarrápidaproduciendo 4-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol (10 mg, 0,03 mmoles, 17%) como una pasta espesa.101H RMN(300 MHz, CDCl3) 7,48 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,8Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,8Hz, 2H), 3,75 (t, J = 4,6Hz, 4H), 2,76 (s, 1H), 2,65-2,41 (m,8H), 1,92 (m, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,42 (m, 1H).15Ejemplo 20: N-óxido de 4-(2-(1-(4-(trifluorometil)fenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil) morfolina.NNN+FFFOO-Se preparó el compuesto del títulosegún el procedimiento general proporcionado en el ejemplo 1 a partir de 4-(2-(1-(4-(trifluorometil)fenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-20il)etil)morfolina.P20139005703-06-2013
351H NMR (CDCl3) δ ppm: 7.72 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.58 (s, 1H), 4.56 –4.36 (m, 2H), 3.90 –3.75 (m, 2H), 3.61 –3.44 (m, 2H), 3.43 –3.19 (m, 4H), 3.00 –2.85 (m, 1H), 2.81 –2.68 (m, 2H), 2.54 –2.37 (m, 1H), 2.25 –2.11 (m, 1H), 2.08 –1.90 (m, 2H), 1.82 –1.64 (m, 1H), 1.60 –1.45 (m, 1H).5Ejemplo21: 2-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenolNNNOOHSe preparó el compuesto del títulosegún el procedimiento general proporcionado en el ejemplo 19 a partir de 4-(2-(1-(2-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.101H NMR (CD3OD) δ ppm: 7.52 (s, 1H), 7.32 –7.23 (m, 1H), 7.21 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.2, 1.0 Hz, 1H), 6.93 (td, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 3.78 –3.67 (m, 4H), 2.86 –2.71 (m, 1H), 2.60 –2.46 (m, 8H), 2.07 –1.88 (m, 3H), 1.80 –1.61 (m, 2H), 1.52 –1.37 (m, 1H)Ejemplo22: (-)-2-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol15NNNOOHSe separó el compuesto del título en las siguientes condiciones cromatográficas:CHIRALCEL OD-H 20x250mmn-heptano/EtOH/DEA 98/2/0.1%=9mL/min20Rt=41.5 minP20139005703-06-2013
36[α] (CH3OH) Na (589nm): -0.0211H NMR (CDCl3) δ ppm: 7.52 (s, 1H), 7.32 –7.23 (m, 1H), 7.21 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.2, 1.0 Hz, 1H), 6.93 (td, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 3.78 –3.67 (m, 4H), 2.86 –2.71 (m, 1H), 2.60 –2.46 (m, 8H), 2.07 –1.88 (m, 3H), 1.80 –1.61 (m, 2H), 1.52 –1.37 (m, 1H)5Ejemplo23: (+)-2-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenolNNNOOHSe separó el compuesto del título en las siguientes condiciones cromatográficas:CHIRALCEL OD-H 20x250mm10n-heptano/EtOH/DEA 98/2/0.1%=9mL/minRt=79.2 min[α] (CH3OH) Na (589nm): +0.022151H NMR (CDCl3) δ ppm: 7.52 (s, 1H), 7.32 –7.23 (m, 1H), 7.21 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.2, 1.0 Hz, 1H), 6.93 (td, J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 3.78 –3.67 (m, 4H), 2.86 –2.71 (m, 1H), 2.60 –2.46 (m, 8H), 2.07 –1.88 (m, 3H), 1.80 –1.61 (m, 2H), 1.52 –1.37 (m, 1H).Ejemplo24: 3-(4-(2-morfolinoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-1-il)fenol20P20139005703-06-2013
37NNNOOHSe preparó el compuesto del títulosegún el procedimiento general proporcionado en el ejemplo 19 a partir de4-(2-(1-(3-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina.1H NMR (CDCl3) δ ppm: 7.50 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.93 5(ddd, J = 8.0, 1.9, 0.8 Hz, 1H), 6.77 (ddd, J = 8.2, 2.4, 0.8 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 4.2 Hz, 4H), 2.84 –2.71 (m, 1H), 2.71 –2.63 (m, 2H), 2.64 –2.47 (m, 4H), 2.03 –1.86 (m, 3H), 1.82 –1.58 (m, 2H), 1.49 –1.35 (m, 1H).EJEMPLOS DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA10Se sometieron a prueba algunos compuestosrepresentativos de lainvenciónpara determinar su actividad como inhibidores sigma (sigma-1). Se siguieron los siguientes protocolos: 15Sigma-1Se realizaronensayos de unión ypreparación de membrana cerebral para elreceptor 1 tal como describe(DeHaven-Hudkins et al., 1992)con algunasmodificaciones. En resumen, se homogeneizaron cerebros de cobaya en 10 vols. (p/v)de Tris-HCl 50 mM,sacarosa 0,32 M, pH 7,4,con unaparatoPolytron PT 3000 de Kinematica a 15000 r.p.m. 20durante30 s. Se centrifugó elhomogeneizadoa 1000g durante10 min.a 4ºCy se recogieron los sobrenadantesy se centrifugó de nuevo a 48000g durante15 min.a 4ºC. Se resuspendió elsedimentoen 10 volúmenesde tampón Tris-HCl (50 mM, pH 7,4), se incubóa 37ºC durante30 min.,y se centrifugóa 48000g durante20 min.a 4ºC. Después de esto, se resuspendió el sedimento en tampón Tris-HCl nuevo (50 mM, pH 7,4)y se almacenó en 25hielo hasta su uso.Cada tubo de ensayocontenía10 lde [3H](+)-pentazocina(concentración final de 0,5nM), 900 lde lasuspensiónde tejidohasta un volumen de ensayo final de 1 mly una concentración de tejido final de aproximadamente30 mg de peso neto de tejido/ml. Se 30P20139005703-06-2013
38definió la unión noespecíficamediante la adición de una concentración final de haloperidol1 M. Se incubaron todos los tubos a 37ºC durante150 min.antes dela finalizaciónde lareacción mediantefiltración rápida sobrefiltros de fibra de vidrio Schleicher & Schuell GF 3362 [empapadospreviamente en unadisoluciónde polietilenimina al 0,5% duranteal menos1 h]. Luego se lavaron los filtroscuatro veces con 4 mlde tampón Tris-HCl frío (50 5mM, pH 7,4). Tras la adicióndelcóctel de centelleo, se dejó que las muestras se equilibraran durante la noche. Se determinó la cantidad de radioactividad unida medianteespectrometría de centelleo líquido usandoun contador de centelleo líquido Wallac Winspectral 1414. Se determinaron las concentracionesde proteína mediante el método de Lowry et al. (1951).10BibliografíaDeHaven-Hudkins, D. L., L.C. Fleissner,y F. Y. Ford-Rice, 1992, Characterization ofthe bindingof [3H](+)pentazocine to recognitionsitesin guinea pig brain, Eur. J. Pharmacol. 15227, 371-378.Lowry, O.H., N.J. Rosebrough, A.L. Farr,y R.J. Randall, 1951, Protein measurementwiththe Folin phenol reagent, J. Biol. Chem, 193, 265.20Los resultadosse resumenen la siguientetablaI:TablaIN.º del compuestoUnióna sigma-1% de Inh (1M)N-óxidode 4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(Ejemplo1)60N-óxidode (R)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(Ejemplo3)76,4N-óxidode (S)-4-(2-(1-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)etil)morfolina(Ejemplo5)98,0P20139005703-06-2013