ES2372307T3

ES2372307T3 - Compuestos de pirazolina sustituida, su preparación y uso como medicamentos.

Info

Publication number: ES2372307T3
Application number: ES06762612T
Authority: ES
Inventors: María Rosa Cuberes Altisen
Original assignee: Laboratorios del Dr Esteve SA
Current assignee: Esteve Pharmaceuticals SA
Priority date: 2005-07-15
Filing date: 2006-07-15
Publication date: 2012-01-18
Anticipated expiration: 2026-07-15
Also published as: ATE523495T1; EP1910299A1; PE20070246A1; TW200745043A; US20070015810A1; EP1757587A1; WO2007009695A1; EP1910299B1

Abstract

Compuestos de fórmula general I: **Fórmula** en la que: R1 representa un grupo fenilo, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionado5 s independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3, R2 representa un grupo fenilo, que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3, R3 representa un grupo pirrolidinilo, un grupo piperidinilo o un grupo piperazinilo, mediante lo cual cada uno de estos grupos puede estar sustituido por uno o más grupos alquilo(C1-C6), o R3 representa un resto -NR4R5-, uno de los residuos R4 y R5 representa un átomo de hidrógeno y el otro de estos residuos R4 y R5 representa un grupo pirrolidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperazinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo triazolilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un resto -SO2R6-; un resto -NR7R8-, o R4 y R5, iguales o diferentes, representan un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo n- butilo, un grupo sec-butilo o un grupo terc-butilo, R6 representa un grupo alquilo(C1-C6); un grupo cicloalifático saturado opcionalmente al menos mono- sustituido que puede estar condensado con un sistema de anillos mono- o policíclico; o un grupo fenilo, que está opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo(C1-C6) y R7 y R8, iguales o diferentes, representan un átomo de hidrógeno o radical alquilo(C1-C6), opcionalmente, en forma de un N-óxido correspondiente del mismo, o una de sus sales o uno de sus solvatos correspondientes.

Description

Compuestos de pirazolina sustituida, su preparacion y uso como medicamentos

La presente invencion se refiere a compuestos de pirazolina sustituida, a procedimientos para su preparacion, medicamentos que comprenden estos compuestos, asi como a su uso para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de seres humanos y animales.

Los cannabinoides son compuestos que proceden de la planta Cannabis sativa, comunmente conocida como marihuana. El compuesto quimico mas activo de los cannabinoides naturales es el tetrahidrocannabinol (THC), concretamente, el /9-THC.

Estos cannabinoides naturales, asi como sus analogos sinteticos, potencian sus efectos fisiologicos mediante la union a receptores acoplados a proteinas G especificos, los denominados receptores de cannabinoides.

Actualmente, se han identificado y clonado dos tipos diferentes de receptores que se unen tanto a cannabinoides naturales como sinteticos. Estos receptores, que se denominan CB1 y CB2, participan en una variedad de procesos fisiologicos o patofisiologicos en seres humanos y animales, p.ej., procesos relacionados con el sistema nervioso central, sistema inmune, sistema cardiovascular, sistema endocrino, sistema respiratorio, tracto gastrointestinal o la reproduccion, segun lo descrito, por ejemplo, en Hollister, Pharm. Rev. 38, 1986, 1-20; Reny y Singha, Prog. Drug. Res., 36, 71-114, 1991; Consroe y Sandyk, en "Marijuana/Cannabinoids", Neurobiology and Neurophysiology, 459, Murphy L. y Barthe A. Eds., CRC Press, 1992.

Por lo tanto, los compuestos que tienen una alta afinidad de union por estos receptores de cannabinoides y que son adecuados para modular estos receptores son utiles en la prevencion y/o el tratamiento de trastornos relacionados con los receptores de cannabinoides.

En concreto, el receptor CB1 esta implicado en muchos trastornos diferentes relacionados con la ingesta de alimentos, tales como la bulimia o la obesidad, incluyendo, la obesidad asociada con la diabetes de tipo II (diabetes no insulino-dependiente) y, por tanto, es posible usar los compuestos adecuados para regular este receptor en la profilaxis y/o el tratamiento de estos trastornos.

Asi pues, la presente invencion tenia por objeto proporcionar nuevos compuestos para su uso como sustancias activas en medicamentos. En concreto, estas sustancias activas han de ser adecuadas para la modulacion de receptores de cannabinoides, mas concretamente, para la modulacion de receptores del cannabinoide 1 (CB1).

Dicho objeto se alcanzo proporcionando los compuestos de pirazolina sustituida de la formula general I que se ofrece a continuacion, sus estereoisomeros, y sus correspondientes sales y solvatos.

Se ha descubierto que estos compuestos tienen una alta afinidad por los receptores de cannabinoides, particularmente, por el receptor CB1, y que actuan como moduladores, p.ej., como antagonistas, agonistas inversos

o agonistas de estos receptores. Son, por tanto, adecuados para la profilaxis y/o el tratamiento de diversos trastornos relacionados con el sistema nervioso central, el sistema inmune, el sistema cardiovascular, el sistema endocrino, el sistema respiratorio, el tracto gastrointestinal o la reproduccion en seres humanos y/o animales, preferiblemente, en seres humanos, incluyendo bebes, ninos y adultos.

De este modo, en uno de sus aspectos, la presente invencion se refiere a compuestos de pirazolina sustituida de formula general I:

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en la que:

R1 representa un grupo fenilo, que esta opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3,

R2 representa un grupo fenilo, que esta opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3,

R3 representa un grupo pirrolidinilo, un grupo piperidinilo o un grupo piperazinilo, en el que cada uno de estos grupos puede estar sustituido por uno o mas grupos alquilo(C1-C6), o R3 representa un resto -NR4R5-,

Uno de los residuos R4 y R5 representa un atomo de hidrogeno y el otro de estos residuos R4 y R5 representa un grupo pirrolidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperazinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo triazolilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un resto -S02-R6-; un resto -NR7R8-, o R4 y R5, iguales o diferentes, representan un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo nbutilo, un grupo sec-butilo o un grupo terc-butilo,

R6 representa un grupo alquilo(C1-C6); un grupo cicloalifatico saturado opcionalmente al menos monosustituido que puede estar condensado con un sistema de anillos mono- o policiclico; o un grupo fenilo, que esta opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo(C1-C6) y

R7 y R8, identicos o diferentes, representan un atomo de hidrogeno o radical alquilo(C1-C6),

opcionalmente, en forma de un N-oxido correspondiente del mismo, o una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos.

Un sistema de anillos mono- o policiclico segun la presente invencion significa un sistema de anillos de hidrocarburo mono- o policiclico que puede ser saturado, insaturado o aromatico. Si el sistema de anillos es policiclico, cada uno de sus diferentes anillos puede presentar un grado diferente de saturacion, i.e., puede ser saturado, insaturado o aromatico. 0pcionalmente, cada uno de los anillos del sistema de anillos mono- o policiclico puede contener uno o mas, p.ej., 1, 2 o 3, heteroatomos como miembros del anillo, que pueden ser identicos o diferentes y que se pueden seleccionar, preferiblemente, del grupo que consiste en N, 0, S y P; mas preferiblemente, se pueden seleccionar del grupo que consiste en N, 0 y S. Preferiblemente, el sistema de anillos policiclico puede comprender dos anillos que estan condensados. Los anillos del sistema de anillos mono- o policiclico son, preferiblemente, de 5 o 6 miembros.

El termino "condensado" segun la presente invencion significa que un anillo o sistema de anillos esta unido a otro anillo o sistema de anillos, por lo que los expertos en la tecnica tambien usan los terminos "anuloso" o "anillado" para designar este tipo de union.

Si uno o mas de los residuos R3-R8 representa o comprende, opcionalmente, al menos un heteroatomo saturado o insaturado como miembro del anillo que contiene un grupo cicloalifatico, que esta sustituido por uno o mas, p.ej., 1, 2, 3 o 4 sustituyentes, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de los sustituyentes se puede seleccionar independientemente del grupo que consiste en hidroxilo, fluor, cloro, bromo, alcoxilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, alquilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, perfluoroalcoxilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, perfluoroalquilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, oxo, amino, carboxilo, amido, ciano, nitro, -S02NH2, -C0alquilo(C1-C4), -S0-alquilo(C1-C4), -S02-alquilo(C1-C4), -NH-S02-alquilo(C1-C4), en los que el alquilo(C1-C4) puede ser, en cada caso, ramificado o no ramificado, y un grupo fenilo, mas preferiblemente, se puede seleccionar del grupo que consiste en hidroxilo, F, Cl, Br, metilo, etilo, metoxilo, etoxilo, CF3, oxo y un grupo fenilo.

Si uno o mas de los residuos R3-R8 representa o comprende un grupo cicloalifatico, que contienen uno o mas heteroatomos como miembros de los anillos, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de estos heteroatomos se puede seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en N, 0 y S. Preferiblemente, un grupo cicloalifatico puede contener 1, 2 o 3 heteroatomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, 0 y S como miembros de los anillos. 0pcionalmente al menos un heteroatomo saturado o insaturado adecuado como miembro de anillo que contiene, grupos cicloalifaticos opcionalmente al menos mono-sustituidos se puede seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo, ciclooctenilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, homo-piperazinilo y morfolinilo.

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Si uno o mas de los residuos R3-R8 comprende un sistema de anillos mono- o policiclico que esta sustituido por uno o mas, p.ej., 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de los sustituyentes se puede seleccionar independientemente del grupo que consiste en hidroxilo, fluor, cloro, bromo, alcoxilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, alquilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, perfluoroalcoxilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, perfluoroalquilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, amino, carboxilo, oxo, amido, ciano, nitro, -S02NH2, -C0-alquilo(C1-C4), -S0-alquilo(C1-C4), -S02-alquilo(C1-C4), -NH-S02-alquilo(C1-C4), en los que el alquilo(C1-C4) puede estar en cada caso ramificado o no ramificado, y un grupo fenilo, mas preferiblemente, se puede seleccionar del grupo que consiste en hidroxilo, F, Cl, Br, metilo, etilo, metoxilo, etoxilo, CF3, oxo y un grupo fenilo.

Si uno o mas de los residuos R1-R8 representa o comprende un grupo arilo, incluyendo un grupo fenilo, que esta sustituido por uno o mas, p.ej., 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de los sustituyentes se puede seleccionar independientemente del grupo que consiste en un atomo de halogeno (p.ej., F, Cl, Br, I), un grupo alquilo(C1-C6) lineal o ramificado, un grupo alcoxilo(C1-C6) lineal o ramificado, un grupo formilo, un grupo hidroxilo, un grupo trifluorometilo, un grupo trifluorometoxilo, un grupo -C0-alquilo(C1-C6), un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo carboxilo, un grupo -C0-0-alquilo(C1-C6), un resto -C0-NRARB-, un resto -C0-NH-NRCRD, un -SH, un grupo -S-alquilo(C1-C6), un grupo -S0-alquilo(C1-C6), un grupo -S02-alquilo(C1-C6), un grupo alquilen(C1-C6)-S0-alquilo(C1-C6), un grupo alquilen(C1-C6)-S02-alquilo(C1-C6), un resto -NH2-, un resto NHR'- o un resto NR'R''-, en los que R' y R'' representan independientemente un grupo alquilo(C1-C6) lineal o ramificado, un grupo alquilo(C1-C6) sustituido por no o mas grupos hidroxilo y un grupo alquilen(C1-C6)-NRERF,

en el que RA y RB, identicos o diferentes, representan hidrogeno o un grupo alquilo(C1-C6), o RA y RB junto con el atomo de nitrogeno de union forman un sistema de anillos heterociclicos de 3-10 miembros mono o biciclico saturado que puede estar al menos mono-sustituido por uno o mas identicos o diferentes grupos alquilo(C1-C6) y/o que puede contener al menos un heteroatomo mas seleccionado del grupo que consiste en nitrogeno, oxigeno y azufre como un miembro de anillo,

RC, RD, iguales o diferentes, representan un atomo de hidrogeno, un grupo alquilo(C1-C6), un grupo -C0-0alquilo(C1-C6), un grupo cicloalquilo(C3-C8), un grupo alquilen(C1-C6)-cicloalquilo(C3-C8), un grupo alquilen(C1-C6)-0-alquilo(C1-C6) o un grupo alquilo(C1-C6) sustituido con uno o mas grupos hidroxilo, o RC, RD, junto con el atomo de nitrogeno de union forman un sistema de anillos heterociclicos de 3-10 miembros mono- o biciclico saturado, que puede estar al menos mono-sustituido por uno o mas sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste en un grupo alquilo(C1-C6), un grupo -C0-alquilo(C1-C6), un grupo -C0-0alquilo(C1-C6), un grupo -C0-NH-alquilo(C1-C6), un grupo -CS-NH-alquilo(C1-C6), un grupo oxo, un grupo alquilo(C1-C6) sustituido con uno o mas grupos hidroxilo, un grupo alquilen(C1-C6)-0-alquilo(C1-C6), un grupo -C0-NH2 y/o que puede contener al menos un heteroatomo mas seleccionado del grupo que consiste en nitrogeno, oxigeno y azufre como miembro de un anillo, y

en el que RE y RF, identicos o diferentes, representan hidrogeno o un grupo alquilo(C1-C6), o RE y RF junto con el atomo de nitrogeno de union forman un sistema de anillos heterociclicos de 3-10 miembros mono- o biciclico saturado que puede estar al menos mono-sustituido por uno o mas grupos alquilo(C1-C6) Identicos o diferentes y/o que puede contener al menos un heteroatomo mas seleccionado del grupo que consiste en nitrogeno, oxigeno y azufre como miembro de un anillo.

Los grupos arilo preferidos, que pueden estar opcionalmente al menos mono-sustituidos, son fenilo y naftilo.

Si uno o mas de los residuos R3-R8 representa o comprende un grupo heteroarilo que esta sustituido por uno o mas, p.ej., 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de los sustituyentes se puede seleccionar independientemente del grupo que consiste en un atomo de halogeno (p.ej., F, Cl, Br, I), un grupo alquilo(C1-C6) lineal o ramificado, un grupo alcoxilo(C1-C6) lineal o ramificado, un grupo formilo, un grupo hidroxilo, un grupo trifluorometilo, un grupo trifluorometoxilo, un grupo -C0-alquilo(C1-C6), un grupo ciano, un grupo carboxilo, un grupo -C0-0-alquilo(C1-C6), un resto -C0-NRARB-, un resto -C0-NH-NRCRD-, un grupo Salquilo(C1-C6), un grupo -S0-alquilo(C1-C6), un grupo -S02alquilo(C1-C6), un grupo alquilen(C1-C6)-S-alquilo(C1-C6), un grupo alquilen(C1-C6)-S0-alquilo(C1-C6), un grupo alquilen(C1-C6)-S02-alquilo(C1-C6), un grupo alquilo(C1-C6) sustituido por uno o mas grupos hidroxilo y un grupo alquilen(C1-C6)-NRERF,

en el que RA y RB, identicos o diferentes, representan hidrogeno o un grupo alquilo(C1-C6), o RA y RB junto con el atomo de nitrogeno de union forman un sistema de anillos heterociclicos de 3-10 miembros mono- o biciclico saturado que puede estar al menos mono-sustituido por uno o mas grupos alquilo(C1-C6) Identicos o diferentes y/o

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que puede contener al menos un heteroatomo mas seleccionado del grupo que consiste en nitrogeno, oxigeno y azufre como miembro de un anillo,

Los heteroatomos, que estan presentes como miembros de los anillos en el radical heteroarilo, se pueden seleccionar, a no ser que se defina lo contrario, independientemente del grupo que consiste en nitrogeno, oxigeno y azufre. Preferiblemente, un radical heteroarilo puede comprender 1, 2 o 3 heteroatomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, 0 y S como miembros de los anillos.

Los grupos heteroarilo adecuados, que pueden estar opcionalmente al menos mono-sustituidos, se pueden seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en tienilo, furilo, pirrolilo, piridinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzo[1,2,5]-tiodiazolilo, benzo[b]tiofenilo, benzo[b]furanilo, imidazo[2,1-b]tiazolilo, triazolilo y pirazolilo, se pueden seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en tienilo, benzo[1,2,5]-tiodiazolilo, benzo[b]tiofenilo, imidazo[2,1-b]tiazolilo, triazolilo y pirazolilo.

