ES2336573T3

ES2336573T3 - Espinosinas para la cicatrizacion de heridas.

Info

Publication number: ES2336573T3
Application number: ES04822004T
Authority: ES
Inventors: Kristina Clare Hacket; Lionel Barry Lowe
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2004-04-29
Filing date: 2004-04-29
Publication date: 2010-04-14
Anticipated expiration: 2024-04-29
Also published as: BRPI0418764A; CA2563800A1; AU2004319804B2; US20070167379A1; EA010975B1; CN1942194A; US7709447B2; EA200602002A1; CA2563800C; EP1744763B1; DE602004025050D1; NO337210B1; BRPI0418764B8; PL1744763T3; BRPI0418764B1; AU2004319804A1; HRP20100137T1; IL178399A; JP2007534750A; JP4880589B2

Abstract

Una espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso en promover o acelerar la cicatrización de heridas en un mamífero.

Description

Espinosinas para la cicatrización de heridas.

La presente invención se dirige hacia el uso terapéutico de espinosinas en la fabricación de un medicamento para seres humanos para promover o acelerar la cicatrización de heridas en seres humanos sanos y afectados por problemas de cicatrización. Se pueden emplear espinosinas, o un derivado de N-demetilo o una sal fisiológicamente aceptable para las indicaciones terapéuticas en seres humanos que requieren el crecimiento y la regeneración de tejido blando. La cicatrización deficiente de heridas es una fuente significativa de morbilidad en seres humanos y puede dar como resultado complicaciones tales como heridas sin cicatrizar. En el individuo normal, se consigue la cicatrización de heridas a través de un proceso endógeno no complicado. En contraste, la cicatrización deficiente de heridas está asociada con diversas afecciones tales como diabetes, infección, inmunosupresión, obesidad y desnutrición.

Antecedentes de la invención

La cicatrización de heridas es un proceso biológico complejo que implica la matriz extracelular, las células de la sangre, las células parenquimales, y mediadores tales como las citoquinas. Después que la herida alcanza la hemostasis, el punto en el que se detiene la hemorragia, comienza el proceso de cicatrización. Este se produce en tres etapas: inflamación, formación del tejido (proliferación), y regeneración del tejido (remodelación). La cicatrización comienza muy rápidamente después de producida la herida; por ejemplo, la reepitelización de las heridas cutáneas comienza en horas (Singer y Clark, New Eng. J. Med. 341(10): 738-746 (1999)). El proceso de cicatrización de la herida se inicia por los nervios sensores aferentes mielinizados que a la vez median en la inflamación neurogénica, las respuestas inmunológicas (Eglezos y col., Adv. Exp. Biol. Med. 273: 499-503 (1989); Immunol. Cell Biol. 69: 285-294 (1991)) y el tono vascular (Khalil & Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989); Brain Res. 527: 292-298 (1990)), todos ellos componentes esenciales de la cicatrización. Tras el inicio de la cicatrización por los nervios sensores, el proceso de cicatrización está regulado por los factores de crecimiento y las citoquinas que afectan la migración celular, la proliferación, y la producción de proteínas. En hemostasis, proteínas tales como la fibrina y la fibronectina interactúan para coagular la sangre, y las citoquinas y los factores de crecimiento están sobrerregulados. Tras la herida, comienza la inflamación.

Las respuestas inflamatorias se producen en tres fases distintas, cada una mediada evidentemente por mecanismos diferentes: (1) una fase transitoria aguda, caracterizada por vasodilatación local y aumento de la permeabilidad capilar, (2) una fase subaguda retrasada, más principalmente caracterizada por infiltración de células tipo leucocitos y fagocitos; y (3) una fase proliferativa crónica, en la que se produce la degeneración del tejido y la fibrosis. Están implicados muchos mecanismos diferentes en los procesos inflamatorios. La capacidad de producir una respuesta inflamatoria es esencial para la supervivencia frente a los patógenos ambientales y heridas, aunque en algunas situaciones y enfermedades la respuesta inflamatoria puede ser exagerada y mantenida sin razón beneficiosa evidente. Durante la inflamación, los neutrófilos (leucocitos polimorfonucleares, PMN), monocitos y macrófagos, se infiltran en la herida. Estas células fagocíticas liberan factores de crecimiento en la fase proliferativa, mediadores enzimáticos (proteasas) que degradan las proteínas, bacterias fagocitósicas, células muertas y moribundas, desbridando de esta manera la herida.

En la siguiente fase, comienza la proliferación. Se deposita colágeno, formando tejido cicatrizado. Los fibroblastos producen proteoglicanos, que se unen a las fibras de colágeno. Con el tiempo, el colágeno se degrada mediante las proteasas y se remodela a una estructura cicatrizada más fuerte.

Las espinosinas (conocidas también como factores A83453) son pesticidas usados en agricultura, ganadería y animales de compañía que muestran actividad contra 1) insectos del orden Lepidoptera, 2) miembros del orden Homoptera, 3) miembros del orden de insectos Diptera, 4) miembros del orden Coleoptera, y 5) miembros del orden Anoplura. Las formulaciones adecuadas para la administración agrícola, al ganado y a los animales de compañía incluyen diversas suspensiones, soluciones, comprimidos, cápsulas, líquidos y tratamientos.

Spinosad (un producto comprendido principalmente por espinosina A, 85%, y espinosina D, 15%) está aprobado actualmente en Australia y Nueva Zelanda para el tratamiento de piojos en ovejas y el tratamiento y la prevención de la picadura de la moscarda azul en ovejas. En Brasil, spinosad está aprobado para el tratamiento y control tópico de algunas garrapatas, moscas y piojos y como antiséptico y repelente cicatrizante para el tratamiento de la miasis de la mosca bovina y heridas en la piel de ganado, ovejas, cabras, caballos, cerdos, pájaros y perros.

Las espinosinas son conocidas por ser útiles para controlar las infestaciones de piojos en un ser humano, documentos U.S. 6.063.771 y EP 1 252 820. Se describen también en dichas patentes las formulaciones adecuadas para el uso pediculicida en seres humanos.

A pesar de que se sabe de la actividad ectoparasiticida de las espinosinas y las autorizadas comercialmente, se ha descubierto ahora que la espinosina o un derivado de N-demetilo o una sal fisiológicamente aceptable tienen actividad cicatrizadora de heridas independientemente de una formulación que contenga un agente antiséptico/desinfectante.

Breve resumen de la invención

La presente invención se refiere a espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso en el tratamiento de heridas en seres humanos para promover o acelerar la cicatrización de la herida incluyendo mala cicatrización o heridas crónicas, enfermedades de la piel y enfermedades alérgicas, particularmente aquellas enfermedades asociadas con la piel, y dolencias o síntomas relacionadas con la anterior. Preferiblemente, la espinosina o derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal son spinosad o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal.

Descripción detallada de la invención

Esta invención proporciona una espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso en la promoción o aceleración de la cicatrización de heridas en un mamífero. Se da a conocer también el uso de una espinosina, o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal, o una formulación que contiene tanto una espinosina como un derivado de N-demetilo o su sal, para la fabricación de un medicamento para promover o acelerar la cicatrización de heridas en un ser humano.

Las espinosinas son productos de fermentación naturalmente derivados. Son macrólidos producidos mediante cultivo de Saccharopolyspora spinosa. La fermentación produce diversos factores, que incluyen espinosina A y espinosina D (denominados también A8354A y A8354D). La espinosina A y la espinosina D son las dos espinosinas más activas como insecticidas. Está disponible comercialmente de Dow AgroSciences un producto agrícola con el nombre spinosad comprendido principalmente por dos espinosinas (aproximadamente 85 de A y 15% de D). Está comercialmente disponible de la Eli Lilly Company un producto para ectoparásitos que comprende spinosad. El nombre "spinosad" proviene de una contracción de las espinosinas "A" y "D".

