ES2339119T3 - Formulaciones farmaceuticas para la liberacion prolongada de interferones asi como sus aplicaciones terapeuticas. - Google Patents
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Abstract
Formulación farmacéutica líquida para la liberación prolongada de interferón o interferones, cuya formulación comprende, como mínimo, un interferón, eventualmente al menos otro principio activo (PA), preferentemente en solución acuosa, y una suspensión coloidal, acuosa, de baja viscosidad, a base de partículas submicrónicas de polímero (PO) biodegradable, hidrosoluble y portador de grupos hidrófobos (GH), estando dichas partículas asociadas de manera no covalente con dicho interferón y eventualmente dicho otro principio activo (PA),#caracterizada porque:#♦ el medio de dispersión de la suspensión está esencialmente constituido por agua,# ♦ su concentración en [PO] está fijada a un valor suficientemente elevado de manera que dicha formulación farmacéutica sea apta para ser inyectada por vía parenteral y para formar después in vivo un depósito gelificado, cuya formación de depósito gelificado:# - es provocada, por un lado, al menos en parte por al menos una proteína fisiológica presente in vivo,# - y permite, por otro lado, prolongar y controlar la duración de liberación del interferón y eventualmente del PA in vivo, más allá de 24 h después de la administración,# ♦ es líquida en las condiciones de inyección,# ♦ y es asimismo líquida a la temperatura y/o a pH fisiológicos, y/o en presencia:# * de electrolito fisiológico en concentración fisiológica,# * y/o de al menos un tensoactivo.
Description
Formulaciones farmacéuticas para la liberación
prolongada de interferones así como sus aplicaciones
terapéuticas.
La presente invención se refiere a nuevas
formulaciones farmacéuticas a base de suspensiones coloidales
acuosas estables y fluidas para la liberación prolongada de
principios activos proteínicos, a saber, los interferones (IFN),
así como a las aplicaciones terapéuticas de estas formulaciones.
Estas formulaciones farmacéuticas activas se
refieren tanto a la terapéutica humana como veterinaria.
Los interferones son glicoproteínas que
pertenecen a la familia de las citocinas. Son mediadores biológicos
que, fijándose sobre unos receptores de membrana, inician una
respuesta celular pleiotrópica. Resulta de ello una actividad
antivírica, antiproliferativa e inmunomoduladora.
Los interferones han sido asimismo reconocidos
como agentes antitumorales o anticancerígenos eficaces. Por
interferón, se designan aquí todas las formas de interferones, tales
como los interferones alfa, beta o gamma. Los IFN pueden ser
producidos mediante ingeniería genética.
Las formulaciones farmacéuticas con liberación
prolongada de IFN están sometidas a la necesidad de reproducir lo
mejor posible en el paciente una concentración plasmática en IFN
próxima al valor observado en el sujeto sano.
Este objetivo se enfrenta a la baja duración de
vida de los IFN en el plasma, lo que obliga de manera muy
limitativa a inyectarlos de manera repetitiva. La concentración
plasmática en proteína terapéutica presenta entonces un perfil
"en diente de sierra" caracterizado por picos elevados de
concentración y mínimos de concentración muy baja. Los picos de
concentración, muy superiores a la concentración basal en el sujeto
sano, tienen efectos nocivos muy marcados debido a la toxicidad
elevada de los IFN. Por otra parte, los mínimos de concentración
son inferiores a la concentración necesaria para tener un efecto
terapéutico, lo que conlleva una mala cobertura terapéutica del
paciente y efectos secundarios graves a largo plazo.
Asimismo, para reproducir en el paciente una
concentración plasmática de interferón próxima al valor ideal para
el tratamiento del paciente, es importante que la formulación
farmacéutica considerada permita liberar la proteína terapéutica
con una duración prolongada, para limitar las variaciones de
concentración plasmática a lo largo del
tiempo.
tiempo.
Por otro lado, esta formulación activa debe
preferentemente satisfacer las características deseadas siguientes,
ya conocidas por los expertos en la técnica:
- 1 -
- liberación prolongada de uno o más interferones activos y no desnaturalizados (no modificados), de manera que la concentración plasmática está mantenida a nivel terapéutico;
- 2 -
- forma líquida suficientemente fluida para ser fácilmente inyectable y esterilizable mediante filtración sobre filtros cuyo tamaño de poros es inferior o igual a 0,2 micrones;
- 3 -
- forma líquida estable;
- 4 -
- biocompatibilidad y biodegradabilidad;
- 5 -
- sin toxicidad;
- 6 -
- sin inmunogenicidad;
- 7 -
- excelente tolerancia local.
\vskip1.000000\baselineskip
Para intentar alcanzar estos objetivos, ya se
han propuesto varios enfoques en la técnica anterior.
En el primer enfoque, la proteína terapéutica
nativa es modificada mediante injerto covalente de una o más
cadenas de polímero o también mediante injerto covalente de una
proteína tal como la albúmina sérica humana (HSA). La proteína así
modificada tiene una menor afinidad para sus receptores y su término
medio de vida en la circulación general aumenta considerablemente.
La amplitud de la variación de concentración entre los picos y los
huecos de concentración plasmática en proteína está así
considerablemente reducida. A título ilustrativo de este primer
enfoque, conviene señalar que la compañía Shering Plough
comercializa con el nombre VIRAFERON® PEG un interferón alfa 2b
modificado químicamente mediante injerto de una cadena de
polietilenglicol (PEG) de masa 12 kD. Esta modificación química se
traduce por un aumento del término medio de vida en el paciente de
6,8 a 33 horas. Al mismo tiempo, la bioactividad de la proteína
modificada está muy reducida. Además, la modificación irreversible
de la proteína, no siendo ya una proteína humana, puede conducir a
largo plazo a problemas de toxicidad y de inmu-
nogenicidad.
nogenicidad.
En un segundo enfoque, se ha propuesto aumentar
la duración de acción gracias a formulaciones que comprenden al
menos un polímero y un principio activo, líquidos a temperatura y
atmósfera ambientes, inyectables y que se vuelven más viscosos
después de la inyección, por ejemplo, bajo el efecto de un cambio de
pH y/o de temperatura.
De esta manera, en este registro, la patente
US-B-6 143 314 divulga una solución
orgánica de polímero de liberación controlada de PA, que forma un
implante sólido después de la inyección. Esta solución
comprende:
- \circ (A)
- 10 a 80% en peso de un polímero termoplástico de base, biocompatible, biodegradable e insoluble en agua o en los fluidos fisiológicos (por ejemplo poliláctico y/o poliglicólico);
- \circ (B)
- un disolvente orgánico, tal como la N-metilpirrolidona que se dispersa en los fluidos fisiológicos;
- \circ (C)
- un principio activo (PA);
- \circ (D)
- y finalmente 1 a 50% en peso de un agente de liberación controlado constituido por un copolímero bloque de tipo poli-láctico-glicólico/polietilenglicol.
\vskip1.000000\baselineskip
Después de la inyección, (B) se dispersa o se
disipa en los fluidos fisiológicos. (A) forma un implante
encapsulante (C) que no está relacionado de manera covalente con
(A) ni con (D), y que se libera entonces lentamente in
vivo.
El principal inconveniente de esta técnica es
usar un disolvente orgánico (B), potencialmente desnaturalizante
para el PA (C) (por ejemplo proteínas terapéuticas) y tóxico para el
paciente. Además, la hidrólisis in vivo del polímero (A)
genera un ácido que puede conducir a problemas de tolerancia
local.
Las solicitudes PCT
WO-A-99/18142 y
WO-A-00/18821 se refieren a
soluciones acuosas de polímeros que contienen un PA en forma
disuelta o coloidal, que son administrables a animales de sangre
caliente, particularmente mediante inyección y que forman un
depósito de PA (por ejemplo insulina) gelificado in vivo,
debido a que la temperatura fisiológica es superior a su
temperatura de gelificación. El gel así formado libera el PA de
manera prolongada. Estos polímeros biodegradables particulares son
tribloques ABA o BAB con A = poliláctico-coglicólico
(PLAGA) o poliláctico (PLA) y B = polietilenglicol. Las
temperaturas de transformación líquida/gel de estos polímeros
tribloques son, por ejemplo, de 36, 34, 30 y 26ºC. Al igual que los
polímeros (A) según el documento
US-B-6 143 314, la hidrólisis de
estos polímeros tribloques ABA o BAB in vivo conduce a ácidos
que pueden no ser correctamente tolerados localmente.
La solicitud PCT
WO-A-98/11874 describe formulaciones
farmacéuticas que comprenden un principio activo lipófilo, un
polímero gelificante (Gelrite® = goma gelan desacetilada o
etilhidroxicelulosa) y un tensoactivo. La interacción
polímero/tensoactivo y eventualmente, tratándose del polímero
Gelrite®, la única presencia de electrólitos tales como iones
Ca^{++} en concentración fisiológica conduce a la formación de un
gel constituido por un agregado de polímero/tensoactivo, al que se
enlaza de manera no covalente el principio activo lipófilo. Esta
formulación está destinada a una administración local en un órgano
diana (el ojo, por ejemplo). La asociación de agregado/principio
activo que se forma in situ permite la lenta liberación del
principio activo en el órgano diana.
Un tercer enfoque realizado para intentar
prolongar la duración de acción de una proteína, conservando al
mismo tiempo su bioactividad, fue usar una proteína terapéutica no
desnaturalizada e incorporarla en microesferas o implantes a base
de polímeros biocompatibles. Este enfoque está en particular
ilustrado por la patente US-B-6 500
448 y la solicitud US-A-2003/0133980
que describen una composición de liberación prolongada de una
hormona humana de crecimiento (hGH) en la que la proteína hormonal,
previamente estabilizada mediante formación de complejo con un
metal, está después dispersada en una matriz de polímero
biocompatible. El polímero biocompatible es, por ejemplo, un
poli(láctido), un poli(glicólico) o un copolímero
poli(láctido-co-glicólico).
