ES2346157T3 - Derivados de alquilaminas ciclicas como inhibidores de la interaccion entre mdm2 y p53. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I), **(Ver fórmula)** una forma de N-óxido, una sal de adición o una forma estereoquímicamente isómera del mismo en donde m es 0, 1, ó 2, y cuando m es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; n es 0, 1, 2, ó 3 y cuando n es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; p es 0 ó 1, y cuando p es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; t es 0 ó 1, y cuanto t es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; **(Ver fórmula)** es -CR8=C< y la línea de puntos es entonces un enlace, -C(=O)-CH<, C(=O)-N<, -CHR8-CH< o -CHR8-N<; en donde cada R8 es independientemente hidrógeno o C1-6alquilo; R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, halo, C1-6alquilo, C1-6alquiloxi, arilC1-6alqui-loxi, heteroarilC1-6alquiloxi, feniltio, hidroxiC1-6alquilcarbonilo, C1-6alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; o C3-7cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, halo, C1-6alquilo, polihaloC1-6alquilo, ciano, cianoC1-6alquilo, hidroxi, amino o C1-6alquiloxi; o R4 y R5 pueden formar opcionalmente juntos un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi o etilenodioxi; R5 es hidrógeno, C1-6alquiloxicarbonilo o C1-6alquilo; R6 y R7 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, C1-6alquiloxiC1-6alquilo o C1-6alquilo; o R6 y R7 pueden formar juntos opcionalmente un radical bivalente seleccionado de (b-1),-(CH2)2-O-(CH2)2- (b-2),-(CH2)2-NR9-(CH2)2- en donde R9 es hidrógeno, C1-6alquiloxiC1-6alquilo o C1-6alquilo; Z es un radical seleccionado de **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** en donde R10 y R11 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, halo, hidroxi, amino, C1-6alquilo, nitro, polihaloC1-6alquilo, ciano, cianoC1-6alquilo, tetrazoloC1-6alquilo, arilo, heteroarilo, arilC1-6alquilo, heteroarilC1-6al-quilo, aril(hidroxi)C1-6alquilo, heteroaril(hidroxi)C1-6alquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, C1-6alquilcarbonilo, arilC1-6alquilcarbonilo, hetero-arilC1-6alquilcarbonilo, C1-6alquiloxi, C3-7cicloalquilcarbonilo, C3-7cicloalquil(hidroxi)C1-6alquilo, arilC1-6alquiloxiC1-6alquilo, C1-6alquiloxiC1-6alquiloxiC1-6alquilo, C1-6alquilcarboniloxiC1-6alquilo, C1-6alquiloxicarbonilC1-6alquiloxiC1-6alquilo, hidroxiC1-6alquiloxiC1-6alquilo, C1-6alquiloxicarbonilC2-6alquenil C1-6alquiloxiC1-6alquilo (sic), C1-6alquiloxicarbonilo, C1-6alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, hidroxiC1-6alquilo, aminoC1-6alquilo, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilC1-6alquilo y -(CH2)v-(C(=O)r)-(CHR17)u-NR13R14; en donde v es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6 y cuando v es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; r es 0 ó 1, y cuando r es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; u es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6, y cuando u es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; R17 es hidrógeno o C1-6alquilo; R12 es hidrógeno, C1-6alquilo, C3-7cicloalquilo, C1-6alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, amino, C1-6alquiloxi y arilo; o C3-7cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, amino, arilo y C1-6alquiloxi; R13 y R14 se seleccionan cada uno independiente de hidrógeno, C1-12alquilo, C1-6alquilcarbonilo, C1-6alquilsulfo-nilo, arilC1-6alquilcarbonilo, C3-7cicloalquilo, C3-7cicloalquilcarbonilo, -(CH2)k-NR15R16, C1-12alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, hidroxicarbonilo, ciano, C1-6alquiloxicarbonilo, C1-6alquiloxi, arilo o heteroarilo; o C3-7cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C1-6alquiloxi, arilo, amino, arilC1-6alquilo, heteroarilo o heteroarilC1-6alquilo; o R13 y R14 junto con el nitrógeno al cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, o piperazinilo sustituido con un sustituyente seleccionado de C1-6alquilo, arilC1-6alquilo, arilC1-6alquiloxicarbonilo, heteroarilC1-6alquilo, C3-7cicloalquilo y C3-7cicloalquilC1-6alquilo; en donde k es 0, 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 y cuando k es 0 se sobreentiende entonces un enlace directo; R15 y R16 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, C1-6alquilo, arilC1-6alquiloxicarbonilo, C3-7cicloalquilo, C1-12alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C1-6alquiloxi, arilo, y heteroarilo; y C3-7cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C1-6alquiloxi, arilo, arilC1-6alquilo, heteroarilo, y heteroarilC1-6alquilo; o R15 y R16 junto con el nitrógeno al cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo, un piperazinilo, o un piperazinilo sustituido con C1-6alquiloxicarbonilo; arilo es fenilo o naftalenilo; cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de halo, hidroxi, C1-6alquilo, amino, polihaloC1-6alquilo y C1-6alquiloxi; y cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido opcionalmente con un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi y etilenodioxi; heteroarilo es piridinilo, indolilo, quinolinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo o tetrahidrofuranilo; cada piridinilo, indolilo, quinolinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo puede estar sustituido opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente de halo, hidroxi, C1-6alquilo, amino, polihaloC1-6alquilo, arilo, arilC1-6alquilo o C1-6alquiloxi; y cada piridinilo, indolilo, quinolinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo, benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo puede estar sustituido opcionalmente con un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi o etilenodioxi.
Description
Derivados de alquilaminas cíclicas como
inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53.
La presente invención se refiere a compuestos y
composiciones que contienen dichos compuestos que actúan como
inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53. Además, la presente
invención proporciona procesos para la preparación de los
inhibidores descritos, composiciones que comprenden los mismos y
métodos de utilización de los mismos, por ejemplo como
medicamento.
p53 es una proteína supresora de tumores que
juega un papel fundamental en la regulación del equilibrio entre la
proliferación celular y la detención/apoptosis del crecimiento
celular. En condiciones normales, la semi-vida de
p53 es muy corta y por consiguiente el nivel de p53 en las células
es bajo. Sin embargo, en respuesta a deterioro del DNA celular o a
estrés celular (v.g. activación de oncogenes, erosión de telómeros,
hipoxia) los niveles de p53 aumentan. Este aumento en los niveles
de p53 conduce a la activación de la transcripción de cierto número
de genes que impulsan la célula o bien hacia la detención del
crecimiento o a los procesos de apoptosis. Así pues, una función
importante de p53 consiste en evitar la proliferación incontrolada
de células deterioradas y proteger de este modo el organismo contra
el desarrollo del cáncer.
MDM2 es un regulador negativo fundamental de la
función de p53. Forma un bucle negativo autorregulador por fijación
al dominio de transactivación del terminal amino de p53 y por
consiguiente MDM2 inhibe a la vez la capacidad de p53 para activar
la transcripción y direcciona p53 hacia la degradación proteolítica.
En condiciones normales, este bucle regulador es responsable del
mantenimiento de niveles bajos de p53. Sin embargo, en los tumores
con p53 de tipo salvaje, la concentración de equilibrio de p53
activa puede aumentarse por antagonizar la interacción entre MDM2 y
p53. Esto dará como resultado el restablecimiento de los efectos
pro-apoptóticos y
anti-proliferativos mediados por p53 en tales
células tumorales.
MDM2 es un proto-oncogén
celular: La sobreexpresión de MDM2 ha sido observada en una gama de
cánceres. MDM2 está sobre-expresado en una
diversidad de tumores debido a amplificación génica o transcripción
o traducción incrementadas. El mecanismo por el cual la
amplificación de MDM2 promueve la tumorigénesis está relacionado al
menos en parte con su interacción con p53. En las células que
sobreexpresan MDM2, la función protectora de p53 está bloqueada y
por consiguiente las células son incapaces de responder al deterioro
del DNA o estrés celular por aumento de los niveles de p53,
conduciendo a detención del crecimiento celular y/o apoptosis. Así
pues, después de deterioro celular y/o estrés celular, las células
que sobreexpresan MDM2 se encuentran en libertad para continuar
proliferando y asumir un fenotipo tumorígeno. En estas condiciones,
la disrupción de la interacción de p53 y MDM2 liberaría la p53 y
permitiría por consiguiente que funcionaran las señales normales de
detención del crecimiento y/o apoptosis.
MDM2 puede tener también funciones separadas
además de la inhibición de p53. Por ejemplo, se ha demostrado que
MDM2 interacciona directamente con el factor de transcripción
E2F1/DP1 regulado por pRb. Esta interacción podría ser crucial para
las actividades oncogénicas de MDM2 independientes de p53. Un
dominio de E2F1 exhibe una semejanza notable con el dominio de
fijación de MDM2 de p53. Dado que las interacciones de MDM2 tanto
con p53 como con E2F1 se localizan en el mismo sitio de fijación en
MDM2, puede esperarse que los antagonistas de MDM2/p53 no sólo
activen la p53 celular, sino que modulen también las actividades de
E2F1, que están comúnmente descontroladas en las células
tumorales.
Asimismo, la eficacia terapéutica de los agentes
de deterioro del DNA utilizados actualmente (quimioterapia y
radioterapia), puede verse limitada por la regulación negativa de
p53 por MDM2. Así, si la inhibición de la retroalimentación por
MDM2 de p53 se interrumpe, un aumento en los niveles funcionales de
p53 aumentará la eficacia terapéutica de dichos agentes por
restablecer la función de p53 de tipo salvaje que conduce a la
apoptosis y/o inversión de la resistencia a los fármacos asociados
con p53. Se demostró que la combinación de los tratamientos de
inhibición de MDM2 y deterioro del DNA in vivo conducía a
efectos sinérgicos antitumorales (Vousden K.H., Cell, vol. 103,
691-694, 2000).
Así pues, la disrupción de la interacción de
MDM2 y p53 ofrece un enfoque para la intervención terapéutica en
tumores con p53 de tipo salvaje, y podría incluso exhibir efectos
anti-proliferativos en células tumorales que estén
desprovistas de p53 funcional y adicionalmente puede sensibilizar
las células tumorígenas para la quimioterapia y radioterapia.
JP11130750, publicado el 18 de mayo de 1999,
describe entre otras cosas derivados sustituidos de
fenilaminocarbonilindolilo como antagonistas de los receptores de
5-HT. EP1129074, publicado el 18 de mayo de 2000,
describe amidas del ácido antranílico como inhibidores de los
receptores del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR) y
útiles en el tratamiento de trastornos angiogénicos. EP1317443,
publicado el 21 de marzo de 2002, describe derivados tricíclicos de
aminas terciarias, útiles como moduladores de los receptores de
quimioquinas CXCR4 o CCR5 para tratamiento del virus de la
inmunodeficiencia humana y el virus de la inmunodeficiencia de los
felinos.
EP1379279, publicado el 10 de octubre de 2002,
describe N-(2-ariletil)bencilaminas
como antagonistas del receptor 5-HT_{6}.
WO 00/15357, publicado el 23 de marzo de 2000,
proporciona derivados de
piperazina-4-fenilo como inhibidores
de la interacción entre MDM2 y p53. EP 1137418, publicado el 8 de
junio de 2000, proporciona compuestos tricíclicos para
establecimiento de la estabilidad estructural de una proteína de la
familia p53.
EP 1443937, publicado el 22 de mayo de 2003,
describe 1,4-benzodiazepinas sustituidas y los usos
de las mismas como inhibidores de las interacciones
MDM2-p53.
EP 1458380, publicado el 26 de junio de 2003,
proporciona
cis-2,4,5-trifenil-imidazolonas
que inhiben la interacción de la proteína MDM2 con péptidos análogos
a p53 y tienen actividad antiproliferativa.
EP 1519932, publicado el 15 de enero de 2004,
describe compuestos de bisarilsulfonamida que se fijan a MDM2 y
pueden utilizarse en la terapia del cáncer.
WO 03/040402, publicado el 15 de mayo de 2003,
describe compuestos que interrumpen las interacciones
proteína-proteína formadas por dos anillos
heteroarilo bicíclicos enlazados por cadenas aminoalquilo.
WO 2006/024837, publicado el 9 de marzo de 2006,
describe derivados de
isoindolin-1-ona enlazados a grupos
heteroarilo por cadenas de alquilamina que inhiben la interacción
MDM2-p53.
WO 2006/032631, publicado del 30 de marzo de
2006, describe derivados bicíclicos unidos por una cadena que
contiene amina a un fenilo como inhibidores de la interacción entre
las proteínas p53 y MDM2.
Continúa habiendo necesidad de moléculas
pequeñas eficaces y potentes que inhiban las interacciones entre
MDM2 y p53.
Los compuestos de la presente invención difieren
de la técnica anterior en estructura, en su actividad farmacológica
y/o en potencia farmacológica.
La presente invención proporciona compuestos,
composiciones para inhibir, y métodos de inhibición de las
interacciones entre MDM2 y p53 para el tratamiento del cáncer.
