ES2328776A1 - Peptido con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. - Google Patents
Peptido con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2328776A1 ES2328776A1 ES200703052A ES200703052A ES2328776A1 ES 2328776 A1 ES2328776 A1 ES 2328776A1 ES 200703052 A ES200703052 A ES 200703052A ES 200703052 A ES200703052 A ES 200703052A ES 2328776 A1 ES2328776 A1 ES 2328776A1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- baselineskip
- seq
- phe
- cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 326
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 91
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 title abstract description 9
- 101710088098 Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 title abstract description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 118
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 56
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 46
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 31
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 31
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 107
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 59
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 54
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 53
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 41
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 37
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 25
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 19
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 17
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 claims description 10
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 claims description 5
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 4
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027145 Melanocytic naevus Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004458 Myoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000271 mature teratoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008798 osteoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 2
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 claims 1
- 206010061692 Benign muscle neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000023525 immature teratoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000000289 malignant teratoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 claims 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 47
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 46
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 38
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 35
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 32
- 230000004044 response Effects 0.000 description 23
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 22
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 20
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 19
- -1 hereinafter Proteins 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 15
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 14
- 230000009471 action Effects 0.000 description 13
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 11
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 10
- 102100021688 Rho guanine nucleotide exchange factor 5 Human genes 0.000 description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 8
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 8
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 8
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 8
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 7
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 6
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 6
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 5
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 5
- 108010075205 OVA-8 Proteins 0.000 description 5
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 5
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 5
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 5
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 4
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 102100033254 Tumor suppressor ARF Human genes 0.000 description 4
- 101710102803 Tumor suppressor ARF Proteins 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108010082406 peptide permease Proteins 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 3
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 3
- TTXYKSADPSNOIF-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O TTXYKSADPSNOIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- ZGHMRONFHDVXEF-AVGNSLFASA-N Gln-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ZGHMRONFHDVXEF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 108700000788 Human immunodeficiency virus 1 tat peptide (47-57) Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- PQNASZJZHFPQLE-LURJTMIESA-N N(6)-methyl-L-lysine Chemical compound CNCCCC[C@H](N)C(O)=O PQNASZJZHFPQLE-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- YPIGGYHFMKJNKV-UHFFFAOYSA-N N-ethylglycine Chemical compound CC[NH2+]CC([O-])=O YPIGGYHFMKJNKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 3
- GFUOTIPYXKAPAH-BVSLBCMMSA-N Trp-Pro-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GFUOTIPYXKAPAH-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- RGXCTRIQQODGIZ-UHFFFAOYSA-O isodesmosine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC[N+]1=CC(CCC(N)C(O)=O)=CC(CCC(N)C(O)=O)=C1CCCC(N)C(O)=O RGXCTRIQQODGIZ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- 108010034507 methionyltryptophan Proteins 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 3
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 description 3
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- XABCFXXGZPWJQP-BYPYZUCNSA-N (S)-3-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](N)CCC(O)=O XABCFXXGZPWJQP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 2,6-diaminopimelic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PECYZEOJVXMISF-REOHCLBHSA-N 3-amino-L-alanine Chemical compound [NH3+]C[C@H](N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QCHPKSFMDHPSNR-UHFFFAOYSA-N 3-aminoisobutyric acid Chemical compound NCC(C)C(O)=O QCHPKSFMDHPSNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 2
- OKEWAFFWMHBGPT-XPUUQOCRSA-N Ala-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 OKEWAFFWMHBGPT-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- 101150019028 Antp gene Proteins 0.000 description 2
- OGTCOKZFOJIZFG-CIUDSAMLSA-N Asp-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OGTCOKZFOJIZFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 241000070918 Cima Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- XIGFLVCAVQQGNS-IHRRRGAJSA-N His-Pro-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XIGFLVCAVQQGNS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 2
- 241000701041 Human betaherpesvirus 7 Species 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 241000701027 Human herpesvirus 6 Species 0.000 description 2
- 108700003968 Human immunodeficiency virus 1 tat peptide (49-57) Proteins 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-VKHMYHEASA-N L-2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCC[C@H](N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- OLNLSTNFRUFTLM-BYPYZUCNSA-N N-ethyl-L-asparagine Chemical compound CCN[C@H](C(O)=O)CC(N)=O OLNLSTNFRUFTLM-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KSPIYJQBLVDRRI-UHFFFAOYSA-N N-methylisoleucine Chemical compound CCC(C)C(NC)C(O)=O KSPIYJQBLVDRRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 2
- FJLODLCIOJUDRG-PYJNHQTQSA-N Pro-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FJLODLCIOJUDRG-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 2
- 244000191761 Sida cordifolia Species 0.000 description 2
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- KNYHAWKHFQRYOX-PYJNHQTQSA-N Val-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N KNYHAWKHFQRYOX-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 2
- 230000013564 activation of immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 2
- 230000007416 antiviral immune response Effects 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 2
- VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O desmosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC[N+]1=CC(CC[C@H](N)C(O)=O)=C(CCC[C@H](N)C(O)=O)C(CC[C@H](N)C(O)=O)=C1 VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108010085109 glycyl-histidyl-arginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N (2R,3S)-3-Hydroxy-2-pyrolidinecarboxylic acid Natural products OC1CCNC1C(O)=O BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- RAVVEEJGALCVIN-AGVBWZICSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]acetyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diamino Chemical group NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RAVVEEJGALCVIN-AGVBWZICSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDDZMHYTLXPYHA-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanedioic acid;3-aminohexanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC(N)CCC(O)=O.OC(=O)C(N)CCCC(O)=O NDDZMHYTLXPYHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146995 Acyl carrier protein Proteins 0.000 description 1
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 1
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 1
- JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N Arg-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- NYDIVDKTULRINZ-AVGNSLFASA-N Arg-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NYDIVDKTULRINZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VENMDXUVHSKEIN-GUBZILKMSA-N Arg-Ser-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O VENMDXUVHSKEIN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- MFFOYNGMOYFPBD-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MFFOYNGMOYFPBD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YRZIYQGXTSBRLT-AVGNSLFASA-N Asp-Phe-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YRZIYQGXTSBRLT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010032795 CD8 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N Cys-Ala-Leu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UPURLDIGQGTUPJ-ZKWXMUAHSA-N Cys-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N UPURLDIGQGTUPJ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 108700006830 Drosophila Antp Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010056663 Gastric infection Diseases 0.000 description 1
- KVYVOGYEMPEXBT-GUBZILKMSA-N Gln-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O KVYVOGYEMPEXBT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101150004541 HOXC8 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- FLYSHWAAHYNKRT-JYJNAYRXSA-N His-Gln-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLYSHWAAHYNKRT-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 108010048671 Homeodomain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009331 Homeodomain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001502974 Human gammaherpesvirus 8 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- TVSPLSZTKTUYLV-ZPFDUUQYSA-N Ile-Glu-Met Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O TVSPLSZTKTUYLV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N Ile-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- RDFMDVXONNIGBC-LURJTMIESA-N L-2-aminoheptanoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](N)C(O)=O RDFMDVXONNIGBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JUQLUIFNNFIIKC-YFKPBYRVSA-N L-2-aminopimelic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCC(O)=O JUQLUIFNNFIIKC-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N L-allo-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Gln Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- GFWLIJDQILOEPP-HSCHXYMDSA-N Lys-Ile-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N GFWLIJDQILOEPP-HSCHXYMDSA-N 0.000 description 1
- ZZHPLPSLBVBWOA-WDSOQIARSA-N Lys-Met-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZZHPLPSLBVBWOA-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- WLXGMVVHTIUPHE-ULQDDVLXSA-N Lys-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WLXGMVVHTIUPHE-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101100018264 Mus musculus Hoxb4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- OLNLSTNFRUFTLM-UHFFFAOYSA-N N-ethylasparagine Chemical compound CCNC(C(O)=O)CC(N)=O OLNLSTNFRUFTLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010065338 N-ethylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010054107 Nodule Diseases 0.000 description 1
- 241001195348 Nusa Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001614207 Pamplona Species 0.000 description 1
- JNRFYJZCMHHGMH-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JNRFYJZCMHHGMH-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- UMKYAYXCMYYNHI-AVGNSLFASA-N Phe-Gln-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N UMKYAYXCMYYNHI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- BAONJAHBAUDJKA-BZSNNMDCSA-N Phe-Tyr-Asp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BAONJAHBAUDJKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N Pro-Phe-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CC=CC=C1 JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N Ser-Tyr-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 241000223229 Trichophyton rubrum Species 0.000 description 1
- UUIYFDAWNBSWPG-IHPCNDPISA-N Trp-Lys-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N UUIYFDAWNBSWPG-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N Tyr-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O UUBKSZNKJUJQEJ-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- YKBUNNNRNZZUID-UFYCRDLUSA-N Tyr-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YKBUNNNRNZZUID-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- WBAJDGWKRIHOAC-GVXVVHGQSA-N Val-Lys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O WBAJDGWKRIHOAC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- 206010047505 Visceral leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001484 arginines Chemical class 0.000 description 1
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N chembl269478 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229940029303 fibroblast growth factor-1 Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229920000550 glycopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 101150003074 hoxa5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000055772 human CD81 Human genes 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 108010043322 lysyl-tryptophyl-alpha-lysine Proteins 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 108010018381 streptavidin-binding peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 1
- BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N trans-3-hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@H]1CC[NH2+][C@@H]1C([O-])=O BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Péptidos de fórmula general (I), donde X está ausente, o bien, X está presente y es X14 o X14-X15, donde X14 y X15, independientemente entre sí, representan un aminoácido; sus variantes y fragmentos funcionales, y sus sales farmacéuticamente aceptables, tienen la capacidad de unirse a la escurfina e inhibir su actividad biológica, por lo que pueden regular o bloquear la actividad de los linfocitos T reguladores (Treg). De aplicación en el tratamiento de enfermedades infecciosas y neoplásicas.
Description
Péptidos con capacidad para unirse a escurfina y
aplicaciones.
La invención se refiere, en general, a péptidos
que tienen la capacidad de unirse a la escurfina y a sus
aplicaciones. En particular, la invención se refiere a péptidos
inhibidores de la actividad biológica de la escurfina mediante su
unión directa a dicha proteína, y que, de este modo, permiten
regular o bloquear la actividad de los linfocitos T reguladores
(Treg). Dichos péptidos pueden utilizarse en el tratamiento de
patologías en las que sea conveniente o necesario regular o
bloquear, de forma controlada, la actividad de los linfocitos Treg,
tales como enfermedades infecciosas y neoplásicas.
A principios de los años 1970 se describió por
primera vez la presencia de unos linfocitos T capaces de suprimir
las respuestas inmunitarias. En aquel momento se pensó que dicha
acción supresora era mediada por una subpoblación celular
específica, pero no se consiguió clonar o caracterizar ningún
marcador específico de dicha subpoblación y se perdió en parte el
interés por este subtipo celular. Sin embargo, en 1995, Sakaguchi y
col. (Sakaguchi et al. 1995. J Immunol
155:1151-64) encontraron que una población
minoritaria de células CD4+ (10%) que co-expresaban
la cadena alfa del receptor para la interleuquina 2 (CD25) era
crucial para el control de las células autoreactivas y la
autoinmunidad in vivo. Desde entonces, muchos grupos han
demostrado que esta subpoblación de células CD4+CD25+, también
conocidas como células Treg o linfocitos Treg, son inmunosupresoras
(Takahashi et al. 1998. Int Immunol
10:1969-80; Thornton & Shevach. 1998. J Exp Med
188:287-96). Estas células fueron identificadas
primero en ratones pero después han sido ampliamente caracterizadas
en humanos (Dieckmann et al. 2001. J Exp Med
193:1303-10; Jonuleit et al. 2001. J Exp Med
193:1285-94; Levings et al. 2001. J Exp Med
193:1295-302). Actualmente, la existencia de una
subpoblación inmunosupresora específica es aceptada ampliamente por
la comunidad científica y se busca la forma de manipular su
actividad para su uso clínico. La principal cuestión es cómo podría
modularse su actividad.
Los linfocitos Treg son esenciales para la
protección frente a las enfermedades autoinmunes y para la
prevención del rechazo a los transplantes; por ello, la posibilidad
de potenciar su actividad tiene un gran potencial en el tratamiento
de las enfermedades autoimmunes y en los transplantes de órganos.
Sin embargo, debido a que los tumores expresan autoantígenos, los
linfocitos Treg pueden ser capaces de inhibir la activación de
respuestas inmunitarias frente al cáncer.
Varios grupos, incluido el de los inventores,
han demostrado que la simple eliminación de las células CD4+CD25+
(Treg) por la administración in vivo de anticuerpos
deplecionantes facilita la inducción de inmunidad antitumoral y la
protección frente al desarrollo del cáncer (Casares et al.
2003. J Immunol 171:5931-9; Onizuka et al.
1999. Cancer Res 59:3128-33; Shimizu et al.
1999. J Immunol 163:5211-8; Steitz et al.
2001. Cancer Res 61:8643-6; Sutmuller et al.
2001. J Exp Med 194:823-32). Así, se cree que las
células CD4+CD25+ (Treg) están continuamente frenando la activación
de los linfocitos T efectores para evitar procesos de autoinmunidad,
pero dificultando a su vez la correcta activación de una respuesta
antitumoral cuando esta es necesaria.
La inmunoterapia alberga grandes esperanzas para
el tratamiento de los pacientes con cáncer. Los numerosos
protocolos clínicos realizados que han utilizado terapias basadas
en citoquinas, infusiones de células T efectoras o protocolos de
vacunación han demostrado que, en general, la inmunoterapia del
cáncer es segura. Sin embargo, aunque en estos protocolos clínicos
se ha observado la inducción de respuestas inmunitarias tras los
tratamientos, la mayoría de los pacientes son incapaces de
desarrollar una inmunidad antitumoral eficaz. Un metaanálisis de 37
protocolos clínicos de vacunación independientes que incluyen a más
de 700 pacientes, ha revelado que el porcentaje de respuestas
parciales o completas frente al tumor es muy bajo (3,8%) (Rosenberg
et al. 2004. Nat Med 10:909-15). La reciente
demostración de la presencia de linfocitos Treg en el tejido
tumoral o en los nódulos linfáticos de pacientes con melanoma
(Wang, H. Y., J Immunol, 2005. 174:2661-2670;
Viguier, M., F. J Immunol, 2004. 173:1444-1453.),
cancer de pulmón (Woo, E. Y., Cancer Res
61:4766-4772), ovario (Woo, E. Y., Cancer Res,
2001. 61:4766-4772, Curiel, T. J., Nat Med, 2004.
10:942-949), páncreas y mama (Liyanage, U. K., J
Immunol, 2002. 169:2756-2761) así como en
hepatocarcinomas (Ormandy, L. A. Cancer Res, 2005.
65:2457-2464; Kobayashi, N., Clin Cancer Res, 2007.
13:902-911) y la descripción de que el tejido
tumoral secreta quimiocinas que atraen específicamente a esta
subpoblación hacia el tejido tumoral indican que el acceso de los
linfocitos Treg al tumor es un proceso dinámico y que ejerce un
efecto inmunosupresor que facilita la progresión de la enfermedad.
