ES2319276T3 - Metodos de uso de cuerpos lamelares para fines terapeuticos. - Google Patents
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Abstract
Cuerpos lamelares, que comprenden fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y colesterol para su uso como una sustancia terapéutica activa.
Description
Métodos de uso de cuerpos lamelares para fines
terapéuticos.
Esta invención se refiere a constructos
fosfolipídicos que actúan como cuerpos lamelares sustitutos en
cavidades corporales, vasos sanguíneos, conductos y tejidos para
modificar la deposición y la eliminación de fibrina extra e
intravascular para fines terapéuticos.
Muchos animales poseen una cavidad celómica que
separa el intestino de otras estructuras. El peritoneo, al igual
que la pleura y el pericardio, es un derivado de la cavidad
celómica. En los animales más primitivos, que sólo constan de una
pared corporal cilíndrica que contiene un intestino tubular,
resulta esencial la separación de las dos partes mediante un
derivado antiadherente de la cavidad celómica si el peristaltismo
va a mantener un flujo de nutrición desde un extremo del intestino
hasta el otro. La supresión del peristaltismo a través de la
adherencia del intestino a la pared corporal es incompatible con la
vida, por lo que desde el comienzo de la evolución, ha sido
imprescindible proporcionar una superficie antiadherente entre
estas estructuras vitales. En el ser humano, las adherencias
peritoneales resultan de cualquier causa, ya se deban a cirugía, a
inflamación crónica del organismo o endometriosis, exponen al
individuo a consecuencias nefastas.
En los animales primitivos, la cavidad celómica
está bajo la constante y grave amenaza de entrada de
microorganismos o moléculas nocivas procedentes del entorno
externo, o bien a través del intestino o bien de la pared corporal.
El peligro para la vida es rápido, así como la propagación libre de
un agente invasor por todo el celoma. Por tanto, se desarrolló una
respuesta defensiva inmediata mediante la cual se espesa el líquido
de la cavidad para prevenir la fuga y para atrapar a los
microorganismos invasores. Este acontecimiento se logra mediante la
polimerización de una proteína soluble
(proto-fibrinógeno) para dar una red voluminosa. La
ciencia médica y la biología en general siguen desconociendo en su
mayor parte el sitio original y el fin del mecanismo elaborado y
ahora sumamente desarrollado de coagulación en los sistemas
vasculares de los vertebrados superiores. Esto ha dado como
resultado que no se haya percibido que este sistema de coagulación
se desarrolló conjuntamente con otro sistema de mantenimiento
igualmente vital de propiedades antiadherentes de las superficies
de revestimiento interior de la cavidad celómica, que es el
sistema secretor de cuerpos lamelares descubierto recientemente. La
enorme cantidad de investigación sobre el mecanismo de coagulación
ha sido casi exclusivamente vasculocéntrico y hasta ahora la falta
de investigación sobre el mecanismo de coagulación en cavidades
serosas ha dado como resultado que no se haya reconocido del papel
crucial del sistema de cuerpos lamelares en la gelificación de
fibrina por todo el cuerpo.
Se reconoce ampliamente en la comunidad
quirúrgica que las adherencias peritoneales constituyen una
complicación extremadamente común de la cirugía abdominal y
pélvica, dando lugar a una morbimortalidad significativa y a una
pérdida no deseada de tiempo de operación y de gasto para los
servicios sanitarios en todo el mundo. Sin embargo, hasta hace
poco, la falta de buenos datos epidemiológicos, combinada con una
incapacidad para prevenir eficazmente la formación de adherencia,
ha limitado el ímpetu de llevar a cabo una investigación seria de
este trastorno.
En el mundo desarrollado, la causa más común de
adherencias peritoneales es la cirugía abdominal, en la que la
causa principal de obstrucción del intestino delgado es la
formación de adherencia tras la cirugía previa. De hecho, durante
todo este siglo se ha producido un aumento continuo en los casos de
obstrucción intestinal debido a adherencias, desde el 7% en 1930
hasta el 64% en 1969, lo que refleja la creciente frecuencia de
cirugía abdominal en la población en general. Ahora se reconoce que
las adherencias son responsables de una morbididad significativa,
de pérdida de trabajo y de gasto para los servicios sanitarios en
todo el mundo. Con el desarrollo reciente de la cirugía mínimamente
invasiva, se esperaba que las adherencias fueran un tema del
pasado. Sin embargo, no ha sido así.
