ES2330079T3 - Direccionamiento de farmaco mediado par la integrina. - Google Patents

Direccionamiento de farmaco mediado par la integrina. Download PDF

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Abstract

Conjugado caracterizado por la fórmula general (I) CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA (I) en la que CT denota un radical citotóxico o un radical de un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino, AA1 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', AA2 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', AA3 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', A4 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp'', en la que Sp'' es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono, Sp está ausente, es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo, con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente, IA es un radical no peptídico que se dirige a un receptor de la integrina v3, que es un radical de la fórmula (III) **(Ver fórmula)** en la que R10 es -SO2R100 , -COOR1000 , -COR100 , -CONR100 o -CS-NR100 , o representa un enlace directo a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R100 independientemente de cualquier otro es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R1000 es un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado; R11 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo sustituido o sin sustituir, R16 es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno; R17 es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno; R12 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido X'' es N, O o S; R13 está ausente, es -H, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO2, -CN, -COR130 , -COOR130 . R130 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales; R14 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido R15 es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido; y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente aceptables.

Description

Direccionamiento de fármaco mediado por la integrina.
El modelo de lectina marcada sobre la superficie de células tumorales (Gabius; Onkologie 12, (1989), 175) abre la posibilidad fundamental de dirigir específicamente éstas sobre células tumorales mediante la unión de unidades de carbohidratos apropiadas a citostáticos. Esta expectativa está restringida al hecho de que, incluso en otros tejidos, en particular en el hígado, se producen lectinas que tienen especificidades por carbohidratos similares (galactosa, lactosa, manosa, N-acetilglucosamina, fucosa, etc.) (Ashwell y col., Annu. Rev. Biochem. 46 (1982), 531; Stahl y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 (1977), 1521; Hill y col., J. Biol. Chem. 262 (1986), 7433; Jansen y col., J. Biol. Chem. 266 (1991), 3343). Por consiguiente, se debe esperar una concentración elevada de glicoconjugados que contienen el compuesto activo en el hígado y en otros órganos ricos en lectina si, en esta aproximación, se usan carbohidratos sin una modificación particular que establezca una selectividad para el tejido tumoral.
La amina heterocíclica batracilina (1) muestra una buena acción antitumoral en diversos modelos de cáncer de estómago (documento US-4 757 072).
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Los conjugados peptídicos de (1) que tienen una buena actividad in vitro y propiedades de solubilidad más favorables (documento US-4 180 343) se toleran peor que la batracilina libre en experimentos con animales. Los conjugados de fucosa de la batracilina (1) descritos en el documento EP-A-0 501 250 se concentran muy intensamente de manera desventajosa en el hígado.
La quinolona-a (2), ácido 7-[(3a-R,S, 4-R,S, 7a-S,R)-4-amino-1,3,3a,4,7,7a-hexahidro-iso-indol-2-il]-8-cloro-1-ciclopropil-6-fluoro-1,4-dihidro-4-oxo-3-quinolincarboxílico, también presenta, además de su extraordinaria actividad antibacteriana, una muy buena actividad contra diversas líneas celulares tumorales (documentos EP-A-0 520 240, JP-4 253 973). No obstante, se enfrenta a problemas toxicológicos considerables (por ejemplo, genotoxicidad, toxicidad de médula ósea, toxicidad muy acusada in vivo, etc.).
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La 20(S)-camptotecina es un alcaloide pentacíclico que fue aislado en 1966 por Wall y col. (J. Am. Chem. Soc. 88, 3888 (1966)). Tiene un potencial antitumoral muy activo en numerosas pruebas in vitro e in vivo. Sin embargo, desafortunadamente, la materialización del potencial prometedor en la fase de investigación clínica falló debido a problemas de toxicidad y solubilidad.
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Abriendo el anillo E de la lactona y con la formación de la sal sódica, se obtuvo un compuesto soluble en agua que se encuentra en un equilibrio con la forma anular cerrada que depende del pH. Aquí también, los estudios clínicos no han dado ningún fruto todavía.
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Unos 20 años más tarde, se encontró que la actividad biológica se debe atribuir a la inhibición enzimática de la topoisomerasa I. Desde entonces, las investigaciones han aumentado de nuevo en la búsqueda de un derivado de camptotecina que sea más tolerable y que sea activo in vivo.
Para mejorar la solubilidad en agua, se han descrito sales de los derivados de camptotecina modificados en el anillo A y en el anillo B y de los derivados de 20-O-acilo con grupos ionizables (Vishnuvajjala y col., documento US 4 943 579). Este último concepto de profármaco también se transfirió a derivados de camptotecina modificados (Wani y col., documento WO 9602546). No obstante, los profármacos de 20-O-acilo descritos, tienen una semi-vida in vivo muy corta y se escinden muy rápidamente para dar la estructura parental.
El documento WO 96/31532 describe citostáticos modificados con carbohidratos en los que se consigue tanto la estabilidad sérica y la liberación del citostático dentro de las células tumorales como una concentración específica del citostático en el tejido tumoral mediante una nueva unión de carbohidratos modificados selectivamente a citostáticos (por ejemplo, batracilina, quinolona-a, camptotecina) a través de grupos espaciadores y enlazadores preferidos.
Las integrinas son proteínas transmembrana heterodiméricas encontradas en la superficie de las células, que desempeñan un papel importante en la adhesión de las células a una matriz extracelular. Reconocen glicoproteínas extracelulares tales como la fibronectina o la vitronectina sobre la matriz extracelular a través de la secuencia RGD que se encuentra en estas proteínas (RGD es el código de una sola letra para la secuencia de aminoácidos arginina-glicina-aspartato).
En general, las integrinas tales como, por ejemplo, el receptor de vitronectina, que también se denomina receptor \alpha_{v}\beta_{3}, o alternativamente receptor \alpha_{v}\beta_{5} o receptor GpIIb/IIIa desempeñan un papel importante en procesos biológicos tales como la migración celular, la angiogénesis y la adhesión a la matriz celular y, por tanto, en enfermedades en las que estos procesos son etapas cruciales. A modo de ejemplo se pueden mencionar el cáncer, la osteoporosis, arterioesclerosis, restenosis y oftalmia.
El receptor \alpha_{v}\beta_{3} se encuentra, por ejemplo, en grandes cantidades en células endoteliales en crecimiento y hace posible su adhesión a una matriz extracelular. El receptor \alpha_{v}\beta_{3} desempeña así un papel importante en la angiogénesis, es decir, la formación de nuevos vasos sanguíneos, que es requisito previo crucial para el crecimiento tumoral y la formación de metástasis en trastornos carcinomatosos.
Ha sido posible demostrar que el bloqueo de los receptores anteriormente mencionados es un punto de partida importante para el tratamiento de trastornos de este tipo. Si se suprime la adhesión de las células endoteliales en crecimiento a la matriz extracelular bloqueando sus receptores integrina correspondientes, por ejemplo, mediante un péptido cíclico o un anticuerpo monoclonal, las células endoteliales mueren. Por tanto no se produce la angiogénesis, que da lugar a la detención o la regresión del crecimiento tumoral (cf., por ejemplo, Brooks y col., Cell, Volumen 79, 1157-1164, 1994).
Además, las propiedades invasivas de las células tumorales y, así, su capacidad para formar metástasis se reduce drásticamente cuando su receptor \alpha_{v}\beta_{3} se bloquea con un anticuerpo (Brooks y col., J. Clin. Invest., Volumen 96, 1815, 1995).
El documento WO 98/10795 describe conjugados en los que una molécula que se añade a tumores se une a una unidad funcional tal como, por ejemplo, un citostático o un marcador detectable tal como, por ejemplo, un núclido radiactivo. Entre otros, se describen antagonistas de integrinas tales como, por ejemplo, péptidos que tienen la secuencia RGD descritos anteriormente como moléculas que se añaden a tumores. La doxorubicina se describe como un ejemplo de citostático que está unido a una molécula de este tipo que se dirige a tumores.
En el caso de los compuestos del documento WO 98/10795, la unión se lleva a cabo de manera que la molécula que se dirige a un tumor y la unidad funcional están directamente unidas entre sí con la retención de sus respectivas propiedades (cf., por ejemplo, p. 56, 1. 17, a p. 58, 1. 10, y Ej. 6). Esto tiene el resultado de que estos compuestos están en efecto selectivamente concentrados en las inmediaciones próximas de las células tumorales por la unión de la entidad que se dirige al tumor (en el caso de un radical que tiene una actividad antagonista de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} mediante la unión al receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} que, en particular, se expresa en células endoteliales recién formadas mediante angiogénesis), pero a causa de la combinación directa, la unidad funcional tal como por ejemplo un citostático, no se puede liberar al espacio intracelular del tejido tumoral.
Fundamentalmente, el conjugado que por una parte está selectivamente concentrado en el tejido tumoral por el efecto de una parte que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} encontrados en el conjugado, pero por otra parte comprende un citostático que se puede liberar del conjugado, debe tener un efecto toxofórico incrementado sobre el tejido tumoral debido a la posibilidad de una acción más directa del citostático sobre las células tumorales comparado con los conjugados descritos en el documento WO 98/10795.
Por tanto, era el objeto de la presente invención desarrollar conjugados que comprendan un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} y un citostático que se pueda liberar del conjugado, en el que el resto en el conjugado que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} retiene su capacidad para unirse al receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
El objeto anterior se consigue mediante conjugados que comprenden un resto no peptídico que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}, un citostático y una unidad de unión que es enzimática o hidrolíticamente escindible con la liberación del citostático. Los conjugados que tienen un resto no peptídico que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} son particularmente preferidos en el presente documento.
En principio, los conjugados que contienen el medicamento son compuestos complejos y difíciles de preparar, como se explica, por ejemplo, en Anti-Cancer Drug Design 10 (1995), 1-9, en particular p. 1. En este artículo, se describen conjugados del metotrexato citostático, un espaciador oligopeptídico y una proteína (seroalbúmina humana). No obstante, también se apunta (cf. p. 7, primer párrafo) que la naturaleza de esta unidad de unión y el tipo de unión al toxóforo y el vehículo (por ejemplo, un anticuerpo) puede afectar a la escisión de la unidad de unión. Por tanto, este artículo enseña que la unión presentada no se puede transferir sin dificultad a otros sistemas conjugados. En particular, no se dice nada sobre si los restos también dirigidos a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se pueden unir a toxóforos de esta forma, sin que, de esta forma, el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} pierda su capacidad para unirse a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
Las unidades de unión descritas en el documento WO 96/31532 se usan específicamente para la unión del toxóforo a un radical oligosacarídico. No se dice nada sobre si los restos también dirigidos a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se pueden unir a toxóforos de esta forma, sin que, de esta forma, el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} pierda su capacidad para unirse a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la unidad de unión se puede escindir mediante enzimas asociadas a tumores. Esto da lugar a un incremento adicional en la especificidad tisular de los conjugados según la invención y así, a una reducción adicional de los conjugados según la invención en otros tipos tisulares.
Según una forma de realización preferida adicional de la invención, la unidad de unión se puede escindir mediante enzimas que están acopladas a anticuerpos con selectividad por tejidos tumorales y así, se dirigen a tejidos tumorales. Esto también se denomina aproximación ADEPT. Asimismo esto da lugar a un incremento adicional en la especificidad tisular de los conjugados según la invención y así, a una reducción adicional de los conjugados según la invención en otros tipos tisulares.
Conjugados particularmente preferidos según la presente invención son aquéllos de la fórmula general (I)
(I)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA
en la que
CT denota un radical citotóxico o un radical de un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino,
AA1 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA2 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
A4 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
en las que
Sp' es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono,
Sp está ausente, es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico que se dirige a un receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, que
es un radical de la fórmula (III)
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4
en la que
R^{7} es OH,
R^{8} es hidrógeno,
R^{9} es hidrógeno,
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''}, -COR^{10'}, -CONR^{10'} o -CS-NR^{10'}, o representa un enlace directo a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} independientemente de cualquier otro es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10''} es un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo sustituido o sin sustituir,
R^{16} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{17} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
L es -NHSO_{2}-
R^{12} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido
X' es N, O o S;
p es 1;
R^{13} está ausente, es -H, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO_{2}, -CN, -COR^{13'}, -COOR^{13'}.
R^{13'} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales;
Y' es N
R^{14} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido
R^{15} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido;
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente aceptables.
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De los conjugados de la fórmula (I), según una forma de realización preferida adicional se prefieren particularmente aquellos conjugados en los que
CT es camptotecina o 9-aminocamptotecina, que se puede estar unida al resto del conjugado a través del grupo C20-OH o, en el caso de 9-aminocamptotecina, a través del grupo amino libre;
AA1 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, y fenilalanina;
AA2 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por lisina, glutamato, histidina, glicina, arginina, ornitina y leucina, y opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina y fenilalanina;
AA4 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo,
Sp está ausente, es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico de la fórmula (III) que se dirige a un receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, en la que
R^{7} es OH,
R^{8} es hidrógeno,
R^{9} es hidrógeno,
R^{10} es SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10'}', -COR^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o -CS-NR^{10'}_{2} o representa un enlace directo, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometil-fenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluoro-metoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluoro-fenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tiofen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo;
R^{10''} es un radical alquilo C_{1-6}, un radical cicloalquilo C_{3-7}, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, dialquil-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4} o
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600
R^{16} es hidrógeno, CN, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, trifluorometoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o yodo;
R^{17} es hidrógeno, CN, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, etoxi, trifluorometoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o yodo;
L es -NHSO_{2}-,
R^{12} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28)
X' es N, O o S;
P es 1;
R^{13} está ausente, es -H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, -NO_{2}, -CN, -COR^{7'}, -COOR^{7'},
R^{13'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos;
Y' es N
R^{14} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28),
y
R^{15} es hidrógeno metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28).
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Asimismo, conjugados particularmente preferidos de la fórmula (I) en esta forma de realización preferida adicional son aquéllos en los que el radical de la fórmula (III) está unido al resto del conjugado a través de un radical en posición \beta en relación al grupo carboxilo, y los otros radicales de la fórmula (III) son como se ha definido anteriormente.
Los compuestos de la fórmula (I) según la invención también pueden estar presentes en forma de sus sales. En general, en el presente documento se pueden mencionar sales con ácidos o bases orgánicas o inorgánicas.
