ES2380748T3

ES2380748T3 - Compuestos de 24-sulfoximina vitamina D3

Info

Publication number: ES2380748T3
Application number: ES03727105T
Authority: ES
Inventors: Mehmet Kahraman; Gary H. Posner; Uttam Saha
Original assignee: Cytochroma Inc; Johns Hopkins University
Current assignee: Cytochroma Inc; Johns Hopkins University
Priority date: 2002-06-13
Filing date: 2003-06-13
Publication date: 2012-05-18
Anticipated expiration: 2023-06-13
Also published as: JP2005529183A; CA2488334C; US7973024B2; WO2003106411A1; US20060217353A1; CA2488334A1; AU2003233735A1; US7101865B2; ATE543796T1; EP1511725B1; AU2003233735A8; US20040038949A1; EP1511725A1; JP4490262B2

Abstract

Compuesto de Fórmula I, y sales, hidratos, solvatos y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo:**Fórmula** en la que R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH, O-alquilo de C1-4, y halo; R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, O-alquilo de C1-4, y halo; cada R3 son ambos H o, juntos, forman =CH2; R4 es alquilo de C1-4; ---- representa un enlace sencillo o un doble enlace; cada R5 puede ser igual o diferente, y se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4, o cada R5 se pueden tomar juntos para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6; R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o está sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo; R7 se selecciona de entre el grupo constituido por H, alquilo de C1-6 y C(O)R8; y R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, aril-alquilo de C1-4, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo, con la condición de que cuando exista un doble enlace entre C22 y C23, sólo haya un grupo R5 unido a C23, y R5 se seleccione de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4; siendo dichos profármacos ésteres formados con un grupo hidroxilo, tiol, amino o carboxi disponible de los compuestos de Fórmula I.

Description

Compuestos de 24-sulfoximina vitamina D3.

5 Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos de 24-sulfoximina vitamina D3 que muestran inhibición selectiva de la enzima CYP24, a composiciones farmacéuticas y de diagnóstico que los contienen, y a su uso médico, particularmente en el tratamiento y/o prevención del cáncer, trastornos dermatológicos, trastornos óseos,

10 trastornos de paratiroides, cicatrización de heridas, osteoporosis y trastornos autoinmunitarios.

Antecedentes de la invención

La ruta metabólica de la vitamina D es parte de un sistema endocrino vital que está muy regulado en determinadas

15 etapas, y produce metabolitos que controlan la secreción de las hormonas de la glándula paratiroides (Beckman, M. y DeLuca, H. (1997) Methods in Enzymol. 282, 200-223; Jones, G., Strugnell, S. y DeLuca, H. (1998) Phystiol. Rev. 78, 1193-1231). La 1a,25-dihidroxi vitamina D3, conocida también como calcitriol (véase más abajo), una hormona producida en la ruta de la vitamina D, regula las concentraciones de fosfato y de calcio en la sangre, que a su vez controlan la masa ósea, el estado de los huesos y afecta a la diferenciación celular en la piel y en el sistema

20 inmunitario (Armbrecht, H. J., Okuda, K., Wongsurawat, N., Nemani, R., Chen, M. y Boltz, M. (1992) J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 43, 1073-1081). En la ruta de la vitamina D, los citocromos P450 son enzimas que introducen grupos funcionales por hidroxilación, normalmente en las posiciones 1, 25 y 24 de la vitamina D3 (Beckman, M. y DeLuca, H. (1997) Methods in Enzymol. 282, 200-223).

La 1a,25-dihidroxi vitamina D3 se convierte en 1a,24,25-trihidroxi-D3 mediante una P450 mitocondrial conocida como CYP24 (Bell, N. H., (1998) J. Bone Miner. Res. 13, 350-35211). La CYP24 es inducida por 1a,25-dihidroxi-D3 y se encuentra en el riñón así como en otros tejidos diana de la vitamina D, tales como las células de la

30 paratiroides, queratinocitos, osteoblastos y enterocitos (Jones, G., Strugnell, S. y DeLuca, H. (1998) Physiol. Rev. 78, 1193-1231).

Los efectos biológicos de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (calcitriol) y sus análogos sintéticos están mediados por el receptor de vitamina D (VDR) nuclear. El calcitriol tiene un papel importante en los efectos antiproliferativos y 35 reguladores del crecimiento sobre células normales y neoplásicas (por ejemplo, células de cáncer de próstata). Los ligandos de VDR tienen una aplicación clínica potencial ampliamente extendida; sin embargo, en muchos casos, se desarrolla hipercalcemia como efecto secundario, lo que evita la administración sistémica sostenida. Se espera que la inhibición del catabolismo de calcitriol y sus análogos prolongue el tiempo de vida biológico de estos compuestos, y de este modo permita que se usen cantidades más pequeñas de ellos para la quimioterapia humana eficaz. Tales

40 dosificaciones más pequeñas evitarán, o al menos minimizarán, la toxicidad hipercalcémica asociada con el uso médico de estos compuestos. La inhibición adicional del catabolismo 1a,25-dihidroxi vitamina D3 incrementa los niveles endógenos de esta hormona, que también tendrá efectos terapéuticos beneficiosos.

El documento WO 00/59513 describe análogos de 1a,25-dihidroxivitamina D3 que contienen azufre.

45 Existe la necesidad de compuestos que modulen la actividad de CYP24, y por lo tanto los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 y sus análogos.

Sumario de la invención

50 Se han encontrado que ciertos compuestos de 24-sulfoximina vitamina D3 muestran inhibición selectiva de la enzima CYP24.

La presente invención proporciona por lo tanto compuestos de Fórmula I, y sales de adición de ácidos 55 farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y profármacos de los mismos: en la que

5 R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH, O-alquilo de C1-4, y halo;

R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, O-alquilo de C1-4, y halo;

cada R3 son ambos H o, juntos, forman =CH2;

10 R4 es alquilo de C1-4;

----: representa un enlace sencillo o un doble enlace;

15 cada R5 puede ser igual o diferente, y se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4, o cada R5 se pueden tomar juntos para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6;

R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5

20 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo;

R7 se selecciona de entre el grupo constituido por H, alquilo de C1-6 y C(O)R8; y

25 R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-6, aril-alquilo de C1-4, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo,

30 con la condición de que cuando exista un doble enlace entre C22 y C23, sólo haya un grupo R5 unido a C23, y R5 se seleccione de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4;

siendo dichos profármacos ésteres formados con un grupo hidroxilo, tiol, amino o carboxi disponible de los compuestos de Fórmula I.

35 Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Modulando selectivamente la CYP24, la enzima que metaboliza 1a,25-dihidroxi vitamina D3, se modulan también las

40 concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (ya sea endógena o administrada como parte de un régimen quimioterapéutico), o un análogo de la 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Las enfermedades que se benefician de una modulación de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 se pueden tratar por lo tanto usando un modulador de CYP24. Además, inhibiendo el catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, los compuestos de la invención aumentarán las concentraciones endógenas de esta hormona, que dará como resultado efectos

45 terapéuticos beneficiosos similares. Actuando preferentemente sobre la CYP24, se reducirán los efectos secundarios causados por la interacción con otras enzimas y receptores. Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para tratar enfermedades que se benefician de una modulación de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la invención a una célula o a un animal que lo necesite. La invención incluye también el

50 uso de un compuesto de la invención para tratar enfermedades que se benefician de una modulación de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Además, la invención incluye un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar enfermedades que se benefician de una modulación de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25dihidroxi vitamina D3.

La inhibición de CYP24 inhibirá el catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o sus análogos, lo que prolongará la vida biológica de estos compuestos y de este modo permitirá que pequeñas cantidades de ellos se usen para un tratamiento eficaz de la enfermedad. Dicha menor dosificación impedirá, o por lo menos minimizará, la toxicidad hipercalcémica asociada con el uso medicinal de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 o sus análogos. Por lo tanto, en una realización, la presente invención proporciona un método para tratar enfermedades que se beneficia de la inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la invención a una célula o animal que lo necesite. La invención incluye también el uso de un compuesto de la invención para tratar enfermedades que se benefician de la inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Además, la invención incluye un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar enfermedades que se benefician de la inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3.

Las enfermedades que se beneficiarán de una modulación en las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 o sus análogos incluyen, pero no se limitan a:

(i): en el paratiroides - hiper- e hipo-paratiroidismo, seudohipoparatiroidismo, hiperparatiroidismo secundario;

(ii): en el páncreas - diabetes;

(iii) en el tiroides - carcinoma medular;

(iv): en la piel - soriasis, cicatrización de heridas;

(v): en los pulmones - sarcoidosis y tuberculosis;

(vi): en el riñón - nefropatía crónica, VDRR hipofosfatémica, raquitismo dependiente de vitamina D;

(vii) en el hueso - tratamiento anticonvulsionante, fibrogénesis ósea imperfecta, osteítis fibrosa quística, osteomalacia, osteoporosis, osteopenia, osteosclerosis, osteodistrofia renal, raquitismo;

(viii) en el intestino - antagonismo glucocorticoide, hipercalcemia idiopática, síndrome de malabsorción, esteatorrea y esprue tropical; y

(ix) enfermedades autoinmunitarias.

En realizaciones de la invención, la enfermedad que se beneficia de una modulación en los niveles de 1a,25dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, se selecciona de cáncer, trastornos dermatológicos (por ejemplo, soriasis), trastornos paratiroideos (por ejemplo, hiperparatiroidismo e hiperparatiroidismo secundario), trastornos óseos (por ejemplo, osteoporosis), y trastornos autoinmunitarios.

Según un aspecto adicional de la presente invención, la enfermedad que se beneficia de una modulación en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, es un trastorno proliferativo celular. En consecuencia, se proporciona un método para modular la proliferación celular (preferentemente inhibiendo la proliferación celular) y/o para promover la diferenciación celular, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la invención a una célula o animal que lo necesite. La invención también incluye un uso de un compuesto de la invención para modular la proliferación celular (preferentemente para inhibir la proliferación celular) y/o promover la diferenciación celular. La invención incluye además un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para modular la proliferación celular (preferentemente inhibir la proliferación celular) y/o promover la diferenciación celular.

En otra realización de la presente invención, la enfermedad que se beneficia de una modulación en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, es cáncer. En consecuencia, la presente invención proporciona un método para tratar cáncer, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la invención a una célula o animal que lo necesite. La invención también incluye un uso de un compuesto de la invención para tratar cáncer. La invención incluye además un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar cáncer. En realizaciones de la invención, el cáncer se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de colon y colorrectal, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer pancreático, cáncer de piel, sarcoma de Kaposi y leucemia.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para modular la actividad de CYP24 en una célula administrando una cantidad eficaz de un compuesto de la invención. En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de CYP24 en una célula administrando una cantidad eficaz de un compuesto de la invención. La presente invención también proporciona un uso de un compuesto de la invención para modular, preferentemente inhibir, la actividad de CYP24. La presente invención proporciona además un uso de

un compuesto de la invención para preparar un medicamento para modular la actividad de CYP24, preferentemente inhibir la actividad de CYP24.

Los compuestos de la invención pueden usarse solos o en combinación con otros agentes que modulan la actividad de la CYP24 o en combinación con otros tipos de tratamiento (que pueden modular o no la CYP24) para las enfermedades que se aprovechan de una modulación en las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma, y/o una inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma. Preferentemente, los compuestos de la invención se administran en combinación con 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (calcitriol), un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 u otros agonistas del receptor de vitamina D. La inhibición del catabolismo de agonistas del receptor de vitamina D tales como 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o análogos de la misma, prolongará el tiempo de vida biológico o eficacia de estas terapias, y de este modo permitirá usar menores cantidades del fármaco para la quimioterapia humana eficaz; tales menores dosificaciones evitarán, o al menos minimizarán, la toxicidad hipercalcémica asociada con el uso médico de estos compuestos. La presente invención proporciona por consiguiente un método para aumentar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina D, preferentemente 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma, que comprende administrar conjuntamente una cantidad eficaz de un compuesto de la invención y una cantidad eficaz del agonista del receptor de vitamina D, preferentemente 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma. Además, la invención incluye el uso de un compuesto de la invención para aumentar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina D, preferentemente 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma, y un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento destinado a aumentar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina D, preferentemente 1a,25dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma.

Breve descripción de los dibujos

La invención se describirá a continuación con relación a los dibujos, en los que:

La figura 1 es una gráfica que muestra que el compuesto I(g) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células MCF-7. Se trataron células MCF-7 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(g) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % de CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(g) (.), 1 nM I(g) (.), 10 nM I(g) (T) y 50 nM I(g) (+).

La figura 2 es una gráfica que muestra que el compuesto I(e) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células MCF-7. Se trataron células MCF-7 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(e) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I(e) (.), 1 nM I(e) (.), 10 nM I(e) (V) y 50 nM I(e) (+).

La figura 3 es una gráfica que muestra que el compuesto I(a) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células MCF-7. Se trataron células MCF-7 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(a) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(a) (.), 1 nM I(a) (.), 10 nM I(a) (T) y 50 nM I(a) (+).

La figura 4 es una gráfica que muestra que el compuesto I(i) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células MCF-7. Se trataron células MCF-7 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(i) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(i) (.), 1 nM I(i) (.), 10 nM I(i) (T) y 50 nM I(i) (+).

La figura 5 es una gráfica que muestra que el compuesto I(n) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células MCF-7. Se trataron células MCF-7 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(n) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I(n) (.), nM I(n) (.), 10 nM I(n) (T) y 50 nM I(n) (+).

La figura 6 es una gráfica que muestra que el compuesto I(g) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(g) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(g) (.), 1 nM I(g) (.), 10 nM I(g) (T) y 100 nM I(g) (+).

La figura 7 es una gráfica que muestra que el compuesto I(e) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(e) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(e) (.), 1 nM I(e) (A), 10 nM I(e) (T) y 100 nM I(e) (+).

La figura 8 es una gráfica que muestra que el compuesto I(c) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(c) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(c) (.), 1 nM I(c) (.), 10 nM I(c) (T) y 100 nM I(c) (+).

La figura 9 es una gráfica que muestra que el compuesto I(a) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(a) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(a) (.), 1 nM I(a) (.), 10 nM I(a) (T) y 100 nM I(a) (+).

La figura 10 es una gráfica que muestra que el compuesto I(j) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(j) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(j) (.), 1 nM 10) (.), 10 nM I(j) (T) y 100 nM I(j) (+).

La figura 11 es una gráfica que muestra que el compuesto I(1) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(1) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(1) (.), 1 nM I(1) (.), 10 nM I(1) (T) y 100 nM I(1) (+).

La figura 12 es una gráfica que muestra que el compuesto I(i) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(i) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(i) (.), 1 nM I(i) (.), 10 nM I(i) (T) y 100 nM I(i) (+).

La figura 13 es una gráfica que muestra que el compuesto I(o) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(o) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(o) (.), 1 nM I(o) (.), 10 nM I(o) (T) y 100 nM I(o) (+).

La figura 14 es una gráfica que muestra que el compuesto I(n) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de células SCC-25. Se trataron células SCC-25 con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(n) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 6 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis para 0,1 nM I(n) (.), 1 nM I(g) (.), 10 nM I(n) (T) y 50 nM I(n) (+).

La figura 15 es una gráfica que muestra que el compuesto I(e) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK). Se trataron NHEK con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(e) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 18 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I(e) (.), 1 nM I(e) (.), 10 nM I(e) (T) y 50 nM I(e) (+).

La figura 16 es una gráfica que muestra que el compuesto I(a) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK). Se trataron NHEK con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(a) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 18 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I(a) (.), 1 nM I(a) (.), 10 nM I(a) (T) y 50 nM I(a) (+).

La figura 17 es una gráfica que muestra que el compuesto I(i) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK). Se trataron NHEK con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto I(i) durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 18 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I(i) (.), 1 nM I(i) (.), 10 nM I(i) (T) y 50 nM I(i) (+).

La figura 18 es una gráfica que muestra que el compuesto I(o) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK). Se trataron NHEK con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto CTA112 durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 18 h a

37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I (o) (.), 1 nM I(o) (.), 10 nM I(o) (V) y 50 nM I(o) (+).

La figura 19 es una gráfica que muestra que el compuesto I(n) y calcitriol actúan para inhibir la proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK). Se trataron NHEK con concentraciones específicas de calcitriol y compuesto CTA113 durante tres días. Las células se trataron entonces con [3H]-timidina durante 18 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5 % CO2. Las placas se cosecharon, y se midió la radioactividad. Se muestran las curvas de respuesta frente a la dosis en ausencia de I (n) (.), 1 nM I(n) (.), 10 nM I(n) (V) y 50 nM I(n) (+).

Descripción detallada de la invención

I. Definiciones

La expresión “alquilo de C1-4”, tal como se usa en la presente memoria, significa grupos alquilo de cadena lineal y/o ramificada que contienen de uno a cuatro átomos de carbono, e incluye metilo, etilo, propilo, isopropilo, y t-butilo.

La expresión “alcoxi de C1-4”, tal como se usa en la presente memoria, significa grupos alcoxi de cadena lineal y/o ramificada que contienen de uno a cuatro átomos de carbono, e incluye metoxi, etoxi, propiloxi, isopropiloxi y tbutoxi.

La expresión “cicloalquilo”, tal como se usa en la presente memoria, significa un anillo cíclico, saturado, sustituido o no sustituido, que contiene de tres a seis átomos de carbono, e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, y ciclohexilo.

El término “arilo”, tal como se usa en la presente memoria, significa grupos aromáticos mono- o bicíclicos, sustituidos o no sustituidos, que contienen de 6 a 14 átomos de carbonos, e incluye fenilo y naftilo.

El término “heteroarilo”, tal como se usa en la presente memoria, significa grupos heteroaromáticos mono- o bicíclicos, sustituidos o no sustituidos, que contienen de 5 a 14 átomos, de los cuales 1 a 3 átomos pueden ser un heteroátomo seleccionado de entre el grupo constituido por S, O y N, e incluye furanilo, tienilo, pirrolo, piridilo, inmolo y benzofuranilo.

El término “halo”, tal como se usa en la presente memoria, significa halógeno, e incluye cloro, fluoro, bromo, y yodo.

En cuanto a cualquiera de los grupos anteriores que contienen uno o más sustituyentes, se entiende, por supuesto, que tales grupos no contienen ninguna sustitución o patrones de sustitución que sean estéricamente impracticables y/o sintéticamente no factibles.

La expresión “farmacéuticamente aceptable”, tal como se usa en la presente memoria, significa que es compatible con el tratamiento de animales, en particular seres humanos.

La expresión “sal de adición de ácidos farmacéuticamente aceptable”, tal como se usa en la presente memoria, significa cualquier sal orgánica o inorgánica no tóxica de cualquier compuesto básico de la invención, o cualquiera de sus productos intermedios. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formar una sal de adición de ácidos en el nitrógeno imínico (para la preparación de tales sales, véanse Brandt, J.; Gais, H-J. Tetrahedron; Asymmetry, 1997, 8, 909 y Shiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988, 53, 5542, Appel, R; Fehlaber, H.; Hanssgen, D.; Schollhorn, R. Chem, Ber.1966, 99, 3108, Akasara, T.; Furukawa, N.; Oae, S. Phosphorus and Sulfur 1985, 21, 277, Johnson, C. R. Janiga, E. R Haake, M. J. Am. Chem. Soc. 1968, 90, 3890 y Johnson, C. R Janiga, E. R J. Am. Chem. Soc. 1973, 95, 7692). �?cidos inorgánicos ilustrativos que forman las sales adecuadas incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, así como las sales metálicas tales como ortofosfato monobásico de sodio y bisulfato de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen los ácidos mono-, di- y tricarboxílicos, tales como los ácidos glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, benzoico, fenilacético, cinámico y salicílico, así como los ácidos sulfónicos tales como los ácidos p-toluenosulfónico y metanosulfónico. Pueden formarse sales mono- o diácidas, y dichas sales pueden existir en forma hidratada, solvatada o sustancialmente anhidra. En general, las sales de adición de ácidos de los compuestos de la invención son más solubles en agua y en varios disolventes orgánicos hidrófilos, y generalmente presentan puntos de fusión más altos en comparación con sus formas básicas libres. La selección de la sal apropiada será conocida por cualquier experto en la materia. Otras sales de adición de ácidos no farmacéuticamente aceptables, por ejemplo oxalatos, pueden usarse, por ejemplo, en el aislamiento de los compuestos de la invención, para uso en el laboratorio, o para la conversión posterior a una sal de adición de ácidos farmacéuticamente aceptable.

El término “solvato”, tal como se utiliza en la presente memoria, significa un compuesto de la invención en el que las moléculas de un disolvente adecuado se incorporan en el retículo cristalino. Un disolvente adecuado es tolerable fisiológicamente a la dosis administrada. Ejemplos de disolventes adecuados son el etanol, el agua, y similares.

Cuando el disolvente es el agua, la molécula se denomina “hidrato”.

La expresión “compuesto(s) de la invención”, tal como se utiliza en la presente memoria, significa el/los compuesto(s) de Fórmula I, y las sales de adición de ácidos, hidratos, solvatos y profármacos de los mismos.

5 La expresión una “cantidad eficaz” o una “cantidad suficiente” de un agente, tal como se usa en la presente memoria, es a cantidad suficiente para obtener resultados beneficiosos o deseados, incluyendo resultados clínicos, y, como tal, una “cantidad eficaz” depende del contexto en el que se esté aplicando. Por ejemplo, en el contexto de la administración de un agente que modula la actividad de CYP24, una cantidad eficaz de un agente es, por

10 ejemplo, una cantidad suficiente para conseguir dicha modulación en la actividad de CYP24 en comparación con la respuesta obtenida sin la administración del agente.

Tal como se usa en la presente memoria, y se entiende también en la técnica, “tratamiento” es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, incluyendo resultados clínicos. Los resultados clínicos beneficiosos o 15 deseados pueden incluir, pero no se limitan a, alivio o mejora de uno o más síntomas o afecciones, disminución del alcance de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, no empeorado) de la enfermedad, prevención de la propagación de la enfermedad, retardo o ralentización de la evolución de la enfermedad, mejora o mitigación de las condiciones patológicas, y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. “Tratamiento” puede significar también la prolongación de la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no se

20 recibe tratamiento.

“Mitigar” una enfermedad o trastorno significa que se reduce el alcance y/o las manifestaciones clínicas indeseables de un trastorno o de un estado patológico, y/o se ralentiza o prolonga el transcurso de la evolución, en comparación con la ausencia del trastorno.

25 El término “modular”, tal como se usa en la presente memoria, incluye la inhibición o supresión de una función o actividad (tal como la actividad de CYP24), así como el aumento de una función o actividad.

“Inhibir” o “suprimir” o “reducir” una función o actividad, tal como la actividad de CYP24, consiste en reducir la 30 función o actividad cuando se compara de otra manera con las mismas condiciones excepto para una condición o parámetro de interés, o como alternativa, en comparación con otras condiciones.

El término “animal”, tal como se usa en la presente memoria, incluye todos los miembros del reino animal, incluyendo el ser humano. El animal es preferentemente un ser humano.