Adicionalmente, los compuestos y composiciones de la presente
invención son útiles para mejorar la eficacia de la quimioterapia y
la radioterapia. Esta invención se refiere a compuestos de fórmula
(I)
una forma de N-óxido, una
sal de adición o una forma estereoquímicamente isómera del mismo en
donde
m es 0, 1, ó 2, y cuando m es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
n es 0, 1, 2, ó 3 y cuando n es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
p es 0 ó 1, y cuando p es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
t es 0 ó 1, y cuanto t es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
es -CR^{8}=C< y la línea de
puntos es entonces un enlace, -C(=O)-CH<,
C(=O)-N<, -CHR^{8}-CH< o
-CHR^{8}-N<; en donde cada R^{8} es
independientemente hidrógeno o
C_{1-6}alquilo;
R^{1} y R^{2} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo,
C_{1-6}alquilo,
C_{1-6}alquiloxi,
arilC_{1-6}alqui-
loxi, heteroarilC_{1-6}alquiloxi, feniltio, hidroxiC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo;
loxi, heteroarilC_{1-6}alquiloxi, feniltio, hidroxiC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo;
R^{3} y R^{4} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo,
C_{1-6}alquilo,
polihaloC_{1-6}alquilo, ciano,
cianoC_{1-6}alquilo, hidroxi, amino o
C_{1-6}alquiloxi; o
R^{4} y R^{5} pueden formar opcionalmente
juntos un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi o
etilenodioxi;
R^{5} es hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxicarbonilo o
C_{1-6}alquilo;
R^{6} y R^{7} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquilo; o
R^{6} y R^{7} pueden formar juntos
opcionalmente un radical bivalente seleccionado de
(b-1),-(CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}-
(b-2),-(CH_{2})_{2}-NR^{9}-(CH_{2})_{2}-
en donde R^{9} es hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquilo;
Z es un radical seleccionado de
en
donde
R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo, hidroxi, amino,
C_{1-6}alquilo, nitro,
polihaloC_{1-6}alquilo, ciano,
cianoC_{1-6}alquilo,
tetrazoloC_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo,
arilC_{1-6}alquilo,
heteroarilC_{1-6}al-
quilo, aril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, heteroaril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, C_{1-6}alquilcarbonilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, heteroarilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, C_{3-7}ciclo-alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquil(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquiloxi-C_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquilcarboniloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, hidroxiC_{1-6}alquiloxi-C_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{2-6}alquenil
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, hidroxiC_{1-6}alquilo, amino
C_{1-6}alquilo, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilC_{1-6}alquilo y -(CH_{2})_{v}-(C(=O)_{r})-(CHR^{17})_{u}-NR^{13}R^{14}; en donde
quilo, aril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, heteroaril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, C_{1-6}alquilcarbonilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, heteroarilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, C_{3-7}ciclo-alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquil(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquiloxi-C_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquilcarboniloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, hidroxiC_{1-6}alquiloxi-C_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{2-6}alquenil
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, hidroxiC_{1-6}alquilo, amino
C_{1-6}alquilo, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilC_{1-6}alquilo y -(CH_{2})_{v}-(C(=O)_{r})-(CHR^{17})_{u}-NR^{13}R^{14}; en donde
v es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6 y cuando v es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
r es 0 ó 1, y cuando r es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
u es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6, y cuando u es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
R^{17} es hidrógeno o
C_{1-6}alquilo;
R^{12} es hidrógeno,
C_{1-6}alquilo,
C_{3-7}cicloalquilo,
C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente
seleccionado de hidroxi, amino, C_{1-6}alquiloxi
y arilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un
sustituyente seleccionado de hidroxi, amino, arilo y
C_{1-6}alquiloxi;
R^{13} y R^{14} se seleccionan cada uno
independiente de hidrógeno, C_{1-12}alquilo,
C_{1-6}alquilcarbonilo,
C_{1-6}alquilsulfo-
nilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquilo, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, -(CH_{2})_{k}-NR^{15}R^{16}, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, hidroxicarbonilo, ciano, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, arilo o heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, amino, arilC_{1-6}
alquilo, heteroarilo o heteroarilC_{1-6}alquilo; o
nilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquilo, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, -(CH_{2})_{k}-NR^{15}R^{16}, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, hidroxicarbonilo, ciano, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, arilo o heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, amino, arilC_{1-6}
alquilo, heteroarilo o heteroarilC_{1-6}alquilo; o
R^{13} y R^{14} junto con el nitrógeno al
cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo,
piperidinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, o piperazinilo sustituido
con un sustituyente seleccionado de
C_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquiloxicarbonilo,
heteroarilC_{1-6}alquilo,
C_{3-7}cicloalquilo y
C_{3-7}cicloalquilC_{1-6}alquilo;
en donde
k es 0, 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 y cuando k es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
R^{15} y R^{16} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, C_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquiloxicarbonilo,
C_{3-7}
cicloalquilo, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, y heteroarilo; y C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, arilC_{1-6}alquilo, heteroarilo, y heteroarilC_{1-6}alquilo; o
cicloalquilo, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, y heteroarilo; y C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, arilC_{1-6}alquilo, heteroarilo, y heteroarilC_{1-6}alquilo; o
R^{15} y R^{16} junto con el nitrógeno al
cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo, un
piperazinilo, o un piperazinilo sustituido con
C_{1-6}alquiloxicarbonilo;
arilo es fenilo o naftalenilo;
cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido
opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno
independientemente de halo, hidroxi,
C_{1-6}alquilo, amino,
polihaloC_{1-6}alquilo y
C_{1-6}alquiloxi; y
cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido
opcionalmente con un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi
y etilenodioxi;
heteroarilo es piridinilo, indolilo,
quinolinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo,
tetrazolilo, benzofuranilo o tetrahidrofuranilo;
cada piridinilo, indolilo, quinolinilo,
imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, tetrazolilo,
benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo puede estar sustituido
opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno
independientemente de halo, hidroxi,
C_{1-6}alquilo, amino,
polihaloC_{1-6}alquilo, arilo,
arilC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquiloxi; y
cada piridinilo, indolilo, quinolinilo,
imidazolilo, furanilo, tienilo, benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo
puede estar sustituido opcionalmente con un radical bivalente
seleccionado de metilenodioxi o etilenodioxi.
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Los compuestos de fórmula (I) pueden existir
también en sus formas tautómeras. Dichas formas, aunque no se indica
explícitamente en la fórmula anterior, deben entenderse incluidas
dentro del alcance de la presente invención.
Varios términos utilizados en las definiciones
anteriores y las que figuran más adelante se explican a
continuación. Estos términos se utilizan a veces como tales o en
términos de composiciones.
Como se utiliza en las definiciones que
anteceden y en lo sucesivo, halo es genérico para fluoro, cloro,
bromo y yodo; C_{1-6}alquilo define radicales
hidrocarbonados saturados lineales y de cadena ramificada que tienen
de 1 a 6 átomos de carbono tales como, v.g., metilo, etilo,
propilo, butilo, pentilo, hexilo, 1-metiletilo,
2-metilpropilo,
2-metil-butilo,
2-metilpentilo y análogos;
hidroxiC_{1-6}alquilo define un sustituyente
hidroxi en radicales hidrocarbonados saturados lineales y de cadena
ramificada que tienen de 1 a 6 átomos de carbono; trihalometilo
define metilo que contiene tres sustituyentes halo idénticos o
diferentes, por ejemplo trifluorometilo;
C_{3-7}cicloalquilo incluye grupos hidrocarbonados
cíclicos que tienen de 3 a 10 carbonos, tales como ciclopropilo,
ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo,
ciclohexenilo, cicloheptilo, y análogos.
El término "sal de adición" comprende las
sales que pueden formar los compuestos de fórmula (I) con bases
orgánicas o inorgánicas tales como aminas, bases de metal alcalino y
bases de metal alcalinotérreo, o bases de amonio cuaternario, o con
ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como ácidos minerales, ácidos
sulfónicos, ácidos carboxílicos o ácidos que contienen fósforo.
El término "sal de adición" comprende
adicionalmente sales farmacéuticamente aceptables, complejos
metálicos y solvatos y las sales de los mismos, que pueden formar
los compuestos de fórmula (I).
El término "sales farmacéuticamente
aceptables" significa sales de adición de ácido o base
farmacéuticamente aceptables. Debe entenderse que las sales de
adición de ácido o base farmacéuticamente aceptables como se
mencionan anteriormente en esta memoria comprenden las formas de sal
no tóxicas de adición de ácido y sales no tóxicas de adición de
base terapéuticamente activas que pueden formar los compuestos de
fórmula (I). Los compuestos de fórmula (I) que tienen propiedades
básicas pueden convertirse en sus sales de adición de ácido
farmacéuticamente aceptables por tratamiento de dicha forma de base
con un ácido apropiado. Ácidos apropiados comprenden, por ejemplo,
ácidos inorgánicos tales como hidrácidos halogenados, v.g. ácido
clorhídrico o bromhídrico; ácido sulfúrico; ácido nítrico; ácido
fosfórico y los ácidos afines; o ácidos orgánicos tales como, por
ejemplo, los ácidos acético, propanoico, hidroxiacético, láctico,
pirúvico, oxálico, malónico, succínico (es decir ácido
butanodioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico,
metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico,
p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico,
p-aminosalicílico, pamoico y los ácidos análogos.
Los compuestos de fórmula (I) que tienen
propiedades ácidas pueden convertirse en sus sales de adición de
base farmacéuticamente aceptables por tratamiento de dicha forma
ácida con una base orgánica o inorgánica adecuada. Formas
apropiadas de sales con bases comprenden, por ejemplo, las sales de
amonio, las sales de metal alcalino y alcalinotérreo, v.g. las
sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y análogas, sales
con bases orgánicas, v.g. las sales de benzatina,
N-metil-D-glucamina, sales de
hidrabamina, y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo,
arginina, lisina y análogos.
Los términos sal de adición de ácido o base
comprenden los hidratos y las formas de sal de adición de disolvente
que pueden formar los compuestos de fórmula (I). Ejemplos de tales
formas son v.g. hidratos, alcoholatos y análogas.
El término "complejos metálicos" significa
un complejo formado entre un compuesto de fórmula (I) y una o más
sales orgánicas o inorgánicas con metales. Ejemplos de dichas sales
orgánicas o inorgánicas comprenden los halogenuros, nitratos,
sulfatos, fosfatos, acetatos, trifluoroacetatos, tricloroacetatos,
propionatos, tartratos, sulfonatos, v.g. metilsulfonatos,
4-metilfenilsulfonatos, salicilatos, benzoatos y
análogas de los metales del segundo grupo principal del sistema
periódico, v.g. las sales de magnesio o calcio, del tercer o cuarto
grupo principal, v.g. aluminio, estaño, plomo así como los grupos de
transición primero a octavo del sistema periódico, tales como, por
ejemplo, cromo, manganeso, hierro, cobalto, níquel, cobre, cinc y
análogos.
La expresión "formas estereoquímicamente
isómeras de compuestos de fórmula (I)", como se utiliza
anteriormente en esta memoria, define todos los compuestos posibles
constituidos por los mismos átomos unidos por la misma secuencia de
enlaces pero que tienen estructuras tridimensionales diferentes que
no son intercambiables, que pueden poseer los compuestos de fórmula
(I). A no ser que se mencione o indique otra cosa, la designación
química de un compuesto abarca la mezcla de todas las formas
estereoquímicamente isómeras posibles que puede poseer dicho
compuesto. Dicha mezcla puede contener todos los diastereómeros y/o
enantiómeros de la estructura molecular básica de dicho compuesto.
Todas las formas estereoquímicamente isómeras de los compuestos de
fórmula (I) tanto en forma pura como en mezcla de unos con otros,
deben entenderse abarcadas dentro del alcance de la presente
invención.
Son especialmente interesantes aquellos
compuestos de fórmula (I) que son estereoquímicamente puros.
Las formas estereoisómeras puras de los
compuestos y compuestos intermedios que se mencionan en esta memoria
se definen como isómeros sustancialmente exentos de otras formas
enantiómeras o diastereoisómeras de la misma estructura molecular
básica de dichos compuestos o compuestos intermedios. En particular,
el término "estereoisómeramente puro" se refiere a compuestos
o compuestos intermedios que tienen un exceso estereomérico de al
menos 80% (es decir como mínimo 90% de un isómero y como máximo 10%
de los otros isómeros posibles) hasta un exceso estereomérico de
100% (es decir 100% de un isómero y nada del otro u otros), de modo
más particular, compuestos o compuestos intermedios que tienen un
exceso estereomérico de 90% hasta 100%, de modo aún más particular
que tienen un exceso estereomérico de 94% hasta 100% y de modo muy
particular que tienen un exceso estereomérico de 97% hasta 100%.
Los términos "enantioméricamente puro" y
"diastereoisómeramente puro" deben entenderse de manera
similar, pero haciendo relación entonces al exceso enantiomérico, o
respectivamente al exceso diastereomérico de la mezcla en
cuestión.
Debe entenderse que las formas tautómeras de los
compuestos de fórmula (I) comprenden aquellos compuestos de fórmula
(I) en los cuales v.g. un grupo enol se convierte en un grupo ceto
(tautomería ceto-enólica).
Debe entenderse que las formas de N-óxido
de los compuestos de fórmula (I) comprenden aquellos compuestos de
fórmula (I) en los cuales uno o más átomos de nitrógeno están
oxidados para formar el denominado N-óxido, particularmente
aquellos N-óxidos en los cuales uno o más de los nitrógenos
de piperidina, piperazina o piridazinilo están oxidados en
N.
Los compuestos de fórmula (I) pueden convertirse
en las formas correspondientes de N-óxido siguiendo
procedimientos conocidos en la técnica para convertir un nitrógeno
trivalente en su forma de N-óxido. Dicha reacción de
oxidación en N puede llevarse a cabo generalmente por
reacción del material de partida de fórmula (I) con un peróxido
orgánico o inorgánico apropiado.
Peróxidos inorgánicos apropiados comprenden, por
ejemplo, peróxido de hidrógeno, peróxidos de metal alcalino o metal
alcalinotérreo, v.g. peróxido de sodio, peróxido de potasio;
peróxidos orgánicos apropiados pueden comprender peroxiácidos tales
como, por ejemplo, ácido bencenocarboperoxoico o ácido
bencenocarboperoxoico sustituido con halógeno, v.g. ácido
3-clorobencenocarboperoxoico, ácidos
peroxoalcanoicos, v.g. ácido peroxoacético, hidroperóxidos de
alquilo, v.g. hidroperóxido de terc-butilo.
Disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, alcoholes inferiores,
v.g. etanol y análogos, hidrocarburos, v.g. tolueno, cetonas, v.g.
2-butanona, hidrocarburos halogenados, v.g.
diclorometano, y mezclas de tales disolventes.
La presente invención tiene por objeto incluir
también cualesquiera isótopos de los átomos presentes en los
compuestos de la invención. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno
incluyen tritio y deuterio, y los isótopos de carbono incluyen
C-13 y C-14.
Siempre que se utilice en lo sucesivo en esta
memoria, debe entenderse que el término "compuestos de fórmula
(I)" incluye asimismo las formas de N-óxido, las sales de
adición de ácido o base farmacéuticamente aceptables y todas las
formas estereoisómeras.
Un primer grupo de compuestos interesantes está
constituido por aquellos compuestos de fórmula (I) en los cuales se
aplican una o más las restricciones siguientes:
a) m es 0;
b) n es 2;
c) p es 1;
d) t es 0;
e)
es
-CH=C<;
f) R^{1} y R^{2} son cada uno
independientemente hidrógeno;
g) R^{3} y R^{4} son cada uno
independientemente hidrógeno;
h) R^{5} es hidrógeno;
i) R^{6} y R^{7} son cada uno
independientemente hidrógeno o C_{1-6}alquilo;
j) Z es un radical seleccionado de
(a-1), (a-2) o
(a-4); o
k) R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, hidroxi,
C_{1-6}alquiloxicarbonilo o
hidroxi
C_{1-6}alquilo.
C_{1-6}alquilo.
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Un segundo grupo de compuestos interesantes está
constituido por aquellos compuestos de fórmula (I) y aquellos
compuestos del primer grupo de compuestos interesantes en donde se
aplican una o más de las restricciones siguientes:
a) m es 0;
b) m es 2;
c) p es 1;
d) t es 0;
e)
es
-CH=C<;
\newpage
f) R^{1} y R^{2} son cada uno
independientemente hidrógeno;
g) R^{3} y R^{4} son cada uno
independientemente hidrógeno;
h) R^{5} es hidrógeno;
i) R^{6} y R^{7} son cada uno
independientemente hidrógeno;
j) Z es un radical seleccionado de
(a-2) o (a-4); o
k) R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, hidroxi, o
hidroxiC_{1-6}alquilo.