La composición se presenta por ejemplo en forma de una suspensión
de microesferas en una solución de carboximetilcelulosa de sodio.
Este enfoque presenta varios inconvenientes: en primer lugar,
durante el procedimiento de fabricación de las microesferas, la
proteína se pone en contacto con disolventes orgánicos
potencialmente desnaturalizantes. Además, las microesferas son de
un tamaño elevado (1 a 1000 micrones), lo que constituye una
restricción en términos de inyección y de esterilización fácil
sobre filtros. Finalmente, pueden aparecer problemas de tolerancia
local durante la hidrólisis in situ del polímero.
Según un cuarto enfoque, se han desarrollado
formas de liberación prolongada de proteína terapéutica (en
particular de interleucinas) constituidas por suspensiones líquidas
de nanopartículas cargadas en proteínas. Estas suspensiones han
permitido la administración de la proteína nativa en una formulación
líquida de baja viscosidad.
La patente
FR-B-2 732 218 describe partículas
de vectorización de principio(s) activo(s), del tipo
de las de base de poliaminoácidos(s) y de tamaño inferior a
200 \mum, para las cuales los poliaminoácidos constitutivos
comprenden al menos dos tipos de aminoácidos recurrentes AAN y AAI,
correspondiendo el tipo AAN a un aminoácido neutro hidrófobo, y
correspondiendo el tipo AAI a un aminoácido de caena lateral
ionizable. Esta patente divulga específicamente suspensiones
coloidales que contienen nanopartículas formadas por asociaciones de
polímero con la hemoglobina, el citocromo C, la ovalbumina. Estas
suspensiones son obtenidas mezclando 100 ó 200 mg de poli Leu/gleu
y 10 mg de citocromo C en 100 ml de una solución tampón a pH
7,2.
La patente
FR-B-2 822 834 describe una
suspensión coloidal de partículas submicrónicas susceptibles de ser
usadas, en particular para la vectorización de principio(s)
activo(s) (PA), siendo estas partículas combinaciones
supramoleculares individualizadas, siendo estas partículas a base de
al menos un copolímero anfifílico que comprende al menos un bloque
de polímero(s) hidrofílico(s) de tipo
polialquilenglicol (PAG), preferentemente polietilenglicol (PEG) y
al menos un copoliaminoácido (PAA) anfifílico lineal, en cadenas
\alpha-peptídicas. Esta patente divulga
específicamente una suspensión coloidal obtenida mezclando 10 mg de
copolímero anfifílico con 1 ml de una solución de insulina a 1,4
mg/ml a pH 7,4.
La patente
FR-B-2 838 964 describe una
suspensión coloidal de partículas submicrónicas susceptibles de ser
usadas, en particular, para la vectorización de principio(s)
activo(s) (PA), siendo estas partículas combinaciones
supramoleculares individualizadas, a base de un copolímero
anfifílico que comprende al menos un bloque de poliaminoáci-
dos(s) (PAA) lineal(es), hidrófilo(s) a cadenas \alpha-peptídicas, siendo los aminoácidos hidrófilos AAI constitutivos de este bloque PAA idénticos o diferentes entre sí y al menos un bloque de al menos un polímero hidrófobo, formado por un polímero de ácido \alpha-hidroxicarboxílico (PAHC), obtenido espontáneamente en ausencia de tensoactivo, mediante la utilización de un copolímero anfifílico con un líquido no-disolvente de los AAI. Esta patente divulga específicamente una suspensión coloidal obtenida mezclando una solución de insulina con unas nanopartículas concentradas a 10 mg/ml a pH 7,4.
dos(s) (PAA) lineal(es), hidrófilo(s) a cadenas \alpha-peptídicas, siendo los aminoácidos hidrófilos AAI constitutivos de este bloque PAA idénticos o diferentes entre sí y al menos un bloque de al menos un polímero hidrófobo, formado por un polímero de ácido \alpha-hidroxicarboxílico (PAHC), obtenido espontáneamente en ausencia de tensoactivo, mediante la utilización de un copolímero anfifílico con un líquido no-disolvente de los AAI. Esta patente divulga específicamente una suspensión coloidal obtenida mezclando una solución de insulina con unas nanopartículas concentradas a 10 mg/ml a pH 7,4.
Según una primera vía de liberación prolongada,
la suspensión nanoparticular de liberación prolongada está
constituida por suspensiones de liposomas en las que la proteína
terapéutica nativa no modificada está encapsulada. Después de la
inyección, la proteína está liberada progresivamente de los
liposomas, lo que prolonga el tiempo de presencia de la proteína en
la circulación general. De esta manera, por ejemplo, Frossen y otros
describen en el artículo Cancer Res 43 p. 546, 1983, el encapsulado
de agentes antineoplásicos en liposomas a fin de aumentar su
eficacia terapéutica. La liberación de los agentes es, sin embargo,
demasiado rápida para obtener una liberación real prolongada. La
compañía Liposome Company Inc., en su patente
US-B-5 399 331, propone mejorar el
tiempo de liberación in vitro del interferón 2 injertándola
de manera covalente en el liposoma. Se vuelve a caer entonces en
los defectos del primer enfoque "proteína modificada"
mencionados anteriormente.
Con el fin de paliar la falta de estabilidad de
los liposomas, guardando al mismo tiempo las ventajas de una
formulación de nanopartículas líquida y de baja viscosidad, la
compañía Flamel Technologies ha propuesto una segunda vía de
liberación prolongada en la que la proteína terapéutica está
asociada a nanopartículas de un polímero hidrosoluble "modificado
hidrófobo", es decir, modificado mediante injerto de grupos
hidrófobos. Este polímero se elige, en particular, entre los
poliaminoácidos (poliglutamatos o poliaspartatos) portadores de
injertos hidró-
fobos.
fobos.
Uno de los puntos de interés notable de estos
polímeros modificados hidrófobos es el de autoensamblarse
espontáneamente en el agua para formar nanopartículas.
Otro punto de interés de estos sistemas es que
las proteínas o los péptidos terapéuticos, se asocian
espontáneamente con las nanopartículas de polímeros modificados
hidrófobos, esta asociación es no covalente y se efectúa sin la
necesidad de recurrir a un tensoactivo ni a un procedimiento de
transformación potencialmente desnaturalizante. No se trata de un
encapsulado de la proteína en una microesfera, tal como se divulga
en la patente US-B-6 500 448 y en
la solicitud US-A-2003/0133980. De
manera totalmente diferente, estas nanopartículas de
copoliaminoácidos modificados hidrófobos adsorben espontáneamente
las proteínas en solución, sin modificarlas químicamente ni
desnaturalizarlas y sin hacerles sufrir etapas de tratamiento
agresivo de tipo "puesta en emulsión" y "evaporación de
disolvente". Las formulaciones se pueden almacenar en forma
líquida o liofilizada.
Después de la inyección, por ejemplo por vía
subcutánea, estas suspensiones de nanopartículas cargadas en
proteínas liberan progresivamente la proteína no desnaturalizada y
bioactiva in vivo. Tales asociaciones no covalentes de
principio activo (PA) proteínico/poli[Glu] o poli[Asp]
están divulgadas en la solicitud de patente
WO-A-00/
30618.
30618.
Esta solicitud describe en particular
suspensiones coloidales de pH 7,4, que comprenden asociaciones de
insulina humana con nanopartículas de poliglutamato "modificado
hidrófobo". La siguiente tabla muestra unos poliaminoácidos
"modificados hidrófobos" usados y unos índices de asociación
obtenidos en los ejemplos del documento
WO-A-00/30618.
\vskip1.000000\baselineskip
Estas suspensiones coloidales titulan 1,4 mg/ml
de insulina y 10 mg/ml de poliaminoácido "modificado
hidrófobo".
Destaca de la figura 1 del documento
WO-A-00/30618 que la duración de la
liberación in vivo de la insulina vectorizada por las
suspensiones mencionadas en lo anterior, es de 12 horas. Sería
interesante que esta duración de liberación fuera aumentada.
De esta manera, incluso si esta solicitud PCT
representa ya un progreso considerable, su contenido técnico se
puede todavía optimizar frente a las características deseadas
enunciadas anteriormente, y sobre todo frente a la prolongación de
la duración de la liberación in vivo de los interferones.
Las solicitudes de patente francesas no
publicadas n^{os} 02 07008 del 07/06/2002, 02 09670 del
30/07/2002, 03 50190 del 28/05/2003 y 01 50641 del 03/10/2003, se
refieren a nuevos poliaminoácidos anfifílicos, hidrosolubles, y que
comprenden unidades ácido aspártico y/o unidades ácido glutámico, en
las que al menos una parte de estas unidades son portadoras de
injertos hidrófobos. Al igual que los poliaminoácidos modificados
hidrófobos divulgados en la solicitud
WO-A-00/30618, estas nuevas materias
primas de polímeros forman espontáneamente, en un medio líquido
acuoso, suspensiones coloidales de nanopartículas que se pueden usar
para la liberación prolongada de PA (insulina). Estas son
biocompatibles, biodegradables y las proteínas, en particular las
proteínas terapéuticas, se adsorben espontáneamente sobre estas
nanopartículas sin sufrir ninguna modificación química o de
desnaturalización.
Estas solicitudes tienen asimismo como objetivo
nuevas composiciones farmacéuticas, cosméticas, dietéticas o
fitosanitarias a base de estos poliaminoácidos.
Los poliaminoácidos "modificados
hidrófobos" anfifílicos según la solicitud de patente francesa nº
02 07008 comprenden unidades de ácido aspártico y/o unidades de
ácido glutámico, portadoras de injertos hidrófobos que comprenden
al menos un motivo alfa-tocoferol, (por ejemplo,
poliglutamato o poliaspartato injertado por el alfa tocoferol de
origen sintético o natural).
Esta solicitud, no publicada, divulga
específicamente una suspensión coloidal que contiene nanopartículas
formadas por asociaciones de polímero/proteína activa y que se
obtiene mezclando 1 mg de un poliglutamato injertado por el
alfa-tocoferol y 7 mg de insulina en 1 ml de agua, a
pH 7,0.