La presencia de Treg en el tumor así como en los nódulos perifércios
podría explicar la baja eficacia de los protocolos de
inmunoterapia. Del mismo modo, en enfermedades infecciosas, el
control ejercido por los linfocitos Treg puede limitar la magnitud
de las respuestas efectoras T y provocar el fallo en el control de
la infección. Así se ha descrito que algunos virus como el de la
hepatitis B (Xu, D. J Immunol, 2006. 177:739-747),
hepatitis C (Boettler, T., J Virol, 2005.
79:7860-7867; Cabrera, R. Hepatology, 2004.
40:1062-1071; Rushbrook, J Virol, 2005.
79:7852-7859; Sugimoto, K. Hepatology, 2003.
38:1437-1448) y HIV, (Aandahl, E. M. J Virol, 2004.
78:2454-2459; Kinter, A. L. J Exp Med, 2004.
200:331-343; Oswald-Richter, K. PLoS
Bio12004. 2:E198; Weiss, L. Blood, 2004.
10^{4}:3249-3256) pueden servirse de los
linfocitos Treg para bloquear la respuesta inmunitaria antiviral y
permitir así el establecimiento de la infección crónica
persistente. Por todo ello se cree que la modulación de la acción de
los linfocitos Treg puede ser esencial en el desarrollo de
inmunoterapias frente al cáncer o frente a las enfermedades
infecciosas.
Existe cierta controversia en cuanto al modo de
acción de los linfocitos Treg, pero parece cada vez más consistente
el papel que juega la citoquina TGF-\beta (factor
transformante de crecimiento \beta) en el proceso de inhibición de
las células T efectoras (Powrie et al. 1996. J Exp Med
183:2669-74; Somasundaram et al. 2002. Cancer
Res 62:5267-72).
Por otro lado, recientemente se ha descrito que
el factor de transcripción escurfina (FOXP3, producto de expresión
del gen foxp3) (Yagi et al. 2004. Int Immunol
16:1643-56. 2004 Oct 04), es esencial para la
actividad de los linfocitos Treg, de manera que su presencia
determina la actividad supresora de estas células. Las secuencias
de cDNA que codifican para escurfina murina y humana han sido objeto
de la patente norteamericana US 6.414.129 que, además, describe que
la modulación de la expresión de la escurfina puede tener efectos
terapéuticos en diversas enfermedades; en dicha patente también se
menciona el empleo de péptidos sintéticos, entre otras moléculas,
para regular la expresión del gen foxp3, pero no menciona
nada sobre la posibilidad de inhibir la actividad de la escurfina
ya expresada.
Asimismo, se ha descrito el uso de un método de
potenciación de la respuesta inmune en mamíferos basado en la
eliminación de los linfocitos Treg mediante el empleo de
anticuerpos monoclonales neutralizantes (WO 2006/044864); sin
embargo, dicha solicitud de patente no menciona nada sobre la
regulación transitoria de la actividad de los linfocitos Treg
mediante la inhibición de la actividad de la escurfina (esencial en
el efecto inmunosupresor de dichas células). Por otra parte, la
depleción de linfocitos Treg incrementa el riesgo de inducción de
autoinmunidad y el hecho de que tales anticuerpos monoclonales no
discriminen entre los linfocitos Treg y los linfocitos T efectores,
reduce su aplicación.
En la actualidad, los únicos métodos para
inhibir la actividad de los linfocitos Treg que se han descrito de
forma experimental pasan por su eliminación, mediante el uso de
anticuerpos deplecionantes o mediante el bloqueo de las citoquinas
que producen y que pueden ser las responsables de sus actividades
(TGF-\beta, IL-10), pero no existe
ningún inhibidor específico de esta subpoblación celular. Los
métodos que se basan en la depleción de las células T reguladoras
tienen el inconveniente de que eliminan las células y conllevan
riesgos de provocar enfermedades autoinmunes. Además, no existen
anticuerpos específicos para las células T reguladoras y los que
existen, también pueden eliminar las células T efectoras.
Así pues, sigue existiendo la necesidad de
identificar nuevos compuestos capaces de regular o bloquear la
actividad de los linfocitos Treg, potencialmente útiles en terapia
humana.
Ahora se ha encontrado, sorprendentemente, que
la actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg puede ser
regulada o bloqueada, de forma transitoria o temporal, inhibiendo
la actividad de la escurfina, un factor de transcripción esencial
para que dichos linfocitos Treg ejerzan su efecto inmunosupresor,
mediante el empleo de unos péptidos capaces no sólo de unirse a la
escurfina sino, además, capaces de inhibir su actividad biológica.
Dichos péptidos con capacidad de unirse a la escurfina, en
particular, aquellos péptidos capaces de inhibir su actividad
biológica, son potencialmente útiles para el tratamiento de
patologías que requieren una regulación o inhibición transitoria o
temporal de la actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg,
tales como, enfermedades infecciosas y enfermedades neoplásicas.
Asimismo, dichos péptidos proporcionan una herramienta para el
estudio del papel biológico de la escurfina y los linfocitos
Treg.
Por tanto, un aspecto de esta invención se
relaciona con unos péptidos que poseen la capacidad de unirse a la
escurfina. En una realización particular y preferida, dichos
péptidos tienen, además, la capacidad de inhibir la actividad
biológica de la escurfina.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
una proteína de fusión que comprende un péptido proporcionado por
esta invención y un péptido transportador con capacidad para
internalizar un péptido en una célula.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
una composición farmacéutica que comprende, al menos, un péptido o
una proteína de fusión proporcionados por esta invención.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
el empleo de dichos péptidos y proteínas de fusión en la
elaboración de un medicamento para el tratamiento de una patología
que requiere una regulación o inhibición transitoria de la actividad
inmunosupresora de los linfocitos Treg, tal como una enfermedad
neoplásica o una enfermedad infecciosa.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
el empleo de dichos péptidos y proteínas de fusión en el
tratamiento de una patología que requiere una regulación o
inhibición transitoria de la actividad inmunosupresora de los
linfocitos Treg, tal como una enfermedad neoplásica o una
enfermedad infecciosa.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
ácidos nucleicos que codifican dichos péptidos o dichas proteínas
de fusión.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
una construcción génica que comprende un ácido nucleico que
codifica un péptido o una proteína de fusión proporcionados por
esta invención.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
un vector que comprende dicho ácido nucleico o dicha construcción
génica.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
una célula hospedadora, tal como una célula hospedadora
transformada, que comprende dicho ácido nucleico, dicha
construcción génica o dicho vector.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
un procedimiento para producir un péptido, o una proteína de
fusión, proporcionados por esta invención que comprende cultivar
dichas células hospedadoras bajo condiciones que permiten la
expresión de dicho péptido y, si se desea, recuperar el péptido, o
la proteína de fusión, obtenidos.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
el empleo de dichos ácidos nucleicos y construcciones génicas en la
elaboración de vectores y células para el tratamiento de una
patología que requiere una regulación o inhibición transitoria de la
actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg, tal como una
enfermedad neoplásica o una enfermedad infecciosa.
La Figura 1 es una gráfica que muestra los
resultados de un análisis de resonancia de plasmones de superficie
(SPR) de la interacción biomolecular que se produce entre el
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) y la escurfina, tal como se describe en
el Ejemplo 1 (apartado 1.3). Como puede apreciarse, el péptido P60
(SEQ ID NO: 1) da una señal positiva que evidencia su capacidad de
unirse específicamente a la escurfina. El resultado que se muestra
es representativo de 3 experimentos independientes. U.R.: unidades
relativas.
La Figura 2 es una gráfica que muestra los
resultados de un análisis de resonancia de plasmones de superficie
(SPR) de la interacción biomolecular que se produce entre el
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) y sus truncados
T(1-13) SEQ ID NO: 2,
T(1-14) (SEQ ID NO: 3) y
T(2-15) (SEQ ID NO: 4), y la escurfina
(Ejemplo 1, apartado 1.4). Como puede apreciarse, la eliminación de
un aminoácido en posición amino terminal inhibe la capacidad del
péptido para unirse a la escurfina; sin embargo, la eliminación de
los residuos 14 ó 15 del extremo carboxilo terminal, no destruyen la
capacidad del péptido de unirse a la escurfina.
La Figura 3 es un diagrama de barras que muestra
la actividad supresora de la línea celular humana Karpas 299
(ACC-31, DSMZ, Alemania). Con esas células se
realizó un ensayo de reacción mixta linfocitaria (MLR) en el que se
miden los niveles de IFN-\gamma producidos tras
un cultivo de células de sangre periférica (PBMC) de 2 donantes en
presencia o ausencia de la línea celular Karpas 299. Cuando los PBMC
de 2 donantes distintos se ponen en cultivo, se produce una
respuesta inmunitaria conocida como respuesta mixta linfocitaria
que conlleva una activación de la proliferación celular y la
producción de citoquinas como el IFN-\gamma por el
reconocimiento alogénico a través de la reacción entre el complejo
principal de histocompatibilidad (MHC) y el receptor de la célula T
(TCR). Esta respuesta se ve inhibida si se añaden células Karpas 299
(con fenotipo y actividad de linfocitos Treg). Leyendas: PBMC1
(1x10^{5} células/pocillo), linfocitos de sangre periférica de un
donante (1) sano; PBMC2 (1x10^{5} células/pocillo), linfocitos de
sangre periférica de otro donante (2) sano diferente al donante (1);
Karpas, línea celular Karpas 299 (1x10^{4} células/pocillo). En
la misma figura se muestra cómo el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100
\muM) es capaz de restaurar la producción de
IFN-\gamma por los linfocitos T (medida en los sobrenadantes de cultivo por un ensayo ELISA, BD Biosciences), inhibiendo la acción supresora de las células Karpas 299.
IFN-\gamma por los linfocitos T (medida en los sobrenadantes de cultivo por un ensayo ELISA, BD Biosciences), inhibiendo la acción supresora de las células Karpas 299.
La Figura 4 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la acción de los
linfocitos Treg humanos (purificados a partir de sangre periférica
de un donante sano utilizando un kit de Miltenyi Biotech, Ref
130-091-301) sobre una respuesta
mixta linfocitaria (MLR). Se mezclaron PBMC derivados de dos
donantes de sangre (1x10^{5} células/pocillo de cada donante) y se
incubaron en presencia o ausencia de los linfocitos Treg
(2x10^{4} células/pocillo) (obtenidos de uno de ellos) y el
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100 \muM). Tras 3 días en cultivo, se
midió la proliferación celular mediante un ensayo convencional de
incorporación de timidina tritiada. Como puede apreciarse, los
linfocitos Treg son capaces de inhibir la MLR y el péptido P60 (SEQ
ID NO: 1) es capaz de reducir el efecto inmunosupresor de los
linfocitos Treg humanos sobre la MLR.
La Figura 5 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la acción de
linfocitos Treg humanos naturales (purificados a partir de sangre
periférica de un donante sano) sobre la respuesta de células
efectoras frente a la estimulación con anticuerpos
anti-CD3/CD28 unidos a micropartículas (Dynabeads®
CD3/CD28, Ref 111-31, Dynal). Los linfocitos T
efectores obtenidos de una donante sano (1x10^{5}
células/pocillo), fueron cultivados en presencia o ausencia de
estímulo anti-CD3/CD28, linfocitos Treg (2x10^{4}
células/pocillo) y péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100 \muM). Tras 48
horas de cultivo, se midió la presencia de
IFN-\gamma en los sobrenadantes de los cultivos
mediante un ELISA comercial. Como puede apreciarse, el péptido P60
(SEQ ID NO: 1) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los
linfocitos Treg humanos sobre la activación con
anti-CD3/CD28.
La Figura 6 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la acción de
linfocitos Treg murinos naturales (purificados a partir de
esplenocitos de ratón mediante el uso de un kit de Miltenyi Biotech,
Ref: 130-091-041) sobre la
producción de IFN-\gamma por las células T
efectoras frente a la estimulación con anticuerpos
anti-CD3 (BD-Biosciences). Los
esplenocitos de ratones BALB/c fueron cultivados (1x10^{5}
células/pocillo) en presencia o ausencia de anticuerpos
anti-CD3 (0,5 \mug/ml), linfocitos Treg
(2x10^{4} cells/pocillo) y péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100
\muM). Como puede apreciarse, el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) es
capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los linfocitos Treg
sobre la producción de IFN-\gamma (medida
mediante un ELISA comercial) por las células efectoras en respuesta
al estímulo con anti-CD3.
La Figura 7 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la acción de
linfocitos Treg murinos naturales (purificados a partir de
esplenocitos de ratón) sobre la respuesta de células efectoras
frente a la estimulación por una respuesta mixta linfocitaria (MLR)
(medida de la proliferación celular mediante un ensayo convencional
de incorporación de timidina tritiada). Los linfocitos efectores
aislados de ratones BALB/c (1x10^{5} células/pocillo) fueron
co-cultivados con células dendríticas purificadas de
ratones C57BL/6, en presencia o ausencia de linfocitos Treg de
BALB/c (2x10^{4} células/pocillo) y en presencia o ausencia de
péptido P60 (SEQ ID NO: 1)
(100 \muM). Como puede apreciarse, el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los linfocitos Treg sobre la proliferación de las células efectoras.
(100 \muM). Como puede apreciarse, el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los linfocitos Treg sobre la proliferación de las células efectoras.
La Figura 8 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la acción de
linfocitos Treg murinos naturales (purificados a partir de
esplenocitos de ratón) sobre la respuesta de células efectoras
frente a la estimulación por un antígeno (medida como producción de
IFN-\gamma al sobrenadante de cultivo). Los
linfocitos efectores aislados de ratones transgénicos OT1
(1x10^{5} células/pocillo) (Ejemplo 3 (apartado 3.2.3)) fueron
co-cultivados con células dendríticas CD de ratones
C57BL/6 y el péptido SIINFEKL (SEQ ID NO: 7) (10 \mug/ml), en
presencia o ausencia de linfocitos Treg de BALB/c (2x10^{4}
células/pocillo) y en presencia o ausencia de péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) (100 \muM). Como puede apreciarse, el péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los
linfocitos Treg sobre la producción de IFN-\gamma
por las células efectoras específicas de este antígeno
péptidico.
La Figura 9 es un diagrama de barras que muestra
el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la inhibición de la
activación del factor de transcripción NF-\kappaB
por la escurfina. Las células 293 fueron transfectadas con el
plásmido pNF-kB-Luc (Clontech, Ref
631904) que expresa luciferasa bajo un promotor inducible por el
factor de transcripción NF-kB, en presencia o
ausencia del plásmido pcDNA, pcDNA-Foxp3 y el
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100 \muM). Como puede apreciarse, la
presencia de escurfina en las células inhibe la expresión de
luciferasa y la presencia del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) restaura
esa expresión. U.R.: unidades relativas.