Un reciente estudio epidemiológico ha
proporcionado datos estadísticos exactos y detallados sobre los
incidentes de las adherencias, evidenciando la gravedad del
problema. Este estudio se llevó a cabo por el Surgical and Clinical
Adhesions Research (SCAR) Group (Grupo de investigación sobre
adherencias clínicas y quirúrgicas) utilizando datos validados de
la base de datos de enlace con historias clínicas del Servicio de
Salud Nacional Escocés. Identificó a pacientes que se sometieron a
cirugía abdominal o pélvica en 1986 que no tenían historia de
cirugía en los cinco años anteriores. Entonces se realizó un
seguimiento de los pacientes durante diez años y se revisaron los
nuevos ingresos posteriores y se clasificaron los desenlaces según
el grado de adherencia. El 5,7% de todos los nuevos ingresos se
clasificaron como producidos indiscutiblemente por adherencias. Un
28,9% adicional volvió a ingresar con signos y síntomas de
obstrucción subaguda que se creyó producida lo más probablemente
por adherencias. En Escocia, en 1994, un total de 4.199 ingresos
para una población de 5 millones estuvieron directamente
relacionados con adherencias. Estas cifras destacan una proporción
notable de ingresos relacionados con las adherencias, cuando se
comparan con cifras similares de otras intervenciones quirúrgicas
esenciales comunes, tales como operaciones de artroplastia de cadera
(4.394), revascularización coronaria (4.020) o cirugía de
hemorroides (4.226) durante el mismo periodo de tiempo y la misma
población.
Un efecto adicional de las adherencias es la
dificultad y el tiempo que lleva diseccionarlas antes de continuar
con una operación. Un estudio de la carga de trabajo incluyó a 120
pacientes que se sometieron de nuevo a una operación de laparotomía
estimó un aumento medio de 24 minutos en el tiempo total de la
operación debido a las adherencias intraabdominales de la cirugía
anterior. También hay un peligro intraoperatorio de
adherenciotomía, tal como se demostró en 274 pacientes que se
sometieron de nuevo a laparotomía en los que se identificó un
riesgo del 21% de perforación del intestino.
Con respecto a la mortalidad, la obstrucción
intestinal es la consecuencia más grave de las adherencias. Se ha
demostrado que de los pacientes que requieren una nueva operación
abdominal, del 30% al 41% tienen obstrucción intestinal relacionada
con adherencias.
Debe observarse que las consecuencias clínicas
de las adherencias no están limitadas simplemente al intestino. Las
adherencias son la causa principal de infertilidad secundaria en
la mujer y son responsables de dolor pélvico y abdominal sustancial
y de incomodidad.
La incidencia de adherencias posoperatorias cada
vez es más inaceptable para las comunidades sanitarias en todo el
mundo. Sin embargo, recientes avances en la biología molecular de
cavidades serosas han proporcionado por fin información exacta
sobre la etiopatogenia de las adherencias, lo que permite
estrategias basadas en la evidencia para su prevención durante
cualquier intervención quirúrgica en cualquiera de los derivados de
la cavidad celómica. Estas nuevas medidas preventivas implican la
comprensión de la formación y la eliminación de la fibrina en las
cavidades serosas. El conocimiento actual supone que los únicos
factores son elementos moleculares y celulares implicados en la
gelificación de la fibrina y en la fibrinólisis. En la presente
invención puede observarse que la secreción de cuerpos lamelares
desempeña un papel principal tanto en la estructura física de la
deposición de fibrina como en la velocidad y el grado de su
eliminación. La presente invención utiliza este conocimiento para
proporcionar usos terapéuticos de disoluciones de cuerpos
lamelares.
\vskip1.000000\baselineskip
El fibrinógeno es una proteína soluble, de fase
aguda y los niveles temporalmente aumentados en la sangre y en los
líquidos tisulares son consecuencias de reacciones inflamatorias.
El contacto con factores pro-coagulantes produce la
polimerización del fibrinógeno para formar un gel fibrinoso.
A principios del siglo XX, los patólogos
describieron y definieron la secuencia de acontecimientos en la
respuesta inflamatoria aguda. Los cambios reactivos implicaban tres
procesos secuenciales:
1. cambios en el calibre vascular y en el flujo
de sangre
2. aumento en la permeabilidad vascular y
formación de exudado inflamatorio rico en proteínas
3. escape de leucocitos de los vasos hacia los
espacios tisulares extravasculares.