Los poliaminoácidos "modificados
hidrófobos" anfifílicos según la solicitud de patente francesa nº
02 09670 comprenden unidades de ácido aspártico y/o unidades de
ácido glutámico, portadoras de injertos hidrófobos que comprenden
al menos un motivo hidrófobo enlazado a las unidades de ácido
aspártico y/o ácido glutámico por medio de una rótula que contiene
dos funciones amida, y más precisamente por medio de un
"separador" de tipo lisina u ornitina.
Esta solicitud no publicada divulga
específicamente una suspensión coloidal que contiene nanopartículas
formadas por asociaciones de polímero/proteína activa y que se
obtiene mezclando 10 mg de un poliglutamato injertado con ácido
palmítico por medio de un "separador" de lisina y 200 Ul de
insulina (7,4 mg) en 1 ml de agua, a pH 7,4.
Los poliaminoácidos "modificados
hidrófobos" anfifílicos según la solicitud de patente francesa nº
03 50190 comprenden unidades de ácido aspártico y/o unidades de
ácido glutámico, de las cuales algunas son portadoras de al menos
un injerto enlazado a una unidad de ácido aspártico o glutámico, por
medio de un "separador" "aminoácido" a base de Leu y/o
ILeu y/o Val y/o Phe, siendo un grupo hidrófobo en
C6-C30 enlazado mediante un enlace éster al
"sepa- rador".
Esta solicitud no publicada divulga
específicamente una suspensión coloidal que contiene nanopartículas
formadas por asociaciones de polímero/proteína activa y que se
obtiene mezclando una solución acuosa que contiene 10 mg de un
poliglutamato injertado con un injerto -Leu-OC8,
-Val-OC12 o -Val-colesterilo y 200
Ul de insulina (7,4 mg), por mililitro de agua, pH 7,4.
La solicitud de patente francesa nº 01 50641
divulga unos homopoliaminoácidos lineales, anfifílicos, aniónicos,
que comprenden unidades de ácido aspártico o unidades de ácido
glutámico, cuyos extremos son portadores de grupos hidrófobos que
comprenden de 8 a 30 átomos de carbono.
En particular, los homopoliaminoácidos
telequélicos "modificados hidrófobos" son, por ejemplo, un
poli[GluONa] con extremos PheOC18/C18 o un
poli[GluONa] con extremos
PheOC18/alfa-tocoferol. Esta solicitud no publicada
describe asimismo una suspensión coloidal que contiene
nanopartículas formadas por asociaciones de polímero/proteína
activa y que se obtiene mezclando 10 mg de uno de los polímeros
antes mencionados y 200 Ul de insulina (7,4 mg) por mililitro de
agua, a pH 7,4.
La duración de la liberación in vivo de
la insulina "vectorizada" por las suspensiones, según estas
solicitudes no publicadas, ganaría al ser aumentada.
En todo caso, toda esta técnica anterior sobre
las suspensiones coloidales de nanopartículas de poliaminoácidos
modificados hidrófobos no revela ninguna formulación que
permita:
- (I)
- aumentar suficientemente la duración de la liberación de la proteína activa después de la inyección por vía parenteral, en particular subcutánea;
- (II)
- y/o reducir el pico de concentración plasmático de la proteína activa después de la inyección de la formulación que la contiene.
\vskip1.000000\baselineskip
En estas condiciones, uno de los objetivos
esenciales de la presente invención es, por lo tanto, proponer una
formulación farmacéutica líquida para la liberación prolongada de
IFN activo(s), que soluciona las carencias de la técnica
anterior, y en particular permite, después de la inyección por vía
parenteral (por ejemplo subcutánea), obtener una duración de
liberación in vivo prolongada para unos interferones no
desnaturalizados.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer una formulación farmacéutica líquida de liberación
prolongada de interferón o interferones in vivo, que sea
suficientemente fluida para ser fácilmente inyectable y
esterilizable por filtración sobre filtros cuyo tamaño de poros es
inferior o igual a 0,2 micrones.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer una formulación farmacéutica líquida de liberación
prolongada de interferón o interferones in vivo, que sea
estable a la conservación tanto en el plano fisicoquímico como
biológico.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer una formulación farmacéutica líquida de liberación
prolongada de interferón o interferones in vivo, que
presenta al menos una de las propiedades siguientes:
biocompatibilidad, biodegradabilidad, atoxicidad, buena tolerancia
local.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer una formulación farmacéutica para la liberación prolongada
lenta de interferón o interferones in vivo, siendo esta
formulación una suspensión coloidal acuosa de baja viscosidad que
comprende partículas submicrónicas de polímero PO autoasociadas a al
menos un interferón, siendo el polímero PO un polímero
biodegradable, hidrosoluble y portador de grupos hidrófobos.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer una formulación farmacéutica para la liberación prolongada
lenta de interferón o interferones in vivo, siendo esta
formulación una suspensión coloidal acuosa de baja viscosidad que
comprende partículas submicrónicas de polímero PO autoasociadas a al
menos un interferón, siendo el polímero PO, por ejemplo, un
poliaminoácido formado por unidades de ácido aspártico y/o unidades
de ácido glutámico, siendo al menos una parte de estas unidades
portadoras de injertos que comprenden al menos un grupo hidrófobo
(GH), siendo PO además biodegradable, hidrosoluble y anfifílico.
Otro objetivo esencial de la invención es
proponer productos derivados y/o precursores de la formulación
mencionada en los objetivos antes enunciados.
Es en particular mérito de la Solicitante haber
realizado unas formulaciones farmacéuticas líquidas acuosas de baja
viscosidad a temperatura fisiológica que, de manera sorprendente,
forman un depósito gelificado in vivo después de una fácil
administración parenteral en el ser humano o en los mamíferos de
sangre caliente, no siendo la formación de este depósito iniciada
mediante un cambio de pH, ni de temperatura durante la inyección
parenteral, ni tampoco por dispersión de disolvente orgánico en el
medio fisiológico. El depósito gelificado así formado aumenta de
manera significativa la duración de la liberación del IFN in
vivo.
De ello resulta que la invención se refiere a
una formulación farmacéutica líquida para la liberación prolongada
de interferón o interferones, comprendiendo esta formulación una
suspensión coloidal, acuosa, de baja viscosidad, a base de
partículas submicrónicas de polímero (PO) biodegradable,
hidrosoluble y portador de grupos hidrófobos (GH), siendo dichas
partículas asociadas de manera no covalente con al menos un
interferón y al menos eventualmente con otro principio activo (PA),
caracterizada:
\newpage
- \blacklozenge
- porque el medio de dispersión de la suspensión está esencialmente constituido por agua,
- \blacklozenge
- porque es apta para ser inyectada por vía parenteral y para formar después in vivo un depósito gelificado, esta formación de depósito gelificado:
- \circ
-
\vtcortauna
- \circ
-
\vtcortauna
- \blacklozenge
- porque es líquida en las condiciones de inyección,
- \blacklozenge
- y porque es asimismo líquida a la temperatura y/o a pH fisiológico, y/o en presencia:
- *
- de electrolito fisiológico en concentración fisiológica,
- *
- y/o de al menos un tensoactivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ventajosamente, esta gelificación in vivo
no resulta de un cambio de pH y/o de temperatura, ni de una
dispersión in vivo de uno o más disolventes orgánicos
eventualmente contenidos en la formulación inyectada.
Sin querer estar limitado por la teoría, se
puede pensar que las proteínas fisiológicas, presentes in
vivo en unas concentraciones fisiológicas, permiten la
agregación de las nanopartículas de PO asociadas a al menos un
interferón. Tal gelificación se lleva a cabo, por ejemplo, en una o
más horas, 24 h, 48 h o 72 h, entre otras.
El depósito gelificado obtenido después de la
inyección parenteral de la formulación permite una prolongación
interesante de la duración de liberación de la proteína, así como
una reducción del pico de concentración plasmática de interferón o
interferones.
Según una forma optimizada de la invención, la
concentración en [PO] es tal que forma un depósito gelificado in
vivo, después de la inyección parenteral.
Según un modo de definición que ya no está
basado en un comportamiento in vivo como el indicado
anteriormente, sino en un comportamiento in vitro, la
invención se refiere a una formulación farmacéutica líquida para la
liberación prolongada de principio(s) activo(s) -PA-,
siendo esta formulación:
- \circ
-
\vtcortauna
- *
- asimismo líquida a la temperatura y/o al pH fisiológicos y/o en presencia:
- \circ
-
\vtcortauna
- *
- y/o de al menos un tensoactivo,
- \circ
-
\vtcortauna
caracterizada porque su concentración en [PO]
está fijada a un valor suficientemente elevado para permitir la
formación del depósito gelificado in vitro, en presencia de
al menos una proteína.
\vskip1.000000\baselineskip
Preferentemente, la formulación farmacéutica
líquida según la invención se caracteriza porque su concentración
en [PO] es tal que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
representando C1 la concentración de
"gelificación inducida" de las partículas de PO tal como
se mide en un ensayo GI.
\vskip1.000000\baselineskip
El depósito gelificado obtenido después de la
inyección parenteral de la formulación permite una prolongación
interesante de la duración de la liberación de la proteína así como
una reducción del pico de concentración plasmática de interferón o
interferones.
La duración de la liberación del PA está
significativamente aumentada con relación a aquella de las
formulaciones de la técnica anterior, en particular aquellas
descritas en la solicitud de patente PCT publicada
WO-A-00/30618 y las solicitudes de
patente francesa no publicadas n^{os} 02 07008, 02 09670, 03 50190
y 01 50641.
La prolongación de la duración de la liberación
in vivo inducida por las formulaciones según la invención es
aún más apreciable porque los interferones liberados son siempre
totalmente bioactivos y no desnaturalizados.