Si uno o mas de los residuos R4-R8 representa o comprende un grupo alifatico saturado o insaturado lineal o ramificado, tal como un grupo alquilo, que esta sustituido por uno o mas, p.ej., 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, a no ser que se defina lo contrario, cada uno de los sustituyentes se puede seleccionar independientemente del grupo que consiste en hidroxilo, fluor, cloro, bromo, alcoxilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, perfluoroalcoxilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, perfluoroalquilo(C1-C4) ramificado o no ramificado, amino, carboxilo, amido, ciano, nitro, -S02NH2, -C0-alquilo(C1-C4), -S0-alquilo(C1-C4), -S02-alquilo(C1-C4), -NH-S02-alquilo(C1-C4), en los que el alquilo(C1-C4) puede ser en cada caso ramificado o no ramificado, y un grupo fenilo, mas preferiblemente, se puede seleccionar del grupo que consiste en hidroxilo, F, Cl, Br, metoxilo, etoxilo, CF3 y un grupo fenilo.

Los grupos alifaticos saturados o insaturados lineales o ramificados preferidos, que pueden estar sustituidos por uno o mas sustituyentes, se pueden seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, vinilo, etinilo, propenilo, propinilo, butenilo y butinilo.

Si alguno de los residuos R4-R8 representa o comprende un grupo alquileno lineal o ramificado, dicho grupo alquileno se puede seleccionar preferiblemente del grupo que consiste en, -metilen-(CH2)-, etilen-(CH2-CH2)-, npropilen-(CH2-CH2-CH2)- o isopropilen-(C(CH3)2)-.

A no ser que se indique lo contrario, los compuestos de la invencion tambien pretenden incluir compuestos que solo se diferencian en la presencia de uno o mas atomos isotopicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras a excepcion de la sustitucion de un hidrogeno por un deuterio o tritio, o la sustitucion de un carbono por carbono enriquecido en 13C o 14C o nitrogeno enriquecido en 15N pertenecen al alcance de la invencion.

El compuesto mas particularmente preferido es (R)-N-piperidinil-5-(4-cloro-fenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida [compuesto 1]:

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opcionalmente, en forma de un N-oxido correspondiente, o una sal o un solvato correspondiente.

En otro aspecto, la presente invencion tambien proporciona un procedimiento para la preparacion de compuestos de pirazolina sustituida de la formula general I ofrecida anteriormente, segun la cual al menos un compuesto de formula general IIa

en la que R1 y R2 tienen el significado anteriormente dado, se transfiere opcionalmente bajo una atmosfera inerte a un compuesto de formula general (III) mediante la reaccion con un agente activador

en la que los sustituyentes R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente y A representa un grupo saliente, preferiblemente, un atomo de cloro, estando dicho compuesto opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado, y se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (IIa) con un compuesto de formula general R3H,

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en la que R3 representa un resto -NR4R5-, en el que R4 y R5 tienen el significado dado anteriormente, bajo una atmosfera inerte para dar un compuesto de pirazolina sustituida de formula general I, en la que R3 representa un resto -NR4R5-,

o se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (III) con un compuesto de formula general R3H, en la que R3 tiene el significado dado anteriormente bajo una atmosfera inerte para dar un compuesto de formula general (I), que esta opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado.

Preferiblemente, el compuesto IIa se obtiene de una mezcla que comprende los enantiomeros

El compuesto (IIa) se puede obtener de la mezcla de los enantiomeros mediante procedimientos conocidos por los expertos en la tecnica. Preferiblemente, el compuesto IIa se obtiene de la mezcla en forma de un compuesto de adicion con una base quiral, preferiblemente, (+)-cinconina o R-(+)-1-feniletilamina, y se libera preferiblemente del compuesto de adicion.

Preferiblemente, la mezcla que comprende los enantiomeros IIa y IIb se puede obtener mediante la reaccion de al menos un compuesto de benzaldehido de formula general (IV)

en la que R1 tiene el significado anteriormente dado, se hace reaccionar con un compuesto de piruvato de formula general (V)

en la que G representa un grupo 0R, siendo R un radical alquilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, preferiblemente, un radical etilo, o G representa un grupo 0K, siendo K un cation, preferiblemente, un cation

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monovalente, mas preferiblemente, un cation de metal alcalino, incluso mas preferiblemente, un cation de sodio, para producir un compuesto de formula general (VI)

en la que R' tiene el significado dado anteriormente, que esta opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado, y que se hace reaccionar con una fenilhidrazina opcionalmente sustituida de formula general (VII)

o una de sus correspondiente sales, en la que R2 tiene el significado dado anteriormente, bajo una atmosfera inerte, para producir una mezcla de compuestos

El procedimiento de la invencion tambien se ilustra en el Esquema I que se ofrece a continuacion:

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La reaccion del compuesto de benzaldehido de formula general IV con un compuesto de piruvato de formula general V se lleva a cabo, preferiblemente, en presencia de al menos una base, mas preferiblemente, en presencia de un hidroxido de metal alcalino, tal como hidroxido de sodio o hidroxido de potasio, o un metoxido de metal

5 alcalino, tal como metoxido de sodio, segun lo descrito, por ejemplo, en Synthetic communications, 26(11), 222933, (1996). La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la revelacion. Preferiblemente, se puede usar piruvato de sodio como el compuesto de piruvato. Preferiblemente, dicha reaccion se lleva a cabo en un medio de reaccion protico, tal como un alcohol alquilico(C1-C4) o sus mezclas. Tambien se pueden usar las mezclas de tales alcoholes con agua, p.ej., etanol/agua.

10 La temperatura de reaccion, asi como la duracion de la reaccion pueden variar en un intervalo amplio. Las temperaturas de reaccion preferidas varian de -10DC al punto de ebullicion del medio de reaccion. Las duraciones adecuadas de la reaccion pueden variar, por ejemplo, de varios minutos a varias horas.

Tambien se prefiere que la reaccion del compuesto de benzaldehido de formula general IV con un compuesto de piruvato de formula general V se lleve a cabo en condiciones catalizadas con un acido, mas preferiblemente,

15 mediante el reflujo de la mezcla en diclorometano en presencia de trifluorometanosulfonato de cobre (II), segun lo descrito, por ejemplo, en Synlett, (1), 147-149, 2001. La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la revelacion.

La reaccion del compuesto de formula general (VI) con una fenilhidrazina opcionalmente sustituida de formula general (VII) se lleva a cabo preferiblemente en un medio de reaccion adecuado, tal como alcoholes(C1-C4) o 20 eteres(C1-C4), tales como dioxano o tetrahidrofurano, o mezclas de al menos dos de estos compuestos anteriormente mencionados. Tambien, preferiblemente, se puede llevar a cabo dicha reaccion en presencia de un acido, de manera que el acido puede ser organico, tal como acido acetico, y/o inorganico, tal como acido

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clorhidrico. Ademas, la reaccion tambien se puede llevar a cabo en presencia de una base, tal como piperidina, piperazina, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio, metoxido de sodio o etoxido de sodio, o se puede usar una mezcla de al menos dos de estas bases.

La temperatura de reaccion, asi como la duracion de la reaccion pueden variar en un intervalo amplio. Las temperaturas de reaccion adecuadas varian de la temperatura ambiente, i.e., aproximadamente 25DC al punto de ebullicion del medio de reaccion. Las duraciones de reaccion adecuadas pueden variar, por ejemplo, de varios minutos a varias horas.

Es posible activar el grupo carboxilico del compuesto de formula general (III) mediante mas reacciones mediante la introduccion de un grupo saliente adecuado segun procedimientos convencionales ampliamente conocidos por los expertos en la tecnica. Preferiblemente, los compuestos de formula general (VI) se transfieren a un cloruro de acido, un anhidrido de acido o un anhidrido mixto, un alquil(C1-C4)ester, un ester activado, tal como p-nitrofenilester. 0tros procedimientos ampliamente conocidos para la activacion de acidos incluyen la activacion con N,Ndiciclohexilcarbodiimida o hexafluorofosfato de benzotriazol-N-oxotris(dimetilamin)fosfonio (B0P).

Si dicho compuesto activado de formula general (III) es un cloruro de acido, se prepara preferiblemente mediante la reaccion del correspondiente acido de formula general (IIa) con cloruro de tionilo o cloruro de oxalilo, en la que dicho agente de cloracion tambien se usa como disolvente. Tambien es posible usar preferiblemente un disolvente adicional. Los disolventes adecuados incluyen hidrocarburos, tales como benceno, tolueno o xileno; hidrocarburos halogenados, tales como diclorometano, cloroformo o tetracloruro de carbono; eteres, tales como dietileter, dioxano, tetrahidrofurano o dimetoxietano. Tambien se pueden usar las mezclas de dos o mas disolventes de una clase o dos o mas disolventes de diferentes clases. La temperatura de reaccion preferida varia de 0DC al punto de ebullicion del disolvente y las duraciones de las reacciones, de varios minutos a varias horas.

Si dicho compuesto activado de formula general (III) es un anhidrido mixto, dicho anhidrido se puede preparar preferiblemente, por ejemplo, mediante la reaccion del correspondiente acido de formula general (IIa) con cloroformiato de etilo en presencia de una base, tal como trietilamina o piridina, en un disolvente adecuado.

La reaccion de formula general (IIa) con un compuesto de formula general HR3 para producir compuestos de formula general I, en la que R3 representa un resto -NR4R5 se lleva a cabo, preferiblemente, en presencia de una base, tal como trietilamina, en un medio de reaccion tal como cloruro de metileno. La temperatura esta preferiblemente en el intervalo de 0°C al punto de ebullicion del medio de reaccion. La duracion de la reaccion puede variar en un amplio intervalo, p.ej., de varias horas a varios dias.

La reaccion de la formula general (IIa) con un compuesto de formula general HR3 para producir compuestos de formula general I, en la que R3 representa opcionalmente al menos un heteroatomo opcionalmente al menos monosustituido saturado o insaturado como miembro de un anillo que contiene un grupo cicloalifatico, que puede estar condensado con un sistema de anillos mono- o policiclico opcionalmente al menos mono-sustituido, o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente al menos mono-sustituido, que puede estar condensado con un sistema de anillos mono- o policiclico opcionalmente al menos mono-sustituido, se puede llevar cabo segun procedimientos convencionales ampliamente conocidos por los expertos en la tecnica, segun, p.ej., Pascual, A., J. Prakt Chem., 1999, 341(7), 695-700; Lin, S. et al., Heterocycles; 2001, 55(2), 265-277; Rao, P. et al., J. Org. Chem., 2000, 65(22), 7323-7344, Pearson D.E y Buehler, C.A., Synthesis, 1972, 533-542 y las referencias citadas en dicha memoria. Las respectivas descripciones se encuentran incorporadas en la presente memoria por referencia y forman parte de la presente revelacion.

Preferiblemente, dicha reaccion se lleva a cabo en presencia de un acido de Lewis, que se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en FeCl3, ZnCl2 y AlCl3, en un medio de reaccion adecuado, tal como tolueno, benceno, tetrahidrofurano o similar. La temperatura esta preferiblemente en el intervalo de 0°C al punto de ebullicion del medio de reaccion, mas preferiblemente, de 15 a 25DC. La duracion de la reaccion puede variar en un amplio intervalo, p.ej., de varios minutos a varias horas.

Las reacciones anteriormente mencionadas que implican la sintesis del anillo de 4,5-dihidro-pirazol o la reaccion de un compuesto que comprende dicho anillo se llevan a cabo bajo una atmosfera inerte, preferiblemente, nitrogeno

o argon, para evitar la oxidacion del sistema de anillos.

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Durante los procedimientos descritos anteriormente, puede ser necesaria y/o deseable la proteccion del grupo sensible o de los reactivos. Se puede efectuar la introduccion de grupos protectores convencionales, asi como su retirada, mediante procedimientos ampliamente conocidos por los expertos en la tecnica.

En otro aspecto mas, la presente invencion tambien proporciona un procedimiento para la preparacion de sales de compuestos de pirazolina sustituida de formula general (I), en el que se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (I) que tiene al menos un grupo basico con al menos un acido inorganico y/o acido organico, preferiblemente, en presencia de un medio de reaccion adecuado. Los medios de reaccion adecuados incluyen, por ejemplo, cualquiera de los anteriormente dados. Los acidos inorganicos adecuados incluyen acido clorhidrico, acido bromhidrico, acido fosforico, acido sulfurico y acido nitrico. Los acidos organicos adecuados son, p.ej., acido citrico, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico o sus derivados, acido p-toluenosulfonico, acido metanosulfonico o acido canfersulfonico.

En otro aspecto mas, la presente invencion tambien proporciona un procedimiento para la preparacion de sales de compuestos de pirazolina sustituida de formula general (I), en el que se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (I) que tiene al menos un grupo acido con una o mas bases adecuadas, preferiblemente, en presencia de un medio de reaccion adecuado. Las bases adecuadas son, p.ej., hidroxidos, carbonatos o alcoxidos, que incluyen cationes adecuados derivados, p.ej., de metales alcalinos, metales alcalinoterreos o cationes organicos, p.ej., [NHnR4-n]+, en la que n es 0, 1, 2, 3 o 4 y R representa un radical alquilo(C1-C4) ramificado o no ramificado. Los medios de reaccion adecuados son, por ejemplo, cualquiera de los dados anteriormente.

Se entendera que el termino "sal" significa cualquier forma del compuesto activo usada segun la invencion, en la que adopta una forma ionica o esta cargado y acoplado con un contraion (un cation o un anion) o esta en disolucion. Esto tambien engloba complejos del compuesto activo con otras moleculas e iones, en concreto, complejos que se han formado mediante interacciones ionicas. Especialmente, esto engloba cualquier sal fisiologicamente aceptable.

Tambien se pueden obtener mediante procedimientos estandar conocidos por los expertos en la tecnica solvatos, preferiblemente, hidratos, de los compuestos de pirazolina sustituida de formula general (I), de los correspondientes N-oxidos o de sus correspondientes sales.

Tambien se pueden obtener compuestos de pirazolina sustituida de formula general I que comprenden anillos saturados, insaturados o aromaticos que contienen atomos de nitrogeno en forma de sus N-oxidos mediante procedimientos ampliamente conocidos por los expertos en la tecnica.

Los expertos en la tecnica entienden que la expresion "compuestos de pirazolina sustituida", como se usa en la presente memoria, engloba derivados, tales como eteres, esteres, asi como complejos de estos compuestos. El termino "derivados", como se usa en la presente solicitud, se define en la presente memoria como un compuesto quimico que ha sido sometido a una derivacion quimica partiendo de un compuesto activo para cambiar (mejorar para un uso farmaceutico) cualquiera de sus propiedades fisicoquimicas, especialmente, lo que se denomina un profarmaco, p.ej., sus esteres y eteres. Los ejemplos de procedimientos ampliamente conocidos para producir un profarmaco de un compuesto activo dado son conocidos por los expertos en la tecnica y se pueden encontrar, p.ej., en Krogsgaard-Larsen et al., "Textbook of Drugdesign and Discovery", Taylor y Francis (abril de 2002). La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la revelacion.

Los expertos en la tecnica entienden que los sustituyentes de los compuestos de la invencion, particularmente, el sustituyente R3, puede conducir a estereoisomeros, que tambien quedan englobados por la presente invencion.

La purificacion y el aislamiento de los compuestos de pirazolina sustituida de la invencion de formula general (I) y sus compuestos intermedios, o una de sus sales o uno de sus N-oxidos, o un solvato o cualquier compuesto intermedio de los mismos, si es necesario, se pueden llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la tecnica, p.ej., procedimientos cromatograficos o recristalizacion.

Los compuestos de pirazolina sustituida de formula general (I) dados a continuacion, los correspondientes Noxidos, asi como sus correspondientes sales y solvatos son toxicologicamente aceptables y, por tanto, son adecuados como sustancias farmaceuticas activas para la preparacion de medicamentos.

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Se ha descubierto que los compuestos de pirazolina sustituida de formula general I dados a continuacion, sus Noxidos, y sus correspondientes sales y solvatos tienen una alta afinidad por los receptores de cannabinoides, particularmente, por los receptores del cannabinoide de tipo 1 (CB1), i.e., son ligandos selectivos del receptor CB1 y actuan como moduladores, p.ej., antagonistas, agonistas inversos o agonistas de estos receptores. En concreto, estos compuestos pirazolinicos muestran una evolucion escasa o nula de la tolerancia durante el tratamiento, particularmente, con respecto a la ingesta de alimentos, i.e., si se interrumpe el tratamiento durante un periodo de tiempo dado y luego se vuelve a retomar, los compuestos pirazolinicos usados en la invencion volveran a mostrar el efecto deseado. Tras finalizar el tratamiento con los compuestos pirazolinicos, se encuentra que continua la influencia positiva en el peso corporal.