35 La expresión “una célula”, tal como se usa en la presente memoria, incluye una multitud de células. Administrar un compuesto a una célula incluye el tratamiento in vivo, ex vivo e in vitro.

La expresión “cáncer”, tal como se usa en la presente memoria, incluye todas las formas de cáncer o enfermedad 40 neoplásica.

El término “estereoquímica 1a,3β“, tal como se usa en la presente memoria, se refiere a la configuración relativa de los grupos, R1 y R2, en la que R2 está por encima del plano de la página, y el R1 está por debajo del plano de la página. El término “estereoquímica 1β,3a”, tal como se usa en la presente memoria, se refiere a la configuración

45 relativa de los grupos, R1 y R2, en la que R1 está por encima del plano de la página, y el R2 está por debajo del plano de la página.

II. Compuestos de la invención

50 Se han preparado nuevos compuestos que presentan inhibición selectiva de la enzima CYP24. Como tales, los compuestos de la invención son útiles para modular la actividad de CYP24 y para tratar enfermedades o trastornos que se benefician de tal modulación.

La presente invención proporciona por consiguiente compuestos de Fórmula I, y sales de adición de ácidos 55 farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y profármacos de los mismos: en la que

cada R3 son ambos H, o, juntos, forman =CH2;

10 R4 es alquilo de C1-4;

----: representa un enlace sencillo o un doble enlace;

15 cada R5 pueden ser igual o diferente, y se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4, o cada R5 se pueden tomar juntos para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6;

R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo están no sustituidos o están sustituidos con 1-5

25 R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, aril-alquilo de C1-4, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo están no sustituidos o sustituidos con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C14, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo,

30 con la condición de que cuando haya un doble enlace entre C22 y C23, sólo haya un grupo R5 unido a C23, y R5 se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4; siendo dichos profármacos ésteres formados con un grupo hidroxilo, tiol, amino o carboxi disponible de los compuestos de Fórmula I.

Los compuestos de Fórmula I incluyen aquellos en los que R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH,

35 O-alquilo de C1-4, y halo, y R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, O-alquilo de C1-4, y halo. En realizaciones de la presente invención, R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH, OCH3 y fluoro, y R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, OCH3 y fluoro. En otras realizaciones de la presente invención, R1 es OH, y R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H y OH. En aún otras realizaciones, R1 y R2 son ambos OH.

40 La presente invención incluye compuestos de Fórmula I en la que cada R3 son ambos H o forman, juntos, =CH2. En realizaciones de la invención, R3 es =CH2. En otras realizaciones de la presente invención, ambos R3 son H.

La presente invención incluye compuestos de Fórmula I en la que R4 es alquilo de C1-4. En realizaciones de la 45 invención, R4 es CH3.

La presente invención incluye compuestos de la Fórmula I en la que cada R5 puede ser igual o diferente, y se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4, o cada R5 puede tomarse junto para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6. En realizaciones de la invención, cada R5 se selecciona de entre el grupo

50 constituido por un grupo F, alquilo de C1-4 y H, o cada R5 puede tomarse junto para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6. En otras realizaciones, cada grupo R5 se selecciona de entre el grupo constituido por F, CH3 y H, o cada grupo R5 se toma junto para formar un anillo de cicloalquilo de C3-4. En todavía otras realizaciones, ambos R5 son ambos H, CH3 o F, o cada grupo R5 se toma junto para formar un anillo de ciclopropilo. En incluso otras realizaciones de la invención, ambos R5 son H.

55 La presente invención incluye compuestos de Fórmula I en la que R6 se selecciona de entre el grupo constituido por

alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En realizaciones de la presente invención, R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En aún otras realizaciones de la presente invención, R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En otras realizaciones, R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4 y arilo, en el que arilo está no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En otras realizaciones, R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4 y fenilo, en el que fenilo está no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En aún otras realizaciones, R6 es un grupo fenilo ya sea no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por CH3, OCH3, NO2, F y Cl. Otras realizaciones incluyen compuestos de Fórmula I en la que R6 es un fenilo no sustituido o fenilo sustituido con 1 sustituyente seleccionado independientemente de entre el grupo constituido por CH3, OCH3, NO2, F y Cl. Es asimismo una realización de la presente invención que R6 sea t-butilo.

La presente invención incluye compuestos de Fórmula I en la que R7 se selecciona de entre el grupo constituido por H, alquilo de C1-6 y C(O)R8. En realizaciones de la presente invención, R7 es H o alquilo de C1-4. En otras realizaciones, R7 es H o CH3. En aún otras realizaciones de la presente invención, R7 es H. En otras realizaciones de la presente invención, R7 es C(O)R8.

La presente invención incluye compuestos de Fórmula I en la que R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, aril-alquilo de C1-4, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En realizaciones de la invención, R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, aril-alquilo de C1-2, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo. En otras realizaciones de la presente invención, R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, PhCH2 y fenilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, PhCH2 y fenilo está no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2, F y Cl. En aún otras realizaciones de la presente invención, R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, PhCH2 y fenilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, PhCH2 y fenilo está no sustituido o sustituido con 1 sustituyente seleccionado independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2, F y Cl. En incluso otras realizaciones, R8 se selecciona de entre el grupo constituido por metilo, t-butilo, PhCH2 y fenilo.

La presente invención incluye los compuestos de Fórmula I en la que ----representa un enlace sencillo o un doble enlace. Es una realización de la invención que el enlace entre C22 y C23 sea un enlace sencillo. Es otra realización que el enlace entre C16 y C17 sea un enlace sencillo. En todavía otra realización, tanto el enlace entre C22 y C23 como el enlace entre C16 y C17 son enlaces sencillos.

En una realización de la presente invención, cuando el enlace entre C16 y C17 es un doble enlace, R6 es alquilo de C1-6, y R7 se selecciona de entre el grupo constituido por H y alquilo de C1-6.

Todos los compuestos de Fórmula I tienen más de un centro asimétrico. Cuando los compuestos según la invención poseen más de un centro asimétrico, pueden existir como diastereómeros. Debe entenderse que todos los isómeros citados y sus mezclas en cualquier proporción están comprendidos dentro del alcance de la presente invención. La estereoquímica de los anillos A, C y D y en la posición C20 de los compuestos de la invención es preferentemente la de la 1a,25-dihidroxi vitamina D3 natural. La estereoquímica en el átomo de azufre de la sulfoximina puede ser R o S. Por consiguiente, la presente invención proporciona compuestos de Fórmula I y sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y profármacos (como se definen anteriormente) de los mismos que tienen la siguiente estereoquímica relativa:

en la que R1-R8 y ----son como se definen anteriormente.

En otra realización de la presente invención, el enlace entre C16 y C17 es un enlace sencillo, y el compuesto de Fórmula I tiene la siguiente estereoquímica relativa:

10: en la que R1 - R8 y ----son como se definen anteriormente.

15: En otra realización de la presente invención, cuando el enlace entre C22 y C23 es un doble enlace y el enlace entre C16 y C17 es un enlace sencillo, el compuesto de Fórmula I tiene la siguiente estereoquímica relativa:

en la que R1 - R8 y ----son como se definen anteriormente.

20 Debe entenderse que aunque la estereoquímica relativa de los compuestos de Fórmula I es preferentemente como se ha presentado anteriormente, dichos compuestos de Fórmula I pueden contener también determinadas cantidades (por ejemplo menores que 20%, preferentemente menores que 10%, más preferentemente menores que 5%) de compuestos de Fórmula I que presentan estereoquímica alternativa. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula I que presenta la estereoquímica 1a,3β de la 1a,25-dihidroxi vitamina D3, mostrada anteriormente, puede contener

25 menos del 20%, preferentemente menos del 10%, más preferentemente menos del 5%, de un compuesto de Fórmula I que presenta la estereoquímica 1β,3a no natural.

En realizaciones específicas de la presente invención, los compuestos de la invención incluyen:

y sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y profármacos (como se definen anteriormente) de los mismos

10 La presente invención incluye en su alcance profármacos (como se definen anteriormente) de los compuestos de la invención. En general, tales profármacos serán derivados funcionales de un compuesto de la invención que son fácilmente convertibles in vivo en el compuesto del que derivan conceptualmente. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de profármacos adecuados se describen, por ejemplo, en “Design of Prodrugs” ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

15 La presente invención incluye formas radiomarcadas de compuestos de la invención, por ejemplo compuestos de la invención marcados mediante incorporación de 3H o 14C, o un halógeno radioactivo tal como 125I en la estructura.

III. Métodos de preparación de compuestos de la invención

20 Según otro aspecto de la presente invención, los compuestos de la invención pueden prepararse por procedimientos análogos a los establecidos en la técnica. Por consiguiente, los compuestos de esta invención pueden prepararse, por ejemplo, mediante la secuencia de reacción mostrada en el Esquema 1:

Esquema 1

Las cetonas de Fórmula III, en las que R4-R7 y ----son como se definen en la Fórmula I, se pueden hacer reaccionar

5 con óxidos de fosfina de Fórmula IV, en la que R1-R3 son como se definen en la Fórmula I, en las condiciones de acoplamiento estándar de Horner-Wadsworth-Emmons (HWE). Por consiguiente, los óxidos de fosfina IV se tratan con una base fuerte, por ejemplo un alquil-litio tal como n-butil-litio, en condiciones anhidras en una atmósfera inerte y disolvente, por ejemplo tetrahidrofurano (THF), a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, adecuadamente a aproximadamente -78ºC. Al anión de óxido

10 de fosfina intermedio resultante se le añade una disolución fría, preferentemente a aproximadamente -78ºC, de una cetona III en un disolvente inerte tal como THF, mientras se mantienen las condiciones anhidras. Tras la eliminación de cualesquiera grupos protectores usando químicas estándar (si es necesario), pueden obtenerse los compuestos de Fórmula I.

15 Las cetonas de Fórmula III, en las que R4, R5, R6 y R7 son como se definen en la Fórmula I, pueden prepararse, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 2:

Esquema 2

20 Las fenilsulfoximinas protegidas de forma adecuada V, en las que R4-R7 y ---- son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado, se desprotegen en primer lugar y a continuación se oxidan para proporcionar cetonas III. Por ejemplo, cuando PG es trialquilsililo, tal como trietilsililo, la desprotección se puede efectuar haciendo reaccionar los compuestos de Fórmula V con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en un disolvente inerte,

25 tal como THF, y en una atmósfera inerte, adecuadamente a aproximadamente temperatura ambiente. La oxidación del alcohol resultante puede realizarse, por ejemplo, usando dicromato de piridinio (PDC), o cualquier otro agente oxidante adecuado, en un disolvente inerte tal como cloruro de metileno, en condiciones estándar.

Los compuestos de Fórmula V, en los que R4-R7 son como se definen en la Fórmula I, ----es un enlace sencillo, y 30 PG es un grupo protector adecuado, pueden obtenerse, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 3:

Esquema 3

35 Los compuestos de Fórmula VI, en los que R4 y ---- son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado, pueden hacerse reaccionar con el anión de los compuestos de Fórmula VII, en la que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC. Los aniones de los compuestos de Fórmula VII pueden prepararse tratando los compuestos de Fórmula VII con una base fuerte, por ejemplo un alquil-litio tal como n-butil-litio, en condiciones inertes y en presencia de, por ejemplo, hexametil fosforamida (HMPA) o N, N, N1, N1-tetrametiletilendiamina (TMEDA). Cuando R7 es H, se prefiere que el nitrógeno de la sulfoximina esté protegido con un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, que se puede

5 eliminar usando técnicas estándar después de la reacción de los compuestos de Fórmula VI con los compuestos de Fórmula VII.

Los compuestos de Fórmula V, en los que uno o ambos de R5 es fluoro, R4, R6, R7 y ----son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado, pueden prepararse también a partir de compuestos de Fórmula V,

10 en los que ambos grupos R5 son H, mediante tratamiento de tales compuestos con uno o dos equivalentes, ya sea secuencialmente o juntos, de una base fuerte, tal como un alquil-litio, seguido de una fuente de “F+”, tal como (PhSO2)2NF.

Los compuestos de Fórmula I, en los que R1-R7 y ---- entre C16 y C17 son como se definen en la Fórmula I y ---15 entre C22 y C23 es un doble enlace, pueden obtenerse, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 4:

Esquema 4

20 Los compuestos de Fórmula VIII, en los que R1-R4 y ----son como se definen en la Fórmula I, pueden hacerse reaccionar con el anión de los compuestos de Fórmula IX, en la que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC. Los aniones de los compuestos de Fórmula IX pueden prepararse tratando los compuestos de Fórmula IX con una base fuerte, por ejemplo t-butóxido

25 de potasio, en un disolvente inerte, por ejemplo tetrahidrofurano, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC. Cuando R7 es H, se prefiere que el nitrógeno de la sulfoximina en IX esté protegido con un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, que se puede eliminar usando técnicas estándar después de la reacción de los compuestos de Fórmula VIII con los compuestos de Fórmula IX.

30 Los compuestos de Fórmula I, en los que R1-R7 y ---- entre C16 y C17 son como se definen en la Fórmula I y ---entre C22 y C23 es un doble sencillo, también pueden prepararse como se muestra en el Esquema 5:

Los compuestos de Fórmula X, en los que R1-R4 y ----son como se definen en la Fórmula I, pueden hacerse reaccionar con el anión de los compuestos de Fórmula VII, en la que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y 40 aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC. Los aniones de los compuestos de Fórmula VII pueden prepararse tratando los compuestos de Fórmula VII con una base fuerte, por ejemplo un alquil

litio, tal como n-butil-litio, en condiciones inertes y en presencia de, por ejemplo, hexametil fosforamida (HMPA) o N, N, N1, N1-tetrametiletilendiamina (TMEDA). Cuando R7 es H, se prefiere que el nitrógeno de la sulfoximina en VII esté protegido con un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, que se puede eliminar usando técnicas estándar después de la reacción de los compuestos de Fórmula X con los compuestos de Fórmula VII.

Los compuestos de Fórmula VII, en los que R5, R6 y R7 son como se definen en la Fórmula I, están comercialmente disponibles, o se pueden preparar usando métodos conocidos en la técnica (para la preparación de (±)-N,S-DimetilS-fenilsulfoximina: véanse Johnson, C.R; Haake, M.; Schroeck. J. Am. Chem. Soc.1970, 92, 6594 y Shiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988, 53, 5542; para la preparación de (±)-S-Metil-S-Fenilsulfoximina: véase Johnson, C.R.; Haake, M.; Schroeck. J. Am. Chem. Soc. 1970, 92, 6594; y para la resolución, véanse: Brandt, J.; Gais, H-J. Tetrahedron; Asymmetry,1997, 8, 909 y Shiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988, 53, 5542; para la preparación de S-(4-metilfenil)-S-metilsulfoximina: véase Johnson, Carl R.; Kirchhoff, Robert A.; Corkins, H. Glenn.

J. Org. Chem. 1974, 39(16), 2458-9; para la preparación de S-(4-metoxifenil)-S-metilsulfoximina: véase Akutagawa, Kunihiko; Furukawa, Naomichi; Oae, Shigeru. Phosphorus Sulfur 1984,19(3), 369-74; para la preparación de S-(4clorofenil)-S-metilsulfoximina: véase Oae, S.; Harada, K.; Tsujihara, K.; Furukawa, N. Int. J. Sulfur Chem., Part A 1972, 2(1), 49-61; para la preparación de S-(4-nitrofenil)-S-metilsulfoximina: véase Oae, S.; Harada, K.; Tsujihara, K.; Furukawa, N. Int. J. Sulfur Chem., Parte A 1972, 2(1), 49-61.

Como un ejemplo, los compuestos de Fórmula VII, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, pueden prepararse como se muestra en el Esquema 6:

Esquema 6

Los sulfuros de Fórmula XI, en los que R5 y R6 son como se definen en la Fórmula I, se pueden oxidar al sulfóxido correspondiente usando condiciones estándar, por ejemplo mediante tratamiento con un equivalente de mCPBA. Este sulfóxido se puede tratar entonces con azida de sodio y un ácido, por ejemplo ácido sulfúrico, en un disolvente inerte, tal como cloroformo, a una temperatura comprendida entre aproximadamente -10ºC y aproximadamente 25ºC, de forma adecuada a aproximadamente 0ºC. Una vez que se ha añadido el ácido a la reacción, se puede dejar que la mezcla llegue hasta la temperatura ambiente, y se puede usar calentamiento moderado para empujar la reacción hasta la terminación. El compuesto resultante de Fórmula VII, en la que R7 es H, se puede hacer reaccionar con un compuesto de Fórmula XII, en la que R7 se selecciona de alquilo de C1-6, C(O)R8 (siendo R8 como se define en la Fórmula I) o un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, y LG es un grupo saliente adecuado, por ejemplo halógeno, en particular cloro, en condiciones de alquilación estándar, para proporcionar compuestos de Fórmula VII en la que R7 se selecciona de alquilo de C1-6, C(O)R8 (siendo R8 como se define en la Fórmula I) o un grupo protector adecuado.

Los compuestos de Fórmula IX, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, pueden prepararse, por ejemplo, de un compuesto de Fórmula VII, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, como se muestra en el Esquema 7:

Esquema 7

Los compuestos de Fórmula VII, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I, pueden tratarse en primer lugar con una base fuerte, por ejemplo un alquil-litio, en un disolvente inerte, por ejemplo tetrahidrofurano, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC, seguido de, por ejemplo, clorofosfato de dietilo, también en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC, para proporcionar compuestos de Fórmula IX, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I. Cuando R7 es H, se prefiere que el nitrógeno de la sulfoximina en VII esté protegido con un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, que se puede eliminar usando técnicas estándar después de la reacción de los compuestos de Fórmula VII con el clorofosfato.

Una ruta alternativa a los compuestos de Fórmula V, en los que R4-R7 y ----son como se definen en la Fórmula I, y

PG es un grupo protector adecuado, se muestra en el Esquema 8

Esquema 8

Los compuestos de Fórmula VII, en los que R5-R7 son como se definen en la Fórmula I (cuando R7 es H, se prefiere

10 que el H esté sustituido por un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, para la secuencia de reacción anterior), pueden tratarse con una base fuerte, por ejemplo un alquil-litio, en condiciones anhidras a temperaturas comprendidas en el intervalo entre aproximadamente -60ºC y aproximadamente -90ºC, de manera adecuada a aproximadamente -78ºC, seguido de la adición de un compuesto de Fórmula XIII, en los que R4 y ---son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado, para proporcionar compuestos de

15 Fórmula XIV, en los que R4-R7 y ---- son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado. El grupo hidroxilo en C22 de los compuestos de Fórmula XIV se puede eliminar usando cualquier método conocido, por ejemplo usando química de radicales libres como se conoce en el Esquema 8, para proporcionar compuestos de Fórmula V, en los que R4-R7 y ---- son como se definen en la Fórmula I, y PG es un grupo protector adecuado. El esquema de reacción anterior es especialmente útil para la preparación de compuestos de Fórmula V en los que el

20 enlace entre C16 y C17 es un doble enlace. Nuevamente, cuando R7 es H, se prefiere que el nitrógeno de la sulfoximina en VII esté protegido con un grupo protector adecuado, por ejemplo un trialquilsilano, que se puede eliminar usando técnicas estándar después de terminar la secuencia de reacción anterior.

Los compuestos de Fórmula XIV, en los que R4, R6, R7 y ---- son como se definen en la Fórmula I, y al menos uno

25 de R5 es H, también pueden usarse para preparar un compuesto de Fórmula V, en el que R4, R6, R7 y ---- entre C16 y C17 son como se definen en la Fórmula I, al menos uno de R5 es H y ---- entre C22 y C23 es un doble enlace, mediante tratamiento con un ácido en condiciones estándar como se muestra en el Esquema 9. En los compuestos mostrados más abajo, es una realización de la invención que R5 sea H

30 Esquema 9

La preparación de compuestos de Fórmula VI, en los que R4 es como se define en la Fórmula I y PG es un grupo protector adecuado, es conocida en la técnica. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula VI pueden prepararse 35 como se describe en Posner, G. H. et al. J. Org. Chem. 1997, 62, 3299-3314, cuyos contenidos se incorporan aquí

como referencia.

La preparación de los compuestos de Fórmula IV, en los que R1 y R2 son como se definen en la Fórmula I, es conocida en la técnica. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula IV pueden prepararse como se describe en Posner, G. H. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3280-3287, cuyos contenidos se incorporan aquí como referencia.

Los compuestos de Fórmula X, en los que R1-R4 y ----son como se definen en la Fórmula I, pueden prepararse a partir del alcohol correspondiente como se da a conocer en Manchand, S.M. et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 65746581).

Los compuestos de Fórmula XIII, en los que R4 es como se define en la Fórmula I y ----es un doble enlace, pueden prepararse como se describe en Lars, K.L. et al. J. Org. Chem. 2003, 68, 1367-1374. Los compuestos correspondientes en los que ---- es un enlace sencillo pueden prepararse mediante hidrogenación o reducción del doble enlace de C16-C17 usando metodologías estándar.

La preparación de compuestos enantioméricamente puros de Fórmula I puede llevarse a cabo usando los compuestos enantioméricamente puros de Fórmula III y IV en la reacción mostrada en el Esquema 1. En esta reacción, se obtiene típicamente una mezcla de los diastereómeros 1a,3β y 1β,3a, con el diastereómero 1a,3β como el producto principal. Estos diastereómeros pueden separarse usando cromatografía, por ejemplo usando cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).

En algunos casos, las químicas mencionadas anteriormente pueden tener que ser modificadas, por ejemplo mediante el uso de grupos protectores, para impedir reacciones secundarias debidas a grupos reactivos, tales como los grupos reactivos unidos como sustituyentes. Esto puede conseguirse por medio de grupos protectores convencionales, por ejemplo como se describe en “Protective Groups in Organic Chemistry” McOmie, J. F. W. Ed., Plenum Press, 1973 y en Greene, T. W. y Wuts, P. G. M., “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, 1991.

La formación de solvatos de los compuestos de la invención variará dependiendo del compuesto y del solvato. En general, los solvatos se forman disolviendo el compuesto en el disolvente apropiado, y aislando el solvato mediante enfriamiento o usando un antidisolvente. El solvato se seca o se destila azeotrópicamente típicamente en condiciones ambientales.

Los profármacos de los compuestos de la invención son ésteres convencionales formados con el grupo hidroxi, tiol, amino o carbonilo disponible. Por ejemplo, cuando R1 y/o R2 es OH en un compuesto de la invención, pueden acilarse usando un ácido activado en presencia de una base, y opcionalmente, en disolvente inerte (por ejemplo, un cloruro ácido en piridina). Algunos ésteres habituales que se han usado como profármacos son los ésteres de fenilo, ésteres (C8-C24) alifáticos, ésteres de aciloximetilo, carbamatos y ésteres de aminoácidos.