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Un grupo de compuestos preferidos está
constituido por aquellos compuestos de fórmula (I) o cualquier
subgrupo de los mismos, en donde m es 0; n es 0; p es 1; t es 0;
R^{1} y R^{2} son cada uno independientemente hidrógeno;
R^{3} y R^{4} son cada uno independientemente hidrógeno;
R^{5} es hidrógeno; R^{6} y R^{7} son cada uno
independientemente hidrógeno o C_{1-6}alquilo; Z
es un radical seleccionado de (a-1),
(a-2) o (a-4); o R^{10} y
R^{11} se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno,
hidroxi, C_{1-6}alquiloxicarbonilo o
hidroxiC_{1-6}alquilo.
Un grupo de compuestos más preferidos está
constituido por aquellos compuestos de fórmula (I) o cualquier
subgrupo de los mismos en donde m es 0; n es 0; p es 1; t es 0;
R^{1} y R^{2} son cada uno independientemente hidrógeno;
R^{3} y R^{4} son cada uno independientemente hidrógeno; R^{5}
es hidrógeno; R^{6} y R^{7} son cada uno independientemente
hidrógeno; Z es un radical seleccionado de (a-2) o
(a-4); o R^{10} y R^{11} se seleccionan cada
uno independientemente de hidrógeno, hidroxi, o
hidroxiC_{1-6}alquilo.
Los compuestos más preferidos son el compuesto
No. 1, el compuesto No. 4 y el compuesto No. 5.
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Los compuestos de fórmula (I), sus sales
farmacéuticamente aceptables y N-óxidos y formas
estereoquímicamente isómeras de los mismos pueden prepararse de
manera convencional. Los materiales de partida y algunos de los
compuestos intermedios son compuestos conocidos y están disponibles
comercialmente o se pueden preparar de acuerdo con procedimientos
convencionales de reacción conocidos generalmente en la técnica.
Algunos de tales métodos de preparación se
describirán más adelante con mayor detalle.
Otros métodos de obtención de los compuestos
finales de fórmula (I) se describen en los ejemplos.
Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar
por reacción de un compuesto intermedio de fórmula (II) con un
compuesto intermedio de fórmula (III) en donde W es un grupo lábil
apropiado tal como, por ejemplo, halo, v.g. fluoro, cloro, bromo o
yodo, o un radical sulfoniloxi tal como metilsulfoniloxi,
4-metilfenilsulfoniloxi y análogos. La reacción
puede llevarse a cabo en un disolvente inerte en la reacción tal
como, por ejemplo, un alcohol, v.g. metanol, etanol,
2-metoxi-etanol, propanol, butanol y
análogos; un éter, v.g. 4,4-dioxano,
1,1'-oxibispropano y análogos; una cetona, v.g.
4-metil-2-pentanona;
o N,N-dimetilformamida, nitrobenceno, acetonitrilo, ácido
acético y análogos. La adición de una base apropiada tal como, por
ejemplo, un carbonato o hidrogenocarbonato de metal alcalino o
alcalinotérreo, v.g. trietilamina o carbonato de sodio, puede
utilizarse para capturar el ácido que se libera durante el curso de
la reacción. Una pequeña cantidad de un yoduro metálico apropiado,
v.g. yoduro de sodio o potasio puede añadirse para favorecer la
reacción. La agitación puede aumentar la velocidad de la reacción.
La reacción puede llevarse a cabo convenientemente a una temperatura
comprendida entre la temperatura ambiente y la temperatura de
reflujo de la mezcla de reacción y, en caso deseado, la reacción
puede llevarse a cabo a una presión incrementada.
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Los compuestos de fórmula (I), en donde p es 1,
a los que se hace referencia en esta memoria como compuestos de
fórmula (I-a) se pueden preparar por conversión de
compuestos intermedios de fórmula (IV) con hidruro de litio y
aluminio en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano.
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Los compuestos de fórmula (I-a)
se pueden preparar también por reacción de un carboxaldehído de
fórmula (VI) apropiado, con un compuesto intermedio de fórmula (V),
en presencia de un reactivo apropiado, tal como un borohidruro de
sodio, v.g. tetrahidroborato de sodio o cianotrihidroborato
soportado por polímero, en un disolvente adecuado, tal como un
alcohol, v.g. metanol.
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De manera idéntica, los compuestos de fórmula
(I), en donde t es 1, a los que se hace referencia en esta memoria
como compuestos de fórmula (I-b), se pueden preparar
por reacción de un compuesto intermedio de fórmula (II) con un
carboxaldehído apropiado de fórmula (VII).
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Los compuestos de fórmula (I) se pueden
convertir también unos en otros por reacciones conocidas en la
técnica o transformaciones de grupos funcionales. Algunas de tales
transformaciones han sido ya descritas anteriormente en esta
memoria. Otros ejemplos son hidrólisis de ésteres carboxílicos para
dar el ácido carboxílico o el alcohol correspondientes; hidrólisis
de amidas para dar los ácidos carboxílicos o aminas
correspondientes; hidrólisis de nitrilos a las amidas
correspondientes; los grupos amino en imidazol o fenilo pueden
reemplazarse por un hidrógeno por reacciones de diazotación
conocidas en la técnica y reemplazamiento subsiguiente del grupo
diazo por hidrógeno; los alcoholes pueden convertirse en ésteres y
éteres; las aminas primarias pueden convertirse en aminas
secundarias o terciarias; los enlaces dobles pueden hidrogenarse
para dar enlaces simples correspondientes; un radical yodo en un
grupo fenilo puede convertirse en un grupo éster por inserción de
monóxido de carbono en presencia de un catalizador de paladio
adecuado.
Los compuestos intermedios de fórmula (V) en
donde m es 0, a los que se hace referencia en esta memoria como
compuestos intermedios de fórmula (V-a), se pueden
preparar por conversión de un compuesto intermedio de fórmula (VIII)
con un hidrato de hidracina en un disolvente adecuado tal como
metanol.
Los compuestos intermedios de fórmula
(V-a) se pueden preparar también por una reacción de
reducción de nitro a amino partiendo de un compuesto intermedio de
fórmula (XVI), en presencia de un catalizador metálico tal como
níquel Raney y un reductor apropiado tal como hidrógeno, en un
disolvente adecuado tal como metanol o etanol.
Los compuestos intermedios de fórmula (X) se
pueden preparar por reacción de un compuesto intermedio de fórmula
(XI) con un compuesto intermedio de fórmula (XII) en presencia de
reactivos apropiados tales como monohidrocloruro de
N'-(etilcarbonimidoil)-N,N-dimetil-1,3-propanodiamina
(EDC) y
1-hidroxi-1H-benzotriazol
(HOBT). La reacción puede llevarse a cabo en presencia de una base
tal como trietilamina, en un disolvente adecuado, tal como una
mezcla de diclorometano y tetrahidrofurano.
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Los compuestos intermedios de fórmula (VI) se
pueden preparar por reacción de compuestos intermedios de fórmula
(XIII) con hidruro de litio y aluminio en un disolvente adecuado tal
como tetrahidrofurano.
Los compuestos intermedios de fórmula (VIII) (lo
mismo es válido para los compuestos intermedios de fórmula (XVI)),
en donde t es 0, a los que se hace referencia en esta memoria como
compuestos intermedios de fórmula (VIII-a), se
pueden preparar por reacción de un compuesto intermedio de fórmula
(IX) con un compuesto intermedio de fórmula (XIV), en donde L es un
grupo lábil apropiado tal como, por ejemplo, halo, v.g. fluoro,
cloro, bromo o yodo, o C_{1-6}alquiloxi, v.g.
metiloxi, en presencia de una solución de hidrocloruro en
2-propanol, en un disolvente inerte en la reacción
tal como N,N-dimetilformamida.
Los compuestos intermedios de fórmula (IX), en
donde R^{6} y R^{7} son ambos hidrógeno, a los que se hace
referencia en esta memoria como compuestos intermedios de fórmula
(LX-a) (sic), se pueden preparar por conversión de
un compuesto intermedio de fórmula (XV) en presencia de
cianoborohidruro de sodio. La reacción puede llevarse a cabo en un
disolvente inerte en la reacción tal como, por ejemplo, ácido
acético.
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Los compuestos de fórmula (I) y algunos de los
compuestos intermedios pueden tener al menos un centro estereogénico
en su estructura. Dicho centro estereogénico puede estar presente en
una configuración R o S.
Algunos de los compuestos de fórmula (I) y
algunos de los compuestos intermedios en la presente invención
pueden contener un átomo de carbono asimétrico. Las formas
estereoquímicamente isómeras puras de dichos compuestos y dichos
compuestos intermedios pueden obtenerse por aplicación de
procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los
diastereoisómeros se pueden separar por métodos físicos tales como
cristalización selectiva o técnicas cromatográficas, v.g.
distribución en contracorriente, cromatografía líquida y métodos
análogos. Los enantiómeros pueden obtenerse a partir de mezclas
racémicas por conversión primeramente de dichas mezclas racémicas
con agentes de resolución adecuados tales como, por ejemplo, ácidos
quirales, en mezclas de sales o compuestos diastereoisómeros;
seguido por separación física de dichas mezclas de sales o
compuestos diastereoisómeros mediante, por ejemplo, cristalización
selectiva, cromatografía con fluidos supercríticos o técnicas
cromatográficas, v.g., cromatografía líquida y métodos análogos; y
finalmente conversión de dichas sales o compuestos diastereoisómeros
separados en los enantiómeros correspondientes. Las formas
estereoquímicamente isómeras puras pueden obtenerse también a
partir de las formas estereoquímicamente isómeras puras de los
compuestos intermedios y materiales de partida apropiados, con tal
que las reacciones que intervienen ocurran
estereoespecíficamente.
Los compuestos de fórmula (I), las sales de
adición farmacéuticamente aceptables y las formas estereoisómeras de
los mismos tienen propiedades farmacológicas valiosas en el sentido
de que inhiben la interacción entre p53 y
MDM2.
MDM2.
El término "MDM2" se utiliza en esta
memoria para referirse a una proteína obtenida como resultado de la
expresión del gen mdm2. Dentro del significado de este término,
MDM2 abarca todas las proteínas codificadas por mdm2, mutantes de
las mismas, proteínas rodaja alternativas de las mismas, y proteínas
fosforiladas de las mismas. Adicionalmente, como se utiliza en esta
memoria, el término "MDM2" incluye análogos de MDM2 v.g. MDMX,
conocido también como MDM4, y homólogos y análogos de MDM2 de otros
animales, v.g. la HDM2 humana homóloga, o la HDMX humana
análoga.
El término "inhibición de la interacción" o
"inhibidor de la interacción" se utiliza en esta memoria para
significar la prevención o reducción de la asociación directa o
indirecta de una o más moléculas, péptidos, proteínas, enzimas o
receptores; o prevención o reducción de la actividad normal de una o
más moléculas, péptidos, proteínas, enzimas o receptores.
La expresión "inhibidor de la interacción de
p53 con MDM2" o "inhibidor de p53-MDM2" se
utiliza en esta memoria para describir un agente que aumenta la
expresión de p53 en el ensayo descrito en C.1. Este aumento puede
estar causado por, pero sin carácter limitante, uno o más de los
mecanismos de acción siguientes:
- -
- inhibición de la interacción entre p53 y MDM2,
- -
- asociación directa con la proteína MDM2 o la proteína p53,
- -
- interacciones con dianas situadas aguas arriba o aguas abajo; v.g. quinasas; o actividades enzimáticas implicadas en la ubiquitinación o modificación SUMO,
- -
- secuestración o transporte de MDM2 y p53 a compartimientos celulares diferentes,
- -
- modulación de proteínas que se asocian con MDM2, por ejemplo (pero sin carácter limitante), p73, E2F-1, Rb, p21waf1 o cip1,
- -
- regulación descendente o interferencia con la expresión de MDM2 y/o la actividad de MDM2, por ejemplo (pero sin carácter limitante), impacto en su localización celular, modificación posterior a la traducción, exportación nuclear o actividad de ligasa de ubiquitina,
- -
- estabilización directa o indirecta de la proteína p53, v.g. por mantenimiento de la misma en su forma funcional estructural, o por prevención del plegamiento erróneo,
- -
- aumento de la expresión de p53 o la expresión de miembros de la familia p53, v.g. p63 y p73,
- -
- aumento de la actividad de p53, por ejemplo (pero sin carácter limitante), aumento de su actividad de transcripción y/o
- -
- aumento de la expresión de genes y proteínas del camino de señalización de p53, por ejemplo (pero sin carácter limitante) p21waf1, cip1, MIC-1 (GDF-15), PIG-3 y ATF-3.
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Por consiguiente, la presente invención describe
los compuestos de fórmula (I) para uso como medicamento.
Adicionalmente, la invención se refiere también
al uso de un compuesto para fabricación de un medicamento para el
tratamiento de un trastorno mediado por una interacción
p53-MDM2, en donde dicho compuesto es un compuesto
de fórmula (I).
El término "terapia" o "tratamiento"
como se utiliza en esta memoria, abarca cualquier tratamiento de una
enfermedad y/o afección en un animal, particularmente un humano, e
incluye: (i) evitación de que ocurra una enfermedad y/o afección en
un individuo que puede estar predispuesto a la enfermedad y/o
afección pero no ha sido diagnosticado todavía de padecer la misma;
(ii) inhibición de la enfermedad y/o afección, es decir, detención
de su desarrollo; (iii) alivio de la enfermedad y/o afección, es
decir, causa de la regresión de la enfermedad y/o afección.
Con la expresión "un trastorno mediado por una
interacción p53-MDM2" se entiende cualquier
condición indeseable o perjudicial que da como resultado o resulta
de la inhibición de la interacción entre la proteína MDM2 y p53 u
otras proteínas celulares que inducen apoptosis, inducen muerte
celular, o regulan el ciclo celular.
Esta solicitud describe también un método para
tratamiento de un trastorno mediado por una interacción
p53-MDM2 por administración de una cantidad eficaz
de un compuesto de la presente invención a un individuo, v.g. un
mamífero (y más particularmente un humano) que precisa dicho
tratamiento.
Los compuestos de la invención pueden tener
efectos antiproliferativos en células tumorales, aun cuando dichas
células estén desprovistas de p53 funcional. De modo más particular,
los compuestos de la invención pueden tener efectos
antiproliferativos en tumores con p53 de tipo salvaje y/o en tumores
que sobreexpresan MDM2.
Así pues, se describe también un método para
inhibición del crecimiento tumoral por administración de una
cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención a un
individuo, v.g. un mamífero (y más particularmente un humano) que
precisa dicho tratamiento.