Ademas, estos compuestos pirazolinicos muestran una afinidad por el canal de Herg relativamente debil, por lo que se espera un riesgo bajo de prolongacion del intervalo OT para estos compuestos.

En resumen, los compuestos pirazolinicos usados en la invencion se distinguen por un amplio espectro de efectos beneficiosos, mientras que, al mismo tiempo, muestran efectos no deseados relativamente bajos, i.e., efectos que no contribuyen positivamente al o ni siquiera interfieren en el bienestar del paciente.

En concreto, la administracion cronica del antagonista CB1 de la invencion (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1-H-pirazol-3-carboxamida disminuyo significativamente el peso corporal de los animales que se habian vuelto obesos mediante la recepcion de una dieta de cafeteria que contenia una dieta rica en grasas, chocolate y cacahuetes molidos para reflejar la tipica dieta occidental. Tras 28 dias de tratamiento farmacologico, el peso corporal de las ratas que habian recibido (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4diclorofenil)-4,5-dihidro-1-H-pirazol-3-carboxamida era inferior a las de los controles tratados con vehiculo.

Asi pues, otro aspecto de la presente invencion se refiere a un medicamento que comprende al menos un compuesto de pirazolina sustituida de formula general I, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. Es preferible que los compuestos de la invencion esten presentes en el medicamento con un exceso enantiomerico con respecto a su otro enantiomero (que resulta del estereocentro de la posicion 5) de al menos un 90%, mas preferiblemente, de al menos un 95%, e incluso mas preferiblemente, de al menos un 99%. Lo mas preferible es que el medicamento de la invencion comprenda el compuesto de pirazolina sustituida de formula general I en forma pura, i.e., esencialmente libre de su otro enantiomero.

El medicamento de la invencion tambien puede comprender preferiblemente cualquiera de los compuestos pirazolinicos de la invencion o combinaciones de al menos dos de estos compuestos pirazolinicos dados anteriormente.

Dicho medicamento tambien puede comprender cualquier combinacion de uno o mas de los compuestos de pirazolina sustituida de formula general I dada anteriormente, sus correspondientes N-oxidos, sus sales fisiologicamente aceptables o sus solvatos fisiologicamente aceptables.

Preferiblemente, dicho medicamento es adecuado para la modulacion (regulacion) de receptores de cannabinoides, preferiblemente, de receptores del cannabinoide 1 (CB1), para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, trastornos del sistema inmune, trastornos del sistema cardiovascular, trastornos del sistema endocrino, trastornos del sistema respiratorio, trastornos del tracto gastrointestinal o trastornos reproductivos.

Lo particularmente preferible es que dicho medicamento sea adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento de la psicosis.

Tambien se prefiere particularmente que dicho medicamento sea adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos de la alimentacion, preferiblemente, de bulimia, anorexia, caquexia, obesidad y/o diabetes mellitus de tipo II (diabetes mellitus no insulinodependiente), mas preferiblemente, obesidad. El medicamento de la invencion tambien parece ser activo en la profilaxis y/o el tratamiento de los trastornos del apetito, p.ej., los compuestos pirazolinicos de formula general I tambien reducen el deseo por los dulces.

Tambien es particularmente preferible que dicho medicamento sea adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento del cancer, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de cerebro, cancer de huesos, cancer de labio, cancer de boca, cancer de esofago, cancer

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de estomago, cancer de higado, cancer de vejiga, cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer de cuello uterino, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de piel, cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata; mas preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata.

Es particularmente preferible que dicho medicamento sea adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento del abuso del alcohol y/o la adiccion al alcohol, el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina, el abuso de drogas y/o la adiccion a drogas y/o el abuso de medicamentos y/o la adiccion a medicamentos, preferiblemente, para el abuso de drogas y/o la adiccion a drogas y/o el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina.

Por lo tanto, el medicamento de la invencion es activo en el tratamiento de la abstinencia, la reduccion de la ansiedad y la prevencion de recaidas en el consumo de alcohol. El medicamento de la invencion tambien se puede usar en la profilaxis y/o el tratamiento de la adiccion, el abandono del habito de fumar y/o la dependencia del tabaco, incluyendo el tratamiento para la reduccion de la ansiedad y la prevencion de recaidas en el habito de fumar.

Los medicamentos y/o los farmacos que son frecuentemente sometidos a un mal uso incluyen opiaceos, barbituricos, cannabis, cocaina, anfetaminas, fenciclidina, halucinogenos y benzodiazepinas.

El medicamento tambien es adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en trastornos oseos, preferiblemente, osteoporosis (p.ej., osteoporosis vinculada a una predisposicion genetica, deficiencia de hormonas sexuales o envejecimiento), enfermedad osea asociada con el cancer o enfermedad osea de Paget; esquizofrenia, ansiedad, depresion, epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos cerebelosos, trastornos espinocerebelosos, trastornos cognitivos, traumatismo craneal, traumatismo de cabeza, apoplejia, ataques de panico, neuropatia periferica, inflamacion, glaucoma, migrana, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Raynaud, trastornos de temblores, trastornos compulsivos, demencia senil, trastornos timicos, disquinesia tardia, trastornos bipolares, trastornos del movimiento inducidos por medicamentos, distonia, apoplejia endotoxemica, apoplejia hemorragica, hipotension, insomnio, trastornos inmunologicos, placas escleroticas, vomitos, diarrea, asma, trastornos de la memoria, prurito, dolor o para potenciar el efecto analgesico de los analgesicos narcoticos y no narcoticos; o para influir en el transito intestinal.

El medicamento tambien es adecuado para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en demencia y trastornos rotados, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de demencia seleccionados del grupo que consiste en perdida de memoria, demencia vascular, deterioro cognitivo leve, demencia frontotemporal y enfermedad de Pick; trastornos de atracones compulsivos; obesidad juvenil; obesidad inducida por farmacos; depresion atipica, adicciones conductuales; trastornos de deficit de atencion; sindrome de Tourette; inhibicion de conductas relacionadas con recompensas; p.ej., evitar lugares acondicionados, tal como la inhibicion de la preferencia por lugares acondicionados inducida por la cocaina y la morfina; impulsividad; disfuncion sexual; preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de disfuncion sexual seleccionados del grupo que consiste en dificultad erectil y disfuncion sexual femenina; trastornos convulsivos; nauseas; emesis; enfermedad neuroinflamatoria, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de enfermedades neuroinflamatorias seleccionadas del grupo que consiste en esclerosis multiple, trastornos relacionados con la desmielinizacion, sindrome de Guillan-Barre, encefalitis viral y accidentes cerebrovasculares; trastornos neurologicos; espasticidad muscular; lesion cerebral traumatica; lesion de medula espinal; trastornos de inflamacion e inmunomoduladores, preferiblemente, para el tratamiento y/o la profilaxis de uno o mas tipos de inflamacion y trastornos inmunomoduladores seleccionados del grupo que consiste en linfoma cutaneo de linfocitos T, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistemico, sepsis, sarcoidosis, fibrosis pulmonar idiopatica, displasia broncopulmonar, enfermedad retinal, esclerodermia, isquemia renal, infarto de miocardio, isquemia cerebral, nefritis, hepatitis, glomerulonefritis, alveolitis fibrosante criptogenica, psoriasis, rechazo a trasplantes, dermatitis atopica, vasculitis, alergia, rinitis alergica estacional, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria intestinal, obstruccion reversible de las vias respiratorias, sindrome de insuficiencia respiratoria del adulto, enfermedad pulmonar obstructiva cronica y bronquitis; apoplejia cerebral; traumatismo craneoencefalico; trastornos de dolor neuropatico; ulceras gastricas; aterosclerosis y cirrosis de higado.

0tro aspecto de la presente invencion consiste en usar al menos un compuesto de pirazolina sustituida de formula general I dada anteriormente como sustancias activas adecuadas, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N–oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y,

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opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la modulacion de receptores de cannabinoides, preferiblemente, receptores del cannabinoide 1 (CB1), para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, trastornos del sistema inmune, trastornos del sistema cardiovascular, trastornos del sistema endocrino, trastornos del sistema respiratorio, trastornos del tracto gastrointestinal o trastornos reproductivos.

Es particularmente preferible el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de la psicosis.

Tambien se prefiere particularmente el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos alimentarios, preferiblemente, bulimia, anorexia, caquexia, obesidad y/o diabetes mellitus de tipo II (diabetes mellitus no insulinodependiente), mas preferiblemente, obesidad.

Tambien es particularmente preferible el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento del cancer; preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de cerebro, cancer de huesos, cancer de labio, cancer de boca, cancer de esofago, cancer de estomago, cancer de higado, cancer de vejiga, cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer de cuello uterino, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de piel, cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata; mas preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata.

Tambien es particularmente preferible el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento del abuso del alcohol y/o la adiccion al alcohol, abuso de la nicotina y/o adiccion a la nicotina, abuso de drogas y/o adiccion a drogas, abuso de medicamentos y/o adiccion a medicamentos; preferiblemente, el abuso de drogas y/o la adiccion a drogas y/o el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina.

Tambien se prefiere el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos, opcionalmente, en forma de uno de sus correspondientes N-oxidos, una de sus correspondientes sales o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en trastornos oseos, preferiblemente, osteoporosis (p.ej., osteoporosis vinculada a una predisposicion genetica, deficiencia de hormonas sexuales o envejecimiento), enfermedad osea asociada con el cancer o enfermedad osea de Paget; esquizofrenia, ansiedad, depresion, epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos cerebelosos, trastornos espinocerebelosos, trastornos cognitivos, traumatismo craneal, traumatismo de cabeza, apoplejia, ataques de panico, neuropatia periferica, inflamacion, glaucoma, migrana, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Raynaud, trastornos de temblores, trastornos compulsivos, demencia senil, trastornos timicos, disquinesia tardia, trastornos bipolares, trastornos del movimiento inducidos por medicamentos, distonia, apoplejia endotoxemica, apoplejia hemorragica, hipotension, insomnio, trastornos inmunologicos, placas escleroticas, vomitos, diarrea, asma, trastornos de la memoria, prurito, dolor o para potenciar el efecto analgesico de los analgesicos narcoticos y no narcoticos; o para influir en el transito intestinal.

Tambien es particularmente preferible el uso de al menos uno de los respectivos compuestos pirazolinicos, opcionalmente, en forma de uno de los estereoisomeros, preferiblemente, enantiomeros o diastereomeros, un racemato o en forma de una mezcla de al menos dos de los estereoisomeros, preferiblemente, enantiomeros y/o

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diastereomeros, en cualquier proporcion de mezclado, o uno de sus correspondientes solvatos y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en demencia y trastornos rotados, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de demencia seleccionados del grupo que consiste en perdida de memoria, demencia vascular, deterioro cognitivo leve, demencia frontotemporal y enfermedad de Pick; trastornos de atracones compulsivos; obesidad juvenil; obesidad inducida por farmacos; depresion atipica, adicciones conductuales; trastornos de deficit de atencion; sindrome de Tourette; inhibicion de conductas relacionadas con recompensas; p.ej., evitar lugares acondicionados, tal como la inhibicion de la preferencia por lugares acondicionados inducida por la cocaina y la morfina; impulsividad; disfuncion sexual, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de disfuncion sexual seleccionados del grupo que consiste en dificultad erectil y disfuncion sexual femenina; trastornos convulsivos; nauseas; emesis; enfermedad neuroinflamatoria, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de enfermedades neuroinflamatorias seleccionadas del grupo que consiste en esclerosis multiple, trastornos relacionados con la desmielinizacion, sindrome de Guillan-Barre, encefalitis viral y accidentes cerebrovasculares; trastornos neurologicos; espasticidad muscular; lesion cerebral traumatica; lesion de medula espinal; trastornos de inflamacion e inmunomoduladores, preferiblemente, para el tratamiento y/o la profilaxis de uno o mas tipos de inflamacion y trastornos inmunomoduladores seleccionados del grupo que consiste en linfoma cutaneo de linfocitos T, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistemico, sepsis, sarcoidosis, fibrosis pulmonar idiopatica, displasia broncopulmonar, enfermedad retinal, esclerodermia, isquemia renal, infarto de miocardio, isquemia cerebral, nefritis, hepatitis, glomerulonefritis, alveolitis fibrosante criptogenica, psoriasis, rechazo a trasplantes, dermatitis atopica, vasculitis, alergia, rinitis alergica estacional, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria intestinal, obstruccion reversible de las vias respiratorias, sindrome de insuficiencia respiratoria del adulto, enfermedad pulmonar obstructiva cronica y bronquitis; apoplejia cerebral; traumatismo craneoencefalico; trastornos de dolor neuropatico; ulceras gastricas; aterosclerosis y cirrosis de higado.

La demencia es una enfermedad caracterizada por el deterioro progresivo de las funciones cognitivas y de adaptacion social que, finalmente, puede interferir en la capacidad del paciente par vivir de manera independiente. La demencia tambien constituye la incapacidad de utilizar la memoria a corto y largo plazo mas sintomas adicionales, tales como los problemas con el pensamiento abstracto, la capacidad de juicio o la personalidad. Se estima que 18 millones de personas padecen demencia en todo el mundo. Las formas mas comunes de demencia incluyen la enfermedad de Alzheimer (EA) y la demencia vascular. 0tras formas son la demencia frontotemporal y la enfermedad de Pick.

La demencia tambien puede tener un origen vascular. La demencia vascular (enfermedad cerebrovascular aterosclerotica) se considera la segunda demencia mas comun entre ancianos, afectando aproximadamente al 1015% de todos los casos. La EA y la demencia vascular se pueden dar individual o conjuntamente (demencia mixta). En la demencia vascular, los cambios ateroscleroticos de los vasos cerebrales pueden conducir a la reduccion del flujo sanguineo local, provocando multiples pequenas apoplejias (demencia de multi-infarto). La demencia vascular se trata parmacologicamente mediante la profilaxis de la apoplejia y mediante el tratamiento del deficit cognitivo.

La enfermedad de Alzheimer (EA), la forma mas habitual e importante de demencia, es un trastorno neurodegenerativo que se caracteriza por el deterioro progresivo de las funciones cognitivas, tales como el razonamiento abstracto y la memoria. Actualmente, se estima que hay 2 millones de personas afectadas por esta enfermedad en Estados Unidos y 12 millones en todo el mundo. Debido al aumento de la esperanza de vida, se preve que habra mas de 100 millones de pacientes de EA en todo el mundo para el ano 2050. La EA es la enfermedad mas frecuente entre ancianos. La mayoria de los pacientes de la EA tiene una edad de sesenta anos o mas. Mas del 5% de todas las personas con mas de 70 anos tienen una perdida relevante de la memoria debido a la EA.

La EA se caracteriza principalmente por el desarrollo gradual del olvido. En estados mas avanzados de la enfermedad, cada vez se van haciendo mas evidentes otros fallos de la funcion cerebral. Estos incluyen la incapacidad para hablar, escribir y realizar operaciones de aritmetica. Se van deteriorando o desapareciendo la orientacion espaciovisual, tal como aparcar el coche, la capacidad de vestirse adecuadamente o de dar y entender direcciones hacia un lugar. En una etapa tardia de la enfermedad, los pacientes olvidan como usar los objetos y herramientas habituales, aunque conservan el poder motor y la coordinacion necesarios para estas actividades.

La esquizofrenia se caracteriza por un trastorno profundo de la cognicion y la emocion, que afecta a la mayoria de las caracteristicas humanas fundamentales: lenguaje, pensamiento, percepcion, afecto y sentido de autoestima.

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Los sintomas positivos incluyen manifestaciones psicoticas, tales como escuchar voces internas o experimentar otras sensaciones que no tienen un origen claro (alucinaciones) y asignar una significacion o significado no habitual a los hechos normales o tener creencias personales falsas fijas (falsas ilusiones). Los sintomas negativos se caracterizan por vaciamiento afectivo y falta de iniciativas u objetivos (avolicion), perdida de los intereses o placeres habituales (anhedonia), trastornos del sueno y de la alimentacion, estado de animo disforico (estado de animo depresivo, ansioso, irritable o enfadado) y dificultad para concentrarse o centrar la atencion en algo.

La depresion principal es un trastorno con multiples facetas que se caracteriza fundamentalmente por un estado de animo disforico y una perdida de interes o placer por las actividades de las que antes se disfrutaba. 0tros sintomas fisicos y psicologicos incluyen la incapacidad para concentrarse, los trastornos motores (el retardo o la agitacion psicomotora), los sentimientos de perdida de autoestima, el sentimiento injustificado de culpa, pensamientos de suicidio, y trastornos de la alimentacion y del sueno.