Cada espinosina tiene un anillo macrocíclico de 12 miembros que es parte de un sistema de anillo tetracíclico al cual se unen dos azúcares diferentes, el aminoazúcar forosamina y el azúcar neutro 2N,3N,4N-tri-O-metilramnosa. Esta estructura única separa las espinosinas de otros compuestos macrocíclicos.

Espinosina A (A83543A) fue la primera espinosina aislada e identificada a partir del caldo de fermentación de Saccharapolyspora spinosa. El examen posterior del caldo de fermentación desveló que la cepa parental de S. spinosa produjo numerosas espinosinas que se han marcado de A a J (A83543A a J). Comparadas con la espinosina A, las espinosinas B-J se caracterizan por diferencias en los modelos de sustitución en el grupo amino de la forosamina, en emplazamientos seleccionados del sistema de anillo tetracíclico y en la 2N,3N,4N-tri-O-metilramnosa. Las cepas de S. spinosa actualmente en uso producen una mezcla de espinosinas de las cuales los componentes principales son espinosina A (\sim85%) y espinosina D (\sim15%). Se han identificado espinosinas adicionales, con letras asignadas desde K a W procedentes de cepas mutantes de S. spinosa.

El término "espinosinas o un derivado o su sal fisiológicamente aceptable" tal como se usa en el presente documento se refiere a un factor de espinosina individual (A, B, C, D, E, F, G, H, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, V, W o Y), y un derivado de N-demetilo de un factor de espinosina individual, una combinación del mismo o una sal fisiológicamente aceptable. Por conveniencia, el término "espinosina" se usará también en el presente documento para significar una espinosina individual, o un derivado o su sal fisiológicamente aceptable, o una combinación del mismo. Spinosad, o un derivado o su sal fisiológicamente aceptable es el más preferido para la cicatrización de heridas en seres humanos.

El documento EP 375 316 describe las espinosinas A-H y J (que denominan factores A83543 A, B, C, D, E, F, G, H y J), y sus sales. Mynderse, y col, describen las espinosinas L-N (que denominan factores A83543 L, M y N), sus derivados de N-demetilo, y sus sales, en la Patente de los Estados Unidos Nº 5.202.242, y Turner, y col, describen las espinosinas Q-T) (que denominan factores A83543 Q, R, S y T), sus derivados de N-demetilo, y sus sales, en la Patente de los Estados Unidos Nº 5.591.606; y la Patente de los Estados Unidos Nº 5.631.155. Las espinosinas K, O, P, U, V, W e Y se describen, por ejemplo por Carl V. DeAmicis, James E. Dripps, Chris J. Hatton y Laura I. Kart en American Chemical Society's Symposium Series: Phytochemicals for Pest Control, Capítulo 11, "Physical and Biological Properties of Spinosyns: Novel Macrolide Pest-Control Agents from Fermentation," páginas 146-154 (1997). En la Patente de los Estados Unidos Nº 6.001.981 se describen diversos derivados sintéticos de espinosinas, y el documento U.S. 6.455.504, en el que se describen diversos análogos de espinosina. Se proporcionan en estas referencias los detalles con respecto a la fermentación y el aislamiento.

Cada una de las Patentes de los Estados Unidos y de las solicitudes de patente EP describe diversos tipos de formulación, la actividad parasiticida y las opciones de administración en animales y agrícolas para las espinosinas y los derivados o sus sales fisiológicamente aceptables.

En las Patentes de los Estados Unidos N^{os} 6.063.771 y 6.342.482, y en el documento EP 1 252 820, se describen las formulaciones y el uso de espinosinas o un derivado o su sal fisiológicamente aceptable para controlar los piojos en seres humanos y los procedimientos para preparar estas formulaciones.

Tal como se ha establecido anteriormente, están comercialmente disponibles formulaciones de spinosad de Dow AgroSciences, 9330 Zionsville Road, Indianapolis, Indiana, 46268-1054, EE.UU., y Elanco Animal Health, una División de Eli Lilly and Company, P.O. Box 708, 2001 W. Main Street, Greenfield, Indiana, 46140, EE.UU. Además, se han depositado S. spinosa y las cepas mutantes en la Agricultural Research Service Patent Culture Collection (NRRL) National Center for Agricultural Utilization Research, ARS, USDA, 1815 North University Street, Peoria, Illinois, 61604, EE.UU. (NRRL 18395,18537, 18538, 18539, 18719, 18720, 18743, 18823 y 30141 (patente de los Estados Unidos 6.455.504).

Las espinosinas pueden reaccionar para formar sales. Las sales que son fisiológicamente aceptables son también útiles en esta invención. Las sales se preparan usando procedimientos normalizados para la preparación de sales. Por ejemplo, se puede neutralizar la espinosina A con un ácido apropiado para formar una sal adicional de ácido. Las sales de adición de ácido de las espinosinas son particularmente útiles. Las sales de adición de ácido adecuadas representativas incluyen las sales formadas por reacción tanto con un ácido orgánico como inorgánico tales como, por ejemplo, sulfúrico, clorhídrico, fosfórico, acético, succínico, cítrico, láctico, maleico, fumárico, cólico, pamoico, músico, glutámico, alcanfórico, glutámico, glicólico, ftálico, fórmico, láurico, esteárico, salicílico, metanosulfónico, bencenosulfónico, sórbico, pícrico, benzoico, cinnámico y ácidos similares.

Todas las relaciones, porcentajes, y partes descritas en el presente documento son "en peso" a no ser que se especifique otra cosa.

Por "herida" se entiende una herida en un ser humano en la que el tejido está cortado, desgarrado, roto, quemado, o traumatizado de otra manera, o es el resultado de un trastorno o enfermedad que da como resultado dicha herida.

La "cicatrización" que se da como resultado por la presente invención es una promoción o aceleración del tiempo desde el cual se produce la herida (se administra una espinosina) hasta que se cierra la herida (contracción completa de la herida).

El término "tejido" se refiere a una masa de células en el cuerpo humano que se agrupa conjuntamente para formar una función específica. El tejido incluye, pero no se limita a, hueso, piel, conectivo, y nervioso tal como la médula espinal.

Los término "tratar", "tratamiento" y "terapia", tal como se usan en el presente documento se refieren a terapia curativa. Aquellos en necesidad de tratamiento incluyen los seres humanos que tienen la herida, trastorno o enfermedad.

La administración "en combinación con" uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden a seres humanos.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" es la cantidad mínima de agente activo (por ejemplo, una espinosina y más preferiblemente spinosad) que es necesaria para impartir beneficio terapéutico a un ser humano. Por ejemplo, una "cantidad terapéuticamente eficaz" a un ser humano que padece de una herida es tal que una cantidad que induce, promueve, acelera o produce de otra manera una mejora en los síntomas patológicos, progresión de la cicatrización, dolencias fisiológicas con o mejora la resistencia a la cicatrización.

"Vehículos" tal como se usa en el presente documento incluye vehículos, excipientes, o estabilizantes farmacéuticamente aceptables que son no tóxicos para el ser humano que se está exponiendo a los mismos a las dosificaciones y concentraciones empleadas. A menudo, el vehículo fisiológicamente aceptable es una solución acuosa de pH tamponado. Los ejemplos de vehículos fisiológicamente aceptables incluyen tampones tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa, o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; alcoholes azucarados tales como manitol o sorbitol; contraiones que forman sales tales como sodio; y/o tensioactivos no iónicos tales como ésteres de ácido graso de polioxietilensorbitán (TWEEN®), polietilenglicol (PEG), y copolímeros en bloque de polioxietileno/polioxipropileno (PLURONIC®).