La Figura 10 ilustra el efecto de la
administración del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) en la potenciación de
la respuesta antitumoral de la vacunación con el péptido AH 1 (SEQ
ID NO: 8). Grupos de ratones BALB/c fueron inmunizados con suero
salino (grupo control n=11) o con el péptido AH1 (SEQ ID NO: 8)
emulsionado en adyuvante incompleto de Freund (IFA) (n=22) (tal
como se describe en Casares et al, 2003. J Immunol
171:5931-9). Once de los ratones inmunizados con el
péptido AH1 (SEQ ID NO: 8) fueron tratados con suero salino durante
los días 0, 2, 4, 6, 8 y 10 tras la inmunización, mientras que los
11 restantes fueron tratados con 50 nm/ratón del péptido P60 (SEQ
ID NO: 1) disuelto en suero salino y administrado por vía
intraperitoneal (i.p.). Se introdujo otro grupo control (n=11) de
ratones no inmunizados que fueron tratados solamente con el péptido
P60 (SEQ ID NO: 1) en tampón fosfato salino (PBS) siguiendo la
misma pauta de tratamiento del grupo anterior. La Figura l0A muestra
el promedio de crecimiento tumoral en diferentes grupos de ratones
BALB/c inoculados subcutáneamente con 5x10^{5} células tumorales
(CT26). Los diferentes grupos representan el promedio de evolución
tumoral en ausencia de tratamiento (Grupo control, triángulo
blanco), tratados solo con antígeno vacunal AH1(triángulo
negro), tratados solo con el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (círculo
blanco) o tratados con el antígeno vacunal en combinación con el
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (círculo negro). La Figura 10B muestra
las curvas de supervivencia de los diferentes grupos experimentales
(Representación de Kaplan-Meier). p<0,001 indica
el resultado del análisis estadístico mediante el test de
log-rank.
En un aspecto, la invención se relaciona con un
péptido, en adelante, péptido de la invención, con capacidad de
unión a escurfina, seleccionado entre:
- a)
- un péptido de fórmula general (I) que comprende la secuencia de aminoácidos:
(I)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X
- donde
- X está ausente, o bien, X está presente y es X_{14} o X_{14}-X_{15}, donde X_{14} y X_{15}, independientemente entre sí, representan un aminoácido;
- b)
- una variante del péptido definido en a); y
- c)
- un fragmento del péptido definido en a) o de una variante definida en b); y sus sales farmacéuticamente aceptables.
El término "péptido", tal como aquí se
utiliza, se refiere a un polímero formado por la unión, en un orden
definido, de alfa-aminoácidos mediante un enlace
peptídico, e incluye modificaciones o derivados del mismo, por
ejemplo, glicosilación, fosforilación, acetilación, amidación,
etc.
Los aminoácidos del péptido de la invención, en
función de la orientación del grupo amino que lleva el átomo de
carbono alfa, pueden pertenecer a la serie L o a la serie D,
preferentemente, a la serie L.
Los aminoácidos representados por X_{14} y
X_{15} pueden ser aminoácidos naturales o aminoácidos modificados
o poco comunes. Entre los aminoácidos naturales están los
aminoácidos alifáticos (glicina, alanina, valina, leucina e
isoleucina), los aminoácidos hidroxilados (serina y treonina), los
aminoácidos azufrados (cisteína y metionina), los aminoácidos
dicarboxílicos y sus amidas (ácido aspártico, asparagina, ácido
glutámico y glutamina), los aminoácidos que poseen dos grupos
básicos (lisina, arginina e histidina), los aminoácidos aromáticos
(fenilalanina, tirosina y triptófano) y los aminoácidos cíclicos
(prolina). Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de aminoácidos
modificados o poco comunes incluyen ácido
2-aminoadípico, ácido
3-aminoadípico, beta-alanina, ácido
2-aminobutírico, ácido
4-aminobutírico, ácido
6-aminocaproico, ácido
2-aminoheptanoico, ácido
2-aminoisobutírico, ácido
3-aminoisobutírico, ácido
2-aminopimélico, ácido
2,4-diaminobutírico, desmosina, ácido
2,2'-diaminopimélico, ácido
2,3-diaminopropiónico,
N-etilglicina, N-etilasparagina,
hidroxilisina, alo-hidroxilisina,
3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina,
isodesmosina, alo-isoleucina,
N-metilglicina, N-metilisoleucina,
6-N-metil-lisina,
N-metilvalina, norvalina, norleucina, orinitina,
etc.
El péptido de la invención se caracteriza por su
capacidad de unión a escurfina, y, ventajosamente, por su capacidad
de inhibir la actividad biológica de la escurfina. La capacidad de
unión de un péptido a la escurfina se puede determinar mediante
cualquier método apropiado que permita determinar la unión entre
dos moléculas (e.g., mediante un ensayo de afinidad), comprendiendo
dicho método poner en contacto la escurfina con el péptido a
ensayar bajo condiciones que permiten la unión de dicho péptido a la
escurfina y evaluar la unión entre el péptido y la escurfina. En
una realización particular, dicho ensayo de afinidad puede
realizarse utilizando la técnica de Resonancia de Plasmones de
Superficie (SPR) (Ejemplo 1.3), o técnicas similares que utilicen
escurfina marcada radiactivamente, o, alternativamente, marcando
radiactivamente el péptido a ensayar. En general, este tipo de
ensayos de afinidad comprende poner en contacto la escurfina, e.g.,
inmovilizada en los pocillos de una placa, con el péptido cuya
capacidad de unión a escurfina se desea conocer, y, tras incubar
durante un periodo de tiempo apropiado, analizar la unión del
péptido a la escurfina. Los péptidos con baja afinidad por la
escurfina se eliminan mediante lavados mientras que los péptidos con
mayor afinidad permanecen unidos a la escurfina y pueden ser
liberados rompiendo las interacciones moleculares entre ambas
moléculas, lo que puede realizarse, por ejemplo, bajando el pH.
Ventajosamente, el péptido de la invención se
caracteriza no solo por su capacidad de unión a escurfina, sino,
además, por su capacidad para inhibir la actividad biológica de la
escurfina, y, en consecuencia, indirectamente, regular o bloquear,
de forma transitoria o temporal, la actividad inmunosupresora de
los linfocitos Treg. Aunque no se desea estar vinculado a ninguna
teoría, se cree que la capacidad de un péptido de inhibir la
actividad biológica de la escurfina es debida a la unión directa de
dicho péptido a la escurfina. La capacidad de un péptido de inhibir
la actividad biológica de la escurfina se puede analizar, in
vitro, por cualquier método convencional apropiado ilustrativo
de tal efecto, e.g.:
- a)
- mediante un ensayo basado en la medida de la proliferación celular en un cultivo de linfocitos T efectores, en presencia de un anticuerpo anti-CD3, linfocitos Treg y timidina tritiada, y en presencia o ausencia del péptido a ensayar; o bien
- b)
- mediante un ensayo basado en el co-cultivo de esplenocitos de ratones transgénicos OT-1 (ratones en los que los linfocitos T presentan un receptor de la célula T específico para el péptido SIINFEKL (SEQ ID NO: 7) de la ovalbúmina) con linfocitos Treg en presencia de antígeno [péptido SIINFEKL (SEQ ID NO: 7)], en presencia o ausencia de linfocitos Treg, y en presencia o ausencia del péptido a ensayar; o bien, alternativamente
- c)
- mediante un ensayo basado en una respuesta mixta linfocitaria (MLR) en la que se mezclan células efectoras de un ratón (e.g., BALB/c) con células dendríticas obtenidas de otra cepa de ratón (e.g., C57BL/6) en presencia o en ausencia de linfocitos Treg obtenidos de un ratón de una de las estirpes (e.g., BALB/c) y en presencia o ausencia del péptido a ensayar.
Análogamente se pueden realizar experimentos
similares utilizando linfocitos Treg de origen humano. En el
Ejemplo 3 se describen detalladamente distintos ensayos dirigidos a
evaluar la capacidad del péptido a ensayar (e.g., un péptido de la
invención) de inhibir la actividad biológica de la escurfina in
vitro.
En una realización particular, el péptido de la
invención es un péptido de fórmula general (I) que comprende la
secuencia de aminoácidos:
Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X
donde X tiene el significado
indicado previamente en relación con la fórmula
(I).
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un péptido de fórmula general (Ia) [péptido de fórmula
(I) en el que X es X_{14}-X_{15}] y comprende, o
está constituido por, la secuencia de aminoácidos:
(Ia)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X_{14}-X_{15}
donde X_{14} y X_{15},
independientemente entre sí, representan un aminoácido natural
(e.g., Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Cys, Met, Asp, Asn, Glu,
Gln, Lys, Arg, His, Phe, Tyr, Trp o Pro) o un aminoácido modificado
o poco común (e.g., Aad, bAad, bAla, Abu, 4Abu, Acp, Ahe, Aib,
bAib, Apm, Dbu, Des, Dpm, Dpr, EtGly, EtAsn, Hyl, aHyl, 3Hyp, 4Hyp,
Ide, alíe, MeGly, Melle, MeLys, McVal, Nva, Nle u Orn). Aunque
X_{14} y X_{15} pueden ser iguales o diferentes, en una
realización concreta, X_{14} y X_{15} son diferentes, por
ejemplo, X_{14} es Ala y X_{15} es
Met.
En otra realización particular y preferida, el
péptido de la invención es un péptido que comprende, o está
constituido por, la secuencia de aminoácidos:
Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-Ala-Met | (SEQ ID NO: 1) |
El péptido constituido por la SEQ ID NO: 1 es
identificado en esta descripción, en ocasiones, como péptido
P60.
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un péptido de fórmula general (Ib) [péptido de fórmula
(I) en el que X es X_{14}] y comprende, o está constituido por,
la secuencia de aminoácidos:
(Ib)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X
donde X es X_{14}, donde X_{14}
representa un aminoácido natural tal como Gly, Ala, Val, Leu, Ile,
Ser, Thr, Cys, Met, Asp, Asn, Glu, Gln, Lys, Arg, His, Phe, Tyr, Trp
o Pro, o un aminoácido modificado o poco común (e.g., Aad, bAad,
bAla, Abu, 4Abu, Acp, Ahe, Aib, bAib, Aprn, Dbu, Des, Dpm, Dpr,
EtGly, EtAsn, Hyl, aHyl, 3Hyp, 4Hyp, Ide, alle, MeGly, Melle,
MeLys, MeVal, Nva, Nle u Orn), preferentemente
Ala.
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un péptido que comprende, o está constituido por, la
secuencia de aminoácidos:
Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-Ala | (SEQ ID NO: 2) |
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un péptido de fórmula general (Ic) [péptido de fórmula
(I) en el que X está ausente] y comprende, o está constituido por,
la secuencia de aminoácidos:
(Ic)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un péptido constituido por la secuencia de
aminoácidos:
Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe | (SEQ ID NO: 3) |
Ensayos realizados por los inventores han puesto
de manifiesto el importante papel que desempeña el extremo amino
terminal del péptido de fórmula general (I) en la capacidad de
unión del péptido a la escurfina ya que la eliminación del
aminoácido del extremo amino terminal (Arg) reduce drásticamente la
capacidad del péptido de unirse a la escurfina, mientras que la
eliminación de los residuos 14 ó 15 del extremo carboxilo terminal,
es decir, del resto "X", no afecta a la capacidad del péptido
de unirse a la escurfina (Ejemplo 1.4, Figura 2).
En otra realización particular, el péptido de la
invención es una variante del péptido de fórmula general (I)
definido en el apartado a). El término "variante", tal como
aquí se utiliza, se refiere a un péptido sustancialmente homólogo y
funcionalmente equivalente al péptido de fórmula general (I)
definido en el apartado a). Tal como aquí se utiliza, un péptido es
"sustancialmente homólogo" a otro péptido cuando su secuencia
de aminoácidos tiene un grado de identidad de, al menos, un 50%,
ventajosamente de, al menos, un 60%, preferentemente de, al menos,
un 70, más preferentemente de, al menos, un 80%, todavía más
preferentemente de, al menos, un 90%, y, aún más preferentemente
de, al menos, un 95%. Asimismo, la expresión "funcionalmente
equivalente", tal como aquí se utiliza, significa que el péptido
en cuestión (variante) mantiene la capacidad de unión a escurfina,
y, ventajosamente, de inhibir, in vitro y/o in vivo,
la actividad biológica de la escurfina. La capacidad de unión de un
péptido a la escurfina se puede determinar por cualquier método
convencional apropiado, tal como se ha mencionado previamente, por
ejemplo, mediante un ensayo de afinidad, tal como un ensayo de
afinidad basado en la técnica de Resonancia de Plasmones de
Superficie (SPR) (Ejemplo 1.3). Asimismo, la capacidad de un péptido
de inhibir la actividad biológica de la escurfina se puede
determinar por cualquier método convencional apropiado, tal como se
ha mencionado previamente, por ejemplo, mediante cualquiera de los
ensayos descritos en el Ejemplo 3. En una realización particular,
el péptido de la invención es una variante que presenta una o más
inserciones, deleciones y/o modificaciones de uno o más aminoácidos
de la secuencia de aminoácidos mostrada en el apartado a), y
mantiene la capacidad de unión a escurfina. En una realización
concreta, dicha variante comprende una o más sustituciones
conservativas de aminoácidos, respecto a la secuencia aminoacídica
previamente mencionada.
En otra realización particular, el péptido de la
invención es un fragmento del péptido de fórmula general (I)
definido en el apartado a) o de la variante definida en el apartado
b). El término "fragmento" tal como se utiliza en la presente
descripción se refiere a un péptido que comprende una porción de,
al menos, 5 aminoácidos consecutivos, del péptido de fórmula
general (I) definido en el apartado a), o de la variante definida
en el apartado b), es decir, una secuencia de, al menos, 5
aminoácidos contiguos comprendida dentro de la secuencia de
aminoácidos de la fórmula general (I) mencionada en dicho apartado
a), o de la variante definida en el apartado b), que mantiene la
capacidad de unión a escurfina. En una realización particular, el
péptido de la invención es un fragmento del péptido de fórmula
general (I) definido en a), o de la variante definida en b), que
comprende 5 o más (es decir, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 14 ó 15)
aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de la fórmula
general (I) mencionada en el apartado a), o de la variante definida
en el apartado b), en el que se han eliminado uno o más aminoácidos
bien del extremo amino terminal, bien del extremo carboxilo
terminal, o bien de ambos extremos, que mantiene la capacidad de
unión a escurfina, y, ventajosamente, la capacidad de inhibir la
actividad biológica de la escurfina. La capacidad de unión de un
fragmento peptídico a la escurfina se puede determinar por
cualquier método convencional apropiado, tal como se ha mencionado
previamente, por ejemplo, mediante un ensayo de afinidad, tal como
un ensayo de afinidad basado en la técnica de SPR (Ejemplo 1.3).
Análogamente, la capacidad de un fragmento peptídico de inhibir la
actividad biológica de la escurfina se puede determinar por
cualquier método convencional apropiado, tal como se ha mencionado
previamente, por ejemplo, mediante cualquiera de los ensayos
descritos en el Ejemplo 3.
Asimismo, dentro del alcance de esta invención
se encuentran las sales farmacéuticamente aceptables del péptido de
la invención. El término "sales farmacéuticamente aceptables",
tal como aquí se emplea, incluye las sales habitualmente utilizadas
para formar sales metálicas o sales de adición de ácidos. La
naturaleza de la sal no es critica siempre y cuando sea
farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables
del péptido de la invención pueden obtenerse a partir de ácidos o
bases, orgánicos o inorgánicos. Dichas sales pueden obtenerse por
métodos convencionales bien conocidos por los técnicos en la
materia.