Los trastornos de ansiedad son un grupo de sindromes que incluyen el trastorno de ansiedad generalizada, el trastorno de panico, fobias, trastorno obsesivo-compulsivo y trastorno de estres post-traumatico. Aunque cada trastorno tiene sus propias caracteristicas diferentes, todos comparten los sintomas de un aburrimiento excesivo, miedos y terror intensos, hipervigilancia y/o sintomas somaticos en ausencia de una situacion peligrosa.

La funcion sexual normal requiere, entre otras cosas, la capacidad de conseguir y mantener la ereccion del pene. Las estructuras anatomicas principales del pene que participan en la funcion erectil incluyen el cuerpo cavernoso, el cuerpo esponjoso y la tunica albuginea (una capucha de colageno que rodea cada cuerpo). Los cuerpos estan compuestos por una masa de musculo liso (trabecula) que contiene una red de vasos revestidos endoteliales (espacios lacunares). La tumescencia y la ereccion del pene estan provocadas por la relajacion de las arterias y los musculos lisos del cuerpo, a la vez que el cierre de los plexos venosos, conduciendo a aumentar el flujo sanguineo en la red lacunar. La inervacion central y periferica contribuye a la regulacion de la respuesta erectil.

La disfuncion erectil (DE) puede provocar la incapacidad de iniciar, llenar o almacenar el volumen de sangre adecuado en la red lacunar del pene. Dependiendo de la disfuncion subyacente, la DE puede ser vasculogenica, neurogenica, endocrinologica, diabetica, psicogenica o relacionada con medicamentos.

La DE afecto al 10-25% de los hombres de mediana edad y edades avanzadas, y tiene un gran impacto en el bienestar de los hombres afectados. Actualmente, se trata con el uso de inhibidores PDE5, tales como vardenafil, tadalifil y sildenafil. Se puede usar alpostadil intrauretral (prostaglandina E1) en pacientes con los que no se hayan obtenido buenos resultados con agentes orales. Ademas, los dispositivos de constriccion por vacio (DCV) constituyen una terapia no invasiva ampliamente extendida.

La disfuncion sexual femenina (DSF) esta muy extendida, relacionada con la edad y en aumento. Afecta del 30 al 50% de las mujeres. La DSF denota una seleccion de problemas medicos y se clasifica segun los trastornos de (1) deseo, (2) excitacion sexual, (3) orgasmo y (4) dolor sexual, y los sintomas incluyen la disminucion de la lubricacion vaginal, el dolor y las molestias durante la relacion sexual, la disminucion de la excitacion sexual y la dificultad para llegar al orgasmo. A nivel molecular, se ha sugerido la importancia del peptido intestinal vasoactivo (PIV), oxido nitrico (N0) y las hormonas sexuales, tales como los estrogenos y los androgenos, para la funcion sexual femenina. Los tratamientos actuales incluyen la terapia de sustitucion con estrogenos, la metiltestosterona, los inhibidores PDE5, tales como el sildenafil, la L-arginina donante de N0, la prostaglandina E1, la fentolamina y los agonistas de la dopamina como la apomorfina.

El medicamento segun la presente invencion puede estar en cualquier forma adecuada para la aplicacion a seres humanos y/o animales, preferiblemente, seres humanos incluyendo bebes, ninos y adultos, y se puede producir mediante procedimientos estandar conocidos por los expertos en la tecnica. La composicion del medicamento puede variar en funcion de la via de administracion.

El medicamento de la presente invencion se puede administrar, por ejemplo, parenteralmente en combinacion con vehiculos liquidos inyectables convencionales, tales como agua o alcoholes adecuados. Los excipientes farmaceuticos convencionales para inyeccion, tales como agentes estabilizadores, agentes disolventes y tampones, se pueden incluir en tales composiciones inyectables. Estos medicamentos se pueden inyectar, por ejemplo, intramuscular, intraperitoneal o intravenosamente.

Los medicamentos segun la presente invencion tambien se pueden formular en composiciones administrables oralmente que contienen uno o mas vehiculos o excipientes fisiologicamente compatibles, en forma solida o liquida.

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Estas composiciones pueden contener ingredientes convencionales, tales como agentes de union, cargas, lubricantes y agentes humectantes aceptables. Las composiciones pueden adoptar cualquier forma conveniente, tal como comprimidos, nodulos, capsulas, pastillas, soluciones acuosas u oleaginosas, suspensiones, emulsiones o formas en polvo seco adecuadas para su reconstitucion con agua u otro medio liquido adecuado antes de su uso para una liberacion inmediata o retardada.

Las formas orales liquidas de administracion tambien pueden contener ciertos aditivos, tales como edulcorantes, aromatizantes, conservantes y agentes emulsionantes. Las composiciones liquidas no acuosas para la administracion oral tambien se pueden formular con aceites comestibles. Tales composiciones liquidas se pueden encapsular convenientemente p.ej., en capsulas de gelatina en una cantidad de dosis unitaria.

Las composiciones de la presente invencion tambien se pueden administrar topicamente o mediante un supositorio.

La dosis diaria para seres humanos y animales puede variar en funcion de factores basados en las respectivas especies u otros factores, tales como la edad, el sexo, el peso o el grado de la enfermedad, etcetera. La dosis diaria para seres humanos puede estar preferiblemente en el intervalo de 1 a 2.000, preferiblemente, de 1 a 1.500, mas preferiblemente, de 1 a 1.000 miligramos de sustancia activa para su administracion en una o varias tomas al dia.

Procedimientos farmacológicos:

I. Determinación in vitro de la afinidad por los receptores CB1/CB2

a)

La determinacion in vitro de la afinidad de los compuestos de pirazolina sustituida de la invencion hacia los receptores CB1/CB2 se lleva a cabo segun lo descrito en la publicacion de Ruth A. Ross, Heather C. Brockie et al., "Agonist-inverse agonist characterization at CB1 and CB2 cannabinoid receptors of L-759633, L759656 and AM630", British Journal of Pharmacology, 126, 665-672, (1999), mediante lo cual se usan receptores CB1 y CB2 humanos transfectados de Receptor Biology, Inc. El radioligando usado para ambos receptores es [3H]-CP55940. Las respectivas partes de la descripcion se encuentran incorporadas en la presente memoria por referencia y forman parte de la presente revelacion.

b)

Unión a CB1 de cerebelo de rata

Se evaluo la afinidad de union por el receptor CB1 segun una modificacion del procedimiento descrito por Govaerts et al., Eur J Pharmac Sci 23, 233-243 (2004). Las respectivas partes de la descripcion se encuentran incorporadas en la presente memoria por referencia y forman parte de la presente revelacion.

En sintesis, se disecciono cuidadosamente el cerebelo de ratas Wistar macho (250-300 g) sobre hielo y se prepararon homogeneizados con Potter-Helveheim en solucion de Tris-HCl 50mM fria que contenia MgCl2 5mM, EDTA 1mM y sacarosa 0,25M, pH 7,4. Se centrifugo la suspension a 1.000 xg durante 5 minutos. Se recogieron los sobrenadantes y se centrifugaron a 50.000 xg durante 15 minutos. Se volvieron a suspender los sedimentos resultantes en tampon de Tris-HCl sin sacarosa, se homogenizaron y se incubaron durante 15 min a 37°C en un bano con agitador orbital, y se volvio a centrifugar a 50.000 xg durante 15 min. Se pesaron los sedimentos, se volvieron a suspender en tampon de Tris-HCl sin sacarosa, se homogenizaron con Ultraturrax a 13.500 rpm durante 3 x 5 segundos y se tomaron alicuotas en volumenes de 0,9 ml en tubos Eppendorf. Se centrifugaron las alicuotas a 20.800 xg durante 5 minutos, se desecharon los sobrenadantes y se congelaron los sedimentos a -80°C hasta su uso. Se determino la concentracion de proteina total usando el kit basado en el procedimiento Lowry de Bio-Rad. Los experimentos de union competitiva se realizaron en presencia de [3H]-CP 55,940 1nM en tubos de vidrio de silicona que contenian 100 Ig de proteina por tubo resuspendida en un volumen final de 1 ml de Tris-HCl 50mM, MgCl2 5mM, EDTA 1mM, albumina de suero bovino al 0,5% (p/v), pH 7,4. Los compuestos estaban presentes a diversas concentraciones y se determino la union inespecifica en presencia de HU-210 10IM. Tras una incubacion de 1 hora a 30°C, se filtro rapidamente la suspension a traves de filtros de fibra GF/B pretratados con PEI al 0,5% sobre un cosechador de 96 pocillos, y se lavo tres veces con 3 ml de tampon de union enfriado sobre hielo sin albumina de suero bovino. Se midio la radiactividad sobre los filtros con un contador Winspectral 1414 de Wallac por centelleo liquido en 6 ml de Exoscint H (National Diagnostics, RU). Los analisis se hicieron por triplicado.

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Se analizaron los datos de union mediante regresion no lineal con el programa informatico GraphPad Prism, version

3.03.

II. Sistema de bioanálisis in vivo para la determinación de la actividad de los cannabinoides

Modelo Tetrad murino

Se sabe que las sustancias con afinidad por los receptores de cannabinoides producen una amplia seleccion de efectos farmacologicos. Tambien se sabe que la administracion intravenosa de una sustancia con afinidad por los receptores de cannabinoides en ratones produce analgesia, hipotermina, sedacion y catalepsia. Individualmente, ninguno de estos efectos se puede considerar prueba de que una sustancia analizada tenga afinidad por los receptores de cannabinoides, pues todos estos efectos son comunes en diversas clases de agentes centralmente activos. En cualquiera caso, las sustancias que muestran todos estos efectos, i.e., las sustancias que son activas en el denominado modelo Tetrad, se consideran con afinidad por los receptores de cannabinoides. Ademas, se ha observado que los antagonistas de los receptores de cannabinoides son muy efectivos en el bloqueo de los efectos de un agonista de cannabinoides en el modelo Tetrad murino.

El modelo Tetrad se describe, por ejemplo, en la publicacion de A.C. Howlett et al., International Union of Pharmacology XXVII. "Classification of Cannabinoid Receptors", Pharmacol Rev 54, 161-202 , 2002 y David R. Compton et al., "In-vivo Characterization of a Specific Cannabinoid Receptor Antagonist (SR141716A): Inhibition of Tetrahydrocannbinol-induced Responses and Apparent Agonist Activity", J. Pharmacol. Exp. Ther. 277, 2, 586-594, 1996. Las correspondientes partes de la descripcion se encuentran incorporadas en la presente memoria por referencia.

Material y procedimientos

Se usaron ratones NMRI macho con un peso de 20-30 g (Harlan, Barcelona, Espana) en la totalidad de los siguientes experimentos.

Antes de probar los procedimientos conductuales dados a continuacion, se aclimatan los ratones a un entorno experimental. Se determinan los valores de control previos al tratamiento para la latencia de la analgesia mediante el procedimiento de la placa caliente (en segundos), la temperatura rectal, la sedacion y la catalepsia.

Para determinar la actividad agonista de la sustancia que se va a analizar, se inyecto intravenosamente la sustancia por analizar o solo el vehiculo a los ratones. 15 minutos despues de la inyeccion, se midio la latencia de la analgesia mediante el procedimiento de la placa caliente.

La temperatura rectal, la sedacion y la catalepsia se midieron 20 minutos despues de la inyeccion.

Para determinar la actividad antagonista, se usa un procedimiento identico al usado para la determinacion de los efectos agonistas, pero con la diferencia de que la sustancia cuya actividad antagonista se va a evaluar se inyecta 5 minutos antes de la inyeccion intravenosa de 1,25 mg/kg de Win-55,212, un conocido agonista de los receptores de cannabinoides.

Analgesia mediante la placa caliente

La analgesia mediante el procedimiento de placa caliente se determina segun el procedimiento descrito en Woolfe

D. et al. "The evaluation of analgesic action of pethidine hydrochloride (Demerol)", J. Pharmacol. Exp. Ther. 80, 300-307,1944. La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

Se colocan los ratones sobre una placa caliente (Harvard Analgesimeter) a 55 ± 0,5DC hasta que muestran una sensacion de dolor mediante el lamido de las patas y saltando, y se registra el momento de estas sensaciones. Esta lectura se considera el valor de referencia (R). El limite de tiempo maximo hasta el que se permite que los ratones se mantengan en la placa caliente en ausencia de cualquier respuesta dolorosa es de 40 segundos para evitar la lesion cutanea. Este periodo se denomina el tiempo de corte (TC).

Ouince minutos despues de la administracion de la sustancia que se va a analizar, se vuelven a colocar los ratones sobre la placa caliente y se repite el procedimiento anteriormente descrito. Este periodo se denomina lectura del post-tratamiento (PT).

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El grado de analgesia se calcula mediante la formula:

% MEP de analgesia = (PT–R) / (TC–R) x 100

MPE = Maximo efecto posible.

Determinación de la sedación y la ataxia

La sedacion y la ataxia se determinan segun el procedimiento descrito en Desmet L. K. C. et al. "Anticonvulsive properties of Cinarizine and Flunarizine in Rats and Mice", Arzneim. –Forsch. (Frug Res) 25, 9, 1975. La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

El sistema de puntuacion seleccionado es:

0: sin ataxia;

1: dudoso;

2: clara calma y tranquilidad;

3: ataxia marcada; tanto antes como despues del tratamiento.

El porcentaje de sedación se determina según la fórmula:

% de sedación = media aritmética / 3 x 100 Hipotermia: La hipotermia se determina segun el procedimiento descrito en David R. Compton et al. "In-vivo Characterization of a Specific Cannabinoid Receptor Antagonist (SR141716A) Inhibition of Tetrahydrocannbinol- induced Responses and Apparent Agonist Activity", J. Pharmacol Exp Ther. 277, 2, 586-594, 1996. La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

Se determinan las temperaturas rectales de referencia con un termometro (Yello Springs Instruments Co., Panlabs) y se inserta una sonda de termistor hasta 25 mm antes de la administracion de la sustancia que se va a analizar. Se vuelve a medir la temperatura rectal 20 minutos despues de la administracion de las sustancias que se van a analizar. Se calcula la diferencia de temperatura para cada animal, considerandose que las diferencias de � -2DC representan actividad.

Catalepsia:

La catalepsia se determina segun el procedimiento descrito en Alpermann H. G. et al. "Pharmacological effects of Hoe 249: A new potential antidepressant", Drugs Dev. Res. 25, 267-282. 1992. La respectiva descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

Se evalua el efecto cataleptico de la sustancia que se va a analizar segun la duracion de la catalepsia, para lo que se coloca a los animales boca abajo con las patas delanteras sobre la parte superior del bloque de madera. El sistema de puntuacion seleccionado es:

Catalepsia durante: mas de 60 segundos = 6; 50-60 segundos = 5; 40-50 segundos = 4; 30-40 segundos = 3; 20-30 segundos = 2; 510 segundos = 1 y menos de 5 segundos = 0.

El porcentaje de catalepsia se determina segun la siguiente formula:

% Catalepsia = media aritmética / 6 x 100

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III. Análisis in vivo de la actividad antiobesidad

a) Tratamiento agudo

Se habituaron las ratas tratadas de la manera habitual a un ciclo invertido de 12/12 h y recibieron una administracion oral aguda tanto del compuesto de analisis como de la solucion salina. Tras la administracion, se midio la ingesta de alimento acumulada (g) a las 6 h y a las 24 h. Tras ello, se midio la diferencia de peso corporal entre los animales tratados con control y con compuesto. Se trata de una variacion del analisis segun Colombo et al., segun lo descrito mas adelante.

b) Tratamiento a largo plazo

La prueba in vivo de la actividad antiobesidad de los compuestos pirazolinicos de la invencion se lleva a cabo segun lo descrito en la publicacion de G. Colombo et al., "Appetite Suppression and Weight Loss after the Cannabinoid Antagonist SR 141716"; Life Sciences, 63 (8), 113-117, (1998). La respectiva parte de la descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

IV. Prueba in vivo de la actividad antidepresiva

La prueba in vivo de la actividad antidepresiva de los compuestos pirazolinicos de la invencion en la prueba de desesperacion en agua se lleva a cabo segun lo descrito en la publicacion de E.T. Tzavara et al., "The CB1 receptor antagonist SR141716A selectively increases monoaminergic neurotransmission in the medial prefrontal cortex: implications for therapeutic actions"; Br. J. Pharmacol. 2003, 138(4):544:53. La respectiva parte de la descripcion se encuentra incorporada en la presente memoria por referencia y forma parte de la presente revelacion.