Puede prepararse un compuesto radiomarcado de la invención usando métodos estándar conocidos en la técnica. Por ejemplo, puede incorporarse tritio en un compuesto de la invención usando técnicas estándar, por ejemplo por hidrogenación de un precursor adecuado a un compuesto de la invención que usa tritio gaseoso y un catalizador. Alternativamente, un compuesto de la invención que contiene yodo radioactivo puede prepararse a partir del derivado de trialquilestaño correspondiente (adecuadamente trimetilestaño) usando condiciones de yodación estándar, tal como yoduro de sodio [125I] en presencia de cloramina-T en un disolvente adecuado, tal como dimetilformamida. El compuesto de trialquilestaño puede prepararse a partir del halocompuesto no radioactivo correspondiente, adecuadamente yodocompuesto, usando condiciones estándar de estannilación catalizada por paladio, por ejemplo hexametildiestaño en presencia de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) en un disolvente inerte, tal como dioxano, y a temperaturas elevadas, adecuadamente 50-100ºC.

IV. Usos

Como se ha mencionado anteriormente en la presente memoria, se han preparado nuevos compuestos de la Fórmula I. Por consiguiente, la presente invención comprende todos los usos de los compuestos de la invención, incluyendo su uso en métodos y composiciones terapéuticos para modular la actividad de CYP24, su uso en ensayos de diagnóstico y su uso como herramientas de investigación.

La inhibición de forma selectiva de la ruta enzimática del citocromo P450, a través de la cual se cataboliza la 1a,25dihidroxi vitamina D3 (principalmente vía hidroxilación de C-24), es una vía importante para prolongar el tiempo de vida de esta hormona, o sus análogos. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula I se analizaron in vitro, usando un protocolo estándar, para determinar su capacidad para inhibir específicamente CYP24, una enzima responsable de la 24-hidroxilación de la 1a,25-dihidroxi vitamina D3. El quetoconazol antimicótico, un fármaco usado clínicamente para la quimioterapia del cáncer de próstata humano (Trachtenberg, J. et al. J. Urol. 1984, J32, 61-63), se usó como control para la inhibición de CYP24. Se ha demostrado que los compuestos I(a), I(c), I(e), I(g), I(i), I(j), I(k), I(1), I(m), I(n), I(o), I(p), I(q), I(r) y I(s) inhiben selectivamente el CYP24.

Modulando selectivamente la CYP24, se modulará también la enzima que metaboliza 1a,25-dihidroxi vitamina D3 y

las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (ya sea endógena o administrada como parte de un régimen quimioterapéutico), o sus análogos. Las enfermedades que se benefician de una modulación, en particular un incremento, de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 pueden por lo tanto tratarse usando un modulador de CYP24. Actuando preferentemente sobre CYP24, se pueden reducir los efectos secundarios causados por la interacción con otras enzimas y receptores. La invención incluye también un compuesto de la invención para uso para tratar enfermedades que se benefician de una modulación, en particular un incremento, de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Además, la invención incluye un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar enfermedades que se benefician de una modulación, en particular un incremento, de las concentraciones de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3.

La inhibición de CYP24 inhibirá el catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o su análogo, que se espera que prolongue la vida biológica de estos compuestos, y de esta manera permitirá que se usen cantidades más pequeñas de ellos para un tratamiento eficaz de la enfermedad. Se espera que tal dosificación más pequeña impeda, o al menos minimice, la toxicidad hipercalcémica asociada con el uso medicinal de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 y sus análogos. Además, mediante la inhibición del catabolismo 1a,25-dihidroxi vitamina D3, los compuestos de la invención incrementarán los niveles endógenos de esta hormona, que tendrá efectos terapéuticos beneficiosos similares. La invención incluye también un compuesto de la invención para uso para tratar enfermedades que se benefician de inhibir el catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Además, la invención incluye un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar enfermedades que se benefician de inhibir el catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25dihidroxi vitamina D3.

Las enfermedades que se beneficiarán de una modulación en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 incluyen, pero no se limitan a:

i. en el paratiroides - hiper- e hipo-paratiroidismo, seudohipoparatiroidismo, hiperparatiroidismo secundario;

ii. en el páncreas - diabetes;

iii. en la tiroides - carcinoma medular;

iv.: en la piel - soriasis, cicatrización de heridas;

v.: en los pulmones - sarcoidosis y tuberculosis;

vi. en el riñón - nefropatía crónica, VDRR hipofosfatémica, raquitismo dependiente de vitamina D;

vii. en el hueso - tratamiento anticonvulsionante, fibrogénesis ósea imperfecta, osteítis fibrosa quística, osteomalacia, osteoporosis, osteopenia, osteosclerosis, osteodistrofia renal, raquitismo;

viii. en los intestinos - antagonismo glucocorticoide, hipercalcemia idiopática, síndrome de malabsorción, esteatorrea y esprue tropical.

ix. trastornos autoinmunitarios.

Según un aspecto adicional de la presente invención, la enfermedad que se beneficia de una modulación, en particular un incremento, en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, es un trastorno proliferativo celular. La invención también incluye un compuesto de la invención para uso para modular la proliferación celular (preferentemente para inhibir la proliferación celular) y/o promover la diferenciación celular. La invención incluye además un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para modular la proliferación celular (preferentemente inhibir la proliferación celular) y/o promover la diferenciación celular.

En particular, el método de la invención es útil para inhibir la proliferación de células anormales pero no normales. Las células anormales incluyen cualquier tipo de célula que cause o esté implicada en una enfermedad o afección, y en las que sea deseable modular o inhibir la proliferación de la célula anormal, o promover su diferenciacion, para tratar la enfermedad o afección. Los ejemplos de células anormales incluyen las células malignas o cancerosas, así como una célula que hiperprolifere en afecciones inflamatorias tales como soriasis.

En otra realización de la presente invención, la enfermedad que se beneficia de una modulación, en particular un incremento, en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, es cáncer.

La invención también incluye un compuesto de la invención para uso para tratar cáncer. La invención incluye además un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para tratar cáncer. En realizaciones de la invención, el cáncer se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de colon y colorrectal, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer pancreático, cáncer de piel, sarcoma de Kaposi y leucemia.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para modular la actividad de CYP24 en una célula administrando una cantidad eficaz de un compuesto de la invención. La presente invención también proporciona un compuesto de la invención para uso para modular, preferentemente inhibir, la actividad de CYP24. La presente invención proporciona además un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento para modular la actividad de CYP24, preferentemente inhibir, la actividad de CYP24.

Los compuestos de la invención pueden usarse solos o en combinación con otros agentes que modulan la actividad de la CYP24, o en combinación con otros tipos de tratamiento (que pueden modular o no la CYP24) para enfermedades que se benefician de una modulación, preferentemente un incremento, en los niveles de 1a,25dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma, y/o una inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma. Preferentemente, los compuestos de la invención se administran en combinación con 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (calcitriol), un análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 u otros agonistas del receptor de vitamina D. La inhibición del catabolismo de agonistas del receptor de vitamina D tales como 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o análogos de la misma, prolongará el tiempo de vida biológico o eficacia de estas terapias, y de este modo permitirá usar menores cantidades del fármaco para la quimioterapia humana eficaz; tales menores dosificaciones evitarán, o al menos minimizarán, los efectos secundarios, por ejemplo la toxicidad hipercalcémica, asociados con el uso médico de estos compuestos. Además, la invención incluye un compuesto de la invención para uso para aumentar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina D, y un uso de un compuesto de la invención para preparar un medicamento destinado a aumentar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina

D. En realizaciones de la invención, el agonista del receptor de vitamina D es 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma. Por análogo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 se quiere decir un análogo químicamente modificado de 1a,25-dihidroxi vitamina D3 que es un agonista del receptor de vitamina D y por lo tanto presenta un perfil terapéutico similar a 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Los ejemplos de tales compuestos se pueden encontrar en los siguientes artículos de repaso, cuyos contenidos se incorporan aquí como referencia: Pinette, K.V et al. “Vitamin D Receptor as a Drug Discovery Target”, Mini Reviews in Med. Chem. 2003, 3:193-204; Mathieu, C. y Adorini, L. “The Coming of Age of 1,25-Dihydroxy Vitamin D3 Analogs as Immunomodulatory Agents”, Trends in Mol. Med. 2002, 8:174-179; Carlberg, C. “Molecular Basis of the Selective Activity of Vitamin D Analogues”, J. Cell. Bio. 2003, 88:274-281; Stein, M.S. y Wark, J.D. “An update on the therapeutic potential of vitamin D analogues”, Expert Opin. Invest. Drugs 2003, 12:825-840; Bouillon, R. et al. “Structure-Function Relationships in the Vitamin D Endocrine System” Endocr. Rev. 1995, 16:200-257; y Nagpal, S. et al. “Vitamin D Analogs: Mechanism of Action and Therapeutic Applications”, Current Med. Chem. 2001, 8:1661-1679.

Los tratamientos usados en combinación con los compuestos de la presente invención se pueden basar en el tipo de enfermedad, y no tienen que dirigirse específicamente contra la actividad de CYP24 o el VDR. En un aspecto particular de la presente invención, los compuestos de la invención se usan en combinación con otras terapias o productos terapéuticos para tratar trastornos dermatológicos, trastornos óseos, cáncer y enfermedades autoinmunitarias. Tales terapias incluyen, pero no se limitan a las siguientes: para cáncer: cirugía, radiación, quimioterapias y bioterapias; para soriasis: radiación ultravioleta B, quimioterapia y bioterapias.

Un experto en la materia puede determinar qué compuestos de la invención tendrían utilidad terapéutica, por ejemplo en la inhibición de la proliferación celular en cualquier tipo de cáncer o trastorno proliferativo celular. Los compuestos pueden examinarse en busca de su potencia en la inhibición del crecimiento celular en ensayos de proliferación celular, tales como la inhibición del crecimiento de queratinocitos murinos (estirpe celular PE), y para la inhibición de la actividad de ornitina descarboxilasa (ODC) inducida por TPA como se describe en la patente US nº 5.830.885, cuyos contenidos se incorporan aquí como referencia.

Además del cáncer, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de otras afecciones que implican proliferación celular aberrante o anormal. Otros trastornos proliferativos celulares que pueden tratarse mediante la presente invención incluyen enfermedades inflamatorias, alergias, enfermedades autoinmunitarias, rechazo del trasplante, soriasis, restenosis, arteroesclerosis, y cualquier otro trastorno en el que sea deseable inhibir, prevenir o suprimir la proliferación celular. Los compuestos de la invención pueden ensayarse para determinar su potencia en un trastorno de proliferación celular específico, usando ensayos y técnicas conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, las referencias siguientes proporcionan ensayos para varias enfermedades: artritis reumatoide: “Regulation of IL-15 - Simulated TNF-alpha Production by Rolipram”, Journal of Immunology (1999) volumen 163 página 8236 por C. S. Kasyapa et al.; alergia: “A novel Lyn-Binding Peptide Inhibitor Blocks Eosinophil Differentiation, Survival, and Airway eosinophilic inflammation”. Journal of Immunology (1999) volumen 163 página 939 por T. Adachi et al.; soriasis: Journal of Immunology (2000) volumen 165 página 224 “Inhibition of Keratinocyte apoptosis by IL-15: a new parameter in the pathegenosis of soriasis” por R. Üchert; y soriasis: International Archives of allergy and Immunology (2000) volumen 123 página 275. “T-cell receptor mimic peptides and their potential application in T-cell mediated disease” por A. H. Enk.

Los compuestos de la invención se formulan preferentemente en composiciones farmacéuticas para la administración a pacientes humanos en una forma biológicamente compatible, adecuada para la administración in vivo. Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención en mezcla con un diluyente o vehículo adecuado. La presente invención comprende además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y un agonista del receptor de vitamina D en mezcla con un diluyente o vehículo adecuado. En realizaciones de la invención, el agonista del receptor de vitamina D es 1a,25-dihidroxi vitamina D3, o un análogo de la misma.

Las composiciones que contienen los compuestos de la invención pueden prepararse mediante métodos conocidos para la preparación de composiciones farmacéuticamente aceptables que pueden administrarse a pacientes, de modo que una cantidad eficaz de la sustancia activa se combine en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los vehículos adecuados se describen, por ejemplo, en Remington’s Pharmaceutical Sciences (Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA 1985). Sobre esta base, las composiciones incluyen, aunque no exclusivamente, disoluciones de las sustancias en asociación con uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, y están contenidas en disoluciones tamponadas con un pH adecuado e isoosmótico con los fluidos fisiológicos.

Los compuestos de la invención pueden usarse farmacéuticamente en forma de la base libre, en forma de solvatos y como hidratos. Todas las formas están comprendidas dentro del alcance de la invención.

Según los usos de la invención, los compuestos descritos o sus solvatos pueden administrarse a un paciente en una variedad de formas, dependiendo de la vía de administración seleccionada, como apreciará cualquier experto en la materia. Las composiciones de la invención pueden administrarse, por ejemplo, por administración oral, parenteral, bucal, sublingual, nasal, rectal, en parches, con bomba o transdérmica (tópica), y las composiciones farmacéuticas pueden formularse en consecuencia. La administración parenteral incluye los modos de administración intravenoso, intraperitoneal, subcutáneo, intramuscular, transepitelial, nasal, intrapulmonar, intratecal, rectal y tópico. La administración parenteral puede ser por infusión continua durante un periodo de tiempo seleccionado.

Un compuesto de la invención se puede administrar por vía oral, por ejemplo con un diluyente inerte o con un portador comestible asimilable, o puede encerrarse en cápsulas de gelatina de cubierta dura o blanda, o puede comprimirse en comprimidos, o puede incorporarse directamente con el alimento de la dieta. Para la administración terapéutica oral, el compuesto de la invención puede incorporarse con excipiente y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, u obleas.

Un compuesto de la invención se puede administrar también por vía parenteral. Las disoluciones de un compuesto de la invención pueden prepararse en agua mezclada de forma adecuada con un tensioactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones pueden prepararse también en glicerol, polietilenglicoles líquidos, DMSO y mezclas de los mismos con o sin alcohol, y en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para impedir el crecimiento de microorganismos. Un experto en la materia conoce cómo preparar formulaciones adecuadas. Los procedimientos e ingredientes convencionales para la selección y preparación de formulaciones adecuadas se describen, por ejemplo, en Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990 - 18ª edición) y en The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19) publicada en 1999.

Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen disoluciones o dispersiones acuosas esterilizadas y polvos esterilizados para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables esterilizadas. En todos los casos, la forma debe estar esterilizada, y debe ser fluida hasta el punto en que se produzca una fácil inyectabilidad. Las ampollas son dosificaciones unitarias convenientes.

Las composiciones para administración nasal pueden formularse convenientemente en forma de aerosoles, gotas, geles y polvos. Las formulaciones en aerosol comprenden típicamente una disolución o suspensión fina de la sustancia activa en un disolvente acuoso o no acuoso fisiológicamente aceptable, y se presentan normalmente en cantidades individuales o en múltiples dosis en forma esterilizada en un recipiente sellado, que puede tener la forma de un cartucho o de relleno para su uso con un disolvente de atomización. Alternativamente, el recipiente sellado puede ser un dispositivo de dosificación unitaria, tal como un inhalador nasal de una sola dosis o un dosificador de aerosol provisto de una válvula de dosificación que está pensado para su eliminación después del uso. Cuando la forma galénica comprende un dosificador de aerosol, contendrá un propelente que puede ser un gas comprimido, tal como aire comprimido, o un propelente orgánico, tal como fluoroclorohidrocarburo. Las formas galénicas de aerosol pueden también tener la forma de un atomizador de bomba.

Las composiciones adecuadas para administración bucal o sublingual incluyen comprimidos, tabletas y pastillas, en las que el ingrediente activo se formula con un vehículo tal como azúcar, goma arábiga, tragacanto o gelatina y glicerina. Las composiciones para administración rectal están convencionalmente en forma de supositorios que contienen una base de supositorio convencional, tal como manteca de cacao.

Las composiciones para la administración tópica pueden incluir, por ejemplo, propilenglicol, alcohol isopropílico, aceite mineral y glicerina. Las preparaciones adecuadas para la administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semi-líquidas tales como linimentos, lociones, aplicadores, emulsiones de aceite en agua o de agua en aceite tales como cremas, ungüentos o pastas; o disoluciones o suspensiones tales como gotas. Además de los ingredientes mencionados anteriormente, las preparaciones tópicas pueden incluir uno o más ingredientes adicionales tales como diluyentes, tampones, agentes saborizantes, aglutinantes, agentes tensioactivos, espesantes, lubricantes, conservantes, por ejemplo hidroxibenzoato de metilo (incluyendo anti-oxidantes), agentes emulsionantes y similares.

Se pueden formular composiciones de liberación sostenida o de liberación directa, por ejemplo liposomas o aquellas en las que el compuesto activo está protegido con revestimientos degradables de forma diferente, tales como mediante microencapsulamiento, revestimientos múltiples, etc. También es posible liofilizar los compuestos de la invención y usar los liofilizados obtenidos, por ejemplo para la preparación de productos para inyección.

Los compuestos de la invención pueden administrarse a un animal solos o en combinación con vehículos farmacéuticamente aceptables, como se ha señalado anteriormente, cuya proporción se determina por la solubilidad y naturaleza química del compuesto, la vía de administración seleccionada y la práctica farmacéutica habitual.

La dosificación de los compuestos y/o de las composiciones de la invención puede variar dependiendo de muchos factores, tales como las propiedades farmacodinámicas del compuesto, el modo de administración, la edad, salud y peso del receptor, la naturaleza y alcance de los síntomas, la frecuencia del tratamiento y el tipo de tratamiento simultáneo, si existe, y la tasa de eliminación del compuesto en el animal que va a tratarse. Un experto en la materia puede determinar la dosificación apropiada basándose en los factores anteriores. Por ejemplo, en el tratamiento tópico, se pueden administrar ungüentos, cremas o lociones que contienen de 1-1000 μg/g de un compuesto de la invención. Pueden formularse preparaciones orales, preferentemente como comprimidos, cápsulas

o gotas, que contienen de 0,5-1000 μg de un compuesto de la invención por unidad de dosificación. Los compuestos de la invención pueden administrarse inicialmente en una dosis adecuada que puede ajustarse según se requiera, dependiendo de la respuesta clínica. Para el tratamiento ex vivo de células durante un periodo corto, por ejemplo durante 30 minutos a 1 hora o más, pueden usarse dosis mayores del compuesto que para la terapia in vivo de larga duración.

Además de los usos terapéuticos mencionados anteriormente, los compuestos de la invención son útiles también en ensayos de diagnóstico, ensayos de identificación y como herramientas para investigación.

En el ensayos de diagnóstico, los compuestos de la invención pueden ser útiles en la identificación o detección de un trastorno proliferativo celular. En dicha realización, los compuestos de la invención pueden radiomarcarse (como se ha descrito anteriormente en la presente memoria) y ponerse en contacto con una población de células. La presencia del producto radiomarcado en las células puede indicar un trastorno proliferativo celular.

En los ensayos de identificación, los compuestos de la invención pueden usarse para identificar otros compuestos que modulen la proliferación celular o la actividad de CYP24. Como herramientas de investigación, los compuestos de la invención pueden usarse en ensayos de unión al receptor y ensayos para estudiar la localización de CYP24. En dichos ensayos, los compuestos pueden también estar radiomarcados.

Los siguientes ejemplos no limitativos son ilustrativos de la presente invención:

Ejemplos

Materiales y métodos para los Ejemplos 1-20

A menos que se indique de otro modo, todas las reacciones se llevaron a cabo en material de vidrio secado en estufa, agitado a una atmósfera de argón de pureza ultra elevada. El THF se destiló en Na/cetil benzofenona, y el CH2Cl2 se destiló en CaH2 inmediatamente antes de su uso. Los compuestos de organolitio se valoraron antes del uso siguiendo métodos conocidos (Suffert, J. J. Org. Chem. 1989, 54, 509-510). Todos los demás reactivos se usaron tal como se recibieron de los proveedores comerciales. El análisis por TLC analítica se realizó en placas de gel de sílice sobre soporte de vidrio recubiertas previamente (Merck Kieselgel 60 F254, de 250 mm de grosor) y se visualizaron con tinción con p-anisaldehído o con KMnO4. La cromatografía en columna se llevó a cabo como se da a conocer por Still et al. J. Org. Chem. 1978, 43, 1404, sobre gel de sílice ultrarrápida (tamaño de partícula: malla 230-400). La cromatografía de líquidos de presión media (MPLC) se llevó a cabo con una bomba FMI y una columna de gel de sílice empaquetada previamente (Merck, Labor Columns, LiChroprep Si 60, 40-63 mm). La HPLC se llevó a cabo usando un sistema Rainin HPLXN equipado con cabezales de bombas preparativas de 25 ml/min usando (1) una columna (semipreparativa) Chiral Technologies CHIRALCEL® OJ de 10 mm x 250 mm, empaquetada con tris(4-metilbenzoato) de celulosa sobre un sustrato de gel de sílice de 10 μm, o (2) una columna (semipreparativa) Phenomenex LUNAN 10 mm x 250 mm, empaquetada con gel de sílice de 110 Å (tamaño de poros de 5 μm) como sílice ligada a C-18 y un detector de longitud de onda variable de doble haz Rainin DynamaxN

UV-C ajustado a 254 nm. Los rendimientos se dan para productos puros (>95% basado en su homogeneidad cromatrográfica y espectroscópica), y no están optimizados. Los puntos de fusión se determinaron en capilares abiertos, usando un aparato de bloque de metal Mel-Temp, y están sin corregir. Las rotaciones ópticas se midieron en la línea de Na usando un polarímetro JASCO, modelo P-1100 (Japan Spectroscopic Co.). Los espectros de RMN se obtuvieron en un espectrómetro XL-400 de Varian que funciona a 400 MHz para 1H, 376 MHz para 19F y 100 MHz para 13C, y un espectrómetro Bruker 300 AMX que funciona a 300 MHz para 1H. Los desplazamientos químicos se dan en ppm (δ) y están referidos a CDCl3 (7,26 ppm para 1H y 77,0 ppm para 13C), tetrametilsilano (TMS, 0,00 ppm para 1H), y CFCl3 (0,00 ppm para 19F). Los espectros infrarrojos (IR) se obtuvieron usando un instrumento de FT-IR de la serie 1600 de Perkin Elmer. Los espectros de HRMS (espectros de masas de alta resolución) se obtuvieron en la instalación de espectrometría de masa en la Ohio State University en un espectrómetro de masas por electroatomización Micromass QTOF. La (-)-(R)-N-trimetilsilil-S-metil-S-fenilsulfoximina y la (+)-(S)-N-trimetilsilil-S-metil-S-fenilsulfoximina se prepararon como se da a conocer previamente (véanse Hwang, K-J. J. Org. Chem. 1986, 51, 99-101. b) Hwang, K-J.; Logusch, E. W.; Brannigan, L. J. Org. Chem. 1987, 52, 3435-3441. La N-alquilación de la S-metil-S-fenilsulfoximina se llevó a cabo como se da a conocer previamente (véanse Johnson, C.R.; Lavergne, O. M. J. Org. Chem. 1993, 58, 1922, y Raguse, B.; Ridley, D. D. Aust. J. Chem. 1986, 39, 1655). La (-)-(R)-S-metil-S-fenilsulfoximina, la (+)-(S)-S-metil-S-fenilsulfoximina, la (-)-(R)-N,S-dimetil-Sfenilsulfoximina y la (+)-(S)-N,S-dimetil-S-fenilsulfoximina se obtuvieron a partir de Fuentes comerciales.