En una realización particular y preferida, el
péptido de la invención es un péptido con capacidad de unión a la
escurfina e inhibir su actividad biológica cuya secuencia de
aminoácidos comprende o está constituida por la SEQ ID NO: 1, una
variante o fragmento del mismo, y sus sales farmacéuticamente
aceptables. Tal como se pone de manifiesto en los ejemplos que
acompañan a esta descripción, dicho péptido es capaz de unirse a
escurfina e inhibir su actividad biológica, e indirectamente, de
regular o bloquear, de forma transitoria, la actividad
inmunosupresora de los linfocitos Treg.
El péptido de la invención puede estar fusionado
a otro péptido constituyendo de este modo una proteína de fusión.
Puesto que la interacción entre el péptido de la invención y la
escurfina debe suceder en el interior de la célula (e.g., en el
citoplasma y/o en el núcleo), el péptido al que se fusiona el
péptido de la invención es, ventajosamente, un péptido capaz de
facilitar la entrada del péptido de la invención al interior de la
célula.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se
relaciona con una proteína de fusión de la invención que
comprende:
- (i)
- un péptido de la invención, y
- (ii)
- un péptido transportador con capacidad para internalizar un péptido en una célula.
Las características del péptido de la invención
ya han sido mencionadas previamente.
Un "péptido transportador con capacidad para
internalizar un péptido en una célula", en ocasiones
identificado en esta descripción como "péptido transportador",
es un péptido capaz de atravesar la membrana celular y penetrar en
una célula desde el exterior, característica que puede ser
conferida al péptido (e.g., péptido de la invención) al que está
fusionado (proteína de fusión de la invención) proporcionando de
este modo una alternativa al transporte de péptidos de interés
(e.g., péptidos de la invención) al interior de las células diana.
Este mecanismo de entrada de péptidos a la célula es conocido como
"transducción (o transporte) de proteínas" ("protein
transduction or delivery"). Se conocen diversos péptidos
transportadores con capacidad para internalizar un péptido en una
célula (Schwarze S.R. et al., Science, 1999 Sep 3;
285(5433):1569-72; Niesner U. et al.,
Bioconjug. Chem. 2002 Jul-Aug;
13(4):729-36; Ford K.G. et al., Gene
Therapy, 2001; 8:1-4; y Gusarova G.A. et
al., J. Clin. Invest. 2007 Jan;
117(1):
99-111).
99-111).
Prácticamente cualquier péptido transportador
con capacidad para internalizar un péptido en una célula puede ser
utilizado para la puesta en práctica de la presente invención; no
obstante, en una realización particular, dicho péptido transportador
es un péptido que comprende un segmento "PTD" (del inglés
"protein transduction domain"). Ejemplos ilustrativos, no
limitativos, de proteínas que comprenden dichos dominios de
transducción de proteínas (PTD) incluyen la proteína TAT (del inglés
"transacting translational protein") del virus de la
inmunodeficiencia humana 1 (HIV-1), el factor de
transcripción homeótico (Antp) de Drosophila antennapedia y
la proteína de unión al ADN VP22 de herpesvirus simples 1
(HSV-1), aunque también se ha sugerido que esta
propiedad de internalizar péptidos en células la poseen otras
proteínas tales como la hemaglutinina de virus influenza, la
lactoferrina, el factor de crecimiento de fibroblastos 1, el factor
de crecimiento de fibroblastos 2 y las proteínas
Hoxa-5, Hoxb-4 y
Hoxc-8 (Ford K.G. et al., Gene Therapy,
2001; 8:1-4).
En una realización particular, dicho péptido
transportador es un péptido derivado de la proteína TAT del
HIV-1, que comprende la secuencia responsable de la
transducción de péptidos, cuyo dominio básico (PTD) comprende los
restos 49-57 de dicha proteína TAT de
HIV-1, concretamente, la secuencia aminoacídica
RKKRRQRRR (SEQ ID NO: 9), o los restos 47-57 de
dicha proteína TAT de HIV-1, tal como el péptido
cuya secuencia de aminoácidos es YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 10) o el
péptido cuya secuencia de aminoácidos es CGISYGRKKRRQRRR (SEQ ID
NO: 11).
En otra realización particular, dicho péptido
transportador es un péptido derivado de la proteína Antp de D.
antennapedia, que comprende el homeodominio de antennapedia
(AntpHD) que comprende el dominio responsable de la transducción de
péptidos (PTD) [restos 43-58 de dicha proteína
Antp), que comprende la secuencia aminoacídica RQIKIWFQNRRMKWKK
(SEQ ID NO: 12), o un fragmento funcional del mismo.
En otra realización particular, dicho péptido
transportador es un péptido derivado de la proteína VP22 de
HSV-1 que comprende un dominio responsable de la
transducción de péptidos (PTD).
En otra realización particular, dicho péptido
transportador es un péptido derivado de la proteína supresora de
tumores ARF (del inglés "alternative reading frame") que
comprende la secuencia aminoacídica responsable de la capacidad del
péptido de penetrar en las células, tal como el fragmento que
comprende los restos 26-44 de dicha proteína ARF,
concretamente, la secuencia aminoacídica KFVRSRRPRTASCALAFVN (SEQ
ID NO: 13), o un fragmento del mismo que comprende los restos
37-44 de dicha proteína ARF, concretamente, la
secuencia aminoacídica SCALAFVN (SEQ ID NO: 14).
El péptido de la invención puede estar unido a
cualquiera de los extremos (amino o carboxilo) terminal del péptido
transportador con capacidad para internalizar un péptido de la
invención en una célula. Por tanto, en una realización particular,
el extremo carboxilo terminal del péptido de la invención está
unido al extremo amino terminal de dicho péptido transportador,
mientras que, en otra realización particular, el extremo amino
terminal del péptido de la invención está unido al extremo carboxilo
terminal de dicho péptido transportador.
El péptido de la invención puede estar unido
directamente, o no, a dicho péptido transportador con capacidad
para internalizar un péptido en una célula. Por tanto, en una
realización particular, el péptido de la invención [péptido (i)]
está unido directamente a dicho péptido transportador [péptido
(ii)], mientras que, en otra realización particular, el péptido de
la invención [péptido (i)] está unido a dicho péptido transportador
[péptido (ii)] a través de un péptido espaciador ("linker" o
"spacer") entre dichos péptidos (i) y (ii). En consecuencia,
si se desea, la proteína de fusión de la invención puede contener,
además, un péptido espaciador situado entre dicho péptido de la
invención [péptido (i)] y dicho péptido transportador [péptido
(ii)]. Ventajosamente, dicho péptido espaciador es un péptido con
flexibilidad estructural, tal como un péptido que da lugar a un
dominio no estructurado. Prácticamente cualquier péptido con
flexibilidad estructural puede ser utilizado como péptido
espaciador; no obstante, ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
dichos péptidos espaciadores incluyen péptidos que contienen
repeticiones de restos de aminoácidos, e.g., de Gly y/o Ser, o
cualquier otra repetición adecuada de restos de aminoácidos.
Opcionalmente, si se desea, la proteína de
fusión de la invención puede incluir una secuencia aminoacídica
útil para el aislamiento o purificación de la proteína de fusión de
la invención. Dicha secuencia estará situada en una región de la
proteína de fusión de la invención que no afecte adversamente a la
funcionalidad del péptido de la invención. Prácticamente cualquier
secuencia de aminoácidos que pueda ser utilizada para aislar o
purificar una proteína de fusión (denominadas genéricamente péptidos
etiqueta o "tag") puede estar presente en dicha proteína de
fusión de la invención. A modo ilustrativo, no limitativo, dicha
secuencia aminoacídica útil para aislar o purificar una proteína de
fusión puede ser, por ejemplo, una cola de argininas
(Arg-tag), una cola de histidinas
(His-tag), FLAG-tag,
Strep-tag, un epítopo susceptible de ser reconocido
por un anticuerpo, tal como
c-myc-tag, SBP-tag,
S-tag, péptido de unión a calmodulina, dominio de
unión a celulosa, dominio de unión a quitina, glutatión
S-transferasa-tag, proteína de
unión a maltosa, NusA, TrxA, DsbA, Avi-tag, etc.
(Terpe K., Appl. Microbiol. Biotechnol. (2003),
60:523-525), \beta-galactosidasa,
VSV-glicoproteína (YTDIEMNRLGK) (SEQ ID NO: 15), o
una secuencia de aminoácidos tal como: Ala His Gly His Arg Pro (SEQ
ID NO: 16) (2, 4, y 8 copias), Pro Ile His Asp His Asp His Pro His
Leu Val Ile His Ser (SEQ ID NO: 17), etc.
El péptido de la invención tiene capacidad de
unión a escurfina, y, además, ventajosamente, capacidad para
inhibir la actividad biológica de la escurfina, con lo que es
capaz, indirectamente, de regular o bloquear de forma transitoria la
actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg. Por tanto, una
ventaja importante del péptido de la invención radica en que
mediante su empleo se puede regular o bloquear, de forma
transitoria o temporal, la actividad inmunosupresora de los
linfocitos Treg. Al contrario que otros métodos conocidos para
inhibir la actividad de los linfocitos Treg basados en el empleo de
anticuerpos frente a marcadores de superficie, la utilización de los
péptidos de la invención, es decir, péptidos con capacidad de unión
a la escurfina y, en particular, con capacidad para inhibir la
actividad biológica de la escurfina mediante su unión directa a
dicha proteína, no elimina los linfocitos Treg lo que permite un
control temporal más fino sobre su actividad. Aunque no se desea
estar vinculado a ninguna teoría se cree que los péptidos de la
invención, debido a su pequeño tamaño, pueden introducirse en las
células para bloquear la acción de la escurfina.
Debido al papel que desempeñan los linfocitos
Treg en numerosos procesos biológicos y al hecho de que la
escurfina es esencial para su actividad inmunosupresora, el empleo
de los péptidos de la invención abre una ventana a un potencial
desarrollo de una nueva familia de fármacos potencialmente útiles
en el tratamiento de las enfermedades neoplásicas y de las
enfermedades infecciosas. La inhibición de la actividad biológica
de la escurfina permite que los péptidos de la invención puedan
regular o bloquear, de forma transitoria o temporal, la actividad
inmunosupresora de los linfocitos Treg, con lo que pueden
desarrollarse terapias para el tratamiento de enfermedades
neoplásicas o de enfermedades infecciosas en las que, además, se
controle de forma selectiva y transitoria la acción de dichos
linfocitos Treg de manera que se reduzca el riesgo de inducción de
autoinmunidad como consecuencia de su eliminación.
Por tanto, los péptidos de la invención, así
como las proteínas de fusión de la invención, pueden ser utilizados
en el tratamiento de una patología en la que sea conveniente o
necesario regular o inhibir, de forma transitoria o temporal, la
actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg, tal como sucede en
el caso de las enfermedades neoplásicas o de las enfermedades
infecciosas en las que los linfocitos Treg pueden jugar un papel
inmunosupresor impidiendo la correcta activación de una respuesta
inmune eficaz. Es conocido, en humanos, que los linfocitos Treg son
capaces de suprimir la acción beneficiosa de las células T
anti-tumorales en casos de melanoma (Wang, H. Y., J
Immunol, 2005. 174:2661-2670; Viguier, M., F. J
Immunol, 2004. 173:1444-1453), cáncer de pulmón
(Woo, E. Y., Cancer Res, 2001 61:4766-4772), cáncer
de ovario (Woo, E. Y., Cancer Res, 2001.
61:4766-4772, Curiel, T. J., Nat Med, 2004.
10:942-949), cáncer de páncreas y cáncer de mama
(Liyanage, U. K., J Immunol, 2002. 169:2756-2761)
así como en hepatocarcinomas (Ormandy, L. A. Cancer Res, 2005.
65:2457-2464; Kobayashi, N., Clin Cancer Res, 2007.
13:902-911). En enfermedades infecciosas, el
control ejercido por los linfocitos Treg puede limitar la magnitud
de las respuestas efectoras T y provocar el fallo en el control de
la infección. Así, se ha descrito que algunos virus, e.g., el virus
de la hepatitis B (Xu, D. J Immunol, 2006.
177:739-747), el virus de la hepatitis C (Boettler,
T., J Virol, 2005. 79:7860- 7867; Cabrera, R. Hepatology, 2004.
40:1062-1071; Rushbrook, J Virol, 2005. 79:7852-
7859; Sugimoto, K. Hepatology, 2003. 38:1437-1448) y
el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) (Aandahl, E. M. J
Virol, 2004. 78:2454-2459; Kinter, A. L. J Exp Med,
2004. 200:331-343; Oswald-Richter,
K. PLoS Biol 2004. 2:E198; Weiss, L. Blood, 2004.
104:3249-3256) pueden servirse de los linfocitos
Treg para bloquear la respuesta inmunitaria antiviral y permitir de
ese modo el establecimiento de la infección crónica
persistente.
Ejemplos ilustrativos de las patologías que
pueden ser potencialmente tratadas con los péptidos y proteínas de
fusión de la invención incluyen las enfermedades neoplásicas y las
enfermedades infecciosas. Tal como aquí se utiliza, el término
"enfermedades neoplásicas" incluye tanto tumores (es decir,
alteraciones de los tejidos que producen un aumento de volumen, en
particular, bultos debidos a un aumento en el número de células que
lo componen, independientemente de que sean de carácter benigno o
maligno), como cáncer (enfermedad que se caracteriza por una
proliferación descontrolada de células anormales capaces de invadir
tejidos adyacentes y diseminarse a órganos lejanos). Asimismo, el
término "enfermedades infecciosas" se refiere, en general, a
enfermedades causadas por agentes infecciosos, e.g., virus,
bacterias, hongos, parásitos, etc. En este tipo de procesos,
infecciosos o neoplásicos (cancerosos), los linfocitos Treg ejercen
un efecto negativo, puesto que son capaces de inhibir la activación
de respuestas inmunitarias frente a los procesos infecciosos o
neoplásicos que favorecerían la curación.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
infecciones virales que pueden ser tratadas con los péptidos y
proteínas de fusión de la invención incluyen prácticamente
cualquier infección de origen viral, por ejemplo, infecciones
causadas por el virus de la hepatitis B, hepatitis C, HIV,
papilomavirus humano, herpesvirus, por ejemplo, herpesvirus
humanos, tales como virus herpes simplex tipo 1
(HSV-1), virus herpes simplex tipo 2
(HSV-2), virus de la varicella zoster (VZV),
citomegalovirus (CMV), herpesvirus humano 6
(HHV-6), herpesvirus humano 7
(HHV-7), virus de Epstein-Barr
(EBV), herpesvirus de Kaposi (HHV-8), etc.,
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
infecciones bacterianas que pueden ser tratadas con los péptidos y
proteínas de fusión de la invención incluyen, aunque no se limitan
a infecciones causadas por Mycobacterium leprae, infecciones
causadas por Mycobacterium tuberculosis, infecciones
causadas por Yersinia pestis, infección gástrica causada por
Helicobacter pylori, etc.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
infecciones fúngicas que pueden ser tratadas con los péptidos y
proteínas de fusión de la invención incluyen, aunque no se limitan
a, infecciones causadas por Candida albicans, infecciones
causadas por Trichophyton rubrum, infecciones causadas por
Aspergillus sp., etc.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
infecciones parasitarias que pueden ser tratadas con los péptidos y
proteínas de fusión de la invención incluyen, aunque no se limitan
a, leishmaniasis, e.g., leishmaniasis visceral, infecciones como la
malaria causadas por parásitos del Plasmodium,
toxoplasmosis, etc.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de
enfermedades neoplásicas que pueden ser tratados con los péptidos y
proteínas de fusión de la invención incluyen, aunque no se limitan
a, papilomas, adenomas, lipomas, osteomas, miomas, angiomas, nevus,
teratomas maduros, carcinomas, sarcomas o teratomas inmaduros, por
ejemplo, melanoma, mieloma, leucemia, linfoma de Hodgkin,
basolioma, espinolioma, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de
útero, cáncer de pulmón, cáncer de bronquios, cáncer de próstata,
cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, cáncer de
esófago, hepatocarcinoma, cáncer de cuello y cabeza, etc.