V. Determinación del efecto de una administración continuada de los compuestos de la invención sobre el peso corporal en ratas

Se midio el peso de los animales durante 36 dias, y se agruparon los datos en 3 periodos para su analisis: Periodo 1, dias 1-8 (periodo para la adaptacion de los animales a las condiciones ambientales: una semana sin tratamiento mas el primer dia de tratamiento); Periodo 2, dias 9-22 (periodo de tratamiento: dos semanas); Periodo 3, dias 2336 (periodo de tratamiento de escape: dos semanas). La administracion de los farmacos comenzo el dia 8, inmediatamente despues de pesar al animal, y finalizo el dia 21. El periodo de tratamiento varia entre un dia despues de la primera administracion y un dia despues de la ultima administracion. Los farmacos se administraron

i.p. una vez al dia. A efectos comparativos, se transformaron los pesos absolutos en porcentajes relativos (se dividio cada peso entre el del dia 8 y se multiplico por 100). Se formaron tres grupos de tratamiento: vehiculo, Npiperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida racemica (10 mg/kg) y (R)N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida (10 mg/kg). El numero de animales fue de 10 para el grupo de la (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1Hpirazol-3-carboxamida y de 9 para el grupo de la N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro1H-pirazol-3-carboxamida racemica y para el grupo de vehiculo. En el grupo de vehiculo, murio un animal, mientras que en el grupo racemico, se excluyo un animal porque su peso descendio durante 5 dias en el periodo de post-tratamiento. Todos los resultados se expresan como la media ± EEM

Se evaluo la dependencia del peso corporal (expresado como un porcentaje relativo al dia 8) en el tiempo (numero de dias tras la inclusion en el estudio) y el tratamiento mediante un analisis de varianza de dos factores (tiempo y tratamiento) (AN0VA) con medidas repetidas en el factor tiempo. El analisis se realizo en los periodos 2 y 3, por separado, y considerando la primera y la segunda semana en cada periodo. Se analizaron las diferencias entre los pares de curvas (tratamientos) usando los contrastes apropiados en el test AN0VA. Tambien se tuvo en cuenta la posible interaccion entre el tiempo y el tratamiento, incluyendo la correccion de Greenhouse-Geisser (G-G). Se considero como significativo el valor de P � 0,05.

La Figura 1 muestra el efecto de la administracion continuada (i.p. una vez al dia) de la N-piperidinil-5-(4clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida racemica (A), la (R)-N-piperidinil-5-(4clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida (B) y vehiculo sobre el peso corporal en ratas. El compuesto R muestra una accion mas potente que el racemato, asi como una recuperacion del peso mas lenta.

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VI. Determinación in vitro del antagonismo hacia el receptor CB1

Preparación de las membranas

Se cultivaron celulas de ovario de hamster chino (CH0) que expresaban establemente el receptor del cannabinoide 1 (CB1) humano recombinante en mezcla de nutrientes F12 de Ham complementada con suero bovino fetal desactivada con calor al 10%, L-glutamina 2mM, 50 U/ml de penicilina, 50 U/ml de estreptomicina y 0,5 mg/ml de geneticina. Para obtener celulas, se lavaron los matraces de cultivo dos veces con solucion salina tamponada con fosfato y se rasparon. Despues, se recogieron las celulas por centrifugacion (200 xg, 10 min) y se almacenaron en seco a -80°C. Se homogenizaron las celulas en HEPES 20mM enfriado con hielo, EDTA 10mM (pH 7,5) y se centrifugaron a 40.000 xg durante 15 min a 4°C. Se volvieron a suspender los sedimentos de membrana en HEPES 20mM, EDTA 0,1mM (pH 7,5) y se centrifugaron durante 15 min a 4DC. Se volvieron a suspender los sedimentos finales de membrana en HEPES 20mM, EDTA 0,1mM (pH 7,5) y se dividieron en alicuotas y se almacenaron a 80°C hasta su uso.

Ensayo de unión a [35S]GTP�S:

La reaccion se llevo a cabo en placas de 96 pocillos. Se incubaron las membranas (15 Ig de proteina/pocillo) durante 60 min a 30°C en tampon (HEPES 50mM, KCl 100mM, MgCl2 5mM, EDTA 1mM, albumina de suero bovino al 0,1% p/vol, GDP 5IM, saponina (10 Ig/ml), [35S]GTP�S 0,5nM, pH 7,4) con compuesto a una concentracion final de 1IM bien en ausencia o en presencia de agonista WIN 55,212-2 entre 3nM y 3IM. Se finalizo la incubacion mediante filtracion rapida a traves de una fibra de vidrio FB Multiscreen de Millipore y se aclaro dos veces con tampon de analisis enfriado con hielo. Se secaron las placas de filtro y se anadieron 30 Il de liquido de centelleo. Se determino la radiactividad usando una Wallac Microbeta Tirlux. Se realizo cada experimento al menos por duplicado. Se realizo sistematicamente un experimento de dosis-respuesta de WIN 55,212-2 bien solo o en presencia de Rimonabant (1IM).

Cálculos:

Se resto la media de la union a [35S]GTP�S de referencia de todos los datos de union. Para comparar los resultados del antagonismo entre las campanas de rastreo, el 100% fue definido como la diferencia entre el efecto agonista maximo de solo WIN 55,212-2 y el efecto antagonista maximo debido a WIN 55,212-2 mas Rimonobant (1IM).

Otros procedimientos:

Consumo de alcohol

El siguiente protocolo se puede usar para evaluar los efectos del consumo de alcohol en ratas hembra con preferencia por el alcohol (P) (p.ej., criadas en la Universidad de Indiana) con un amplio historial de consumo. La siguiente referencia proporciona una descripcion detallada de Prats: Lumeng, L, et al.,"Different sensitivities to ethanol in alcohol-preferring and-nonpreferring rats", Pharmacol, Biochem Behav., 16, 125-130 (1982).

Se permite a las ratas hembra 2 horas de acceso al alcohol (10% (v/v) y agua, 2 botellas a elegir) diariamente al comenzar el ciclo de oscuridad. Se mantienen las ratas en un ciclo inverso para facilitar las interacciones de los experimentadores. Se asignan los animales inicialmente a cuatro grupos con un consumo de alcohol equiparado: Grupo 1: vehiculo; Grupo 2: control positivo (p.ej., 5,6 mg/kg de AM251); Grupo 3: baja dosis del compuesto de prueba; y Grupo 4: alta dosis del compuesto de prueba. Los compuestos de prueba se mezclan en general en un vehiculo de ciclodextrina al 30% (p/v) en agua destilada a un volumen de 1-2 ml/kg. Las inyecciones de vehiculo se aplican a todos los grupos durante los dos primeros dias del experimento. A esto, le siguen dos dias de inyecciones de farmaco (a los grupos apropiados) y un ultimo dia de inyecciones de vehiculo. Durante los dias de inyeccion de farmaco, los farmacos se administran s.c. 30 minutos antes de un periodo de acceso al alcohol de 2 horas. Se mide el consumo de alcohol de todos los animales durante el periodo de prueba y se hace una comparacion entre los animales tratados con farmaco y los tratados con vehiculo para determinar los efectos de los compuestos sobre la conducta de consumo de alcohol.

Se pueden realizar otros estudios de consumo utilizando ratones C57BI/6 hembra (Charles River). Varios estudios han demostrado que esta cepa de ratones consumira facilmente alcohol con una manipulacion escasa o nula (Middaugh et al., "Ethanol Consumption by C57BU6 Mice: Influence of Gender and Procedural Variables" Alcohol, 17 (3),175-183, 1999; Le et al., "Alcohol Consumption by C57BL/6, BALA/c, and DBA/2 Mice in a Limited AccessParadigm" Pharmacology Biochemistry and Behavior, 47, 375-378,1994).

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Por ejemplo, tras su llegada, se enjaulan los ratones individualmente y se les ofrece un acceso ilimitado a comida en polvo para ratas, agua y una solucion alcoholica al 10% (p/v). Tras 2-3 semanas de este acceso ilimitado, se restringe el agua durante 20 horas y se restringe el alcohol a un acceso diario de solo 2 horas. Esto se hace de manera que el periodo de acceso sea durante las dos ultimas horas del periodo de oscuridad del ciclo de luz.

Una vez estabilizada la conducta de consumo de alcohol, comienza la prueba. Los ratones se consideran estables cuando el consumo medio de alcohol durante 3 dias es un 20% de la media del total de los 3 dias. El dia 1 de la prueba consiste en que todos los ratones reciben la inyeccion de vehiculo (s.c. o i.p.). De treinta a 120 minutos despues de la inyeccion, se permite el acceso al alcohol y al agua. Se calcula el consumo de alcohol durante ese dia (g/kg) y se asignan los grupos de manera que todos los grupos tengan un consumo de alcohol equivalente. El dia 2 y 3, los ratones reciben una inyeccion con vehiculo o farmaco y se sigue el mismo protocolo seguido el dia anterior. El dia 4 es de limpieza y no se aplica ninguna inyeccion. Se analizan los datos usando AN0VA con medidas repetidas. Se vuelve a comparar el cambio en el consumo de agua o alcohol con el del vehiculo para cada dia de la prueba. Los resultados positivos se interpretarian como un compuesto que fue capaz de reducir significativamente el consumo de alcohol sin tener efecto en el consumo de agua.

Procedimientos de consumo de oxígeno:

Se mide el consumo de oxigeno del cuerpo entero usando un calorimetro indirecto (0xymax de Columbus Instruments, Columbus, 0H) en ratas Sparague Dawley macho (en caso de usarse otra cepa de ratas o ratas hembra, se especificara). Se colocan las ratas (p.ej., peso corporal de 300-380 g) en las camaras del calorimetro y se colocan las camaras en monitores de actividad. Estos estudios se realizan durante el ciclo de luz. Antes de medir el consumo de oxigeno, se alimentan las ratas con comida estandar a voluntad. Durante la medicion del consumo de oxigeno, no hay alimento. Se miden el consumo de oxigeno previo a la dosis de referencia y la actividad ambulatoria cada 10 minutos durante 2,5 a 3 horas. Al final del periodo de predosificacion de referencia, se abren las camaras y se administra a los animales una sola dosis de compuesto (el intervalo de dosis habitual es de 0,001 a 10 mg/kg) mediante alimentacion forzada oral (u otra via de administracion segun lo especificado, i.e., s.c., i.p., i.v.). Los farmacos se preparan en metilcelulosa, agua u otro vehiculo especificado (los ejemplos incluyen PEG400, ciclodextrano beta al 30% y propilenglicol). Se miden el consumo de oxigeno y la actividad ambulatoria cada 10 minutos durante otro periodo posterior a la dosificacion de 1-6 horas.

El programa informatico del calorimetro 0xymax calcula el consumo de oxigeno (ml/kg/h) en base al caudal de aire que pasa a traves de las camaras y la diferencia del contenido de oxigeno en los puertos de entrada y de salida. Los monitores de actividad tienen 15 haces de luz infrarroja separados unos 2,5 cm sobre cada eje, la actividad ambulatoria se registra cuando se rompen dos haces consecutivos, y los resultados se registran como recuentos.

Se calcula el consumo de oxigeno en reposo antes y despues de la dosificacion haciendo la media de los valores de consumo cada 10 min, excluyendo los periodos de actividad ambulatoria elevada (recuento de actividad ambulatoria � 100) y excluyendo los 5 primeros valores del periodo previo a la dosificacion y el primer valor del periodo posterior a la dosificacion. El cambio en el consumo de oxigeno se presenta como un porcentaje y se calcula dividiendo el consumo de oxigeno en reposo tras la dosificacion entre el consumo de oxigeno previo a la dosificacion x 100. Los experimentos se realizaron comunmente con n = 4-6 ratas y los resultados presentados son la media +/- EEM.

Interpretacion:

Un aumento del consumo de oxigeno de � 10% se considera un resultado positivo. Historicamente, las ratas tratadas con vehiculo no tienen ningun cambio en el consumo de oxigeno con respecto al valor de referencia previo a la dosificacion.

Dependencia de la nicotina

Se puede usar un modelo de autoadministracion de nicotina intravenosa o modelo de preferencia por un lugar para evaluar los efectos de un compuesto de prueba en la dependencia de la nicotina (vease, p.ej., Vastola, et al. Physiol. Behav. 77:107-114, 2002; Brower, et al., Brain Res. 930:12-20, 2002).

Preferencia por un lugar

En este estudio, se usan ratas Sprague-Dawley (Vastola, et al., 2002). Se enjaulan los animales en un ciclo de iluminacion de 12 h/ 12 h a una temperatura controlada con acceso de alimento y agua a voluntad. El

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acondicionamiento y la prueba se realizan en una camara dividida en dos compartimentos con una puerta de separacion entre ellos. Se graba con una camara de video el comportamiento de los animales.

Los animales son habituados al procedimiento de inyeccion durante varios dias. Luego, se colocan los animales en la camara de prueba y se les ofrece acceso libre a ambos compartimentos. Se determina la preferencia inicial por un determinado compartimento. Para los ensayos de condicionamiento, se inyecta nicotina a los animales y se les restringe el paso al compartimento no preferido, o se inyecta solucion salina a los animales y se les restringe el paso al compartimento preferido. El dia de la prueba, se retira la puerta de separacion de los compartimentos, se coloca al animal en el centro de la camara y se permite que se mueva libremente entre los compartimentos. Se registra el tiempo que pasa en cada uno de los compartimentos. La preferencia por ocupar el compartimento con nicotina se produce tras los efectos de refuerzo condicionado de nicotina.

Autoadministración

La autoadministracion en animales es una variable predictiva del posible abuso de un compuesto en seres humanos. Las modificaciones realizadas a este procedimiento tambien se pueden usar para identificar los compuestos que evitan o bloquean las propiedades que refuerzan las caladas susceptibles de un posible abuso. Un compuesto que extingue la autoadministracion de una calada puede evitar el abuso de dar caladas o su dependencia.

En este estudio, se usan ratas Sprague-Dawley. Inicialmente, se enjaulan los animales en un ciclo de iluminacion de 12 h/ 12 h a una temperatura controlada con acceso de alimento y agua a voluntad. Luego se implantan cateteres yugulares con salida a traves de la espalda a los animales, y se coloca a cada animal en una camara operante individual (Brower, et al., 2002). Se conectan los cateteres a una bomba de jeringa dirigida por ordenador ubicada fuera de la camara. La camara contiene dos palancas con una luz verde sobre cada palanca. La luz se ilumina cuando hay nicotina disponible.

En una prueba de autoadministracion, se colocan los animales en las camaras operantes y se asignan aleatoriamente las palancas activas e inactivas. Cada respuesta sobre la palanca activa produce una infusion de nicotina. Las presiones en la palanca inactiva no tienen efecto, pero tambien se registran. Luego se preparan los animales para la autoadministracion de nicotina durante un periodo establecido de tiempo teniendo acceso a dar caladas durante cada sesion diaria. El encendido de la luz de la camara senaliza el comienzo de la sesion y la disponibilidad de nicotina. Cuando la sesion finaliza, se apaga la luz. Inicialmente, la infusion de nicotina se produce cada vez que se presiona la palanca activa. Una vez establecida la conducta de presion de palanca, se aumenta el numero de presiones necesario para producir una infusion de nicotina. Tras obtener la autoadministracion de nicotina estable, es posible evaluar el efecto de un compuesto de prueba sobre la conducta reforzada hacia la nicotina. La administracion de este compuesto de prueba antes de la sesion puede bien potenciar, extinguir o no cambiar la conducta de autoadministracion. Las pruebas se realizan cada dos dias, y se controla el orden de administracion de las dosis del compuesto de prueba.

EXPERIMENTOS DE ALZHEIMER/DEMENCIA

Tarea del laberinto acuático de Morris

El laberinto acuatico de Morris es una prueba conductual in vivo para medir el aprendizaje de la orientacion espacial y la memoria a traves de una tarea aprendizaje complejo. Es muy adecuada para probar compuestos que potencian el aprendizaje y la memoria. Se llena un tanque o una piscina circular (2 m de diametro, 0,7 m de altura) de agua y se coloca una plataforma de 10 cm2 1-1,5 cm por debajo de la superficie del agua en una ubicacion definida dentro de la piscina. La plataforma de escape no es visible para el animal que nada en el tanque de agua. Para el experimento, se mete una rata o un raton en la piscina para que nade libremente.