Ejemplos de tumores que pueden ser inhibidos,
pero sin carácter limitante, son cáncer de pulmón (v.g.
adenocarcinoma y con inclusión de cáncer de pulmón de células no
pequeñas), cánceres pancreáticos (v.g. carcinoma pancreático tal
como, por ejemplo, carcinoma pancreático exocrino), cáncer de colon
(v.g. carcinomas colorrectales, tales como, por ejemplo,
adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), cáncer esofágico,
carcinoma oral escamoso, carcinoma de lengua, carcinoma gástrico,
cáncer nasofaríngeo, tumores hematopoyéticos de linaje linfoide
(v.g. leucemia linfocítica aguda, linfoma de células B, linfoma de
Burkitt), linfoma distinto al Hodgkin, enfermedad de Hodgkin,
leucemias mieloides (por ejemplo, leucemia mielógena aguda (AML)),
cáncer folicular de tiroides, síndrome mielodisplástico (MDS),
tumores de origen mesenquimático (v.g. fibrosarcomas y
rabdomiosarcomas), melanomas, teratocarcinomas, neuroblastomas,
tumores cerebrales, gliomas, tumor benigno de la piel
(queratoacantomas), carcinoma de mama (v.g. cáncer de mama
avanzado), carcinoma de riñón, carcinoma de ovario, carcinoma
cervical, carcinoma endometrial, carcinoma de vejiga, cáncer de
próstata con inclusión de la enfermedad avanzada, cánceres
testiculares, osteosarcoma, cáncer de cabeza y cuello y carcinoma
epidérmico.
Los compuestos de la presente invención pueden
utilizarse también para el tratamiento y la prevención de afecciones
inflamatorias.
Así, se describe también un método para el
tratamiento y la prevención de afecciones inflamatorias por
administración de una cantidad eficaz de un compuesto de la presente
invención a un individuo, v.g. un mamífero (y más particularmente un
humano) que precisa dicho tratamiento.
Los compuestos de la presente invención se
pueden utilizar también para el tratamiento de enfermedades y
afecciones autoinmunes. Con el término "enfermedades
autoinmunes" debe entenderse cualquier enfermedad en la cual el
sistema inmunitario de un animal reacciona negativamente a un
autoantígeno. Con el término "autoantígeno" se entiende
cualquier antígeno que se encuentra normalmente en el cuerpo del
animal. Enfermedades autoinmunes representativas incluyen, pero sin
carácter limitante: tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Grave,
esclerosis múltiple, anemia perniciosa, enfermedad de Addison,
diabetes mellitus dependiente de insulina, artritis reumatoide,
lupus eritematoso sistémico (SLE o lupus), dermatomiositis,
enfermedad de Crohn, granulomatosis de Wegener, Enfermedad
Anti-Membrana Basal Glomerular, Síndrome
Antifosfolipídico, Dermatitis Herpetiforme 25, Encefalomielitis
alérgica, glomerulonefritis, glomerulonefritis membranosa, síndrome
de Goodpasture, Lambert-Eaton, síndrome miasténico,
miastenia grave, penfigoide bulloso, poliendocrinopatías, enfermedad
de Reiter, y síndrome de Stiff-Man.
Así pues, se describe también un método para el
tratamiento de enfermedades y afecciones autoinmunes y el
tratamiento de enfermedades asociadas con proteínas estructurales
inestables o defectuosamente plegadas por administración de una
cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención a un
individuo, v.g. un mamífero (y más particularmente un humano) que
precisa dicho tratamiento.
Los compuestos de la presente invención pueden
ser útiles también para el tratamiento de enfermedades asociadas con
proteínas estructurales inestables o defectuosamente plegadas.
Ejemplos de las enfermedades asociadas con
proteínas estructurales inestables o defectuosamente plegadas
incluyen, pero sin carácter limitante: fibrosis quística (CFTR),
síndrome de Marfan (fibrilina), esclerosis amiotrófica lateral
(superóxido-dismutasa), escorbuto (colágeno),
enfermedad de la orina jarabe de arce (complejo de
\alpha-cetoácido-deshidrogenasa),
osteogénesis imperfecta (procolágeno pro-alfa tipo
I), enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (prión),
enfermedad de Alzheimer (\beta-amiloide),
amiloidosis familiar (lisozima), cataratas (cristalinas),
hipercolesterolemia familiar (receptor de LDL), deficiencia en
antitripsina \alphaI, enfermedad de Tay-Sachs
(beta-hexosaminidasa), retinitis pigmentosa
(rodopsina), y leprechaunismo (receptor de insulina).
Así pues, se describe también un método para el
tratamiento de enfermedades asociadas con proteínas estructurales
inestables o defectuosamente plegadas por administración de una
cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención a un
individuo, v.g. un mamífero (y más particularmente un humano) que
precisa dicho tratamiento.
Teniendo en cuenta sus útiles propiedades
farmacológicas, los presentes compuestos pueden formularse en
diversas formas farmacéuticas para propósitos de administración.
Para preparar las composiciones farmacéuticas de
esta invención, una cantidad eficaz de un compuesto particular, en
forma de sal de adición de base o ácido como el ingrediente activo
se combina en mezcla íntima con un vehículo farmacéuticamente
aceptable, vehículo que puede tomar una gran diversidad de formas
dependiendo de la forma de preparación deseada para administración.
Estas composiciones farmacéuticas se encuentran deseablemente en
forma de dosificación unitaria adecuada, preferiblemente, para
administración oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral.
Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de
dosificación oral, puede emplearse cualquiera de los medios
farmacéuticos usuales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles,
aceites, alcoholes y análogos en el caso de preparaciones orales
líquidas tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o
vehículos sólidos tales como almidones, azúcares, caolín,
lubricantes, aglomerantes, agentes desintegrantes y análogos en el
caso de polvos, píldoras, cápsulas y tabletas.
Debido a su facilidad de administración,
tabletas y cápsulas representan la forma de dosificación oral más
ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos
farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el
vehículo comprenderá usualmente agua estéril, al menos en gran
parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo para
favorecer la solubilidad. Pueden prepararse por ejemplo soluciones
inyectables, en las cuales el vehículo comprende solución salina,
solución de glucosa o una mezcla de solución salina y de glucosa.
Pueden prepararse también suspensiones inyectables, en cuyo caso se
pueden emplear vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión
y análogos. En las composiciones adecuadas para administración
percutánea, el vehículo comprende opcionalmente un agente mejorador
de la penetración y/o un agente humectante adecuado, combinado
opcionalmente con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en
menores proporciones, aditivos que no causan un efecto deletéreo
significativo a la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la
administración a la piel y/o pueden ser útiles para preparar las
composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar
de diversas maneras, v.g. como un parche transdérmico, como un
toque, o como un ungüento. Es especialmente ventajoso formular las
composiciones farmacéuticas arriba mencionadas en forma de dosis
unitaria para facilidad de administración y uniformidad de
dosificación.
Forma unitaria de dosificación, como se utiliza
en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, hace
referencia a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis
unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de
ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico
deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido.
Ejemplos de tales formas unitarias de dosificación son tabletas (con
inclusión de tabletas ranuradas o recubiertas), cápsulas, píldoras,
paquetes de polvos, pastillas, soluciones o suspensiones
inyectables, cucharaditas de té, cucharadas de mesa y análogas, y
múltiplos segregados de las mismas.
Es especialmente ventajoso formular las
composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma
unitaria de dosificación para facilidad de administración y
uniformidad de dosificación.
La forma unitaria de dosificación como se
utiliza en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas
hacen referencia a unidades físicamente discretas adecuadas como
dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad
predeterminada de ingrediente activo, calculada para producir el
efecto terapéutico deseado, en asociación con los vehículos
farmacéuticos requeridos. Ejemplos de tales formas de dosis unitaria
son tabletas (con inclusión de tabletas ranuradas o recubiertas),
cápsulas, píldoras, paquetes de polvos, pastillas, soluciones o
suspensiones inyectables, cucharaditas de té, cucharadas de mesa y
análogas, y múltiplos segregados de las mismas.
El compuesto de la invención se administra en
una cantidad suficiente para inhibir la interacción entre MDM2 y p53
u otras proteínas celulares que inducen apoptosis, inducen muerte
celular, o regulan el ciclo celular.
El potencial oncogénico de MDM2 no viene
determinado exclusivamente por su capacidad para suprimir p53, sino
también por su capacidad para regular otras proteínas supresoras de
tumores, v.g. la proteína pRb del retinoblastoma y el factor de
transcripción E2F1 estrechamente asociado.
Por ello, el compuesto de la invención se
administra en una forma suficiente para modular la interacción entre
MDM2 y los factores de transcripción E2F.
Los expertos en la técnica podrían determinar
fácilmente la cantidad eficaz a partir de los resultados de tests
presentados más adelante en esta memoria. En general, se contempla
que una cantidad terapéuticamente eficaz podría ser de 0,005 mg/kg
a 100 mg/kg de peso corporal, y en particular de 0,005 mg/kg a 10
mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis
requerida como una, dos, tres, cuatro o más subdosis a intervalos
apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis pueden formularse
como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen
0,5 a 500 mg, y en particular 10 mg a 500 mg de ingrediente activo
por forma de dosis unitaria.
Como otro aspecto de la presente invención, se
contempla una combinación de un inhibidor de
p53-MDM2 con otro agente anticáncer, especialmente
para uso como medicamento, más especialmente en el tratamiento del
cáncer o enfermedades afines.
Para el tratamiento de las afecciones
anteriores, los compuestos de la invención pueden emplearse
ventajosamente en combinación con uno o más agentes medicinales
distintos, de modo más particular, con otros agentes anticáncer.
Ejemplos de agentes anticáncer incluyen pero sin carácter
limitante:
- -
- compuestos de coordinación de platino, por ejemplo cisplatino, carboplatino u oxaliplatino;
- -
- compuestos de taxano, por ejemplo paclitaxel o docetaxel;
- -
- inhibidores de la topoisomerasa I tales como compuestos de camptotecina, por ejemplo irinotecán o topotecán;
- -
- inhibidores de la topoisomerasa II tales como epipodofilotoxinas antitumorales o derivados de podofilotoxinas, por ejemplo etoposido o teniposido;
- -
- alcaloides antitumorales de la vinca, por ejemplo vinblastina, vincristina o vinorrelbina;
- -
- derivados antitumorales nucleosídicos, por ejemplo 5-fluorouracilo, leucovorina, gemcitabina, o capecitabina;
- -
- agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas o nitrosourea, por ejemplo ciclofosfamida, clorambucil, carmustina, tiotepa, mefalán o lomustina;
- -
- derivados antitumorales de antraciclina, por ejemplo daunorrubicina, doxorrubicina, doxil, idarrubicina o mitoxantrona;
- -
- moléculas que direccionan el receptor IGF-1, por ejemplo picropodofilina;
- -
- derivados de tetracarcina, por ejemplo tetrocarcina A;
- -
- glucocorticoides, por ejemplo prednisona;
- -
- anticuerpos, por ejemplo trastuzumab (anticuerpo HER2), rituximab (anticuerpo CD20), gemtuzamab, cetuximab, pertuzumab o bevacizumab;
- -
- antagonistas de los receptores de estrógenos o moduladores selectivos de los receptores de estrógenos, por ejemplo tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, droloxifeno, faslodex o raloxifeno;
- -
- inhibidores de las aromatasas, tales como exemestano, anastrozol, letrazol o vorozol;
- -
- agentes de diferenciación tales como retinoides, vitamina D o ácido retinoico y agentes bloqueantes del metabolismo del ácido retinoico (RAMBA), por ejemplo accutano;
- -
- inhibidores de la metil-transferasa de DNA, por ejemplo azacitidina o decitabina;
- -
- antifolatos, por ejemplo pemetrexed disódico;
- -
- antibióticos, por ejemplo antinomicina D, bleomicina, mitomicina C, dactinomicina, carminomicina o daunomicina;
- -
- antimetabolitos, por ejemplo clofarabina, aminopterina, citosina-arabinosido o metotrexato;
- -
- agentes inductores de apoptosis y agentes antiangiogénicos, tales como inhibidores de Bcl-2, por ejemplo YC 137, BH 312, ABT 737, gossipol, HA 14-1, TW 37 o ácido decanoico;
- -
- agentes de fijación de tubulina, por ejemplo combrestatina, colchicinas o nocodazol;
- -
- inhibidores de quinasas, como por ejemplo flavoperidol, imatinib-mesilato, erlotinib o gefitinib;
- -
- inhibidores de la farnesil-transferasa, por ejemplo tipifamib;
- -
- inhibidores de la histona-desacetilasa (HDAC), por ejemplo butirato de sodio, ácido suberoilanilida-hidroxámico (SAHA), depsipéptido (FR901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585 o tricostatina A;
- -
- inhibidores del camino ubiquitina-proteasoma, por ejemplo PS-341, MLN.41 o bortezomib;
- -
- Yondelis;
- -
- inhibidores de las telomerasas, por ejemplo telomestatina;
- -
- inhibidores de las metaloproteinasas de la matriz, por ejemplo batimastat, marimastat, prinostat o metastat.
\vskip1.000000\baselineskip
Como se ha expuesto anteriormente, los
compuestos de la presente invención tienen también aplicaciones
terapéuticas en la sensibilización de células tumorales para
quimioterapia y radioterapia.
Por consiguiente, los compuestos de la presente
invención pueden utilizarse como "radiosensibilizador" y/o
"quimiosensibilizador" o pueden administrarse en combinación
con otro "radiosensibilizador" y/o
"quimiosensibilizador".
El término "radiosensibilizador", como se
utiliza en esta memoria, se define como una molécula,
preferiblemente una molécula de peso molecular bajo, administrada a
animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la
sensibilidad de las células a la radiación ionizante y/o para
promover el tratamiento de enfermedades que son tratables con
radiación ionizante.
El término "quimiosensibilizador", como se
utiliza en esta memoria, se define como una molécula,
preferiblemente una molécula de peso molecular bajo, administrada a
animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la
sensibilidad de las células a la quimioterapia y/o promover el
tratamiento de enfermedades que son tratables con agentes
quimioterapéuticos.
Varios mecanismos para el modo de acción de los
radiosensibilizadores han sido propuestos en la bibliografía, con
inclusión de: radiosensibilizadores de células hipóxicas (v.g.,
compuestos de 2-nitroimidazol, y compuestos de
benzotriazina-dióxido) que mimetizan el oxígeno o se
comportan alternativamente como agentes biorreductores en
condiciones de hipoxia; radiosensibilizadores de células no
hipóxicas (v.g. pirimidinas halogenadas) pueden ser análogos de las
bases de DNA y se incorporan preferentemente en el DNA de las
células del cáncer y promueven con ello la rotura inducida por
radiación de las moléculas de DNA y/o previenen los mecanismos
normales de reparación del DNA; y diversos otros mecanismos
potenciales de acción han sido propuestos para los
radiosensibilizadores en el tratamiento de enfermedades. Muchos
protocolos de tratamiento del cáncer emplean actualmente
radiosensibilizadores en asociación con radiación de rayos X.
Ejemplos de radiosensibilizadores activados por rayos X incluyen,
pero sin carácter limitante, los siguientes: metronidazol,
misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol,
nimorazol, mitomicina C, RSU-1069, SR 4233, EO9, RB
6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR),
5-yododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina,
fluorodesoxiuridina (FudR), hidroxiurea, cisplatino, y análogos
terapéuticamente eficaces y derivados de los mismos.