Los interferones en el sentido de la presente
descripción son indiferentemente interferones no modificados o
interferones modificados, por ejemplo mediante injerto de uno o más
grupos polioxietilénicos. Entre las proteínas de la familia de los
interferones, se pueden citar: IFN alfa, IFN beta e IFN gamma.
En toda la presente descripción, las
combinaciones supramoleculares de polímero PO asociado o no a al
menos un inteferón y, eventualmente a al menos otro principio
activo, se designarán indiferentemente como "partículas
submicrónicas" o "nanopartículas". Esto corresponde a
partículas de diámetro hidrodinámico medio (medido según un modo de
realización Md definido más adelante en los ejemplos), por ejemplo,
comprendido entre 1 y 500 nm, preferentemente entre 5 y 250 nm.
Además, es muy importante tener en cuenta que
estas formulaciones son líquidas, es decir, que presentan
ventajosamente una viscosidad muy baja, que hace su inyección
fácil. Éstas gelifican sólo in vivo.
Según la invención, los calificativos
"líquida", "baja" o "muy baja viscosidad"
corresponden, ventajosamente, a una viscosidad dinámica a 20ºC
inferior o igual a 5 Pa.s. La medición de referencia para la
viscosidad se puede realizar, por ejemplo, a 20ºC con la ayuda de
un reómetro AR1000 (TA Instruments) equipado de una geometría
cono-plano (4 cm, 2º). La viscosidad v se mide para
un gradiente de cizallamiento de 10 s^{-1}. De esta manera, la
viscosidad de las formulaciones según la invención puede estar, por
ejemplo, comprendida entre 1.10^{-3} y 5 Pa.s, preferentemente
entre 1.10^{-3} y 0,8 Pa.s y, aún más preferentemente, entre
1.10^{-3} y 0,5 Pa.s.
Esta baja viscosidad hace las formulaciones de
la invención no sólo fácilmente inyectables por vía parenteral, en
particular por vía intramuscular o subcutánea, entre otros, sino
también esterilizables fácilmente y a menor coste por filtración
sobre unos filtros de esterilización de 0,2 \mum de tamaño de
poros.
Este estado líquido o esta baja viscosidad de
las formulaciones de la invención existen tanto a temperaturas de
inyección que corresponden a temperaturas ambientes, por ejemplo,
comprendidas entre 4 y 30ºC, como a temperatura fisiológica.
La formulación según la invención es,
preferentemente, una suspensión coloidal acuosa de nanopartículas
asociadas a uno o más interferones y eventualmente a uno o más PA.
Esto significa que, según la invención, el medio de dispersión de
esta suspensión está esencialmente formado por agua. En la práctica,
este agua representa, por ejemplo, al menos 50% en peso con
relación a la masa total de la formulación.
Según el sentido de la invención, el término
"proteína" designa tanto una proteína como un péptido. Pudiendo
ser esta proteína o este péptido modificado o no, por ejemplo,
mediante injerto de uno o más grupos polioxietilénicos.
Mediante la expresión "proteínas
fisiológicas" se entienden, según el sentido de la invención, las
proteínas y/o los péptidos endógenos de los mamíferos de sangre
caliente presentes en el lugar de inyección.
Mediante la expresión "temperatura
fisiológica" se entiende, según el sentido de la invención, la
temperatura fisiológica de los mamíferos de sangre caliente, a
saber por ejemplo, aproximadamente 37-42ºC.
Mediante la expresión "pH fisiológico" se
entiende, según el sentido de la invención, un pH por ejemplo
comprendido entre 6 y 7,6.
Por el término "gel" se entiende, según el
sentido de la invención, un estado semisólido en el que se
transforma la formulación líquida, según la invención, de forma
espontánea mediante la única presencia de proteína(s)
fisiológica(s), sin ninguna intervención esencial del pH
fisiológico y/o de la temperatura fisiológica y/o de la presencia
de un electrolito fisiológico (Ca^{++} por ejemplo) y/o de la
dispersión (o disipación) in vivo de un disolvente orgánico
eventualmente presente en la formulación inyectada.
Mediante la expresión "electrolito
fisiológico" se entiende, según el sentido de la invención,
cualquier elemento electrolito (por ejemplo iones Ca^{++})
presente en los mamíferos de sangre caliente.
Mediante la expresión "concentración
fisiológica" se entiende, según el sentido de la invención,
cualquier concentración fisiológica encontrada en los mamíferos de
sangre caliente, para el medio fisiológico considerado.
Además, las formulaciones, según la invención,
son no tóxicas, bien toleradas localmente y estables.
Es asimismo mérito de los inventores haber
realizado un ensayo in vitro GI que permite seleccionar una
población de las formulaciones preferentes, según la invención, y
determinar las concentraciones adecuadas en PO en las
formulaciones.
Según la invención, el ensayo GI de medición de
la concentración de gelificación C1 es un ensayo de referencia que
permite definir la concentración crítica C1, denominada a
continuación concentración de gelificación inducida C1, que
caracteriza cada formulación coloidal según la invención.
El ensayo GI de determinación de la
concentración C1 de gelificación inducida es el siguiente:
A fin de determinar la concentración C1, se
preparan formulaciones coloidales de concentraciones variables en
polímero anfifílico según la invención y de concentración constante
en proteína terapéutica. Para esto, se ponen en solución en agua
desionizada cantidades crecientes de polvo seco del polímero. Las
soluciones se mantienen a 25ºC bajo agitación magnética durante 16
horas antes de ser mezcladas con una solución concentrada en
proteína terapéutica. El volumen y la concentración de esta solución
de proteína terapéutica se ajustan a fin de obtener la
concentración en proteína buscada para la formulación [por ejemplo
0,3 mg/ml de interferón alfa 2b].
Las formulaciones coloidales preparadas de este
modo se mezclan en una solución acuosa de albúmina de suero bovino
(BSA) concentrada a 30 mg/ml, y después centrifugada durante 15
minutos a 3000 rpm. Las mezclas se dejan bajo agitación suave
durante 24 horas antes de ser recuperadas para ser
caracterizadas.
Las mediciones de viscoelasticidad se efectúan
con un reómetro TA Instrument AR 1000, equipado de una geometría
cono-plano (diámetro 4 cm y ángulo 1,59). Una
deformación de 0,01 rad, situada en el dominio de viscoelasticidad
lineal, se impone de manera sinusoidal sobre un rango de frecuencia
comprendido entre 0,1 y 300 rad/s. La temperatura de la muestra es
mantenida constante a 20ºC por medio de una célula Peltier.
Los espectros de frecuencia del módulo elástico
G' y del módulo viscoso o de pérdida, G'', permiten definir el
tiempo de relajación característico Tr definido aquí como la inversa
de la frecuencia a la que el módulo elástico G' cruza el módulo
viscoso G''. Se encontrará una exposición detallada de estas
cuestiones en el documento Ferry, Viscoelastic Properties of
Polymers, J.D. Ferry, J. Wiley, NY, 1980 y en el artículo de J.
Regalado y otros Macromolecules 1999, 32, 8580.
La medición del tiempo de relajación Tr en
función de la concentración en polímero de la formulación permite
definir la concentración C1 a la que este tiempo Tr pasa 1 segundo.
Ejemplos de valores de la concentración de gelificación C1 se darán
en el ejemplo 7 a continuación.
De la misma manera, se pueden definir las
concentraciones C0,1 y C10 para las cuales el tiempo de relajación
supera respectivamente 0,1 s y 10 s. Estas concentraciones se
clasifican en el orden creciente siguiente: C0,1 < C1 <
C10.
Según una variante de la formulación según la
invención:
- \ding{226}
- [PO] \geq C0,1,
- \ding{226}
- Preferentemente [PO] \geq C1,
- \ding{226}
- Y más preferentemente todavía [PO] \geq C10.
\vskip1.000000\baselineskip
Según una característica adicional ventajosa:
[PO] \leq 20.C1.
Según el sentido de la invención y en toda la
presente descripción los términos "asociación" o "asociar"
usados para calificar las relaciones entre uno o más principios
activos y los polímeros PO (por ejemplo los poliaminoácidos)
significan, en particular, que el principio o principios activos
están unidos al polímero o polímeros PO [por ejemplo el (o los)
poliaminoácido(s)] mediante una unión no covalente, por
ejemplo mediante interacción electroestática y/o hidrófoba y/o una
unión de hidrógeno y/o un gen estérico.
Los polímeros PO, según la invención, son
polímeros biodegradables, hidrosolubles y portadores de grupos
hidrófobos GH. Los grupos hidrófobos pueden encontrarse en número
reducido frente al resto de la cadena y pueden situarse
lateralmente a la cadena o ser intercalados en la cadena, y ser
repartidos de manera aleatoria (copolímero estático) o repartidos
en forma de secuencias o de injertos (copolímeros bloque o
copolímeros secuenciados).
Sin que sea limitativo, los polímeros PO
modificados hidrófobos se pueden elegir del grupo que comprende los
copoliaminoácidos anfifílicos, los polisacáridos (preferentemente en
el subgrupo que comprende los pululanos y/o los quitosanos y/o los
mucopolisacáridos), las gelatinas, o sus mezclas.
Según un modo preferente de realización de la
invención, PO se elige entre los copoliaminoácidos anfifílicos.
Según el sentido de la invención y en toda la presente descripción,
el término "poliaminoácido" cubre tanto los
oligoaminoácidos que comprenden de 2 a 20 unidades de
"aminoácido" como los poliaminoácidos que comprenden más de 20
unidades de "aminoácido".
Preferentemente, los poliaminoácidos según la
presente invención son oligómeros u homopolímeros que comprenden
unidades recurrentes de ácido glutámico o aspártico, o copolímeros
que comprenden una mezcla de estos dos tipos de unidades de
"aminoácido". Las unidades consideradas en estos polímeros son
aminoácidos que tienen la configuración D o L o D/L y que están
unidos por sus posiciones alfa o gamma para la unidad glutamato o
ácido glutámico y alfa o beta para la unidad ácido aspártico o
aspartato.