Las espinosinas de la presente invención y más particularmente spinosad estimulan la actividad de cicatrización, y la actividad inflamatoria posterior implicada en el crecimiento y la proliferación celular. De acuerdo con esto, se pueden emplear las composiciones de la presente invención para estimular la proliferación epitelial celular y los queratinocitos basales a objeto de cicatrizar la herida, particularmente las heridas dérmicas. Estas heridas pueden ser de naturaleza superficial o pueden ser profundas e implicar daño en la dermis y la epidermis de la piel.

Las espinosinas son útiles para tratar numerosas heridas y dolencias. Por ejemplo, las espinosinas son activas in vivo en diversos modelos de cicatrización de heridas.

El ser humano al cual se administran espinosinas puede cicatrizar las heridas a una velocidad normal o puede tener problemas de cicatrización. Cuando se administran a un individuo que no tiene problemas de cicatrización, las espinosinas se administran para acelerar el proceso de cicatrización normal. Cuando se administran a un individuo que tiene problemas de cicatrización, las espinosinas se administran para facilitar la cicatrización de las heridas que de otra manera podrían cicatrizar lentamente o no del todo. Numerosas afecciones y dolencias pueden dar como resultado la alteración de la cicatrización. Estas afecciones y dolencias incluyen diabetes (por ejemplo, diabetes mellitus Tipo II), tratamiento con agentes farmacológicos esteroideos y no esteroideos, y bloqueo o herida isquémica.

Un número de factores de crecimiento han demostrado promover la cicatrización de las heridas en individuos con problemas de cicatrización. Estos factores de crecimiento incluyen factor de liberación de la hormona del crecimiento, factor de crecimiento derivado de plaquetas, y factor básico de crecimiento de los fibroblastos. De esta manera, la presente invención abarca también la administración de al menos una espinosina en conjunción con uno o más factores de crecimiento u otro agente que promueva la cicatrización de heridas.

Las espinosinas de la presente invención promueven la cicatrización de heridas anastomóticas y otras producidas por procedimientos quirúrgicos en seres humanos que cicatrizan las heridas a una velocidad normal o que tienen una cicatrización deficiente.

Las espinosinas de la presente invención y particularmente spinosad son clínicamente útiles en la estimulación de la cicatrización de heridas de heridas que incluyen heridas quirúrgicas, heridas por excisión, heridas profundas que implican daño de la dermis y epidermis, heridas del tejido blando tales como desgarros musculares, heridas del tejido de los ojos, heridas del tejido dental, heridas de la cavidad oral, heridas y úlceras de la mucosa gastrointestinal, úlceras diabéticas, úlceras dérmicas, úlceras de decúbito, úlceras arteriales, úlceras de estasis venosa, y quemaduras resultantes de calor, exposición a temperaturas extremas de calor o frío, o exposición a productos químicos, en individuos normales y aquellos sujetos a dolencias que inducen cicatrización anormal de la herida tales como uremia, malnutrición, deficiencias de vitaminas, obesidad, infección, inmunosupresión y complicaciones asociadas con tratamiento sistémico con esteroides, terapia de radiación, y fármacos y antimetabolitos antineoplásicos. Las composiciones son también útiles para promover la cicatrización de las heridas asociadas con isquemia y herida isquémica, por ejemplo, úlceras venosas en las piernas crónicas producidas por un problema de retorno y/o insuficiencia del sistema circulatorio venoso; para promover el restablecimiento dérmico posterior a la pérdida dérmica; aumento de la resistencia a la tracción de la epidermis y el espesor epidérmico, y aumento de la adherencia de los injertos de piel a un lecho de la herida y para estimular la reepitelización a partir del lecho de la herida.

Tal como se usa en el presente documento, por "individuo" se pretende un ser humano.

Las formulaciones de espinosina pueden emplear diluyentes farmacéuticos adecuados que se sabe que son útiles en las composiciones farmacéuticas. Dichos diluyentes incluyen, pero no se limitan a, solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol, y sus combinaciones. La formulación debería ser idónea al modo de administración. Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas se formularán para la administración.

Se puede administrar la espinosina en composiciones farmacéuticas en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Debe entenderse que, cuando se administran a un ser humano, el uso diario total de las composiciones farmacéuticas de la presente invención se decidirá por el médico a cargo del paciente dentro del alcance del juicio médico establecido. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo para cualquier paciente concreto dependerá de una variedad de factores que incluyen el tipo y el grado de la respuesta que se va a conseguir; la composición específica, incluyendo si se emplea, si acaso, otro agente; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el momento de la administración, la ruta de administración, y la velocidad de excreción de la composición; la duración del tratamiento; los fármacos (tales como un agente quimioterapéutico) usados en combinación o junto con la composición específica; y factores similares bien conocidos en la técnica médica. Se pueden encontrar las formulaciones adecuadas, conocidas en la técnica, en Remington's Pharmaceutical Sciences (la última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA. La "cantidad eficaz" de espinosinas a objeto en el presente documento (incluyendo una cantidad eficaz de espinosina) se determina de esta manera mediante dichas consideraciones.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar de una manera conveniente tal como mediante rutas oral, rectal, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarticular, subcutánea, intranasal, mediante inhalación, intraocular o intradérmica. La liberación parenteral y tópica son las rutas preferidas de administración.

El término "parenteral" tal como se usa en el presente documento se refiere a los modos de administración que incluyen inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intraesternal, subcutánea e intraarticular.

Las composiciones farmacéuticas se administran en una cantidad que es eficaz para tratar la indicación específica. En la mayor parte de los casos, la dosificación de espinosina está entre aproximadamente 0,5 \mug/kg a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal diario, teniendo en cuenta las rutas de administración, síntomas, etc. Sin embargo, la dosificación puede ser tan baja como 0,05 \mug/kg de peso corporal. Por ejemplo, en el caso específico de administración tópica, las dosificaciones se administran preferiblemente entre aproximadamente 0,2 \mug a 2 \mug por cm^{2}. En el caso de administración intranasal e intraocular, las dosificaciones se administran preferiblemente entre aproximadamente 0,05 \mug y aproximadamente 50 \mug/kg de peso corporal, y más preferiblemente entre aproximadamente 0,5 \mug/kg y aproximadamente 5 \mug/kg de peso corporal.

Como propuesta general, la cantidad total farmacéuticamente eficaz de la espinosina administrada parenteralmente estará en el intervalo de aproximadamente 0,5 \mug/kg/día a 5 mg/kg/día de peso corporal del paciente, aunque, tal como se ha señalado anteriormente, esto estará sujeto a discreción terapéutica. Si se proporciona continuamente, la espinosina se administra normalmente a una velocidad de la dosis de aproximadamente 10 \mug/kg/hora a aproximadamente 100 \mug/kg/hora, tanto mediante 1-4 inyecciones por día como mediante infusiones subcutánea continuas, usando, por ejemplo, una minibomba. Se pueden emplear también una solución en bolsa o una solución en botella intravenosas.

Un tratamiento en curso de espinosina parece ser óptimo si se continúa más de un cierto número mínimo de días, 1 a 5 días para los seres humanos La longitud del tratamiento necesaria para observar cambios y el intervalo que sigue al tratamiento para que se produzcan las respuestas variarán dependiendo del efecto deseado.