Los animales tienen la tarea de localizar la plataforma sumergida, y se mide el tiempo y la distancia necesarios para recuperarla satisfactoriamente. Se proporcionan multiples senales mas del laberinto mediante mobiliario en la sala, incluyendo escritorios, equipamiento informatico, un segundo tanque de agua, la presencia del experimentador y una radio colocada sobre una estanteria a un volumen suave.

Antes de la administracion del compuesto de prueba, se preparan los animales de la manera habitual en la tarea 4 veces al dia durante 5 dias. Los compuestos de analisis se administran oral o intraperitonealmente el dia del experimento en un momento definido (p.ej., 30 minutos antes de la primera prueba de natacion). Los animales

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control reciben el correspondiente vehiculo que no contiene compuesto de prueba. Los compuestos activos producen tiempos y distancias menores para localizar la plataforma (i.e., cuanto mejor recuerda el animal la ubicacion de la plataforma, menor sera la distancia que recorre y mas rapido alcanzara la plataforma).

La prueba tambien se puede llevar a cabo usando animales transgenicos o con un deterioro cognitivo. El deterioro cognitivo es provocado bien por una edad avanzada o experimentalmente, mediante lesiones cerebrales, tales como lesiones bilaterales de la corteza entorrinal de las ratas. Tales lesiones se pueden producir mediante inyecciones intracerebrales de la excitotoxina acido ibotenico.

Tarea de reconocimiento de objetos

La tarea de reconocimiento de objetos se usa para evaluar los efectos de los compuestos en el rendimiento cognitivo de los roedores. Se coloca una rata en un campo abierto en el que hay dos objetos identicos. Las ratas inspeccionan ambos objetos durante el ensayo inicial de la prueba. Tras un cierto intervalo de retencion (p.ej., 24 horas), se lleva a cabo un segundo ensayo. Aqui, se colocan en el campo abierto uno de los dos objetos del primer ensayo (el objeto "familiar") y un nuevo objeto, y se mide el tiempo de inspeccion de cada uno de los objetos. La buena retencion se refleja en mayores tiempos de exploracion para el nuevo objeto en comparacion con el objeto "familiar".

La administracion de un supuesto potenciador de la cognicion antes del primer ensayo permite predominantemente la evaluacion de los efectos sobre la adquisicion y sobre los procedimientos de consolidacion. La administracion del compuesto de prueba tras el primer ensayo permite evaluar los efectos sobre los procedimientos de consolidacion, mientras que la administracion antes del segundo ensayo permite medir los efectos sobre los procedimientos de recuperacion.

Tarea de evasión pasiva

La tarea de evasion pasiva evalua el rendimiento de la memoria en ratas y ratones. La evasion inhibidora usa un aparato que consiste en una caja con dos compartimentos separados por una puerta de guillotina que el experimentador puede manejar. Uno de los compartimentos esta iluminado con una luz brillante y el otro esta a oscuras. Un umbral de 2 cm separa los dos compartimentos cuando se eleva la puerta de guillotina 15 cm. Cuando la puerta esta abierta, la iluminacion del compartimento oscuro es de aproximadamente 2 lux. La intensidad de la luz es de aproximadamente 500 lux en el centro del suelo del compartimento iluminado.

Se dan sesiones de habituacion, una sesion de descarga y una sesion de retencion separadas por intervalos de 24 horas. Durante las sesiones de habituacion y la sesion de retencion, se deja que la rata explore el aparato durante 300 segundos. Se coloca la rata en el compartimento de luz, mirando hacia la pared opuesta a la puerta de guillotina. Tras un periodo de aclimatacion de 15 segundos, se abre la puerta de guillotina, de manera que se puede acceder libremente a todas las partes del aparato. Las ratas normalmente evitan las zonas muy iluminadas y entraran en el compartimento oscuro en pocos segundos.

En la sesion de descarga, se baja la puerta de guillotina situada entre los compartimentos en cuanto la rata entra en el compartimento oscuro con todas las patas y se aplica una descarga codificada en las patas de 1mA durante 2 segundos. Luego se retira la rata del aparato y se devuelve a su jaula. El procedimiento durante la sesion de retencion es identico al de las sesiones de habituacion.

La latencia por etapas, es decir, la primera latencia de entrar en el compartimento oscuro (en segundos) durante la sesion de retencion es un indice del rendimiento de la memoria del animal: se supone que si la latencia de entrada al compartimento oscuro es mayor el animal tiene una mejor retencion. Se administra un compuesto de prueba 30 minutos antes de la sesion de descarga, junto con 1 mg/kg de escopolamina. La escopolamina afecta al rendimiento de la memoria durante la sesion de retencion 24 horas posterior. Si el compuesto de prueba aumenta la latencia de entrada en comparacion con los controles tratados con escopolamina, se considera que el animal posee una actividad potenciadora de la cognicion.

Tarea de alternancia espontánea en un laberinto en forma de T

La tarea de alternancia espontanea en un laberinto en forma de T (TeMCAT) evalua el rendimiento de la memoria espacial en ratones. Se disponen puertas de guillotina en el brazo inicial y en los dos brazos finales del laberinto en forma de T que el experimentador podra manejar manualmente. Al comenzar el entrenamiento, se coloca un raton

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en el brazo inicial. En el primer ensayo, se bloquea bien el brazo final izquierdo o el derecho bajando la respectiva puerta de guillotina (ensayo forzado).

Una vez liberado el raton del brazo inicial, explorara el laberinto y, finalmente, entrara en el brazo final que este abierto y volvera a la posicion inicial, en donde quedara confinado durante 5 segundos al bajar la puerta de guillotina. Luego, el animal puede elegir libremente entre el brazo final izquierdo o el derecho (todas las puertas de guillotina abiertas) durante 14 ensayos mas (ensayos de libre eleccion). En cuanto un raton entra en un brazo final, el otro brazo se cierra. El raton finalmente vuelve al brazo inicial y es libre de visitar cualquier brazo que desee tras haber sido confinado en el brazo inicial durante 5 segundos. Tras finalizar los 14 ensayos de libre eleccion en una sesion, el animal es retirado del laberinto.

Se calcula el porcentaje de alteraciones de los 14 ensayos. Se analiza este porcentaje y el tiempo total necesario para completar el primer ensayo forzado y los 14 ensayos de libre eleccion posteriores (en segundos). Ademas, se pueden inducir deficits cognitivos mediante la inyeccion de escopolamina 30 minutos antes de iniciar la sesion de entrenamiento. Un potenciador de la cognicion, administrado antes de la sesion de entrenamiento, antagonizara, al menos parcialmente, la reduccion inducida por escopolamina de la tasa de alteraciones espontaneas.

Modelo de depresión

Se puede usar un modelo de natacion forzada o de suspension por la cola para evaluar la eficacia de compuestos antidepresivos (vease, p.ej., Porsolt, et al., Nature 266:730-732, 1977; Stem, et al., Psychopharmacology 85:367370, 1985).

Prueba de natación forzada

Se colocan ratas o ratones en un cilindro lleno de agua a 23-25DC de donde es imposible escapar. Inicialmente, los animales forcejean y tratan de escapar, pero al final, adoptan una postura inmovil caracteristica y dejan de intentar escapar, a excepcion de pequenos movimientos necesarios para mantener la cabeza fuera del agua. Se administra a los ratones un compuesto y un observador mide la actividad (nadar o trepar) o la inmovilidad. La inmovilidad es considerada por algunos como el reflejo de una "conducta de desesperacion", en la que los animales dejan de forcejear para escapar de la situacion de aversion. Una amplia variedad de antidepresivos clinicamente usados (TCA, MA0I, SSRI, atipicos) disminuye la inmovilidad en esta prueba, que tiene una buena validez predictiva en tanto en cuanto detecta los antidepresivos con diferentes mecanismos de accion, pero una validez conceptual debil. Se producen al menos dos patrones conductuales activos distintos mediante farmacos antidepresivos farmacologicamente selectivos. Los inhibidores selectivos de la reabsorcion de la serotonina aumentan la conducta de nadar, mientras que los farmacos que actuan fundamentalmente para aumentar los niveles extracelulares de norepinefrina o dopamina aumentan la conducta de trepar. Hay falsos positivos (psicoestimulantes), pero relativamente pocos falsos negativos (agonistas beta-adrenergicos). La prueba es sensible a los efectos de relajacion muscular (benzodiazepinas) y sedantes (neurolepticos), que conducen a aumentar la inmovilidad. Los falsos positivos y los falsos negativos a menudo se pueden rastrear midiendo si el compuesto produce estimulacion locomotora o sedacion.

Prueba de suspensión por la cola

Cuando son suspendidos por la cola, los ratones inicialmente forcejearan e intentaran escapar, y luego alternaran los intentos activos por escapar y la inmovilidad. En esta prueba, se administra a los ratones un compuesto, y un observador mide la inmovilidad durante 6 min. Porsolt describe la conducta inmovil como una "conducta de desesperacion" en el que los animales dejan de forcejear por escapar de la situacion de aversion. Una amplia variedad de antidepresivos clinicamente usados (triciclicos, MA0I, SSRI y atipicos) disminuyen la inmovilidad en este modelo. La prueba tiene una buena validez predictiva para la actividad antidepresiva y funciona para la mayoria de las clases de antidepresivos, pero con algunos falsos positivos (psicoestimulantes). La prueba es sensible a los efectos de relajacion muscular (benzodiazepinas) y sedantes (neurolepticos), que conducen a aumentar la inmovilidad. Los falsos positivos y los falsos negativos a menudo se pueden rastrear midiendo si el compuesto produce estimulacion locomotora o sedacion. Se han encontrado diferencias entre cepas de ratones en la prueba de suspension por la cola. La prueba de suspension por la cola tiene cierta validez aparente, pero su validez conceptual es debil.

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Modelo de esquizofrenia

Se puede usar un modelo de inhibicion prepulso para evaluar la eficacia de compuestos antipsicoticos (vease Swerdlow y Geyer, "Schizophrenia Bulletin" 24: 285-301, 1998).

Inhibición prepulso

La inhibicion prepulso es el procedimiento mediante el cual un estimulo relativamente suave, el prepulso, inhibe la respuesta hacia un estimulo potente que provoca un sobresalto cuando el prepulso precede al estimulo de sobresalto en un breve espacio de tiempo (aproximadamente 10 a 500 milisegundos). La inhibicion prepulso es un fenomeno de diversas especies (i.e., esta presente en mamiferos que varian de ratones a seres humanos), aunque esta relativamente ausente entre los pacientes esquizofrenicos. Se cree que el deficit del PPI en los pacientes esquizofrenicos refleja la perdida de la regulacion sensoriomotriz, que puede conducir a la inundacion sensorial y la fragmentacion cognitiva. En esta prueba, se administra a los ratones o las ratas compuestos y se colocan individualmente en un soporte sobre una plataforma transductora para medir los sobresaltos de todo el cuerpo. Se introduce el soporte en una camara para la deteccion de alteraciones sensoriomotrices con un ruido blanco de fondo. Tras un breve periodo de habituacion, se realizan en los animales multiples ensayos de un estimulo de prepulso acustico debil, seguidos por un fuerte estimulo acustico de sobresalto. Se realizan cuatro tipos de ensayos: prepulso mas sobresalto, prepulso solo, sobresalto solo y estimulacion nula. La PPI se mide como la cantidad de inhibicion del sobresalto tras el prepulso y se expresa como el porcentaje de sobresalto basico. Como control, se toman medidas en los ensayos sin estimulacion y en los de solo prepulso. La PPI se considera una prueba con buena validez predictiva, aparente y conceptual para la esquizofrenia. Se pueden analizar supuestos antipsicoticos solos para determinar si aumentan la PPI. Alternativamente, se pueden rastrear los antipsicoticos para determinar si bloquean diversos agentes que afectan a la PPI (apomorfina, d-anfetamina, PCP, quetamina, D0I). Finalmente, se pueden rastrear ratones mutantes con o sin farmacos usando el procedimiento de PPI.

Modelo de ansiedad

Se puede usar un modelo de laberinto MAS elevado para evaluar la eficacia de compuestos anxioliticos (vease Pellow y File, Pharm. Biochem. Behav. 24, 525-529, 1986).

Laberinto MAS elevado

El laberinto MAS elevado se usa ampliamente como un paradigma de la ansiedad que examina el conflicto entre el instinto por explorar, y la aversion a las alturas y los espacios abiertos de ratas o ratones. El laberinto es una cruz formada por dos brazos abiertos y dos brazos cerrados que esta elevada sobre el nivel del suelo. Se cree que la combinacion de luz, los brazos abiertos y la altura producen un miedo incondicionado o respuestas de ansiedad en ratones o ratas. El aparato de prueba es un laberinto abierto por la parte superior de plastico opaco en el que se alternan brazos abiertos y cerrados. Para las ratas, cada brazo tiene una longitud de 45-55 cm y una anchura de 812 cm, con los lados de los brazos cerrados de una altura de 35-45 cm, la union de aproximadamente 10 x 10 cm, y el laberinto esta elevado 45-55 cm por encima del suelo. El laberinto MAS elevado para ratones consta de dos brazos cerrados (15 x 6 x 30 cm) y dos brazos abiertos (1 x 6 x 30 cm) en forma de cruz con un centro cuadrangular (6 x 6 cm). El laberinto esta situado 50 cm por encima del nivel del suelo. Se realiza una prueba en una sala libre de ruido y distracciones. Los dias de la prueba, se administra a los animales farmaco o vehiculo. Si hace falta un periodo de pretratamiento, se devuelve a los animales a la jaula mientras dura el pretratamiento; de lo contrario, se colocan los animales individualmente en una camara espaciadora de plastico transparente o junto a su pareja de jaula durante 1-10 minutos antes del tiempo de la prueba. Luego se colocan las ratas en el centro del laberinto siempre orientadas en la misma direccion, bien sistematicamente en frente de un brazo abierto o de un brazo cerrado. Durante 5-10 minutos, el o los observadores registran las entradas en cada uno de los brazos y el tiempo que pasan en cada brazo. Esto tambien se puede grabar por video o mediante una entrada receptora de ordenador de una camara de video montada sobre el laberinto. Para que cuente como entrada, las cuatro patas deben estar dentro del brazo. Si es necesario, se registraran otras medidas de conductas relacionadas con la ansiedad, i.e., el tiempo que pasan sin moverse, el tiempo que pasan en el centro, el tiempo que pasan preparandose y el numero de posturas de estiramiento o de excrementos producidos. Tras la prueba, los animales son devueltos a sus jaulas. Cuando los animales se colocan en el centro del laberinto, estos pasan la mayor parte del tiempo en los brazos cerrados, evitando los brazos abiertos. Los farmacos anxioliticos, tales como las benzodiazepinas, aumentaran el tiempo que los animales pasan en los brazos abiertos. La prueba tambien es sensible a los farmacos anxiogenicos, lo que conduce a reforzar su validez predictiva.

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Disfunción eréctil

Los farmacos que afectan a la funcion erectil se pueden analizar midiendo el efecto sobre los aumentos provocados por la apomorfina en la presion intracavernosa de la rata despierta, segun lo descrito por Andersson, et al., (J. Urol.

161: 1707-17] 2, 1999). Se implanta un extremo de un tubo de polietileno en el espacio cavernoso del pene de ratas Sprague-Dawley macho. Tras recuperarse de la cirugia, se registra la presion intracavernosa usando un transductor de presion conectado a un registrador de pluma multicanal. Se inducen erecciones mediante la administracion de apomorfina (100-250 ug/kg s.c.) con o sin compuesto de prueba, y se comparan los resultados para el grupo tratado y el grupo no tratado.

Disfunción sexual femenina

Los sistemas para probar compuestos para el tratamiento de la disfuncion sexual femenina incluyen modelos in vitro e in situ que usan preparaciones de musculo liso vaginal o clitoral, la evaluacion histologica y evaluaciones del flujo sanguineo vaginal. Los estudios in vivo de respuestas sexuales se centran en paradigmas conductuales que implican posturas lordoticas y receptividad, asi como indices de motivacion con el uso de un procedimiento de marcapasos bicameral (vease, p.ej., Hale, et al., Int. J. Impot. Res. 15 Supl 5: S75-79, 2003).

A continuacion, se ilustra la presente invencion con la ayuda de ejemplos. Estas ilustraciones se ofrecen unicamente a modo de ejemplo y no limitan el espiritu general de la presente invencion.