Las unidades de "aminoácido" preferentes de
la cadena de poliaminoácido principal son aquellas que tienen la
configuración L y una unión de tipo alfa.
Según un modo todavía más preferente de
realización de la invención, el polímero PO es un poliaminoácido
formado por unidades de ácido aspártico y/o unidades de ácido
glutámico, siendo al menos una parte de estas unidades portadora de
injertos que comprenden al menos un grupo hidrófobo GH. Estos
poliaminoácidos son en particular del tipo de los descritos en la
solicitud de patente PCT
WO-A-00/30618.
Según una primera posibilidad, el (o los) PO de
la formulación son definidos por la fórmula general (I)
siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\newpage
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
Según una segunda posibilidad, el (o los) PO de
la formulación responde(n) a una de las fórmulas generales
(II), (III) y (IV) siguientes:
en las
que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
\newpage
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
Ventajosamente, los grupos GH del PO representan
cada uno independientemente entre sí un radical monovalente de la
fórmula siguiente:
en la
que:
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
Según una característica destacable de la
invención, todo o parte de los grupos hidrófobos R^{6} de los PO
se eligen de manera independiente, en el grupo de radicales que
comprende:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
En la práctica y sin que eso sea limitativo, el
radical hidrófobo R^{6} del injerto del PO procede de un
precursor alcohólico elegido del grupo que comprende: el octanol, el
dodecanol, el tetradecanol, el hexadecanol, el octadecanol, el
oleilalcohol, el tocoferol o el colesterol.
Según una primera forma de realización de la
invención, las cadenas principales de poliaminoácidos son
homopolímeros de alfa-L-glutamato o
de ácido alfa-L-glutámico.
Según una segunda forma de realización de la
invención, las cadenas principales de poliaminoácidos son
homopolímeros de alfa-L-aspartato o
de ácido alfa-L-aspártico.
Según una tercera forma de realización de la
invención, las cadenas principales de poliaminoácidos son
copolímeros de
alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato
o de ácido
alfa-L-aspártico/alfa-L-glutámico.
Ventajosamente, la distribución de las unidades
de ácido aspártico y/o de ácido glutámico de la cadena
poliaminoácido principal del PO es tal que el polímero así
constituido es aleatorio, o bien de tipo bloque, o bien de tipo
multibloque.
\newpage
Preferentemente, el PO usado en la formulación,
según la invención, tiene una masa molar que se sitúa entre 2000 y
100.000 g/mol, y preferentemente entre 5000 y 40.000 g/mol.
Según un primer modo preferente de realización
de la formulación, el radical hidrófobo R^{6} del injerto del PO
procede de un precursor alcohólico formado por el tocoferol:
- \blacklozenge
- 1% \leq [n/(n+m)] x 100 \leq 10%
- \blacklozenge
- preferentemente 3,5% \leq [n/(n+m)] x 100 \leq 7,5%
- \blacklozenge
- n + m varía de 100 a 400, preferentemente entre 120 y 300.
\vskip1.000000\baselineskip
Según un segundo modo preferente de realización
de la formulación, el radical hidrófobo R^{6} del injerto del PO
procede de un precursor alcohólico formado por el colesterol:
- \blacklozenge
- 1% \leq [n/(n+m)] x 100 \leq 10%
- \blacklozenge
- preferentemente 3,5% \leq [n/(n+m)] x 100 \leq 6,5%
- \blacklozenge
- n + m varía de 100 a 400, preferentemente entre 120 y 300.
\vskip1.000000\baselineskip
En estos dos modos preferentes de realización de
la formulación de la invención, es ventajoso que la concentración
en polímero [PO] esté comprendida entre 15 y 50 mg/ml.
Según una variante, el PO de la formulación,
según la invención, es portador de al menos un injerto de tipo
polialquilenglicol unido a una unidad glutamato y/o aspartato.
Ventajosamente, este injerto de tipo
polialquilenglicol es de la fórmula (V) siguiente.
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
En la práctica, el polialquilenglicol es, por
ejemplo, un polietilenglicol.
Es deseable, según la invención, que el
porcentaje molar de injerto del polialquilenglicol varíe de 1 a
30%.
Los poliaminoácidos PO son además extremadamente
interesantes debido a un índice de injerto ajustable, y se
dispersan en agua de pH 7,4 (por ejemplo con un tampón fosfato) para
dar unas suspensiones coloidales.
Además, los principios activos que son los
interferones u otros PA elegidos entre las proteínas, péptidos o
pequeñas moléculas, pueden asociarse espontáneamente a
nanopartículas que comprenden estos poliaminoácidos PO.
Se debe comprender que los PO a base de
poliaminoácidos contienen unas funciones carboxílicas que son, bien
neutras (forma COOH), o bien ionizadas (anión COO), según el pH y la
composición. Por estas razones, la solubilidad en una fase acuosa
es directamente función del índice de COOH libres de los PO (no
injertado por el motivo hidrófobo) y del pH. En solución acuosa, el
contracatión puede ser un catión metálico tal como sodio, calcio o
magnesio, o un catión orgánico tal como trietanolamina,
tris(hidroximetil)-aminometano o poliamina
tal como la polietilenimina.
Los PO de tipo poliaminoácidos susceptibles de
ser usados en la formulación de la invención son obtenidos, por
ejemplo, mediante métodos conocidos por un experto en la técnica.
Los poliaminoácidos estadísticos se pueden obtener mediante injerto
del injerto hidrófobo, previamente funcionalizado por el
"separador", directamente en el polímero mediante reacción
habitual de acoplamiento. Los PO poliaminoácidos bloque o
multibloques se pueden obtener mediante polimerización secuencial
de los anhídridos de
N-carboxi-aminoácidos (NCA)
correspon-
dientes.
dientes.
Se prepara por ejemplo un poliaminoácido, un
homopoliglutamato, un homopoliaspartato o un copolímero
glutamato/aspartato, bloque, multibloque o aleatorio según métodos
habituales.
Para la obtención de un poliaminoácido de tipo
alfa, la técnica más habitual se basa en la polimerización de
anhídridos de N-carboxi-aminoácidos
(NCA), descrita por ejemplo en el artículo "Biopolymers, 1976, 15,
1869" y en el documento de H.R. Kricheldorf
"alpha-Aminoacid-N-carboxy
Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Los
derivados de NCA son preferentemente unos derivados
NCA-O-Me,
NCA-O-Et o
NCA-O-Bz (Me = Metilo, Et = Etilo y
Bz = Bencilo). Los polímeros se hidrolizan después en condiciones
apropiadas para obtener el polímero en su forma ácida. Estos
métodos se basan en la descripción dada en la patente
FR-A-2 801 226 de la solicitante.
Un cierto número de polímeros utilizables según la invención, por
ejemplo de tipo ácido
poli(alfa-L-aspártico), ácido
poli(alfa-L-glutámico), ácido
poli(alfa-D-glutámico) y
ácido poli(gamma-L-glutámico)
de masas variables, están disponibles comercialmente. El ácido
poliaspártico de tipo alfa-beta se obtiene mediante
condensación del ácido aspártico (para obtener una polisuccinimida)
seguida de una hidrólisis básica (véase Tomida y otros, Polymer
1997, 38, 4733-36).
El acoplamiento del injerto con una función
ácida del polímero se realiza fácilmente mediante reacción del
poliaminoácido en presencia de una carbodiimida como agente de
acoplamiento y, de forma opcional, un catalizador tal como la
4-dimetilaminopiridina y en un disolvente apropiado
tal como la dimetilformamida (DMF), la
N-metilpirrolidona (NMP) o el dimetilsulfóxido
(DMSO). La carbodiimida es, por ejemplo, la diciclohexilcarbodiimida
o la diisopropilcarbodiimida. El índice de injerto se controla
químicamente mediante la estoiquiometría de los constituyentes y
reactivos o el tiempo de reacción. Los injertos hidrófobos
funcionalizados por un "separador" se obtienen mediante
acoplamiento peptídico clásico o mediante condensación directa por
catalización ácida. Estas técnicas son bien conocidas por los
expertos en la técnica.
Para la síntesis de copolímero bloque o
multibloque, se usan derivados NCA previamente sintetizados con el
injerto hidrófobo. Por ejemplo, el derivado
NCA-hidrófobo se copolimeriza con el
NCA-O-bencilo y después se eliminan
mediante hidrólisis selectivamente los grupos bencílicos.
La síntesis de poliaminoácidos PO conduce
preferentemente a unas suspensiones acuosas de nanopartículas
de
PO.
PO.
Tales suspensiones se pueden transformar en
polvos de nanopartículas de PO mediante secado, de manera apropiada
y conocida por los expertos en la técnica, como por ejemplo:
calentamiento (autoclave, etc.), puesta al vacío, uso de
desecantes, liofilización, atomización.
Estas nanopartículas de PO, en suspensión o en
estado pulverulento, forman una materia prima para la preparación
de las formulaciones, según la invención.
A propósito de eso, se puede precisar que las
formulaciones, según la invención, resultan de la asociación no
covalente de nanopartículas a base de al menos un PO y de al menos
un PA, en un medio líquido acuoso.
Para la preparación, el PO y/o el interferón o
interferones (y/o el eventual PA suplementario) puede(n)
estar en forma sólida (preferentemente polvo) y/o en forma líquida
(preferentemente suspensión acuosa coloidal).
La asociación interferón o interferones/PO
significa, según el sentido de la presente descripción, que el
interferón o interferones está (están) asociado(s) al (a los)
polímero(s) PO [por ejemplo uno o más
poliaminoácidos(s)] mediante una o más uniones
distinta(s) que una (o más) unión(es)
química(s) covalente(s).