Ejemplo 1: Procedimiento general para la preparación de compuestos de la Fórmula V, en los que R7 es hidrógeno, y C22-C23 es un enlace sencillo.

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un condensador de reflujo, y un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la sulfoximina VII apropiada (50 mg, 0,32 mmoles), y se disolvió en 0,6 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución 0,5 M. Después, el matraz se colocó en un baño de aceite a 60ºC. A esta disolución se añadió Et2NTMS (72 μl, 0,38 mmoles) vía una jeringuilla gota a gota durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se dejó agitar a 60ºC durante aprox. 30 minutos. Cuando la cromatografía de capa fina (TLC) mostró el consumo total del material de partida, el matraz se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla se concentró a vacío para dar el producto Ntrimetilsilil sulfoximina, esencialmente puro según se determina mediante RMN 1H. Éste se usó sin purificación adicional.

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, y un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la N-trimetilsilil sulfoximina VII apropiada (73 mg, 0,32 mmoles) disuelta en 3,2 ml de THF recientemente destilado y 0,32 ml de HMPA. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadieron 0,23 ml de n-BuLi (0,33 mmoles, disolución 1,44 M en hexanos) gota a gota durante varios minutos, durante cuyo tiempo se desarrolló un color amarillo pálido. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales, y después se calentó hasta 0ºC durante 10 min. El matraz se volvió a enfriar hasta -78ºC. Mientras tanto, un matraz con forma de pera, de 10 ml secado a la llama, equipado con un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con yoduro de (+)-VI (50 mg, 0,11 mmoles) disuelto en 0,5 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de yoduro de (+)-VI se transfirió al matraz que contiene la sulfoximina litiada a -78ºC, vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y se agitó a esta temperatura durante alrededor de 10 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La reacción se paralizó mediante adición de 2 ml de HCl 3N acuoso, y se dejó agitar durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con éter dietílico, y se basificó usando NaOH 1H acuoso hasta que se alcanzó un pH de alrededor de 9, y después se enjuagó en un embudo de separación con éter dietílico. La mezcla se extrajo con éter dietílico (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml), y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida.

a) Alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(a). Según el procedimiento general para la preparación de los compuestos

de la fórmula V, en la que R7 es un hidrógeno como se describe anteriormente, la (+)-(S)-S-metil-S-fenil

sulfoximina VII(a) dio un compuesto de la fórmula (+)-V(a) como se muestra en el Esquema 10:

Esquema 10

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos, proporcionó 28 mg de (+)V(a) con un rendimiento de 53%. Datos para (+)-V(a): [a]25D = +43,4 (c = 1,4, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,93 (m, 2H), 7,64-7,50 (m, 3H), 4,0 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 3,20 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,4 Hz, J = 13,6 Hz), 5 3,02 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 11,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,67 (br, 1H), 1,86 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 1,80-1,63 (m, 4H), 1,561,4 (m, 3H), 1,36-1,26 (m, 3H), 1,20-1,00 (m, 4H), 0,93 (t, 9H, J = 8,4 Hz), 0,84 (s, 3H), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,54 (q, 6H, J = 8,4 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 141,9, 132,9, 129,1, 128,3, 69,2, 55,9, 54,8, 52,9, 42,1, 40,6, 34,5, 34,1, 28,6, 26,9, 22,8, 18,3, 17,6, 13,4, 6,9, 4,9. IR (película delgada) 3271 (br, w), 2949 (s), 2875 (s), 1445 (m), 1224 (br, s), 1163 (m), 1091 (sh, m), 1017 (br, s), 742 (m) cm-1. HRMS: calculado para C26H45NO2SSiNa+

10 [M+Na]: 486,2832 Encontrado: 486,2829.

b) Alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(a’). Según el procedimiento general para la preparación de los compuestos de la fórmula V, en la que R7 es un hidrógeno como se describe anteriormente, la (-)-(R)-S-metil-Sfenil sulfoximina VII(a’) dio un compuesto de la Fórmula (+)-V(a’)+ como se muestra en el Esquema 11:

15 Esquema 11

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos proporcionó 38 mg del

20 producto de alquilación (+)-V(a’) como un aceite viscoso, con un rendimiento del 72%. Datos para (+) V(a’): [a]25D = +37,1 (c = 1,8, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,97-7,93 (m, 2H), 7,64-7,49 (m, 3H), 4,0 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 3,17 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,4, 13,6 Hz), 3,06 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,6 Hz), 2,68 (s, br, 1H), 1,88-1,71 (m, 3H), 1,66-1,44 (m, 4H), 1,42-1,25 (m, 4H), 1,19-1,00 (m, 4H), 0,93 (t, 9H, J = 8,0 Hz), 0,84 (s, 3H), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,53 (q, 6H, J = 8,0 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 141,8, 132,9, 129,1, 128,3, 69,2, 55,8, 54,7, 52,9, 42,1,

25 40,6, 34,5, 34,1, 28,6, 26,9, 22,8, 18,3, 17,5, 13,4, 6,9, 4,9. IR (película delgada) 3283 (br, w), 2948 (s), 2874 (s), 1445 (m), 1222 (br, s), 1163 (m), 1092 (sh, m),1017 (br, s), 973 (br, m), 742 (m) cm-1. HRMS: calculado para C26H45NO2SSiNa+ [M+Na]: 486,2832 Encontrado: 486,2825.

Ejemplo 2: Procedimiento general para la preparación de cetonas III con anillo C,D, en las que R7 es 30 hidrógeno, y C22-C23 es un enlace sencillo

Esquema 12

35 Método general de desprotección

Un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto

con un balón de Ar, se cargó con alcohol protegido con trietilsililo apropiado (30 mg, 0,065 mmoles) disuelto en 1,6

ml de acetonitrilo anhidro, para dar una disolución aprox. 0,04 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,26 40 ml de HF (0,46 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó

agitar entonces a temperatura ambiente en la oscuridad durante 4 horas. La TLC mostró la terminación de la

reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta

que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación

con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 45 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a

vacío para dar el producto bruto.

Método general de oxidación

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con el alcohol apropiado (15 mg, 0,043 mmoles) disuelto en 1 ml de CH2Cl2 recientemente destilado, para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron, en una porción a temperatura ambiente, PDC (34 mg, 0,09 mmoles) y 21 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna.

Ejemplo 2 (a): Preparación de cetona (+)-III(a) con anillo CD:

Esquema 13

Se preparó una disolución de alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(a) (30 mg, 0,065 mmoles) disuelto en 1,6 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,04 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,26 ml de HF (0,46 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a temperatura ambiente en la oscuridad durante 4 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 19,4 mg del alcohol correspondiente como un aceite viscoso con un rendimiento de 86%. Datos para el alcohol correspondiente: [a]25D = +30,2 (c = 1,45, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,97-7,95 (m, 2H), 7,64-7,53 (m, 3H), 4,05 (br, 1H), 3,20 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,6 Hz), 3,03 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,6 Hz), 2,67 (s, br, 1H), 1,93-1,68 (m, 6H), 1,58-1,37 (m, 5H), 1,30-0,95 (m, 5H), 0,87 (s, 3H), 0,84 (d, 3H, J = 6,4 Hz). RMN 13C (PDCl3, 100 MHz): δ 141,9, 132,9, 129,1, 128,3, 69,0, 55,8, 54,8, 52,4, 41,8, 40,2, 34,1, 33,5, 28,5, 26,8, 22,3,18,2, 17,3, 13,4. IR (película delgada) 3436 (br, w), 3330 (br, w), 2934 (s), 2871 (s), 1445 (m), 1373 (w), 1219 (br, s), 1161 (w), 1097 (sh, m), 989 (s), m), 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C20H31NO2SNa+ [M+Na]; 372,1967 Encontrado: 372,1968.

El alcohol correspondiente (15 mg, 0,043 mmoles) se disolvió en 1 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (34 mg, 0,09 mmoles) y 21 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 12 mg de cetona (+)-III(a) con un rendimiento del 81%. Datos para (+)-III(a):

[a]25

D = +9,2 (c = 0,4, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,95 (m, 2H), 7,65-7,54 (m, 3H), 3,21 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,6 Hz), 3,04 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,6Hz), 2,67 (s, 1H), 2,42 (dd, 1H, J = 8,0 Hz, J = 11,6 Hz), 2,302,16 (m, 2H), 2,05-1,95 (m, 2H), 1,93-1,65 (m, 5H), 1,60-1,35 (m, 4H), 1,27-1,19 (m, 1H), 0,91 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,58 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 211,6, 141,9, 133,0, 129,2, 128,3, 61,7, 55,9, 54,7, 49,7, 40,8, 38,8, 34,4, 28,6, 27,2, 23,9, 18,9, 18,4, 12,4. IR (película delgada) 3271 (w), 2942 (s), 2872 (s), 1701 (s), 1437 (sh, m), 1378 (w), 1219 (br, s), 1102 (w), 978 (m), 755 (w) cm-1. HRMS: calculado para C20H29NO2SNa+ [M+Na]: 370,1811 Encontrado: 370,1793.

Ejemplo 2 (b): Preparación de cetona (+)-III(a’) con anillo CD

Esquema 14 10

Se preparó una disolución de alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(a’) (30 mg, 0,065 mmoles) disuelto en 1,6 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,04 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,26 ml de HF (0,46 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a temperatura ambiente en la oscuridad durante 4 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 20,1 mg del alcohol correspondiente como un aceite viscoso con un rendimiento del 89%. Datos para el alcohol correspondiente: [a]25D = +23,7 (c = 1,45, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,99-7,96 (m, 2H), 7,66-7,54 (m, 3H), 4,07 (br, 1H), 3,19 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,4, 13,6 Hz), 3,07 (ddd, 1H, J = 4,4, 11,6, 13,6 Hz), 2,68 (s, br, 1H), 1,95-1,78 (m, 4H), 1,75-1,62 (m, 2H), 1,58-1,36 (m, 5H),1,32-0,95 (m, 5H), 0,89 (s, 3H), 0,87 (d, 3H, J = 6,4 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 1,41,9, 132,9, 129,1, 128,3, 69,0, 55,7, 54,7, 52,4, 42,8, 40,2, 34,1, 33,5, 28,5, 26,8, 22,3, 18,2, 17,3, 13,4. IR (película delgada) 3448 (br, w), 3330 (br, w), 2935 (s), 2871 (s), 1445 (m), 1219 (br, s), 1098 (sh, m), 1078 (br, s), 990 (s), m), 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C20H31NO2SNa+ [M+Na]: 372,1967 Encontrado: 372,1981.

El alcohol correspondiente (15 mg, 0,043 mmoles) se disolvió en 1 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (34 mg, 0,09 mmoles) y 21 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 13 mg de cetona (+)-III(a’) con un rendimiento del 87%. Datos para (+)-III(a’):

[a]25

D = +8,0 (c = 0,4, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,95 (m, 2H), 7,65-7,54 (m, 3H), 3,18 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,0, 13,6 Hz), 3,08 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,0, 13,6Hz), 2,67 (s, 1H), 2,41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 10,8 Hz), 2,302,16 (m, 2H), 2,06-1,95 (m, 2H), 1,93-1,80 (m, 2H), 1,78-1,64 (m, 3H), 1,57-1,33 (m, 4H), 1,27-1,19 (m, 1H), 0,92 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,59 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 211,6, 141,9, 133,0, 129,1, 128,3, 61,7, 55,8, 54,6, 49,7, 40,8, 38,8, 34,4, 28,6, 27,1, 23,9, 18,9, 18,4, 12,4. IR (película delgada) 3271 (w), 2954 (s), 2872 (s), 1701 (s), 1443 (sh, m), 1219 (br, s), 1096 (s), 978 (m), 749 (w) cm-1. HRMS: calculado para C20H29NO2SNa+ [M+Na]: 370,1811 Encontrado: 370,1809.

Ejemplo 3a: 24-Fenil sulfoximinas I(a) y I(b)

Esquema 15

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (±)-IV(a) (Posner, G. H. et al. J. Med Chem. 1992, 35, 3280-3287) y la cetona (+)-III(a) con anillo CD se secaron azeotrópicamente con benceno, y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (±)-IV(a) (65 mg, 0,11 mmoles) en argón se disolvió en 1,1 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,1 M en un matraz de 10 ml secado a la llama, y el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió n-BuLi (68 μl, 0,11 mmoles, disolución 1,6 M en hexanos) gota a gota durante varios minutos, durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con cetona (+)-III(a) con anillo CD (12 mg, 0,036 mmoles) disuelta en 1 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC, vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 15 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución

de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado.

El producto acoplado (13 mg, 0,018 mmoles), en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, se disolvió en 0,9 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,02 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 75 μl de HF (1,8 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a temperatura ambiente en la oscuridad durante 2 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml) y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (5 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml), y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío, para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida se eluyó con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar 8,4 mg de una mezcla de diastereómeros (+)-I(a) y (+)-I(b) con un rendimiento del 92%, y en una relación de 2,5:1 respectivamente. La mezcla diastereomérica se separó entonces mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,0 ml/min.) eluída con 13% de etanol en hexanos para proporcionar 1,9 mg de (+)-I(a) y 1,0 mg de (+)-I(6) con rendimientos de 21% y 11%, respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(a) fue 58,1 min., y para (+)-I(b) fue 45,7 min.

Datos para (+)-I(a): [a]D = +80,4 (c = 0,13, MeOH) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,96 (m, 2H), 7,64-7,52 (m, 3H), 6,36 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,99 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,32 (t, 1H, J = 1,6 Hz) 4,98 (br, 1H), 4,43-4,40 (m, 1H), 4,23-4,22 (m, 1H), 3,20 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,4, 13,2 Hz), 3,03 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,4, 13,2 Hz), 2,82-2,78 (m, 1H), 2,65 (s, 1H), 2,61-2,58 (m, 1H), 2,33-2,28 (m, 1H) 2,04-1,90 (m, 4H), 1,82-1,75 (m, 2H), 1,69-1,42 (m, 8H), 1,281,20 (m, 4H), 0,88 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz): δ 149,9, 142,3, 140,8, 136,0, 135,2, 130,7, 129,9, 124,9, 119,3, 112,2, 71,6, 67,5, 57,5, 57,2, 55,5, 47,0, 46,2, 43,8, 41,8, 36,4, 30,3, 30,0, 28,4, 24,7, 23,3, 19,1, 12,4. IR = 3387 (br, m), 3307 (br, m), 2942 (s), 2872 (m), 1443 (m), 1349 (w), 1213 (s), 1096 (m), 1055 (s), 1008 (m), 984 (sh, s), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C29H41NO3SNa+ [M+Na]: 506,2699; Encontrado: 506,2668.

Datos para (+)-I(b): [a]D = +9 (c = 0,09, MeOH) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,96 (m, 2H), 7,64-7,52 (m, 3H), 6,37 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,31 (m, 1H), 4,98 (br, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,23-4,19 (m, 1H), 3,23-317 (m, 1H), 3,07-2,99 (m, 1H), 2,83-2,80 (m, 1H), 2,66 (s, 1H), 2,62-2,60 (m, 1H), 2,32-2,27 (m, 1H), 2,00-1,90 (m, 5H), 1,81-1,64 (m, 7H), 1,25-1,21 (m, 6H), 0,87 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,48 (s, 3H). RMN 13C (CD3OD, 100 MHz): δ 149,8, 142,4, 142,2, 135,9, 130,5, 129,8, 124,9, 124,9, 119,2, 112,4, 71,7, 67,5, 57,2, 55,8, 47,0, 46,4, 43,8, 41,8, 36,4, 30,5, 30,0, 28,4, 24,7, 23,4, 19,1, 12,4. IR: 3320 (br, m), 3307, 2940 (s), 2871 (m), 1445 (m), 1349 (w), 1214 (s), 1093 (m), 1053 (s), 1008 (m), 984 (sh, s), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C29H41NO3SNa+ [M+Na]: 506,2699; Encontrado: 506,2690.

Ejemplo 3b: 24-Fenil sulfoximinas I(c) y I(d)

De manera similar, los compuestos I(c) y I(d) se pueden preparar como se muestra en el Esquema 16:

Esquema 16

en el que la cetona (+)-III(a’) con anillo CD, en vez de la cetona (+)-III(a) con anillo CD, se acopló con óxido de fosfina (±)IV(a) como se describe en el ejemplo 3a anterior. Tras la reacción de acoplamiento y la etapa de desprotección subsiguiente, la cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 7,2 mg de una mezcla de diastereómeros (+)-I(c) y (+)-I(d) con un rendimiento del 82% y en una relación de 2,9:1 respectivamente. La mezcla diastereomérica se separó entonces mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,0 ml/min.) eluída con 13% de etanol en hexanos para proporcionar 2,2 mg de (+)-I(c) y 1,0 mg de (+)-I(d) con rendimientos de 25% y 11%, respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(c) fue 49,2 min. y para (+)-I(d) fue 40,2 min.

Datos para (+)-I(c): [a]D = +37,3 (c = 0,13, MeOH) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,95 (m, 2H), 7,65-7,52 (m, 3H), 6,36 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,99 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,31 (m, 1H) 4,98 (br, 1H), 4,43-4,40 (m, 1H), 4,29-4,22 (m, 1H), 3,18 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,4, 14,0 Hz), 3,07 (ddd, 1H, J = 4,8, 12,4, 14,0 Hz), 2,83-2,80 (m, 1H), 2,66 (s, 1H), 2,61-2,58 (m, 1H), 2,33-2,28 (m, 1H) 2,20-1,80 (m, 6H), 1,75-1,62 (m, 18H), 1,30-1,16 (m, 4H), 0,88 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 147,6, 142,5, 133,2, 129,6, 128,6, 128,2, 124,8, 117,3, 111,8, 70,8, 66,8, 56,1, 55,7, 54,1, 45,9, 45,2, 42,8, 40,3, 34,9, 28,9, 28,2, 27,2, 23,4, 22,1,18,5, 11,9. IR: 3377 (br, m), 3318 (br, m), 2931 (s), 2872 (m), 1442 (m), 1214 (s), 1096 (m), 1055 (s), 1008 (m), 984 (sh, s), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C29H41NO3SNa+ [M+Na]: 506,2699; Encontrado: 506,2676.

Datos para (+)-Id: [a]D = +17,5 (c = 0,09, MeOH) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,95 (m, 2H), 7,64-7,52 (m, 3H), 6,37 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,31 (m, 1H) 4,98 (br, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,22-4,19 (m, 1H), 3,16 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,0, 13,2 Hz), 3,08 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,4, 13,2 Hz), 2,82-2,80 (m, 1H), 2,66 (s, 1H), 2,622,58 (m, 1H), 2,31-2,27 (m, 1H) 1,91-1,80 (m, 4H), 1,74-1,60 (m, 10H), 1,30-1,19 (m, 4H), 0,88 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,50 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ Debido a una cantidad insuficiente, no fue fue obtenida el 13C. IR: 3307 (br, m), 2919 (s), 2860 (m), 1443 (m), 1219 (s), 1090 (m), 1055 (s), 984 (sh, s), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C29H41NO3SNa+ [M+Na]: 506,2699; Encontrado: 506,2673.

Ejemplo 4: Procedimiento general para la preparación de los compuestos de la Fórmula V, en los que R7 no es hidrógeno y C22-C23 es un enlace sencillo.

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la sulfoximina VII apropiada (véase el Esquema 3) (43 mg, 0,25 mmoles), y se disolvió en 1,7 ml de THF recientemente destilado y 0,17 ml de HMPA. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió 0,156 ml de n-BuLi (0,25 mmoles, disolución 1,6 M en hexanos) gota a gota durante varios minutos, durante cuyo tiempo se desarrolló un color amarillo pálido. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales, y después a 0ºC durante 10 min. El matraz se volvió a enfriar hasta -78ºC. Mientras tanto, un matraz con forma de pera de 10 ml secado a la llama, equipado con un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con yoduro de VI (véase el Esquema 3) (37 mg, 0,0845 mmoles) que se disolvió en 0,5 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de yoduro de VI se transfirió al matraz que contiene la sulfoximina litiada a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó durante alrededor de 4 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La reacción se paralizó mediante adición de 5 ml de agua destilada, y después se enjuagó en un embudo de separación con acetato de etilo. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml), y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida.

a) Alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(b). Según el procedimiento general para la preparación de los compuestos

de la fórmula V, en los que R7 no es un hidrógeno como se describe anteriormente, la (+)-(S)-N,S-dimetil-S-fenil

sulfoximina VII(b) dio un compuesto de la fórmula V(b) como se muestra en el Esquema 17:

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 30% de acetato de etilo en hexanos proporcionó 32,4 mg de (+)-V(b) con un rendimiento del 80%. Datos para (+)-V(b): [a]25D = +82,69 (c = 0,3, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,84-7,81 (m, 2H), 7,61-7,52 (m, 3H), 3,98 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 3,20 (ddd, 1H, J = 4,8 Hz, J = 5,2 Hz, J = 12,4 Hz), 2,98 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 4,4 Hz, J = 12,4 Hz), 2,65 (s, 3H), 1,85-1,60 (m, 6H), 1,56-1,23 (m, 6H), 1,17-0,98 (m, 3H), 0,91 (t, 6H, J = 7,6 Hz), 0,80 (s, 3H), 0,79 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,51 (q, 9H, J = 8,0 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 137,54, 132,71, 129,31, 69,20, 55,92, 53,88, 52,93, 42,09, 40,62, 34,48, 34,23, 29,53, 28,11, 26,94, 22,81, 18,26, 17,57, 13,43, 6,91, 4,88. IR (película delgada) 2950 (s), 2875 (s), 1445 (sh, m), 1490 (m), 1246 (br, s), 1149 (m), 1082 (sh, m), 1020 (m), 846 (w) cm-1. HRMS: calculado para C27H47NO2SSiNa+ [M+Na]: 500,2988 Encontrado: 500,2998.

b) Alcohol protegido con trietilsililo (-)-V(b’). Según el procedimiento general para la preparación de los compuestos de la fórmula V, en los que R7 no es un hidrógeno como se describe anteriormente, la (-)-(R)-N,S-dimetil-S-fenil sulfoximina VII(b’) dio un compuesto de la fórmula V(b’) como se muestra en el Esquema 18:

Esquema 18

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 30% de acetato de etilo en hexanos proporcionó 35 mg del producto de alquilación (-)-V(b’) como un aceite viscoso con un rendimiento del 86%. Datos para (-)-V(b’): [a]25D = 10 5,92 (c = 0,3, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,85-7,83 (m, 2H), 7,63-7,54 (m, 3H), 3,99 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 3,18-3,02 (m, 2H), 2,66 (s, 3H), 1,88-1,44 (m, 8H), 1,36-1,24 (m, 4H), 1,17-1,05 (m, 3H), 0,93 (t, 9H, J = 8,0 Hz), 0,84 (s, 3H), 0,82 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,53 (q, 6H, J = 8,0 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 137,48, 132,72, 129,39, 129,31, 69,20, 55,88, 53,72, 52,94, 42,09, 40,63, 34,48, 34,11, 29,55, 28,12, 26,89, 22,82, 18,28, 17,57, 13,43, 6,91, 4,88. IR (película delgada) 2946 (s), 2874 (s), 1445 (m), 1490 (m), 1245 (br, s), 1150 (w), 1084 (sh, m),

15 1021 (br, s), 846 (w) cm-1. HRMS: calculado para C27H47NO2SSiNa+ [M+Na]: 500,2988 Encontrado: 500,2956.