Un acontecimiento inicial en los espacios
tisulares es la aparición de fibrina identificada mediante una
variedad de técnicas histoquímicas. Los estudios histológicos
iniciales reconocieron que la fibrina representaba un intento para
separar mediante la formación de una pared la zona infectada o
dañada, así como para proporcionar una "estructura principal"
de fibras en el tejido edematoso congestionado para ayudar al
movimiento ameboideo de los leucocitos que migran hacia el
interior. Cuando se consideraba la respuesta inflamatoria aguda,
una desaparición inicial y ordenada de la fibrina presagiaba un
desenlace satisfactorio para la respuesta inflamatoria, ya que el
líquido tisular en exceso se iba filtrando en el sistema linfático y
se desarmaba la estructura principal de fibrina.
Por tanto, el resultado óptimo de una respuesta
inflamatoria aguda es la restitución completa de la estructura y la
función normales del tejido afectado. Este proceso se denomina
resolución o cicatrización por primera intención. En el proceso de
resolución, la tarea principal es la eliminación de los desechos
celulares y de la fibrina. Sin embargo, si se forman depósitos
pesados de fibrina durante las fases iniciales de la inflamación
aguda, puede que no se eliminen completamente en el plazo de
algunos días por las enzimas fibrinolíticas del exudado
inflamatorio. La consecuencia de este fallo puede ser profunda, ya
que la fibrina que no se elimina rápidamente se somete a un proceso
denominado organización. Los macrófagos migran hacia la fibrina,
seguidos de cerca por el crecimiento de nuevos capilares y
fibroblastos para formar un tejido conocido como tejido de
granulación. Cuando el tejido de granulación madura, se sustituye
finalmente por un tejido firme, denso y fibroso denominado más
comúnmente tejido cicatricial. Cuando el tejido de granulación
entre dos superficies tisulares u órganos opuestos se transforma
mediante este proceso, el tejido fibroso denso que une las
entidades anteriormente separadas se denomina adherencia. Este
proceso también se conoce como cicatrización por segunda intención
y las adherencias pueden comprometer gravemente la función normal
en el sitio de la respuesta inflamatoria aguda original.
En la era anterior a los antibióticos, los
signos y síntomas clínicos de los exudados fibrinosos en respuesta
a las infecciones bacterianas constituían la mayor parte de la
práctica médica diaria. El sonido de un roce de fricción escuchado
con la auscultación del tórax significaba un exudado fibrinoso
grueso, la respuesta inflamatoria aguda de la pleura a la infección
pulmonar subyacente, como en la neumonía neumocócica. Los roces de
fricción pericárdica también eran comunes, no sólo en respuesta a
diversas infecciones, sino también en la uremia y en la fiebre
reumática. Con la desaparición completa de muchos tipos de
enfermedades a medida que la medicina ha avanzado, la actual
generación de investigadores no apreció el papel reconocido
anteriormente de la deposición fibrinosa en la mayoría de los
estados patológicos. Una excepción a esta regla han sido los
biólogos moleculares que trabajan en el campo de los trastornos
reumatoides, en el que el efecto extremadamente incapacitante de la
conversión de los depósitos de fibrina extravasculares en tejido
fibroso denso sigue siendo un centro de atención de la
investigación en curso.
En las dos últimas décadas se han producido
avances considerables en la biología molecular del mesotelio, en su
reacción a la lesión y la inflación y en su reparación y
generación. Una fina monocapa mesotelial que descansa sobre una
membrana basal cubre la totalidad de los órganos abdominales
(viscerales) y la pared de la cavidad abdominal (parietal). En un
adulto, su superficie mide hasta 2 m^{2}, presentando una gran
área que actúa como membrana semipermeable para el intercambio de
agua y solutos de bajo peso molecular. La cavidad peritoneal humana
existe en la vida normal como un espacio potencial estando las
superficies opuestas separadas por sólo 5 \mu. Por lo tanto, no
contiene más de 50 ml de líquido estéril, transparente, con un peso
específico bajo y un contenido en proteínas bajo. El fibrinógeno
no está presente y por lo tanto, el líquido seroso no
coagulará.