Para la administración parenteral, en una forma de realización, se formula la espinosina generalmente mezclando ésta en el grado de pureza deseado, en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, o emulsión), con un vehículo farmacéuticamente aceptable, es decir, uno que no sea tóxico a los receptores, a las dosificaciones y concentraciones empleadas y sea compatible con otros ingredientes de la formulación.

Generalmente, las formulaciones se preparan poniendo en contacto la espinosina de manera uniforme e íntima con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos. A continuación, si es necesario, el producto se conforma en la formulación deseada. En el caso de un vehículo parenteral, se emplea preferiblemente una solución que sea isotónica con la sangre del receptor. Los ejemplos de dichos vehículos excipientes incluyen agua, solución salina, solución de Ringer, y solución de dextrosa. Son también útiles en el presente documento los vehículos no acuosos tales como aceites y oleato de etilo fijos, así como liposomas. Se pueden encontrar formulaciones adecuadas, conocidas en la técnica en Remington's Pharmaceutical Sciences (la última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA.

Para la administración tópica, se pueden usar formulaciones tales como pomadas, cremas, y geles a las dosificaciones anteriormente descritas para las composiciones. Se pueden encontrar formulaciones adecuadas, conocidas en la técnica en Remington's Pharmaceutical Sciences (la última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA.

Se preparan generalmente las pomadas usando tanto (1) una base oleaginosa, es decir, una constituida por aceites o hidrocarburos fijos, tales como vaselina blanca o aceite mineral, como (2) una base absorbente, es decir, una constituida por alguna sustancia o sustancias anhidras que pueden absorber el agua, por ejemplo, lanolina anhidra. Por regla general, tras la formación de la base, si el ingrediente activo (espinosinas), oleaginoso o absorbente se añaden en una cantidad que da como resultado la concentración deseada.

Las cremas son emulsiones de aceite/agua. Están constituidas por una fase oleosa (fase interna), que comprende aceites, hidrocarburos, y similares normalmente fijos, tales como ceras, vaselina, aceite mineral, y similares, y una fase acuosa (fase continua), que comprende agua y alguna sustancia soluble en agua, tal como sales añadidas. Las dos fases se estabilizan mediante el uso de un agente emulsificante, por ejemplo, un agente activo superficial, tal como lauril sulfato de sodio; coloides hidrofílicos, tal como arcillas coloidales de acacia, veegum, y similares. Tras la formación de la emulsión, el ingrediente activo (espinosinas) se añade por regla general en una cantidad para conseguir la concentración deseada.

Los geles comprenden una base seleccionada a partir de una base oleaginosa, agua, o una base en emulsión-suspensión, tal como las anteriormente descritas. Se añade a la base un agente gelificante que forma una matriz en la base, aumentando su viscosidad. Los ejemplos de agentes gelificantes son hidroxipropilcelulosa, polímeros de ácido acrílico, y similares. Por regla general, los ingredientes activos (espinosinas) se añaden a la formulación a la concentración deseada en el momento anterior a la adición del agente gelificante.

Las formulaciones farmacéuticas orales se preparan mediante procedimientos conocidos usando ingredientes bien conocidos e ingredientes fácilmente disponibles. En la preparación de las composiciones, el ingrediente activo se premezclará normalmente con un vehículo, o se diluirá con un vehículo, o se encerrará en el interior de un vehículo farmacéuticamente aceptable que puede estar en forma de una cápsula, bolsita, papel, u otros contenedor. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como un vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. De esta manera, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, pastillas, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, cápsulas de gelatina blanda y dura, y similares.

Además del ingrediente activo o terapéutico, en las dosificaciones descritas anteriormente para las composiciones, los comprimidos contienen numerosos materiales inertes conocidos como aditivos o excipientes. Estos materiales ayudan a impartir características de procesamiento y compresión satisfactorias a la formulación incluyendo diluyentes, ligantes, agentes de deslizamiento y lubricantes. Un grupo adicional de sustancias añadidas ayuda a proporcionar características físicas deseables al comprimido acabado. Incluidos en este grupo están los desintegrantes, los colores, y en el caso de los comprimidos masticables, los aromas y los agentes endulzantes, y en el caso de los comprimidos de liberación controlada, polímeros o ceras u otros materiales que retardan la solubilidad.

Por "farmacéuticamente aceptable" se quiere significar que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los diferentes ingredientes de la formulación y no perjudicial para el receptor de la misma.

Se pueden encontrar detalles adicionales, que incluyen las formulaciones representativas en Remington's Pharmaceutical Sciences (última edición) Mach Publishing Company, Easton, PA.

Las presentes composiciones para uso en la promoción o la aceleración de la cicatrización de heridas en un mamífero, contemplan también los apósitos o vendajes para el cuidado de la herida que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sals. El apósito o el vendaje para el cuidado de la herida comprende un soporte externo de tejido, preferiblemente un soporte de tejido elastomérico, y una almohadilla interna, en el que la almohadilla interna incluye una membrana externa superficial, fabricada preferiblemente de un material formador de película, y que incorpora una cantidad terapéuticamente eficaz de una espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sals, preferiblemente spinosad o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sals, en las dosificaciones anteriormente descritas para las composiciones en la matriz. La almohadilla puede ser íntegra con o separada del soporte externo de tejido.

La espinosina se incorpora idealmente en la matriz de la membrana, pero se puede incorporar también en el material de la almohadilla interna contenido por la membrana.

El agente terapéuticamente activo se mantiene en la matriz polimérica de tal manera que se inhibe la migración, y permite la liberación gradual de la espinosina en el tiempo.

En otro aspecto, el apósito para heridas comprende una almohadilla absorbente que tiene un revestimiento lateral del cuerpo permeable a líquidos, una lámina cubierta externa diferenciada, opcionalmente impermeable a líquidos, y un cuerpo absorbente dispuesto entre las anteriores. El cuerpo interno y/o el absorbente se fabrican de materiales que incorporan una cantidad terapéuticamente eficaz de una espinosina en la matriz o los espacios intersticiales para asegurar que la espinosina está en proximidad estrecha constante a la herida.

La superficie o almohadilla interna de la venda se fabrica preferiblemente de un material de membrana o formador de película natural o sintético tanto orgánico como inorgánico, de origen animal o vegetal, o de materiales plásticos. Por ejemplo, de gelatinas o de gomas vegetales que se moldean o recubren como una película o membrana de manera usual.

Los materiales poliméricos adecuados incluyen, pero no se limitan a silastic u otro material basado en silicona, polietilentereftalato (PET), Dacron, Dacron tejido, fieltro de Dacron, poliglacina, nylon, seda, polietileno (PE), poliuretano, elastómero silástico de cloruros de polivinilo, silicona, caucho, PMMA (poli-(metilmetacrilato)), látex, polipropileno (PP), poliolefina, celulosa, alcohol polivinílico (PVA), poli(hidroximetilmetacrilato) (PHEMA), ácido poli(glicólico), poli(acrilonitrilo) (PAN) fluoroetileno-cohexa-fluoropropileno (FEP), Teflón (PTFE), sus copolímeros y sus mezclas.

El procedimiento más sencillo para incorporar los compuestos terapéuticamente activos en el material polimérico es mediante composición directa de la sustancia terapéuticamente activa en la resina plástica antes del moldeo o similar.

La película o membrana se fabrica idealmente de un polímero hidrófobo que es permeable a líquidos y gases, pero impermeable al paso de microorganismos. La hidrofobia de la película o membrana es una característica útil en la que ésta reduce la tendencia de la película o membrana de volverse a unir al emplazamiento de la herida.