Las técnicas de asociación de uno o más
interferones a los PO, según la invención, se describen
especialmente en la solicitud de patente
WO-A-00/30618. Consisten en
incorporar al menos un interferón (y uno o más principio(s)
acti-
vo(s) eventual(es)) en el medio líquido que contiene unas nanopartículas de PO, para obtener una suspensión coloidal de nanopartículas cargadas en o asociadas con uno o más interferón o interferones (y uno o más principio(s) activo(s) eventual(es)).
vo(s) eventual(es)) en el medio líquido que contiene unas nanopartículas de PO, para obtener una suspensión coloidal de nanopartículas cargadas en o asociadas con uno o más interferón o interferones (y uno o más principio(s) activo(s) eventual(es)).
La invención tiene, por lo tanto, asimismo, por
objeto un procedimiento de preparación de la formulación mencionada
anteriormente.
Según un primer modo preferente de realización,
este procedimiento se caracteriza porque consiste esencialmente
en:
- \blacklozenge
- llevar a cabo una suspensión coloidal de nanopartículas de al menos un PO,
- \blacklozenge
- mezclar esta suspensión coloidal de nanopartículas de PO con al menos un interferón (y eventualmente otro o más principio(s) activo(s) eventual(es)), preferentemente en solución acuosa,
- \blacklozenge
- añadir eventualmente al menos un excipiente
- \blacklozenge
- si es necesario, ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente filtrar la suspensión así obtenida.
\vskip1.000000\baselineskip
Ventajosamente, el interferón (y eventualmente
otro o más principio(s) activo(s) eventual(es))
se obtienen en forma de suspensión o de solución acuosa para la
mezcla con la suspensión coloidal de nanopartículas de PO.
Según un segundo modo de realización, este
procedimiento se caracteriza porque consiste esencialmente en:
- \blacklozenge
- realizar un material en polvo de al menos un polímero PO,
- \blacklozenge
- mezclar este polvo con una suspensión o solución acuosa de al menos un interferón (y eventualmente otro o más principio(s) activo(s) eventual(es)), preferentemente en solución acuosa,
- \blacklozenge
- añadir eventualmente al menos un excipiente,
- \blacklozenge
- si es necesario ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente filtrar la suspensión así obtenida.
\vskip1.000000\baselineskip
Las formulaciones así obtenidas pueden asimismo
ser elaboradas en forma de geles, de polvo o de película mediante
los métodos clásicos conocidos por los expertos en la técnica, tales
como la concentración por diafiltración o evaporación, el
revestimiento, la atomización o la liofilización, entre otros. Estos
métodos pueden ser eventualmente combinados.
De lo anterior resulta un tercer modo de
realización del procedimiento de preparación de las formulaciones
líquidas, según la invención, consistiendo este tercer modo
esencialmente en:
- \blacklozenge
- realizar un material en polvo procedente del secado de la formulación líquida, según la invención, tal como se ha definido anteriormente,
- \blacklozenge
- mezclar este polvo con un medio líquido acuoso, preferentemente bajo agitación,
- \blacklozenge
- añadir eventualmente al menos un excipiente,
- \blacklozenge
- si es necesario ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente filtrar la suspensión así obtenida
\vskip1.000000\baselineskip
Los excipientes susceptibles de ser añadidos
son, por ejemplo, antimicrobianos, tampones, antioxidantes, agentes
que permiten ajustar la isotonicidad, que son conocidos por los
expertos en la técnica. Se podrá, por ejemplo, referirse al
documento: Injectable Drug Development, P.K. Gupta y otros,
Interpharm Press, Denver, Colorado 1999.
La filtración eventual de la formulación líquida
sobre filtros de porosidad igual, por ejemplo, de 0,2 \mum,
permite esterilizarla. Se puede así inyectar directamente a un
paciente.
Todos estos ejemplos de preparación de
formulaciones líquidas, según la invención, son ventajosamente
realizados en atmósfera y a temperatura ambiente (25ºC por
ejemplo).
\vskip1.000000\baselineskip
Según una disposición interesante de la
formulación, según la invención, su fracción másica en interferón o
interferones no asociado(s) a las partículas submicrónicas
interferón o interferones no asociado(s) en % en peso es tal
que:
- \circ
-
\vtcortauna
- \circ
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
Según la invención, el interferón preferido es
el interferón alfa.
Según otro de sus aspectos, la invención engloba
cualquier producto derivado obtenido a partir de la formulación
líquida según la invención, tal como se ha definido anteriormente, y
que comprende partículas submicrónicas, formadas mediante
asociaciones no covalentes PO/interferón tales como se han definido
anteriormente.
En la práctica, estos productos derivados pueden
en particular estar constituidos por polvos, geles, implantes o
películas, entre otros.
Además, la invención se refiere a cualquier
precursor de la formulación líquida inyectable tal como se ha
definido anteriormente.
Haciendo referencia adicional a estos productos
derivados, se debe subrayar que la invención se refiere asimismo a
un procedimiento de preparación de un material en polvo derivado de
la formulación tal como se ha definido anteriormente, estando este
procedimiento caracterizado porque dicho polvo se obtiene mediante
secado de la formulación tal como se ha definido anteriormente.
La formulación, según la invención, es
preferentemente farmacéutica, sin excluir las formulaciones
cosméticas, dietéticas o fitosanitarias que comprenden al menos un
PO tal como se ha definido anteriormente, y al menos un interferón
y eventualmente al menos otro principio activo.
Según la invención, el eventual principio activo
suplementario diferente de un interferón puede ser una proteína,
una glicoproteína, una proteína enlazada a una o más cadenas
polialquilenglicol [preferentemente polietilenglicol (PEG):
"proteína-PEGilada"], un polisacárido, un
liposacárido, un oligonucleótido, un polinucleótido o un
pép-
tido.
tido.
Este principio activo suplementario se puede
seleccionar de entre las hemoglobinas, los citocromos, las
albúminas, los interferones, las citocinas, los antígenos, los
anticuerpos, la eritropoietina, la insulina, las hormonas de
crecimiento, los factores VIII y IX, los factores estimulantes de la
hematopoyesis, y sus mezclas.
Según una variante, este principio activo
suplementario es una "pequeña" molécula orgánica hidrófoba,
hidrofílica o anfifílica, por ejemplo los péptidos tales como
leuprolida o la ciclosporina, o las pequeñas moléculas tales como
aquellas que pertenecen a la familia de la antraciclinas, de los
taxoides o de las camptotecinas, y sus mezclas.
Entre las características principales de la
formulación, según la invención, figuran su carácter inyectable y
su capacidad de formar un depósito sobre el sitio de inyección,
in vivo, mediante gelificación o también mediante agregación
de las nanopartículas, en presencia de proteínas fisiológicas o
análogos.
La formulación, según la invención, puede en
particular ser inyectada por vía parenteral, subcutánea,
intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral o en un
tumor.
La formulación, según la invención, puede
asimismo ser administrada por vía oral, nasal, vaginal, ocular o
bu-
cal.
cal.
Ventajosamente, la formulación se destina a la
preparación de medicamentos, en particular para administración
parenteral, subcutánea, intramuscular, intradérmica,
intraperitoneal, intracerebral o en un tumor, incluso por vía oral,
nasal, vaginal u ocular.
Aunque la formulación, según la invención, sea
preferentemente farmacéutica, esto no excluye sin embargo las
formulaciones cosméticas, dietéticas o fitosanitarias que comprenden
al menos un PO tal como se definió anteriormente y al menos un
principio activo correspondiente.
Según todavía otro de sus aspectos, la invención
se refiere a un procedimiento de preparación de medicamentos, en
particular para administración parenteral, subcutánea,
intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral o en un
tumor, incluso por vía oral, nasal, vaginal u ocular, caracterizado
porque consiste esencialmente en realizar al menos una formulación
definida anteriormente y/o cualquier producto derivado y/o cualquier
precursor de dicha formulación.
La invención se entenderá mejor y sus ventajas y
variantes de realización se comprenderán mejor a partir de los
ejemplos siguientes, que describen la síntesis de los PO formados
por poliaminoácidos injertados por un grupo hidrófobo, su
transformación en sistema de liberación prolongada de interferón, a
saber, en formulación según la invención (suspensión coloidal
acuosa estable) y la demostración de la capacidad de tal sistema,
no sólo en asociarse a un interferón, sino sobre todo en
gelificarse/reticularse para liberar de manera muy prolongada in
vivo los inter-
ferones.
ferones.
\newpage
Figura 1: Curvas de las concentraciones
plasmáticas de IFN (picogramo/ml) conseguidas en un perro después
de inyección subcutánea
- \bullet
- de la formulación de IFN (A) según la invención (ejemplos 9 y 10):
- (curva -\blacksquare-\blacksquare-
- \bullet
- y de la formulación de IFN (D) control no incluida en la invención (ejemplo 10):
- (curva -\ding{115}-\ding{115}-,
- en función del tiempo T en horas y a una dosis de IFN de 60 \mug/kg.
\vskip1.000000\baselineskip
Se solubilizan 5,5 g de un
alfa-L-poliglutamato (de masa
equivalente a aproximadamente 10.000 Da) con respecto a un estándar
de polioxietileno y obtenido mediante polimerización de NCAGluOMe
seguida de una hidrólisis tal como se describe en la solicitud de
patente FR-A-2 801 226) en 92 ml de
dimetilformamida (DMF) calentando a 40ºC durante 2 horas. Una vez
solubilizado el polímero, se deja volver la temperatura hasta 25ºC y
se añaden sucesivamente 1,49 g de
D,L-alfa-tocoferol (> 98%
obtenido de Fluka®) previamente solubilizado en 6 ml de DMF, 0,09 g
de 4-dimetilaminopiridina previamente solubilizada
en 6 ml de DMF y 0,57 g de diisopropilcarbodiimida previamente
solubilizada en 6 ml de DMF. Después de 8 horas a 25ºC bajo
agitación, el medio de reacción se vierte en 800 ml de agua que
contiene 15% de cloruro de sodio y de ácido clorhídrico (pH 2). El
polímero precipitado se recupera después mediante filtración, se
lava con ácido clorhídrico 0,1N y después con agua. El polímero se
resolubiliza después en 75 ml de DMF, y después se reprecipita en
agua que contiene como antes sal y ácido a pH 2. Después de dos
lavados con agua, se lava varias veces con éter diisopropílico. El
polímero se seca después en estufa, en vacío a 40ºC. Se obtiene un
rendimiento del orden de 85%.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos polímeros se obtienen de la misma manera
que para la obtención del polímero P1. La siguiente tabla 1 resume
las características de estos polímeros. Las del polímero P1 se dan a
título de comparación.