En particular, los compuestos de la fórmula (I) según la invención se pueden emplear en forma de sus sales fisiológicamente aceptables. Se entiende por sales fisiológicamente aceptables según la invención como sales no tóxicas que en general son accesibles por reacción de los compuestos de la fórmula (I) según la invención con un ácido o base orgánica o inorgánica usados de manera convencional para este propósito. Ejemplos de sales preferidas de los compuestos de la fórmula (I) según la invención son las sales de los metales alcalinos correspondientes, por ejemplo, sal de litio, potasio o sodio, la sal de los metales alcalino-térreos correspondientes tales como sal de magnesio o calcio, una sal de amonio cuaternario tal como, por ejemplo, sal de trimetilamonio, acetato, bencenosulfonato, benzoato, dicarbonato, disulfato, di-tartrato, borato, bromuro, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, fumarato, gluconato, glutamato, hexilresorcinato, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pantotenato, fosfato, difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, succinato, tartrato, tosilato y valerato y otras sales usadas para fines médicos.
La presente invención incluye tanto enantiómeros o diastereómeros individuales como los correspondientes racematos, mezclas diastereoméricas y sales de los compuestos según la invención. Además, según la presente invención están incluidas todas las posibles formas tautoméricas de los compuestos descritos anteriormente. Además, la presente invención incluye tanto los isómeros E y Z puros de los compuestos de la fórmula (I) como sus mezclas E/Z en todas sus relaciones. Las mezclas diastereoméricas o las mezclas E/Z se pueden separar en isómeros individuales mediante procesos cromatográficos. Los racematos se pueden resolver en sus respectivos enantiómeros tanto mediante procesos cromatográficos sobre fases quirales como por resolución.
En el contexto de la presente invención, los sustituyentes, a menos que se indique otra cosa, en general, tienen los siguientes significados:
Alquilo en general representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 20 átomos de carbono. Ejemplos que se pueden mencionar son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo, isopentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, isoheptilo, octilo e isooctilo, nonilo, decilo, dodecilo, eicosilo.
Alquenilo en general representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 20 átomos de carbono y uno o más, preferentemente que tiene uno o dos, dobles enlaces. Ejemplos que se pueden mencionar son alilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, pentenilo, isopentenilo, hexenilo, isohexenilo, heptenilo, isoheptenilo, octenilo, isooctenilo.
Alquinilo en general representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 20 átomos de carbono y uno o más, preferentemente que tiene uno o dos, triples enlaces. Ejemplos que se pueden mencionar son etinilo, 2-butinilo, 2-pentinilo y 2-hexinilo.
Acilo en general representa un alquilo inferior de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 9 átomos de carbono, que está unido a través de un grupo carbonilo. Ejemplos que se pueden mencionar son: acetilo, etilcarbonilo, propilcarbonilo, isopropilcarbonilo, butilcarbonilo e isobutilcarbonilo.
Alcoxi en general representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 14 átomos de carbono y está unido a través de un átomo de oxígeno. Ejemplos que se pueden mencionar son metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, pentoxi, isopentoxi, hexoxi, isohexoxi, heptoxi, isoheptoxi, octoxi o isooctoxi. Los términos "alcoxi" y "alquiloxi" se usan como sinónimos.
Alcoxialquilo en general representa un radical alquilo que tiene hasta 8 átomos de carbono, que está sustituido por un radical alcoxi que tiene hasta 8 átomos de carbono.
Alcoxicarbonilo puede estar representado, por ejemplo, por la fórmula
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Alquilo en general en el presente documento representa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 13 átomos de carbono. Ejemplos que se pueden mencionar son los siguientes radicales alcoxicarbonilo: metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo o isobutoxicarbonilo.
Cicloalquilo en general representa un radical hidrocarbonado cíclico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono. Ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo son radicales preferidos. Ejemplos que se pueden mencionar son ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
Cicloalcoxi en el contexto de la invención representa un radical alcoxi cuyo radical hidrocarbonado es un radical cicloalquilo. El radical cicloalquilo en general tiene hasta 8 átomos de carbono. Ejemplos que se pueden mencionar son: ciclopropiloxi y ciclo-hexiloxi. Los términos "cicloalcoxi" y "cicloalquiloxi" se usan como sinónimos.
Arilo en general representa un radical aromático que tiene de 6 a 10 átomos de carbono. Radicales arilo preferidos son fenilo, bencilo y naftilo.
Halógeno en el contexto de la invención representa flúor, cloro, bromo y yodo.
Heterociclo en el contexto de la invención en general representa un heterociclo saturado, insaturado o aromático de 3 a 10 miembros, por ejemplo, de 5 ó 6 miembros, que puede contener hasta 3 heteroátomos del grupo constituido por S, N y/u O y que, en el caso de un átomo de nitrógeno, también puede estar unido a través de éste. Ejemplos que se pueden mencionar son: oxadiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, piridacinilo, piracinilo, tienilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, piperacinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, 1,2,3-triazolilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, morfolinilo o piperidilo. Se prefieren los grupos tiazolilo, furilo, oxazolilo, pirazolilo, triazolilo, piridilo, pirimidinilo, piridacinilo y tetrahidropiranilo. El término "heteroarilo" (o "hetarilo") representa un radical heterocíclico aromático.
Los conjugados según la invención se caracterizan porque un radical citotóxico o un radical de un citostático o de un derivado citostático está unido a través de una unidad de enlace a un resto no peptídico que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
El resto no peptídico del conjugado que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} sirve para llevar a la parte toxofórica del conjugado a las células tumorales, o a sus inmediaciones, y así conseguir selectividad tisular. El tejido tumoral en crecimiento estimula la formación de nuevos vasos sanguíneos, es decir, angiogénesis, hasta un grado considerable para cubrir sus crecientes necesidades nutricionales. Los vasos sanguíneos recién formados por angiogénesis difieren del tejido convencional por marcadores específicos sobre las superficies de las células endoteliales formadas. Además, el receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} es expresado por muchos tumores humanos (cf. WO 98/10795 y las referencias allí indicadas). Así, el conjugado es llevado selectivamente al tejido tumoral a tratar, o a sus inmediaciones, por la interacción de su parte no peptídica que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} con los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} encontrados sobre células endoteliales o sobre células tumorales formadas por angiogénesis.
A diferencia de los radicales peptídicos que se dirigen a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} (tales como los descritos, por ejemplo, en el documento WO 98/10795), los restos no peptídicos según la invención que se dirigen a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} se distinguen por una estabilidad sérica incrementada, mediante la que se asegura en un mayor grado el transporte del toxóforo en el conjugado hasta el tejido tumoral.
El conjugado según la invención puede liberar su radical toxofórico en su sitio diana y así, esto puede hacer posible la penetración en el tejido tumoral. Esto se lleva a cabo con la elección específica de una unidad que une el radical toxofórico al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}. Para ser capaz de liberar el radical toxofórico, la unidad de enlace se tiene que poder escindir en condiciones fisiológicas. Esto significa que la unidad de enlace debe ser escindible hidrolíticamente o por enzimas endógenas.
Particularmente se prefiere que la unidad de enlace sea escindida por enzimas asociadas al tumor. Esto da lugar a un incremento adicional en la selectividad tisular de la acción de los conjugados según la invención.
Un punto de partida adecuado adicional para promover la selectividad tisular de la acción de los conjugados según la invención consiste en la denominada aproximación ADEPT. En ésta, los conjugados son escindidos por ciertas enzimas. Estas enzimas son introducidas en el cuerpo acopladas a anticuerpos junto con los conjugados según la invención, los anticuerpos que sirven como vehículos se dirigen específicamente al tejido tumoral. Esto da lugar a una concentración selectiva tanto del conjugado como del sistema enzima/anticuerpo en el tejido tumoral, por lo que el toxóforo se libera en el tejido tumoral con una selectividad incluso mayor y puede presentar allí su actividad.
Las unidades de enlace adecuadas según la invención son todas las unidades de enlace que comprenden al menos uno de los criterios anteriormente mencionados y que se pueden unir al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} de tal forma que éste retiene su actividad de unión a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}.
En los conjugados según la invención, los toxóforos usados pueden ser todos radicales citotóxicos o radicales de un citostático o de un derivado citostático que se emplean convencionalmente en terapia tumoral.
Según una forma de realización preferida, los conjugados según la invención que se pueden emplear son compuestos de la fórmula (I) en los que un toxóforo está unido a través de una unidad de enlace que consta de 0 a 4 aminoácidos, preferentemente de 1 a 3 aminoácidos y particularmente de manera preferente de 2 aminoácidos, y, si es apropiado, de un grupo espaciador no peptídico, a un resto no peptídico que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} de la fórmula (III)
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en la que los radicales de la fórmula tienen los significados indicados anteriormente.
En los conjugados de la fórmula (I) según la invención, el toxóforo usado pueden ser radicales citostáticos o radicales de un citostático o de un derivado citostático que se emplean convencionalmente en terapia tumoral. En el presente documento se prefiere la camptotecina o los derivados de camptotecina tales como la 9-aminocamptotecina, que se puede unir al resto del conjugado a través del grupo CO-OH o a través de un grupo funcional que está opcionalmente presente en la molécula, tal como el grupo amino en el caso de la 9-aminocamptotecina. Según esta forma de realización preferida, la unidad camptotecina usada como compuesto de partida puede estar presente en configuración 20(R) o 20(S) o con una mezcla de estas dos formas esteroisoméricas. Se prefiere la configuración 20(S).
En los conjugados de la fórmula (I), la unidad de enlace preferentemente consta de una unidad de la fórmula
-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
Si están presentes, cada uno de los radicales AA1 a AA4 representa un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente pueden llevar grupos protectores o un radical Sp'. En este contexto, particularmente se prefiere uno de los aminoácidos de origen natural glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, cisteína, metionina, aspartato, glutamato, asparagina, glutamina, arginina, lisina, histidina, triptófano, fenilalanina, tirosina, o prolina. Los aminoácidos usados en el procedimiento según la invención se pueden encontrar en configuración L o D o alternativamente como una mezcla de la forma D y L.
El término "aminoácidos" se refiere en particular, según la invención, a los \alpha-aminoácidos de origen natural, pero además también incluye sus homólogos, isómeros y derivados. Un ejemplo de isómeros que se puede mencionar son los enantiómeros. Los derivados pueden ser, por ejemplo, aminoácidos suministrados con grupos protectores.
Según la presente invención, cada uno de los aminoácidos puede estar unido a otro y al toxóforo o al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} a través de sus funciones \alpha-carboxilo o \alpha-amino, pero también a través de grupos funcionales opcionalmente presentes en las cadenas laterales, tales como, por ejemplo, funciones amina.
En el caso de aminoácidos que tienen grupos funcionales en sus cadenas laterales, estos grupos funcionales se pueden desbloquear o proteger con grupos protectores convencionales usados en la química de péptidos. Los grupos protectores empleados para estos grupos funcionales de los aminoácidos pueden ser los grupos protectores conocidos en la química de péptidos, por ejemplo, del tipo uretano, alquilo, acilo, éster o amida.
Grupos aminoprotectores en el contexto de la invención son los grupos aminoprotectores habituales usados en la química de péptidos. Éstos incluyen preferentemente: benciloxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenciloxicarbonilo, 3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo, 2,4-dimetoxibenciloxicarbonilo, 4-metoxibenciloxicarbonilo; 4-nitrobenciloxi-carbonilo, 2-nitrobenciloxicarbonilo, 2-nitro-4,5-dimetoxibenciloxicarbonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, terc-butoxicarbo-
nilo (Boc), aliloxicarbonilo, viniloxicarbonilo, 3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo, ftaloilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2,2,2-tricloro-terc-butoxicarbonilo, mentiloxicarbonilo, 4-nitro-fenoxicarbonilo, fluorenil-9-metoxicarbonilo
(Fmoc), formilo, acetilo, propionilo, pivaloilo, 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo, 2,2,2-trifluoroacetilo, 2,2,2-tricloroacetilo, benzoílo, bencilo, 4-clorobenzoílo, 4-bromobenzoílo, 4-nitrobenzoílo, ftalimido, isovaleroilo o benciloximetileno, 4-nitrobencilo, 2,4-dinitrobencilo, 4-nitrofenilo o 2-nitrofenilsulfenilo. El grupo Fmoc y el grupo Boc son particularmente preferidos.
La retirada de los grupos protectores en etapas de reacción apropiadas se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante la acción de un ácido o una base, hidrogenolítica o reductoramente de otra forma.
Además, cada uno de los aminoácidos AA1 a AA4 puede llevar un radical Sp', en el que Sp' representa un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono. Preferentemente, este radical Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo.
El radical Sp' está preferentemente unido a la cadena lateral del aminoácido correspondiente a través del grupo funcional. No obstante, si el enlace del toxóforo al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} en un aminoácido tiene lugar a través del grupo funcional en la cadena lateral, el radical Sp' también puede estar unido a la función carboxilo o \alpha-amino del aminoácido correspondiente.
Según una forma de realización preferida, AA1, si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen cadenas laterales con requerimientos estéricos o no polares. Ejemplos que se pueden mencionar son glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, prolina, triptófano y metionina. La valina, leucina e isoleucina son particularmente preferidas.
Según una forma de realización preferida, AA2, si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen cadenas laterales básicas. Ejemplos que se pueden mencionar son lisina, arginina, glutamato, histidina, ornitina, glicina, leucina o ácido diaminobutírico. No obstante, también se pueden usar aminoácidos que tienen cadenas laterales no polares. La lisina, glutamato, histidina, leucina y glicina son particularmente preferidos.
Según una forma de realización preferida, AA3, si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen cadenas laterales no polares. Ejemplos que se pueden mencionar son glicina, alanina, valina, leucina, fenilalanina e isoleucina. La glicina, valina y leucina son particularmente preferidas.
Según una forma de realización preferida, AA4, si está presente, se selecciona entre aminoácidos que tienen cadenas laterales no polares. Ejemplos que se pueden mencionar son alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, triptófano, fenilalanina y metionina. La alanina, valina y prolina son particularmente preferidas.
Según la forma de realización preferida según la invención, la unidad espaciadora Sp es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono o un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo. Particularmente de manera preferente, Sp es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo. En particular, se prefiere un radical carbonilo o tiocarbonilo y un radical ácido succínico o ácido glutárico.
Según la invención se prefiere que la unidad de enlace conste de dos aminoácidos AA1 y AA2 y la unidad espaciadora Sp, siendo posible, en particular, para la unidad AA2, estar modificada en la cadena lateral mediante grupos protectores o el radical Sp'. No obstante, también es posible que la unidad de enlace conste de uno, tres o cuatro aminoácidos AA1 a AA4 y una unidad espaciadora Sp. En estos casos, como norma, el enlace al toxóforo tiene lugar a través de la función carboxilo del aminoácido AA1 y el enlace al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} a través de la unidad espaciadora Sp tiene lugar usando un grupo amino o un grupo hidroxilo del resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}. En el caso en el que el enlace tiene lugar a través de la función carboxilo del resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5}, se prefiere sin embargo, usar unidades de enlace sin la unidad espaciadora Sp. En este caso, la unión entre la unidad de enlace y el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} tiene lugar a través de una función amino de un aminoácido. En este caso, se prefiere particularmente una unidad de enlace que conste de dos aminoácidos AA1 y AA2.