La cantidad de espinosinas incorporadas en la formulación no es crítica; la concentración debería estar únicamente en un intervalo suficiente para permitir la fácil aplicación de la formulación a la zona de la herida en una cantidad en la que se administrará la cantidad deseada de espinosinas.

La cantidad normal de formulación que se va a aplicar a una herida dependerá del tamaño de la herida y de la concentración de espinosinas en la formulación. Generalmente, se aplicará la formulación a la herida en una cantidad que de cómo resultado entre aproximadamente 0,1 \mug a aproximadamente 5 \mug de espinosinas por cm^{2} de herida. Preferiblemente, la cantidad aplicada de espinosinas oscilará entre aproximadamente 0,2 \mug a aproximadamente 2 \mug/cm^{2}, y lo más preferible, entre aproximadamente 0,25 \mug a aproximadamente 0,5 \mug/cm^{2}.

Se pueden administrar también espinosinas en los ojos para tratar heridas de las glándulas lacrimales, trastornos y patologías en seres humanos como un líquido, gota, líquido espeso, un gel.

Se pueden administrar también las espinosinas por vía intranasal en la mucosa nasal para tratar trastornos, heridas y patologías de la mucosa nasal y el epitelio del seno en seres humanos como gotas líquidas o en forma de pulverización.

Las espinosinas se formulan normalmente en vehículos a una concentración de aproximadamente 0,01 \mug/ml a 50 mg/ml, preferiblemente 0,01 \mug/ml a 10 mg/ml, a un pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, preferiblemente aproximadamente 6 a aproximadamente 7, lo más preferible aproximadamente a pH 6,2. Debe entenderse que el uso de alguno de los anteriores excipientes, vehículo, o estabilizantes puede dar como resultado la formación de sales de espinosinas.

Las espinosinas se almacenarán normalmente en envases unitarios o multidosis, por ejemplo, ampollas o viales cerrados herméticamente, en forma de solución acuosa o de formulación liofilizada para la reconstitución. Como ejemplo de una formulación liofilizada, se rellenan viales de 3 ml con 1 ml de solución acuosa de espinosina al 1% (p/v) filtrada en estéril, y se liofiliza la mezcla resultante. La solución de infusión se prepara reconstituyendo la espinosina liofilizada usando Agua para inyección que puede incluir opcionalmente uno o más antioxidantes.

Se pueden disponer también las dosificaciones en un paciente de manera específica para proporcionar una concentración predeterminada de la actividad de una espinosina en sangre, tal como se determinó, por ejemplo, mediante una técnica RIA. De esta manera, se puede ajustar la dosificación del paciente para conseguir niveles regulares en curso en la sangre, tal como se midió mediante RIA, en el orden de entre 50 y 1000 ng/ml, preferiblemente 150 a 500 ng/ml.

Ejemplo 1 La aplicación tópica de spinosad mejora la cicatrización de heridas procedentes de la operación de Mules en ovejas (Estudio número T9CAL0205)

Corderos de raza Merina con la cola cortada y castrados se sometieron a la operación de Mules (la operación de Mules implica la eliminación quirúrgica de la piel que soporta la lana desde el área perineal, y cuando las heridas cicatrizan, se reduce la susceptibilidad de la oveja a la picadura de la mosca). Cincuenta ovejas se mantuvieron sin tratar y un grupo de 381 se trataron con 7,1 g de 4 mg/g de aerosol de spinosad (en referencia a la Tabla 1 para la formulación). El aerosol de spinosad se aplica tópicamente a la herida hasta que se humedece con el producto, teniendo cuidado de la parte de la lana.

TABLA 1 Formulación de aerosol de Spinosad

1

Se examinaron cuidadosamente las heridas de la operación de Mules de 18 corderos por grupo y se evaluaron para la evidencia de cicatrización de la herida a los 7 y 17 días después del tratamiento (Tabla 1). Se puntuaron la formación de cicatriz y la contracción de la herida desde 0 (cicatrización completa o normal) hasta 3 (equivalente a sin cicatrizar). Se puntuaron visualmente la hemorragia/efusión serosa y la afectación de la cicatrización desde 0 (ausencia de hemorragia/efusión y cicatrización normal) hasta 3 (hemorragia grave o afectación de la cicatrización)

TABLA 2 El efecto de la aplicación tópica de spinosad sobre la cicatrización de la herida en ovejas tras la operación de Mules

2

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En el día 7 tras la operación de Mules, las ovejas tratadas con spinosad tuvieron una mayor contracción de las heridas producidas por la operación de Mules que los controles sin tratar, tal como se determinó mediante las puntuaciones inferiores de la media para la contracción de la herida. En los 17 días tras la operación de Mules, las ovejas tratadas con spinosad tuvieron mejora en la formación de la costra, la contracción de la herida y hemorragia y efusión serosa reducidas, indicando una mejora en la cicatrización de la herida, en comparación con las ovejas control sin tratar.

La aplicación tópica de spinosad en las heridas producidas por la operación de Mules de ovejas dará como resultado una mejora en la cicatrización de la herida 17 días después del tratamiento en comparación con los animales sin tratar. Esta mejora en la cicatrización de la herida se produce en ausencia de factores de confusión tales como la picadura de la mosca azul. Sin embargo, la formulación usada en este ejemplo incluyó también un compuesto antibacteriano, clorhexidina. La capacidad de la clorhexidina para inhibir la infección bacteriana puede tener también un efecto positivo en la cicatrización de la herida en este ejemplo.

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Ejemplo 2 La aplicación tópica de spinosad mejora la cicatrización de las heridas producidas por la operación de Mules en ovejas (Estudio número T9CAL0206)

Corderos y ovejas de raza Merina con la cola cortada se sometieron a la operación de Mules desde la zona perineal. Se aplicaron aproximadamente 46 ml de Extinosad diluido (125 ppm) (en referencia a la Tabla 3 para la formulación) a las heridas producidas por la operación de Mules a 150 corderos usando un pequeño aplicador de pulverización manual de jardín presurizado (2 ó 5 l) disponible en tiendas al detalle que tenían suministros para el jardín. El contenedor o depósito tiene forma cónica y se presuriza mediante bombeo manual. La pulverización se administró desde una boquilla cónica. Se aplicaron 4 mg/g de aerosol de spinosad (en referencia a la Tabla 1 para la formulación) a la herida usando un pulverizador en aerosol hasta que la herida y la lana que la rodeaba se humedecieron con el producto. Cincuenta ovejas permanecieron sin tratar tras la operación de Mules (control).

TABLA 3 Formulación de Extinosad (25 g/l de spinosad)

3

Catorce días después del tratamiento se reunieron los corderos y se mantuvieron en corrales de animales. Se observaron los corderos durante un periodo de 15 minutos y se identificaron los que presentaban signos de picadura de mosca tales como movimientos nerviosos de la cola, mordiscos en la zona o marcas de una pata. Se seleccionaron de manera aleatoria veinticinco corderos de cada grupo y se colocaron en un carril y se evaluaron sus heridas producidas por la operación de Mules para la evidencia de picadura de la mosca y cicatrización de la herida (Tabla 4). Se puntuaron la formación de cicatrices y la contracción de la herida desde 0 (cicatrización completa o normal) hasta 3 (equivalente a sin cicatrizar). Se puntuaron visualmente la hemorragia/efusión serosa y la cicatrización deficiente desde 0 (ausencia de hemorragia/efusión y cicatrización normal) hasta 3 (hemorragia grave o cicatrización deficiente).