La terapia fotodinámica (PDT) de los cánceres
emplea luz visible como el activador de radiación del agente
sensibilizador. Ejemplos de radiosensibilizadores fotodinámicos
incluyen los siguientes, pero sin carácter limitante: derivados de
hematoporfirina, Photofrin, derivados de benzoporfirina,
etioporfirina de estaño, feoborbida-a,
bacterioclorofila-a, naftalocianinas, ftalocianinas,
ftalocianina de cinc, y análogos y derivados de los mismos
terapéuticamente eficaces.
Los radiosensibilizadores pueden administrarse
en conjunción con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más
compuestos adicionales que incluyen, pero sin carácter limitante:
compuestos que promueven la incorporación de radiosensibilizadores
a las células diana; compuestos que controlan el flujo de agentes
terapéuticos, nutrientes y/u oxígeno a las células diana; agentes
quimioterapéuticos que actúan sobre el tumor con o sin radiación
adicional; u otros compuestos terapéuticamente eficaces para el
tratamiento del cáncer u otra enfermedad.
Los quimiosensibilizadores pueden administrarse
en asociación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más
compuestos adicionales que incluyen, pero sin carácter limitante:
compuestos que promueven la incorporación de quimiosensibilizadores
a las células diana; compuestos que controlan el flujo de agentes
terapéuticos, nutrientes y/u oxígeno a las células diana; agentes
quimioterapéuticos que actúan sobre el tumor u otros compuestos
terapéuticamente eficaces para el tratamiento del cáncer u otra
enfermedad. Los antagonistas del calcio, por ejemplo verapamil, se
han encontrado útiles en combinación con agentes antineoplásticos
para establecer la quimiosensibilidad en las células tumorales
resistentes a los agentes quimioterapéuticos aceptados y potenciar
la eficacia de tales compuestos en enfermedades malignas sensibles a
los fármacos.
Teniendo en cuenta sus útiles propiedades
farmacológicas, los componentes de las combinaciones de acuerdo con
la invención, es decir, el otro agente medicinal y el inhibidor de
p53-MDM puede formularse en diversas formas
farmacéuticas para propósitos de administración. Los componentes
pueden formularse por separado en composiciones farmacéuticas
individuales o en una composición farmacéutica unitaria que contiene
ambos compuestos.
La presente invención se refiere también por
tanto a una composición farmacéutica que comprende el otro agente
medicinal y el inhibidor de p53-MDM junto con uno o
más vehículos farmacéuticos.
La presente invención se refiere adicionalmente
al uso de una combinación de acuerdo con la invención en la
fabricación de una composición farmacéutica para inhibir el
crecimiento de las células tumorales.
La presente invención se refiere adicionalmente
a un producto que contiene como primer ingrediente activo un
inhibidor de p53-MDM2 de acuerdo con la invención y
como segundo ingrediente activo un agente anticáncer, como una
preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en
el tratamiento de pacientes que sufren de cáncer.
El otro agente medicinal y el inhibidor de
p53-MDM2 pueden administrarse simultáneamente (v.g.
en composiciones separadas o unitarias) o secuencialmente en
cualquier orden. En el último caso, los dos compuestos se
administraran dentro de un periodo y en una cantidad y manera que
es suficiente para asegurar que se consigue un efecto ventajoso o
sinérgico. Se apreciará que el método y el orden de administración
preferidos así como las cantidades de dosificación respectivas y
los regímenes para cada componente de la combinación dependerán del
otro agente medicinal particular y del inhibidor de
p53-MDM2 que se administre, su ruta de
administración, el tumor particular que se esté tratando y el
hospedador particular de que se trate. El método y orden de
administración óptimos así como las cantidades y régimen de
dosificación pueden ser determinados fácilmente por los expertos en
la técnica utilizando métodos convencionales y teniendo en cuenta la
información expuesta en esta memoria.
El compuesto de coordinación de platino se
administra ventajosamente en una dosis de 1 a 500 mg por metro
cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 50 a 400
mg/m^{2}, particularmente para cisplatino en una dosis de
aproximadamente 75 mg/m^{2} y para carboplatino aproximadamente
300 mg/m^{2} por curso de tratamiento.
El compuesto de taxano se administra
ventajosamente en una dosis de 50 a 400 mg por metro cuadrado
(mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 75 a 250
mg/m^{2}, particularmente para paclitaxel en una dosis de
aproximadamente 175 a 250 mg/m^{2} y para docetaxel en
aproximadamente 75 a 150 mg/m^{2} por curso de tratamiento.
El compuesto de camptotecina se administra
ventajosamente en una dosis de 0,1 a 400 mg por metro cuadrado
(mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 1 a 300 mg/m^{2},
particularmente para irinotecán en una dosis de aproximadamente 100
a 350 mg/m^{2} y para topotecán en aproximadamente 1 a 2
mg/m^{2} por curso de tratamiento.
\newpage
El derivado antitumoral de podofilotoxina se
administra ventajosamente en una dosis de 30 a 300 mg por metro
cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 50 a 250
mg/m^{2}, particularmente para etoposido en una dosis de
aproximadamente 35 a 100 mg/m^{2}, y para teniposido en un
aproximadamente 50 a 250 mg/m^{2} por curso de tratamiento.
El alcaloide anti-tumoral de la
vinca se administra ventajosamente en una dosis de 2 a 30 mg por
metro cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal, particularmente
para vinblastina en una dosis de aproximadamente 3 a 12 mg/m^{2},
para vincristina en una dosis de aproximadamente 1 a 2 mg/m^{2} y
para vinorrelbina en una dosis de aproximadamente 10 a 30 mg/m^{2}
por curso de tratamiento.
El derivado antitumoral nucleosídico se
administra ventajosamente en una dosis de 200 a 2500 mg por metro
cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 700 a 1500
mg/m^{2}, particularmente para 5-FU en una dosis
de 200 a 500 mg/m^{2}, para gemcitabina en una dosis de
aproximadamente 800 a 1200 mg/m^{2} y para capcitabina en
aproximadamente 1000 a 2500 mg/m^{2} por curso de tratamiento.
Los agentes alquilantes tales como mostaza
nitrogenada o nitrosourea se administran ventajosamente en una
dosis de 100 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) se superficie
corporal, por ejemplo 120 a 200 mg/m^{2}, particularmente para
ciclofosfamida en una dosis de aproximadamente 100 a 500 mg/m^{2},
para clorambucil en una dosis de aproximadamente 0,1 a 0,2 mg/kg,
para carmustina en una dosis de aproximadamente 150 a 200
mg/m^{2}, y para lomustina en una dosis de aproximadamente 100 a
150 mg/m^{2} por curso de tratamiento.
El derivado antitumoral de antraciclina se
administra ventajosamente en una dosis de 10 a 75 mg por metro
cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal, por ejemplo 15 a 60
mg/m^{2}; particularmente para doxorrubicina en una dosis de
aproximadamente 40 a 75 mg/m^{2}, para daunorrubicina en una dosis
de aproximadamente 25 a 45 mg/m^{2}, y para idarrubicina en una
dosis de aproximadamente 10 a 15 mg/m^{2} por curso de
tratamiento.
El agente antiestrogénico se administra
ventajosamente en una dosis de aproximadamente 1 a 100 mg
diariamente, dependiendo del agente particular y la afección de que
se trate. El tamoxifeno se administra ventajosamente por vía oral
en una dosis de 5 a 50 mg, preferiblemente 10 a 20 mg dos veces al
día, continuando la terapia durante tiempo suficiente para alcanzar
y mantener un efecto terapéutico. El toremifeno se administra
ventajosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 60 mg
una vez al día, continuando la terapia durante un tiempo suficiente
para alcanzar y mantener un efecto terapéutico. El anastrozol se
administra ventajosamente por vía oral en una dosis de
aproximadamente 1 mg una vez al día. El droloxifeno se administra
ventajosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente
20-100 mg una vez al día. El raloxifeno se
administra ventajosamente por vía oral en una dosis de
aproximadamente 60 mg una vez al día. El exemestano se administra
ventajosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 25 mg
una vez al día.
Los anticuerpos se administran ventajosamente en
una dosis de aproximadamente 1 a 5 mg por metro cuadrado
(mg/m^{2}) de superficie corporal, o como se conoce en la técnica,
en caso de ser diferente. El trastuzumab se administra
ventajosamente en una dosis de 1 a 5 mg por metro cuadrado
(mg/m^{2}) de superficie corporal, particularmente 2 a 4
mg/m^{2} por curso de tratamiento.
Estas dosificaciones pueden administrarse por
ejemplo una sola vez, dos veces o más por curso de tratamiento, que
puede repetirse por ejemplo cada 7, 14, 21 ó 28 días.
Los compuestos de fórmula (I), las sales de
adición de ácido farmacéuticamente aceptables y las formas
estereoisómeras de los mismos pueden tener propiedades diagnósticas
valiosas en el sentido de que pueden utilizarse para detectar o
identificar una interacción p53-MDM2 en una muestra
biológica que comprende detectar o medir la formación de un
complejo entre un compuesto marcado y/o p53 y/o MDM2 y/u otras
moléculas, péptidos, proteínas, enzimas o receptores.
Los métodos de detección o identificación pueden
utilizar compuestos que están marcados con agentes de marcación
tales como radioisótopos, enzimas, sustancias fluorescentes,
sustancias luminosas, etc. Ejemplos de los radioisótopos incluyen
^{125}I, ^{131}I, ^{3}H y ^{14}C. Las enzimas se hacen
detectables usualmente por conjugación de un sustrato apropiado que
cataliza a su vez una reacción detectable. Ejemplos de las mismas
incluyen, por ejemplo, beta-galactosidasa,
beta-glucosidasa, fosfatasa alcalina, peroxidasa y
malato-deshidrogenasa, preferiblemente peroxidasa
de rábano picante. Las sustancias luminosas incluyen, por ejemplo,
luminol, derivados de luminol, luciferina, equorina y
luciferasa.
Las muestras biológicas pueden definirse como
tejido corporal o fluidos corporales. Ejemplos de fluidos corporales
son fluido cerebroespinal, sangre, plasma, suero, orina, esputo,
saliva y análogos.
Los ejemplos siguientes ilustran la presente
invención.
En lo sucesivo, "DMF" se define como
N,N-dimetilformamida, "DCM" se define como
diclorometano, "EtOAc" se define como acetato de etilo,
"EtOH" se define como etanol, "MeOH" se define como
metanol y "THF" se define como tetrahidrofurano.
\vskip1.000000\baselineskip
Para algunos compuestos, se obtuvieron los
puntos de fusión con un banco caliente Kofler, constituido por una
placa calentada con un gradiente lineal de temperatura, un índice
deslizante y una escala de temperatura en grados Celsius.
\vskip1.000000\baselineskip
Método
A
El gradiente de HPLC fue suministrado por un
sistema Alliance HT 2795 (Waters) que comprendía una bomba
cuaternaria con desgasificador, un tomamuestras automático y un
detector de red de diodos (DAD). El flujo procedente de la columna
se dividió a un detector MS. El detector MS estaba configurado con
una fuente de ionización por pulverización electrónica. El voltaje
de la aguja capilar era 3 kV y la temperatura de la fuente se
mantuvo a 100ºC en el LCT (espectrómetro de masas de tiempo de
vuelo con diseño Z-Spray de Waters). Se utilizó como
gas nebulizador nitrógeno. La adquisición de los datos se realizó
con un sistema de datos Waters-Micromass
MassLynx-Openlynx.
La HPLC en fase inversa se llevó a cabo en una
columna Xterra-RP C18 (5 \mum, 3,9 x 150 mm) con
un caudal de 1,0 ml/min a una temperatura de 30ºC. Se emplearon dos
fases móviles (fase móvil A: 100% acetato de amonio 7 mM; fase
móvil B: 100% acetonitrilo, para ejecutar una condición de gradiente
desde 85%A, 15% B (mantenimiento durante 3 minutos) hasta 20% A,
80% B en 5 minutos, mantenimiento a 20% A y 80% B durante 6 minutos
y reequilibración con las condiciones iniciales durante 3 minutos.
Se utilizó un volumen de inyección de 20 \mul. El voltaje del
cono era 20V para modo de ionización positivo. Los espectros de
masas se adquirieron por escaneo desde 100 a 900 en 0,8 segundos
utilizando un retardo interescaneo de 0,08 segundos.
\vskip1.000000\baselineskip
Método
B
El gradiente LC fue suministrado por un sistema
Acquity UPLC (Waters) que comprendía una bomba binaria, un
organizador de muestras, un calentador de columna (ajustado a 55ºC)
y un detector de red de diodos (DAD). El flujo de la columna se
dividió a un detector MS. El detector MS estaba configurado con una
fuente de ionización por pulverización electrónica. Los espectros
de masas se adquirieron por escaneo desde 100 a 1000 en 0,18
segundos utilizando un tiempo de residencia de 0,02 segundos. El
voltaje de la aguja capilar era 3,5 kV y la temperatura de la
fuente se mantuvo a 140ºC. Se utilizó nitrógeno como gas
nebulizador. La adquisición de los datos se realizó con un sistema
de datos Waters-Micromass
MassLynx-Openlynx.
La UPLC de fase inversa se realizó en una
columna puenteada etilsiloxano/sílice (BEH) C18 (1,7 \muM, 2,1 x
50 mm) con un caudal de 0,8 ml/min. Se utilizaron dos fases móviles
(fase móvil A: 0,1% ácido fórmico en H_{2}O/metanol 95/5; fase
móvil B: metanol) para ejecutar una condición de gradiente desde 95%
A a 5% A, 95% B en 1,3 minutos y mantenimiento durante 0,2 minutos.
Se utilizó un volumen de inyección de 0,5 \mul.
El voltaje del cono era 10V para modo de
ionización positivo y 20V para modo de ionización negativo.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de
5-nitroindolina (10,0 g, 0,061 moles) e hidrocloruro
de 4-cloropiridina (11,0 g, 0,073 moles) en DMF (70
ml), bajo argón, a 0ºC, se añadió poco a poco
terc-butóxido de potasio (17,0 g, 0,15 moles). La
mezcla se calentó hasta 100ºC durante 16 horas. La mezcla se vertió
en hielo y se extrajo dos veces con EtOAc. Se separó la capa
orgánica, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó el
disolvente. El residuo se purificó dos veces por cromatografía en
columna sobre gel de sílice (40-63 \mum)
(eluyente: ciclohexano/EtOAc/MeOH 50/50/0 hasta 0/80/20). Se
recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente,
obteniéndose 2,49 g (17%) de compuesto intermedio 1 como sólido
pardo anaranjado.