Si el toxóforo contiene una función amino, por ejemplo, 9-aminocamptotecina, la unión al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o \alpha_{v}\beta_{5} puede tener lugar directamente a través de una unidad espaciadora Sp sin que ninguno de los aminoácidos AA1 a AA4 esté contenido en la unidad de enlace. En este caso se prefiere particularmente que Sp represente una función carbonilo o tiocarbonilo, en particular una función tiocarbonilo.
El resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} además puede ser un radical de la fórmula (III):
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en la que los radicales de la fórmula (III) tienen los significados definidos anteriormente.
En la siguiente descripción, se indican los sustituyentes bivalentes de manera que su respectivo extremo izquierdo está conectado al grupo izquierdo indicado del sustituyente correspondiente en la fórmula (III) y su respectivo extremo derecho está conectado al grupo derecho indicado del sustituyente correspondiente en la fórmula (III). Si, por ejemplo, el radical L es igual a -NHSO_{2}- en la fórmula (III), el átomo de nitrógeno está conectado al grupo fenileno encontrado a la izquierda del radical L en la fórmula (III). Los siguientes detalles se refieren adicionalmente al radical de la fórmula (III) en el estado no unido. La unión del radical de la fórmula (III) al toxóforo a través de la unidad de enlace puede tener lugar mediante un grupo funcional en la cadena lateral del radical de la fórmula (III), es decir, a través del grupo amino o de un sustituyente unido a él en posición \beta en relación al grupo carboxilo terminal.
Los radicales de la fórmula (III) según la invención se caracterizan porque tienen, como elemento estructural principal, dos unidades fenilo conectadas a través de un grupo enlazador L, un grupo fenileno que tiene un radical derivado de un \beta-aminoácido, mientras que el otro grupo fenileno tiene un grupo amino, grupo urea, grupo tiourea o un grupo guanidina. Las unidades fenileno conectadas a través de un grupo enlazador L además pueden llevar sustituyentes adicionales aparte de los radicales anteriormente mencionados.
Preferentemente, los radicales de la fórmula (III) según la invención se usan en una forma en la que la unidad carboxilo terminal está presente en forma de ácido carboxílico libre.
El radical unido a una de las dos unidades fenileno centrales y derivado de un \beta-aminoácido alternativamente puede llevar uno o dos sustituyentes adicionales en posición \alpha en relación al grupo carboxilo. Cada uno de estos sustituyentes se puede seleccionar del grupo constituido por hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, un radical alquenilo opcionalmente sustituido, un radical alquinilo opcionalmente sustituido, un radical hidroxilo o un radical alcoxi.
Según la invención, el grupo amino incluido en el radical derivado de un \beta-aminoácido preferentemente está sustituido de manera particular por -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''}, -CONR^{10'}_{2} o -COR^{10'}, en las que R^{10'} y R^{10''} son como se ha definido anteriormente. En particular, en el presente documento se prefieren los radicales de la fórmula (III) puesto que el radical derivado de un \beta-aminoácido no tiene sustituyente en posición \alpha en relación a la unidad carboxilo y el grupo amino incluido en este radical está sustituido por -SO_{2}R^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o -COR^{10'}, en las que R^{10'} es como se ha definido anteriormente.
Además de uno de los radicales anteriormente mencionados, el átomo de nitrógeno del grupo amino encontrado en posición \beta puede tener un sustituyente seleccionado grupo constituido por hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido o estar unidos entre sí y así, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un sistema anular heterocíclico. Los sustituyentes preferidos en el presente documento son aquéllos que se pueden seleccionar del grupo constituido por hidrógeno, un alquilo C_{1-6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo, un cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo, un arilo tal como, por ejemplo, fenilo, bencilo o tolilo, un radical heterocíclico tal como, por ejemplo, pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol, piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol, oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benxotiazol, bencimidazol, quinolina, isoquinolina, tetrahidroquinolina, tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina y alternativamente pueden estar sustituidos por uno o más radicales alquilo C_{1-6} tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo, radicales cicloalquilo C_{3-7} tal como ciclopropilo, ciclo-propilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, radicales arilo tal como fenilo, bencilo, tolilo, naftilo, indolilo, radicales heterocíclicos tal como pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol, piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol, oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol, quinolina, isoquinolina, tetrahidroquinolina, tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina, o grupos funcionales tales como un doble enlace o un heteroátomo tal como oxígeno, azufre o nitrógeno, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo nitro, un halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo éter, un grupo sulfuro, un grupo mercaptano, un grupo ciano, un grupo isonitrilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo aldehído, un grupo ceto, un grupo carboxilo, un grupo éster, un grupo amida, un grupo sulfóxido o un grupo sulfona. Además, uno o más de los anillos adicionalmente saturados o insaturados pueden estar fusionados a los radicales cíclicos anteriormente mencionados con la formación de, por ejemplo, una unidad naftilo, indolilo, benzofuranilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, bencimidazolilo, quinolinilo o isoquinolinilo o uno de sus análogos parcial o completamente hidrogenados. El sustituyente adicional sobre el átomo de nitrógeno del grupo \beta-amino es particularmente de manera preferible hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 4-metil-ciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4},
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El radical derivado de un \beta-aminoácido está unido a una de las dos unidades fenileno centrales conectadas a través de un grupo enlazador L, que se designa en el presente documento como unidad fenileno A. Además del radical derivado de un \beta-aminoácido y el grupo enlazador L, la unidad fenileno A preferentemente no lleva sustituyentes adicionales, pero puede tener uno o más radicales que se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno. Los radicales alquilo son preferentemente radicales alquilo C_{1-6} tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo. Los radicales cicloalquilo son preferentemente radicales cicloalquilo C_{3-7} tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo.
Los radicales alcoxi son preferentemente radicales alcoxi C_{1-6} tales como metoxi, trifluorometoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, y los átomos de halógeno son preferentemente F, Cl, Br o I.
Según la presente invención radicales particularmente preferidos son aquéllos de la fórmula (III) cuya unidad central fenileno A-enlazador L-fenileno B consta, según la presente definición, de una unidad fenileno A m-sustituida y una unidad fenileno B m-sustituida.
Según la invención, el grupo enlazador L es preferentemente -NHSO_{2}-.
La unidad fenileno B central lleva como sustituyente un radical que se selecciona del grupo constituido por una unidad guanidina, urea o tiourea. Esta unidad guanidina, urea o tiourea puede ser de cadena abierta. Los átomos de nitrógeno de las respectivas unidades, ambos opcionalmente presentes y unidos solamente mediante enlaces sencillos, pueden llevar sustituyentes adicionales R^{12}, R^{14} y R^{15}. Estos sustituyentes pueden ser, independientemente los unos de los otros o simultáneamente, hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido. Sustituyentes preferidos en el presente documento son aquellos que se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un alquilo C_{1-6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo, un cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo, un arilo tal como, por ejemplo, fenilo, bencilo o tolilo, un radical heterocíclico tal como, por ejemplo, pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol, piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol, oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol, quinolina, isoquinolina, tetrahidro-quinolina, tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina y alternativamente pueden estar sustituidos por uno o más radicales alquilo C_{1-6} tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo, radicales cicloalquilo C_{3-7} tal como ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, radicales arilo tal como fenilo, bencilo, tolilo, naftilo, indolilo, radicales heterocíclicos tal como pirrolidina, piperidina, piperacina, pirrol, piridina, tetrahidrofurano, furano, tiofeno, tetrahidrotiofeno, imidazolidina, imidazol, oxazolidina, oxazol, tiazolidina, tiazol, oxatiazol, benzofurano, benzoxazol, benzotiazol, bencimidazol, quinolina, isoquinolina, tetrahidro-quinolina, tetrahidroisoquinolina, triazol, tetrazol, pirimidina, purina, citosina, timina, uracilo, adenina, guanina o xantina, o grupos funcionales tales como un doble enlace o un heteroátomo tal como oxígeno, azufre o nitrógeno, un grupo amino, un grupo nitro, un halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo éter, un grupo sulfuro, un grupo mercaptano, un grupo ciano, un grupo nitrilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo aldehído, un grupo ceto, un grupo carboxilo, un grupo éster, un grupo amida, un grupo sulfóxido o un grupo sulfona opcionalmente sustituidos. Además, a los radicales cíclicos anteriormente mencionados pueden estar fusionados uno o más anillos saturados o insaturados con la formación de, por ejemplo, una unidad naftilo, indolilo, benzofuranilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, bencimidazolilo, quinolinilo o isoquinolinilo o uno de sus análogos parcial o completamente hidrogenados.
Sustituyentes particularmente preferidos son aquéllos tales como hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclo-propilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4} o uno de los radicales (a1) a (a28) anteriormente mencionados.
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Como se ha mencionado anteriormente, la unidad urea, tiourea o guanidina puede ser de cadena abierta y así, ser un constituyente de una de las siguientes unidades funcionales preferidas:
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En las unidades estructurales mostradas anteriormente, R^{12}, R^{14} y R^{15} son como se ha definido anteriormente.
Además, en las unidades estructurales anteriores R^{13} puede estar ausente, puede ser hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir tal como, por ejemplo, un alquilo C_{1-6} tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo o un cicloalquilo C_{3-7} tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, -NO_{2}, -CN, -COR^{13'} o -COOR^{13'}, en las que R^{13'} puede ser hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales, y es preferentemente un alquilo C_{1-6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, un cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, un arilo tal como, por ejemplo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos.
Según la invención, radicales particularmente preferidos de la fórmula (III) son aquéllos en los que el grupo amino incluido en el radical derivado de un \beta-aminoácido lleva un radical -SO_{2}R^{10'}, en las que R^{10'} es preferentemente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}
(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluoro-metil-fenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propil-fenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonilpiperidin-3-ilo, tio-fen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es -NHSO_{2}-,
-CH_{2}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los que el grupo amino incluido en el radical derivado de un \beta-aminoácido lleva un radical -SO_{2}R^{10'} o un radical -COOR^{10''}, en las que R^{10'} o R^{10''} es preferentemente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-cloro-fenil-metilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonil-fenil-metilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluoro-metil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metil-fenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetra-metilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metil-benzo-tiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tiofen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloro-piridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es -NHSO_{2}-, -CH_{2}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}- o -OCH_{2}-, -CH_{2}O-, -CH_{2}OCH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}O-, -OCH_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los que el grupo amino incluido en el radical derivado de un \beta-aminoácido lleva un radical -COR^{10'}, en la que R^{10'} es preferentemente hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluoro-metil-fenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)-anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tiofen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloro-piridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es
-NHSO_{2}-, -CH_{2} NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Además, según la presente invención los radicales de la fórmula (III) son particularmente preferidos, en los que el grupo amino incluido en el radical derivado de un \beta-aminoácido lleva un radical -COR^{10'}, en la que R^{10'} es preferentemente hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-fenil-etenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluoro-metil-fenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)-anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tiofen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloro-piridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo, el grupo enlazador L es
-NHSO_{2}-, -CH_{3}NHSO_{2}-, -NHSO_{2}CH_{2}-, y el radical encontrado en la unidad fenileno es una unidad guanidina cíclica o de cadena abierta, siendo particularmente preferida una unidad guanidina cíclica, tal como, por ejemplo, la unidad 4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilamino.
Los nuevos conjugados según la reivindicación 1 se pueden preparar mediante la unión del toxóforo a la unidad enlazadora y su posterior unión al resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}. No obstante, también es posible conectar primero el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} a la unidad enlazadora y a continuación unir el toxóforo a la unidad enlazadora.
La combinación de las unidades individuales de los conjugados según la invención se puede llevar a cabo preferentemente por medio de grupos funcionales que se pueden hacer reaccionar entre sí y, como resultado, se pueden unir mediante procedimientos conocidos por aquellos expertos en la materia. Por ejemplo, las funciones carboxilo se pueden hacer reaccionar con funciones amino con la formación de un enlace amida. También es posible sintetizar paso a paso la unidad enlazadora sobre uno de los dos radicales a conectar, es decir, el toxóforo o el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia y, a continuación, unir la unidad de unión terminada al radical que aún está por unir.
En particular, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de conjugados según la fórmula (I), que comprende:
[A] la reacción de un compuesto del grupo de compuestos de la fórmula (III) que tiene una función carboxilo libre u opcionalmente activada,
con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen los significados indicados en la reivindicación 5,
en presencia de una base;
o
[B] la reacción de un compuesto del grupo de compuestos de la fórmula (III) que tiene una función amino libre primaria o secundaria,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster del ácido clorofórmico, si fuese apropiado en presencia de una base,
seguida por la reacción con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen los significados indicados en la reivindicación 5,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
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[C] la reacción de un compuesto citotóxico o citostático o de un derivado citostático CT que contiene un grupo amino libre primario o secundario,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster de un ácido clorofórmico en presencia de una base,
seguida de la reacción con un compuesto del grupo de compuestos de la fórmula (III) que tiene una función amino libre primaria o secundaria,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
\vskip1.000000\baselineskip
[D] la reacción de un compuesto del grupo de compuestos de la fórmula (III) que contiene una función amino libre primaria o secundaria,
con un compuesto de la fórmula (Ia) que contiene una función carboxilo libre u opcionalmente activada
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen el significado indicado en la reivindicación 5,
en presencia de una base;
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
\vskip1.000000\baselineskip
Según una forma de realización preferida, todas las etapas del proceso de preparación se llevan a cabo en fase sólida.
En la variante [A] del procedimiento de preparación según la invención, un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) se une a través de su función carboxilo libre a la función amino de un conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia) con la formación de un enlace amida. Esta reacción se lleva a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 370 ff.). Según la invención se prefiere activar la función carboxilo del resto que se dirige a los receptores de la \alpha_{v}\beta_{3} y a continuación hacerla reaccionar con el compuesto (Ia) en un disolvente orgánico en presencia de una base.
Para la activación del grupo carboxilo, se pueden usar reactivos acoplantes conocidos en la química de péptidos, tal como se describe, por ejemplo, en Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine [Amino acids, Peptides, Proteins]; Verlag Chemie 1982 o Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Los ejemplos mencionados son anhídridos de ácido N-carboxílico, cloruros de ácido o anhídridos mixtos, aductos con carbodiimidas, por ejemplo, N,N'-dietil-, N,N-diisopropil- o N,N-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)N'-etil-carbodiimida, meto-p-toluensulfonato de N-ciclohexil-N'-(2-morfolinoetil)-carbodiimida, o compuestos carbonilo tales como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio, o compuestos de acilamino tales como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o anhídrido propano-fosfónico o cloroformato de isobutilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxi-tris-(dimetil-amino)-fosfonio, 1-hidroxibenzotriazol o ésteres de N-hidroxisuccinimida. Además se ha propuesto emplear los componentes ácidos en forma de anhídrido de Leuchs.