Ejemplo 5: Procedimiento general para la preparación de cetonas III con anillo C,D, en las que R7 no es hidrógeno y C22-C23 es un enlace sencillo.

20 Esquema 19

Método general de desprotección

25 Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con el alcohol protegido con trietilsililo apropiado (35 mg, 0,073 mmoles) que se disolvió en 1,4 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,05 M. El matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,21 ml de TBAF (0,22 mmoles, disolución 1,0 M en THF), dando como resultado una disolución amarilla. Después de que la adición

30 estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó a esta temperatura durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó directamente mediante cromatografía en columna.

Método general de oxidación

35 Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con el alcohol apropiado (25 mg, 0,068 mmoles), y se disolvió en 1,7 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (54 mg, 0,14 mmoles) y 34 mg de Celite secada en estufa. La mezcla

40 resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna.

Ejemplo 5 (a): Preparación de cetona (+)-III(b) con anillo CD:

Esquema 20

Se preparó una disolución del alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(b) (35 mg, 0,073 mmoles) en 1,4 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,05 M. El matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,21 ml de TBAF (0,22 mmoles, disolución 1,0 M en THF), dando como resultado una disolución amarilla. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó a esta temperatura durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 24,3 mg del alcohol correspondiente con un rendimiento del 98%. El producto se recristalizó en acetona mediante evaporación lenta. P.f. 115-116ºC. [a]25D = +86,76 (c = 2,18, acetona) RMN 1H (acetona-d6, 400 MHz): δ 7,86-7,83 (m, 2H), 7,70-7,61 (m, 3H), 3,99 (br, 1H), 3,17 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 4,4 Hz, J = 11,6 Hz), 3,04 (ddd, 1H, J = 4,8 Hz, 4,8 Hz, J = 11,8 Hz), 2,86 (br, 1H), 2,55 (s, 3H), 1,91-1,58 (m, 6H), 1,50-1,24 (m, 6H), 1,19-1,00 (m, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,85 (d, 3H, J = 6,4 Hz). RMN 13C (acetona-d6, 100 MHz): δ 139,51, 133,50, 130,19 (2C), 68,71, 56,91, 53,91, 53,71, 42,80, 41,54, 35,07, 34,93, 29,51, 29,34, 27,78, 23,39, 18,79, 18,40, 14,07. IR (película delgada) 3284 (br, m), 2930 (s), 2877 (m), 1446 (sh, m), 1402 (w), 1377 (w), 1232 (s), 1147 (s), 1106 (m), 992 (w), 943 (w), 861 (w) cm-1. HRMS: calculado para C21H33NO2SNa+ [M+Na]: 386,2124 Encontrado: 386,2138.

El alcohol correspondiente (25 mg, 0,068 mmoles) se disolvió en 1,7 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (54 mg, 0,14 mmoles) y 34 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó la cetona (+)-III(b) como un aceite viscoso con un rendimiento del 82%. Datos para (+)-III(b): [a]25D = +52,61 (c = 0,5, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,83 (m, 2H), 7,65-7,55 (m, 3H), 3,23 (ddd, 1H, J = 4,8 Hz, J = 5,2 Hz, J = 12,0 Hz), 3,00 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 4,8 Hz, J = 11,6 Hz), 2,67 (s, 3H), 2,41 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 7,2 Hz), 2,29-2,16 (m, 2H), 2,05-1,35 (m, 11H), 1,25-1,16 (m, 1H), 0,89 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 0,56 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 211,54, 137,43, 132,80, 129,35, 129,31, 61,68, 55,86, 53,83, 49,69, 40,78, 38,75, 34,45, 29,46, 28,07, 27,13, 23,86, 18,89, 18,32, 12,36. IR (película delgada) 2956 (s), 2874 (s), 2801 (w), 1711 (s), 1445 (sh, m), 1380 (w), 1243 (br, s), 1107 (w), 1080 (w), 920 (w), 858 (w) cm-1. HRMS: calculado para C21H31NO2SNa+ [M+Na]: 384,1967 Encontrado: 384,1943.

Ejemplo 5 (b): Preparación de cetona (-)-III(b’) con anillo CD

Se preparó una disolución del alcohol protegido con trietilsililo (-)-V(b’) (35 mg, 0,073 mmoles) en 1,4 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,05 M. El matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,21 ml de TBAF (0,22 mmoles, disolución 1,0 M en THF), dando como resultado una disolución amarilla. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó a esta temperatura durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 24,8 mg del alcohol correspondiente como un sólido blanco con un rendimiento del

93%. El producto se recristalizó en acetona mediante evaporación lenta. P.f. 122-123ºC. [a]25D = -31,93 (c = 2,36, acetona) RMN 1H (acetona-d6, 400 MHz): δ 7,85-7,83 (m, 2H), 7,70-7,61 (m, 3H), 3,99 (br, 1H), 3,20-3,01 (m, 2H), 2,88 (br, 1H), 2,54 (s, 3H), 1,91-1,58 (m, 6H), 1,54-1,46 (m, 1H), 1,42-1,23 (m, 5H), 1,16-1,01 (m, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (d, 3H, J = 6,4 Hz). RMN 13C (acetona-d6, 100 MHz): δ 139,37, 133,51, 130,20 (2C), 68,72, 56,84, 53,71, 42,80, 41,53, 35,03, 34,92, 29,53, 29,33, 27,70, 23,39, 18,81, 18,39, 14,07. IR (película delgada) 3280 (br, m), 2930 (s), 2877 (s), 1445 (m), 1238 (br, s), 1148 (m), 1106 (m), 865 (w) cm-1. HRMS: calculado para C21H33NO2SNa+ [M+Na]: 386,2124 Encontrado: 386,2155.

El alcohol correspondiente (25 mg, 0,068 mmoles) se disolvió en 1,7 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (54 mg, 0,14 mmoles) y 34 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo proporcionó 23,5 mg de cetona (-)-III(b’) con un rendimiento del 95%. Datos para (-)-III(b’): [a]2D = -24,43 (c = 0,5, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,83 (m, 2H), 7,65-7,55 (m, 3H), 3,19-3,04 (m, 2H), 2,67 (s, 3H), 2,40 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 11,2 Hz), 2,29-2,15 (m, 2H), 2,05-1,80 (m, 4H), 1,75-1,63 (m, 2H), 1,561,20 (m, 6H), 0,91 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,59 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 211,53, 137,36, 132,80, 129,35, 129,32, 61,68, 55,80, 53,65, 49,69, 40,78, 38,76, 34,30, 29,48, 28,10, 27,08, 23,85, 18,89, 18,34, 12,38. IR (película delgada) 2958 (s), 2875 (s), 2802 (w), 1713 (s), 1445 (sh, m), 1380 (m), 1243 (br, s), 1145 (s), 1107 (s), 1083 (s), 920 (w), 858 (w) cm-1. HRMS: calculado para C21H31NO2SNa+ [M+Na]: 384,1967 Encontrado: 384,2000.

Ejemplo 6a: 24-Fenil N-metil sulfoximinas (Ie) y I(f).

Esquema 22

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (±)IV(a) (Posner, G. H. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3280-3287) y la cetona (+)-IIIb con anillo CD se secaron azeotrópicamente con benceno, y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (±)IV(a) (70 mg, 0,12 mmoles) se disolvió en 2,4 ml de THF recientemente destilado en argón para dar una disolución aprox. 0,05 M en un matraz de 10 ml. El matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos n-BuLi (78 μl, 0,12 mmoles, disolución 1,53 M en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética y que contiene la cetona (+)-IIIb con anillo CD (22 mg, 0,06 mmoles) se disolvió en 1 ml de THF recientemente destilado en argón, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona (+)-IIIb con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 10 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado como un sólido ceroso.

El producto acoplado (17 mg, 0,023 mmoles) se colocó en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, y se disolvió en 1,0 ml de acetonitrilo anhidro en argón para dar una disolución aprox. 0,02 M. A esta disolución bien agitada se añadió 0,1 ml de HF (2,3 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y después la mezcla se dejó agitar a la temperatura ambiente en la oscuridad durante 2 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se

secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 10,3 mg de una mezcla de (+)-I(e) y (+)-I(f) con un rendimiento del 89% y en una relación de 2,7:1 respectivamente. Esta mezcla diastereomérica se separó entonces mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 7% de etanol en hexanos, para proporcionar 6,62 mg de (+)-I(e) y 2,73 mg de (+)-I(f) con rendimientos de 57% y 23% respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(e) fue 52,08 min., y para (+)-I(f) fue 43,08 min.

Datos para (+)-I(e): [a]D = +57,3 (c = 0,44, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,84 (m, 2H), 7,64-7,54 (m, 3H), 6,36 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,32 (dd, 1H, J = 1,6 Hz, J = 1,6 Hz), 4,99-4,98 (m, 1H), 4,44-4,42 (m, 1H), 4,23-4,22 (m, 1H), 3,22 (ddd, 1H, J = 4,8 Hz, J = 12,8 Hz, J = 13,6 Hz), 3,00 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 11,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,80 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,8 Hz), 2,67 (s, 3H), 2,59 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 13,2 Hz) 2,30 (dd, 1H, J = 6,8 Hz, J = 13,6 Hz), 2,04-1,89 (m, 3H), 1,80-1,38 (m, 11H), 1,28-1,12 (m, 4H), 0,85 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,47 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 147,56, 142,66, 137,52, 133,07, 132,78, 129,37 (br, 2C), 124,84, 117,16, 111,84, 70,80, 66,80, 56,13, 55,69, 53,90, 45,80, 45,23, 42,80, 40,29, 35,04, 29,54, 28,93, 28,17, 27,26, 23,43, 22,11, 18,47, 11,92. IR: 3378 (br, m), 2944 (s), 2874 (m), 1645 (w), 1445 (m), 1380 (w), 1235 (br, s), 1146 (m), 1107 (w), 1067 (sh, m), 957 (w), 895 (w), 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C30H44NO3S+ [M+]: 498,3036; Encontrado: 498,3045.

Datos para (+)-I(f): [a]D = +43,3 (c = 0,18, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,83 (m, 2H), 7,64-7,54 (m, 3H), 6,37 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,31 (dd, 1H, J = 1,2 Hz, J = 1,6 Hz), 4,99-4,98 (m, 1H), 4,43 (br, 1H), 4,22-4,20 (m, 1H), 3,22 (ddd, 1H, J = 5,2 Hz, J = 12,4 Hz, J = 13,6 Hz), 3,00 (ddd, 1H, J = 4,4 Hz, 11,6 Hz, 13,6 Hz), 2,80 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 12,8 Hz), 2,67 (s, 3H), 2,61 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 12,8 Hz), 2,29 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,03-1,19 (m, 3H), 1,80-1,41 (m, 11H), 1,28-1,13 (m, 4H), 0,85 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,47 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 147,3, 142,7, 137,5, 132,9, 132,8, 129,4, 128,9, 124,83, 117,2, 11,5, 71,3, 66,8, 56,1, 55,7, 53,9, 45,8, 45,4, 42,8, 40,29, 30,1, 29,6, 28,9, 28,2, 27,3, 23,4, 22,1, 18,5, 12,0. IR: 3374 (br, m), 2943 (s), 2873 (m), 1646 (w), 1445 (m), 1379 (w), 1235 (br, s), 1145 (s), 1057 (br, s), 957 (m), 861 (m), 752 (s) cm-1. HRMS: calculado para C30H44NO3S+ [M+]: 498,3036 Encontrado: 498,3049.

Ejemplo 6b: 24-Fenil N-metil sulfoximinas (Ig) y I(h).

De una manera similar, los compuestos (+)-I(g) y (-)-I(h) se pueden preparar como se muestra en el Esquema 23:

Esquema 23

en el que la cetona (-)-III(b’) con anillo CD, en vez de la cetona (+)-III(b) con anillo CD, se acopló con óxido de fosfina (±)IV(a) como se describe en el ejemplo 6a anterior. Tras la reacción de acoplamiento y la etapa de desprotección subsiguiente, la cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 9,5 mg de una mezcla de diastereómeros (+)-I (g) y (-)-I(h), con un rendimiento del 82% y en una relación de 3:1 respectivamente. La mezcla diastereomérica se separó entonces mediante HPLC, usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 7% de etanol en hexanos, para proporcionar 3,39 mg de (+)-I(g) y 1,12 mg de (-)-I(h) con rendimientos del 29% y 10% respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(g) fue 45,19 min. y para (-)-I(h) fue 39,84 min.

Datos para (+)-I(g): [a]D = +7,1 (c = 0,2, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,83 (m, 2H), 7,64-7,54 (m, 3H), 6,35 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,31 (dd, 1H, J = 1,2 Hz, J = 2,0 Hz), 4,98 (dd, 1H, J = 1,2 Hz, J = 2,0 Hz), 4,43 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,19-3,04 (m, 2H), 2,80 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,8 Hz), 2,67 (s, 3H), 2,59 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 13,6 Hz), 2,30 (dd, 1H, J = 6,8 Hz, J = 13,6 Hz), 2,05-1,84 (m, 4H), 1,71-1,13 (m, 14H), 0,86 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): d 147,58, 142,64, 137,49, 133,08, 132,76, 129,37 (br, 2C), 124,84, 117,18, 111,81, 70,80, 66,82, 56,15, 55,70, 53,77, 45,82, 45,23, 42,83, 40,32, 34,94, 29,55, 28,94, 28,17, 27,22, 23,44, 22,12, 18,48, 11,93. IR: 3350 (m, br), 2924 (s), 2873 (m), 1445 (m), 1378 (w), 1235 (br, s), 1147 (m), 1107 (w), 1057 (m), 861 (w), 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C30H44NO3S+ [M+]: 498,3036; Encontrado: 498,3049.

Datos para (-)-I(h): [a]D = -8,5 (c = 0,08, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,86-7,84 (m, 2H), 7,64-7,52 (m, 3H), 6,36 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,97 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,31 (br, 1H), 4,98 (m, 1H), 4,43 (br, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,193,04 (m, 2H), 2,80 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,4 Hz), 2,67 (s, 3H), 2,61-2,58 (m, 1H), 2,29 (dd, 1H, J = 6,4 Hz, J = 12,8 Hz), 2,01-1,90 (m, 5H), 1,69-1,17 (m, 13H), 0,86 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): d 147,3, 142,7, 137,4, 133,1, 132,9, 129,4, 129,0, 124,9, 117,2, 112,5, 71,3, 66,8, 56,1, 55,7, 53,78, 45,8, 45,4, 42,8, 40,3, 34,9, 29,6, 28,9, 28,2, 27,2, 23,4, 22,12, 18,5, 11,9. IR: 3383 (br, m), 2926 (s), 2873 (s), 1445 (m), 1235 (br, s), 1145 (s), 1056 (br, m), 957 (w), 860 (br, w), 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C34H44NO3S+ [M+]: 498,3036 Encontrado: 498,3061.

Ejemplo 7a: 24-Fenil sulfoximina 19-Nor-vitamina-D3 I(i)

Esquema 24

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (±)-IV(b) (Posner, G. H. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3280-3287) y la cetona (+)-III(a) con anillo CD se secaron azeotrópicamente con benceno, y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (±)-IV(b) (76 mg, 0,13 mmoles) en argón se disolvió en 0,8 ml de THF recientemente destilado, para dar una disolución aprox. 0,1 M en un matraz de 10 ml secado a la llama, y el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos n-BuLi (83 μl, 0,13 mmoles, disolución 1,6 M en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con cetona (+)-III(a) con anillo CD (14 mg, 0,040 mmoles) disuelta en 1 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 15 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado.

El producto acoplado (15 mg, 0,021 mmoles) en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, se disolvió en 1,0 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,02 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 87 ml de HF (2,1 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a la temperatura ambiente en la oscuridad durante 2 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (5 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 3,7 mg de (+)-I(i) con un rendimiento del 70%. Este análogo se purificó después mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 15% de etanol en hexanos para proporcionar 2,3 mg de (+)-I(i) con un rendimiento del 43%. El tiempo de retención para (+)-I(i) fue 35,22 min.

Datos para (+)-I(i): [a]D = +82,3 (c = 0,16, MeOH) RMN 1H (d3-MeOD, 400 MHz): δ 7,98-7,96 (m, 2H), 7,73-7,61 (m, 3H), 6,20 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 4,05-3,96 (m, 2H), 3,26 (dd, 1H, J = 4,0, 11,6 Hz), 3,193,13 (m, 1H), 2,81 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 11,6 Hz), 2,58 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 13,6 Hz), 2,40 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 14,0 Hz), 2,23-2,13 (m, 2H), 2,03-1,93 (m, 2H), 1,84-1,46 (m, 12H), 1,33-1,17 (m, 5H), 0,89 (d, 3H, J = 6,0 Hz),

5 0,51 (s, 3H). RMN 13C (d3-MeOD, 100 MHz): d 142,17, 141,91, 134,66, 134,20, 130,55, 129,81, 123,51, 117,41, 68,11, 67,84, 57,46, 57,29, 55,81, 46,89, 45,55, 42,81, 41,83, 37,76, 36,43, 30,52, 29,88, 28,46, 24,57, 23,31, 19,10, 12,49. IR: 3330 (m, br), 2942 (s), 2872 (s), 1443 (m), 1213 (br, s), 1096 (m), 1049 (m), 978 (s), 755 (s) cm-1. HRMS: calculado para C28H41NO3SNa+ [M+Na]: 494,2699; Encontrado: 494,2679.

10 Ejemplo 7b: 24-Fenil sulfoximina 19-Nor-Vitamina-D3 I(i)

De manera similar, el compuesto I(j) se puede preparar como se muestra en el Esquema 25:

en la que la cetona (+)-III(a’) con anillo CD, en vez de la cetona (+)-III(a) con anillo CD, se acopló con óxido de fosfina (±)IV(b) como se describe en el ejemplo 7a anterior. Tras la reacción de acoplamiento y la etapa de desprotección subsiguiente, la cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en

20 presencia de 1% de trietilamina proporcionó 9,1 mg de (+)-I(j) con un rendimiento del 91%. Este análogo se purificó después mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 15% de etanol en hexanos para proporcionar 7 mg de (+)-I(j) con un rendimiento del 70%. El tiempo de retención para (+)-I(j) fue 30,25 min.

25 Datos para (+)-I(j): [a]D = +101,6 (c = 0,46, MeOH) RMN 1H (d3-MeOD, 400 MHz): δ 7,98-7,96 (m, 2H), 7,73-7,62 (m, 3H), 6,20 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 4,04-3,96 (m, 2H), 3,26 (dd, 1H, J = 4,8, 12,0 Hz), 3,15 (ddd, 1H, J = 4,8, 11,6, 14,0 Hz), 2,81 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 12,4 Hz), 2,58 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,40 (dd, 1H, J = 2,8 Hz, J = 13,6 Hz), 2,23-2,13 (m, 2H), 2,02-1,94 (m, 2H), 1,87-1,45 (m, 12H), 1,39-1,14 (m, 5H), 0,90 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,52 (s, 3H). RMN 13C (d3-MeOD, 100 MHz): d 142,11, 141,90, 134,66, 134,19, 130,55, 129,81,

30 123,50, 117,41, 68,11, 67,83, 57,45, 57,24, 55,70, 46,88, 45,55, 42,80, 41,81, 37,76, 36,41, 30,47, 29,88, 28,44, 24,57, 23,31, 19,12, 12,48. IR: 3330 (m, br), 2942 (s), 2872 (s), 1437 (m), 1213 (br, s), 1096 (m), 1049 (m), 978 (m), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C28H41NO3SNa+ [M+Na]: 494,2699; Encontrado: 494,2707.

Ejemplo 8a: 24-Fenil N-metil sulfoximina 19-Nor-vitamina-D3 I(k)

35 Esquema 26

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (±)IV(b) (Posner, G. H. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3280-3287) y la 40 cetona (+)-III(b) con anillo CD se secaron azeotrópicamente con benceno, y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (±)IV(b) (53 mg, 0,092 mmoles) se disolvió en 0,9 ml de THF recientemente destilado en argón para

dar una disolución aprox. 0,01 M en un matraz de 10 ml. El matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos n-BuLi (55 μl, 0,093 mmoles, disolución 1,7 M en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, y que contiene la cetona (+)-III(b) con anillo CD (16 mg, 0,044 mmoles) se disolvió en 1 ml de THF recientemente destilado en argón, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona (+)-III(b) con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 10 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado como un sólido ceroso.

El producto acoplado (21 mg, 0,029 mmoles) se colocó en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, y se disolvió en 1,5 ml de acetonitrilo anhidro en argón para dar una disolución aprox. 0,02 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,12 ml de HF (2,9 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a la temperatura ambiente en la oscuridad durante 1,5 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 10,7 mg de (+)-I(k) con un rendimiento del 72%. Este análogo se purificó después mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 10% de etanol en hexanos para proporcionar 3,2 mg de (+)-I(k) con un rendimiento del 30%. El tiempo de retención para (+)-I(k) fue 27,26 min.

Datos para (+)-I(k): [a]D = +92,4 (c = 0,13, MeOH) RMN 1H (d3-MeOD, 400 MHz): δ 7,87-7,85 (m, 2H), 7,74-7,64 (m, 3H), 6,20 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 4,06-3,95 (m, 2H), 3,27 (ddd, 1H, J = 5,2, 12,0, 18,4 Hz), 3,18 (ddd, 1H, J = 4,4, 10,0, 18,4 Hz) 2,81 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 12,0 Hz), 2,60 (s, 3H), 2,58 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 13,2 Hz), 2,40 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 13,2 Hz), 2,22-2,13 (m, 2H), 2,03-1,94 (m, 2H), 1,87-1,42 (m, 13H), 1,341,16 (m, 5H), 0,88 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (d3-MeOD, 100 MHz): d 141,9, 137,8, 134,8, 134,2, 130,9, 130,7, 123,5, 117,4, 68,1, 67,8, 57,4, 57,3, 54,2, 46,9, 45,5, 42,8, 41,8, 37,7, 36,5, 29,8, 29,7, 29,6, 28,5, 24,6, 23,3, 19,1, 12,5. IR: 3377 (m, br), 2931 (s), 2872 (m), 1437 (m), 1231 (br, s), 1143 (m), 1049 (m), 855 (w), 749

(s) cm-1. HRMS: calculado para C29H43NO3SNa+ [M+Na]: 508,2855; Encontrado: 508,2859.