La respuesta inflamatoria local del peritoneo es
similar a la de otros tejidos, pero el revestimiento interior del
peritoneo es único porque presenta una gran superficie de exudación
y absorción. El revestimiento interior puede separarse para alojar
muchos litros de líquido. En los sitios de irritación, hay una
salida de líquido hacia la cavidad peritoneal con un alto contenido
en proteínas. Este exudado contiene fibrinógeno que polimeriza para
dar fibrina sólida en contacto con un factor tisular local liberado
por el mesotelio o los leucocitos. Las placas del exudado fibrinoso
que se forman en la superficie inflamada pegan entre sí el
intestino, el intestino medio y el epiplón adyacentes. El proceso
de adherencia está facilitado enormemente por la inhibición del
peristaltismo que permite que las asas intestinales y el epiplón
permanezcan sin alterar mientras la fibrina sumamente adherente
separa progresivamente con una pared la zona dañada. Aunque este
proceso se ha desarrollado para localizar la infección y detener su
propagación a través de toda la cavidad peritoneal, se produce
inevitablemente la misma respuesta cuando se abre quirúrgicamente
el peritoneo en condiciones estériles.
Por tanto, como parte de la respuesta
inflamatoria, el mesotelio tiene una poderosa capacidad
pro-coagulante a través de su producción local de
factor tisular. Éste, cuando se libera hacia el exudado peritoneal,
inicia una cascada que conduce a la polimerización del fibrinógeno
para dar fibrina sólida. Esto se equilibra mediante una capacidad
fibrinolítica igualmente poderosa cuando los tejidos peritoneales
normales contienen niveles medibles de plasminógeno que puede
convertirse en plasmina mediante la secreción de activador de
plasminógeno tisular. Estos procesos constituyen sistemas en
cascada finamente equilibrados mediante activadores e
inhibidores.
En este caso, la investigación del solicitante
ha demostrado que la gelificación de la fibrina resulta
profundamente afectada cuando se produce en un entorno que contiene
cuerpos lamelares. Los cuerpos lamelares constituyen un último
descubrimiento en la biología moderna, produciéndose su
identificación ultraestructural y su asociación con la importante
función de la secreción pulmonar de surfactante en 1975. Por tanto,
la presencia de cuerpos lamelares dentro de los neumocitos tipo II
siguió sin detectarse hasta que el tejido pulmonar, cuando se fijó
en una mezcla poco común de glutaraldehído y ácido tánico, reveló
que las vacuolas no estaban vacías, sino que contenían de hecho
configuraciones geométricas sorprendentes de lamelas densamente
osmófilas, estrechamente empaquetadas. Ahora, se ha establecido
firmemente la formación intracelular de lamelas fosfolipídicas, su
almacenamiento vacuolar como cuerpos lamelares maduros y la
liberación exocitótica de la superficie luminal de los neumocitos
tipo II como surfactante pulmonar.
Hasta el día de hoy, se cree ampliamente que la
cualidad de lubricante del líquido disperso presente en la cavidad
peritoneal se debe únicamente a la baja concentración de
glicosoaminoglicanos que difunden pasivamente desde los capilares
subyacentes hacia la cavidad. Debido a la escasa resolución del
microscopio óptico, se creyó durante mucho tiempo que la célula
mesotelial era una célula pasiva sencilla del revestimiento
interior. El primer estudio realizado con microscopía electrónica
del peritoneo humano reveló que la célula mesotelial tenía un
contenido subcelular complejo con una organización secretora
característica. Tras la observación de la estrecha concordancia
ultraestructural entre las células mesoteliales y los neumocitos
tipo II, los estudios demostraron que el mesotelio sintetizaba
fosfatidilcolina, el principal constituyente del surfactante
pulmonar, en cantidades iguales a las producidas por el pulmón.
Posteriormente, cuando se aplicaron al peritoneo técnicas de
fijación especializadas desarrolladas para la conservación de los
cuerpos lamelares, se encontraron estructuras idénticas en todas y
cada una de las células mesoteliales. Aunque originalmente se creía
que era exclusiva de los alvéolos pulmonares, pronto se estableció
que la secreción exocitótica de cuerpos lamelares en asociación con
proteína A tensioactiva es un sistema biológico ampliamente
extendido situado en el revestimiento interior mesotelial de todas
las cavidades serosas y presente a menor densidad en una variedad de
otros tejidos por todo el cuerpo.
La presente investigación del solicitante indica
que los cuerpos lamelares desempeñan funciones de surfactante,
lubricante, repelente al agua y transporte. En las cavidades
serosas, su principal función parecería ser la reducción sumamente
eficaz de la fricción a través de rodamientos de rodillos y de bola
autolubricantes que se forman y se vuelven a formar constantemente
entre superficies opuestas.
Puede observarse que sería ventajoso
proporcionar un método de prevención de formación de adherencias
entre superficies durante intervenciones quirúrgicas.