La variante [A] del procedimiento de preparación anterior según la invención se puede llevar a cabo a diversas condiciones de presión y temperatura, por ejemplo, de 0,5 a 2 bar, y preferentemente a presión normal, o de -30 a +100ºC y preferentemente de -10 a +80ºC, en disolventes adecuados tales como dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), diclorometano, cloroformo, alcoholes inferiores, acetonitrilo, dioxano, agua o en mezclas de los disolventes mencionados. Como norma, se prefiere la reacción en DMF, diclorometano, THF, dioxano/agua o THF/diclorometano a temperatura ambiente o enfriando en hielo y a presión normal.
Las bases que se pueden emplear en la variante [A] del procedimiento de preparación según la invención son, por ejemplo, trietilamina, etil-diisopropilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas convencionalmente en pasos de este tipo tales como, por ejemplo, base de Hünig.
En la variante [B] del procedimiento según la invención, un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) se hace reaccionar a través de su función amino libre, primero con un derivado de un ácido carbónico con la formación de un isocianato, isotiocianato o carbamato correspondiente, que a continuación se une a la función amino de un conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia) con la formación del conjugado (I).
La reacción del resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) a través de su función amino libre con un derivado de ácido carbónico se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 370 ff.). Según la invención, la reacción preferentemente se lleva a cabo con fosgeno o un sustituto para el fosgeno tal como, por ejemplo, cloroformato de triclorometilo, tiofosgeno o un éster de ácido clorofórmico en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF) o una mezcla de dioxano y agua (1:1) o de tetrahidrofurano (THF) y diclorometano (DCM) (1:1) a temperatura ambiente o enfriando, preferentemente a temperatura ambiente, y agitando durante 10 minutos aproximadamente hasta 3 horas aproximadamente, si fuese apropiado en presencia de una
base.
La reacción posterior del isocianato, isotiocianato o carbamato así obtenido con la función amino de un conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia) con la formación de un enlace tiourea o urea correspondiente se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.).
Según la invención, el carbamato o tiocianato o isotiocianato preferentemente se hace reaccionar con la función amino del compuesto (Ia) a temperatura ambiente con agitación durante 1 a 5 horas aproximadamente, preferentemente de 2 a 3 horas aproximadamente, en presencia de una base en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF).
Las bases que se pueden emplear en la variante [B] del procedimiento de preparación según la invención son, por ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas de manera convencional en pasos de este tipo, tal como, por ejemplo, base de Hünig.
En la variante [C] del procedimiento según la invención, una función amino de un compuesto citotóxico o de un citostático o de un derivado citostático CT primero se hace reaccionar con un derivado de ácido carbónico con la formación de un isocianato, isotiocianato o carbamato correspondiente, que a continuación se hace reaccionar con una función amino de un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) con la formación del conjugado (I).
La reacción de la función amino de un compuesto citotóxico o de un citostático o de un derivado citostático CT con un derivado de ácido carbónico se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 370 ff.). Según la invención, la reacción con fosgeno o un sustituto para el fosgeno tal como, por ejemplo, cloroformato de triclorometilo, tiofosgeno o un éster de ácido clorofórmico preferentemente se lleva a cabo en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF) o una mezcla de dioxano y agua (1:1) o de tetrahidrofurano (THF) y diclorometano (DCM) (1:1) a temperatura ambiente o enfriando, preferentemente a temperatura ambiente, y agitando durante 10 minutos aproximadamente hasta 3 horas aproximadamente, si fuese apropiado en presencia de una base.
\newpage
La reacción posterior del isocianato, isotiocianato o carbamato así obtenido con la función amino de un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) con la formación de un enlace tiourea o urea correspondiente se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.).
Según la invención, el carbamato o tiocianato o isotiocianato preferentemente se hace reaccionar con la función amino de un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) a temperatura ambiente con agitación durante 1 a 5 horas aproximadamente, preferentemente de 2 a 3 horas aproximadamente, en presencia de una base en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF).
Las bases que se pueden emplear en la variante [C] del procedimiento de preparación según la invención son, por ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas de manera convencional en pasos de este tipo, tal como, por ejemplo, base de Hünig.
En la variante [D] del procedimiento de preparación según la invención, un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) se une a través de su función amino libre a la función carboxilo de un conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia) con la formación de un enlace amida. Esta reacción se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia (cf., por ejemplo, J. March, Advanced organic chemistry, 3ª ed., Wiley, p. 802 ff.). Según la invención se prefiere activar la función carboxilo del compuesto (Ia) y a continuación hacerla reaccionar con un resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} del grupo de radicales de la fórmula (III) en un disolvente orgánico en presencia de una
base.
Para la activación del grupo carboxilo, se pueden usar reactivos de acoplamiento conocidos en la química de péptidos, tal como se describe, por ejemplo, en Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren. Peptide, Proteine [Amino acids, Peptides, Proteins]; Verlag Chemie 1982 o Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Los ejemplos mencionados son anhídridos de ácido N-carboxílico, cloruros de ácido o anhídridos mixtos, aductos con carbodiimidas, por ejemplo, N,N'-dietil-, N,N-diisopropil- o N,N-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)N'-etil-carbodiimida, meto-p-toluensulfonato de N-ciclohexil-N'-(2-morfolinoetil)-carbodiimida, o compuestos carbonilo tales como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio, o compuestos de acilamino tales como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o anhídrido propano-fosfónico o cloroformato de isobutilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxi-tris-(dimetil-amino)-fosfonio, 1-hidroxibenzotriazol o ésteres de N-hidroxisuccinimida. Además se ha propuesto emplear los componentes ácidos en forma de anhídrido de Leuchs. La variante [D] del procedimiento de preparación anterior según la invención se puede llevar a cabo a diversas condiciones de presión y temperatura, por ejemplo, de 0,5 a 2 bar, y preferentemente a presión normal, o de -30 a +100ºC y preferentemente de -10 a +80ºC, en disolventes adecuados tales como dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), diclorometano, cloroformo, alcoholes inferiores, acetonitrilo, dioxano, agua o en mezclas de los disolventes mencionados. Como norma, se prefiere la reacción en DMF, diclorometano, THF, dioxano/agua o THF/diclorometano a temperatura ambiente o enfriando en hielo y a presión normal.
Las bases que se pueden emplear en la variante [D] del procedimiento de preparación según la invención son, por ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas convencionalmente en etapas de este tipo tales como, por ejemplo, base de Hünig.
Los compuestos obtenidos según el procedimiento explicado anteriormente se pueden derivar adicionalmente con la retirada de los grupos protectores que puedan estar presentes, la posterior sustitución de los átomos de nitrógeno presentes en posiciones preferidas en el procedimiento de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o sus sales fisiológicamente aceptables. A modo de ejemplo, los grupos t-butoximetoxicarbonilo usados convencionalmente como grupos protectores para los átomos de nitrógeno se retiran en medio ácido, por ejemplo, mediante la adición de ácido trifluoroacético. Agentes alquilantes adecuados para la derivación de átomos de nitrógeno en esta etapa son reactivos usados convencionalmente para este propósito, con cuyo uso se puede unir, por ejemplo, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido al átomo de nitrógeno apropiado. Con respecto a los sustituyentes preferentemente unidos a los respectivos átomos de nitrógeno, se hace referencia a la descripción anterior de los compuestos según la invención. Las reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por aquellos expertos en la materia y se describen con detalle en obras de referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Los derivados éster según la invención se pueden convertir en los ácidos carboxílicos libres correspondientes de manera convencional, tal como, por ejemplo, por hidrólisis básica del éster.
Si se desea, los compuestos según la invención se pueden convertir en sus sales fisiológicamente aceptables. Esto se puede llevar a cabo por reacción con una base orgánica o inorgánica tal como, por ejemplo, un hidróxido de un metal alcalino o un hidróxido de un metal alcalino-térreo tales como KOH, NaOH, LiOH, Mg(OH)_{2} o Ca(OH)_{2}, cuyo resultado es la desprotonación del grupo carboxilo terminal y la formación del carboxilato correspondiente, o por reacción con un ácido orgánico o inorgánico tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido mandélico, ácido oleico, ácido linoleico o ácido p-toluensulfónico, con lo que se protonan uno o más de los átomos de nitrógeno presentes.
Los compuestos de la fórmula (Ia) que sirven como sustancias de partida se pueden preparar mediante procedimientos convencionales. La unión del toxóforo a las unidades aminoácido se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales de la química de péptidos (cf., por ejemplo, Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine [Amino acids, Peptides, Proteins]; Verlag Chemie 1982, Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag Stuttgart, 4ª Edición; Volumen 15.1 y 15.2, editado por E. Wünsch) y también se describe, por ejemplo, en los documentos WO 96/31532 y WO 98/51703, cuyos contenidos se incorporan en el presente documento por referencia.
Si fuera apropiado, se debería unir una unidad espaciadora Sp a un conjugado toxóforo-aminoácido apropiado o a un toxóforo o a una modificación de la cadena lateral de aminoácidos que puedan estar presentes, y se debe llevar a cabo por la unión de una unidad espaciadora Sp'. Unidades espaciadoras Sp posibles según la presente invención son un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono y un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo. Radicales de la cadena lateral Sp' posibles según la presente invención son un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono.
La unión de los radicales arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo apropiados se puede llevar a cabo como se ha descrito anteriormente por reacción del toxóforo o del conjugado toxóforo-aminoácido con un arilisocianato o arilisotiocianato apropiado. Reacciones de este tipo también se describen, por ejemplo, en el documento WO
96/31532.
La unión de los radicales carbonilo o tiocarbonilo apropiados se puede llevar a cabo como se ha descrito anteriormente por reacción del toxóforo o del conjugado toxóforo-aminoácido con fosgeno o un sustituto para el fosgeno tal como, por ejemplo, cloroformato de triclorometilo o tiofosgeno.
La unión de los radicales ácido alcanodicarboxílico apropiados se puede llevar a cabo mediante procedimientos convencionales conocidos por aquellos expertos en la materia, tal como se describe, por ejemplo, en Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag Stuttgart, cuarta edición; Volumen 15.1 y 15.2, editado por E. Wünsch. Por ejemplo, las funciones amino libres del toxóforo o del conjugado toxóforo-aminoácido se pueden hacer reaccionar con ácidos alcanodicarboxílicos apropiados opcionalmente activados como se ha descrito anteriormente o anhídridos alcanodicarboxílicos tales como anhídrido succínico o glutárico en presencia de una base en un disolvente tal como diclorometano.
Las bases que se pueden emplear en el presente documento son, por ejemplo, trietilamina, etildiisopropilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina u otras bases usadas convencionalmente en etapas de este tipo tales como, por ejemplo, base de Hünig.
Aunque según la invención se prefiere sinterizar primero el conjugado de la unidad de unión al toxóforo (Ia), naturalmente también es posible construir primero en serie la unidad de enlace sobre el resto que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} o unirlo como un todo y a continuación conectar el conjugado así obtenido al
toxóforo.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la síntesis de los compuestos según la invención se lleva a cabo en fase sólida tal como una resina de poliestireno, particularmente de manera preferible una resina de poliestireno Wang disponible comercialmente. En este caso, la resina primero se dilata en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF). El resto de la fórmula (III) que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} se une a continuación a la resina a través de su función carboxilo mediante procedimientos habituales. Por ejemplo, la unión del ácido carboxílico a la resina se puede llevar a cabo en presencia de una base tal como piridina y un reactivo que active la unidad carboxilo, tal como un haluro de ácido, por ejemplo, cloruro de diclorobenzoílo, en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF). No obstante, también se pueden usar otros reactivos usados de manera convencional para este propósito. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente y a presión normal durante al menos 2 horas, preferentemente 12 horas, particularmente de manera preferente 24 horas, el ácido carboxílico que se emplea en exceso con respecto a la carga de la fase sólida, preferentemente en un exceso de dos a tres veces. Todas las reacciones descritas en el presente documento se pueden llevar a cabo entonces sobre el resto de la fórmula (III) unido a la resina y que se dirige al receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, como se describe en el presente documento.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, el toxóforo es camptotecina o un derivado de camptotecina tal como 9-aminocamptotecina. La unión de estos toxóforos a la unidad de enlace se puede llevar a cabo a través del grupo C20-OH o, en el caso de la 9-aminocamptotecina, a través del grupo amino libre.
La unidad camptotecina usada como compuesto de partida puede estar presente en configuración 20(R) o 20(S) o como mezcla de estas dos formas esteroisoméricas. Se prefiere la configuración 20(S).
Después de la unión del primer aminoácido a la camptotecina, se pueden formar mezclas diastereoméricas. Los diasterómeros puros de los compuestos según la invención se pueden preparar mediante los procedimientos indicados anteriormente, por ejemplo, mediante la separación de los diasterómeros de una manera adecuada después del acoplamiento de la primera unidad aminoácido a la camptotecina y la posterior retirada del grupo protector.
El radical de la fórmula (III) que se dirige a los receptores de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} se puede preparar a partir de compuestos de partida obtenibles comercialmente mediante las siguientes etapas:
las etapas esenciales del procedimiento de preparación según la invención son la reacción de un \beta-aminoácido de la fórmula (IIIa)
13
en la que
P es -(CH_{2})_{m}NO_{2}, -(CH_{2})_{m}O-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{m}SO_{2}P', -(CH_{2})_{m}COP', -(CH_{2})_{m}CH_{2}O-alquilo C_{1-6}, en las que m es en cada caso un número entero de 0 ó 1;
P' es -OH, -O-alquilo C_{1-6},
y los otros radicales son como se ha definido anteriormente, en la que R^{7} adicionalmente puede ser una fase sólida usada de manera convencional para llevar a cabo una reacción en fase sólida;
con un compuesto R^{10}-A para dar un compuesto de la fórmula (IIIb) en la que
14
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''} o - COR^{10'};
R^{10'} y R^{10''} son como se ha definido anteriormente;
A es -Cl, -Br, -I, -O-triflilo, -O-tosilo, -O-alquilo C_{1-6}, -O-CO-alquilo C_{1-6}, -O-CO-O-alquilo C_{1-6}, -OC(CH_{3})=CH_{2};
y los otros radicales son como se ha definido anteriormente;
la conversión del radical P en el radical Q,
en la que
Q es -(CH_{2})_{m}NH_{2}, -(CH_{2})_{m}OH, -(CH_{2})_{m}CH_{2}OH, -(CH_{2})_{m}SO_{2}A, -(CH_{2})_{m}COA,
A es como se ha definido anteriormente;
m es un número entero de 0 ó 1;
la reacción del compuesto (IIIb) obtenido anteriormente con un compuesto de la fórmula (IIIc) en la que
15
S es ASO_{2}(CH_{2})_{n}-,
en la que
n es un número entero de 0
A es como se ha definido anteriormente; y
16
C es -NO_{2} o
y
X, R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} son como se ha definido anteriormente;
para dar un compuesto de la fórmula (IIId)
17
en la que los radicales son como se ha definido anteriormente;
si fuese apropiado la conversión de C, si C es un grupo nitro, en una unidad urea, tiourea o guanidina opcionalmente cíclica con la retención del radical (III); y
si fuese apropiado la retirada de grupos protectores y/o la derivación de los átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
Los derivados del \beta-aminoácido de la fórmula (IIIa) están disponibles comercialmente o son accesibles de forma simple mediante procedimientos químicos habituales, tal como es sabido por cualquier persona experta en la materia y se describen en obras de referencia tales como Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme-Verlag, Stuttgart. En particular, se hace referencia a los procesos de preparación para los derivados del \beta-aminoácido descritos por Rodionow y col., J. Am. Chem. Soc. 51, 1929, 844-846, Kunz y col., Angew. Chem. 101, 1989, 1042-1043 e Ishihara y col., Bull. Chem. Soc. Jpn., 68, 6, 1995, 1721-1730.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, los derivados del \beta-aminoácido de la fórmula (IIIa) se obtienen por reacción de ácido malónico con un derivado benzaldehído de la fórmula (IIIa').