^{1}H NMR (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 8,47 (dd, 2H, J=6,4, J=1,6),
8,06 (m, 2H), 7,41 (d, 1H, J=9,6), 7,28 (dd, 2H, J=6,4, J=1,6), 4,16
(t, 2H, J=8,6), 3,22 (t, 2H, J=8,6), MS (ES+) m/z 242
(M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 1 (2,4 g,
0,010 moles) y níquel Raney (5 ml, suspensión espesa al 50% en agua)
en EtOH (45 ml) y THF (45 ml) se agitó a la temperatura ambiente
bajo 30 psi (2,11 kg/cm^{2}) de hidrógeno durante 3 horas. Después
de filtración a través de un taco de Celita, se evaporó el
disolvente para dar 2,01 g (96%) de compuesto intermedio 2 como un
sólido pardo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32
(dd, 2H, J=6,4, J=1,5), 7,15 (d, 1H, J=8,5), 6,92 (dd, 2H, J=6,4,
J=1,5), 6,63 (d, 1H, J=2,2), 6,50 (dd, 1H, J=8,3, J=2,4), 3,92 (t,
2H, J=8,3), 3,44 (brs, 2H), 3,08 (t, 2H, J=8,3).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de compuesto intermedio 2 (1,9 g,
0,0089 moles) en DCM (20 ml) y THF (20 ml), bajo argón, se
añadieron sucesivamente ácido
indol-3-acético (2,0 g, 0,012
moles), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,6 g,
0,012 moles) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3
etilcarbodiimida (2,2 g, 0,012 moles). La mezcla de reacción se
agitó a la temperatura ambiente durante 40 horas. Para completar la
reacción, se añadieron ácido
indol-3-acético (1,6 g, 0,0089
moles) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(1,7 g, 0,0089 moles) y la mezcla se agitó a la temperatura
ambiente durante 16 horas más. Se evaporaron los disolventes y el
residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: DCM/MeOH/NH_{4}OH
95/5/0,1 a 80/20/0,1). Se evaporaron las fracciones recogidas, y el
sólido resultante se lavó con MeOH y se secó, obteniéndose 1,95 g
(60%) del compuesto intermedio 3.
^{1}H NMR (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 10,93 (brs, 1H), 10,08 (brs,
1H), 8,31 (d, 2H, J=6,3), 7,88 (d, 1H, J=8,1), 7,58 (m, 2H), 7,34
(m, 2H), 7,26 (d, 1H, J=2,1), 7,17 (d, 2H, J=6,6), 7,07 (t, 1H,
J=6,9), 6,98 (t, 1H, J=7,4), 3,99 (t, 2H, J=8,3), 3,71 (s, 2H), 3,12
(t, 2H, J=8,2), MS (ES+) m/z 369 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de
5-nitroindolina (5,0 g, 0,030 moles) y
4-cloroquinolina (6,0 g, 0,037 moles) en DMF (30
ml), bajo argón, se añadió poco a poco terc-butóxido
de potasio (8,4 g, 0,075 moles). La mezcla se agitó a 100ºC durante
16 horas y luego a la temperatura ambiente durante 70 horas. La
mezcla se vertió en hielo y se extrajo tres veces con EtOAc. Se
separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó MgSO_{4},
se filtró y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó por
cromatografía en columna sobre gel de sílice (40-63
\mum) (eluyente: EtOAc/ciclohexano 50/50 a 100/0). Se recogieron
las fracciones puras y se evaporó el disolvente, obteniéndose 2,26
g (26%) de compuesto intermedio 4 como un sólido anaranjado.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,93
(d, 1H, J=4,9), 8,11 (m, 2H), 7,92 (dd, 1H, J=8,9, J=2,5), 7,85 (d,
1H, J=7,7), 7,82 (dt, 1H, J=7,0, J=1,4), 7,60 (dt, 1H, J=6,8,
J=1,2), 7,54 (d, 1H, J=4,9), 6,26 (d, 1H, J=8,9), 4,30 (t, 2H,
J=8,4), 3,35 (t, 2H, J=8,2).
MS (ES+) m/z 292 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 4 (2,0 g,
0,0069 moles) y níquel Raney (3 ml, suspensión espesa al 50% en
agua) en EtOH (30 ml) y THF (30 ml) se agitó a la temperatura
ambiente bajo 30 psi (2,11 kg/cm^{2}) de hidrógeno durante 4,5
horas. Después de filtración a través de un taco de Celita, se
evaporó el disolvente, obteniéndose 1,81 g (100%) de compuesto
intermedio 5 como un sólido anaranjado.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,71
(d, 1H, J=5,1), 8,07 (d, 1H, J=8,5), 8,01 (d, 1H, J=8,5), 7,67 (t,
1H, J=7,0), 7,41 (t, 1H, J=7,1), 7,09 (d, 1H, J=5,1), 6,67 (s, 1H),
6,49 (d, 1H, J=8,3), 6,38 (dd, 1H, J=8,3, J=1,9), 4,04 (t, 2H,
J=7,9), 3,39 (brs, 2H), 3,12 (t, 2H, J=7,8).
MS (ES+) m/z 262 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de compuesto intermedio 5 (1,7 g,
0,0064 moles) en DCM (15 ml) y THF (15 ml), bajo argón, se
añadieron sucesivamente ácido
indol-3-acético (1,5 g, 0,0084
moles), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,1 g,
0,0084 moles) e hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(1,6 g, 0,0084 moles). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente
durante 16 horas. Se evaporaron los disolventes y el residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: DCM/MeOH/NH_{4}OH
90/10/0,1). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 1,15 g (43%) de compuesto intermedio 6 como
una espuma parda.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,74
(d, 1H, J=5,1), 8,61 (brs, 1H), 8,09 (d, 1H, J=8,1), 7,91 (d, 1H,
J=8,4), 7,70-7,62 (m, 2H), 7,41 (m, 4H), 7,22 (m,
3H), 7,09 (d, 1H, J=5,1), 6,74 (dd, 1H, J=8,4, J=1,8), 6,38 (d, 1H,
J=8,4), 4,04 (t, 2H, J=8,0), 3,89 (s, 2H), 3,15 (t, 2H, J=7,9).
MS (ES+) m/z 419 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de ácido
indol-3-acético (2,0 g, 0,013 moles)
y 1,1-carbonildiimidazol (2,1 g, 0,013 moles,
añadido poco a poco) en DCM (28 ml) se agitó bajo argón a la
temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió hidrocloruro de
N,O-dimetilhidroxilamina (1,3 g, 0,013 moles), se
agitó la mezcla a la temperatura ambiente durante 16 horas, y se
vertió luego en hielo y agua. Se ajustó el pH a 10 con una solución
4N de hidróxido de sodio, y la capa acuosa se extrajo dos veces con
EtOAc. Se separó la capa orgánica, se lavó con una solución de ácido
clorhídrico 3N, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 2,37 g (89%) de compuesto intermedio 7 como
un sólido de color rosado.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8.09
(brs, 1H), 7,66 (d, 1H, J=7,5), 7,36 (d, 1H, J=7,5),
7,22-7,10 (m, 3H), 3,92 (s, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,23
(s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de 5-nitroindolina
(8,0 g, 0,024 moles) y éster metílico del ácido
4-cloro-2-piridinacarboxílico
(5,0 g, 0,029 moles) en ácido acético (24 ml), se calentó a 120ºC
durante 25 minutos en un aparato de microondas Biotage Initiator.
La reacción se extinguió con hielo, y se ajustó el pH a pH 9 por
adición de una solución saturada de carbonato de potasio. La mezcla
se extrajo tres veces con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó el disolvente. El residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: DCM/MeOH 100/0 a 90/10).
Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente,
obteniéndose 1,37 g (19%) de compuesto intermedio 8 como un sólido
amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,65
(d, 1H, J=5,6), 8,16 (dd, 1H, J=8,9, J=2,1), 8,11 (s, 1H), 7,98 (d,
1H, J=2,5), 7,35 (d, 1H, J=8,9), 7,30 (dd, 1H, J=5,7, J=2,5), 4,23
(t, 2H, J=8,5), 4,05 (s, 3H), 3,32 (t, 2H, J=8,4),
MS (ES+) m/z 300 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 8 (1,2 g,
0,0045 moles) y níquel Raney (4 ml, suspensión espesa al 50% en
agua) en MeOH (20 ml) y THF (20 ml) se agitó a la temperatura
ambiente bajo 1 atmósfera de hidrógeno durante 20 horas. Después de
filtración a través de un taco de Celita, se evaporó el disolvente,
obteniéndose 1,06 g (88%) de compuesto intermedio 9 como un sólido
anaranjado.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,40
(d, 1H, J=5,8), 7,77 (d, 1H, J=2,5), 7,18 (d, 1H, J=8,4), 7,05 (dd,
1H, J=5,8, J=2,6), 6,62 (d, 1H, J=2,2), 6,52 (dd, 1H, J=8,4, J=2,4),
4,00 (m, 5H), 3,09 (t, 2H, J=8,3).
MS (ES+) m/z 270 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de 5-aminoindol (1,1
g, 0,0086 moles) y anhídrido ftálico (2,6 g, 0,017 moles) en DMF (20
ml) se agitó a 100ºC durante 5 horas, y luego a la temperatura
ambiente durante 64 horas. La mezcla de reacción se diluyó en
EtOAc, se lavó dos veces con una solución saturada de cloruro de
amonio, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente. El aceite resultante se recogió en ácido acético (15 ml)
y se agitó a la temperatura ambiente durante 20 minutos, después de
lo cual se calentó a 80ºC durante 1,5 horas. Se añadió hielo y el
pH se ajustó a pH 4 con una solución saturada de carbonato de sodio.
La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc. Se separó la capa
orgánica, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna
sobre gel de sílice (40-63 \mum) (eluyente:
EtOAc/ciclohexano 40/60). Se recogieron las fracciones puras y se
evaporó el disolvente, obteniéndose 2,06 g (91%) de compuesto
intermedio 10.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32
(brs, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 1H, J=2,0), 7,49 (d,
1H, J=8,6), 7,27 (dd, 1H, J=5,7, J=2,8), 7,17 (dd, 1H, J=8,6,
J=2,0), 6,61 (t, 1H, J=1,1).
MS (ES+) m/z 263 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 10 (2,1 g,
0,0079 moles) y cianoborohidruro de sodio (987 mg, 0,016 moles) en
ácido acético (30 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 18
horas. Se añadió hielo y el pH se ajustó a 6 con una solución
saturada de carbonato de sodio. La mezcla se extrajo dos veces con
EtOAc. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el disolvente. El residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: EtOAc/ciclohexano 30/70 a
70/30). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 726 mg (35%) de compuesto intermedio 11
como un sólido amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,93
(m, 2H), 7,77 (m, 2H), 7,09 (s, 1H), 7,00 (d, 1H, J=8,2), 6,70 (d,
1H, J=8,2), 3,62 (t, 2H, J=8,4), 3,09 (t, 2H, J=8,4).
MS (ES+) m/z 265 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 11 (570 mg,
0,0022 moles),
4-bromo-6,7-dihidro-5H-[1]piridin-7-ol
(554 mg, 0,0026 moles) y una solución de ácido clorhídrico 5N en
2-propanol (0,57 ml, 0,0029 moles) en DMF (11 ml)
se calentó a 120ºC durante 1 hora en un aparato de microondas
Biotage Initiator. La reacción se extinguió con una solución
saturada de hidrogenocarbonato de sodio y se extrajo 3 veces con
DCM. Se evaporaron los disolventes. El residuo se purificó por
cromatografía en columna sobre gel de sílice (40-63
\mum) (eluyente: EtOAc/MeOH 100/0 a 80/20 y luego DCM/MeOH 95/5 a
90/10). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 651 mg (76%) de compuesto intermedio 12
como un sólido amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,30
(d, 1H, J=5,6), 7,95 (m, 2H), 7,79 (m, 2H),
7,23-7,12 (m, 3H), 6,94 (d, 1H, J=8,4), 5,24 (t, 1H,
J=7,0), 4,18 (m, 1H), 4,08 (m, 1H); 3,25 (m, 2H), 3,00 (m, 1H), 2,85
(m, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,06 (m, 1H).
MS (ES+) m/z 398 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
A la temperatura ambiente, se añadió hidrato de
hidracina (137 \mul, 0,0028 moles) a una suspensión de compuesto
intermedio 12 (557 mg, 0,0014 moles) en MeOH (5,5 ml) y la mezcla
resultante se calentó a 7,0ºC durante 40 minutos. Se extinguió la
reacción con agua y se extrajo 4 veces con EtOAc. Se separó la capa
orgánica, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 392 mg (100%) de compuesto intermedio 13
como un sólido pardo anaranjado.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,18
(d, 1H, J=5,8), 7,07 (d, 1H, J=5,8), 6,49 (d, 1H, J=8,3), 6,63 (d,
1H, J=2,1), 6,48 (dd, 1H, J=8,3, J=2,4), 5,21 (m, 1H), 4,19 (brs,
2H), 4,03 (m, 3H), 3,05 (m, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,03
(m, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
2,3-dihidro-3,3-dimetil-5-nitro-1H-indol
(0,003 moles) y 4-bromopiridina (0,003 moles) en
1-butanol (5 ml) se calentó en un tubo
herméticamente cerrado en un horno microondas a 140ºC durante 30
minutos, se recogió luego en una solución de carbonato de potasio
al 10% y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, a
continuación con NaCl y salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y
se evaporó el disolvente. El residuo (0,8 g) se purificó por
cromatografía en columna sobre gel de sílice (20-45
\mum) (eluyente: DCM/MeOH 100/0 a 98/2). Se recogieron las
fracciones puras y se evaporó el disolvente. El residuo (0,45 g,
64%) se cristalizó en acetonitrilo. El precipitado se separó por
filtración y se secó, obteniéndose 0,216 g (31%) del compuesto
intermedio 14, punto de fusión 217ºC (Kofler).
^{1}H NMR (DMSO-d_{6})
\delta 1,4 (6H, s), 3,92 (2H, s), 7,3 (2H, m), 7,45 (1H, m), 8,10
(2H,m), 8,47 (2H,m).
LCMS (ES+) m/z 270 (M+1), R_{t} = 0,77, método
B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de compuesto intermedio 14 (0,003
moles) y níquel Raney (0,9 g) en MeOH (20 ml) se hidrogenó a la
temperatura ambiente durante 1 hora a una presión de 3 bares, y se
filtró luego sobre Celita. La Celita se lavó con MeOH. El filtrado
se evaporó, obteniéndose 0,8 g (100%) de compuesto intermedio
15.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió poco a poco hexafluorofosfato de
bromotris(pirrolidino)fosfonio (0,004 moles) a la
temperatura ambiente a una solución de compuesto intermedio 15
(0,003 moles), ácido
1H-indol-3-acético (0,004
moles), 1-hidroxibenzotriazol (0,04 moles) y
diisopropil-éter (0,005 moles) en DCM (15 ml). La mezcla se agitó a
la temperatura ambiente durante una noche. Se lavó la capa orgánica
con una solución de carbonato de potasio al 10%, se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó el disolvente. El residuo (3,2
g) se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(10-40 \mum) (eluyente: DCM/MeOH/NH_{4}OH
25/5/0,2). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el
disolvente. El residuo (0,7 g, 52%) se cristalizó en acetonitrilo.