4

Las ovejas tratadas con spinosad, tanto con una formulación en aerosol (4 mg/l) como con un pulverizador manual (125 mg/l) muestran una mejora en la cicatrización de la herida, tal como se evidenció por una puntuación reducida para la formación de la cicatriz, contracción de la herida y la presencia de hemorragia y efusión serosa en el lugar de la herida. Además, de las 25 ovejas examinadas en cada grupo de tratamiento, ninguno de los animales tienen deteriorada la cicatrización, en comparación con los 4 animales que tienen deteriorada la cicatrización señalados en el grupo control sin tratar. Larvas de Lucilia cuprina están presentes en 4 de las 25 ovejas control sin tratar, en comparación con una oveja del grupo tratado con Extinosad, y ninguna oveja del grupo tratado con aerosol de spinosad. La infección en el lugar de la herida está presente en 6 de las 25 ovejas del grupo sin tratar, pero está ausente en los grupos tratados con spinosad.

El tratamiento tópico de las heridas producidas por la operación de Mules con spinosad dio como resultado una mejora en la cicatrización de la herida en comparación con los animales control sin tratar, tal como se observa en el Ejemplo 1 anterior. Esta mejora en la cicatrización de la herida está acompañada por índices de infección reducidos y presencia reducida de larvas de Lucilia cuprina. La mejora en la cicatrización de la herida se produce con respecto a la formulación o dosis de spinosad aplicadas a la herida en la operación de Mules. Además, spinosad, en ausencia de clorhexidina (Extinosad) es capaz de potenciar la cicatrización de la herida. Estos datos sugieren que la potenciación de la cicatrización de la herida que se observa en los Ejemplos 1 y 2 puede ser efecto del propio spinosad, más bien que de las propiedades de la clorhexidina para inhibir la infección.

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Ejemplo 3 Spinosad mejora la cicatrización de la herida en ratas usando un modelo de herida térmica a) Efecto de spinosad sobre la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas jóvenes normales

Ratas Sprague-Dawley machos exogámicas, de 3 meses de edad y aproximadamente 300 g fueron desprovistas de pelo en la región interescapular 24 horas antes de la inducción de la herida. Las ratas se anestesiaron y se indujo una quemadura térmica usando un láser de CO_{2} (cuatro periodos de estimulación consecutivos, cada uno con una energía de 25 vatios, pulsos de 0,5 segundos con el diámetro del haz puntual ajustado a 10 mm), dando como resultado un área circular de la herida de 2 cm^{2}. Se trataron grupos de 12 ratas con solución salina, ácido cítrico (5%) o spinosad (0,5% en ácido cítrico al 5%). Se administraron los tratamientos dos veces al día durante 5 días tras la inducción de la herida, mediante 2 inyecciones intradérmicas de 100 \mul en lados opuestos de la herida.

La formación de cicatrices produce una disminución transitoria en la velocidad de contracción de la herida (Snowden y col., Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 60: 73-82 (1982)). Por tanto, la cicatriz y una ligera escarificación adherente se eliminan suavemente tras la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el rastreo preciso del área de la herida.

Se midieron las heridas diariamente durante 6 días consecutivos tras la inducción de la herida, y posteriormente cada 48 h hasta que se produjo el cierre/reepitelización completa de la herida. Se rastreó el área de la quemadura (diámetro máximo de la herida) bajo un estereomicroscopio para la precisión y a continuación se midió con un planímetro digital. El criterio clínico de valoración de la cicatrización es el tiempo en el que se produjo la contracción completa de la herida (Tabla 5)

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 5 Efecto de spinosad (0,5%) sobre la velocidad de cicatrización de la herida en ratas expuestas a herida por quemadura térmica, en comparación con los controles con solución salina y ácido cítrico

5

El efecto de spinosad sobre la cicatrización de la herida es notable en el día 2 después de la inducción de la herida, por lo cual, las ratas tratadas con spinosad tuvieron heridas un 30% más pequeñas que las de los controles tratados con solución salina y ácido cítrico. Las ratas tratadas con spinosad muestran la resolución completa de la herida en el día 12, que es 4 días antes de sus partes correspondientes tratadas con solución salina o ácido cítrico.

Estos datos muestran que una solución acuosa simple de spinosad puede acelerar la cicatrización de heridas en ratas sanas jóvenes normales.

b) Efecto de spinosad sobre la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas diabéticas (cicatrización deteriorada) Inducción de diabetes usando Estreptozotocina

Se indujo la diabetes en ratas Sprague-Dawley exogámicas de 3 meses usando Estreptozotocina (STC). Se disolvió la Estreptozotocina (75 mg/kg) en tampón de citrato de sodio frío 0,1 M (pH 4) y se mantuvo en hielo para evitar la descomposición. Tras 24 horas de ayuno, se inyectaron las ratas por vía intraperitoneal con una dosis única de STZ recientemente preparada (fría) (Rakienten y col., Cancer Chemotherapy Report 29: 73-82 (1963)). Los síntomas de diabetes fueron evidentes en estas ratas en los 2-3 días y se confirmó su dolencia diabética mediante el ensayo de glucosa en orina. Se usó tratamiento de insulina para proporcionar alivio regular de la dominancia catabólica de la dolencia permitiendo a la vez hiperglicemias regulares y graves (Willars y col., J. Neurol. Sci. 91: 153-164 (1989)). Se proporcionaron una o dos inyecciones de insulina (Protophane 2IU/100 g) por vía subcutánea a las ratas recientemente diabéticas dependiendo de la gravedad de su dolencia física (por ejemplo, comer o beber poco, pérdida de peso hasta aproximadamente 115 g, inactividad extrema. Las ratas que no consiguieron mejorar o perdieron más de un 15% de su peso corporal, se sacrificaron.

Ratas diabéticas de aproximadamente 200 g a las que se había desprovisto de pelo desde la región interescapular 24 h antes de la inducción de la herida. Se anestesiaron las ratas y se indujo una quemadura térmica usando un láser de CO_{2} (cuatro periodos de estimulación consecutivos cada uno con una energía de 25 vatios, pulsos de 0,5 segundos con el diámetro puntual del haz ajustado a 10 mm), dieron como resultado un área circular de la herida de 2 cm^{2}. Se trataron grupos de 12 ratas tanto con solución salina como con spinosad (0,5% en ácido cítrico al 5%). Se administraron los tratamientos por vía tópica dos veces durante 5 días después de la inducción de la herida, haciendo gotear 100 \mul de solución directamente sobre el lugar de la herida.

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La cicatriz y una ligera escarificación adherente se eliminaron suavemente tras la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el rastreo preciso del área de la herida. Se midieron las heridas tal como se describe anteriormente (Ejemplo 3a), hasta que fue evidente el cierre de la herida (Tabla 6)

TABLA 6 Efecto de spinosad (0,5%) sobre la velocidad de cicatrización de la herida en ratas diabéticas expuestas a herida por quemadura térmica en comparación con controles con solución salina

6

Las ratas diabéticas tratadas por vía tópica con spinosad muestran mejora en la cicatrización de la herida en comparación con los controles con solución salina 3 días después de la inducción de la herida, tal como se ilustra mediante el área reducida de la herida. El tamaño de la herida continúa contrayéndose más rápidamente en las ratas tratadas con spinosad, dando como resultado la resolución de la herida en el día 13, 4 días antes de que se produzca la resolución de la herida en los controles tratados con solución salina.

c) Efecto de spinosad sobre la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas de edad avanzada (cicatrización deteriorada)

Ratas Sprague-Dawley macho exogámicas, de 24 meses de edad y de aproximadamente 600 g fueron desprovistas de pelo de la región interescapular 24 horas antes de la inducción de la herida. Se anestesiaron las ratas y se indujo una quemadura térmica usando un láser de CO2 (cuatro periodos de estimulación consecutivos cada uno con una energía de 25 vatios, pulsos de 0,5 segundos con el diámetro puntual del haz ajustado a 10 mm), dieron como resultado un área circular de la herida de 2 cm^{2}. Se trataron grupos de 12 ratas tanto con solución salina como con spinosad (0,5% en ácido cítrico al 5%). Se administraron los tratamientos por vía tópica dos veces durante 5 días después de la inducción de la herida, haciendo gotear 100 \mul de solución directamente sobre el lugar de la herida.