18
en la que R^{17} y P son como se ha definido anteriormente, en presencia de amoniaco, compuestos de amonio o aminas. En lugar de ácido malónico, también se puede usar un éster, si fuese apropiado con la adición de una base empleada de manera convencional para estos fines, tal como NaH o un alcóxido sódico, preferentemente metóxido sódico o etóxido sódico. Preferentemente, como compuesto de nitrógeno se emplea un compuesto de amonio tal como, por ejemplo, acetato de amonio.
Los derivados benzaldehído (IIIa') están disponibles comercialmente o son accesibles de forma simple mediante procedimientos químicos habituales, tal como es sabido por cualquier persona experta en la materia y se describen en obras de referencia tales como Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme-Verlag, Stuttgart.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, como compuesto de la fórmula (IIIa') se emplea un derivado de nitrobenzaldehído tal como 3- o 4-nitrobenzaldehído o un derivado de alcoxibenzaldehído tal como 3- o 4-metoxibenzaldehído.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, el \beta-aminoácido de la fórmula (IIIa) se obtiene mediante reacción de cantidades aproximadamente equimolares de ácido malónico, acetato de amonio y 3-nitrobenzaldehído o 3-metoxibenzaldehído en un disolvente tal como isopropanol calentando durante unas horas, preferentemente de 2 a 6 horas, de 50 a 110ºC, preferentemente con el reflujo del disolvente, en la atmósfera del entorno (es decir, al aire y a presión normal).
Para las siguientes etapas de reacción, el grupo carboxilo se bloquea mediante un grupo protector P convencional. Grupos protectores de este tipo son conocidos por aquellos expertos en la materia y no es necesario mencionarlos expresamente en el presente documento. El grupo carboxilo está preferentemente de manera particular esterificado, en el que P es un alquilo C_{1-6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, un cicloalquilo C_{3-7} tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, un arilo tal como, por ejemplo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos.
Además, el procedimiento de preparación según la invención para los radicales de la fórmula (III) se puede llevar a cabo en fase sólida. En este caso, el radical carboxilo puede estar conectado a cualquier fase sólida usada de manera convencional para reacciones de este tipo, tal como una resina de poliestireno, por ejemplo, una resina de poliestireno Wang.
Según una forma de realización preferida de la invención, el grupo carboxilo del \beta-aminoácido anterior se esterifica por reacción con un alcohol tal como etanol o un polímero usado de manera convencional para llevar a cabo una reacción en fase sólida. Esto se puede llevar a cabo en condiciones conocidas por aquellos expertos en la materia, tal como catálisis ácida y, si fuese apropiado, la adición de un agente deshidratante tal como diciclohexilcarbodiimida. No obstante, el \beta-aminoácido se suspende preferentemente en el alcohol apropiado presente en exceso, tal como etanol, se pasa HCl a su través durante un período de 30 minutos aproximadamente a 2 horas aproximadamente y a continuación la mezcla se calienta en la atmósfera ambiente durante unas horas, preferentemente de 1 a 6 horas aproximadamente y particularmente de manera preferente de 3 a 5 horas aproximadamente, de 50ºC aproximadamente a 100ºC aproximadamente, preferentemente a temperatura de reflujo del alcohol.
Los \beta-aminoácidos protegidos en el grupo carboxilo accesibles de esta forma se hacen reaccionar con un reactivo sulfonante, carbamoilante o acilante adecuado para obtener los derivados sulfonamida, carbamato o amida correspondientes. El reactivo sulfonante usado preferentemente es un cloruro de sulfonilo de la fórmula R^{10''}-SO_{2}Cl o un cloruro de carbamoilo de la fórmula R^{10''}-OCOCl, en las que R^{10''} es un alquilo C_{1-10} tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, o camfor-10-ilo, un arilo tal como fenilo, bencilo, tolilo, mesitilo o derivados sustituidos de éstos tales como -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-cloro-fenilo, 4-clorofenilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluorometoxifenilo, fenil-metilo, 2-acetamido-4-metil-tiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluorofenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metil-benzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tio-fen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo, 8-quinolinilo, o un análogo heterocíclico de los radicales cíclicos anteriormente mencionados. En lugar de los cloruros de sulfonilo o carbamoilo anteriormente mencionados, también es posible emplear los fluoruros, bromuros o yoduros correspondientes. Como reactivo acilante, los haluros de ácido carboxílico o anhídridos de ácido carboxílico apropiados se hacen reaccionar con el grupo amino, siendo preferidos según la invención los cloruros de ácido alquil-C_{1-6}-carboxílico apropiados tal como cloruros de ácido metil-, etil-, propil-, isopropil-, butil-, isobutil-, t-butil-, pentil-, isopentil-, neopentil-, hexil-, cicloalquilo C_{3-7} tal como ciclopropil-, ciclobutil-, ciclopentil-, ciclohexil-, arilo tal como fenil-, bencil-, tolilcarboxílico o sus derivados sustituidos. Para la preparación de los radicales urea o tiourea, el grupo amino preferentemente primero se hace reaccionar con un derivado de ácido carbónico o un ácido tiocarbónico tal como un éster del ácido clorofórmico o tiofosgeno y a continuación con una amina deseada. Las reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por aquellos expertos en la materia y se describen con detalle en obras de referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Según una forma de realización preferida de la invención, el \beta-aminoácido protegido en el grupo carboxilo de la fórmula (IIIa) se trata con una cantidad equimolar o un ligero exceso del agente sulfonante apropiado, por ejemplo, cloruro de fenilsulfonilo, o de agente acilante, por ejemplo, cloruro de mesitilacetilo, enfriando, preferentemente a 0ºC, en un disolvente tal como piridina o dioxano en atmósfera ambiente en presencia de una base tal como una amina, preferentemente trietilamina o diisopropiletilamina, y la mezcla se agita a esta temperatura durante 10 minutos aproximadamente hasta 3 horas aproximadamente. En el caso de la sulfonilación, a esto le sigue la agitación a temperatura ambiente durante unas horas, preferentemente de 2 a 6 horas aproximadamente.
Antes de la síntesis del grupo enlazador L, el radical P del compuesto de la fórmula (IIIb) se debe convertir en un grupo Q que puede participar en una sustitución nucleófila bien como reactivo nucleófilo o como sustrato. Si P incluye un grupo nitro, éste se reducirá al grupo amino correspondiente, que según la presente invención se puede llevar a cabo preferentemente con la adición de cloruro de estaño (II) a una disolución del compuesto de la fórmula (IIIb) en un disolvente tal como etanol y el calentamiento posterior de 50ºC a 110ºC aproximadamente, preferentemente con el reflujo del disolvente, durante unas horas, preferentemente de 1 a 4 horas aproximadamente, en atmósfera ambiente. Si P incluye un grupo éter, la liberación del grupo hidroxilo correspondiente preferentemente se lleva a cabo mediante la adición de un ácido de Lewis tal como tribromuro de boro en un disolvente tal como diclorometano enfriando, preferentemente a -78ºC, y la posterior agitación durante unas horas, preferentemente de 6 a 24 horas, a temperatura ambiente. Si P incluye un grupo ácido sulfónico o ácido carboxílico, preferentemente se lleva a cabo una conversión en el haluro de sulfonilo o de ácido carboxílico correspondiente. Esto se puede llevar a cabo de una manera conocida por aquellos expertos en la materia, por ejemplo, por reacción del ácido sulfónico o carboxílico correspondiente con cloruro de tionilo.
El compuesto preparado de esta forma a continuación se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula (IIIc)
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19 
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en la que
S es ASO_{2}(CH_{2})_{n}-,
en la que
n es un número entero de 0
A es como se ha definido anteriormente; y
C es -NO_{2} o y
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20 
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X, R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15}
son como se ha definido anteriormente;
\newpage
para dar un compuesto de la fórmula (IIId)
21
en la que los radicales son como se ha definido anteriormente. Esta reacción formalmente representa la sustitución de un grupo saliente en uno de los compuestos de partida por una unidad nucleófila en el otro compuesto de partida, en cada caso.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, los reactivos se mezclan juntos en cantidades aproximadamente equimolares en presencia de una base tal como piridina o hidruro sódico y, si fuera apropiado, en un disolvente tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano (THF) o dimetilformamida (DMF) en atmósfera ambiente a temperatura ambiente y enfriando, preferentemente a 0ºC aproximadamente, y se agita durante unas horas, preferentemente de 1 h aproximadamente a 24 horas aproximadamente, a temperatura ambiente o enfriando, por ejemplo, a 0ºC.
Los compuestos de la fórmula (IIId) así obtenidos se convierten en los radicales de la fórmula (III) según la invención por conversión del grupo nitro terminal en una unidad guanidina, urea o tiourea cíclica o de cadena abierta.
Para esto, el grupo nitro primero se convierte según la invención en un grupo amino, preferentemente con la adición de un agente reductor habitual tal como cloruro de estaño (II), si fuera apropiado en presencia de disolventes tales como etanol, agitando la mezcla de reacción y calentando de 50ºC a 110ºC, preferentemente a temperatura de reflujo del disolvente, en atmósfera ambiente durante 2 horas aproximadamente.
El grupo amino así obtenido se convierte a continuación en una unidad guanidina, urea o tiourea. Para esto, el grupo amino anterior primero se hace reaccionar preferentemente con un derivado éster de ácido carbónico o éster de ácido tiocarbónico en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF) en presencia de cloruro de mercurio (II) enfriando, preferentemente a 0ºC aproximadamente, y agitando durante 10 minutos aproximadamente a 3 horas aproximadamente enfriando, preferentemente a 0ºC aproximadamente, y si fuera apropiado posteriormente a temperatura ambiente. El derivado éster de ácido carbónico o éster de ácido tiocarbónico empleado preferentemente puede ser fosgeno, trifosgeno, tiofosgeno, ésteres de ácido clorofórmico o derivados de tiopseudourea, prefiriéndose para la preparación de los derivados de urea los ésteres de ácido clorofórmico obtenibles comercialmente, prefiriéndose el tiofosgeno para la preparación de los derivados de tiourea y prefiriéndose los derivados de tiopseudourea para la preparación de los derivados de guanidina.
Los carbamatos o isotiocianatos formados de esta forma se pueden convertir en los derivados de urea, tiourea y guanidina correspondientes por reacción con aminas apropiadas. Las aminas usadas pueden ser sustancias de la fórmula HNRR', en la que R y R' independientemente la una de la otra o simultáneamente pueden ser hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, un radical alquilamina, un radical alquilamida o pueden estar conectados entre sí y junto con el átomo de nitrógeno pueden formar un sistema anular heterocíclico opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales. Con respecto a los radicales preferidos sobre la amina, se hace referencia a la descripción anterior de los compuestos según la invención. Según la invención, el carbamato o isocianato preferentemente se hace reaccionar con una amina a temperatura ambiente con agitación durante 1 a 5 horas aproximadamente, preferentemente de 2 a 3 horas aproximadamente, en presencia de una base auxiliar tal como diisopropiletilamina en un disolvente tal como dimetilformamida (DMF). En el caso de la preparación de derivados de guanidina cíclicos, el isocianato correspondiente preferentemente se calienta primero en etanol durante unas horas, preferentemente de 12 a 24 horas aproximadamente, y a continuación se calienta con una amina tal como diaminoetano en un disolvente tal como tolueno, dimetilformamida (DMF) o una mezcla de ambos.
Según una forma de realización preferida adicional de la presente invención también es posible generar el grupo guanidina, urea o tiourea anterior sobre el compuesto de la fórmula (IIIc) de la forma anterior y a continuación hacer reaccionar el compuesto de la fórmula (IIIc) así obtenido con el compuesto de la fórmula (IIIb) de la manera descrita anteriormente.
Los compuestos obtenidos según el procedimiento explicado anteriormente se pueden derivar adicionalmente con la retirada de grupos protectores que pudieran estar presentes, la sustitución posterior de átomos de nitrógeno presentes en posiciones preferidas en el procedimiento de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o sus sales fisiológicamente aceptables. Por ejemplo, los grupos t-butoximetoxicarbonilo usados convencionalmente como grupos protectores para átomos de nitrógeno se retiran en un medio ácido, por ejemplo, con la adición de ácido trifluoroacético. Agentes alquilantes adecuados para la derivación de átomos de nitrógeno son reactivos usados convencionalmente para este fin en esta etapa, a los que puede estar unido, por ejemplo, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado, opcionalmente sustituido al átomo de nitrógeno correspondiente. Con respecto a los sustituyentes unidos preferentemente a los respectivos átomos de nitrógeno, se hace referencia a la descripción anterior de los compuestos según la invención. Las reacciones anteriores y su implementación son muy conocidas por los expertos en la materia y se describen con detalle en obras de referencia tales como, por ejemplo, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg Thieme Verlag, Stuttgart. Los derivados éster según la invención se pueden convertir en los ácidos carboxílicos libres correspondientes de una manera convencional, tal como, por ejemplo, por hidrólisis básica del éster.
Si se desea, los compuestos según la invención se pueden convertir en sus sales fisiológicamente aceptables. Esto se puede llevar a cabo por reacción con una base orgánica o inorgánica tal como, por ejemplo, un hidróxido de un metal alcalino o un hidróxido de un metal alcalino-térreo tales como KOH, NaOH, LiOH, Mg(OH)_{2} o Ca(OH)_{2}, mediante la que se desprotona el grupo carboxilo terminal y se forma el carboxilato correspondiente, o por reacción con un ácido orgánico o inorgánico tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido mandélico, ácido oleico, ácido linoleico o ácido p-toluensulfónico, mediante la que se protonan uno o más de los átomos de nitrógeno presentes.