El precipitado se separó por filtración y se secó, obteniéndose 0,55
g (41%) de compuesto intermedio 16, punto de fusión 158ºC
(Kofler).
^{1}H NMR (DMSO-d6) \delta
1,28 (6H, s), 3,7 (2H, s), 3,73 (2H, s), 6,99 (1H, t, J=7,7Hz),
7,07-7,11 (3H,m), 2,25 (1H, d, J=3,6Hz),
7,30-7,39 (3H, m), 7,55 (1H, br, d, J=3,6Hz), 7,62
(1H, d, J=7,7 Hz), 8,3 (2H, d, J=7,7Hz), 10,03 (1H, br, s), 10,92
(1H, br, s) LCMS (ES+) m/z 397 (M+1), R_{t} = 8,43, método A.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió poco a poco hidruro de litio y
aluminio (423 mg, 0,0011 moles) a una suspensión de compuesto
intermedio 3 (1,0 g, 0,0027 moles) en THF (60 ml) bajo argón. La
mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante 24 horas, se
extinguió con hielo y una solución diluida de sal de Rochelle, y se
extrajo 3 veces con DCM. Se separó la capa orgánica, se secó
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el disolvente. El residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: DCM/MeOH/NH_{4}OH
95/5/0,1). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el
disolvente, obteniéndose 170 mg (18%) de compuesto 1 como una espuma
amarilla.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,36
(brs, 1H), 8,32 (d, 2H, J=6,6), 7,63 (d, 1H, J=7,8), 7,39 (d, 1H,
J=7,5), 7,24-7,11 (m, 3H), 7,07 (d, 1H, J=1,8), 6,93
(d, 2H, J=6,6), 6,58 (s, 1H), 6,45 (dd, 1H, J=8,4, J=2,1), 3,93 (t,
2H, J=8,2), 3,62 (brs, 1H), 3,46 (t, 2H, J=7,5), 3,09 (m, 4H). LCMS
(ES+) m/z 355 (M+1), R_{t} = 8,30, método A.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió poco a poco bajo argón, a la
temperatura ambiente, hidruro de litio y aluminio (391 mg, 0,010
moles) a una solución de compuesto intermedio 6 (1,1 g, 0,0026
moles) en THF (55 ml). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente
durante 18 horas. La reacción se extinguió a 0ºC con MeOH. Se
añadieron hielo y solución diluida de sal de Rochelle, y la mezcla
se extrajo 3 veces con DCM. Se separó la capa orgánica, se lavó con
salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna
sobre gel de sílice (40-63 \mum) (eluyente:
DCM/MeOH/NH_{4}OH 97/3/0,5). Se recogieron las fracciones puras y
se evaporó el disolvente, obteniéndose 121 mg (12%) de compuesto 2
como una espuma anaranjada.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,70
(d, 1H, J=5,1), 8,18 (brs, 1H), 8,07 (d, 1H, J=8,7), 8,03 (d, 1H,
J=8,7), 7,66 (m, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,22 (t, 1H, J=7,7), 7,12 (m,
3H), 6,63 (s, 1H), 6,56 (d, 1H, J=8,4), 6,34 (dd, 1H, J=8,4, J=2,1),
4,06 (t, 2H, J=7,8), 3,46 (t, 2H, J=6,8), 3,12 (m, 4H).
MS (ES+) m/z 405 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
A 0ºC bajo argón, se añadió hidruro de litio y
aluminio (14 mg, 0,00036 moles) a una solución de compuesto
intermedio 7 (74 mg, 0,00036 moles) en THF (1 ml). La mezcla se
agitó a 0ºC durante 1 hora, se extinguió con una solución al 5% de
hidrogenosulfato de potasio, y se extrajo dos veces con EtOAc. Se
separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el disolvente, para dar el
indol-3-il-acetaldehído
como un aceite anaranjado.
Una mezcla de compuesto intermedio 9 (200 mg,
0,00074 moles) y cianoborohidruro de sodio (64 mg, 0,0010 moles) en
MeOH (2,3 ml) y ácido acético (2 gotas) se añadió gota a gota a una
solución del aldehído anterior (236 mg, 0,0015 moles) en MeOH (2
ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente
durante 16 horas. La reacción se extinguió con agua, se alcalinizó
con una solución saturada de hidrofluorocarbonato de sodio y se
extrajo tres veces con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se lavó
con salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el
disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna
sobre gel de sílice (40-63 \mum) (eluyente:
EtOAc/MeOH 100/0 a 90/10). Se recogieron las fracciones puras y se
evaporó el disolvente, obteniéndose 190 mg (44%) de compuesto 3 como
una espuma anaranjada.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,42
(d, 1H, J=5,7), 8,08 (brs, 1H), 7,79 (d, 1H, J=2,4), 7,63 (d, 1H,
J=7,8), 7,40 (d, 1H, J=8,1), 7,25-7,07 (m, 5H), 6,59
(s, 1H), 6,48 (dd, 1H, J=8,7, J=2,1), 4,00 (m, 5H), 3,48 (t, 2H,
J=6,8), 3,12 (m, 4H).
MS (ES+) m/z 413 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió lentamente borohidruro de sodio (92
mg, 0,0024 moles) a una solución de compuesto 3 (100 mg, 0,00024
moles) en MeOH (3 ml). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente
durante 1 hora y luego a 80ºC durante 4 horas, y de nuevo a la
temperatura ambiente durante 85 horas. La reacción se extinguió con
agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica,
se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó
el disolvente. El residuo se purificó por cromatografía en columna
sobre gel de sílice (40-63 \mum) (eluyente:
DCM/MeOH 90/10 a 85/15). Se recogieron las fracciones puras y se
evaporó el disolvente, obteniéndose 50 mg (54%) del compuesto 4 como
una espuma amarilla.
^{1}H NMR (300 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 10,83 (brs, 1H), 8,14 (d, 1H,
J=5,7), 7,54 (d, 1H, J=7,8), 7,35 (d, 1H, J=7,8), 7,22 (m, 2H), 7,14
(d, 1H, J=2,1), 7,70 (dt, 1H, J=7,6, J=1,2), 6,98 (dt, 1H, J=7,5,
J=0,9), 6,86 (dd, 1H, J=6,0, J=2,4), 6,62 (d, 1H, J=2,1), 6,45 (dd,
1H, J=8,7, J=2,2), 5,39 (brs, 2H), 4,49 (d, 2H, J=4,0), 3,92 (t, 2H,
J=8,2), 3,30 (m, 2H), 3,06 (t, 2H, J=8,1), 2,96 (t, 2H, J=7,5).
MS (ES+) m/z 385 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
A 0ºC bajo argón, se añadió hidruro de litio y
aluminio (14 mg, 0,00036 moles) a una solución de compuesto
intermedio 7 (74 mg, 0,00036 moles) en THF (1 ml). La mezcla se
agitó a 0ºC durante 1 hora, se extinguió con una solución al 5% de
hidrogenosulfato de potasio, y se extrajo dos veces con EtOAc. Se
separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el disolvente, para dar el
indol-3-il-acetaldehído
como un aceite anaranjado.
A una mezcla de compuesto intermedio 13 (100 mg,
0,00037 moles) y cianoborohidruro de sodio (33 mg, 0,00052 moles)
en MeOH (1,5 ml) y ácido acético (2 gotas), se añadió gota a gota
una solución del aldehído anterior (57 mg, 0,00036 moles) en MeOH
(0,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente
durante 18 horas. La reacción se extinguió con una solución
saturada de hidrogenocarbonato de sodio y se extrajo dos veces con
EtOAc. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó el disolvente. El residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice
(40-63 \mum) (eluyente: DCM/MeOH 100/0 a 90/10).
Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente,
obteniéndose 79 mg (52%) de compuesto 5 como una espuma
amarilla.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,37
(brs, 1H), 8,15 (d, 1H, J=5,8), 7,63 (d, 1H, J=7,8), 7,37 (d, 1H,
J=7,1), 7,21 (dt, 1H, J=7,6, J=1,2), 7,12 (dt, 1H, J=7,6, J=1,1),
7,07 (m, 2H), 6,83 (d, 1H, J=8,5), 6,56 (d, 1H, J=2,0), 6,40 (dd,
1H, J=8,5, J=2,3), 5,22 (t, 1H, J=6,7), 4,19 (brs, 1H), 4,04 (m,
3H), 3,44 (t, 2H, J=6,7), 3,06 (m, 5H), 2,83 (m, 1H), 2,54 (m, 1H),
2,08 (m, 1H).
MS (ES+) m/z 411 (M+1).
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto intermedio 16 (0,001 mol) se añadió
poco a poco a una solución de tetrahidruro de litio y aluminio
(0,002 moles) en THF (10 ml) en corriente de N_{2}. La mezcla se
agitó y se calentó a reflujo durante 24 horas, se vertió en agua
con hielo y se filtró sobre Celita. La Celita se lavó con EtOAc. El
filtrado se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó el disolvente. El residuo
(0,45 g) se purificó por cromatografía en columna sobre gel de
sílice (10 \mum) (eluyente: DCM/MeOH/NH_{4}OH 95/5/0,5). Se
recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente,
obteniéndose 0,042 g de compuesto 6.
^{1}H NMR (DMSO-d6) \delta
1,28 (6H, s), 2,95 (2H, t, J=7,7Hz), 3,27-3,34 (2H,
m), 3,65 (2H, s), 5,3 8(1H, br, t, J=6,4Hz), 6,45 (1H, dd,
J=4Hz,7,7Hz), 6,57 (1H, d, J=4Hz), 6,96-7,02 (3H,
m), 7,07 (1H, t, J=7,7Hz), 7,15-7,5 (3H, m),7,35
(1H, d, J=7,7Hz), 7,55 (1H, d, J=7,7Hz), 8,22 (1H, d, J=7,7Hz),
10,83(1H,br,s).
MS (ES+) m/z 383 (M+1), R_{t} = 9,17,
método A.
La Tabla F-1 enumera los
compuestos que se prepararon en uno de los ejemplos anteriores.
La capacidad de los compuestos para preservar
p-53 en células A2780 se midió con el ensayo de
inmunosorbente unido a enzima de p53. El ensayo de p53 es un
inmunoensayo enzimático "sándwich" que emplea dos anticuerpos
policlonales. Un anticuerpo policlonal, específico para la proteína
p53, se ha inmovilizado en la superficie de los pocillos de
plástico. Cualquier p53 presente en la muestra a ensayar se fijará
al anticuerpo de captura. El anticuerpo policlonal biotinilado
detector reconoce también la proteína p53, y se fijará a cualquier
p53, que haya sido retenida por el anticuerpo de captura. El
anticuerpo detector, a su vez, se liga a estreptavidina conjugada
con peroxidasa de rábano picante. La peroxidasa de rábano picante
cataliza la conversión del sustrato cromógeno
o-fenileno-diamina, cuya intensidad
es proporcional a la cantidad de proteína p53 ligada a la placa. El
producto de la reacción coloreada se cuantifica utilizando un
espectrofotómetro. La cuantificación se realiza por la construcción
de una curva estándar utilizando concentraciones conocidas de
proteína p53 purificada recombinante marcada con HIS (véase el
Ejemplo C.1.).
La actividad celular de los compuestos de
fórmula (I) se determinó en células tumorales U87MG utilizando un
ensayo colorimétrico para toxicidad o supervivencia de las células
(véase el Ejemplo C.2).
Las células U87MG son células de glioblastoma
humano con p53 de tipo salvaje. En esta línea de células MDM2
controla estrictamente la expresión de p53.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron células A2780 (ATCC) en RPMI 1640
complementado con 10% de suero de ternero fetal (FCS),
L-glutamina 2 mM y gentamicina a 37ºC en una
incubadora humidificada con 5% CO_{2}.
Las células A2780 se sembraron a razón de 20.000
células por pocillo en una placa de 96 pocillos, se cultivaron
durante 24 horas y se trataron con compuesto durante 16 horas a 37ºC
en una incubadora humidificada. Después de la incubación, las
células se lavaron una sola vez con solución salina tamponada con
fosfato y se añadieron 30 \mul, por pocillo, de tampón RIPA con
baja concentración de sal (Tris 20 mM, pH 7,0, EDTA 0,5 mM, 1%
Nonidet P40, 0,5% DOC, 0,05% SDS, PMSF 1 mM, 1 \mug/ml de
aprotinina y 0,5 \mu/ml de leupeptina). Se pusieron las placas en
hielo durante 30 minutos para completar la lisis. La proteína p53 se
detectó en los lisados utilizando el ELISA sándwich, descrito más
adelante.
Se recubrieron placas de 96 pocillos EIA/RIA de
poliestireno de alta fijación (Costar 9018) con el anticuerpo de
captura pAb1801 (Abcam ab28-100) a una concentración
de 1 \mug/ml en tampón de revestimiento (NaHCO_{3} 0,1M de pH
8,2), 50 \mul por pocillo. Se dejó que el anticuerpo se adhiriera
durante una noche a 4ºC. Las placas revestidas se lavaron una sola
vez con solución salina tamponada con fosfato (PBS)/0,05% Tween 20 y
se añadieron 300 \mul de tampón de bloqueo (PBS, 1% de
seroalbúmina bovina (BSA)), durante un periodo de incubación de 2
horas a la temperatura ambiente. Se hicieron diluciones de la
proteína p53 purificada recombinante marcada con HIS, comprendidas
entre 3 y 200 ng/ml en tampón de bloqueo y se utilizaron como
estándares.
Se lavaron dos veces las placas con PBS/0,05%
Tween 20 y se añadieron tampón de bloqueo o estándares a 80
\mul/pocillo. Se añadieron a los estándares 20 \mul de tampón de
lisis. Se añadieron las muestras a los otros pocillos a razón de 20
\mul lisado/pocillo. Después una incubación durante una noche a
4ºC, se lavaron dos veces las placas con PBS/0,05% Tween 20. Se
añadieron a cada pocillo partes alícuotas de 100 \mul de
anticuerpo policlonal secundario p53 (FL-393)
(Tebubio, sc-6243) a una concentración de 1
\mug/ml en tampón de bloqueo, y se dejó que se adhirieran durante
2 horas a la temperatura ambiente. Se lavaron tres veces las placas
con PBS/0,05% Tween 20. Se añadió el anticuerpo de detección HRP
anticonejo (sc-2004 Tebubio) a 0,04 \mug/ml en
PBS/1% BSA y se incubó durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se
lavaron tres veces las placas con PBS/0,05% Tween 20 y se
añadieron 100 \mul de tampón sustrato (el tampón sustrato se
preparó poco antes de su utilización por adición de 1 tableta de 10
mg de o-fenileno-diamina (OPD) de
Sigma y 125 \mul de H_{2}O_{2} al 3% a 25 \mul de tampón
OPD: ácido cítrico 35 mM, Na_{2}HPO_{4} 66 mM, pH 5,6). Después
de 5 a 10 minutos, se paró la reacción coloreada por adición de 50
\mul de tampón de parada (H_{2}SO_{4} 1M) por pocillo. Se
midió la absorbancia a longitudes de onda duales de 490/655 nm
utilizando un lector de microplacas BioRad y se analizaron luego los
resultados.