También sería ventajoso proporcionar un método
de disolución de cualquier coágulo sanguíneo y de prevención de la
coagulación.
Un primer objeto de la presente invención es
proporcionar un método de prevención o tratamiento de adherencias
durante la cirugía.
Un objeto adicional de la presente invención es
proporcionar un método de disolver coágulos sanguíneos en
formación, formados y maduros (es decir, formados hace muchos
días).
Un objeto adicional de la presente invención es
proporcionar métodos que puedan ponerse en práctica fácilmente
durante intervenciones quirúrgicas.
Según un primer aspecto de la presente
invención, se proporcionan cuerpos lamelares que comprenden
fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y colesterol para su uso
como una sustancia terapéutica activa.
Según un segundo aspecto de la presente
invención, se proporciona una composición que comprende cuerpos
lamelares que comprenden ellos mismos fosfatidilcolina,
esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilinositol y colesterol para su uso como un
medicamento.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para la prevención de la formación de coágulos de fibrina.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para la modificación de coágulos de fibrina.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para la prevención de adherencias.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para el tratamiento de adherencias.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para la prevención de coágulos intravasculares.
Preferiblemente, la composición farmacéutica es
para la modificación de coágulos intravasculares.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en una disolución.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con cualquier vehículo o excipiente
farmacéutico convencional.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con hialuronano y/o sulfato de
condroitina B.
Opcionalmente, los cuerpos lamelares son cuerpos
lamelares sintéticos.
Una opción adicional es que los cuerpos
lamelares procedan de una fuente natural.
Aún una opción adicional es que se use una
mezcla de cuerpos lamelares naturales y sintéticos.
Preferiblemente, la composición farmacéutica
está en forma de un aerosol.
Preferiblemente, la composición se aplica a
intervalos de 30 minutos.
Preferiblemente, la concentración de
dosificación de los cuerpos lamelares en la composición es de 10 x
10^{9}
por ml.
por ml.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan otros agentes activos.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan compuestos antiestrógeno.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares pueden
incorporar además agentes quimioterápicos antitumorales.
Según un tercer aspecto de la presente
invención, se proporciona un uso de cuerpos lamelares para la
preparación de un agente para la prevención de la formación de
coágulos de fibrina.
Alternativamente, se proporciona el uso de
cuerpos lamelares para la preparación de un agente para la
modificación de coágulos de fibrina.
Preferiblemente, el uso es para la prevención de
adherencias.
Alternativamente, el uso es para la prevención
de adherencias.
Preferiblemente, el uso es para la prevención de
coágulos intravasculares.
Alternativamente, el uso es para la prevención
de coágulos intravasculares.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en disolución.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con cualquier vehículo o excipiente
farmacéutico convencional.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con hialuronano y/o sulfato de
condroitina B.
Opcionalmente, los cuerpos lamelares son cuerpos
lamelares sintéticos.
Una opción adicional es que los cuerpos
lamelares procedan de una fuente natural.
Aún una opción adicional es que se use una
mezcla de cuerpos lamelares naturales y sintéticos.
Preferiblemente, el uso de cuerpos lamelares es
durante intervenciones quirúrgicas.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
pulverizan sobre la zona que va a tratarse.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
aplican a intervalos de 30 minutos.
Preferiblemente, la concentración de
dosificación de los cuerpos lamelares es de 10 x 10^{9} por
ml.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan otros agentes activos.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan compuestos antiestrógeno.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares pueden
incorporar además agentes quimioterápicos antitumorales.
Según un cuarto aspecto de la presente
invención, se proporciona un procedimiento para fabricar un
medicamento destinado a la prevención de la formación de coágulos
de fibrina, caracterizado porque se usan cuerpos lamelares.
Alternativamente, el cuarto aspecto proporciona
un procedimiento para fabricar un medicamento destinado a la
modificación de coágulos de fibrina, caracterizado porque se usan
cuerpos lamelares.
Según un quinto aspecto de la presente
invención, se proporciona un método de prevención de formación de
coágulos de fibrina mediante la administración de cuerpos
lamelares.
Según un sexto aspecto de la presente invención,
se proporciona un método de modificación de coágulos de fibrina
mediante la administración de cuerpos lamelares.
Según un séptimo aspecto de la presente
invención, se proporciona un método de prevención de adherencias
quirúrgicas mediante la administración de cuerpos lamelares al
sitio de cirugía.