Ejemplos Abreviaturas:

Eq.: Equivalente Proc.: Procedimiento Disolv. Crist.: disolvente usado en el experimento de cristalizacion T Crist.: Temperatura a la que se lleva a cabo el experimento de cristalizacion 1� Crist.: primera cristalizacion 2� Cris.: segunda cristalizacion T.A.: temperatura ambiente (�20-25DC)

Ejemplo 1:

Síntesis general de N–piperidinil–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–1H–pirazol–3– carboxamida racémica a) Ácido 4–(4–clorofenil)–2–oxo–3–butenoico

En un matraz de tres cuellos, se disolvieron p-clorobenzaldehido (13,3 g; 95 mmol) y piruvato de etilo (10 g; 86 mmol) en 150 ml de etanol absoluto. Se enfrio la solucion con hielo hasta 0°C y se anadio una solucion acuosa de Na0H (3,8 g en 45 ml de agua) en gotas manteniendo la temperatura por debajo de o igual a 10°C, mediante lo que se formo un precipitado de color amarillo anaranjado. Se agito la mezcla de reaccion durante 1 h a 0°C y luego durante 1,5 horas mas a temperatura ambiente (aproximadamente 25DC). Tras ello, se enfrio la mezcla de reaccion hasta aproximadamente 5°C y se aislo la sal sodica insoluble de acido 4-(4-clorofenil)-2-oxo-3-butenoico mediante filtracion.

Se dejo el filtrado en el refrigerador durante una noche, mediante lo que se formo mas precipitado, que fue filtrado, combinado con la primera fraccion de la sal y lavado con dietileter. Luego se trato la sal de sodio de acido 4-(4

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clorofenil)-2-oxo-3-butenoico con una solucion de HCl 2N, se agito durante algunos minutos y se separo acido 4(4-clorofenil)-2-oxo-3-butenoico solido mediante filtracion, y se seco para dar 12,7 g del producto deseado (70% de rendimiento teorico).

IR (KBr, cm-1) : 3500-2500; 1719,3; 1686,5; 1603,4; 1587,8; 1081,9.

1H-RMN (CDCl3, �) : 7,4 (d, � = 8,4 Hz, 2H), 7,5 (d, � = 16,1 Hz, 1H), 7,6 (d, � = 8,4 Hz, 2H), -8,1(d, � = 16, 1H).

b) Ácido 5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico

Se mezclaron acido 4-(4-clorofenil)-2-oxo-3-butenoico obtenido segun la etapa a) (12,6 g; 60 mmol), clorhidrato de 2,4-diclorofenilhidrazina (12,8 g; 60 mmol) y acido acetico glacial (200 ml) bajo una atmosfera de nitrogeno y se

10 calentaron hasta el reflujo durante 4 horas, se volvieron a enfriar hasta la temperatura ambiente (aproximadamente 25DC) y se metieron en agua con hielo, mediante lo que se obtuvo una masa pegajosa que se extrajo con cloruro de metileno. Se lavaron las fracciones de cloruro de metileno combinadas con agua, se secaron con sulfato sodico, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad para dar un solido amarillo palido (12,7 g; 57% de rendimiento teorico).

IR (KBr, cm-1): 3200-2200; 1668,4; 1458; 1251,4; 1104,8.

15 1H-RMN (CDCl3, �): 3,3 (dd, 1H), 3,7 (dd, 1H), 5,9 (dd, 1H), 7,09-7,25 (m, 7H).

(c) cloruro de ácido 5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico

Bajo una atmosfera de nitrogeno, se disolvio el acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3carboxilico (2,5 g; 6,8 mmol) obtenido segun la etapa (b) en 4 ml de cloruro de tionilo, y se calento hasta el reflujo 20 durante 2,5 horas. Se elimino el exceso de cloruro de tionilo de la mezcla de reaccion bajo una presion reducida, y el residuo crudo resultante (2,6 g) se uso sin mayor purificacion.

IR (KBr, cm-1): 1732,3; 1700; 1533,3; 1478,1; 1212,9; 826,6.

d) N–piperidinil–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidropirazol–3–carboxamida [este compuesto tambien se puede denominar piperidin-1-ilamida de acido 5-(4-cloro-fenil)-1-(2,4-dicloro-fenil)-4,5-dihidro-1H25 pirazol-3-carboxilico o 1-(2,4-diclorofenil)-5-(4-clorofenil)-4,5-dihidro-N-(piperidin-1-il)-1H-pirazol-3- carboxamida].

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Bajo una atmosfera de nitrogeno, se disolvieron N-aminopiperidina (0,6 ml; 5,6 mmol) y trietilamina (4 ml) en cloruro de metileno (25 ml). Se volvio a enfriar con hielo la mezcla resultante hasta 0°C y se anadio una solucion de cloruro de acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico obtenida en la etapa (c) en cloruro de metileno (15 ml) en gotas Se agito la mezcla de reaccion resultante a temperatura ambiente (aproximadamente 25DC) durante una noche. Tras ello, se lavo la mezcla de reaccion con agua, seguida por una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico, luego se volvio a lavar con agua, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se evaporo hasta la sequedad en un rotavapor. Se cristalizo el solido crudo resultante en etanol. Se retiro el solido cristalizado mediante filtracion y se concentraron los licores madre hasta producir una segunda fraccion de producto cristalizado. Se combinaron las dos fracciones para dar una cantidad total de 1,7 g (57% de rendimiento teorico) de N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidropirazol-3-carboxamida que tenia un punto de fusion de 183-186°C.

IR (KBr, cm-1): 3222,9; 2934,9; 1647,4; 1474,7; 1268,3; 815,6.

1H-RMN (CDCl3, �): 1,4 (m, 2H), 1,7 (m, 4H), 2,8 (m, 4H), 3,3 (dd, � = 6,1 y 18,3 Hz, 1H), 3,7 (dd, � = 12,5 y 18,3 Hz, 1H), 5,7 (dd, � = 6,1 y 12,5 Hz, 1H), 7,0-7,2 (m, 6H), 7,4 (s, 1H).

La resolucion del racemato de N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3carboxamida se puede llevar a cabo mediante procedimientos conocidos por los expertos en la tecnica, p.ej., cromatografia en columna.

Sin embargo, los presentes inventores han descubierto que su compuesto intermedio, concretamente, el acido 5(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico se puede separar facilmente en los respectivos enantiomeros mediante la reaccion con una base quiral. A continuacion, se describe el procedimiento para esta resolucion.

Ejemplo 2:

Resolución de los enantiómeros de ácido 5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3– carboxílico

La resolucion de los enantiomeros de acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico se llevo a cabo mediante la reaccion con las siguientes bases quirales:

•: Brucina

•: Ouinina

•: (-)-Cinconidina

•: (+)-Cinconina

•: R-(+)-1-Feniletilamina

•: Clorhidrato de (1R,2S)-(-)-efedrina

•: Clorhidrato de (1S,2R)-(+)-efedrina

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En cada caso, las reacciones se llevaron a cabo con 0,5 y 1 equivalente de base con respecto a 1 equivalente de compuesto de acido y usando los siguientes disolventes:

•: Etanol

•: Acetona

•: Acetonitrilo

•: Dioxano

•: Etilacetato

•: Cloroformo.

Los resultados se resumen en las siguientes tablas. Puede entenderse que los experimentos de cristalizacion anteriormente mencionados que no quedan reflejados en las siguientes tablas no produjeron cristales de las respectivas sales en las condiciones dadas.

Sin embargo, los expertos en la tecnica pueden determinar las condiciones adecuadas para la cristalizacion de estas sales mediante experimentos rutinarios.

En las siguientes tablas:

�cido representa acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico racemico;

R-�cido representa el derivado respectivo del acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol3-carboxilico;

S-�cido representa el derivado respectivo de acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol3-carboxilico.

Procedimientos para la cristalización:

Procedimiento A: se anadio una solucion de la base quiral sobre una solucion del acido racemico a temperatura ambiente.

Procedimiento C: se anadio una solucion del acido racemico sobre una solucion de la base quiral. Se calento la mezcla hasta el reflujo y se anadio disolvente hasta completar la disolucion. Se dejo cristalizar la solucion a T.A.

Procedimiento D: se anadio directamente la base quiral sobre una solucion del acido racemico a temperatura ambiente.

Procedimiento E: se anadio directamente la base quiral sobre una solucion del acido racemico a temperatura de reflujo.

Procedimiento F: se evaporo la solucion de la sal hasta la sequedad. Se disolvio el residuo en una cantidad minima del disolvente bajo calentamiento a reflujo. Se dejo cristalizar la solucion a T.A.

Resolución con brucina

Brucina

�cido g (mmol): Eq. de amina Proc. Disolvente para la cristalizacion T Crist. Rendimiento de la 1� crist. % S-�cido% R-�cido% Rendimiento de la 2� crist. % S-�cido%

0,4 g (1,09mmol): 0,5 A 8 ml de acetona T.A. 44,6 98,8 1,2 5,6% 99,4

0,4 g (1,09mmol): 0,5 A 11,5 ml de acetonitrilo T.A. 50,7 47,5 52,4

0,4 g (1,09mmol): 1 A 17 ml de acetonitrilo T.A. 25,6 45,7 54,3

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Resolución con quinina

�cido g (mmol): Eq. de Proc. Disolvente para T Cris. Rendimiento S-�cido R-�cido

amina: cristalizacion de la 1� crist.

%
%
%

0,4 g (1,09 mmol): 1 A 8 ml de dioxano T.A. 49,46 91,6 8,3

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 15 ml de acetonitrilo T.A. 26 94,4 5,5

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 2 ml de etilacetato T.A. 25 96,7 3,3

0,4 g (1,09 mmol): 0,5 A 4 ml de dioxano T.A. 38,5 97,5 2,5

Resolución con (–)–cinconidina

amina: cristalizacion de la 1� crist.

%
%
%

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 2 ml de dioxano T.A. 31 94,4 5,6

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 19 ml de etilacetato T.A. 28,5 95,8 4,2

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 20 ml de acetona T.A. 19,6 96,9 3,1

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 24 ml de acetonitrilo T.A. 42 85,8 14,1

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Resolución con (+)–cinconina

�cido: Eq. de amina Proc. Disolvente para cristalizacion T Cris. Rendimiento de la 1� crist. % S-�cido % R-�cido %

0,4 g (1,09 mmol): 1 C 50 ml de acetona T.A. 32,8 7,42 92,57

0,4 g (1,09 mmol): 0,5 F 30 ml de acetona T.A. 23,5 4,0 95,9

0,4 g (1,09 mmol): 0,5 C 50 ml de acetonitrilo T.A. 31,5 3,07 96,92

0,4 g (1,09 mmol): 1 C 50 ml de acetonitrilo T.A. 78,25 39,01 60,98

0,4 g (1,09 mmol): 0,5 C 15 ml de etilacetato T.A. 14,9 3,62 96,37

0,4 g (1,09 mmol): 1 C 27 ml de etilacetato T.A. 35 7,78 92,21

0,4 g (1,09 mmol): 1 F 4 ml de dioxano T.A. 21 33,5 66,4

Resolución con R–(+)–1–feniletilamina

�cido: Eq. de Proc. Disolvente para T Cris. Rendimiento S-�cido R-�cido

amina: cristalizacion de la 1� crist.

%
%
%

0,4 g (1,09 mmol): 1 D 1,6 ml de etanol T.A. 22 51,4 48,6

0,4 g (1,09 mmol): 0,5 E 6 ml de acetonitrilo T.A. 11 8,1 91,9

0,4 g (1,09 mmol): 1 E 6 ml de acetonitrilo T.A. 50 36,8 63,2

0,4 g (1,09 mmol): 1 E 6 ml de dioxano �5DC 5 4,6 95,3

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Descripción detallada:

Resolución de ácido 5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico con (+)– cinconina

Se anadieron 35 g (294,68 mmol) de acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico racemico en 630 ml de acetonitrilo a una suspension de 16,39 g (47,34 mmol) de (+)-cinconina en 920 ml de acetonitrilo bajo una agitacion vigorosa. Se calento la suspension resultante hasta el reflujo y se anadio acetonitrilo

(1.300 ml) hasta completar la disolucion. Se dejo cristalizar la solucion resultante a temperatura ambiente durante el fin de semana, tras lo que se obtuvo un solido cristalino. Se filtro el solido cristalino, se lavo con 50 ml de acetonitrilo frio y se seco para dar 25,26 g de un solido blanco (ee � 91-92%). No se pudo obtener una segunda fraccion de cristales de los licores madre, ni tras el enfriamiento en el refrigerador ni tras la concentracion. Asi pues, se llevo a cabo la recristalizacion de la sal diastereomerica en diferentes disolventes para mejorar el exceso enantiomerico:

Disolvente: Rendimiento Proporción de enantiómeros % (R) / % (S)

Acetonitrilo: 90% 99,6 / 0,4

Et0H-H20: 68,5% 99,3 / 0,7

Isopropanol: 55% 98,9 / 1,1

Por consiguiente, se recristalizo el producto en acetonitrilo para dar 22,6 g de cristales (rendimiento del 72% molar con respecto a la base quiral). La proporcion de enantiomeros determinada mediante electroforesis capilar fue:

99,7% de (+)-cinconina de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico

0,3% de (+)-cinconina de acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico

ee= 99,4%.

Preparación de ácido (R)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico a partir del compuesto de adición (+)–cinconina de ácido (R)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol– 3–carboxílico

Se suspendieron 22,59 g (34 mmol) de la sal diastereomerica, que fue recristalizada en acetonitrilo, en 200 ml de HCl 6N, y se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos. Tras ello, se anadieron 200 ml de tolueno hasta que se hubo completado la disolucion. Se agito la mezcla durante 30 minutos y se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa con tolueno, se lavaron las fases organicas combinadas con agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad, tras lo que se obtuvieron 11,9 g (95%) de un solido microcristalino blanco (punto de fusion 129-133).

El exceso enantiomerico (ee) determinado mediante electroforesis capilar fue del 99,2%.

Pureza quimica determinada mediante CLAR: 99,3%

[�]D (c = 1, 23DC, Me0H) = -429.

Aislamiento del enantiómero ácido (R)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3– carboxílico de los licores madre obtenidos de la cristalización del enantiómero ácido (S)–5–(4–clorofenil)–1– (2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico con brucina

Se trato con HCl 6N el residuo obtenido de la evaporacion de los licores madre obtenidos a partir de la cristalizacion del acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico con brucina segun lo descrito anteriormente para obtener el acido libre. Tras evaporar la fase organica, se obtuvieron 21,86 de una mezcla con una composicion teorica de 20 mmol de acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3carboxilico y 39,9 mmol de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico. Se anadio una suspension de 13,82 g (39,9 mmol) de (+)-cinconina en 1.000 ml de acetonitrilo, y se calento la mezcla hasta el reflujo. Se anadio mas acetonitrilo hasta que se completo la disolucion (volumen total de acetonitrilo de

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4.000 ml). Luego se enfrio lentamente la mezcla hasta la temperatura ambiente para obtener cristales. Tras unas cuantas horas, se obtuvo un solido blanco que se filtro y se seco para dar 22,42 (rendimiento del 84,5% con respecto a la sal de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico).

El exceso enantiomerico (ee) determinado mediante electroforesis capilar fue del 92%.

La pureza de la sal aislada fue comparable a la de la sal obtenida directamente de la resolucion del racemato. Por consiguiente, se pudo aplicar el mismo procedimiento de purificacion descrito anteriormente.

Resolución de ácido 5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico racémico con brucina

Preparación de la sal diastereomérica con brucina

A temperatura ambiente, se disolvieron 15,74 g (39,9 mmol) de brucina en 475 ml de acetona bajo una agitacion vigorosa. Se anadio una solucion de 29,5 g (79,8 mmol) del acido 5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidropirazol-3-carboxilico racemico en 85 ml de acetona. Se dejo cristalizar la mezcla resultante durante un par de dias, tras lo que se obtuvo un solido cristalino. Se filtro el solido cristalino, se lavo con acetona fria y se seco para dar 13,66 g (45% molar con respecto a la base) de un solido de color beis.

La proporcion de enantiomeros determinada mediante electroforesis capilar fue: 99% de brucina del acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico 1% de brucina del acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico. Exceso enantiomerico (ee) = 98%. Se dejaron en el refrigerador los licores madre filtrados y produjeron una segunda fraccion de cristales que se

filtraron y se secaron para dar otros 1,56 g (5,1% molar con respeto a la base). El analisis de la 2� fraccion mediante electroforesis capilar dio: 99,3% de brucina del acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico 0,7% de brucina de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico Exceso enantiomerico (ee) = 98,6% Rendimiento total: 15,22 g (50,1% molar con respecto a la base) de la sal con un ee = 98%.