En general, cualquier proceso infeccioso o
neoplásico en el que los linfocitos Treg ejerzan un papel
inmunosupresor, que podría afectar a la curación de la patología
que padece un sujeto puede ser susceptible de ser tratado con el
péptido de la invención.
Asimismo, los péptidos y proteínas de fusión de
la invención de la invención pueden ser utilizados para potenciar
vacunas antivirales o antitumorales, ya que su administración tras
la vacunación, y el consiguiente bloqueo de los linfocitos Treg por
los péptidos de la invención durante su administración, permitiria
potenciar la respuesta a los componentes de la vacuna.
Adicionalmente, parece que los linfocitos Treg
pueden jugar un papel central en la tolerancia oral a un antígeno
(Huibregtse, I. L. Gastroenterology, 2007.
133:517-528), por lo que los péptidos de la
invención podrían utilizarse en situaciones en las que se desee
romper esa tolerancia a los antígenos administrados oralmente.
Para su administración a un sujeto, el péptido
de la invención, o la proteína de fusión de la invención, se
formulará en una composición farmacéutica apropiada. El término
"sujeto", tal como aquí se utiliza, se refiere a cualquier
miembro de una especie de un mamífero e incluye, pero no se limita,
a animales domésticos, primates y humanos; el sujeto es
preferiblemente un ser humano masculino o femenino de cualquier
edad o raza.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se
relaciona con una composición farmacéutica, en adelante composición
farmacéutica de la invención, que comprende una cantidad
terapéuticamente eficaz de un péptido de la invención, o de una
proteína de fusión de la invención, junto con, al menos, un
excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicha composición
farmacéutica es útil para su administración y/o aplicación en el
cuerpo humano o animal, preferentemente en el cuerpo humano.
La composición farmacéutica de la invención
puede contener uno o más péptidos o proteínas de fusión de la
invención, junto con, opcionalmente, uno o más, compuestos
reguladores o inhibidores de la actividad inmunosupresora de
linfocitos Treg alternativos, diferentes a los péptidos y proteínas
de fusión de la invención. Prácticamente, cualquier compuesto
inhibidor o regulador de la actividad inmunosupresora de los
linfocitos Treg, independientemente de su mecanismo de acción
(e.g., a través de la inhibición de la escurfina o a través de otros
mecanismos), distinto a los péptidos y proteínas de fusión de la
invención, puede estar presente, si se desea, en la composición
farmacéutica de la invención. Ejemplos ilustrativos, no limitativos,
de compuestos inhibidores o reguladores de la actividad de
linfocitos Treg alternativos, distintos a los péptidos y proteínas
de fusión de la invención, que pueden emplearse junto con los
péptidos y proteínas de fusión de la invención incluyen, aunque no
se limitan a, anticuerpos anti-CD25,
anti-CTLA4, anti-GITR, compuestos
inhibidores de las citoquinas TGF-beta,
IL-10 o IL-9, quimioterápicos tales
como la ciclofosfamida o la fludarabina, o inhibidores de
quimiocinas CCL17 o CCL22 entre otras.
El empleo de los péptidos de la invención, en
lugar de anticuerpos presenta numerosas ventajas, ya que dichos
péptidos son moléculas pequeñas, presentan mayor capacidad de
difusión y una vida media más corta. Los péptidos de la invención
poseen una elevada afinidad por la escurfina pero se degradan más
rápidamente que los anticuerpos pudiéndose controlar los posibles
efectos secundarios adversos mediante una dosificación apropiada de
los péptidos de la invención. Por otro lado, la mayoría de los
anticuerpos frente a los linfocitos Treg provocan la eliminación de
dichas células y, por tanto, su efecto es más duradero con lo que
aumenta el riesgo de inducir enfermedades autoinmunes (Stephens, L.
A., Proc Natl Acad Sci U S A, 2005.
102:17418-17423). El empleo de proteínas de fusión
de la invención también presenta numerosas ventajas ya que
facilitan la entrada del péptido de la invención en la célula, con
lo que aumenta la actividad inhibitoria de la actividad de la
escurfina de los péptidos de la invención ya que la interacción
entre el péptido de la invención y la escurfina debe realizarse en
el interior de la célula (e.g., en el citoplasma o, tal vez, en el
núcleo).
Para el tratamiento de las patologías para las
que están indicados, e.g., enfermedades infecciosas o neoplásicas,
los péptidos y proteínas de fusión de la invención pueden
administrarse por cualquier medio que produzca el contacto del
péptido de la invención con el sitio de acción del mismo en el
cuerpo humano o animal. La cantidad de péptido, derivado o sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, o de proteína de fusión de
la invención, que puede estar presente en la composición
farmacéutica proporcionada por esta invención puede variar dentro de
un amplio intervalo.
La dosificación para tratar dichas patologías
con los péptidos, proteínas de fusión y/o composiciones
farmacéuticas de la invención dependerá de numerosos factores,
incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la
enfermedad o patología, la ruta y frecuencia de administración y
del péptido o proteína de fusión de la invención a administrar.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el
péptido o la proteína de fusión de la invención pueden presentarse
en cualquier forma de administración, por ejemplo, sólida o
líquida, y pueden administrarse por cualquier vía apropiada, por
ejemplo, por vía oral, parenteral, rectal o tópica, para lo cual
incluirán los excipientes farmacéuticamente aceptables necesarios
para la formulación de la forma de administración deseada, por
ejemplo, pomadas (lipogeles, hidrogeles, etc.), colirios, aerosoles
por nebulización, soluciones inyectables, bombas osmóticas, etc. Una
revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de
medicamentos y de los excipientes necesarios para la obtención de
las mismas puede encontrarse, por ejemplo, en el "Tratado de
Farmacia Galénica", C. Faulí i Trillo, 1993, Luzán 5, S.A.
Ediciones, Madrid; y en Remington's Pharmaceutical Sciencies (A.R.
Gennaro, Ed.), 20ª edición, Williams & Wilkins PA, USA
(2000).
El empleo de los péptidos y proteínas de fusión
de la invención en la elaboración de la composición farmacéutica de
la invención constituye un aspecto adicional de esta invención. Por
tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con el empleo de
un péptido de la invención, o de una proteína de fusión de la
invención, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento
de una patología en la que sea conveniente o necesario, regular o
bloquear, de forma transitoria o temporal, la actividad
inmunosupresora de los linfocitos Treg, tales como las enfermedades
infecciosas (e.g., infecciones virales, bacterianas, infecciones
fúngicas, infecciones parasitarias, etc.) y enfermedades
neoplásicas, e.g., cáncer y tumores.
Asimismo, en otro aspecto, la invención se
relaciona con el empleo de un péptido de la invención, o de una
proteína de fusión de la invención, en el tratamiento de una
patología en la que sea conveniente o necesario, regular o bloquear,
de forma transitoria o temporal, la actividad inmunosupresora de
los linfocitos Treg, tales como las enfermedades infecciosas (e.g.,
infecciones virales, bacterianas, infecciones fúngicas, infecciones
parasitarias, etc.) y enfermedades neoplásicas, e.g., cáncer y
tumores.
El péptido de la invención se puede obtener por
métodos sintéticos convencionales, por ejemplo, mediante técnicas
de síntesis química sobre fase sólida, y purificar mediante métodos
convencionales, por ejemplo, mediante cromatografia líquida de alta
resolución (HPLC). Adicionalmente, si se desea, se puede analizar
mediante técnicas convencionales, por ejemplo, mediante
secuenciación y espectrometria de masas, análisis de aminoácidos,
resonancia magnética nuclear, etc. A modo ilustrativo, no
limitativo, el péptido de la invención puede obtenerse mediante
síntesis peptídica siguiendo procedimientos convencionales
(Merrifield RB. J Am Chem Soc 1963; 85:2149-2154)
utilizando la variante Fmoc de Atherton (Atherton, E., Logan, J. C.
and Sheppard, R. C. 1989. Peptide synthesis II. Procedures for solid
phase synthesis using N-fluorenyl methoxycarbonyl
aminoacids on polyamide supports. Sintesis of substance P and of
acyl carrier protein 65-74 decapeptide. J. Chem.
Soc. Perkin Trans. 1:538). La pureza del péptido obtenido puede
determinarse mediante, por ejemplo, cromatografia HPLC de fase
inversa y/o espectrometria de masas.
La proteína de fusión de la invención puede
obtenerse mediante una reacción de copulación del péptido de la
invención y del péptido transportador con capacidad para
internalizar un péptido de la invención en una célula, los cuales
han podido ser obtenidos bien por métodos sintéticos
convencionales, tales como los que se han mencionado previamente
(e.g., síntesis química sobre fase sólida), o bien mediante
técnicas recombinantes.
Alternativamente, el péptido de la invención, y
la proteína de fusión de la invención, pueden obtenerse mediante la
tecnología del ADN recombinante. Por tanto, en otro aspecto, la
invención proporciona una secuencia de ADN que codifica un péptido
o una proteína de fusión de la invención. Dicha secuencia de ADN
puede ser deducida fácilmente a partir de la secuencia de
aminoácidos del péptido o de la proteína de fusión de la
invención.
Dicha secuencia de ADN puede estar contenida en
una construcción de ADN. Por tanto, en otro aspecto, la invención
proporciona una construcción de ADN que comprende una secuencia de
ADN que codifica un péptido o proteína de fusión de la invención.
Dicha construcción de ADN puede incorporar, operativamente unida,
una secuencia reguladora de la expresión de la secuencia de ADN que
codifica el péptido o proteína de fusión de la invención. Las
secuencias de control son secuencias que controlan y regulan la
transcripción y, en su caso, la traducción del péptido o proteína de
fusión de la invención, e incluyen secuencias promotoras,
terminadoras, etc., funcionales en células hospedadoras
transformadas que comprenden dicha secuencia o construcción de ADN.
En una realización particular, dicha secuencia de control de
expresión es funcional en bacterias. Ventajosamente, dicha
construcción de ADN comprende, además, un marcador o gen que
codifica un motivo o para un fenotipo que permita la selección de
la célula hospedadora transformada con dicha construcción de ADN.
La construcción de ADN proporcionada por esta invención puede
obtenerse mediante el empleo de técnicas ampliamente conocidas en
el estado de la técnica (Sambrook et al., "Molecular
cloning, a Laboratory Manual", 2^{nd} ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, N.Y., 1989 Vol 1-3).
La secuencia de ADN o la construcción de ADN
proporcionadas por esta invención, pueden ser insertadas en un
vector apropiado. Por tanto, en otro aspecto, la invención se
relaciona con un vector, tal como un vector de expresión, que
comprende dicha secuencia o construcción de ADN. La elección del
vector dependerá de la célula hospedadora en la que se va a
introducir posteriormente. A modo de ejemplo, el vector donde se
introduce dicha secuencia de ADN puede ser un plásmido o un vector
que, cuando se introduce en una célula hospedadora, se integra o no
en el genoma de dicha célula. La obtención de dicho vector puede
realizarse por métodos convencionales conocidos por los técnicos en
la materia (Sambrok et al., 1989, citado supra).
En otro aspecto, la invención se relaciona con
una célula hospedadora, tal como una célula hospedadora
transformada, que comprende una secuencia de ADN o una construcción
de ADN proporcionadas por esta invención o un vector según se ha
mencionado anteriormente. Dicha célula puede ser una célula
procariota o eucariota.
Asimismo, en otro aspecto, la invención se
relaciona con un procedimiento para producir un péptido de la
invención, o una proteína de fusión de la invención, que comprende
crecer una célula hospedadora que comprende la secuencia,
construcción de ADN o vector proporcionados por esta invención bajo
condiciones que permiten la producción de dicho péptido o proteína
de fusión de la invención y, si se desea, recuperar dicho péptido o
proteína de fusión de la invención. Las condiciones para optimizar
el cultivo de dicha célula hospedadora dependerán de la célula
hospedadora utilizada. Si se desea, el procedimiento para producir
el péptido o la proteína de fusión de la invención incluye, además,
el aislamiento y purificación de dicho péptido o proteína de
fusión.
\newpage
Por otra parte, dichas secuencias de ADN y
construcciones de ADN proporcionadas por esta invención pueden ser
utilizadas en la elaboración de vectores y células para tratar una
patología en la que sea conveniente o necesario regular o bloquear,
de forma transitoria, la actividad inmunosupresora de los linfocitos
Treg. Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con el
empleo de dichas secuencias de ADN y construcciones de ADN en la
elaboración de vectores y células para el tratamiento de una
patología en la que sea conveniente o necesario regular o bloquear,
de forma transitoria, la actividad inmunosupresora de los linfocitos
Treg, por ejemplo, infecciones virales, bacterianas, fúngicas,
parasitarias, etc., y enfermedades neoplásicas. De acuerdo con este
aspecto de la invención, dicha secuencia o construcción de ADN se
ponen en contacto con un vector de transferencia génica, tal como un
vector viral o no viral. Vectores virales apropiados para poner en
práctica esta realización de la invención incluyen, pero no están
limitados a, vectores adenovirales, vectores adenoasociados,
vectores retrovirales, vectores lentivirales, vectores alfavirales,
vectores herpesvirales, vectores derivados de coronavirus, etc.
Vectores de tipo no viral apropiados para poner en práctica esta
realización de la invención incluyen, pero no se limitan a ADN
desnudo, liposomas, poliaminas, dendrimeros, glicopolímeros
catiónicos, complejos liposoma-policatión,
proteínas, sistemas de transferencia génica mediados por receptor,
etc.