Ejemplo 8b: 24-Fenil N-metil sulfoximina 19-Nor-vitamina-D3 I(l)

De una manera similar, el compuesto (+)-I(k) se puede preparar como se muestra en el Esquema 27:

Esquema 27

en el que la cetona (-)-III(b’) con anillo CD, en vez de la cetona (+)-III(b) con anillo CD, se acopló con óxido de fosfina (±)IV(b) como se describe en el ejemplo 8a anterior. Tras la reacción de acoplamiento y la etapa de desprotección subsiguiente, la cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 11,3 mg de (+)-I(l) con un rendimiento del 79%. Este análogo se purificó después mediante HPLC, usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 10% de etanol en hexanos para proporcionar 2,9 mg de (+)-I(l) con un rendimiento del 26%. El tiempo de retención para (+)-I(l) fue 25,88 min.

Datos para (+)-I(l): [a]D = +71,6 (c = 0,13, MeOH) RMN 1H (d3-MeOD, 400 MHz): δ 7,87-7,85 (m, 2H), 7,74-7,65 (m, 3H), 6,20 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 4,05-3,95 (m, 2H), 3,27 (ddd, 1H, J = 1,6,2,8, 12 Hz), 3,17 (ddd, 1H, J = 5,6, 12,0, 14,0 Hz), 2,81 (dd, 1H, J = 2,8 Hz, J = 11,2 Hz), 2,60 (s, 3H), 2,58 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 14,0 Hz), 2,40 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 13,2 Hz), 2,23-2,13 (m, 2H), 2,02-1,94 (m, 2H), 1,84-1,44 (m, 11H), 1,33-1,17 (m, 5H), 0,90 (d, 3H, J.=6,4 Hz), 0,53 (s, 3H). RMN 13C (d3-MeOD, 100 MHz): d 141,9, 137,7, 134,8, 134,2, 130,9, 130,7, 123,5, 117,4, 68,1, 67,8, 57,4, 57,2, 53,9, 46,9, 45,5, 42,8, 41,8, 37,7, 36,4, 29,9, 29,7, 29,6, 28,4, 24,6, 23,3, 19,1, 12,5. IR: 3389 (m, br), 2942 (s), 2872 (m), 1443 (m), 1231 (br, s), 1143 (m), 1078 (m), 1043 (m), 855 (w), 749

(s) cm-1. HRMS: calculado para C29H43NO3SNa+ [M+Na]: 508,2855; Encontrado: 508,2850.

Ejemplo 9: 24-Fenil sulfoximina 1-Nor vitamina-D3 I(m)

Esquema 28

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (+)-IV(c) (Kutner, A. et al. Bioorg. Chem. 1995, 23, 22-32) y la cetona (+)-III(a) con anillo CD se secaron azeotrópicamente con benceno y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (+)-IV(c) (76 mg, 0,13 mmoles) en argón se disolvió en 0,8 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,1 M en un matraz de 10 ml secado a la llama, y el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos n-BuLi (83 μl, 0,13 mmoles, disolución 1,6 M en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la cetona (+)-III(a) con anillo CD (14 mg, 0,040 mmoles) disuelta en 1 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 15 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado.

Se disolvió el producto acoplado (15 mg, 0,021 mmoles) en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética, en 1,0 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,02

M. A esta disolución bien agitada se añadieron 87 ml de HF (2,1 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a temperatura ambiente en la oscuridad durante 2 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (5 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío, para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina proporcionó 10,6 mg de (+)-I(m) con un rendimiento del 88%. Este análogo se purificó después mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 10% de etanol en hexanos para proporcionar 3,0 mg de (+)-I(m) con un rendimiento del 28%. El tiempo de retención para (+)-I(m) fue 31,47 min.

Datos para (+)-I(m): [a]D = +36,6 (c = 0,53, CHCl3) RMN 1H (CDCl3 400 MHz): δ 7,98-7,96 (m, 2H), 7,64-7,53 (m, 3H), 6,21 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 6,00 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,05-5,04 (m, 1H), 4,80 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 3,96-3,91 (m, 1H), 3,20 (ddd, 1H, J = 4,4, 12,4, 13,6 Hz), 3,04 (ddd, 1H, J = 4,4, 11,2, 13,6 Hz), 2,80 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,4 Hz), 2,56 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 13,2 Hz), 2,43-2,36 (m, 1H), 2,33 (dd, 1H, J = 7,6 Hz, J = 13,2 Hz), 2,20-2,13 (m, 1H), 1,96-190 (m, 4H), 1,82-1,42 (m, 10H), 1,28-1,16 (m, 4H), 0,87 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 145,0, 142,0, 141,6, 135,3, 132,9, 129,1, 128,3, 122,2, 117,7, 112,4, 69,2, 56,1, 55,7, 54,8, 45,9, 45,7, 40,3, 35,2, 35,0, 31,9, 28,8, 28,7, 27,3, 23,4, 22,1, 18,5, 11,9. IR: 3295 (m, br), 2931 (s), 2860 (m), 1443 (m), 1213 (br, s), 1096 (m), 1061 (w), 984 (m), 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C29R41NO2SNa+ [M+Na]:

5 490,2750; Encontrado: 490,2723. UV (MeOH) λmax 265 nm (ε 15.648).

Ejemplo 10: Procedimiento general para la preparación de los compuestos de la fórmula V, en los que R7 es hidrógeno y junto con R5 forma un anillo ciclopropílico.

10 Esquema 29

4. desproteger

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un

15 condensador de reflujo, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con (±)-S-ciclopropil-S-fenil sulfoximina VII(c) (100 mg, 0,55 mmoles), y se disolvió en 1,1 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución 0,5 M. Después, el matraz se colocó en un baño de aceite a 60ºC. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos Et2NTMS (125 μl, 0,66 mmoles) vía una jeringuilla. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se dejó agitar a 60ºC durante aprox. 30 minutos. Cuando la TLC mostró el consumo total del material de partida, el matraz

20 se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla se concentró a vacío para dar el producto N-trimetilsilil sulfoximina, esencialmente puro según se determina mediante RMN 1H. Éste se usó sin purificación adicional.

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la N-trimetilsilil sulfoximina apropiada (0,163 mg, 0,55 mmoles) disuelta en 25 2,8 ml de THF recientemente destilado y 0,28 ml de HMPA. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,34 ml de n-BuLi (0,55 mmoles, 1,6 M disolución en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló un color amarillo pálido. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales, y después se calentó hasta 0ºC durante 10 min. El matraz se volvió a enfriar hasta -78ºC. Mientras tanto, un matraz con forma de pera de 10 ml secado a la llama, equipado con un 30 tabique junto con un balón de Ar, se cargó con yoduro de (+)-VI (80 mg, 0,18 mmoles) disuelto en 0,5 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de yoduro de (+)-VI se transfirió al matraz que contiene la sulfoximina litiada a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y se agitó a esta temperatura durante alrededor de 10 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. 35 La reacción se paralizó mediante adición de 2 ml de HCl 3N acuoso, y se dejó agitar durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con éter dietílico, y se basificó usando NaOH 1H acuoso hasta que se alcanzó un pH de alrededor de 9, y después se enjuagó en un embudo de separación con éter dietílico. La mezcla se extrajo con éter dietílico (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto V(c) protegido con TMS, que

40 se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida.

Ejemplo 11: Procedimiento general para la preparación de cetonas III con anillo C,D, en las que R7 es hidrógeno y junto con R5 forma un anillo ciclopropílico.

45 Esquema 30

Método general de desprotección

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con el alcohol V apropiado protegido con trietilsililo, el cual se disolvió en 1,8 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. El matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,75 ml de TBAF (disolución al 49%), dando como resultado una disolución amarilla. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó a esta temperatura durante alrededor de 4 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó directamente mediante cromatografía en columna.

Método general de oxidación

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con el alcohol apropiado (50 mg, 0,133 mmoles) y se disolvió en 3,3 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (105 mg, 0,279 mmoles) y 66 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna.

Ejemplo 11 (a) Preparación de cetona III(c) con anillo CD:

Esquema 31

Se preparó una disolución del alcohol protegido con trietilsililo (+)-V(c) en 1,8 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. El matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 0,75 ml de HF (disolución acuosa al 49%), dando como resultado una disolución amarilla. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente, y después se agitó a esta temperatura durante alrededor de 4 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con acetato de etilo al 50% proporcionó 50,0 mg del alcohol correspondiente, con un rendimiento del 73%. Datos producidos: RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,97-7,95 (m, 4H), 7,63-7,58 (m, 2H), 7,55-7,50 (m, 4H), 4,03 (br, 2H), 2,14 (t, 4H, J = 11,2 Hz), 1,90 (d, 2H, J = 13,2 Hz), 1,78-1,20 (m, 22H), 1,08-0,88 (m, 12H), 0,86 (s, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,78-0,70 (m, 2H), 0,71 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,68 (d, 3H, J = 6,4 Hz). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 141,2, 140,50, 132,77, 132,70, 128,97, 128,88, 128,74, 69,05, 57,06, 56,97, 52,40, 41,93, 40,26, 40,20, 37,56, 37,13, 33,46, 33,26, 27,18, 27,13, 22,38, 18,78, 17,28, 13,48, 12,41, 12,27, 12,20, 11,67. IR (película delgada) 3448 (br, w), 3330 (br, m), 3271 (m), 2931 (s), 2860 (s), 1443 (m), 1219 (br, s), 1067 (sh, m), 984 (s),967 (m), 755 (s) cm-1. HRMS: calculado para C22H33NO2SNa+ [M+Na]: 398,2124 Encontrado: 398,2121.

El alcohol correspondiente (50 mg, 0,133 mmoles) se disolvió en 3,3 ml de CH2Cl2 recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,04 M. Después, a esta disolución se añadieron en una porción a temperatura ambiente PDC (105 mg, 0,279 mmoles) y 66 mg de Celite secada en estufa. La mezcla resultante se dejó agitar a la temperatura ambiente durante alrededor de 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía en columna. La cromatografía en columna ultrarrápida eluída con acetato de etilo al 50% proporcionó la cetona III(c) como una mezcla (~1:1) de diastereoisómeros como un aceite viscoso, con un rendimiento del 85%. Datos para III(c): RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,99-7,94 (m, 4H), 7,65-7,60 (m, 2H), 7,57-7,54 (m, 4H), 2,8 (br, 2H), 2,39-2,34 (m, 2H), 2,29-2,14 (m, 4H), 2,04-1,94 (m, 4H), 1,92-1,58 (m, 10H), 1,54-1,35 (m, 6H), 1,28-1,20 (m 2H), 1,12-0,91 (m, 6H), 0,81 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,77 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,79-0,69 (m, 4H), 0,58 (s, 3H), 0,55 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 211,65, 139,98, 133,10, 133,02, 129,02, 128,92, 61,75, 57,09, 57,00, 49,85, 40,15, 38,81, 38,78, 37,82, 37,36, 33,62, 27,49, 27,43, 23,89, 19,00, 18,94, 12,71, 12,52, 12,49, 12,44, 11,83. IR (película delgada) 3278 (m), 2957 (s), 2874 (m), 1708 (s), 1445 (sh, m), 1378 (w), 1220 (br, s), 1109 (w), 968 (m), 749 (m) cm-1. HRMS: calculado para C22H31NO2SNa+ [M+Na]: 396,1967 Encontrado: 396,1955.

Esquema 32

Antes de la reacción, el óxido de fosfina (±)-IV(a) (Posner, G. H. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3280-3287) y la cetona con anillo CD (+)-III(c) se secaron azeotrópicamente con benceno, y se dejaron a vacío durante 48 h. El óxido de fosfina (±)-IV(a) (63,5 mg, 0,11 mmoles) en argón se disolvió en 1,1 ml de THF recientemente destilado para dar una disolución aprox. 0,1 M en un matraz de 10 ml secado a la llama, y el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadió gota a gota durante varios minutos n-BuLi (82 μl, 0,11 mmoles, disolución 1,33 M en hexanos), durante cuyo tiempo se desarrolló y persistió un color rojo intenso. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 10 minutos adicionales. Mientras tanto, un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con la cetona (+)-III(c) con anillo CD (15 mg, 0,04 mmoles) disuelta en 1 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de cetona con anillo CD se transfirió suavemente gota a gota al matraz que contiene el anión de óxido de fosfina a -78ºC vía una cánula durante varios minutos. Después de que la adición estuvo terminada, el color rojo intenso persistió, y la mezcla se dejó agitar a 78ºC durante aprox. 8 horas, durante cuyo tiempo se comprobó visualmente. Tras la observación del color amarillo claro, la reacción se paralizó a -78ºC mediante adición de 5 ml de tampón de pH 7, y se dejó llegar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna eluída con acetato de etilo al 50% en hexanos en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar el producto acoplado.

El producto acoplado (15 mg, 0,02 mmoles) se disolvió en un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón equipado con una barra agitadora magnética en 1,0 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,02

M. A esta disolución bien agitada se añadieron 83 μl de HF (2,0 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a la temperatura ambiente en la oscuridad durante 2 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se diluyó con éter (25 ml), y se añadió disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (5 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 25 ml) y con disolución de salmuera (1 x 25 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna.

La cromatografía en columna ultrarrápida se eluyó con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina para proporcionar 8,2 mg de una mezcla de diastereómeros (+)-I(n) y (+)-I(o) con un rendimiento del 79% y en una relación de 1:1, respectivamente. La mezcla diastereomérica se separó entonces mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,0 ml/min.) eluída con 7% de etanol en hexanos para proporcionar 1,2 mg de (+)-I(n) y 1,9 mg de (+)-I(o) con rendimientos de 30% y 48%, respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(n) fue 123,3 min., y para (+)-I(o) fue 137,5 min.

Datos para (+)-I(n): [a]D = +8,5 (c = 0,08, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,97-7,94 (m, 2H), 7,62-7,58 (m, 1H), 7,55-7,51 (m, 2H), 6,36 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,33 (m, 1H), 4,99 (br, 1H), 4,45-4,41 (m, 1H), 4,26-4,20 (m, 1H), 2,80 (dd, 1H, J = 4,4 Hz, J = 12,8 Hz), 2,59 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,50 (s, 1H), 2,31 (dd, 1H, J = 6,8, 13,6 Hz), 2,15 (d, 1H, J = 14,4 Hz), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,95-1,88 (m, 4H), 1,77-1,59 (m, 5H), 1,48-1,20 (m, 7H), 1,11-0,86 (m, 2H), 0,75 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 0,75-0,72 (m, 2H), 0,46 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 147,62, 142,74, 141,50, 133,06, 129,38, 128,77, 128,46, 124,87, 117,17, 111,76, 70,82, 66,84, 57,05, 56,19, 54,1, 45,93, 45,24, 42,88, 40,33, 37,80, 34,11, 28,96, 27,61, 23,45, 22,21,19,13, 12,29 (2C), 12,01. IR: 3330 (br, m), 2931 (s), 2872 (m), 1443 (m), 1219 (s), 1072 (m), 961 (sh, s), 890 (w) 749 (s) cm-1. HRMS: calculado para C31H43NO3SNa+ [M+Na]: 532,2855; Encontrado: 532,2826. UV (MeOH) λmax 265 nm (ε 9.024).

Datos para (+)-I(o): [a]D = +37,7 (c = 0,12, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,98-7,95 (m, 2H), 7,63-7,59 (m, 1H), 7,56-7,52 (m, 2H), 6,36 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,99 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 5,33 (m, 1H), 4,99-4,98 (br, m, 1H), 4,45-4,41 (m, 1H), 4,26-4,17 (m, 1H), 2,79 (dd, 1H, J = 4,0 Hz, J = 12,4 Hz), 2,59 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 13,6 Hz), 2,54 (s, 1H), 2,31 (dd, 1H, J = 6,4, 13,6 Hz), 2,13 (d, 1H, J = 14,8 Hz), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,95-1,88 (m, 4H), 1,771,59 (m, 5H), 1,48-1,20 (m, 7H), 1,11-0,86 (m, 2H), 0,73 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,76-0,70 (m, 2H), 0,49 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 147,59, 142,70, 140,75, 133,08, 129,47, 128,78, 128,55, 124,84, 117,18, 111,79, 70,80, 66,81, 56,94, 56,18, 45,92, 45,22, 42,85, 40,32, 40,29, 37,40, 34,13, 28,95, 27,66, 23,44, 22,22, 19,11, 12,41, 12,03, 11,74. IR: 3334 (br, m), 2936 (s), 2872 (m), 1445 (m), 1284 (s), 1215 (br, m), 1119 (m), 1053 (br, s), 978 (w) 753 (s) cm-1. HRMS: calculado para C31H43NO3SNa+ [M+Na]: 532,2855; Encontrado: 532,2860. UV (MeOH) λmax 265 nm (ε 15.684).

Ejemplo 13: p-Fluorofenilmetil sulfoximina VII(d) protegida con TBSCl

Un matraz de recuperación de 25 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique, un embudo de adición junto con un balón de Ar, se cargó con sulfuro de 4-fluorofenilmetilo (1 g, 7 mmoles), y se disolvió en 14 ml de CH2Cl2 recientemente destilado. Después, el matraz se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A esta disolución se añadió gota a gota mCPBA (1,9 g 7,7 mmoles, 70%) como una disolución en 5 ml de CH2Cl2, vía un embudo de adición, durante varios minutos. Esta mezcla se dejó agitar a 0ºC durante 2 horas adicionales. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La reacción se paralizó mediante adición de agua, y después se enjuagó en un embudo de separación con 50 ml de CH2Cl2. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolución sat. de NaHCO3 (1 x 10 ml), disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluída en primer lugar con 100% de acetato de etilo, produciendo el sulfóxido correspondiente como un aceite con un rendimiento del 90% (1 g, 6,3 mmoles).

Un matraz de recuperación secado a la llama de 25 ml, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique, y un embudo de adición junto con un balón de Ar, se cargó con el sulfóxido (1 g, 6,3 mmoles) y se disolvió en 6,3 ml de CHCl3. Después, se añadió al matraz en una porción (0,45 g, 6,9 mmoles) de NaN3. Mientras tanto, se cargaron 1,53 ml de H2SO4 con. en el embudo de adición, y se dejó gotear en el matraz de reacción a 0ºC durante varios minutos. El embudo de adición se sustituyó entonces con un condensador de reflujo, y el matraz se colocó en un baño de aceite y se calentó hasta 45ºC durante toda la noche. La TLC mostró el consumo total del material de partida. El matraz de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y la reacción se paralizó mediante adición de agua, y después se enjuagó en un embudo de separación con 50 ml de CHCl3. La mezcla se extrajo con CHCl3 (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 100% de acetato de etilo, produciendo 0,81 g de sulfoximina VII(d) como un sólido, con un rendimiento del 74%. Ésta se recristalizó en acetato de etilo. Datos producidos para p-fluorofenilmetil sulfoximina: P.f. 93-94ºC. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 8,06-8,02 (m, 2H), 7,26-7,21 (m, 2H), 3,12 (s, 3H), 2,76 (br, 1H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 165,37 (d, J = 253,7 Hz),139,4 (d, J = 2,7 Hz), 130,5 (d, J = 9,1 Hz), 116,3 (d, J = 22,8 Hz), 46,3. RMN 19F (CDCl3, 375 MHz): δ - 105,60-105,7 (m). IR: 3268 (m), 3102 (w), 2928 (w), 1589 (s), 1493 (s), 1404 (w), 1321 (w), 1224 (s), 1094 (s), 1021 (m), 1004 (s), 946 (m), 840 (m), 817 (m), 753 (m) cm-1. HRMS: calc. para C7H8FNOSNa+ [M+Na]: 196,0202; encontrado: 196,0201.

Un matraz de recuperación de 5 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con p-fluorofenilmetil sulfoximina (0,1 g, 0,58 mmoles), y se disolvió en 1,1 ml de piridina anhidra para dar una disolución aprox. 0,5 M. A esta disolución se añadió TBSCl (0,1 g 0,69 mmoles) en forma pura en una porción. Esta mezcla se dejó agitar a la temperatura ambiente durante 12 horas. La TLC mostró el consumo total del material de partida. La reacción se paralizó mediante adición de agua, y después se enjuagó en un embudo de separación con 25 ml de acetato de etilo. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 10% de acetato de etilo produciendo la sulfoximina VII(d) protegida con TBS como un aceite con un rendimiento del 90% (0,15 g, 0,52 mmoles). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): δ 7,97-7,93 (m, 2H), 7,207,14 (m, 2H), 2,99 (s, 3H), 0,91 (s, 9H), 005 (s, 3H), 0,04 (s, 3H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz): δ 164,9 (d, J = 252,9 Hz), 141,2 (d, J = 3,0 Hz), 129,6 (d, J = 8,1 Hz), 116,0 (d, J = 22,0 Hz), 49,7, 25,9, 17,9, -2,57. RMN 19F (CDCl3, 375 MHz): δ -107,3-107,4 (m). IR: 2954 (s), 2958 (s), 2885 (s), 2855 (s), 1589 (m), 1493 (m), 1322 (s), 1302 (s), 1284 (s),

1250 (m), 1163 (s), 1150 (s); 1090 (w), 1006 (w), 953 (w), 834 (s), 814 (m), 774 (s) cm-1. HRMS: calc. para C13H22FNOSSiNa+ [M+Na]: 310,1067; encontrado: 310,1043.

Esquema 34

Un matraz de recuperación de 5 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con (±)-VII(a) (8,4 mg, 0,029 mmoles), y se disolvió en 0,5 ml de THF recientemente destilado. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadieron gota a gota durante varios minutos 19 μl de n-BuLi (0,03 mmoles, disolución 1,6 M en hexanos), seguido de la adición de 50 μl de HMPA, dando como resultado un color amarillo. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales. Mientras tanto, un matraz con forma de pera de 5 ml secado a la llama, equipado con un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con yoduro de (+)-IX (5 mg, 0,0073 mmoles), se disolvió en 0,5 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de yoduro de (+)-IX se transfirió al matraz que contiene la sulfoximina litiada a -78ºC vía una cánula durante unos pocos minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se agitó a -78ºC durante alrededor de 4-5 horas. La TLC mostró el consumo casi total de (+)-IX. La reacción se paralizó mediante adición de 2 ml de tampón de pH 7, y después se enjuagó en un embudo de separación con acetato de etilo. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 10 ml) y con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto acoplado, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluída en primer lugar con 100 ml de 100% de hexanos, y después 10% de acetato de etilo en hexanos.