Según un octavo aspecto de la presente
invención, se proporciona un método de tratamiento de adherencias
quirúrgicas mediante la administración de cuerpos lamelares a las
adherencias.
Según un noveno aspecto de la presente
invención, se proporciona un método de prevención de coágulos
intravasculares mediante la administración de cuerpos lamelares.
Según un décimo aspecto de la presente
invención, se proporciona un método de modificación de coágulos
intravasculares mediante la administración de cuerpos lamelares.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en disolución.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con cualquier vehículo o excipiente
farmacéutico convencional.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con hialuronano y/o sulfato de
condroitina B.
Opcionalmente, los cuerpos lamelares son cuerpos
lamelares sintéticos.
Una opción adicional es que los cuerpos
lamelares procedan de una fuente natural.
Aún una opción adicional es que se use una
mezcla de cuerpos lamelares naturales y sintéticos.
Preferiblemente, la administración de los
cuerpos lamelares tiene lugar durante intervenciones
quirúrgicas.
Preferiblemente, la disolución de cuerpos
lamelares se pulveriza sobre la zona que va a tratarse.
Preferiblemente, la disolución de cuerpos
lamelares se aplica a intervalos de 30 minutos.
Preferiblemente, la concentración de
dosificación de la disolución de cuerpos lamelares es de 10 x
10^{9} por ml.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan otros agentes activos.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares
incorporan compuestos antiestrógeno.
Preferiblemente, los cuerpos lamelares pueden
incorporar además agentes quimioterápicos antitumorales.
Con el fin de proporcionar una mejor comprensión
de la presente invención, ahora se describirán las realizaciones y
los usos de la invención a modo de ejemplo únicamente y con
referencia a las figuras siguientes, en las que:
la figura 1 es una representación esquemática
del gusano primitivo que muestra la separación del intestino de la
pared corporal mediante la cavidad celómica;
la figura 2 es una representación esquemática
del aspecto del mesotelio y los neumocitos tipo II que demuestra
la estrecha similitud de disposiciones ultraestructurales entre los
tipos celulares;
la figura 3 es una representación esquemática
basada en cortes en serie de mesotelio parietal humano que ilustra
la forma y la disposición de estructuras lamelares;
la figura 4 es una representación esquemática
basada en la reconstrucción tridimensional de micrografías
electrónicas en serie de mesotelio peritoneal humano normal fijado
en mezcla de glutaraldehído y ácido tánico preparada recientemente
para preservar una bicapa fosfolipídica;
la figura 5 es un diagrama simplificado basado
en la reconstrucción tridimensional de la figura 4, que muestra la
mecánica del sistema de lubricación de cuerpos lamelares; y
la figura 6 es una representación esquemática de
los cambios histopatológicos secuenciales observados en el
desarrollo de una respuesta inflamatoria aguda en el peritoneo.
Debe observarse que a lo largo de este
documento, la expresión "cuerpos lamelares" se refiere tanto a
cuerpos lamelares que se producen naturalmente como a
sintéticos.
En un peritoneo normal, las superficies
mesoteliales están separadas por una fina película de líquido (de 4
\mu a
5 \mu) que contiene cuerpos lamelares. El papel de esta capa es para la reducción de la fricción y para la estimulación del movimiento entre superficies opuestas, tal como puede observarse en la figuras 4 y 5. En respuesta a la inflamación aguda, a este sistema de lubricación se opone directamente la formación de fibrina, cuyo fin principal es la estimulación de la adherencia y la reducción del movimiento en el locus. Por lo tanto, se deduce inevitablemente que estos dos sistemas están en un estado de equilibrio biológico ya que, tras la resolución de una respuesta inflamatoria aguda, la fibrina se elimina totalmente y vuelve la capa de lubricación, junto con el movimiento y la función.
5 \mu) que contiene cuerpos lamelares. El papel de esta capa es para la reducción de la fricción y para la estimulación del movimiento entre superficies opuestas, tal como puede observarse en la figuras 4 y 5. En respuesta a la inflamación aguda, a este sistema de lubricación se opone directamente la formación de fibrina, cuyo fin principal es la estimulación de la adherencia y la reducción del movimiento en el locus. Por lo tanto, se deduce inevitablemente que estos dos sistemas están en un estado de equilibrio biológico ya que, tras la resolución de una respuesta inflamatoria aguda, la fibrina se elimina totalmente y vuelve la capa de lubricación, junto con el movimiento y la función.