Para identificar inicialmente péptidos con
capacidad de unión a escurfina se ha utilizado la tecnología
asociada con las librerías de fagos. Esta técnica permite
identificar péptidos que presentan una unión de alta afinidad con
una proteína determinada (e.g., escurfina) y cuantificar,
posteriormente, mediante ensayos in vitro, su capacidad de
inhibir la actividad biológica de la proteína en cuestión. En este
caso, dicha proteína es la escurfina y la inhibición de su
actividad biológica permite regular o bloquear, indirectamente, la
actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg. La secuencia de
los péptidos que se unen a la escurfina, inhibiendo su actividad
biológica, se puede deducir a partir de la secuencia del ADN
correspondiente al cabo de varios ciclos de "biopanning",
generalmente 3. El empleo de librerías de fagos para identificar
inhibidores de ciertos productos ha sido descrito, por ejemplo, por
Chirinos-Rojas C.L. et al., en Immunology,
1999, Jan. 96(1):109-113; McConnell S.J.,
et al., en Gene 1994, Dec. 30,
151(1-2):115-118; o por Smith
G.P., Science, 1985, Jun. 14,
228(4705):1315-1317.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se
relaciona con un método para la identificación de péptidos con
capacidad de unión a escurfina que comprende:
- (i)
- utilizar una librería de fagos que comprende una pluralidad de fagos filamentosos, conteniendo el genoma de cada uno de dichos fagos una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido diferente ligada al gen de una proteína de la cubierta del fago, con lo que cada fago contiene un péptido diferente genéticamente fusionado a una proteína de la cubierta del fago;
- (ii)
- seleccionar, mediante un ensayo de afinidad, los fagos que contienen los péptidos que se unen con mayor afinidad a escurfina; y
- (iii)
- determinar la secuencia de los péptidos que se unen a escurfina, a partir de las secuencias de ADN correspondientes insertadas en los fagos seleccionados en la etapa (ii) y que codifican dichos péptidos que se unen a escurfina.
En una realización particular, con el fin de
obtener péptidos de una longitud de 15 aminoácidos capaces de
unirse con alta afinidad a la escurfina y con posible actividad
inhibitoria de su actividad biológica, se utilizó una librería de
fagos compuesta por una pluralidad de bacteriófagos filamentosos
(M13) conteniendo cada uno de ellos un péptido diferente, de 15
aminoácidos, genéticamente fusionado a una proteína de la cubierta
del fago, en este caso unido al extremo N-terminal
de la proteína de cubierta pIII. De esta forma, el fago presenta
sobre su superficie un péptido de 15 aminoácidos, en cada una de
las 5 moléculas de la proteína de superficie, mientras en su
interior contiene el ADN que codifica dicha secuencia peptídica. En
las librerías de fagos, la secuencia codificante del péptido
proviene de una secuencia degenerada en cada una de las 15
posiciones con los 20 aminoácidos naturales, lo que permite la
presentación de 1,1x10^{12} secuencias posibles de 15 aminoácidos
en diferentes fagos. La relación física, 1 a 1, entre la secuencia
peptídica y el ADN que lo codifica en el bacteriófago permite
seleccionar, de entre un gran número de variantes, aquellas
secuencias que se unen específicamente a la escurfina. Este proceso
se realiza mediante un ensayo de afinidad.
En una realización particular, dicho ensayo de
afinidad consiste en un protocolo de selección in vitro
denominado "biopanning". Brevemente, dicha técnica consiste en
la incubación de un conjunto de fagos representantes, a efectos
prácticos, de todas las variantes de péptidos de 15 aminoácidos (en
este caso), en una placa tapizada con escurfina, presentada
correctamente para su interacción con los péptidos portados por los
fagos. Tras una incubación se eliminan los fagos no unidos mediante
lavados y posteriormente se eluyen los fagos unidos
específicamente, mediante un descenso de pH que rompe las
interacciones moleculares entre la escurfina y los péptidos
presentados por los fagos. Los fagos eluidos son, entonces,
amplificados mediante infección en una cepa bacteriana. El proceso
se repite un total de 3 rondas, de manera que el contenido de fagos
que se unen específicamente y con alta afinidad a la escurfina se va
enriqueciendo. La concentración de escurfina utilizada para
bloquear las placas se va reduciendo progresivamente en cada ronda,
por ejemplo, de 2,5 a 0,02 \mug/mL y, finalmente, 0,002
\mug/mL. De este modo, los fagos seleccionados en cada ronda
presentan cada vez mayor grado de afinidad por la escurfina. Al
final del proceso, los fagos que han sido seleccionados por su
afinidad por escurfina son secuenciados con cebadores. Esto permite
obtener las secuencias de los péptidos presentados en los fagos.
Tras la realización de este screening, se pueden realizar ensayos de
confirmación de la capacidad de interacción entre dichos péptidos y
la escurfina por medio de la técnica de Resonancia de Plasmones de
Superficie (SPR) de interacción biomolecular, tal como se muestra
en la Figura 1 y que muestra cómo el péptido P60 (SEQ ID NO: 1),
identificado mediante esa técnica, se une a la escurfina
específicamente.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención y
no deben ser considerados limitativos del alcance de la misma.
\vskip1.000000\baselineskip
La selección de péptidos con capacidad de unión
a la escurfina y posible actividad inhibitoria de su actividad
biológica, se llevó a cabo mediante una técnica de selección in
vitro basada en la tecnología desarrollada a partir de las
librerías de fagos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para producir escurfina se partió del plásmido
pDEST15-FOXP3, un vector de expresión de escurfina
unida a glutation-S-transferasa
(GST) como proteína de fusión, cedido amablemente por el Dr.
Ignacio Casal (Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas, CNIO,
Madrid, España). Dicho plásmido se clonó en bacterias
Escherichia coli BL21 competentes para la expresión y
posterior purificación de la proteína (escurfina). La expresión de
dicha proteína se realizó a partir de un cultivo de 0,5 litros de
medio de cultivo LB (Sigma, St Louis). El pellet bacteriano se lisó
en una prensa de French (Thermo Electron Corporation) de manera que
la escurfina quedaba en el sobrenandante. La purificación de la
escurfina se llevó a cabo mediante cromatografia de afinidad usando
columnas de afinidad GSTrap (Ref 17513001, Amersham, Pharmacia) y
la plataforma de un cromatógrafo de FPLC (fast protein liquid
chromatography) (Akta FPLC, Amersham Biosciences). Con las
fracciones recogidas se realizó un Western Blot para verificar la
existencia de la proteína, utilizando anticuerpos
anti-Foxp3 (ab10564, Abcam). Una vez aislada y
purificada la escurfina, se iniciaron las rondas de unión/elución
con la librería de fagos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para identificar péptidos con capacidad de
unirse a escurfina se ha utilizado la tecnología asociada con las
librerías de fagos. Esta técnica permite identificar péptidos que
presentan una unión de alta afinidad con una proteína determinada
(en este caso, escurfina), y cuantificar, posteriormente, mediante
ensayos in vitro, la capacidad de los distintos péptidos
para inhibir la actividad biológica de dicha proteína. La secuencia
de los péptidos que se unen a la escurfina se puede deducir a
partir de la secuencia del ADN correspondiente al cabo de varios
ciclos de "biopanning" (generalmente 3).
La librería de fagos utilizada para la
realización de este ejemplo contiene 2 x 10^{8} clones distintos
y ha sido cedida por el laboratorio de George P. Smith (Division of
Biological Sciences Tucker Hall, University of Missouri, EE.UU.).
Los fagos presentes en dicha librería de fagos fueron amplificados
y purificados antes de proceder con la selección (biopanning). Para
ello, 10 pl de dicha librería de fagos fueron amplificados
empleando como cepa huésped E. coli K91 Kan (suministrada por
George P. Smith, Division of Biological Sciences Tucker Hall,
University of Missouri) y posteriormente purificados mediante 2
precipitaciones con polietilenglicol (PEG)/NaCl y una
centrifugación en gradiente de CsC1. El título de la suspensión de
fagos, calculado por espectrometría, fue de 3,82 x 10^{14}
viriones/ml y el número de partículas infecciosas fue de 1,3 x
10^{13} TU/ml. Antes de comenzar con el ensayo de selección, se
secuenció una fracción de dicha suspensión de fagos para comprobar
que la amplificación no había afectado a la diversidad de los
clones.
El proceso de selección de péptidos con
capacidad de unirse a escurfina, potencialmente útiles como
inhibidores de su actividad biológica, comprende poner en contacto
la escurfina con los péptidos presentados por la librería de fagos.
Para ello, se tapizaron con escurfina los pocillos de una placa de
96 pocillos (añadiendo escurfina en un buffer carbonato a dichos
pocillos y dejando incubar durante 16 horas a 4ºC), se añadieron 10
\mul de la librería de fagos a una concentración de 3x10^{4}
virus/ml y se dejó incubar durante 1-2 horas a
temperatura ambiente (20-22ºC). A continuación, se
eliminaron los fagos no unidos mediante lavados con PBS/Tween
(tampón fosfato salino/polioxialquilen derivados de ésteres de
ácidos grasos de sorbitano) de modo que solo permanecieron unidos a
la placa los fagos específicos de escurfina. Estos fagos unidos
específicamente a escurfina se eluyeron mediante descenso de pH
(buffer de elución) que rompe las interacciones moleculares entre
la escurfina y los péptidos presentados por los fagos. Los fagos
eluidos fueron amplificados mediante infección en una cepa
bacteriana (E. coli K91 Kan), repitiéndose ese proceso un
total de 3 rondas más de unión/elución, cada vez con menos cantidad
de escurfina pegada a los pocillos (reduciéndose progresivamente en
cada ronda de 2,5 \mug/ml a 0,02 \mug/ml, y, finalmente, a
0,002 \mug/ml), de modo que en cada ronda se iban seleccionando
los fagos con mayor afinidad de unión a escurfina. Así, en la ronda
final, se obtuvieron colonias de bacterias infectadas por un único
fago, que presentaba en la región degenerada de su genoma una única
secuencia que codificaba un único péptido (la selección de las
colonias bacterianas se llevó a cabo en presencia de tetraciclina
cuya resistencia viene dada por un gen de resistencia a dicho
antibiótico presente en el genoma de los fagos, de modo que, de
esta manera, únicamente crecen colonias infectadas por los fagos y
cada colonia contiene el genoma de un único fago al que le
corresponde la secuencia de un solo péptido presentado en su
superficie). La secuenciación de esta región permite conocer su
secuencia de ADN y, por tanto, la secuencia del péptido capaz de
unirse a escurfina, potencialmente inhibidor de la actividad de
escurfina.
A partir de colonias de bacterias infectadas por
fagos, derivados de la última ronda de selección por
"biopanning", se extrajo su ADN y se secuenció la porción del
genoma que engloba la región correspondiente a los péptidos
presentados en la proteína pIII del fago utilizando el cebador
específico (SEQ ID NO: 5) que hibrida cerca de esa región. De este
modo se obtuvieron 47 péptidos.
Para restringir el número de péptidos a ensayar,
se realizó un ELISA comercial, basado en un anticuerpo monoclonal
anti-M13 del fago (HRP/Anti-M13
monoclonal Conjugate (Ref 27942101, Amersham Pharmacia Biotech)),
con el fin de seleccionar únicamente los fagos con mayor afinidad
por escurfina. Brevemente, el ELISA se realizó utilizando placas
Maxisorp (Nunc, Ref: 442404) tapizadas con escurfina. Los fagos
seleccionados fueron dispensados en los pocillos de la placa ELISA,
y, tras sucesivos lavados, la placa fue revelada con el anticuerpo
monoclonal anti-M13. Los pocillos con densidades
ópticas superiores a sus respectivos controles negativos (pocillos
sin escurfina) contenían los péptidos más específicos para
escurfina. De este modo, se seleccionaron 25 de los 47 fagos
iniciales. Los 25 péptidos seleccionados fueron sintetizados
químicamente utilizando la tecnología Fmoc en el laboratorio de los
inventores para su utilización en posteriores ensayos. Tras realizar
varios ensayos in vitro para medir la capacidad de esos
péptidos de inhibir la acción inmunosupresora de los linfocitos
Treg se seleccionó el péptido identificado como P60 (SEQ ID NO: 1)
porque presentaba la mayor actividad inhibitoria en tales ensayos
(Ejemplo 2).
\vskip1.000000\baselineskip
La capacidad del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) para
unirse a la escurfina se comprobó mediante la técnica de resonancia
de plasmones de superficie (SPR) de interacción biomolecular
utilizando el Biosensor BIAcore X (BIAcore, AB, Uppsala, Swedden).
La escurfina, producida en E. coli y purificada por afinidad
utilizando columnas GSTrap (Amersham, Pharmacia), fue inmovilizada
covalentemente en la superficie de la celda de flujo 2 (FC2) de un
chip CM5 (Sensor Chip CM Ref
116Br-1000-14, BIAcore, General
Electrics) tal como se describe en De Crescenzo et al. (JBC
2001, Vol 276; 29632-29643). La celda de flujo 1
(FC1), en cuya superficie no se inmoviliza escurfina, se usó como
celda reflujo de referencia. Las soluciones de cada péptido (10
\muM) fueron inyectadas tres veces en un buffer Hepes 10 mM, NaCl
150 mM, pH 7,4 a un flujo de 30 \mul/min. Las curvas de unión
fueron procesadas mediante la sustracción de la respuesta en FC1 de
la obtenida en FC2. La respuesta en equilibrio fue comparada entre
el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) y un péptido control irrelevante de la
misma talla (longitud), en concreto, el péptido cuya secuencia de
aminoácidos se muestra en SEQ ID NO: 6, que corresponde a los
aminoácidos 123-137 del receptor humano CD81. Cada
respuesta fue multiplicada por un factor de corrección de masa:
MW(P60)/MW(P), donde MW(P60) es el peso
molecular del .péptido P60 (SEQ ID NO: 1) y MW(P) el del
péptido control. Como se puede ver en la Figura 1, el péptido P60
(SEQ ID NO: 1) da una señal positiva que evidencia su capacidad de
unirse específicamente a la proteína escurfina.
\vskip1.000000\baselineskip
Con el fin de evaluar la importancia de los
aminoácidos colocados en los extremos amino terminal y carboxilo
terminal del péptido P60 (SEQ ID NO: 1), se sintetizaron
químicamente, tal como se ha mencionado antes, formas truncadas
(truncados) de dicho péptido P60 (SEQ ID NO: 1) y se ensayó la
capacidad de dichos truncados de unirse a escurfina mediante SPR,
según el protocolo descrito previamente en el apartado 1.3.
Los truncados sintetizados químicamente fueron
los péptidos o formas truncadas de P60 identificadas como:
T(1-13) (SEQ ID NO: 2)
[aminoácidos 1-13 de P60],
T(1-14) (SEQ ID NO: 3)
[aminoácidos 1-14 de P60], y
T(2-15) (SEQ ID NO: 4)
[aminoácidos 2-15 de P60].
\vskip1.000000\baselineskip
Asimismo, se ensayó la capacidad de dichos
péptidos (SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4) de unirse a la
escurfina mediante SPR en las condiciones mencionadas previamente.
Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la eliminación de
un aminoácido en posición amino terminal inhibe la capacidad del
péptido para unirse a la escurfina. Sin embargo, la eliminación de
los residuos 14 ó 15 del extremo carboxilo terminal, no destruye la
capacidad del péptido de unirse a la escurfina (Figura 2).
\vskip1.000000\baselineskip
Tras comprobar y confirmar su perfil, se
realizaron ensayos in vitro utilizando la línea celular
humana Karpas 299 (ACC-31, DSMZ, Alemania), derivada
de un linfoma humano, con perfil de células T reguladoras
[linfocitos Treg] (Wolke et al Int J Mol Med. 2006
Feb;17(2):275-8), de este modo, se evita el
tener que aislar células CD4+CD25+.