Se introducen en un frasco 1,5 g de polvo
liofilizado del poliaminoácido anfifílico P6 del ejemplo 2 anterior.
Este polvo se disuelve en 30 ml de agua estéril para inyección. La
solución de polímero se mantiene durante 16 horas a 35ºC bajo
agitación magnética. La osmolaridad de la solución se ajusta a 275
\pm 20 mOsmol con la ayuda de un osmómetro Fiske Mark 3,
introduciendo la cantidad necesaria de una solución acuosa de NaCl
5,13M (30% p/p). El pH se ajusta si es necesario a pH 7,4 \pm 0,2
mediante la adición de una solución de NaOH 1N. La concentración en
polímero se ajusta a 45 mg/ml mediante la adición de una solución
acuosa estéril de NaCl 0,15M.
La solución de polímero se filtra a continuación
sobre un filtro de tamaño de poro 0,8 y 0,2 micrones, y después se
almacena a 4ºC.
En un frasco de vidrio, se mezclan después 26,65
ml de la solución coloidal de polímero P6 anterior y 1,85 ml de una
solución de IFN (PC GEN; solución concentrada a 2,42 mg/ml). La
osmolaridad y el pH se reajustan si es necesario a 300 \pm 20
mOsmol y pH 7,4 \pm 0,2 mediante la adición de sosa 0,1N y de
cloruro de sodio 0,9% estéril. La solución cargada en proteína se
pone en maduración durante 5h a 25ºC en estufa, y después se filtra
sobre 0,8-0,2 micrones.
Se obtienen así 30 ml de una formulación lista
para ser inyectada que contiene 0,15 mg/ml de IFN y 40 mg/ml de
polímero P6.
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación se efectúa como en el ejemplo 3,
preparando en un primer tiempo una solución coloidal de polímero a
1,25 veces la concentración final buscada, y después mezclando esta
solución con una solución de interferón concentrada a 2,42 mg/ml.
El volumen de la solución de proteína se determina mediante la
elección de la relación de la concentración en polímero, a la
concentración en proteína diana. Como en el ejemplo 3, los ajustes
de concentraciones y de pH se realizan mediante adición de una
solución de NaCl y de sosa.
\vskip1.000000\baselineskip
El diámetro hidrodinámico medio de las
partículas de polímero PO según la invención se mide según el modo
de realización Md definido a continuación:
Las soluciones de PO se preparan en
concentraciones de 1 ó 2 mg/ml en medio NaCl 0,15M y se dejan bajo
agitación durante 24 h. Estas soluciones se filtran después sobre
0,8-0,2 \mum, antes de analizarlas en difusión
dinámica de la luz gracias a un aparato de tipo Brookhaven, que
funciona con un haz láser de longitud de onda 488 nm y polarizado
verticalmente. El diámetro hidrodinámico de las nanopartículas de
polímero PO se calcula a partir de la función de autocorrelación
del campo eléctrico por medio del método de los cumulantes, tal como
se describe en el texto "Surfactant Science Series" volumen
22, Surfactant Solutions, Ed. R Zana, cap. 3, M. Dekker, 1984.
Se obtienen los resultados siguientes para los
polímeros PO, P2, P3, P4 y P6 del ejemplo 2:
Una solución de tampón fosfato a 25 mM se
prepara a partir de polvo de NaH_{2}Po_{4} (Sigma ref.
S-0751) y se ajusta con sosa 1N (SDS ref. 3474015)
a pH = 7,2.
Una suspensión coloidal de nanopartículas de
polímero P1 se prepara mediante solución del polímero liofilizado
durante una noche a 5 mg/ml en la solución de tampón fosfato
anterior.
Una solución madre de BSA (Sigma
A-2934) se prepara mediante solución durante dos
horas de una proteína a 10 mg/ml en el mismo tampón.
Las soluciones madre así como el tampón se
filtran sobre 0,22 \mum.
Se realizan mezclas mediante adición de
volúmenes predeterminados de dos soluciones madre y de la dilución
en el tampón fosfato para obtener al final una gama de muestras que
tienen una concentración constante en polímero (0,1 mg/ml) y unas
concentraciones crecientes de proteínas (0 a 1,8 mg/ml).
Las muestras se dejan asociar durante 5 horas a
25ºC y después se analizan mediante electroforesis capilar en un
método denominado frontal en el que es posible visualizar
separadamente la proteína y el complejo de
proteína-polímero. Para más detalles de esta
técnica, se consultará el siguiente artículo: Gao JY, Dublin PL,
Muhoberac BB, Anal. Chem. 1997, 69, 2945. Los análisis se realizan
en un aparato Agilent G16000A provisto de una burbuja capilar de
sílice fundida (tipo G1600-62-232).
La altura del primer nivel que corresponde a la proteína libre
permite determinar la concentración en BSA no asociada. El
experimento muestra que para unas cantidades de proteínas
inferiores a 0,1 g de proteína por g de polímero, la proteína se
asocia a las nanopartículas de polímero.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aplica el ensayo GI a formulaciones de IFN
asociadas a los polímeros P1 a P6 de los ejemplos 1 y 2. Las
concentraciones en proteínas de estas formulaciones se trasladan a
la tabla siguiente. La medición del tiempo de relajación de las
formulaciones en presencia de BSA (concentración 30 mg/ml) se
efectúa según el modo de realización del ensayo GI. La
concentración crítica C1, para la cual el tiempo de relajación
excede 1 s se traslada a las tablas 3 para el IFN:
Una formulación (A) de IFN (concentración 0,3
mg/ml) y de polímero anfifílico P1 a la concentración de 30 mg/ml
se prepara según el modo de realización descrito en el ejemplo 4.
Esta formulación se inyecta por vía subcutánea a unos perros
Beagles (n=3), en dosis de 60 \mug/kg). Se efectúan extracciones
de suero en los tiempos 1, 5, 11, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168
y 240 horas. La concentración plasmática en IFN se mide sobre estas
extracciones mediante determinación ELISA (kit immunotech IM
3193).
Se obtiene así un perfil de concentración
plasmática medio tal como se representa en la figura 1 que demuestra
claramente la liberación prolongada de la proteína en el suero con
respecto a una formulación de control (D) no incluida en la
invención de IFN (concentración 0,3 mg/ml) y de polímero anfifílico
P6 a la concentración de 40 mg/ml (véase la tabla 4, ejemplo 9). En
un plano cuantitativo, la prolongación de la liberación de IFN por
las formulaciones, según la invención, se estima mediante la
medición:
- (a)
- del tiempo Tmax, mediana del tiempo para el cual la concentración plasmática es máxima,
- (b)
- del tiempo T50, media del tiempo al final del cual el área debajo de la curva de concentración plasmática alcanza 50% de su valor máximo de medida.
\vskip1.000000\baselineskip
En el caso de esta formulación, los tiempos Tmax
y T50 toman los valores:
- Tmax = 28 horas
- T50 = 54,2 horas
\vskip1.000000\baselineskip
Las siguientes formulaciones se preparan según
el modo de realización descrito en el ejemplo 4.
\vskip1.000000\baselineskip
La formulación A tiene una concentración en
polímero superior a la concentración de gelificación C1 medida en
el ejemplo 7. En otras palabras, el tiempo de relajación, medido en
el ensayo GI, es superior a 1 segundo. Esta formulación A
pertenece, por lo tanto, a la selección según la invención. En
cambio, las formulaciones B, C y D tienen unas concentraciones
inferiores a sus concentraciones de gelificación y no pertenecen a
la selección según la invención.
Estas formulaciones se inyectan a una dosis de
60 \mug/kg en perros Beagles. Se efectúan extracciones de plasma
en los tiempos 1, 5, 11, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168 y 240
horas.
\newpage
La concentración plasmática en IFN se mide como
en el ejemplo anterior. Los tiempos Tmax y T50 para las
formulaciones A, B, C y D se trasladan a la tabla 5 siguiente.
De esta manera, la formulación A, que pertenece
a la selección según la invención, presenta una duración de
liberación considerablemente aumentada con respecto a las
formulaciones B, C y D que no pertenecen a la selección según la
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
El comportamiento subcutáneo de las
formulaciones, según la invención, se ha estudiado en el cerdo
doméstico. Se ha procedido a inyectar debajo de la piel de la
barriga, a 4 mm de profundidad, seis cerdos domésticos, con 0,3 ml
de las siguientes formulaciones:
- Formulación A:
- solución acuosa isotónica de pH 7,3 del polímero P6 del ejemplo 2 concentrado a 45 mg/ml.
- Formulación B:
- solución acuosa isotónica de pH 7,3 del polímero P1 del ejemplo 1 concentrado a 20 mg/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
Los sitios inyectados han sido extraídos 72
horas después de la administración. El examen histológico muestra
la presencia de un depósito gelificado de polímero para la
formulación B. Este se presenta en forma de zonas uniformemente
coloreadas. Sin embargo, este fenómeno no se observa para la
formulación A para la cual el polímero se infiltra entre las fibras
de colágeno.
Se puede subrayar que la matriz de polímero B es
perfectamente biodegradable debido a que el tejido ha vuelto
completamente a su estado normal después de 21 días.