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La cicatriz y una ligera escarificación adherente se eliminaron suavemente tras la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el rastreo preciso del área de la herida. Se midieron las heridas tal como se describe anteriormente (Ejemplo 3a), hasta que fue evidente el cierre de la herida (Tabla 7)

TABLA 7 Efecto de spinosad (0,5%) sobre la velocidad de cicatrización de la herida en ratas de edad avanzada expuestas a herida por quemadura térmica, en comparación con controles con solución salina

7

Las ratas de edad avanzada que se trataron por vía tópica con spinosad muestran mejora en la cicatrización de la herida en comparación con los controles con solución salina 3 días después de la inducción de la herida, tal como se ilustra por el área reducida de la herida. El tamaño de la herida continúa contrayéndose en ratas tratadas con spinosad, hasta el día 6, en dicho tiempo, el tamaño de la herida aumenta en ratas tratadas con solución salina. Las ratas tratadas con spinosad continúan hasta tener un tamaño reducido de la herida en comparación con los controles con solución salina, dando como resultado la resolución de la herida en el día 15, 6 días antes de que se produzca la resolución de la herida en los controles tratados con solución salina.

Spinosad mejora la velocidad de cicatrización de la herida tanto si se aplica tópica como intradérmicamente.

Spinosad mejora la cicatrización de la herida en ratas de edad avanzada que tienen deficiencias nerviosas sensoras crónicas. Dichos datos sugieren que spinosad puede potenciar la cicatrización de la herida mediante mecanismos nerviosos sensores dependientes y nerviosos sensores independientes. Spinosad puede por tanto cicatrizar las ulceraciones crónicas asociadas con el envejecimiento.

Spinosad mejora la cicatrización de la herida en ratas con diabetes inducida, otra forma de deficiencia nerviosa sensora. Estos datos sugieren también que las propiedades de cicatrización de heridas de spinosad se pueden modular mediante rutas nerviosas sensoras dependientes e independientes. Spinosad puede por tanto cicatrizar ulceraciones crónicas y otras heridas asociadas con una mala cicatrización en diabéticos.

Spinosad mejora la cicatrización en ratas sanas jóvenes normales con los nervios sensores intactos. Dichos hallazgos sugieren que spinosad puede operar tanto a través de un mecanismo nervioso sensor independiente, como puede potenciar el funcionamiento de los nervios sensores. Spinosad puede por tanto mejorar heridas en pacientes humanos sanos, tales como las que se producen por herida o cirugía.

Los resultados del Ejemplo 3 indican que spinosad puede estimular la cicatrización de la herida mediante numerosos mecanismos, y podría ser efectivo en seres humanos que tienen deteriorada la cicatrización y normales.

Las ratas diabéticas y de edad avanzada muestran generalmente un periodo de retraso antes de cualquier respuesta significativa a la herida (Tablas 6 y 7) en comparación con las ratas sanas jóvenes (Tabla 5) Este periodo de retraso se ha atribuido a un declive general en la actividad de las neuronas sensoras aferentes de ratas diabéticas (Gibran y col., J. Surg. Res. 108: 122: 128 (2002)) y de edad avanzada (Khalil y Helme, J. Gerontol. Biol. Sci. 51 A(5): B354-B361 (1996)), evidente durante la fase inflamatoria de cicatrización de la herida. Que spinosad es capaz de generar un efecto de cicatrización de la herida en ratas diabéticas puede ser debido a la estimulación de nervios sensores aferentes locales o al uso de mecanismos independientes de activación de los nervios sensores aferentes.

El efecto de spinosad es más pronunciado en animales control con nervios sensores intactos (Tabla 5). Este efecto es particularmente obvio durante la fase inflamatoria inicial (días 2- 5), el componente inicial de la fase proliferativa (días 2-6), con efecto positivo adicional durante el componente final de la fase proliferativa (días 6-8) y la fase de remodelación (días 9-12).

Spinosad parece también tener efecto durante la fase de remodelación de la reparación de la herida, que implica la infiltración y la proliferación celular. La dermis responde a la herida durante esta fase produciendo colágeno y proteínas de matriz que da como resultado la contracción y la resolución de la herida. Spinosad puede por tanto tener un efecto sobre los mediadores que influencian la infiltración y la activación celular, tales como las citoquinas, quimioquinas y otros señaladores celulares, o puede potenciar directamente la producción de la matriz y la remodelación d la piel en el lugar de la herida.

El Ejemplo 3 muestra que spinosad mejora la cicatrización de heridas a lo largo de las 3 fases de la cicatrización. Los datos del Ejemplo 3 confirman los resultados de los Ejemplos 1 y 2, este spinosad ayuda a la cicatrización de las heridas, inducidas tanto quirúrgicamente como mediante quemadura. Spinosad potenció la cicatrización de la herida en 2 especies.

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Ejemplo 4 Investigaciones en el modo de acción de spinosad en la potenciación de la cicatrización de la herida en ratas usando un modelo de ampolla de inflamación neurogénica a) Efecto de la dosis de spinosad sobre el flujo vascular

Se evaluaron las respuestas inflamatorias neurogénicas usando un procedimiento bien establecido (Khalil y Helme, Brain Res. 527: 292-298 (1990)). Se indujo la anestesia en ratas Sprague-Dawley macho exogámicas con pentobarbitona de sodio (60 mg/kg i.p). Se mantuvo la anestesia general mediante inyecciones suplementarias de 15 mg/kg. Este procedimiento de anestesia ha mostrado no alterar las respuestas vasodilatadoras basales en la microvasculatura periférica (Khalil y Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989)). Se canuló la vena yugular izquierda con tubería de polietileno para la administración intravenosa de heparina/solución salina o fármacos. Se mantuvo la temperatura corporal a 37ºC. Al final del experimento, se sacrificaron los animales mediante sobredosis de barbitúricos.

Se indujeron las ampollas en la región media de la pata trasera en las ratas anestesiadas usando una presión de vacío de -40 kPa aplicada durante 30 minutos mediante un tapón metálico de succión calentado a 40ºC. Una vez estuvo establecida la ampolla, se retiró la epidermis (epitelio superficial) y se aseguró una cámara de plexiglás con puertos de entrada y salida sobre la base de la ampolla. Se perfundió solución de Ringer sobre la superficie de la burbuja y se mantuvo mediante una bomba peristáltica a 4 ml/h para establecer las medidas de los valores iniciales. Se vigiló el flujo relativo de sangre en el tiempo mediante un flujómetro láser Doppler mediante una sonda colocada inmediatamente antes de la base de la ampolla y se vigiló el flujo relativo de sangre (voltios) continuamente mediante un registrador gráfico.

Se diluyó spinosad en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y se perfundió sobre la base de la ampolla durante hasta 30 minutos.