Los conjugados según la invención se pueden usar como componentes del compuesto activo para la producción de medicamentos contra trastornos carcinomatosos. Para esto, se pueden convertir en las formulaciones habituales tales como comprimidos, comprimidos recubiertos, aerosoles, píldoras, gránulos, jarabes, emulsiones, suspensiones y disoluciones de una manera conocida usando excipientes o disolventes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados. Preferentemente, los compuestos según la invención se usan en el presente documento en una cantidad tal que su concentración en la mezcla total es del 0,5 aproximadamente al 90% en peso aproximadamente, la concentración que depende, entre otros, de la indicación correspondiente del medicamento.
Las formulaciones anteriormente mencionadas se producen, por ejemplo, extendiendo los compuestos activos con disolventes y/o excipientes que tienen las propiedades, en las que, si es necesario, se tienen que añadir adicionalmente emulsionantes o dispersantes y, en el caso del agua como disolvente, alternativamente un disolvente orgánico.
Los medicamentos según la invención se pueden administrar de la manera habitual.
La presente invención se ilustra a continuación con la ayuda de ejemplos no restrictivos y ejemplos comparativos.
Ejemplos
En los siguientes ejemplos, todos los datos cuantitativos, si no se indica otra cosa, se refieren a porcentajes en peso. Las determinaciones de la masa se llevaron a cabo por cromatografía de líquidos de alto rendimiento-espectrometría de masas (HPLC-MS) usando el método de ionización por electropulverización (ESI) o por espectroscopia de masas FAB o MALDI.
Lista de abreviaturas usadas
HPLC - cromatografía líquida de alto rendimiento
RP - fase inversa
ACN - acetonitrilo
DMF - dimetilformamida
DCM - diclorometano
THF - tetrahidrofurano
DIEA - diisopropiletilamina (base de Hünig)
NMP - N-metilpirrolidona
TFA - ácido trifluoroacético
Fmoc - 9-fluorenilmetoxicarbonilo
RT - temperatura ambiente
MTBE - metil-terc-butil-éter
Boc - terc-butiloxicarbonilo
TLC - cromatografía de capa fina
DMAP - dimetilaminopiridina
DMSO - dimetilo sulfóxido
I. Preparación de conjugados de camptotecina I.1. Trifluoroacetato de 20-O-L-valil-camptotecina
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Una suspensión de 10 g (28,7 mmol) de 20(S)-camptotecina en 500 ml de diclorometano absoluto se trató con agitación con 14 g (2 eq.) de N-carboxianhídrido de N-(terc-butoxicarbonil)-valina y 1 g de 4-(N,N-dimetilamino)-piridina. Después de calentar a temperatura de reflujo durante 4 días, la mezcla se concentró sobre vacío. El residuo se agitó con 100 ml de MTBE durante 20 min. A continuación se añadieron 200 ml de éter de petróleo y la mezcla se filtró. Se obtuvieron 14,9 g del compuesto Boc-protegido intermedio, que puede contener pequeñas cantidades de epímero D-valina que, no obstante, se puede retirar sin problemas después de la retirada del grupo protector.
A continuación se agitaron 11,65 g de este compuesto Boc-protegido intermedio a 5ºC durante 1 h en una mezcla de 300 ml de diclorometano y 70 ml de ácido trifluoroacético anhidro. Después de concentrar sobre vacío hasta un pequeño volumen, el producto se precipitó con dietiléter y se lavó abundantemente con dietiléter. El producto se precipitó de nuevo en diclorometano/metanol usando dietiléter. Si era apropiado, el producto en bruto se recogió de nuevo en 40 ml de metanol, y la disolución se trató con 120 ml de MTBE y se enfrió a 0ºC. El precipitado se eliminó por filtración y se obtuvieron 9,4 g (80%) de trifluoroacetato de 20-O-(valil)-camptotecina después de secar. [TLC: acetonitrilo/agua (20: 1); R_{f} = 0,39].
I.2 Trifluoroacetato de [L-valil-camptotecina]-bencil-L-glutamato
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400 mg (1,185 mmol) de N-terc-butoxicarbonil-glutamato de bencilo se disolvieron en 40 ml de DMF y se trataron con 273 mg (1,2 eq) de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida y con 240 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. Después de 1 h, se añadieron 665 mg (1,185 mmol) del compuesto del Ejemplo I.1 y 811 \mul de base de Hünig. La reacción de acoplamiento se completó después de 2 h. La mezcla de reacción se concentró sobre vacío. El residuo se recogió en diclorometano, la mezcla se extrajo dos veces con agua y a continuación la fase orgánica se secó y se concentró de nuevo. A continuación el residuo se recogió en diclorometano/metanol, se añadió un poco de éter y a continuación se precipitó con éter de petróleo. Se repitió este proceso de purificación y el intermedio se eliminó por filtración y se secó (rendimiento: 752 mg = 83%).
A continuación se agitaron 100 mg (0,13 mmol) de este compuesto Boc-protegido intermedio a temperatura ambiente durante 1 h con 10 ml de diclorometano y 1 ml de ácido trifluoroacético anhidro. Después de concentrar sobre vacío, el producto se recogió en diclorometano/metanol, se precipitó con dietiléter y se lavó abundantemente con dietiléter. El producto se precipitó de nuevo en diclorometano/metanol usando dietiléter. El precipitado se eliminó por filtración y se obtuvieron 85 mg (84%) del compuesto diana después de secar.
[TLC: acetonitrilo/agua 10:1 R_{f} = 0,4]. Análogamente, se prepararon los siguientes conjugados de camptotecina-péptido parcialmente protegido mediante la reacción de los conjugados de camptotecina-aminoácido apropiados con aminoácidos parcialmente protegidos adicionales. Si era apropiado, los grupos protectores se retiraron según procedimientos conocidos:
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I.11 20-O-Succinilcamptotecina
Inicialmente se introdujo 1 g (2,9 mmol) de camptotecina en 50 ml de diclorometano y se trataron con 100 mg de dimetilaminopiridina (DMAP) y 600 mg de anhídrido succínico. Después de un tiempo de reacción de 44 h, se añadieron de nuevo cantidades iguales de DMAP y anhídrido succínico y la mezcla se agitó durante 48 h más. Se purificó por cromatografía súbita en gel de sílice (acetonitrilo--> acetonitrilo/agua (20:1)). Las fracciones correspondientes se concentraron y el producto se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Rendimiento: 160 mg (13%). [TLC: (acetonitrilo/agua (10:1); R_{f} = 0,6].
I.12. 20-O-[N^{\alpha}-(Fenilamino-tiocarbonil)-L-lisil-L-valil]-camptotecina
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Se disolvieron 666 mg (0,73 mmol) del compuesto del Ejemplo 1.4 en 40 ml de DMF y se trataron con 500 \mul de base de Hünig. A continuación se añadieron 87 \mul (1 eq) de fenilisocianato obtenible comercialmente y la mezcla se agitó durante toda la noche. A continuación se concentró y el residuo se precipitó dos veces en diclorometano/metanol usando éter. El precipitado se eliminó por filtración y después de secar se obtuvieron 614 mg (90%) del intermedio protegido. [TLC: (acetonitrilo) R_{f} = 0,66].
614 mg (0,658 mmol) de este compuesto intermedio se disolvieron en 20 ml de DMF y se trataron con 2 ml de piperidina. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45 minutos, la mezcla se concentró. El residuo se precipitó dos veces en diclorometano/metanol usando éter. Se eliminó por filtración y después de secar se obtuvieron 365 mg (78%) del compuesto diana. [TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial 5:1:0,2) R_{f} = 0,46].
II. Preparación de ligandos o intermedios de integrinas no peptídicos adecuados para la unión II. 1 Ácido etil-3-amino-(3-(3-[N,N'-bis-t-butoxicarbonil-guanidino]-benceno-sulfonilamino)-fenil]-3-propanoico
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II. 1a: Clorhidrato del ácido 3-amino-3-nitrofenilpropiónico
Se calentó 3-nitrobenzaldehído (151 g), acetato de amonio (94 g) y ácido malónico (127 g) a temperatura de reflujo en isopropanol (1 l) durante 5 h. La disolución se filtró y el precipitado se lavó con isopropanol caliente (0,71). El producto en bruto se secó sobre vacío (rendimiento: 146 g). RMN ^{1}H (D_{4}-MeOH): 3,09 (m, 2 H), 4,88 (m, 1 H), 7,74 (t, 1 H), 7,90 (d, 1 H), 8,33 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H).
II.1b: Clorhidrato de 3-amino-3-(3-nitrofenil)-propionato
Se suspendió clorhidrato del ácido 3-amino-3-nitrofenilpropiónico procedente de II.1a (60 g) en 660 ml de etanol y se pasó a su través HCl gaseoso durante 1 h. A continuación la mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 4 h y se enfrió y se concentró. Se obtuvo un sólido blanco (rendimiento: 62 g). RMN ^{1}H (D_{4}-MeOH): 1,22 (t, 3 H), 3,12 (dd, 1 H), 3,20 (dd, 1 H), 4,18 (c, 2 H), 4,95 (t, 1 H), 7,77 (t, 1 H), 7,94 (d, 1 H), 8,35 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H).
II.1c: 3-Aliloxicarbonilamino-3-(3-nitrofenil)-propionato de etilo
Se añadió diisopropiletilamina (66 ml) y cloroformato de alilo (22 ml) en 150 ml de cloruro de metileno a 0ºC a una disolución de clorhidrato de 3-amino-3-(3-nitrofenil)-propionato de etilo procedente de II.1b (47 g) en 350 ml de cloruro de metileno. Después de un tiempo de reacción de 30 min, se añadió HCl (1N, 100 ml). La fase orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. Se obtuvo un sólido blanco (rendimiento: 56,4 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,19 (t, 3 H), 2,91 (d, 2 H), 4,09 (c, 2 H), 4,57 (m, 2 H), 5,18-5,26 (m, 3 H), 5,92 (m, 1 H), 6,04 (m, 1 H), 7,52 (t, 1 H), 7,68 (d, 1 H), 8,14 (d, 1 H), 8,20 (s, 1 H).
II.1d: 3-Aliloxicarbonilamino-3-(3-aminofenil)-propionato de etilo
Se añadió cloruro de estaño (II) (64,6 g) a una disolución de 3-aliloxicarbonilamino-3-(3-nitrofenil)-propionato de etilo procedente de II.1c (18,8 g) en 245 ml de etanol, y la mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 2 h. Después de enfriar la disolución, se ajustó a pH = 7 usando NaOH 2 N, se calentó brevemente, se enfrió de nuevo y se filtró. A continuación se extrajo con diclorometano, y la fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró. Se obtuvieron 10,9 g de producto.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,18 (t, 3 H), 2,80 (m, 2 H), 4,08 (c, 2 H), 4,56 (m, 2 H), 5,06 (m, 1 H), 5,20 (d, 1 H), 5,30 (d, 1 H), 5,70 (m, 1 H), 5,90 (m, 1 H), 6,57 (d, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,68 (d, 1 H), 7,11 (t, 1 H).
II.1e: 3-Aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-nitrofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato de etilo
Se añadió cloruro de 3-nitrobencenosulfonilo (9,9 g) a 0ºC a una disolución de 3-aliloxicarbonilamino-3-(3-aminofenil)-propionato de etilo procedente de II.1d (10,9 g) en 100 ml de piridina. Después de un tiempo de reacción de 2 h a 0ºC, la mezcla se concentró, se trató con HCl 1 N (150 ml) y se extrajo con diclorometano. Después de secar (MgSO_{4}), se retiró el disolvente, y se obtuvieron 16,8 g de producto. RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,18 (t, 3 H), 2,78 (m, 2 H), 4,06 (c, 2 H), 4,53 (m, 2 H), 5,04 (c, 1 H), 5,18-5,35 (m, 2 H), 5,80-5,95 (m, 2 H), 6,79 (d, 2 H), 7,00 (d, 1 H), 7,03 (s, 1 H), 7,11 (d, 1 H), 7,24 (t, 1 H), 7,65 (t, 1 H), 8,03 (d, 1 H), 8,38 (d, 1 H), 8,61 (s, 1 H).
II.1f: 3-Aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-aminofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato de etilo
Se añadió cloruro de estaño (II) (39,7 g) a una disolución de 3-aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-nitrofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato de etilo procedente de II.1e (16,8 g) en 155 ml de etanol y la mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 2 h. Después de enfriar, la disolución se ajustó a pH = 7 usando NaOH 2 N, se calentó brevemente, se enfrió de nuevo y se filtró. A continuación se extrajo con diclorometano, y la fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró. Se obtuvieron 7,3 g de producto. RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,12 (t, 3 H), 2,73 (m, 2 H), 3,91 (s, 2 H), 4,02 (c, 2 H), 4,49 (m, 2 H), 5,01 (c, 1 H), 5,15 (d, 1 H), 5,24 (d, 1 H), 5,75 (m, 1 H), 5,84 (m, 1 H), 6,47 (s, 1 H), 6,69 (d, 1 H), 6,81 (d, 1 H), 6,88 (s, 1 H), 6,99 (d, 1 H), 7,03 (d, 1 H), 7,08-7,15 (m, 3 H).
II.1g: 3-Aliloxicarbonilamino-3-(3-(3-[N,N'-bis-t-butoxicarbonil-guanidino]-fenilsulfonilamino)-fenil)-propionato de etilo
Se añadió trietilamina (6,5 ml), 1,3-bis(t-butoxicarbonil)-2-metil-2-isotiourea (8,23 g) y cloruro mercúrico (7,7 g) a 0ºC a una disolución de 3-aliloxicarbonilamino-3-(3-[3-aminofenilsulfonilamino]-fenil)-propionato de etilo procedente de II.1f (10,5 g) en 320 ml de DMF. Después de un tiempo de reacción de 30 min a 0ºC, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h más. El precipitado se retiró por filtración y la disolución se concentró. Después de la cromatografía (cloruro de metileno/metanol (40:1)), se obtuvieron 13,5 g de producto. RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,16 (t, 3 H), 1,51 (s, 9 H), 1,56 (s, 9 H), 2,76 (m, 2 H), 4,05 (c, 2 H), 4,53 (m, 2 H), 5,05 (m, 1 H), 5,21 (m, 1 H), 5,30 (m, 1 H), 5,73 (m, 1 H), 5,90 (m, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 7,01-7,09 (m, 3 H), 7,19 (t, 1 H), 7,36 (m, 2 H), 7,79 (d, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 10,25 (s, 1 H), 11,80 (s, 1 H).