Claims (33)
1. Formulación farmacéutica líquida para la
liberación prolongada de interferón o interferones, cuya formulación
comprende, como mínimo, un interferón, eventualmente al menos otro
principio activo (PA), preferentemente en solución acuosa, y una
suspensión coloidal, acuosa, de baja viscosidad, a base de
partículas submicrónicas de polímero (PO) biodegradable,
hidrosoluble y portador de grupos hidrófobos (GH), estando dichas
partículas asociadas de manera no covalente con dicho interferón y
eventualmente dicho otro principio activo (PA),
caracterizada porque:
- \blacklozenge
- el medio de dispersión de la suspensión está esencialmente constituido por agua,
- \blacklozenge
- su concentración en [PO] está fijada a un valor suficientemente elevado de manera que dicha formulación farmacéutica sea apta para ser inyectada por vía parenteral y para formar después in vivo un depósito gelificado, cuya formación de depósito gelificado:
- \circ
-
\vtcortauna
- \circ
-
\vtcortauna
- \blacklozenge
- es líquida en las condiciones de inyección,
- \blacklozenge
- y es asimismo líquida a la temperatura y/o a pH fisiológicos, y/o en presencia:
- *
- de electrolito fisiológico en concentración fisiológica,
- *
- y/o de al menos un tensoactivo.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Formulación farmacéutica líquida para la
liberación prolongada de interferón o interferones y eventualmente
de principio(s) activo(s) -PA-, siendo esta
formulación:
- \circ
-
\vtcortauna
- \circ
-
\vtcortauna
- *
- de electrolito fisiológico en concentración fisiológica,
- *
- y/o de al menos un tensoactivo,
- \circ
-
\vtcortauna
caracterizada porque su concentración en
[PO] está fijada a un valor suficientemente elevado para permitir
la formación de depósito gelificado in vitro, en presencia de
al menos una proteína.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque su
concentración en [PO] es tal que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
representando C1 la concentración de
"gelificación inducida" de las partículas de PO tal como
se mide en un ensayo GI.
\newpage
4. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque los
polímeros modificados hidrófobos PO se seleccionan del grupo que
comprende: poliaminoácios, polisacáridos (preferentemente en el
subgrupo que comprende pululanos y/o quitosanos y/o
mucopolisacáridos), gelatinas, o sus mezclas.
5. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque los grupos
hidrófobos (GH) se sitúan lateralmente en la cadena.
6. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el polímero
PO es un poliaminoácido formado por unidades de ácido aspártico y/o
unidades de ácido glutámico, siendo al menos una parte de estas
unidades portadora de injertos que comprenden al menos un grupo
hidrófobo (GH).
7. Formulación, según la reivindicación 6,
caracterizada porque el (los) PO se define(n) mediante
la fórmula general (I) siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\newpage
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
8. Formulación, según la reivindicación 6,
caracterizada porque el (o los) PO responde(n) a una
de las fórmulas generales (II), (III) y (IV) siguientes:
en las
que:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- \bullet
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\newpage
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
9. Formulación, según la reivindicación 7 u 8,
caracterizada porque los grupos GH del PO representan cada
uno independientemente entre sí un radical monovalente de la
siguiente fórmula:
en la
que:
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
- -
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
10. Formulación, según la reivindicación 9,
caracterizada porque todo o parte de los radicales hidrófobos
R^{6} de los PO se eligen de manera independiente del grupo de
radicales que comprende:
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
- \sqbullet
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
11. Formulación, según la reivindicación 9 ó 10,
caracterizada porque el radical hidrófobo R^{6} del injerto
del PO procede de un precursor alcohólico elegido del grupo que
comprende: el octanol, el dodecanol, el tetradecanol, el
hexadecanol, el octadecanol, el oleilalcohol, el tocoferol o el
colesterol.
12. Formulación, según la reivindicación 6,
caracterizada porque el PO está constituido por un
homopolímero de alfa-L-glutamato o
de ácido alfa-L-glutámico.
13. Formulación, según la reivindicación 6,
caracterizada porque el PO está constituido por un
homopolímero de alfa-L-aspartato o
de ácido alfa-L-aspártico.
14. Formulación, según la reivindicación 6,
caracterizada porque el PO está constituido por un copolímero
de
alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato
o de ácido
alfa-L-aspártico/alfa-L-glutámico.
15. Formulación, según la reivindicación 14,
caracterizada porque en el PO la distribución de las unidades
de ácido aspártico y/o de ácido glutámico portadoras de injertos
que comprenden al menos un motivo GH es tal que el polímero así
constituido es aleatorio, o bien de tipo bloque o bien de tipo
multibloque.
16. Formulación, según la reivindicación 1,
caracterizada porque la masa molar del PO se sitúa entre 2000
y 100.000 g/mol, y preferentemente entre 5000 y 40.000 g/mol.
17. Formulación, según las reivindicaciones 7 y
9, caracterizada porque el radical hidrófobo R^{6} del
injerto del PO procede de un precursor alcohólico formado por el
tocoferol y porque:
- \blacklozenge
- 1% \leq [n/(n+m)]x 100 \leq 10%
- \blacklozenge
- preferentemente 3,5% \leq [n/(n+m)]x 100 \leq 7,5%
- \blacklozenge
- n + m varía de 100 a 400, preferentemente entre 120 y 300.
\vskip1.000000\baselineskip
18. Formulación, según las reivindicaciones 7 y
9, caracterizada porque el radical hidrófobo R^{6} del
injerto del PO procede de un precursor alcohólico formado por el
colesterol:
- \blacklozenge
- 1% \leq [n/(n+m)]x 100 \leq 10%
- \blacklozenge
- preferentemente 3,5% \leq [n/(n+m)]x 100 \leq 6,5%
- \blacklozenge
- n + m varía de 100 a 400, preferentemente entre 120 y 300.
\vskip1.000000\baselineskip
19. Formulación, según la reivindicación 17 ó
18, caracterizada porque la concentración en polímero [PO]
está comprendida entre 15 y 50 mg/ml.
20. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 19, caracterizada porque su viscosidad a
20ºC es inferior o igual a 5 Pa.s.
21. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 20, caracterizada porque su fracción
másica en interferón o interferones no asociado(s) a las
partículas submicrónicas [interferón o interferones no
asociado(s)] en % en peso es tal que:
- \circ
-
\vtcortauna
- \circ
-
\vtcortauna
\vskip1.000000\baselineskip
22. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 21, caracterizada porque el interferón
es el interferón alfa.
23. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 22, caracterizada porque el principio o
principios activos suplementarios diferentes del interferón son una
proteína, una glicoproteína, una proteína enlazada a una o más
cadenas polialquilenglicol [preferentemente polietilenglicol (PEG):
"proteína-PEGilada"], un polisacárido, un
liposacárido, un oligonucleótido, un polinucleótido o un péptido,
siendo este principio o principios activos suplementarios
preferentemente seleccionados entre las hemoglobinas, los
citocromos, las albúminas, los interferones, las citocinas, los
antígenos, los anticuerpos, la eritropoietina, la insulina, las
hormonas de crecimiento, los factores VIII y IX, los factores
estimulantes de la hematopoyesis o sus mezclas.
24. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 23, caracterizada porque es inyectable
por vía parenteral, subcutánea, intramuscular, intradérmica,
intraperitoneal, intracerebral o en un tumor.
25. Formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 24, caracterizada porque se destina a la
preparación de medicamentos, en particular para la administración
parenteral, subcutánea, intramuscular, intradérmica,
intraperitoneal, intracerebral o en un tumor, incluso por vía oral,
nasal, vaginal u ocular.
26. Procedimiento de preparación de
medicamentos, en particular para la administración parenteral,
subcutánea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal,
intracerebral o en un tumor, incluso por vía oral, nasal, vaginal u
ocular, caracterizado porque consiste esencialmente en
realizar al menos una formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 25.
27. Producto derivado, caracterizado
porque comprende unas partículas submicrónicas, formadas por
asociaciones no covalentes PO/PA tales como se definen en la
reivindicación 1, y porque se obtiene a partir de la formulación
según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25.
28. Producto derivado, según la reivindicación
27, caracterizado porque está constituido por un material en
polvo o por un gel.
\newpage
29. Procedimiento de preparación de la
formulación, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25,
caracterizado porque consiste esencialmente:
- \blacklozenge
- en realizar una suspensión coloidal de nanopartículas de al menos un PO,
- \blacklozenge
- en mezclar esta suspensión coloidal de nanopartículas de PO con al menos un interferón y uno u otros varios principios activos eventuales, preferentemente en solución acuosa,
- \blacklozenge
- en añadir eventualmente al menos un excipiente,
- \blacklozenge
- si es necesario, en ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente, en filtrar la suspensión así obtenida.
\vskip1.000000\baselineskip
30. Procedimiento, según la reivindicación 29,
caracterizado porque el (o los) PA está(n) en forma de
suspensión o de solución acuosa para la mezcla con la suspensión
coloidal de nanopartículas de PO.
31. Procedimiento de preparación de la
formulación, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25,
caracterizado porque consiste esencialmente:
- \blacklozenge
- en realizar un material en polvo de nanopartículas de al menos un polímero PO,
- \blacklozenge
- en mezclar este polvo con una suspensión o solución acuosa de al menos un interferón (y eventualmente otro o más principio(s) activo(s)), preferentemente en solución acuosa,
- \blacklozenge
- en añadir eventualmente al menos un excipiente,
- \blacklozenge
- si es necesario, en ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente, en filtrar la suspensión así obtenida.
\vskip1.000000\baselineskip
32. Procedimiento de preparación de la
formulación, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25,
caracterizado porque consiste esencialmente:
- \blacklozenge
- en realizar un material en polvo procedente del secado de la formulación líquida, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25,
- \blacklozenge
- en mezclar este polvo con un medio líquido acuoso, preferentemente bajo agitación,
- \blacklozenge
- en añadir eventualmente al menos un excipiente,
- \blacklozenge
- si es necesario, en ajustar el pH y/o la osmolaridad, y
- \blacklozenge
- eventualmente, en filtrar la suspensión así obtenida.
\vskip1.000000\baselineskip
33. Procedimiento de preparación de un material
en polvo derivado de la formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 25, caracterizado porque dicho polvo se
obtiene mediante secado de la formulación, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 25.
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