En una situación en la que el acceso frecuente a
la cavidad peritoneal a través de la inserción o la extracción de
catéteres, y el drenaje y la infusión de cuatro veces al día de 8 a
10 litros de líquido de diálisis en cientos de miles de pacientes,
la cavidad peritoneal actuaba como un tubo de ensayo vivo en el que
su reacción a una amplia variedad de estímulos era obvia tanto para
el paciente como para el asesor médico. Llegó a quedar claro
clínica y patológicamente que la exudación de fibrina era una
característica frecuente de la terapia.
Se han ideado modelos in vitro
relativamente sencillos para estudiar la gelificación de la
fibrina. Dado que la polimerización del fibrinógeno soluble para
dar fibrina polimérica es el acontecimiento fundamental en la
formación de coágulos intravasculares, el establecimiento de un
modelo libre de interferencias de otros elementos sanguíneos, tales
como eritrocitos, leucocitos y plaquetas, es importante para
estudiar el proceso en un entorno en el que el número de variables
es limitado. Mediante el uso de un modelo de este tipo, puede
estudiarse el efecto de adición o sustracción de reactivos
individuales con mayor confianza en la fiabilidad de los
hallazgos.
La molécula de fibrinógeno es un dímero
asimétrico con forma de varilla (de aproximadamente 10 x 45 nm).
Con la activación, las moléculas de fibrinógeno polimerizan
mediante asociación de extremo con extremo y de lado con lado,
formando así protofibrillas. Las protofibrillas se asocian para
formar fibras de fibrina y estas últimas se unen en haces de
anchuras más grandes. Se cree que las protofibrillas se enrollan de
manera helicoidal, reflejando una simetría de hélice autóctona en
la propia molécula de fibrinógeno. Las fibras de fibrina también se
enrollan y crecen hasta un tamaño limitante. La limitación en el
crecimiento se explica como una consecuencia del estiramiento de
las protofibrillas cerca de la superficie de la fibra. Cuando la
cantidad de energía necesaria para estirar una protofibrilla supera
la energía disponible para la unión, entonces cesa el crecimiento
lateral.
Los geles de fibrina hidratados se han estudiado
mediante una variedad de métodos físico-químicos,
mediante microscopía óptica y electrónica, permeación de líquidos y
turbidez. Se encontró que los geles del fibrinógeno humano normal
estaban compuestos de elementos de fibra lineales de tipo varilla,
algunos de los cuales se originan a partir de nódulos más densos.
El aumento de las concentraciones de trombina o fibrinógeno forma
redes de gel que se vuelven más apretadas, con las hebras de la
fibra más cortas y la porosidad disminuye. La porosidad del gel de
la red también disminuye en los geles formados a fuerzas iónicas
crecientes. Se sabe que la albúmina y el dextrano, cuando están
presentes en el sistema de formación de gel, producen estructuras
más porosas. Por tanto, se cree que la albúmina está entre los
determinantes para la formación de este tipo de estructura de gel
en el plasma.
Se obtuvieron cuerpos lamelares sintéticos
usando una mezcla de fosfolípidos (fosfatidilcolina,
esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilinositol y colesterol en cloruro de sodio al 0,9%).
Mediante microscopía electrónica de transmisión se demostró que el
intervalo de tamaños de los cuerpos lamelares sintéticos y la
configuración ultraestructural de las bicapas lamelares eran
congruentes con los cuerpos lamelares que se producen naturalmente.
También se sometieron a prueba los cuerpos lamelares sintéticos
para determinar la esterilidad.
Se formaron coágulos de fibrina usando
fibrinógeno humano y trombina humana. Se obtuvieron alícuotas del
fibrinógeno a 2 mg por ml y de la trombina a una concentración
final de 0,05 \mug por ml en un tampón de tris-HC1
0,5 M + cloruro de sodio 0,1 M + cloruro de calcio 0,018 M. A 200
\muL de disolución de fibrinógeno se añadieron 25 \muL de
trombina, se mezcló y se dejó coagular durante 60 minutos. Entonces
se recubrió el coágulo formado con 200 \muL de tampón y se incubó
durante una hora a 37ºC.
La gelificación de fibrina se ve influida por la
fuerza fónica de la disolución. Por tanto, el efecto de dilución de
añadir cuerpos lamelares sintéticos obtenidos en cloruro de sodio
al 0,9% se compensó mediante ajustes apropiados en las
concentraciones de fibrinógeno y trombina. También se analizó y se
caracterizó independientemente el efecto de los cambios en el
equilibrio salino y en la estructura y la formación de coágulos.