TABLA 8 Efecto de diferentes concentraciones de spinosad en el flujo sanguíneo sobre la base de la ampolla, en comparación con la solución de Ringer

8

Spinosad perfundido a través de la herida de la ampolla a una concentración del 0,5% tuvo un mayor efecto sobre el flujo vascular, en términos de elevación de la respuesta y de duración de la respuesta. Una solución de spinosad al 0,05% tuvo un efecto positivo sobre el flujo sanguíneo, aunque se redujo la magnitud de la respuesta en comparación con spinosad al 0,5%. Spinosad a una concentración del 5% produjo una respuesta intermedia con un pico de duración y magnitud reducidas en comparación con la respuesta obtenida con spinosad al 0,5%. La magnitud de respuesta mantenida observada con spinosad al 0,5% es sugestiva de la interacción con las rutas nerviosas del péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP, mientras que la insensibilización observada con la mayor concentración de spinosad se asoció a menudo con las rutas mediadas por la sustancia P. estos datos muestran que spinosad tuvo un efecto positivo sobre el flujo vascular, un requisito esencial para la cicatrización de la herida. Esta acción puede ser debida a la acción directa sobre los vasos sanguíneos o mediante la liberación de péptidos tales como CGRP y la sustancia P de los nervios sensores que median a la vez una respuesta vascular.

b) Efecto de los antagonistas peptídicos de los nervios sensores y del inhibidor de la sintasa del óxido nítrico sobre la respuesta vascular de las ratas a spinosad al 0,5%

Se diluyó spinosad en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y se perfundió sobre la base de la ampolla durante hasta 30 minutos. Se perfundió una almohadilla de la pata de cada rata con spinosad al 0,5%, mientras que la otra almohadilla de la pata de cada rata se perfundió en primer lugar con un antagonista o inhibidor durante 10 minutos seguido por perfusión simultánea con spinosad al 0,5% durante 30 minutos. Se perfundió CGRP8.37 (antagonista de CGRP; Auspep, VIC, Australia) a 1 \muM, se perfundió Metil éster de N-nitro L-arginina (L-NAME, un inhibidor de la sintasa del óxido nítrico endotelial; Cayman Chemical Co., MI, EE.UU) a 100 \muM, y se perfundió spantide II (antagonista II de la sustancia P; Auspep, VIC, Australia) a 10 \muM.

TABLA 9 Efecto de los antagonistas peptídicos de los nervios sensores y del inhibidor de eNOS sobre la respuesta vascular de las ampollas en las almohadillas de las patas de ratas a la perfusión con spinosad al 0,5%, y la contribución relativa de los efectores a la actividad de spinosad

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El flujo sanguíneo en respuesta a la estimulación de spinosad disminuyó en presencia de los antagonistas peptídicos de CGRP y SP y un inhibidor de NOS (Tabla 9). Estos datos indican que el efecto de spinosad sobre el flujo sanguíneo vascular está mediado a través de las rutas de CGRP, la sustancia P y el óxido nítrico. La contribución de CGRP, la sustancia P y eNO al efecto de spinosad es del 27%, 34% y 24%, respectivamente (Tabla 9).

El perfil de la respuesta vascular en presencia de un antagonista de CGRP tuvo una magnitud de respuesta similar a lo largo de la perfusión, sugiriendo que la mediación del efecto de spinosad por CGRP es constante en el tiempo. Los perfiles de respuesta vascular en presencia del antagonista de la sustancia P (spantide) o del inhibidor de eNOS (L-NAME) muestran que la respuesta disminuye en el tiempo. Esto sugiere que la sustancia P y eNOS tienen mayor implicación en la mediación del efecto de spinosad durante las últimas etapas de la respuesta.

Estos datos muestran colectivamente que el efecto de spinosad sobre el flujo vascular esta mediado a través de los péptidos, la sustancia P y CGRP de los nervios sensores, y a través del óxido nítrico endotelial. La implicación de eNO en este proceso sugiere que spinosad puede actuar directamente sobre el endotelio de los vasos sanguíneos, así como a través de la inervación de los nervios sensores de los vasos sanguíneos en las heridas. Además, el efecto de spinosad es de larga duración y está mediado a través de diferentes efectores en diferentes etapas de la respuesta. Dichos hallazgos pueden explicar las diferencias en los perfiles de cicatrización de la herida entra las ratas tratadas con spinosad y las ratas control en el modelo de herida térmica (Ejemplo 3), particularmente en la resolución inicial de las heridas en ratas con la cicatrización deteriorada (de edad avanzada o diabéticas). La capacidad de los inhibidores y antagonistas neuropéptidos de inhibir la acción de spinosad sobre el flujo vascular sugiere que la propiedad de cicatrización inicial de la herida de spinosad está actuando a través de las rutas nerviosas sensoras, e implica una combinación de neuropéptidos. Dicha actividad potenciaría la etapa inflamatoria inicial del proceso de cicatrización de la herida que se inicia, en gran medida, por la actividad de los nervios sensores (Steinhoff y col., Arch. Dermatol. 139: 1479-1488 (2003)). De hecho, los datos del Ejemplo 3 muestran que en ratas jóvenes normales y ratas con la cicatrización deteriorada, el efecto de spinosad sobre la contracción de las heridas es pronunciado durante los primeros 5 días de la cicatrización.

c) El efecto de spinosad sobre la respuesta vascular durante las fases inicial y final de la inflamación aguda

Se diluyó spinosad (0,5%) en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y se perfundió sobre la base de la ampolla durante hasta 30 minutos. Se perfundió la ampolla en una almohadilla de la pata de cada rata inmediatamente con spinosad (fase inicial), a la vez que se perfundía la ampolla en la otra almohadilla de la pata durante 5 horas tras la inducción de la ampolla (fase final).

TABLA 10 Efecto de spinosad al 0,5% sobre la respuesta vascular de las ampollas de las almohadillas de las patas durante las fases inicial (inmediatamente después de la herida) y final (5 h después de la herida) de la inflamación aguda

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Los efectores neurogénicos están implicados predominantemente en la fase inicial de la respuesta inflamatoria, mientras que la fase final de la respuesta inflamatoria implica componentes del sistema inmune tales como neutrófilos y monocitos. Este spinosad tiene casi el mismo efecto en las fases inicial y final de la respuesta inflamatoria (Tabla 10) lo que sugiere que spinosad no solo actúa sobre los mediadores neurogénicos de la inflamación (se muestra también en el Ejemplo 4b), sino que también tiene un efecto significativo sobre los mediadores inmunológicos de la respuesta inflamatoria. Este resultado es significativo debido a la implicación de los mediadores inmunes en el alistamiento y activación de las células durante las fases proliferativa y de remodelación de la cicatrización de la herida (días 6-12). Tal como se ha señalado anteriormente en el Ejemplo 3, el efecto de spinosad sobre la cicatrización de la herida se observa en las fases inflamatoria, proliferativa y de remodelación. Los datos del ejemplo actual proporcionan evidencias de que spinosad es un estimulante de las rutas tanto neurogénica como inmunológica para mediar sus efectos de cicatrización de la herida.

Claims

1. Una espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso en promover o acelerar la cicatrización de heridas en un mamífero.

2. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicha espinosina es spinosad o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal.

3. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en el que dicho mamífero no tiene deteriorada la cicatrización.

4. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en el que dicho mamífero tiene deteriorada la cicatrización.

5. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que dicha espinosina se aplica a dicha herida por vía tópica.

6. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que dicha espinosina se administra por vía oral.

7. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que dicha espinosina se administra por vía parenteral.

8. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en el que dicho mamífero es una oveja.

9. La espinosina o un derivado de N-demetilo fisiológicamente aceptable o su sal para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en el que dicho mamífero es un ser humano.