II.1: Ácido etil-3-amino-(3-(3-[N,N'-bis-t-butoxicarbonil-guanidino]-bencenosulfonil-amino)-fenil]-3-propanoico
Se añadió ácido acético (1,6 ml), dicloruro de bistrifenilfosfina de paladio (110 mg) e hidruro de tributilestaño (3,5 g) a una disolución de II.1g en cloruro de metileno (150 ml). Después de 2,5 h, se añadió de nuevo dicloruro de bistrifenilfosfina de paladio (110 mg) e hidruro de tributilestaño (3,5 g) y la mezcla se agitó durante 24 h. La disolución se trató con NaHCO_{3} saturado, se extrajo con cloruro de metileno, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. Después de la cromatografía (cloruro de metileno/metanol), se obtuvieron 4,8 g de producto.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 1,23 (t, 3 H), 1,51 (s, 9 H), 1,56 (s, 9 H), 2,54 (m, 2 H), 4,12 (c, 2 H), 4,33 (dd, 1 H), 7,05 (d, 1 H), 7,11 (m, 2 H), 7,21 (t, 1 H), 7,37 (t, 1 H), 7,42 (d, 2 H), 7,90 (d, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 10,25 (s, 1 H), 11,80 (s, 1 H).
II.12 Ácido 3-(4-aminobencenosulfonilamino)-3-[3-(propilaminocarbonilamino-fenil-sulfonilamino)-fenil]-pro- piónico
27 
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Se dilataron 1,2 g de resina de poliestireno Wang (carga 1,08 mmol/g) en DMF. El disolvente se eliminó por filtración con succión y se añadió una disolución de 841 mg de ácido (3R,S)-3-(9-fluorenil-metoxicarbonilamino)-3-(3-nitrofenil)-propiónico (reactivo aminoácido, preparado protegiendo la función amino libre del ácido 3-amino-3-(3-nitrofenilpropiónico con FMCO de una manera convencional conocida) en 15 ml de DMF. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 min, la suspensión se trató con 350 \mul de piridina y 540 mg de cloruro de 2,6-diclorobenzoílo. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y DCM.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450 \mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de cloruro de 3-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 500 \mul de DIEA en 12 ml de THF/DCM 1:1 y una disolución de 2757 mg de éster del ácido 4-nitrofenilclorofórmico en 12 ml de THF/DCM 1:1. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45 min, se lavó con THF y DMF y se añadió una disolución de 943 mg de propilamina y 2780 \mul de DIEA en 20 ml de NMP. Después de agitar durante 10 h, la resina se lavó con DMF, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450 \mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
Para la retirada del producto, la resina se agitó durante 1 h con 12 ml de TFA/DCM y se eliminó por filtración, y el filtrado se concentró sobre vacío.
II.13 Ácido 3-amino-3-[3-(propilaminocarbonilamino-fenil-sulfonilamino)-fenil]-propiónico
28
Se dilataron 1,2 g de resina de poliestireno Wang (carga 1,08 mmol/g) en DMF. El disolvente se eliminó por filtración con succión y se añadió una disolución de 841 mg de ácido (3R,S)-3-(9-fluorenil-metoxicarbonilamino)-3-(3-nitrofenil)-propiónico (reactivo aminoácido) en 15 ml de DMF. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 min, la suspensión se trató con 350 \mul de piridina y 540 mg de cloruro de 2,6-diclorobenzoílo. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y DCM.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 450 \mul de DIEA en 500 \mul de THF y una disolución de 430 mg de cloruro de 3-nitrobencenosulfonilo en 500 \mul de THF. Se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se lavó con DMF, MeOH y THF.
La resina se trató con una disolución de 5400 mg de cloruro de estaño (II) dihidratado en 12 ml de NMP y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. A continuación la resina se trató con NMP, MeOH, THF y DCM.
La resina se trató con una disolución de 500 \mul de DIEA en 12 ml de THF/DCM 1:1 y una disolución de 2757 mg de éster del ácido 4-nitrofenilclorofórmico en 12 ml de THF/DCM 1:1. Después de agitar a temperatura ambiente durante 45 min, se lavó con THF y DMF y se añadió una disolución de 943 mg de propilamina y 2780 \mul de DIEA en 20 ml de NMP. Después de agitar durante 10 h, la resina se lavó con DMF, MeOH, THF y DCM.
Para la retirada del producto, la resina se agitó durante 1 h con 12 ml de TFA/DCM y se eliminó por filtración, y el filtrado se concentró sobre vacío.
II.14 Ácido 3-(4-aminobencenoaminocarbonilamino)-3-[3-(guanidino-fenil-sulfonil-amino)-fenil]-propiónico ácido trifluoroacético 
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29 
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Se agitaron 100 mg (0,165 mmol) del compuesto II.1 con 1 equivalente de 4-nitrofenilisocianato durante 3 h en 10 ml de DMF. La mezcla se concentró, y el residuo se recogió en diclorometano y se precipitó usando pentano. El intermedio a (106 mg; 83%) se secó.
Se disolvieron 120 mg (0,156 mmol) del intermedio a en metanol y se hidrogenó sobre paladio/carbono. El catalizador se separó, la disolución se concentró y el residuo se liofilizó en dioxano/agua (86 mg; 75% de intermedio b).
Se recogieron 76 mg (0,1027 mmol) del intermedio b en metanol y se trataron con 154 \mul (3 eq.) de una disolución de hidróxido de litio 2 M. Después de 6 h, se añadieron 51 \mul más de la disolución de hidróxido de litio y la mezcla se agitó durante 2 días. Se concentró, se precipitó en diclorometano usando éter y así se obtuvo el intermedio c.
A continuación se recogieron 10 mg del intermedio precipitado c en 4 ml de diclorometano y se trataron con 0,5 ml de ácido trifluoroacético. Después de 1,5 h, la mezcla se concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Se obtuvieron 3 mg (30%) del compuesto diana. [ESI-MS: m/e = 512 (M+H)^{+}].
II.16 Ácido 3-(4-aminofenilaminocarbonilamino)-3-[3-(propilaminocarbonil-amino-fenil-sulfonilamino)-fenil]- propiónico
30
Se agitaron 70 mg (0,166 mmol) del compuesto II.13 con 54 mg (2 eq) de 4-nitrofenilisocianato durante 1 h en 10 ml de DMF. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía súbita en gel de sílice usando diclorometano/metanol/amoniaco con una fuerza del 17% (15:2:0,2). Después de la precipitación en diclorometano/metanol usando éter, se obtuvo el intermedio a (29 mg; 30%).
Éste se disolvió en metanol y se hidrogenó sobre paladio/carbono. El catalizador se separó, la disolución se concentró y el residuo se liofilizó en dioxano/agua. Se obtuvieron 18 mg (74%) del compuesto diana.
3. Conjugados con enlace a través de la cadena lateral del ligando de la integrina no peptídico
Ejemplo 3.1
31
Se agitaron 300 mg (0,5 mmol) de material de partida II.1 con 80 \mul de piridina y 166 mg (1,5 eq) de cloruro de m-nitrobencenosulfonilo durante toda la noche en 10 ml de diclorometano. Se añadieron 200 ml de diclorometano y 200 ml de agua adicionales y la mezcla se agitó vigorosamente. La fase orgánica se recogió y se concentró, y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice usando diclorometano/metanol 99:1. Después de secar, se obtuvieron 274 mg (70%) de la nitro-bencenosulfonamida correspondiente.
Se recogieron 265 mg (0,33 mmol) de la nitrobencenosulfonamida en 30 ml de metanol y se hidrogenó sobre paladio/carbono. Después de precipitar, se obtuvo la aminobencenosulfonamida correspondiente.
Se disolvieron 192 mg (0,25 mmol) de la aminobencenosulfonamida correspondiente en 20 ml de metanol y la disolución se agitó durante toda la noche con 504 \mul (4 eq) de una disolución de hidróxido de litio 2 M. Se concentró, se destiló dos veces con diclorometano, y, después de la precipitación en metanol usando éter, se obtuvieron 180 mg del ácido carboxílico libre correspondiente.
Se disolvieron 180 mg (0,25 mmol) de este ácido carboxílico libre en 15 ml de dioxano/agua (1:1) y se trataron con 38,5 \mul de tiofosgeno. Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 min, se añadieron 172 \mul (4 eq) de base de Hünig, y la mezcla se agitó durante 10 minutos más y a continuación se concentró. El residuo se recogió en diclorometano, se volvió a destilar dos veces y a continuación se precipitó en diclorometano usando éter. Se obtuvieron 208 mg del isotiocianato correspondiente en forma de sal de la base de Hünig.
A continuación se retiró el grupo protector Boc en diclorometano usando 4 ml de ácido trifluoroacético y la guanidina sin proteger se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Se obtuvieron 80 mg de la guanidina correspondiente.
Se disolvieron 30 mg (0,037 mmol) de la guanidina correspondiente en 3 ml de DMF y a continuación se trataron con 24 mg (0,8 eq) del material de partida 1,3 y con 26 \mul de base de Hünig. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 min, la mezcla se concentró y el residuo se agitó primero con diclorometano y a continuación con metanol. Se añadió metanol hasta que la disolución se hubo completado y la mezcla se precipitó usando éter.
Se obtuvieron 20 mg (47%) del producto objetivo.
[TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,19]. [FAB-MS: m/e = 1159 (M+H)^{+}].
Ejemplo 3.2
32
La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.1 con la excepción de que en la primera etapa se empleó cloruro de p-nitrobencenosulfonilo en lugar cloruro de m-nitrobencenosulfonilo.
[TLC: (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,18]. [FAB-MS: m/e = 1159 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.3
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33 
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.1 con la excepción de que en la primera etapa el material de partida II.1 se acopló a ácido p-aminobenzoico en presencia de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida/hidroxibenzotriazol según condiciones normales en lugar de cloruro de m-nitro-bencenosulfonilo. [TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:6:0,6); R_{f} = 0,25]. [FAB-MS: m/e = 1123 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.4
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34 
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.2 con la excepción de que en la última etapa de reacción, la reacción tiene lugar con el material de partida 1.4 en lugar de con el material de partida 1.3 y a continuación el grupo protector Fmoc se separa según condiciones normales usando piperidina. [TLC del producto final: (diclorometano/- metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (10:10:1); R_{f} = 0,16]. [FAB-MS: m/e = 1150 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.5
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35 
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52 mg (0,073 mmol) del material de partida Boc-protegido II.14 (intermedio c) se trataron con 7,8 \mul de tiofosgeno en 5 ml de dioxano/agua (1:1) y la mezcla se agitó durante 30 min. A continuación se añadieron 37 \mul de base de Hünig y la mezcla se concentró.
El residuo se recogió en diclorometano y se trató con 1 ml de ácido trifluoroacético. Después de 3 h, la mezcla se concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando éter.
El residuo obtenido se disolvió en DMF como se ha descrito en el Ejemplo 3.1 en la última fase y a continuación se hizo reaccionar con el material de partida 1.3 en presencia de base de Hünig. Rendimiento: 53%. [TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:8:0,8); R_{f} = 0,26]. [FAB-MS: m/e = 1138 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.12
36
La preparación se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.6 a partir de los materiales de partida II.12 y I.3.
[TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:3:0,3); R_{f} = 0,19]. [FAB-MS: m/e = 1202 (M+H)^{+}].
Ejemplo 3.13
37
La preparación se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.6 a partir de los materiales de partida II.16 y I.3. [TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5); R_{f} = 0,36]. [FAB.MS: m/e = 1181 (M+H)^{+}].
Ejemplo 3.16
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38 
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La preparación se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.15 a partir de los materiales de partida II.13 y 9-aminocamptotecina ([preparada según Wani y col. (J. Med. Chem. 29 (1986), 2358)] [TLC del producto final: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5); R_{f} = 0,38]. [ESI-MS: m/e = 826 (M+H)^{+}].
Ejemplo 3.17
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39 
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En primer lugar, se disolvieron 200 mg del material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825 \mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo completado, se concentró y el producto se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster, uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este paso. A continuación se preparó la tiourea a partir de este intermedio y 9-aminocamptotecina ([preparada según Wani y col. (J. Med. Chem. 29 (1986), 2358)] de manera análoga al Ejemplo 3.15. En la última etapa, a continuación se separa el grupo Boc restante usando ácido trifluoroacético en diclorometano.
[TLC del producto final: acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,5]. [MALDI-MS: m/e = 783 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.18
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40 
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En primer lugar, se disolvieron 200 mg del material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825 \mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo completado, se concentró y el producto se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster, uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este paso (intermedio a).
Se disolvieron 60 mg (0,134 mmol) del material de partida I.11 en 5 ml de DMF y a continuación se trataron con 31 mg (1,2 eq) de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida y 27 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y se añadieron 64 mg del intermedio a y a continuación 69 \mul de base de Hünig. Después de agitar a temperatura ambiente durante 4 h, la mezcla se concentró y el residuo se agitó con 5 ml de agua. La fase acuosa se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) 15:1:0,1-> 15:2:0,2). Las fracciones correspondientes se combinaron y se precipitaron en diclorometano/metanol usando éter (intermedio b). Rendimiento: 31 mg (26%) [TLC del intermedio b: (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5); R_{f} = 0,44].
En la última etapa, el grupo Boc restante a continuación se separa de 30 mg de intermedio b usando 1 ml de ácido trifluoroacético en 5 ml de diclorometano. Se obtuvieron 30 mg (100%) del compuesto diana. [TLC del producto final: acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,45]. [FAB-MS: m/e = 808 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.19
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41 
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En primer lugar, se disolvieron 200 mg del material de partida II.1 en 10 ml de metanol y se trataron con 825 \mul de una disolución de hidróxido de litio 2 M y la mezcla se agitó durante toda la noche. Después de que la reacción se hubo completado, se concentró y el producto se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. Además de la escisión del éster, uno de los dos grupos protectores Boc también se separó en este paso (intermedio a).
Se disolvieron 68 mg (0,11 mmol) del compuesto del material de partida 1.6 en 5 ml de DMF y a continuación se trataron con 25 mg (1,2 eq) de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida y 22 mg (1,5 eq) de hidroxibenzotriazol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y a continuación se añadieron 52 mg del intermedio a y 38 \mul de base de Hünig. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 días, la mezcla se concentró y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando éter. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (10:1:0,05). Las fracciones apropiadas se combinaron, el disolvente se retiró por evaporación y el residuo se precipitó en diclorometano/metanol usando éter (intermedio b). Rendimiento: 29 mg (24%) [TLC del intermedio b: acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (10:1:0,1); R_{f} = 0,25].
En la última etapa, el grupo Boc restante a continuación se separa de 25 mg de intermedio b usando 1 ml de ácido trifluoroacético en 5 ml de diclorometano. Después de repetir la precipitación en diclorometano/metanol usando éter, se obtuvieron 18 mg (72%) del compuesto diana.