Determinación de la quilaridad de la sal de brucina mediante cristalografía de rayos X

La quilaridad del enantiomero que cristalizo con brucina (ee: 98%) se determino mediante cristalografia de rayos X y corresponde al enantiomero S. Por consiguiente, el otro enantiomero que cristalizo con la (+)-cinconina es el enantiomero R correspondiente.

Preparación de ácido (S)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico a partir del compuesto de adición brucina del ácido (S)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3– carboxílico

Se suspendieron 15,17 g (19,85 mmol) de brucina del acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidropirazol-3-carboxilico en 150 ml de HCl 6N, y se agito la suspension durante 10 minutos, tras lo que se anadieron 150 ml de tolueno tras lo que se observo la disolucion completa. Se agito la mezcla resultante durante 30 minutos mas bajo el control con cromatografia en columna (gel de silice: Cl2CH2:Me0H (95:5)). Tras ello, se separaron las fases, se extrajo la fase acuosa con tolueno y se lavaron las fases de tolueno combinadas con agua tres veces, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad. Se obtuvieron 7 g (95,5%) de un aceite que solidifico tras la adicion de una pequena cantidad de dietileter para producir un solido amorfo blanco que mostro una transformacion cristalina bajo fusion a 130-133DC.

CCF (Cl2CH2:Me0H (95:5)): Rf= 0,3

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El analisis de los enantiomeros mediante electroforesis capilar dio:

99,1% de acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico

0,9% de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico

Exceso enantiomerico (ee) = 98,2%.

[�]D (c = 1, 23°C, Me0H) = -480,5.

Pureza quimica determinada mediante CLAR: 99,1%.

1H-RMN (CDCl3) � ppm: 3,2 (dd, � = 6,4 y 18,2 Hz, 1H), 3,7 (dd, � = 12,7 y 18,2 Hz, 1H), 5,85 (dd, � = 6,4 y 12,6 Hz, 1H), 7,0-7,2 (m, 7H).

Aislamiento del enantiómero ácido (S)–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3– carboxílico de los licores madre obtenidos de la cristalización del otro enantiómero ácido (R)–5–(4– clorofenil )–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–pirazol–3–carboxílico con (+)–cinconina

Se trato con HCl 6N el residuo obtenido de la evaporacion de los licores madre obtenidos a partir de la cristalizacion del acido (R)-5-(4 -clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3-carboxilico con (+)-cinconina segun lo descrito anteriormente para obtener el acido libre. Tras evaporar la fase organica, se obtuvieron 23,63 g de una mezcla con una composicion teorica de 13,34 mmol de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidropirazol-3-carboxilico y 47,34 mmol de acido (S)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3carboxilico. Se anadio dicha mezcla, disuelta en 118 ml de acetona, sobre una solucion de 18,7 g (47,4 mmol) de brucina en 650 ml de acetona, se agito durante un par de minutos y se dejo cristalizar a temperatura ambiente durante una noche. Se obtuvo un solido de color crema que se filtro y se seco para producir 28 g (77,5% con respecto a la sal de (S)).

El exceso enantiomerico (ee) determinado mediante electroforesis capilar fue del 98,2%.

Preparación de (R)–N–piperidinil–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil)–4,5–dihidro–1H–pirazol–3– carboxamida (A)

Se disolvieron 9,94 g (26,89 mmol) de acido (R)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-pirazol-3carboxilico en 95 ml de tolueno, seguidos de la adicion de 2,35 ml (32,3 mmol) de cloruro de tionilo y 4 gotas de DMF. Bajo una atmosfera de nitrogeno anhidro, se calento la mezcla hasta una temperatura de 75-80°C bajo una agitacion vigorosa durante dos horas y luego se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente. Luego se anadio dicha solucion de cloruro de acido en gotas a una solucion de 3,47 ml (31,2 mmol) de N-aminopiperidina, 15 ml (107,6 mmol) de trietilamina y 38 ml de tolueno anhidro, que se enfrio hasta 0-5DC, manteniendo de ese modo la temperatura por debajo de 10DC durante la adicion. Se agito la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante una noche, tras lo que se obtuvo una suspension. Se anadieron agua y tolueno a dicha suspension hasta que se completo la disolucion y se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa con tolueno, se lavaron las fases organicas combinadas con solucion de Na0H (10%) y agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron hasta la sequedad para obtener 13,41 g de un aceite amarillo claro que no cristalizo. Se purifico el aceite mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (eluyente: atilacetato de bencina (90:10) a (60:40)) para dar 10,5 g (83,5%) de (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3carboxamida en forma de un solido amorfo de color amarillo claro (punto de fusion 75-78DC).

1H-RMN (DMS0-d6) ��ppm: 9,25 (s, 1H), 7,5 (d, � = 8,8 Hz, 1H), 7,4 (d, � = 2,3 Hz, 1H), 7,3-7,25 (2d, � = 8,8 y 8,5 Hz, 3H), 7,1 (d, � = 8,5 Hz, 2H), 5,8 (dd, � = 5,7 y 11,8 Hz, 1H), 3,65 (dd, � = 11,8 y 18,1 Hz, 1H), 3,0 (dd, � = 5,7 y 18,1 Hz, 1H), 2,75 (m, 4H), 1,5 (m, 4H), 1,2 (m, 2H).

El analisis del enantiomero mediante CLAR quiral: ee = 100%.

Pureza quimica determinada mediante CLAR: 98,5%.

[�]D (c = 1, 23°C, Me0H) = -293,5.

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Preparación de sal clorhidrato de (R)–N–piperidinil–5–(4–clorofenil)–1–(2,4–diclorofenil–4,5–dihidro–1H– pirazol–3–carboxamida (clorhidrato de A)

Se disolvieron 0,5 g (1,1 mmol) de (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol3-carboxamida en 10 ml de isopropanol, se enfriaron con hielo, y se anadio una solucion de HCl-etanol saturada.

5 La solucion cambio de color y se formo un solido blanco, que se filtro, se lavo con isopropanol:dietileter (1:1) y se seco para producir 0,38 g (71%) de un solido blanco con un punto de fusion de 160-165DC. La pureza determinada mediante CLAR fue del 99,3%. Determinacion de cloro: 7,15% (98,5% del valor teorico).

1H-RMN (DMS0-d6) ��ppm: 10,3 (sa, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,3 (2d, �= 2,5 y 8,5 Hz, 3H), 7,15 (d, � = 8,5 Hz, 2H), 5,8 (dd, � = 6,3 y 12,0 Hz, 1H), 3,7 (dd + H20), 3,05 (m, 5H), 1,7 (m, 4H), 1,4 (m, 2H).

10 Datos farmacológicos:

Se determino la union de los compuestos pirazolinicos de formula general I con el receptor CB1 segun lo descrito en el apartado de procedimientos farmacologicos, parte I.

Los compuestos pirazolinicos de formula general I muestran una alta afinidad hacia el receptor CB1 (Tabla 1).

Tabla 1

Compuesto según el ejemplo: CI50 [nM] Inhibición [%], 10–7M Inhibición [%], 10–8M

A: 16,1

Clorhidrato de A: 20

Se determino el antagonismo de los compuestos pirazolinicos de formula general I hacia el receptor CB1 segun lo descrito en el apartado de procedimientos farmacologicos, parte VI (Tabla 2).

Tabla 2

Compuesto según el ejemplo: Antagonismo [%]

A: 106

Clorhidrato de A: 113

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Claims

REIVINDICACIONES

1.- Compuestos de formula general I:

en la que:

5 R1 representa un grupo fenilo, que esta opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3,

R2 representa un grupo fenilo, que esta opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metilo, etilo, F, Cl, Br y CF3,

R3 representa un grupo pirrolidinilo, un grupo piperidinilo o un grupo piperazinilo, mediante lo cual cada uno 10 de estos grupos puede estar sustituido por uno o mas grupos alquilo(C1-C6), o R3 representa un resto -NR4R5-,

uno de los residuos R4 y R5 representa un atomo de hidrogeno y el otro de estos residuos R4 y R5 representa un grupo pirrolidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperidinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo piperazinilo opcionalmente al menos mono-sustituido; un grupo triazolilo

15 opcionalmente al menos mono-sustituido; un resto -S02R6-; un resto -NR7R8-, o R4 y R5, iguales o diferentes, representan un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo nbutilo, un grupo sec-butilo o un grupo terc-butilo,

R6 representa un grupo alquilo(C1-C6); un grupo cicloalifatico saturado opcionalmente al menos monosustituido que puede estar condensado con un sistema de anillos mono- o policiclico; o un grupo fenilo, que 20 esta opcionalmente sustituido con uno o mas grupos alquilo(C1-C6) y

R7 y R8, iguales o diferentes, representan un atomo de hidrogeno o radical alquilo(C1-C6),

opcionalmente, en forma de un N-oxido correspondiente del mismo, o una de sus sales o uno de sus solvatos correspondientes.
2.- El compuesto (R)-N-piperidinil-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-3-carboxamida 25 segun la reivindicacion 1:

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opcionalmente, en forma de un N-oxido correspondiente, o una sal o un solvato correspondiente.
3.- Procedimiento para la fabricacion de compuestos de pirazolina sustituida de la formula general I segun una o mas de las reivindicaciones 1 a 2, que se caracteriza porque al menos un compuesto de formula general IIa:

en la que R1 y R2 tienen el significado segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, se transfiere opcionalmente bajo una atmosfera inerte a un compuesto de formula general (III) mediante la reaccion con un agente de activacion:

en la que los sustituyentes R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente y A representa un grupo saliente, preferiblemente, un atomo de cloro, estando dicho compuesto opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado, y se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (IIa) con un compuesto de formula general R3H,

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en la que R3 representa un resto -NR4R5-, en el que R4 y R5 tienen el significado segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, bajo una atmosfera inerte para producir un compuesto de pirazolina sustituida de formula general I, en la que R3 representa un resto -NR4R5-,

o se hace reaccionar al menos un compuesto de formula general (III) con un compuesto de formula general R3H, en la que R3 tiene el significado segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, bajo una atmosfera inerte para producir un compuesto de formula general (I) segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, que esta opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado.
4.- Procedimiento segun la reivindicacion 3, en el que el compuesto IIa se obtiene de una mezcla que comprende los enantiomeros:
5.- Procedimiento segun la reivindicacion 4, en el que el compuesto IIa se obtiene de la mezcla en forma de un compuesto de adicion con una base quiral, preferiblemente, (+)-cinconina o R-(+)-1-feniletilamina, y se libera preferiblemente del compuesto de adicion.
6.- Procedimiento segun la reivindicacion 4 o 5, en el que la mezcla que comprende los enantiomeros IIa y IIb se obtiene mediante la reaccion de al menos un compuesto de benzaldehido de formula general IV:

en la que R1 tiene el significado segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, se hace reaccionar con un compuesto de piruvato de formula general (V):

en la que G representa un grupo 0R, siendo R un radical alquilo(C1-C6) ramificado o no ramificado, o G representa un grupo 0-K, siendo K un cation, para producir un compuesto de formula general (VI):

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en la que R1 tiene el significado dado anteriormente, que esta opcionalmente aislado y/o opcionalmente purificado, y que se hace reaccionar con una fenilhidrazina opcionalmente sustituida de formula general (VII):

o una de sus correspondiente sales, en la que R2 tiene el significado segun una o mas de las reivindicaciones 1-2, bajo una atmosfera inerte, para producir una mezcla de compuestos:
7.- Medicamento que comprende uno o mas compuestos de pirazolina sustituida de formula general I segun una o mas de las reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.

10 8.- Medicamento segun la reivindicacion 7 para la modulacion de receptores de cannabinoides, preferiblemente, de receptores del cannabinoide 1 (CB1), para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, trastornos del sistema inmune, trastornos del sistema cardiovascular, trastornos del sistema endocrino, trastornos del sistema respiratorio, trastornos del tracto gastrointestinal o trastornos reproductivos.
9.- Medicamento segun la reivindicacion 7 o 8 para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos de la alimentacion,

15 preferiblemente, de bulimia, anorexia, caquexia, obesidad, diabetes mellitus de tipo II (diabetes mellitus no insulinodependiente), mas preferiblemente, obesidad.
10.- Medicamento segun la reivindicacion 7 o 8 para la profilaxis y/o el tratamiento de la psicosis.
11.- Medicamento segun la reivindicacion 7 o 8 para la profilaxis y/o el tratamiento del abuso del alcohol y/o la adiccion al alcohol, el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina, el abuso de drogas y/o la adiccion a drogas 20 y/o el abuso de medicamentos y/o la adiccion a medicamentos, preferiblemente, para el abuso de drogas y/o la

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adiccion a drogas y/o el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina.
12.- Medicamento segun la reivindicacion 7 o 8 para la profilaxis y/o el tratamiento del cancer, preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de cerebro, cancer de huesos, cancer de labio, cancer de boca, cancer de esofago, cancer de estomago, cancer de higado, cancer de vejiga, cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer de cuello uterino, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de piel, cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata; mas preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata.
13.- Medicamento segun la reivindicacion 7 o 8 para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en trastornos oseos, preferiblemente, osteoporosis (p.ej., osteoporosis vinculada a una predisposicion genetica, deficiencia de hormonas sexuales o envejecimiento), enfermedad osea asociada con el cancer o enfermedad osea de Paget; esquizofrenia, ansiedad, depresion, epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos cerebelosos, trastornos espinocerebelosos, trastornos cognitivos, traumatismo craneal, traumatismo de cabeza, apoplejia, ataques de panico, neuropatia periferica, glaucoma, migrana, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Raynaud, trastornos de temblores, trastornos compulsivos, demencia senil, trastornos timicos, disquinesia tardia, trastornos bipolares, trastornos del movimiento inducidos por medicamentos, distonia, apoplejia endotoxemica, apoplejia hemorragica, hipotension, insomnio, trastornos inmunologicos, placas escleroticas, vomitos, diarrea, asma, trastornos de la memoria, prurito, dolor o para potenciar el efecto analgesico de los analgesicos narcoticos y no narcoticos; o para influir en el transito intestinal.
14.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la modulacion de receptores de cannabinoides, preferiblemente, de receptores del cannabinoide 1 (CB1), para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, trastornos del sistema inmune, trastornos del sistema cardiovascular, trastornos del sistema endocrino, trastornos del sistema respiratorio, trastornos del tracto gastrointestinal o trastornos reproductivos.
15.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de trastornos alimentarios, preferiblemente bulimia, anorexia, caquexia, obesidad, diabetes mellitus de tipo II (diabetes mellitus no insulinodependiente), mas preferiblemente, obesidad.
16.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de psicosis.
17.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento del abuso del alcohol y/o la adiccion al alcohol, abuso de la nicotina y/o adiccion a la nicotina, abuso de drogas y/o adiccion a drogas, abuso de medicamentos y/o adiccion a medicamentos; preferiblemente, el abuso de drogas y/o la adiccion a drogas y/o el abuso de la nicotina y/o la adiccion a la nicotina.
18.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento del cancer; preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de cerebro, cancer de huesos, cancer de labio, cancer de boca, cancer de esofago, cancer de estomago, cancer de higado, cancer de vejiga, cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer de cuello uterino, cancer de pulmon, cancer de mama, cancer de piel, cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata; mas preferiblemente, para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas tipos de cancer seleccionados del grupo que consiste en cancer de colon, cancer de intestino y cancer de prostata.
19.- Uso de al menos un compuesto de pirazolina sustituida segun una o mas reivindicaciones 1-2 y, opcionalmente, uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, para la preparacion de un medicamento para la profilaxis y/o el tratamiento de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en trastornos oseos, preferiblemente, osteoporosis (p.ej., osteoporosis vinculada a una predisposicion genetica, deficiencia de hormonas sexuales o envejecimiento), enfermedad osea asociada con el cancer o enfermedad osea de Paget; esquizofrenia,

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ansiedad, depresion, epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos cerebelosos, trastornos espinocerebelosos, trastornos cognitivos, traumatismo craneal, traumatismo de cabeza, apoplejia, ataques de panico, neuropatia periferica, glaucoma, migrana, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Raynaud, trastornos de temblores, trastornos compulsivos, demencia senil, trastornos timicos, disquinesia tardia, trastornos bipolares, trastornos del movimiento inducidos por medicamentos, distonia, apoplejia endotoxemica, apoplejia hemorragica, hipotension, insomnio, trastornos inmunologicos, placas escleroticas, vomitos, diarrea, asma, trastornos de la memoria, prurito, dolor o para potenciar el efecto analgesico de los analgesicos narcoticos y no narcoticos; o para influir en el transito intestinal.

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