Un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética junto con una tapa, se cargó con el producto acoplado (3,4 mg, 0,004 mmoles), y se disolvió en 0,4 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,01 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,16 μl de HF (0,44 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a la temperatura ambiente en la oscuridad durante 4 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (10 ml), y se añadió disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo, y se extrajo con acetato de etilo (4 x 10 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 10 ml), con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluída con 99% de acetato de etilo en presencia de 1% de trietilamina, para proporcionar 1,7 mg de (+)-I(p) y (+)-I(q) con un rendimiento del 84%. Esto se purificó adicionalmente mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 13% de etanol en hexanos para proporcionar 0,51 mg de (+)-I(p) y 0,37 mg de (+)-I(q) con rendimientos del 19% y 26%, respectivamente. El tiempo de retención para (+)-I(p) fue 78,0 min. y para (+)-I(q) fue 61,0 min. Datos para (+)-I(p): [a]D = +12,3 (c = 0,09, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 300 MHz): δ 8,00-7,95 (m, 2H), 7,257,20 (m, 2H), 6,36 (d, 1H, J = 11,22 Hz), 5,99 (d, 1H, J = 11,22 Hz), 5,32 (br, s, 1H), 4,98 (br, s, 1H), 4,44-4,30 (m, 1H), 4,23-4,22 (m, 1H), 3,23-3,15 (m, 1H), 3,07-2,97 (m, 1H), 2,66 (br, 1H), 2,60 (dd, 1H, J = 3,39 Hz, 13,26 Hz), 2,30 (dd, 1H, J = 5,61 Hz, 13,29 Hz), 2,04-1,88 (m, 4H), 1,81-1,44 (m, 11H), 1,30-1,12 (m, 4H), 0,88 (d, 3H, J = 6,33 Hz), 0,50 (s, 3H). RMN 19F (CDCl3, 375 MHz): δ -105,75-105,78 (m). IR (pura) 3299 (m), 2926 (s), 2869 (s), 1587 (m), 1491 (w), 1446 (w), 11401 (w), 1350 (m), 1220 (s), 1016 (w), 1057 (w), 994 (m), 836 (w), 752 (s) cm-1. HRMS: calc. para C29H40FNO3SNa+ [M+Na]: 524,2605; encontrado: 524,2610. UV (MeOH) λmax 263 nm (ε 11.096). Datos para (+)-I(q): [a]D = +22,6 (c = 0,05, CHCl3) RMN 1H (CDCl3, 300 MHz): δ 8,00-7,95 (m, 2H), 7,25-7,19 (m, 2H), 6,36 (d, 1H, J = 11,22 Hz), 5,99 (d, 1H, J = 11,31 Hz), 5,32 (br, s, 1H), 4,98 (br, s, 1H), 4,45-4,40 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 1H), 3,22-3,00 (m, 2H), 2,80 (dd, 1H, J = 3,81 Hz, 11,82 Hz), 2,67 (br, 1H), 2,59 (dd, 1H, J = 3,48 Hz, 13,38 Hz), 2,31 (dd, 1H, J = 6,36 Hz, 13,44 Hz), 2,06-1,87 (m, 3H), 1,55-1,41 (m, 11H), 1,29-1,15 (m, 4H), 0,88 (d, 3H, J = 6,39 Hz), 0,50 (s, 3H). RMN 19F (CDCl3, 375 MHz): δ -105,72-105,78 (m). IR (pura) 3294 (m), 2921 (s), 2866 (m), 1583 (m), 1490 (m), 1348 (m), 1222 (s), 1096 (w), 1052 (m), 997 (m), 838 (w), 750 (s) cm-1. HRMS: calc. para C29H40FNO3SNa+ [M+Na]: 524,2605; encontrado: 524,2619. UV (MeOH) λmax 263 nm (ε 10.895).

Ejemplo 15: Preparación de sulfoximina IX

Esquema 35

Un matraz de recuperación de 10 ml secado a la llama, equipado con una barra agitadora magnética, un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con (+)-S-metil-S-fenil sulfoximina (43 mg, 0,1595 mmoles), y se disolvió en 1,5 ml de THF recientemente destilado. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadieron gota a gota 0,16 ml de t-BuLi (0,1755, disolución 1,1 M en pentano) durante varios minutos, dando como resultado un color amarillo. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales. A esta disolución se añadió clorofosfato de dietilo (41,3 mg, 35 μl, 0,2393 mmoles). Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se agitó a -78ºC durante alrededor de 1 hora. La TLC mostró que el matarial de partida se consumió totalmente. La reacción se paralizó mediante adición de agua (5 ml), y después la mezcla se enjuagó en un embudo de separación extraída con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 10 ml), con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto. El bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida eluída con una mezcla

9:1 de acetato de etilo:hexanos para dar 34 mg de (+)-IX como un aceite con un rendimiento del 53%. Datos para (+)-IX: [a]D22= +40,3 (c 0,55, CHCl3). RMN 1H (CDCl3, 300 MHz): δ 7,99-7,97 (m, 2H), 7,58-7,48 (m, 3H), 4,13-4,02 (m, 4H), 3,73 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, 15,2 Hz), 3,68 (dd, 1H, J = 3,6 Hz, J = 15,2 Hz), 1,28-1,21 (m, 6H), 0,91 (s, 9H), 0,05 (s, 6H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) δ 144,46, 132,47, 128,55, 127,83, 62,74 (d, J = 6,1 Hz), 62,55, (d, J = 6,1 Hz), 58,02 (d, J = 135,8 Hz), 25,85, 17,96, 16,22 (d, J = 2,1 Hz), 16,16 (d, J = 2,3 Hz), -2,63, -2,65 ppm. IR (pura) 3066 (w), 2955 (m), 2929 (m), 2855 (m), 1473 (m), 1446 (m), 1391 (m), 1361 (m), 1320 (m), 1300 (s), 1253 (s), 1167 (s), 1052 (s), 1025 (s), 974 (m), 834 (s), 778 (m), 689 (m) cm-1. HRMS: calc. para C17H32NO4PSSiNa+ [M+Na]: 443,1451; encontrado: 428,1435.

Esquema 36

Un matraz de recuperación de 5 ml secado a la llama equipado con una barra agitadora magnética, y un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con (±)-IX (4,2 mg, 0,01 mmoles) y se disolvió en 0,5 ml de THF recientemente destilado. Después, el matraz se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. A esta disolución se añadieron gota a gota 13 μl de t-BuOK (0,013 mmoles, disolución 1,0 M en THF) durante varios minutos, dando como resultado un color amarillo. Esta mezcla se dejó agitar a -78ºC durante 30 min. adicionales. Mientras tanto, un matraz con forma de pera de 5 ml secado a la llama, equipado con un tabique junto con un balón de Ar, se cargó con VIII (5,0 mg, 0,0087 mmoles) disuelta en 1,0 ml de THF recientemente destilado, y se enfrió hasta -78ºC en un baño de isopropanol/hielo seco. La disolución de VIII se transfirió al matraz que contiene el anión de (±)-IX a -78ºC vía una cánula, durante unos pocos minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se agitó a 78ºC durante alrededor de 1,0 horas. Después, el matraz se calentó hasta la temperatura ambiente, y se dejó agitar durante 1,5 horas. La TLC mostró el consumo del material de partida. La reacción se paralizó mediante adición de agua (5 ml), y después la mezcla se enjuagó en un embudo de separación extraída con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 10 ml), con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto acoplado. El producto acoplado se purificó mediante cromatografía ultrarrápida eluída con 10% de acetato de etilo en hexanos para dar 5,4 mg con un rendimiento del 71%.

Un vial de polipropileno de 5 ml purgado con argón, equipado con una barra agitadora magnética junto con una tapa, se cargó con el producto acoplado (5,0 mg, 0,006 mmoles), y se disolvió en 0,6 ml de acetonitrilo anhidro para dar una disolución aprox. 0,01 M. A esta disolución bien agitada se añadieron 0,25 μl de HF (0,6 mmoles, disolución acuosa al 49%) vía una jeringuilla a temperatura ambiente, y la mezcla se dejó agitar entonces a la temperatura 5 ambiente en la oscuridad durante 4 horas. La TLC mostró la terminación de la reacción. Esta mezcla de reacción se diluyó con éter (10 ml), y se añadió una disolución saturada de NaHCO3 hasta que no se liberó más dióxido de carbono. La mezcla de reacción se enjuagó después en un embudo de separación con acetato de etilo y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos combinados se lavaron con agua (1 x 10 ml), con disolución de salmuera (1 x 10 ml), se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el producto 10 bruto que se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice, para proporcionar 2,3 mg de una mezcla de (+)-I(r) y (+)-I(s) con un rendimiento del 79%. Ésta se purificó adicionalmente mediante HPLC usando una columna Chiralcel OJ (semipreparativa (1 x 25 cm), caudal = 2,5 ml/min.) eluída con 17% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar 800 μg de (+)-I(r) y 540 μg de (+)-I(r) con rendimientos de 28% y 19%, respectivamente. Datos para (+)-I (r): RMN 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 7,96-7,93 (m, 2H), 7,61-7,48 (m, 3H), 6,83 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 15,0 Hz),

15 6,35 (d, 1H, J = 12,60 Hz), 6,31 (d, 1H, J = 15,00 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 10,83 Hz), 5,31 (s, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,484,38 (m, 1H), 4,28-4,18 (m, 1H), 2,84-2,79 (m, 2H), 2,62-2,57 (m, 1H), 2,34-2,28 (m, 2H) 2,06-1,88 (m, 4H), 1,691,33 (m, 7H), 1,33-1,22 (m, 4H), 1,11 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,52 (s, 3H). HRMS: calc. para C29H39NO3SNa+ [M+Na]: 504,2543; encontrado: 504,2530. UV (MeOH) λmax 261 nm (ε 12.799).

20 Datos para (+)-I(r): RMN 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 7,96-7,94 (m, 2H), 7,61-7,48 (m, 3H), 6,83 (dd, 1H, J = 89,8 Hz, J = 15,0 Hz), 6,35 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,31 (d, 1H, J = 15,00 Hz), 5,98 (d, 1H, J = 11,16 Hz), 5,31 (s, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,47-4,38 (m, 1H), 4,28-4,18 (m, 1H), 2,81-2,76 (m, 2H), 2,60-2,57 (m, 1H), 2,34-2,25 (m, 2H), 2,06-1,87 (m, 4H), 1,62-1,37 (m, 7H), 1,33-1,25 (m, 4H), 0,99 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,42 (s, 3H). HRMS: calc. para C29H39NO3SNa+ [M+Na]: 504,2543; encontrado: 504,2543. UV (MeOH) λmax 265 nm (ε 7.718).

30 De una manera similar, el compuesto (R)-I(t) se puede preparar a partir de (R)-VII(a) protegido con TBS.

Ejemplo 18: Preparación propuesta del compuesto (S)-I(t) - Método B

De una manera similar, el compuesto (R)-I(t) se puede preparar a partir de (R)-VII(e) protegido con TBS.

De una manera similar, el compuesto (R)-I(u) se puede preparar a partir de (R)-VII(f).

5 De una manera similar, el compuesto (R)-I(v) se puede preparar a partir de (R)-VII(f).

Ejemplo 21: Ensayo de la enzima CYP24 (células HPK1A-ras inducidas)

(i) Material y reactivos:

1,25(OH)2D3 10-5 M (Sigma, St. Louis, MO);

15 La preparación de una disolución de trabajo 10-5 M es como sigue:

Disuélvase 1 mg de 1,25(OH)2D3 en 480 μl de isopropanol para obtener una disolución madre 5X10-3 M. Almacénese a -70ºC hasta que se necesite. Añádase una alícuota de 1μl de disolución madre 5X10-3 M de 1,25(OH)2D3 a 499 μl de isopropanol para obtener una disolución de trabajo de 1,25(OH)2D3 10-5 M. Almacénese a

20 20ºC hasta que se necesite.

[3H]-1,25(OH)2D3 16.000 cpm/μl, 8 μM (Perkin Elmer, Boston, MA) Células HPK1A-ras (obtenidas de Dr. Glenville Jones, Queens University, Kingston, Ontario, Canadá) Placa de 48 pocillos

25 Metanol Diclorometano KCl saturada: KCl 30 g, H2O 400 ml

(ii) Procedimiento: 30

1. Inducción de células HPK1A-ras (el día anterior al ensayo)

Cuando las células HPK1A-ras fueron confluentes entre el 80 y el 90%, se añadió 1 μl de 1,25(OH)2D3 10-5 M a 1 ml de medio en la placa (la concentración final es de 10-8 M). 35

2. Preparación de la suspensión celular Después de 18 a 20 horas de inducción, se eliminó el medio y las células se lavaron dos veces con PBS. A

continuación las células se tripsinizaron en la placa, se centrifugaron (2.000 rpm, 5 min) y se puso en suspensión el pelete de las células en medio DMEM+1% de BSA.

Se hizo el recuento de células y se ajustó la densidad de las células a 250.000/150 μl, se añadieron 150 μl de 5 suspensión celular a cada pocillo en una placa de 48 pocillos (incluyendo 3 pocillos como control sin células, y 3 pocillos de células sin fármaco o inhibidor como controles).

3. Se añadieron 25 μl de cetoconazol (concentración final 10-5 M, 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M) o fármacos (concentración

final 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M) en cada pocillo designado. La placa se mantuvo a 37ºC durante 10 min. 10

4. Preparación del sustrato

Para cada ml requerido, se añadieron 872 μl de medio DMEM+1% de BSA, 20 μl de 3H-1,25(OH)2D3 y 8 μl de DPPD 100 mM a un tubo, y se sometió a vórtice. 15

5. Incubación

Se añaden 25 μl de sustrato a cada pocillo, se incuba la placa a 37ºC durante 2 horas. Se añaden 25 μl de sustrato para el recuento de la placa (2 pocillos) como recuento total. 20

6. Extracción de lípidos y recuento

Se añaden 500 μl de metanol a cada pocillo para interrumpir la reacción, y se transfieren a un tubo. Se añaden 250 μl de diclorometano, y se somete a vórtice. 25 Se añaden 250 μl de diclorometano y 250 μl de KCl saturado, y se somete a vórtice. Se centrifuga a 4.000 rpm durante 5 min.

Se transfieren 100 μl de la fase acuosa (fase superior) a la placa de plástico de recuento. Se añaden 600 μl de fluido de centelleo a cada pocillo. Se hace el recuento de la placa en el contador de centelleo. 30

7. Cálculo de la actividad enzimática

La CPM del control celular tras restar la CPM del control sin células (NCC) fue 100% de actividad enzimática.

35 Actividad enzimática = (CPM en el pocillo con los compuestos de ensayo - CPM en el pocillo de NCC)/(CPM en el control celular - CPM en el pocillos de NCC) * 100%

Dilución de cetoconazol Disolución madre 10-2 M 40

Concentración (final): De la etapa previa (μl) DMEM + 1% BSA (μl) Concentración (real)

10-5 M: 4 496 8×10-5 M

10-6 M: 12,5 112,5 8×10-6 M

10-7 M: 12,5 112,5 8×10-7 M

10-8 M: 12,5 112,5 8×10-8 M

Dilución de los compuestos de ensayo Disolución madre 10-3 M

10-6 M: 4 496 8×10-6 M

10-7 M: 12,5 112,5 8×10-7 M

10-8 M: 12,5 112,5 8×10-8 M

10-9 M: 12,5 112,5 8×10-9 M

(iii) Los resultados se muestran en la Tabla 1

(iv) Referencias:

50 Ray S, Ray R, Holick M. Metabolism of 3H-1alpha, 25-dihydroxy vitamin D3 in the cultured human keratinocytes (1995) 59:117-122

Dilworth F J, Scott I, Green A, Strugnell S, Guo Y D, Roberts E A, Kremer R, Calverley, M J, Makin H L J, Jones G. Different mechanisms of hydroxylation site selection by liver and kidney cytochrome P450 species (CYP27 and 55 CYP24) involved in Vitamin D metabolism. (1995) J Biochem 270(28):16766-16774.

Ejemplo 22: Ensayo de enzima CYP24 (usando estirpe celular estable – células V79-CYP24)

(i): Material y reactivos

1a,25(OH)2D3 1 mM reconstituido en isopropanol Substratos (1 mM) reconstituidos en isopropanol Células V79-CYP24 Medio DMEM suplementado con higromicina y 10 % de suero fetal bovino Medio DMEM +1% BSA DPPD Placa de 48 pocillos Metanol Diclorometano KCl saturado: KCl 30g, H2O 400 ml Quetoconazol

(ii): Procedimiento:

1.: Preparación de la suspensión celular

En el día del ensayo, lávese la monocapa de células V79-CYP24 una vez con 1X tampón de PBS y después tripsinícese durante 5 min a temperatura ambiente (aprox. 22ºC). Añádase 1 X PBS. Recójanse las células en un tubo, centrifúguense las células (500 X g, 5 min) y resuspéndanse en medio DMEM +1% BSA. Recuéntense las células y ajústese la densidad hasta 250.000 células/ 150 μl (1,67 millones/1 ml).

2.: Cultivo de las células en placa

Añádanse 150 μl de suspensión celular a pocillos marcados apropiadamente de una placa de 48 pocillos. Incúbese la placa durante 30 minutos a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2 para la adherencia de las células a los pocillos.

3.: Adición de compuesto

Añádanse 25 μl de inhibidor (10-6 a 10-9 M) y, después de 10 min, añádanse 25 μl de sustrato [3H-1β]-1a,25(OH)2D3 (20 nM) durante 2 horas a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2. Tanto el inhibidor como el sustrato se prepararon en medio DMEM con 1% de BSA en ausencia y en presencia de 100 μM de DPPD.

4.: Extracción de lípido y recuento

Añádanse 500 μl de metanol para detener la reacción. Transfiérase a un tubo. Añádanse 250 μl de diclorometano y sométase a vórtice. Añádanse 250 μl de diclorometano y 250 μl de KCl saturado y sométase a vórtice. Centrifúguese a 4000 rpm durante 5 min. Se mezclaron alícuotas de 100 μl de fracción acuosa por triplicado con 600 μl de fluido de centelleo y se midió la radioactividad usando un contador de centelleo. Todos los valores se normalizaron con respecto al valor de fondo.

(iii) Resultados. Mostrados en la Tabla 1

(iv) Referencia.

1. Solicitud de patente PCT Serie No. PCT/CA03/00620 (WO 03/093459)

Ejemplo 23: Ensayo de la enzima CYP27A1

(A): Procedimiento: Como se describe en: Dilworth F. J., Black S. M., Guo Y. D., Miller W. L., Jones G. Construction of a P450c27 fusion enzyme: a useful tool

for analysis of vitamin D3 25-hydroxylase (1996) Biochem. J. 320:267-271 Sawada N., Sakaki T., Ohta M., Inouye K. Metabolism of vitamin D (3) by human CYP27A1 (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 273(3):977-84

(B): Resultados:

Véase la Tabla 1. 5 Ejemplo 24: Ensayo de unión de VDR

(A) Reactivos y materiales

1. 9,4 pmoles/μl de VDR (humano, recombinante, Biomol). 10

2.: [3H]-1,25(OH)2D3 en etanol

3.: 1,25(OH)2D3 en etanol

15 4. TEK300 Tris-HCl 50 mM EDTA 1,5 mM KCl 300 mM Ajústese el pH hasta 7,4 (25ºC)

5. TEDK300 TEK300 DTT (ditiotreitol) 10 mM (MW 154,24)

25 6. Tampón Tris

22,50 g de Tris-HCl 500 ml de H2O 13,25 g de Tris-base

30 500 ml de H2O Manténgase a 4ºC

7. Dextrano-T70 (peso molecular 70.000) Pharmacia

: 35 8. Carbón vegetal (carbón decolorante neutro, Norit) Fisher Scientific

9. Gelatina (G-2625 Sigma)

(ii): Preparación de reactivos 40

1. Disolución de dextrano con carbón vegetal

(1): Tampón Tris 45 Mézclese una cantidad igual de Tris-HCl y Tris-base.

(2) Carbón vegetal neutro decolorante de Norit 2,0 g Tampón Tris 150 ml Agítese

(3): Dextrano T-70 0,2 g Tampón Tris 50 ml.

(4): Añádase gota a gota lentamente el dextrano en suspensión en la disolución de carbón vegetal con agitación.

55 Manténgase en el refrigerador durante la noche. Treinta minutos antes de su uso, almacénese. en hielo con agitación continua.

2. Disolución de TEK300/gelatina

60 50 mg de gelatina de cerdo 5 ml de disolución de TEDK300 caliéntese, agítese y a continuación enfríese hasta 4ºC. 5 ml de disolución de TEDK300

3. Preparación de 1,25(OH)2D3 y de los compuestos de ensayo en etanol

1,25(OH)2D3: 125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 pg/25 μl (disolución madre 10-5 M/25 μl = 100.000 pg/25 μl)

Concentración (ng/ml): Cantidad (pg/50 μl)

5,0: 125

10,0: 250

20,0: 500

40,0: 1000

80,0: 2000

160,0: 4000

Compuestos de ensayo: 12.500, 25.000, 50.000, 100.000, 200.000 y 400.000 pg/25 μl. (4*10-5 M/25 μl = 400.000 5 pg/25 μl)

4. Dilución de VDR: 1 μl de disolución madre de VDR en 2,5 ml de disolución de TEDK300/gelatina (500 μl/tubo), (manténgase en hielo)

(iii) Procedimiento:

1. Montaje de la reacción 15 Márquense los tubos según el siguiente diagrama, cada uno por triplicado:

Sin control de VDR: Sin control de VD3 Patrón Compuestos de ensayo

Añádanse 25 μl de etanol
Añádanse 25 μl de etanol: Añádanse 25 μl de cada patrón (en cada concentración) Añádanse 25 μl de de cada muestra (en cada concentración)

Añádanse 500 μl de TEDK300/gelat en disolución: Añádanse 500 μl de disolución de trabajo de VDR Añádanse 500 μl de disolución de trabajo de VDR Añádanse 500 μl de disolución de trabajo de VDR

Mézclense todos los tubos vía vórtice e incúbese a temperatura ambiente durante 1 hora. Añádanse 10 μl de dilución de trabajo de [3H]-1,25(OH)2D3, mézclese mediante vórtice, e incúbese a temperatura ambiente durante 1 20 hora.

2. Procesamiento de la muestra

Treinta minutos antes de la adición, póngase en hielo el carbón/disolución de dextrano con agitación continua. 25 Añádanse 100 μl de carbón/disolución de dextrano a cada tubo, mézclese bien, e incúbese en hielo durante 30 minutos. Centrifúguese a 2000 rpm durante 10 minutos a 4ºC.

3. Recuento

30 Pipetéense 100 μl de la fase acuosa, superior, a una placa de recuento por centelleo de 24 pocillos, y añádanse 600 μl de fluido de centelleo por pocillo, cúbrase y mézclese bien. Recuéntese la placa usando un contador de centelleo durante 5 min/muestra.

(iv) Cálculos:

35 La cantidad de 1,25(OH)2D3 para desplazar el 50% de [3H]-1,25(OH)2D3 de VDR se calculó como B50 para 1,25(OH)2D3. La unión por VDR de otros compuestos se calculó como B50 con relación a un valor de 1 para 1,25(OH)2D3.