Para evaluar el efecto del péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) sobre la actividad inmunosupresora de la línea celular
Karpas 299 se realizó un ensayo de "reacción mixta
linfocitaria" (MLR) utilizando células de sangre periférica
(PBMC) de 2 donantes en presencia o ausencia de la línea celular
Karpas 299. Este ensayo (MLR) se basa en el
co-cultivo de linfocitos de diferente origen, con
histocompatibilidades diferentes, que se reconocerán entre sí como
extraños. Esta reacción hace que los linfocitos proliferen
secretando citoquinas. Para este ensayo se cultivaron, en una placa
de 96 pocillos, 100.000 células de cada donante (control positivo
de la MLR) solas o en presencia de 10.000 células de la línea
celular Karpas 299.
A las 48 horas se extrajeron los sobrenadantes
para medir el interferon-gamma
(IFN-\gamma) mediante un ELISA comercial (Ref
555138, Pharmingen, San Diego, CA, Estados Unidos). En este caso no
es posible medir la proliferación celular porque la presencia de la
línea celular Karpas 299 enmascara cualquier posible efecto en la
proliferación de la MLR. Los resultados de la medida de
IFN-\gamma se muestran en la Figura 3 y
proporcionan información sobre la actividad supresora de la línea
celular Karpas 299. En este ensayo de inhibición de la MLR por la
presencia de la línea celular Karpas 299, se analizó la capacidad
del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) para restaurar la producción de
IFN-\gamma debida a la MLR. La Figura 3 pone de
manifiesto que la adición del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100
\muM) al co-cultivo de la MLR con la línea celular
Karpas 299 es capaz de recuperar, en parte, la producción de
IFN-\gamma que se observa en ausencia de las
células Karpas 299.
\vskip1.000000\baselineskip
La capacidad inhibitoria del péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) sobre la actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg
humanos se analizó mediante 2 ensayos diferentes:
- a)
- mediante un ensayo basado en una respuesta mixta linfocitaria (MLR); y
- b)
- mediante un ensayo basado en la medida de la producción de IFN-\gamma en un cultivo de linfocitos T efectores CD4 humanos cultivados con microesferas que contienen anticuerpo anti-CD3 y anti-CD28 pegados a su superficie, en presencia o ausencia de linfocitos Treg.
\vskip1.000000\baselineskip
Para la realización del ensayo basado en una
respuesta mixta linfocitaria (MLR), tal como la mostrada en el
Ejemplo 2, se mezclan células de sangre periférica (PBMC) de 2
donantes junto con células Treg CD4+CD25+ (linfocitos Treg)
purificadas a partir de uno de ellos, mediante el uso de un kit
comercial (Ref 130091072, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach,
Germany) siguiendo las instrucciones del fabricante. Tras la
purificación, se analizaron las células por citometria de flujo,
obteniéndose una pureza del 90% aproximadamente en todos los
ensayos. Este ensayo MLR se realizó incubando 10^{5} células de
PBMC de cada donante y 2x10^{4} linfocitos Treg, en presencia o
ausencia del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) con el fin de ensayar su
capacidad para bloquear el efecto inhibitorio de los linfocitos
Treg humanos. A los 3 días de cultivo, se añadieron 0,5
\muCi/pocillo de timidina tritiada (Amersham, Pharmacia) y, tras
16 horas, se procedió al cosechado de las placas utilizando un
cosechador (Filtermate 96 harvester; Packard Instrument, Meriden,
CT) y a la realización del contaje de la radiactividad incorporada
al ADN celular (como medida de la proliferación celular) mediante un
contador de centelleo (Topcount; Packard Instrument). Los
resultados de este ensayo se muestran en la Figura 4, en la que
puede apreciarse que la mezcla de los PBMC de 2 donantes promueve
la proliferación celular, medida como incorporación de timidina
radiactiva, y que la adición de linfocitos Treg es capaz de inhibir
dicha proliferación celular; y, además, se observa que la adición
del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) a esos co-cultivos es
capaz de restaurar en parte la MLR, bloqueando el efecto
inmunosupresor de los linfocitos Treg humanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ensayo se basa en la medida de la
producción de IFN-\gamma en un cultivo de 10^{5}
linfocitos T efectores CD4 humanos cultivados con microesferas que
contienen anticuerpo anti-CD3 y
anti-CD28 pegados a su superficie (Dynabeads®
CD3/CD28; Ref 111.31, Dynal), en presencia o ausencia de 2x10^{4}
linfocitos Treg humanos (purificados como se indica más arriba).
Este ensayo se realizó en presencia o ausencia del péptido P60 (SEQ
ID NO: 1) para valorar su efecto inhibidor de los linfocitos Treg.
Tras 48 horas de cultivo, se midió la presencia de
IFN-\gamma en los sobrenadantes de los cultivos
mediante un ELISA comercial (Ref 555138, Pharmingen). En la Figura 5
se observa que las microesferas que contienen anticuerpos
anti-CD3 y anti-CD28 estimulan la
producción de IFN-\gamma por los linfocitos T y
que la adición de linfocitos Treg al cultivo es capaz de inhibir
dicha producción de IFN-\gamma. La adición del
péptido P60 (SEQ ID NO: 1) a estos co-cultivos es
capaz, de nuevo, de bloquear el efecto inhibidor de los linfocitos
Treg humanos, restaurando en parte la producción de
IFN-\gamma en respuesta al estímulo.
\vskip1.000000\baselineskip
La capacidad inhibitoria del péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) sobre la actividad inmunosupresora de los linfocitos Treg
murinos se analizó mediante 3 ensayos diferentes:
- a)
- mediante un ensayo basado en la activación de esplenocitos;
- b)
- mediante un ensayo de respuesta mixta linfocitaria (MLR); y
- c)
- mediante un ensayo basado en el co-cultivo de esplenocitos de ratones transgénicos con linfocitos Treg.
\vskip1.000000\baselineskip
En primer lugar, se realizaron unos ensayos de
activación de esplenocitos de ratón BALB/c (Charles River) en
presencia de anticuerpos anti-CD3 (Ref 553057, BD
Biosciences). Para ello, 10^{5} esplenocitos de ratones BALB/c
fueron cultivados en presencia o ausencia de anticuerpos
anti-CD3, 2x10^{4} linfocitos Treg murinos y
péptido P60 (SEQ ID NO: 1), observándose que el péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) (100 \muM) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de
los linfocitos Tregs sobre la producción de
IFN-\gamma por las células efectoras en respuesta
al estímulo con anti-CD3 (Figura 6).
\vskip1.000000\baselineskip
En segundo lugar, se realizaron unos ensayos de
respuesta mixta linfocitaria (MLR). Los linfocitos efectores
aislados de ratones BALB/c (10^{5} células/pocillo) fueron
co-cultivados con células dendríticas purificadas de
ratones C57BL/6 (Charles River), en presencia o ausencia de
linfocitos Treg de BALB/c y en presencia o ausencia de péptido P60
(SEQ ID NO: 1) (100 \muM). La medida de la proliferación celular
se realizó mediante un ensayo convencional de incorporación de
timidina tritiada tal como se ha descrito previamente. Los
resultados obtenidos ponen de manifiesto que el péptido P60 (SEQ ID
NO: 1) es capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los
linfocitos Treg sobre la proliferación de las células efectoras en
respuesta a una MLR (Figura 7).
\vskip1.000000\baselineskip
En tercer lugar, se midió el efecto del péptido
P60 (SEQ ID NO: 1) en un ensayo basado en el
co-cultivo de esplenocitos de ratones transgénicos
OT-1 (cuyos linfocitos T presentan el receptor de
la célula T (TCR) específico para el péptido SIINFEKL (SEQ ID NO:
7) de la ovalbúmina, que fueron amablemente cedidos por el Dr
Melero, CIMA Pamplona) con linfocitos Treg en presencia de antígeno
(SEQ ID NO: 7) y en presencia o ausencia de linfocitos Treg. La
Figura 8 muestra el efecto del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) sobre la
acción de células T reguladoras naturales murinas (purificadas a
partir de esplenocitos de ratón) sobre la respuesta de células
efectoras frente a la estimulación por un antígeno (medida como
producción de IFN-\gamma al sobrenadante de
cultivo). Los linfocitos efectores aislados de ratones transgénicos
OT-1 (10^{5} células/pocillo) fueron
co-cultivados con células dendríticas de ratones
C57BL/6 y el péptido SIINFEKL (SEQ ID NO: 7) (10 \mug/m1), en
presencia o ausencia de 2x10^{4} células T reguladoras de BALB/c
y en presencia o ausencia de péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100
\muM). Como puede observarse, el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) es
capaz de inhibir el efecto inmunosupresor de los linfocitos Treg
sobre la producción de IFN-\gamma (medida por
ELISA comercial (Ref: 555138, Pharmingen, San Diego, CA)) por las
células efectoras específicas de este antígeno péptidico.
\vskip1.000000\baselineskip
Se ha descrito que la presencia de escurfina
puede inhibir la activación del factor de transcipción
NF-kB en células 293 (Betelli et al, Proc
Natl Acad Sci U S A. 2005 102:5138-43). Basándose
en ese trabajo, se ha estudiado el efecto de la adición del péptido
P60 (SEQ ID NO: 1) a un cultivo de células 293 transfectadas con un
plásmido que expresa el gen foxp3, amablemente cedido por el
Dr Oukka, y descrito previamente (Betelli et al, Proc Natl
Acad Sci U S A. 2005 102:5138-43) y a un cultivo de
células 293 transfectadas con un plásmido control junto con un
plásmido que expresa luciferasa bajo un promotor inducible por
NF-kB (Ref 631904,
pNF-kB-Luc, Clontech). Las células
293 fueron transfectadas mediante el uso de lipofectamina con el
plásmido pNF- kB-Luc que expresa luciferasa bajo un
promotor inducible por el factor de transcripción
NF-kB, en presencia o ausencia del plásmido pcDNA,
pcDNA-Foxp3 y el péptido P60 (SEQ ID NO: 1) (100
\muM). A las 24 horas de cultivo, se cosecharon las células y se
procedió a medir la actividad luciferasa en los extractos celulares
mediante el uso de un kit apropiado (Promega, Maddison, USA) y del
luminómetro (Orion Microplate luminometer, Berthold detection
systems, Alemania). Los resultados obtenidos se muestran en la
Figura 9, en donde puede apreciarse que la presencia de scurfina en
las células inhibe la expresión de luciferasa y que la presencia
del péptido P60 (SEQ ID NO: 1) restaura la expresión de
luciferasa.
\vskip1.000000\baselineskip
A la vista de los resultados obtenidos
previamente, se han realizado ensayos in vivo para medir el
efecto inmunopotenciador de la administración de péptidos
inhibidores de escurfina sobre la vacunación antitumoral.
El modelo tumoral utilizado para este ensayo ha
sido un modelo basado en la línea de cáncer de colon CT26, descrito
en un trabajo previo del laboratorio de los inventores (Casares
et al, 2001. Eur J Immunol 31:1780-9; Casares
et al., 2003. J Immunol 171:5931-9), ya que
los inventores habían demostrado previamente que, en ese modelo,
los linfocitos Treg tienen un efecto inmunosupresor que favorece el
crecimiento tumoral (Casares et al., 2003, citado
supra).
Como antígeno vacunal se utilizó el péptido
sintético AH1 (SEQ ID NO: 8) que contiene un determinante T
citotóxico descrito para la línea CT26 (Huang, A. Y. et al,
Proc Natl Acad Sci U S A, 1996. 93:9730-9735) y cuya
inmunización retrasa en cierta medida el crecimiento del tumor, sin
llegar a eliminarlo debido a la presencia de los linfocitos Treg
(Casares et al., 2003, citado supra).
Brevemente, se inmunizaron grupos de 6 ratones
BALB/c (Charles River) de 6 semanas con el péptido AH1 (SEQ ID NO:
8) tal como se describe en Casares et al., 2001, citado
supra, en presencia o ausencia del péptido P60 (SEQ ID NO:
1). Diez días después de la inmunización, los ratones fueron
inyectados con 5 x 10^{5} células CT26 por vía subcutánea, y se
midió la evolución del tumor.
Como se muestra en la Figura 10, la
administración de dicho péptido P60 (SEQ ID NO: 1) durante los días
posteriores a la inmunización con el péptido AH1 protegió a los
ratones de la aparición del tumor. De hecho, solamente 2 de los 11
ratones inmunizados con el péptido AH1 y tratados con el péptido
P60 (SEQ ID NO: 1) desarrollaron tumor palpable (82% protección),
mientras que la protección en el resto de los grupos fue muy
significativamente inferior desarrollando tumores letales (ratones
inmunizados solo con AH1 (0%), sólo con péptido P60 (SEQ ID NO: 1)
(10%) o sólo con PBS (0%)) (n=11 en todos lo casos).
En la Figura 10A se muestran las curvas de
crecimiento tumoral mientras que en la Figura 10B se representan
las curvas de supervivencia de los diferentes grupos experimentales
(Representación de Kaplan-Meier). p<0,001 indica
el resultado del análisis estadístico mediante el test de
log-rank.
<110> PROYECTO DE BIOMEDICINA CIMA
S.L.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> PÉPTIDOS CON CAPACIDAD PARA UNIRSE A
ESCURFINA Y APLICACIONES
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> P2598ES00
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Asp Phe Gln Ser Phe Arg Lys Met Trp Pro
Phe Phe Ala Met}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Asp Phe Gln Ser Phe Arg Lys Met Trp Pro
Phe Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Asp Phe Gln Ser Phe Arg Lys Met Trp Pro
Phe Phe Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Phe Gln Ser Phe Arg Lys Met Trp Pro Phe
Phe Ala Met}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptgaattttct gtatgagg
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido correspondiente a los
aminoácidos 123-137 del receptor humano CD8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Lys Gln Phe Tyr Asp Gln Ala Leu Gln Gln
Ala Val Val Asp}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido sintético AH1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg
Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Cys Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg
Gln Arg Arg Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg
Met Lys Trp Lys Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Phe Val Arg Ser Arg Arg Pro Arg Thr Ala
Ser Cys Ala Leu Ala}
\sac{Phe Val Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Cys Ala Leu Ala Phe Val Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly
Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala His Gly His Arg Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Péptido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Pro Ile His Asp His Asp His Pro His Leu Val
Ile His Ser}
Claims (27)
1. Un péptido con capacidad de unión a
escurfina, seleccionado entre:
- a)
- un péptido de fórmula general (I) que comprende la secuencia de aminoácidos:
(I)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X
- donde
- X está ausente, o bien, X está presente y es X_{14} o X_{14}-X_{15}, donde X_{14} y X_{15}, independientemente entre si, representan un aminoácido;
- b)
- una variante del péptido definido en a); y
- c)
- un fragmento del péptido definido en a) o de una variante definida en b); y sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Péptido según la reivindicación 1, que tiene,
además, la capacidad de inhibir la actividad biológica de escurfina
in vitro y/o in vivo.