Para cada experimento, se ejecutaron en paralelo
controles (que no contenían fármaco alguno) y una incubación en
blanco (que no contenía células o fármacos). El valor en blanco se
sustrajo de todos los valores de control y de muestra. Para cada
muestra, el valor de p53 (en unidades de absorbancia) se expresó
como porcentaje del valor para p53 presente en el control. La
preservación de un porcentaje mayor que 140% se definió como
significativa. En este caso, los efectos de los compuestos de test
se expresan como la dosis mínima que proporciona al menos 140% del
valor para p53 presente en el control (LAD) (véase tabla
F-2).
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los compuestos testados se disolvieron en
DMSO y se hicieron diluciones adicionales en medio de cultivo. Las
concentraciones finales en DMSO no excedían de 0,1% (v/v) en los
ensayos de proliferación celular. Los controles contenían células
U87MG y DMSO sin compuesto, y los blancos contenían DMSO pero no
contenían células.
Las células U87MG se sembraron en placas de
cultivo de células de 96 pocillos a razón de 3000
células/pocillo/100 \mul. 24 horas más tarde, se cambió el medio
y se añadieron compuesto y/o disolvente hasta un volumen final de
200 \mul. Después de 4 días de incubación, se reemplazó el medio
por 200 \mul de medio fresco y se evaluó el crecimiento celular
utilizando un ensayo basado en MTT. Para ello, se añadieron a cada
pocillo 25 \mul de la solución de MTT (0,5% de MTT grado
investigación, de Serva, en solución salina tamponada con fosfato),
y las células se incubaron ulteriormente durante 2 horas a 37ºC. Se
aspiró luego cuidadosamente el medio y el producto azul
MTT-formazano se disolvió por adición a cada pocillo
de 25 \mul de glicina 0,1M y 100 \mul de DMSO. Las placas se
agitaron mediante sacudidas durante 10 minutos más en un agitador de
sacudidas de microplacas antes de leer la absorbancia a 540 nm por
un lector de microplacas BioRad.
Dentro de un experimento, los resultados para
cada condición experimental son el valor medio de 3 pocillos
replicados. Para propósitos de cribado iniciales, los compuestos se
testaron a una sola concentración fijada de 10^{-5} M. Para los
compuestos activos, se repitieron los experimentos para construir
curvas completas concentración-respuesta. Para cada
experimento, se ejecutaron en paralelo controles (que no contenían
fármaco alguno) y una incubación en blanco (que no contenía células
ni fármaco). El valor en blanco se sustrajo de todos los valores de
control y de muestra. Para cada muestra, el valor medio para
crecimiento celular (en unidades de absorbancia) se expresó como un
porcentaje del valor medio para el crecimiento celular del control.
En caso apropiado, se computaron los valores CI_{50}
(concentración del fármaco, necesaria para reducir el crecimiento
celular al 50% del control) utilizando análisis Probit para datos
clasificados (Finney, D.J., Probit Analyses, 2nd Ed. Chapter 10,
Graded Responses, Cambridge University Press, Cambridge 1962). En
este caso, los efectos de los compuestos de test se expresan como
pCI_{50} (el valor del logaritmo negativo del valor CI_{50})
(véase tabla F-2).
En algunos de los experimentos, el ensayo de
proliferación se adaptó para y se utilizó en placas de cultivo de
384 pocillos (véase tabla F-2).
\vskip1.000000\baselineskip
Una mixtura de 100 g de un compuesto de fórmula
(I), 570 g de lactosa y 200 g de almidón se mezcla bien y se
humidifica después con una solución de 5 g de dodecilsulfato de
sodio y 10 g de polivinil-pirrolidona en
aproximadamente 200 ml de agua. La mezcla de polvo húmedo se tamiza,
se seca y se tamiza nuevamente. Se añaden luego 100 g de celulosa
microcristalina y 15 g de aceite vegetal hidrogenado. Se mezcla bien
el todo y se comprime en tabletas, obteniéndose 10.000 tabletas,
cada una de las cuales contiene 10 mg de un compuesto de fórmula
(I).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 10 g de
metil-celulosa en 75 ml de etanol desnaturalizado se
añade una solución de 5 g de etil-celulosa en 150 ml
de diclorometano. Se añaden luego 75 ml de diclorometano y 2,5 ml de
1,2,3-propanotriol, se funden 10 g de
polietilenglicol y se disuelven en 75 ml de diclorometano. Se añade
la última solución a la primera y se añaden luego 2,5 g de
octadecanoato de magnesio, 5 g de
polivinil-pirrolidona y 30 de ml de suspensión
concentrada de colorante, y se homogeneíza el todo. Los núcleos de
la tabletas se revisten con la mezcla así obtenida en un aparato de
revestimiento.
Claims (10)
1. Un compuesto de fórmula (I),
una forma de N-óxido, una
sal de adición o una forma estereoquímicamente isómera del mismo en
donde
m es 0, 1, ó 2, y cuando m es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
n es 0, 1, 2, ó 3 y cuando n es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
p es 0 ó 1, y cuando p es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
t es 0 ó 1, y cuanto t es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
es -CR^{8}=C< y la línea de
puntos es entonces un enlace, -C(=O)-CH<,
C(=O)-N<, -CHR^{8}-CH< o
-CHR^{8}-N<; en donde cada R^{8} es
independientemente hidrógeno o
C_{1-6}alquilo;
R^{1} y R^{2} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo,
C_{1-6}alquilo,
C_{1-6}alquiloxi,
arilC_{1-6}alqui-
loxi, heteroarilC_{1-6}alquiloxi, feniltio, hidroxiC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo;
loxi, heteroarilC_{1-6}alquiloxi, feniltio, hidroxiC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de amino, arilo y heteroarilo;
R^{3} y R^{4} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo,
C_{1-6}alquilo,
polihaloC_{1-6}alquilo, ciano,
cianoC_{1-6}alquilo, hidroxi, amino o
C_{1-6}alquiloxi; o
R^{4} y R^{5} pueden formar opcionalmente
juntos un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi o
etilenodioxi;
R^{5} es hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxicarbonilo o
C_{1-6}alquilo;
R^{6} y R^{7} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquilo; o
R^{6} y R^{7} pueden formar juntos
opcionalmente un radical bivalente seleccionado de
(b-1),-(CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}-
(b-2),-(CH_{2})_{2}-NR^{9}-(CH_{2})_{2}-
en donde R^{9} es hidrógeno,
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquilo;
Z es un radical seleccionado de
en
donde
R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, halo, hidroxi, amino,
C_{1-6}alquilo, nitro,
polihaloC_{1-6}alquilo, ciano,
cianoC_{1-6}alquilo,
tetrazoloC_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo,
arilC_{1-6}alquilo,
heteroarilC_{1-6}al-
quilo, aril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, heteroaril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, C_{1-6}alquilcarbonilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, hetero-arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquil(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquilcarboniloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, hidroxiC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{2-6}alquenil
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo (sic), C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, hidroxiC_{1-6}alquilo,
aminoC_{1-6}alquilo, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilC_{1-6}alquilo y -(CH_{2})_{v}-(C(=O)_{r})-(CHR^{17})_{u}-NR^{13}R^{14}; en donde
quilo, aril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, heteroaril(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, C_{1-6}alquilcarbonilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, hetero-arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquil(hidroxi)C_{1-6}alquilo, arilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquilcarboniloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, hidroxiC_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquiloxicarbonilC_{2-6}alquenil
C_{1-6}alquiloxiC_{1-6}alquilo (sic), C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, hidroxiC_{1-6}alquilo,
aminoC_{1-6}alquilo, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilC_{1-6}alquilo y -(CH_{2})_{v}-(C(=O)_{r})-(CHR^{17})_{u}-NR^{13}R^{14}; en donde
v es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6 y cuando v es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
r es 0 ó 1, y cuando r es 0 se sobreentiende
entonces un enlace directo;
u es 0, 1, 2, 3, 4, 5, ó 6, y cuando u es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
R^{17} es hidrógeno o
C_{1-6}alquilo;
R^{12} es hidrógeno,
C_{1-6}alquilo,
C_{3-7}cicloalquilo,
C_{1-6}alquilo sustituido con un sustituyente
seleccionado de hidroxi, amino, C_{1-6}alquiloxi
y arilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un
sustituyente seleccionado de hidroxi, amino, arilo y
C_{1-6}alquiloxi;
R^{13} y R^{14} se seleccionan cada uno
independiente de hidrógeno, C_{1-12}alquilo,
C_{1-6}alquilcarbonilo,
C_{1-6}alquilsulfo-
nilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquilo, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, -(CH_{2})_{k}-NR^{15}R^{16}, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, hidroxicarbonilo, ciano, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, arilo o heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, amino, arilC_{1-6}
alquilo, heteroarilo o heteroarilC_{1-6}alquilo; o
nilo, arilC_{1-6}alquilcarbonilo, C_{3-7}cicloalquilo, C_{3-7}cicloalquilcarbonilo, -(CH_{2})_{k}-NR^{15}R^{16}, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, hidroxicarbonilo, ciano, C_{1-6}alquiloxicarbonilo, C_{1-6}alquiloxi, arilo o heteroarilo; o C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, amino, arilC_{1-6}
alquilo, heteroarilo o heteroarilC_{1-6}alquilo; o
R^{13} y R^{14} junto con el nitrógeno al
cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo,
piperidinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, o piperazinilo sustituido
con un sustituyente seleccionado de
C_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquiloxicarbonilo,
heteroarilC_{1-6}alquilo,
C_{3-7}cicloalquilo y
C_{3-7}cicloalquilC_{1-6}alquilo;
en donde
k es 0, 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 y cuando k es 0 se
sobreentiende entonces un enlace directo;
R^{15} y R^{16} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, C_{1-6}alquilo,
arilC_{1-6}alquiloxicarbonilo,
C_{3-7}
cicloalquilo, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, y heteroarilo; y C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, arilC_{1-6}alquilo, heteroarilo, y heteroarilC_{1-6}alquilo; o
cicloalquilo, C_{1-12}alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, y heteroarilo; y C_{3-7}cicloalquilo sustituido con un sustituyente seleccionado de hidroxi, C_{1-6}alquiloxi, arilo, arilC_{1-6}alquilo, heteroarilo, y heteroarilC_{1-6}alquilo; o
R^{15} y R^{16} junto con el nitrógeno al
cual están unidos pueden formar opcionalmente un morfolinilo, un
piperazinilo, o un piperazinilo sustituido con
C_{1-6}alquiloxicarbonilo;
arilo es fenilo o naftalenilo;
cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido
opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno
independientemente de halo, hidroxi,
C_{1-6}alquilo, amino,
polihaloC_{1-6}alquilo y
C_{1-6}alquiloxi; y
cada fenilo o naftalenilo puede estar sustituido
opcionalmente con un radical bivalente seleccionado de metilenodioxi
y etilenodioxi;
heteroarilo es piridinilo, indolilo,
quinolinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo,
tetrazolilo, benzofuranilo o tetrahidrofuranilo;
cada piridinilo, indolilo, quinolinilo,
imidazolilo, furanilo, tienilo, oxadiazolilo, tetrazolilo,
benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo puede estar sustituido
opcionalmente con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados cada uno
independientemente de halo, hidroxi,
C_{1-6}alquilo, amino,
polihaloC_{1-6}alquilo, arilo,
arilC_{1-6}alquilo o
C_{1-6}alquiloxi; y
cada piridinilo, indolilo, quinolinilo,
imidazolilo, furanilo, tienilo, benzofuranilo, o tetrahidrofuranilo
puede estar sustituido opcionalmente con un radical bivalente
seleccionado de metilenodioxi o etilenodioxi.
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2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en donde
m es 0; n es 0; p es 1; t es 0; R^{1} y
R^{2} son cada uno independientemente hidrógeno; R^{3} y R^{4}
son cada uno independientemente hidrógeno; R^{5} es hidrógeno;
R^{6} y R^{7} son cada uno independientemente hidrógeno o
C_{1-6}alquilo; Z es un radical seleccionado de
(a-1), (a-2) o
(a-4); o R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno
independientemente de hidrógeno, hidroxi,
C_{1-6}alquiloxicarbonilo o
hidroxiC_{1-6}alquilo.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde m es 0; n es 0; p es 1; t es 0; R^{1} y R^{2}
son cada uno independientemente hidrógeno; R^{3} y R^{4} son
cada uno independientemente hidrógeno; R^{5} es hidrógeno; R^{6}
y R^{7} son cada uno independientemente hidrógeno; Z es un radical
seleccionado de (a-2) o (a-4); o
R^{10} y R^{11} se seleccionan cada uno independientemente de
hidrógeno, hidroxi, o hidroxiC_{1-6}alquilo.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, 2 ó 3 en donde el compuesto es el compuesto No. 1, el compuesto
No. 4 o el compuesto No. 5
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5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, 2, 3 ó 4 para uso como medicamento.
6. Una composición farmacéutica que comprende
vehículos farmacéuticamente aceptables y, como ingrediente activo,
una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con
la reivindicación 1 a 4.
7. Un proceso de preparación de una composición
farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, en donde los
vehículos farmacéuticamente aceptables y un compuesto de acuerdo con
la reivindicación 1 a 4 se mezclan íntimamente.
8. Uso de un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1, 2, 3 ó 4 para la fabricación de un medicamento
para el tratamiento de un trastorno mediado por una interacción
p53-MDM2.
9. Una composición de un agente anticáncer y un
compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4.
10. Un proceso para preparar un compuesto de
acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por
- a)
- hacer reaccionar un compuesto intermedio de fórmula (II) con un compuesto intermedio de fórmula (III) en donde W es un grupo lábil apropiado tal como, por ejemplo, halo,
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- definiéndose las variables como en la reivindicación 1;
- b)
- convertir un compuesto intermedio de fórmula (IV) en compuestos de fórmula (I), en donde p es 1, a los que se hace referencia en esta memoria como compuestos de fórmula (I-a), en presencia de hidruro de litio y aluminio en un disolvente adecuado,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- definiéndose las variables como en la reivindicación 1;
\newpage
- c)
- hacer reaccionar un carboxaldehído de fórmula (VI) apropiado, con un compuesto intermedio de fórmula (V), en presencia de un reactivo apropiado, en un disolvente adecuado, o
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- definiéndose las variables como en la reivindicación 1;
- d)
- hacer reaccionar un compuesto intermedio de fórmula (II) con un carboxaldehído apropiado de fórmula (VII) con la formación de un compuesto de fórmula (I), en donde t es 1, a los que se hace referencia en esta memoria como compuestos de fórmula (I-b),
- definiéndose las variables como en la reivindicación 1;
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| EP06111529 | 2006-03-22 | ||
| US78512006P | 2006-03-23 | 2006-03-23 | |
| EP06111529 | 2006-03-23 | ||
| US785120P | 2006-03-23 |
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|---|---|
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