40 Dilución en serie de 1,25(OH)D3

Concentración (pg/25 μl): Concentración final M 10-5 M (μl) Etanol (μl)

4.000: 2x10-8 6 144

2.000: 10-8 70 70

1.000: 5x10-9 70 70

500: 2,5x10-9 70 70

250: 1,25x10-9 70 70

125: 6,25x10-10 70 70

Dilución en serie de los compuestos de ensayo

Concentración (pg/50 μl): Concentración final M 10-3 M (μl) Etanol (μl)

400.000: 2x10-6 6 144

200.000: 10-6 70 70

10.000: 5x10-7 70 70

5.000: 2,5x10-7 70 70

25.000: 1,25x10-7 70 70

12.500: 6,25x10-8 70 70

(v) Resultados:

Véase la Tabla 1 5

(vi) Referencias:

1. Ross T. K., Prahl J. M., DeLuka H. Overproduction of rat 1,25-dihydroxyvitamin D3 receptor in insect cells using

the baculovirus expression system. (1991) Proc. Natl Acd Sci USA 88:6555-6559 10

2. Wecksler W. R., Norman A. W. An hydroxylapatite batch assay for the quantitation of 1alpha,25-dihydroxyvitamin D3-receptor complexes (1979) Anal. Biochem. 92:314-323

Ejemplo 25: Ensayo de proliferación de [3H]-timidina con células MCF-7.

(i) Materiales y métodos:

Células MCF-7 (ATCC)

20 MEM suplementado con piruvato sódico, aminoácidos no esenciales, insulina bovina, gentamicina y 10% de suero fetal bovino (medio de crecimiento)

RPMI1640 suplementado con triyodotironina, hidrocortisona, transferrina, insulina bovina y 5% de suero fetal bovino (medio de proliferación)

25 1a,25(OH)2D3 1mM reconstituida en isopropanol. Sustratos (1mM) reconstituidos en isopropanol Disolución de tripsina: EDTA 1XPBS

30 Matraces de cultivo de tejidos de 75 cm2 Placas de cultivo de tejido de 96 pocillos. Fluido de recuento de centelleo de líquidos. Placa de filtro de 96 pocillos (Millipore)

35 (ii) Procedimiento:

1. Preparación de la suspensión celular.

Cuando las células MCF-7 alcanzaron una confluencia de 70-80%, aspírese el medio de crecimiento. Lávense las 40 células con 1X PBS. Tripsinícense con tripsina-EDTA de la placa, recójanse las células del matraz de cultivo de tejidos, centrifúguense (500 X g, 5 min) y resuspéndanse en medio de crecimiento.

2. Cultivo celular en placas.

45 Recuéntense las células y ajústese la densidad celular hasta 25.000/ml. Añádanse 200 μl por pocillo en una placa de 96 pocillos. Incúbese la placa durante 24 h a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2. Aspírese el medio usado y sustitúyase por 150 μl por pocillo con medio de proliferación.

3. Adición de sustrato.

50 Añádanse 25 μl de 1a,25(OH)2D3 (concentración final 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M) en cada pocillo designado. Añádanse 25 μl de sustrato (concentración final 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M o 10-9 M) en cada pocillo designado. Incúbense las placas durante 3 días a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2.

55 4. Incorporación de 3H-timidina.

Añádase 3H-timidina a 0,02 μCi por pocillo e incúbese a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2 durante 6 h.

5. Recogida de las placas.

Aspírense todos los medios y lávense las células con 1X PBS. Tripsinícense las células durante 30 min a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2. Recójanse las células en una placa de filtro de 96 pocillos (Millipore) 5 usando un cosechador de células Tomtec, según las instrucciones del fabricante.

6. Recuento por centelleo.

Añádanse 25 μl de fluido de centelleo por pocillo. Recuéntese la placa usando un contador de centelleo. 10

7. Resultados.

Las gráficas que muestran los resultados para los compuestos I(g), I(e), I(a), I(i), I(m) y I(n) se muestran en las figuras 1-5 respectivamente. 15

Ejemplo 26: Ensayo de proliferación de [3H]-timidina con células SCC-25.

(i) Materiales y métodos:

20 Células SCC-25 (ATCC) DMEM-F12 suplementado con hidrocortisona y 5% de suero fetal bovino 1a,25(OH)2D3 1mM reconstituida en isopropanol. Sustratos (1mM) reconstituidos en isopropanol Disolución de tripsina: EDTA

25 1XPBS Matraces de cultivo de tejidos de 75 cm2 Placas de cultivo de tejido de 96 pocillos. Fluido de recuento de centelleo de líquidos. Placa de filtro de 96 pocillos (Millipore)

(ii) Procedimiento:

1. Preparación de la suspensión celular.

35 Cuando las células SCC-25 alcanzaron una confluencia de 70-80%, aspírese el medio. Lávense las células con 1X PBS. Tripsinícense con tripsina-EDTA de la placa, recójanse las células del matraz de cultivo de tejidos, centrifúguense (500 X g, 5 min) y resuspéndanse en medio.

2. Cultivo celular en placas.

40 Recuéntense las células y ajústese la densidad celular hasta 10.000/ml. Añádanse 200 μl por pocillo en una placa de 96 pocillos. Incúbese la placa durante 24 h a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2. Aspírese el medio usado y sustitúyase por 150 μl por pocillo con medio.

45 3. Adición de compuesto.

Añádanse 25 μl de 1a,25(OH)2D3 (concentración final 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M) en cada pocillo designado. Añádanse 25 μl de sustrato (concentración final 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M o 10-9 M) en cada pocillo designado. Incúbense las placas durante 3 días a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2.

4. Incorporación de 3H-timidina.

Añádase 3H-timidina a 0,02 μCi por pocillo e incúbese a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2 durante 6 h. 55

5. Recogida de las placas.

Aspírense todos los medios y lávense las células con 1X PBS. Tripsinícense las células durante 30 min a 37ºC en una atmósfera humidificada más 5% de CO2. Recójanse las células en una placa de filtro de 96 pocillos (Millipore) 60 usando un cosechador de células Tomtec, según las instrucciones del fabricante.

6.: Recuento por centelleo.

7.: Resultados.

Añádanse 25 μl de fluido de centelleo por pocillo. Recuéntese la placa usando un contador de centelleo. 65

Los resultados para los compuestos I(g), I(e), I(c), I(a), I(j), I(l), I(i), I(o) y I(n) se muestran en las figuras 6-14, respectivamente. 5

Ejemplo 27: Ensayo de proliferación de queratinocitos epidérmicos humanos (HEK)

(i) Material y reactivos

10 Células HEK normales (Cambrex, Walkersville, MD) Medio de KGM-Ca Bullet kit (Cambrex, Walkersville, MD) Paquete de reactivos (Cambrex, Walkersville, MD) Cloruro de calcio (Cambrex, Walkersville, MD) Matraces de cultivo de tejidos de 25 cm2

15 Placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos [3H]-timidina (Perkin Elmer, Boston, MA) Calcitriol (1mM) reconstituido en isopropanol (Sigma, St Louis, MO) Placas de filtro de 96 pocillos Fluido de centelleo

20 Contador de centelleo Cosechador celular Tomtec (Tomtec, Hamden, CT)

(ii) Preparación de reactivos

: 25 1. Medio de células HEK

Supleméntese medio KGM con reactivos adicionales proporcionados en el kit Bullet según las instrucciones del proveedor. Añádase cloruro de calcio hasta una concentración final de 0,3 mM.

: 30 2. Diluciones de calcitriol

Disolución madre: calcitriol (1mM)

: 35 3. Diluciones de sustrato Disolución madre: sustrato (0,1 mM)

Concentración (final): De la etapa previa (μl) Medio KGM (μl) Isopropanol (μl) Concentración (real)

10-6 M 10-7 M 10-8 M 10-9 M 10-10 M 10-11 M: 8 de disolución madre 100 100 100 100 100 992 882 882 882 882 882 12 18 18 18 18 18 8X10-6 M 8X10-7 M 8X10-8 M 8X10-9 M 8X10-10 M 8X10-11 M

Concentración (final): De la etapa previa (μl) Medio KGM (μl) Isopropanol (μl) Concentración (actual)

10-7 M 5X10-8 M 10-8 M 10-9 M 10-10 M: 8 de disolución madre 500 200 100 100 992 490 784 882 882 12 10 16 18 18 8X10-6 M 8X10-7 M 8X10-8 M 8X10-9 M 8X10-11 M

40 (iii) Procedimiento:

1. Cultivo celular

Descongélese un vial de células HEK que contiene al menos 500 K, y divídase en 5 matraces de 25 cm2 con 5 ml

45 de medio de células HEK. 24 horas más tarde, elimínese el medio y repóngase con 5 ml de medio reciente. Cámbiese el medio nuevamente 48 h más tarde.

2. Preparación de la suspensión celular.

50 En el día del ensayo, lávese la monocapa de células HEK una vez con tampón 1X PBS (proporcionado en el paquete de reactivos), y después tripsinícese durante 5 min a 37ºC. Añádase disolución neutralizante de tripsina (proporcionada en el paquete de reactivos). Recójanse las células en un tubo, centrifúguense las células (500 X g, 5 min) y resuspéndanse en medio de células HEK. Recuéntense las células y ajústese la densidad hasta 150.000

células/ml. Dilúyanse las células adicionalmente 1:30 con medio de células HEK.

2. Cultivo de células en placas

5 Añádanse 150 μl de suspensión celular a pocillos marcados apropiadamente de una placa de 96 pocillos. Incúbese la placa durante 48 h a 37 ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2 para determinar la adherencia de las células a los pocillos.

3. Adición de compuestos

10 Añádanse 25 μl de calcitriol (10-6 a 10-11 M, final) y añádanse 25 μl de sustrato (10-7 a 10-10 M, final), e incúbese durante 32 horas a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2.

4. Cosecha de células y recuento

15 Añádanse 0,2 μCi/pocillo de [3H]-timidina en 20 μl de medio de células HEK a cada pocillo. Incúbense las placas durante 18 h a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2. Aspírese el medio y coséchese con 1 X PBS. Tripsinícense las células durante 30 min a 37ºC en un atmósfera humidificada que contiene 5% de CO2. Coséchense las células sobre placas de filtro usando una cosechadora celular Tomtec según las instrucciones del

20 fabricante. Añádanse 25 μl de fluido de centelleo por pocillo. Mídase la radioactividad usando un contador de centelleo. Todos los valores se normalizaron con respecto al valor del fondo.

5. Resultados:

25 Las gráficas que muestran los resultados para los compuestos I(e), I(a), I(i), I(o) y I(n) se muestran en las figuras 15-19, respectivamente.

Ejemplo 28: Composición tópica propuesta que contiene un compuesto de la invención:

30 Disuélvase un compuesto de la invención (1 mg) en 1 g de aceite de almendras. A esta disolución añádase aceite mineral (40 g) y cera de abejas autoemulsionante (20 g). Caliéntese la mezcla para licuarla, y añádase agua cliente (40 ml) y agítese bien la mezcla para proporcionar una crema que contiene aproximadamente 10 μg y un compuesto de la invención por gramo de crema.

35 Ejemplo 29: Crema propuesta que contiene 50 g de un compuesto de la invención/g

Compuesto de la invención 50 mg Cetomacrogol 1000 25 g Alcohol cetoestearílico 75 g Cloruro de cloroalilhexaminio 0,5 g Glicerol 30 g Hidrogenofosfato disódico 2 g Dihidrogenofosfato sódico 0,1 g Parafina líquida 60 g polioxietileno esteariléter 12 g Vaselina blanca 160 g Agua purificada hasta 1000 g

Disuélvase un compuesto de la invención en una disolución de glicerol, hidrogenofosfato disódico, dihidrogenofosfato sódico y polioxietileno esteariléter disuelto en agua. Mézclese con el cetomacrogol 1000 fundido,

40 parafina líquida, alcohol cetoestearílico y vaselina blanca. Homogenéicese la emulsión y enfríese. Disuélvase cloruro de cloroalilhexaminio en parte del agua y mézclese hasta homogeneidad con la emulsión. Introdúzcase la crema en tubos de aluminio.

Ejemplo 30: Crema propuesta que contiene 100 g de un compuesto de la invención/g

45 Composición de la invención 100 mg Cetomacrogol 1000 30 g Alcohol cetoestearílico 60 g Cloruro de cloroalilhexaminio 0,5 g Propilenglicol 30 g Hidrogenofosfato disódico 2 g Dihidrogenofosfato sódico 0,1 g Parafina líquida 50 g Vaselina blanca 170 g Agua purificada hasta 1000 g Fúndanse cetomacrogol 1000, alcohol cetoestearílico, parafina líquida y vaselina blanca a 75ºC. Disuélvase propilenglicol en agua a 75ºC, y mézclese la disolución con la fase grasa. Homogenéicese la emulsión y enfríese hasta 30ºC. Muélase el compuesto de la invención hasta un tamaño de partículas por debajo de 5 μm y suspéndase en una disolución acuosa de hidrogenofosfato disódico, dihidrogenofosfato sódico y cloruro de cloroalilhexaminio. Añádase la suspensión a la emulsión, e introdúzcase la crema en tubos.

Ejemplo 31: Loción propuesta que contiene 50 g de un compuesto de la invención/g

Composición de la invención 50 mg Alcohol absoluto 400 g Hidroxipropilcelulosa 1 g Mentol 1 g Citrato sódico 1 g Propilenglicol 40 g Agua purificada hasta 1000 ml

10 Disuélvanse hidroxipropilcelulosa, citrato de sodio y propilenglicol en agua. Mézclese con una disolución de un compuesto de la invención y mentol en alcohol absoluto. Introdúzcase la loción en botellas de plástico de polietileno.

15 Ejemplo 32: Cápsulas propuestas que contienen un compuesto de la invención

Un compuesto de la invención se suspende en aceite de cacahuete hasta una concentración final de 5 μg/ml de aceite. Mézclense juntos, con calentamiento, 10 partes en peso de gelatina, 5 partes en peso de glicerina, 0,08 partes en peso de sorbato potásico, y 14 partes en peso de agua destilada, y désele la forma de cápsulas de

20 gelatina blandas. Después, introdúzcase cada cápsula con 100 μl de compuesto en la suspensión oleosa, de manera que cada cápsula contenta 0,5 μg del compuesto.

Tabla I: Sumario de resultados de los Ejemplos 21-24

Compuesto nº: IC50 de CYP24 (nM) (células HPK1A-ras) IC50 de CYP24 (nM) (células V79-CYP24) IC50 de CYP27A1 (nM) Unión de VDR (nM)

I(a): 5 4 >1000 >2000

I(c): 33 20 >1000 >2000

I(e): 66 29 >1000 >2000

I(g): 20 26 >1000 >2000

I(i): 8,5 >2000

I(j): 27 >2000

I(k): 300 >2000

I(l): 42 >2000

I(m): 120 >2000

I(n): 23

I(o): 20

I(p): 42

I(q): 78

I(s): 580

quetoconazol: 300 300

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de Fórmula I, y sales, hidratos, solvatos y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo:

en la que

R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH, O-alquilo de C1-4, y halo; 10 R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, O-alquilo de C1-4, y halo;

cada R3 son ambos H o, juntos, forman =CH2;

15 R4 es alquilo de C1-4;

----

representa un enlace sencillo o un doble enlace;

cada R5 puede ser igual o diferente, y se selecciona de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de 20 C1-4, o cada R5 se pueden tomar juntos para formar un anillo de cicloalquilo de C3-6;

R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o está sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4,

25 CF3, NO2 y halo;

R7 se selecciona de entre el grupo constituido por H, alquilo de C1-6 y C(O)R8; y

R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, aril-alquilo de C1-4, arilo y

30 heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-5 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo,

con la condición de que cuando exista un doble enlace entre C22 y C23, sólo haya un grupo R5 unido a C23, y R5 35 se seleccione de entre el grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo de C1-4;

siendo dichos profármacos ésteres formados con un grupo hidroxilo, tiol, amino o carboxi disponible de los compuestos de Fórmula I.

40 2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 se selecciona de entre el grupo constituido por OH, OCH3 y fluoro.
3. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es OH.

45 4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH, OCH3 y fluoro.
5. Compuesto según la reivindicación 4, en el que R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H, OH y fluoro.

50 6. Compuesto según la reivindicación 5, en el que R2 se selecciona de entre el grupo constituido por H y OH.
7.

Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 y R2 son ambos OH.
8.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que cada R3 forman juntos =CH2.
9.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que cada R3 es H.
10.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R4 es CH3.
11.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que cada R5 se selecciona de entre el grupo constituido por F, alquilo de C1-4 e H, o se toman juntos para formar un anillo de cicloquilo de C3-5.
12.

Compuesto según la reivindicación 11, en el que cada R5 se selecciona de entre el grupo constituido por F, CH3 e H, o se toman juntos para formar un anillo de cicloquilo de C3-4.
13.

Compuesto según la reivindicación 12, en el que ambos R5 son CH3, F o H, o se toman juntos para formar un anillo de ciclopropilo.
14.

Compuesto según la reivindicación 13, en el que cada R5 es H.
15.

Compuesto según la reivindicación 13, en el que cada R5 se toman juntos para formar un anillo de ciclopropilo.
16.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo están no sustituidos o están sustituidos con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo.
17.

Compuesto según la reivindicación 16, en el que R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo están no sustituidos o están sustituidos con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo.
18.

Compuesto según la reivindicación 17, en el que R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, y arilo, en el que arilo está no sustituido o está sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo.
19.

Compuesto según la reivindicación 18, en el que R6 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, y fenilo, en el que fenilo está no sustituido o está sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo.
20.

Compuesto según la reivindicación 19, en el que R6 es un grupo fenilo no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por CH3, OCH3, NO2, F y Cl.
21.

Compuesto según la reivindicación 20, en el que R6 es un grupo fenilo no sustituido o fenilo sustituido con 1 sustituyente seleccionado independientemente de entre el grupo constituido por CH3, OCH3, NO2, F y Cl.
22.

Compuesto según la reivindicación 19, en el que R6 es t-butilo.
23.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en el que R7 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4 e H.
24.

Compuesto según la reivindicación 23, en el que R7 se selecciona de CH2 o H.
25.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en el que R7 es C(O)R8.
26.

Compuesto según la reivindicación 25, en el que R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, aril-alquilo de C1-2, arilo y heteroarilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, arilo y heteroarilo está no sustituido o sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2 y halo.
27.

Compuesto según la reivindicación 26, en el que R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, PhCH2 y fenilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-5, PhCH2 y fenilo está no sustituido o sustituido con 1-2 sustituyentes seleccionados independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2, F y Cl.
28.

Compuesto según la reivindicación 26, en el que R8 se selecciona de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, PhCH2 y fenilo, en el que cada uno de alquilo de C1-4, PhCH2 y fenilo está no sustituido o sustituido con 1 sustituyente seleccionado independientemente de entre el grupo constituido por alquilo de C1-4, O-alquilo de C1-4, CF3, NO2, F y Cl.
29.

Compuesto según la reivindicación 1, en el que R6 es alquilo de C1-6 y ---- entre C16 y C17 es un doble enlace.
30.

Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, en el que ---- entre C22-C23 representa un enlace sencillo.

5 31. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, en el que ---- entre C16-C17 representa un enlace sencillo.
32. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, en el que ambos ----representan un enlace

sencillo. 10
33. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 32, que tiene la siguiente estereoquímica relativa:

15 34. Compuesto según la reivindicación 31, que tiene la siguiente estereoquímica relativa:
35.

Compuesto según la reivindicación 1, que tiene la siguiente estereoquímica relativa:
36.

Compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona de entre el grupo constituido por:
37.

Compuesto según la reivindicación 36, seleccionado de entre el grupo constituido por I(a); I(c); I(e); I(g); I(i); I(j);

I(l); I(m); I(n); I(o); I(p) e I(q). 5
38. Compuesto según la reivindicación 37, seleccionado de entre el grupo constituido por I(a), I(c), I(e), I(g), I(i), I(j), I(l), I(n) I(o) e I(p).
39. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, y un 10 vehículo farmacéuticamente aceptable.
40. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a tratar una enfermedad que se beneficia de una modulación de los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3

o un análogo de la misma. 15
41. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a tratar una enfermedad que se beneficia de un incremento en los niveles de 1a,25-dihidroxi vitamina D3

o un análogo de la misma.

20 42. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a tratar una enfermedad que se beneficia de una inhibición del catabolismo de 1a,25-dihidroxi vitamina D3

o un análogo de la misma.
43. Uso según la reivindicación 41 o 42, en el que la enfermedad se selecciona de entre el grupo constituido por 25 cáncer, trastornos dermatológicos, trastornos paratiroideos, trastornos autoinmunitarios y trastornos óseos.
44. Uso según la reivindicación 43, en el que la enfermedad se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer, soriasis, hiperparatiroidismo, hiperparatiroidismo secundario y osteoporosis.

30 45. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a inhibir la proliferación celular y/o promover la diferenciación celular.
46. Uso según la reivindicación 45, en el que la célula es una célula cancerosa.

35 47. Uso según la reivindicación 46, en el que el cáncer se selecciona de cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer pancreático, sarcoma de Kaposi y leucemia.
48. Uso según la reivindicación 45, en el que la célula es una célula de la piel. 40
49.

Uso según la reivindicación 48, en el que la célula es un queratinocito.
50.

Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento

destinado a inhibir la actividad de CYP24. 45
51. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a tratar una enfermedad que se beneficia de una inhibición de la actividad de CYP24.
52. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento 50 destinado a incrementar la eficacia de un agonista del receptor de vitamina D.
53.

Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, para preparar un medicamento destinado a tratar una enfermedad que se beneficia de coadministrar una cantidad eficaz de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 y una cantidad eficaz de un agonista del receptor de vitamina D.
54.

Uso según la reivindicación 52 o 53, en el que el agonista del receptor de vitamina D es 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (calcitriol), o un análogo de la misma.

5 55. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 52 a 54, en el que el compuesto se selecciona de entre el grupo constituido por I(a), I(c), I(e), I(g), I(i), I(j), I(l), I(n) e I(o).
56. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 52 a 55, en el que la enfermedad se selecciona de entre el grupo

constituido por cáncer, trastornos dermatológicos, trastornos paratiroideos, trastornos autoinmunitarios y trastornos 10 óseos.
57. Uso según la reivindicación 56, en el que la enfermedad se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer, soriasis, hiperparatiroidismo, hiperparatiroidismo secundario y osteoporosis.

15 58. Uso según la reivindicación 57, en el que la enfermedad es cáncer.
59. Uso según la reivindicación 58, en el que el cáncer se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer pancreático, sarcoma de Kaposi y leucemia.
60. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer, trastornos dermatológicos, trastornos paratiroideos, trastornos autoinmunitarios o trastornos óseos cuando se usa en combinación con una o más terapias o productos terapéuticos para tratar cáncer, trastornos dermatológicos, trastornos paratiroideos, trastornos autoinmunitarios o trastornos óseos.
61. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 en la preparación de un medicamento destinado a tratar cáncer cuando se utiliza en combinación con una o varias terapias o productos terapéuticos para tratar el cáncer.

30 62. Uso según la reivindicación 61, en el que una o varias terapias o productos terapéuticos para tratar el cáncer se seleccionan de entre el grupo constituido por cirugía, radiación, quimioterapia y bioterapia.
63. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 en la preparación de un medicamento

destinado a tratar soriasis cuando se utiliza en combinación con una o varias terapias o productos terapéuticos 35 destinadas a tratar soriasis.
64. Uso según la reivindicación 63, en el que las una o varias terapias o productos terapéuticos destinadas a tratar la soriasis se seleccionan de entre el grupo constituido por radiación ultravioleta B, quimioterapia y bioterapia.

40 65. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 para su uso como medicamento.