3. Péptido según la reivindicación 1, que
comprende, o está constituido por, la secuencia de aminoácidos:
(Ia)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X_{14}-X_{15}
donde X_{14} y X_{15},
independientemente entre sí, representan un
aminoácido.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Péptido según la reivindicación 3, en el que
X_{14} es Ala y X_{15} es Met.
5. Péptido según la reivindicación 1, que
comprende, o está constituido por, la secuencia de aminoácidos:
(Ib)Arg-Asp-Phe-Gln-Ser-Phe-Arg-Lys-Met-Trp-Pro-Phe-Phe-X
donde X es X_{14}, donde X_{14}
representa un
aminoácido.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Péptido según la reivindicación 5, en el que
X_{14} es Ala.
7. Péptido según la reivindicación 1,
seleccionado entre un péptido que comprende la SEQ ID NO: 1, SEQ ID
NO: 2 o SEQ ID NO: 3, una variante o fragmento del mismo, y sus
sales farmacéuticamente aceptables.
8. Péptido según la reivindicación 1,
seleccionado entre un péptido constituido por la SEQ ID NO: 1, SEQ
ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3.
9. Una proteína de fusión que comprende:
- i)
- un péptido según cualquiera de. las reivindicaciones 1 a 8; y
- ii)
- un péptido transportador con capacidad para internalizar un péptido en una célula.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Proteína de fusión según la reivindicación
9, en la que dicho péptido transportador comprende una secuencia de
aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID
NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, o SEQ ID NO: 14.
11. Proteína de fusión según la reivindicación
10, que comprende, además, un péptido espaciador situado entre
dicho péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8
[péptido (i)] y dicho péptido transportador [péptido
(ii)].
(ii)].
12. Proteína de fusión según la reivindicación
10, que comprende, además, una secuencia aminoacídica útil para el
aislamiento o purificación de la proteína de fusión de la
invención.
\newpage
13. Una composición farmacéutica que comprende
una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8, o de una proteína de fusión según
cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, junto con, al menos, un
excipiente farmacéuticamente aceptable.
14. Composición farmacéutica según la
reivindicación 13, que comprende, además de, al menos un péptido
según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o de una proteína
de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, uno o
más, compuestos inhibidores o reguladores de la actividad
inmunosupresora de linfocitos Treg diferentes.
15. Empleo de un péptido según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, o de una proteína de fusión según
cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en la elaboración de una
composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad
neoplásica o de una enfermedad infecciosa.
16. Empleo según la reivindicación 15, en el que
dicha enfermedad infecciosa se selecciona entre la enfermedad
causada por una infección viral, una infección bacteriana, una
infección fúngica y una infección parasitaria.
17. Empleo según la reivindicación 16, en el que
dicha enfermedad infecciosa se selecciona entre la enfermedad
causada por el virus de la hepatitis C y la enfermedad causada por
el virus de la hepatitis B.
18. Empleo según la reivindicación 15, en el que
dicha enfermedad neoplásica es un papiloma, un adenoma, un lipoma,
un osteoma, un mioma, un angioma, un nevus, un teratoma maduro, un
carcinoma, un sarcoma o un teratoma inmaduro.
19. Empleo según la reivindicación 19, en el que
dicha enfermedad neoplásica es un melanoma, un mieloma, una
leucemia, un linfoma de Hodgkin, un basolioma, un espinolioma,
cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de útero, cáncer de pulmón,
cáncer de bronquios, cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer de
páncreas, cáncer de riñón, cáncer de esófago, hepatocarcinoma o
cáncer de cuello y cabeza.
20. Empleo de un péptido según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, o de una proteína de fusión según
cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en el tratamiento de una
enfermedad neoplásica o de una enfermedad infecciosa.
21. Un ácido nucleico que codifica un péptido
según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o de una proteína
de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12.
22. Una construcción génica que comprende un
ácido nucleico según la reivindicación 21.
23. Construcción génica según la reivindicación
22, que comprende, además, operativamente unida, una secuencia
reguladora de la expresión de dicho ácido nucleico.
24. Un vector que comprende un ácido nucleico
según la reivindicación 21, o una construcción génica según
cualquiera de las reivindicaciones 22 ó 23.
25. Una célula hospedadora que comprende un
ácido nucleico según la reivindicación 21, o una construcción
génica según cualquiera de las reivindicaciones 22 ó 23, o un
vector según la reivindicación 24.
26. Un procedimiento para producir un péptido
según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una proteína de
fusión según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, que
comprende crecer una célula hospedadora según la reivindicación 25
bajo condiciones que permiten la producción de dicho péptido, y, si
se desea, recuperar dicho péptido o dicha proteína de fusión.
27. Empleo de un ácido nucleico según la
reivindicación 21, o de una construcción génica según cualquiera de
las reivindicaciones 22 ó 23, en la elaboración de vectores y
células para el tratamiento de una enfermedad neoplásica o de una
enfermedad infecciosa.
Priority Applications (11)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200703052A ES2328776B1 (es) | 2007-11-19 | 2007-11-19 | Peptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. |
CA2706201A CA2706201A1 (en) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptides with capacity to bind to scurfin and applications |
PCT/ES2008/000716 WO2009065982A1 (es) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Péptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones |
CN2008801217329A CN101903514B (zh) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | 能与scurfin结合的肽及其应用 |
EP08852484.8A EP2223998B1 (en) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptides that can bind to scurfin and uses thereof |
MX2010005520A MX2010005520A (es) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. |
JP2010534507A JP5385910B2 (ja) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | スクルフィンに結合する能力を有するペプチドおよびその用途 |
AU2008327792A AU2008327792B2 (en) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptides that can bind to scurfin and uses thereof |
RU2010125199/10A RU2502741C2 (ru) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Пептиды со способностью связываться со скурфином и их применение |
US12/743,616 US8524860B2 (en) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptides with capacity to bind to scurfin and applications |
BRPI0819311-8A BRPI0819311A2 (pt) | 2007-11-19 | 2008-11-14 | Peptídeos com capacidade para se unir a escurfina e aplicações |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200703052A ES2328776B1 (es) | 2007-11-19 | 2007-11-19 | Peptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2328776A1 true ES2328776A1 (es) | 2009-11-17 |
ES2328776B1 ES2328776B1 (es) | 2010-07-06 |
Family
ID=40409793
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES200703052A Expired - Fee Related ES2328776B1 (es) | 2007-11-19 | 2007-11-19 | Peptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8524860B2 (es) |
EP (1) | EP2223998B1 (es) |
JP (1) | JP5385910B2 (es) |
CN (1) | CN101903514B (es) |
AU (1) | AU2008327792B2 (es) |
BR (1) | BRPI0819311A2 (es) |
CA (1) | CA2706201A1 (es) |
ES (1) | ES2328776B1 (es) |
MX (1) | MX2010005520A (es) |
RU (1) | RU2502741C2 (es) |
WO (1) | WO2009065982A1 (es) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8080518B2 (en) * | 2007-12-05 | 2011-12-20 | Arbor Vita Corporation | Co-administration of an agent linked to an internalization peptide with an anti-inflammatory |
CA3018494C (en) | 2009-06-10 | 2021-12-07 | Nono Inc. | Co-administration of an agent linked to an internalization peptide with an anti-inflammatory |
WO2015124715A1 (en) * | 2014-02-21 | 2015-08-27 | Cellectis | Method for in situ inhibition of regulatory t cells |
ES2665543B1 (es) * | 2016-10-26 | 2019-02-12 | Fundacion Para La Investig Medica Aplicada | Péptidos de unión a FOXP3 y usos de los mismos |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6414129B1 (en) * | 1998-08-11 | 2002-07-02 | Darwin Discovery Ltd. | Identification of the gene causing the mouse scurfy phenotype and its human ortholog |
WO2002090600A2 (en) * | 2001-05-08 | 2002-11-14 | Darwin Molecular Corporation | A method for regulating immune function in primates using the foxp3 protein |
WO2006044864A2 (en) * | 2004-10-19 | 2006-04-27 | Duke University | Vaccine adjuvant |
WO2007084775A2 (en) * | 2006-01-20 | 2007-07-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for modulation of suppressor t cell activation |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5698015A (en) * | 1995-05-19 | 1997-12-16 | Nikko Company | Conductor paste for plugging through-holes in ceramic circuit boards and a ceramic circuit board having this conductor paste |
WO1999029721A1 (en) * | 1997-12-10 | 1999-06-17 | Washington University | Anti-pathogen system and methods of use thereof |
AU2001238144A1 (en) * | 2000-02-09 | 2001-08-20 | Agensys, Inc. | 83p5g4: a tissue specific protein highly expressed in prostate cancer |
US20030191073A1 (en) * | 2001-11-07 | 2003-10-09 | Challita-Eid Pia M. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 161P2F10B useful in treatment and detection of cancer |
-
2007
- 2007-11-19 ES ES200703052A patent/ES2328776B1/es not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-11-14 RU RU2010125199/10A patent/RU2502741C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-11-14 CN CN2008801217329A patent/CN101903514B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-14 CA CA2706201A patent/CA2706201A1/en not_active Abandoned
- 2008-11-14 MX MX2010005520A patent/MX2010005520A/es active IP Right Grant
- 2008-11-14 BR BRPI0819311-8A patent/BRPI0819311A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-11-14 WO PCT/ES2008/000716 patent/WO2009065982A1/es active Application Filing
- 2008-11-14 US US12/743,616 patent/US8524860B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-14 JP JP2010534507A patent/JP5385910B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-14 AU AU2008327792A patent/AU2008327792B2/en not_active Ceased
- 2008-11-14 EP EP08852484.8A patent/EP2223998B1/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6414129B1 (en) * | 1998-08-11 | 2002-07-02 | Darwin Discovery Ltd. | Identification of the gene causing the mouse scurfy phenotype and its human ortholog |
WO2002090600A2 (en) * | 2001-05-08 | 2002-11-14 | Darwin Molecular Corporation | A method for regulating immune function in primates using the foxp3 protein |
WO2006044864A2 (en) * | 2004-10-19 | 2006-04-27 | Duke University | Vaccine adjuvant |
WO2007084775A2 (en) * | 2006-01-20 | 2007-07-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for modulation of suppressor t cell activation |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
CASARES N et al.: "{}CD4+/CD25+ regulatory cells inhibit activation of tumor-primed CD4+ T cells with IFN-gamma-dependent antiangiogenic activity, as well as long-lasting tumor immunity elicited by peptide vaccination"{} JOURNAL OF IMMUNOLOGY, AMERICAN ASSOCIATION OF IMMUNOLOGISTS, US, vol. 171, no. 11, 1 Diciembre 2003 (01.12.2003), páginas 5931-5939, todo el documento. * |
CASARES N et al.: "CD4+/CD25+ regulatory cells inhibit activation of tumor-primed CD4+ T cells with IFN-gamma-dependent antiangiogenic activity, as well as long-lasting tumor immunity elicited by peptide vaccination" JOURNAL OF IMMUNOLOGY, AMERICAN ASSOCIATION OF IMMUNOLOGISTS, US, vol. 171, no. 11, 1 Diciembre 2003 (01.12.2003), páginas 5931-5939, todo el documento. * |
YAGI H et al.: "{}Crucial role of FOXP3 in the development and function of human CD25+CD"{} INTERNATIONAL IMMUNOLOGY, OXFORD UNIVERSITY PRESS, GB, vol. 16, no. 11, 4 Octubre 2004 (04.10.2004), páginas 1643-1656, todo el documento. Citado en la solicitud. * |
YAGI H et al.: "Crucial role of FOXP3 in the development and function of human CD25+CD" INTERNATIONAL IMMUNOLOGY, OXFORD UNIVERSITY PRESS, GB, vol. 16, no. 11, 4 Octubre 2004 (04.10.2004), páginas 1643-1656, todo el documento. Citado en la solicitud. * |
ZUO TAO et al.: "{}FOXP3 is an X-linked breast cancer suppressor gene and an important repressor of the HER-2/ErbB2 oncogene."{} CELL 29 JUN 2007, vol. 129, no. 7, 29 Junio 2007 (29.06.2007), páginas 1275-1286, todo el documento. * |
ZUO TAO et al.: "FOXP3 is an X-linked breast cancer suppressor gene and an important repressor of the HER-2/ErbB2 oncogene." CELL 29 JUN 2007, vol. 129, no. 7, 29 Junio 2007 (29.06.2007), páginas 1275-1286, todo el documento. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2008327792B2 (en) | 2014-04-24 |
AU2008327792A1 (en) | 2009-05-28 |
MX2010005520A (es) | 2010-09-28 |
EP2223998B1 (en) | 2015-05-13 |
EP2223998A1 (en) | 2010-09-01 |
US20100267623A1 (en) | 2010-10-21 |
JP2011504108A (ja) | 2011-02-03 |
WO2009065982A1 (es) | 2009-05-28 |
US8524860B2 (en) | 2013-09-03 |
CN101903514B (zh) | 2013-07-17 |
ES2328776B1 (es) | 2010-07-06 |
RU2502741C2 (ru) | 2013-12-27 |
JP5385910B2 (ja) | 2014-01-08 |
RU2010125199A (ru) | 2011-12-27 |
CN101903514A (zh) | 2010-12-01 |
BRPI0819311A2 (pt) | 2015-06-16 |
CA2706201A1 (en) | 2009-05-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2381631T3 (es) | Péptidos inhibidores de la fusión del VIH con propiedades biológicas mejoradas | |
ES2542522T3 (es) | Péptidos modificados como inhibidores potentes de la interacción entre receptor de NMDA/PSD-95 | |
AU2020201174B2 (en) | Modulating gamma - c -cytokine activity | |
CN107880101A (zh) | 针对癌症的靶向细胞周期蛋白a1的t细胞免疫疗法 | |
JP2003529319A (ja) | HIV−1gp41を標的化する広範に中和する抗体を誘発する方法 | |
ES2304315B1 (es) | Peptidos con capacidad para unirse a la interleuquina 10 (il-10). | |
ES2328776B1 (es) | Peptidos con capacidad para unirse a escurfina y aplicaciones. | |
US20210324029A1 (en) | Stable modulators of gamma-c-cytokine activity | |
US20210322528A1 (en) | Peptides from npsr1 | |
CA2522329A1 (en) | Inhibitors of coronavirus | |
ES2886944T3 (es) | Péptidos | |
US20200399313A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting cd279 interactions | |
ES2933112T3 (es) | Péptidos de PAGE5 | |
JP2022191303A (ja) | Foxp3結合ペプチド及びその使用 | |
ES2441252T3 (es) | Epítopos promiscuos de linfocitos T CD4 HER-2/NEU | |
ES2395336T3 (es) | Métodos y moléculas inmunoterapéuticos | |
CN108997481B (zh) | 源自于lmp1的抗原短肽 | |
Nicoli et al. | ORCA–Online Research@ Cardiff | |
CN118103387A (zh) | 肽 | |
US20210094990A1 (en) | Compositions and methods for inhibition of foxp3 | |
ITMI20081119A1 (it) | Frammenti di muc16 ad attivita antigenica e composizioni farmaceutiche che li contengono |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20091117 Kind code of ref document: A1 |
|
FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2328776B1 Country of ref document: ES |
|
FD2A | Announcement of lapse in spain |
Effective date: 20211117 |