[TLC: acetonitrilo/agua/ácido acético glacial (5:1:0,2); R_{f} = 0,38] [MALDI-MS: m/e = 978 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.20
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42 
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Se disolvieron 125 mg (0,2 mmol) del compuesto del material de partida I.11 en 5 ml de DMF y a continuación se trataron con 42 mg (0,22 mmol) de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida y 34 mg (0,3 mmol) de N-hidroxisuccinimida. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y a continuación se concentró y el residuo se precipitó dos veces en diclorometano usando éter.
Se trataron 10 mg (0,014 mmol) del intermedio activado con 5,8 mg del material de partida II.13 y con 4,8 \mul (0,028 mmol) de base de Hünig en 4 ml de DMF y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) 15:2:0,2-> 15:3:0,3). Las fracciones apropiadas se combinaron y se precipitaron en diclorometano/metanol usando éter. Rendimiento: 6 mg (42%) [TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:3:0,3) R_{f} = 0,14] [ESI-MS: m/e = 1035 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.21
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43 
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida 1.8 y el material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:3:0,3) R_{f} = 0,18] [ESI-MS: m/e = 1148 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.22
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44 
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida 1.9 y el material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:4:0,5) R_{f} = 0,42] [ESI-MS: m/e = 1134 (M+H)^{+}].
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Ejemplo 3.23
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45 
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La síntesis se llevó a cabo de manera análoga al Ejemplo 3.20 partiendo del material carboxi de partida I.10 y el material de partida betaína II.13.
[TLC: diclorometano/metanol/amoniaco (con una fuerza del 17%) (15:3:0,3); R_{f} = 0,24] [ESI-MS: m/e = 1245 (M+H)^{+}].
Pruebas biológicas A: Prueba de unión de \alpha_{v}\beta_{3}
Se purificaron \alpha_{v}\beta_{3} procedentes de células A375 humanas de manera análoga al procedimiento descrito por Wong y col. (Molecular Pharmacology, 50, 529-537 (1996)). En cada caso, se incubaron 10 \mul de \alpha_{v}\beta_{3} (5 ng) en TBS pH 7,6, CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM, 1% de n-octil-glucopiranósido (Sigma); se incubaron 10 \mul de sustancia de prueba en TBS pH 7,6, 0,1% de DMSO y 45 \mul de TBS pH 7,6, CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM, MnCl_{2} 1 mM a temperatura ambiente durante 1 h. En cada caso, a continuación se añadieron 25 \mul de cuentas SPA de WGA (Amersham, 4 mg/ml) y 10 \mul de equistatina (0,1 \muCi, Amersham, marcadas con cloramina-T). Después de 16 horas a temperatura ambiente, las muestras se midieron en un aparato de medición de centelleo (Wallac 1450). Los resultados de la prueba se muestran en la Tabla 1 a continuación.
TABLA 1 Valores de CI_{50} de la unión al receptor \alpha_{v}\beta_{3} [nM]
46 
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B: Prueba de inhibición del crecimiento para la determinación de las propiedades citotóxicas sobre diversas líneas celulares tumorales
Las líneas celulares de intestino grueso humano SW 480 y HT29 (Nº ATCC CCL 228 y HTB38), las líneas celulares de mama humana MDA-MB 231, MCF-7 y BT20 (Nº ATCC HTB-, 26, 22 y 23) y la línea celular de melanoma de ratón B16F10 (CRL 6475) se crecieron hasta confluencia en platos de Roux en medio RPMI 1640 con la adición de FCS al 10%. A continuación se tripsinizaron y se recogieron en RPMI más FCS al 10% hasta un recuento de 50.000 células o, para B16F10, de 20.000 células por ml. Se añadieron 100 \mul de la suspensión celular/pocillo a una placa de microtitulación de 96 pocillos y se incubó a 37ºC durante 1 día en una incubadora de CO_{2}. Se añadieron 100 \mul más de medio RPMI y a continuación se añadió 1 \mul de DMSO con las sustancias de prueba. El crecimiento se controló después de 6 días. Para esto, se añadieron 25 \mul de disolución MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltrazolio) a cada pocillo a una concentración de partida de 5 mg/ml de H_{2}O. La placa se incubó a 37ºC durante 5 horas en una incubadora de CO_{2}. A continuación el medio se aspiró y se añadieron 100 \mul de isopropanol/pocillo. Después de agitar con 100 \mul de H_{2}O durante 30 min, se midió la extinción a 595 nm usando un lector de multiplacas Multiplate Reader (BIO-RAD 3550.UV).
La acción citostática está indicada en la Tabla 2 como valor de CI_{50}, en cada caso para las líneas celulares individuales.
TABLA 2 Valores de CI_{50} de la acción citotóxica sobre líneas celulares tumorales [nM]
47 
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C. Inhibición in vivo del crecimiento tumoral usando un modelo de ratón desnudo Material
En todos los experimentos in vivo para investigar la inhibición del crecimiento tumoral, se usaron ratones desnudos atímicos (cepa NMRI nu/nu). El tumor se desarrolló mediante el paso seriado en ratones desnudos. El origen humano del tumor se confirmó mediante procedimientos enzimáticos e inmunohistoquímicos.
Preparación del experimento
El tumor se implantó subcutáneamente en ambos flancos de ratones desnudos nu/nu de 6 a 8 semanas de edad. El tratamiento se inició, dependiendo del tiempo de doblado, tan pronto como los tumores hubieron alcanzado un diámetro de 5-7 mm. Los ratones fueron asignados aleatoriamente al grupo de tratamiento o al grupo control (5 ratones por grupo que tienen 8-10 tumores evaluables). Todos los tumores individuales del grupo control crecieron progresivamente.
El tamaño de los tumores se midió en dos dimensiones por medio de un pie de rey. A continuación se usó el volumen del tumor, que se correlaciona bien con el recuento de células, para todas las evaluaciones. El volumen se calculó según la fórmula "longitud x anchura x anchura /2" ([a x b^{2}]/2, a y b representan dos diámetros dispuestos ortogonalmente).
Se calcularon los valores del volumen tumoral relativo (RTV) para cada tumor individual dividiendo el tamaño del tumor el día X por el tamaño del tumor el día 0 (en el momento de la separación aleatoria). Los valores medios del RTV se usaron entonces para una evaluación posterior.
La inhibición del incremento del volumen tumoral (volumen tumoral del grupo de prueba/grupo control, T/C, en porcentaje) fue el valor medido final.
Tratamiento
Los compuestos se pueden administrar diariamente o con un calendario de terapia intermitente cada dos días, ya sea por vía intraperitoneal, intravenosa, oral o subcutánea.
El compuesto del ejemplo 3.8 inhibió el crecimiento tumoral del xenoinjerto MX1 de cáncer de mama humano que crece subcutáneamente con una T/C óptima de 15,9 a una dosis de 40 mg/kg administrada el día 1-3 y 14-16.
D. Proliferación inducida por CSF de células madre hematopoyéticas
Se extrajeron células de médula ósea del fémur de ratones. Se incubaron 10^{5} células en medio McCoy 5A (0,3% de agar) junto con GM-CSF murino recombinante (Genzyme; formación de la colonia celular parental) y las sustancias (10^{-4} a 100 \mug/ml) a 37ºC y 7% de CO_{2}. 7 días más tarde, se contaron las colonias (<50 células) y los grupos de colonias (17-50 células).
Una serie de compuestos presenta una toxicidad drásticamente reducida contra células madre in vitro comparada con la camptotecina.
48

Claims (6)

1. Conjugado caracterizado por la fórmula general (I)
(I)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp-IA
en la que
CT denota un radical citotóxico o un radical de un citostático o de un derivado citostático, que adicionalmente puede llevar un grupo hidroxilo, carboxilo o amino,
AA1 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA2 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
A4 está ausente o es un aminoácido en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono,
Sp está ausente, es un radical arilaminocarbonilo o arilaminotiocarbonilo que tiene 7-11 átomos de carbono o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico que se dirige a un receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, que
es un radical de la fórmula (III)
49
en la que
R^{10} es -SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''}, -COR^{10'}, -CONR^{10'} o -CS-NR^{10'}, o representa un enlace directo a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} independientemente de cualquier otro es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10''} es un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir o un radical arilo sustituido o sin sustituir,
R^{16} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{17} es hidrógeno, CN, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical alcoxi sustituido o sin sustituir o un átomo de halógeno;
R^{12} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido
X' es N, O o S;
R^{13} está ausente, es -H, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, -NO_{2}, -CN, -COR^{13'}, -COOR^{13'}.
R^{13'} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido que puede estar saturado o insaturado y/o puede contener heteroátomos adicionales;
R^{14} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido
R^{15} es hidrógeno, un radical alquilo o cicloalquilo sustituido o sin sustituir, un radical arilo sustituido o sin sustituir, un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido;
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente aceptables.
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2. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque
CT es camptotecina o 9-aminocamptotecina, que se puede estar unida al resto del conjugado a través del grupo C20-OH o, en el caso de 9-aminocamptotecina, a través del grupo amino libre;
AA1 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, y fenilalanina;
AA2 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por lisina, glutamato, histidina, glicina, arginina, ornitina y leucina, y opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
AA3 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que se selecciona del grupo constituido por glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina y fenilalanina;
AA4 está ausente o es un aminoácido de origen natural en configuración D o L, que opcionalmente puede llevar grupos protectores o un radical Sp',
en la que
Sp' es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo,
Sp está ausente, es un radical fenilaminocarbonilo o fenilaminotiocarbonilo o es un radical ácido alcanodicarboxílico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono o un radical carbonilo o tiocarbonilo,
con la condición de que al menos uno de los radicales AA1 a AA4 y/o Sp esté presente,
IA es un radical no peptídico de la fórmula (III) que se dirige a un receptor de la integrina \alpha_{v}\beta_{3},
en la que
R^{10} es SO_{2}R^{10'}, -COOR^{10''}, -COR^{10'}, -CONR^{10'}_{2} o -CS-NR^{10'}_{2} o representa un enlace directo, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{10'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, -C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, -C_{6}(CH_{3})_{5}, -CH_{2}C_{6}H_{2}(CH_{3})_{3}, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2,4-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,5-diclorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 4-clorofenilmetilo, 2,4-diclorofenilmetilo, 2,6-diclorofenilmetilo, 3-aminofenilo, 4-aminofenilo, 2-metoxicarbonilfenilmetilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-trifluorometil-fenilo, 3,5-bis(trifluorometil)fenilo, 4-trifluoro-metoxifenilo, fenilmetilo, 2-acetamido-4-metiltiazol-5-ilo, feniletilo, 1-fenilpropilo, (S)-(+)-camfor-10-ilo, (R)-(-)-camfor-10-ilo, 2-feniletenilo, 2-tiofenilo, 4-metoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 4-propilfenilo, 2,5-dimetilfenilo, 2-metoxi-5-metilfenilo, 2,3,5,6-tetrametilfenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2-cloro-6-metilfenilo, 2-cloro-4-fluoro-fenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-cloro-6-metoxifenilo, 2-trifluorometilfenilo, 2-alquilsulfonilfenilo, 2-arilsulfonilfenilo, 3-(N-acetil-6-metoxi)anilina, 4-acetamidofenilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 5-cloro-3-metilbenzotiazol-2-ilo, N-metoxicarbonil-piperidin-3-ilo, tiofen-2-ilo, isoxazol-5-ilo, etoxi, 2-cloropiridin-3-ilo, piridin-3-ilo, benciloxi, 5-metilisoxazol-3-ilo, 1-adamantilo, 4-clorofenoximetilo, 2,2-dimetiletenilo, 2-cloropiridin-5-metilo, 5,7-dimetil-1,3,4-triazaindolicin-2-ilo, (S)-camfan-1-ilo, (R)-camfan-1-ilo o 8-quinolinilo;
R^{10''} es un radical alquilo C_{1-6}, un radical cicloalquilo C_{3-7}, un radical arilo sustituido o sin sustituir o un radical heterocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, a través del cual el radical de la fórmula (III) está opcionalmente unido al resto del conjugado;
R^{11} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, dialquil-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4} o
50 
\vskip1.000000\baselineskip
51
510
R^{16} es hidrógeno, CN, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, trifluorometoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o yodo;
R^{17} es hidrógeno, CN, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metoxi, etoxi, trifluorometoxi, propoxi, butoxi, pentoxi o hexoxi, flúor, cloro, bromo o yodo;
R^{12} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28)
X' es N, O o S;
R^{13} está ausente, es -H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, -NO_{2}, -CN, -COR^{7'}, -COOR^{7'},
R^{13'} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos;
R^{14} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28),
y
R^{15} es hidrógeno metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, 4-metilciclohexilo, 3,3,5-trimetilciclohexilo, 5-metil-2-hexilo, fenilo, bencilo, tolilo o uno de sus derivados sustituidos, alquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, dialquil-C_{1-4}-amino-alquilo-C_{1-4}, amino-alquilo-C_{1-4}, alquiloxi-C_{1-4}-alquilo-C_{1-4}, uno de los radicales (a1) a (a28),
y sus sales y esteroisómeros fisiológicamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Procedimiento para la preparación de conjugados según la reivindicación 1, que comprende:
[A] hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (III) que tiene una función carboxilo libre u opcionalmente activada, con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen los significados indicados en la reivindicación 1,
en presencia de una base;
o
[B] hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III) que tiene una función amino libre primaria o secundaria,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster del ácido clorofórmico, si fuese apropiado en presencia de una base,
seguida por la reacción con un compuesto de la fórmula (Ia) que tiene un grupo amino libre primario o secundario
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen los significados indicados en la reivindicación 1,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
[C] hacer reaccionar un compuesto citotóxico o citostático o de un derivado citostático CT que contiene un grupo amino libre primario o secundario,
con un derivado de ácido carbónico tal como, por ejemplo, fosgeno, tiofosgeno o un éster de un ácido clorofórmico en presencia de una base,
seguida de la reacción con un compuesto de fórmula (III) que tiene una función amino libre primaria o secundaria,
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica; o
[D] hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III) que contiene una función amino libre primaria o secundaria,
con un compuesto de fórmula (Ia) que contiene una función carboxilo libre u opcionalmente activada
(Ia)CT-AA1-AA2-AA3-AA4-Sp
en la que todos los radicales tienen el significado indicado en la reivindicación 1,
en presencia de una base;
y
si fuese apropiado, la retirada de grupos protectores y/o la derivación de átomos de nitrógeno presentes en puntos temporales preferidos en el proceso de preparación y/o la conversión del compuesto obtenido en el ácido libre y/o la conversión del compuesto obtenido en una de sus sales fisiológicas por reacción con un ácido o una base orgánica o inorgánica.
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4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque todas las etapas del procedimiento se llevan a cabo en fase sólida.
5. Medicamento, que comprende al menos uno de los conjugados según una de las reivindicaciones 1 a 2.
6. Uso de los compuestos según una de las reivindicaciones 1 a 2 para la producción de medicamentos para el tratamiento de trastornos carcinomatosos.
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