Los coágulos formados con y sin cuerpos lamelares sintéticos se
obtuvieron inicialmente en crioviales especialmente adaptados para
facilitar eliminación fácil del coágulo. Los coágulos posteriores
obtenidos para diferentes estudios se formaron en jeringuillas de 2
ml, 48 placas de microtitulación y cubetas de plástico
semimicro.
Los coágulos de fibrina formados en el modelo
in vitro eran de color blanco con una translucidez variable.
Los coágulos que contenían cuerpos lamelares sintéticos también
eran visiblemente más translúcidos que los coágulos habituales. No
se adherían a superficies de plástico y de vidrio a diferencia de
los coágulos habituales que eran fuertemente adherentes a
superficies de plástico y de vidrio.
La diferencia entre los coágulos formados en
condiciones habituales y los formados añadiendo concentraciones
crecientes de cuerpos lamelares sintéticos está relacionada
directamente con la porosidad del coágulo. A su vez, la densidad
del coágulo es una función del grado de separación de las fibras
de fibrina, que es dependiente de la concentración de los cuerpos
lamelares sintéticos presentes al comienzo de la gelificación.
La estructura tridimensional del gel que refleja
su densidad puede medirse con exactitud y expresarse de tres
modos:
1. ultraestructura de la red de fibrina mediante
microscopía electrónica de barrido y de transmisión;
2. absorbancia de la luz transmitida a 620
\ring{A}; y
3. impedancia del paso de líquidos a través del
gel.
Se investigaron los estudios de la evolución
temporal del proceso dinámico de gelificación usando los tres
métodos de medición. Éstos demostraron que la adición de incluso
cantidades pequeñas de cuerpos lamelares sintéticos alteró
significativamente la evolución temporal de la polimerización del
fibrinógeno para dar fibrina.
La morfología de los coágulos formados con
diferentes concentraciones de cuerpos lamelares sintéticos, cuando
se comparó con la de los coágulos habituales, proporcionó una
percepción considerable sobre el efecto de los cuerpos lamelares
sintéticos sobre la gelificación. Los coágulos examinados mediante
microscopía electrónica de barrido y de transmisión se fijaron en
mezcla de glutaraldehído al 2,5%, ácido tánico al 2% y se fijaron
posteriormente en tetróxido de osmio al 1% con el fin de preservar
los cuerpos lamelares sintéticos.
Con la microscopía electrónica de barrido, los
coágulos habituales mostraron una red densa de fibras de fibrina
sólidas ramificadas y entrelazadas. Adicionalmente, numerosos
nódulos pequeños estaban distribuidos regularmente por todas las
fibras. Los aspectos ultraestructurales tridimensionales, el
espesor relativo y la separación de las fibras, junto con los
nódulos, eran estrechamente similares a los encontrados en muchas
biopsias peritoneales de peritoneo humano que muestran fibrina
depositada recientemente. Se fijaron las biopsias peritoneales y
los coágulos in vitro y se procesaron de forma idéntica. Por
tanto, la estrecha concordancia ultraestructural entre la formación
de coágulos de fibrina in vitro y la formación de fibrina
extravascular peritoneal in vivo da un crédito considerable
a, y por consiguiente confianza en, los resultados de la
información derivada del modelo in vitro.
La microscopía electrónica de transmisión de
coágulos de fibrina habituales mostró fibrillas finas,
moderadamente osmófilas, dispuestas en haces separados entre sí por
espacios despejados regulares. De nuevo, los aspectos
ultraestructurales eran estrechamente similares a los observados
in vivo en las biopsias peritoneales de pacientes con
diálisis.
La microscopía electrónica de barrido de
coágulos de fibrina formados con diferentes concentraciones de
cuerpos lamelares sintéticos mostró una arquitectura tridimensional
significativamente diferente de la observada en los coágulos de
fibrina habituales. Las fibras de fibrina eran más gruesas, más
irregulares y más desiguales que las observadas en los coágulos
habituales. Los espacios dentro de la red eran mayores debido a la
separación más amplia de las fibras.
Las micrografías electrónicas de transmisión de
coágulos de fibrina formados con cuerpos lamelares sintéticos
mostraron un aspecto ultraestructural radicalmente diferente al
encontrado en los coágulos habituales. Mientras que en los coágulos
habituales, la geometría era exclusivamente una de las fibras de
fibrina dispuestas en una red rectilínea, en los coágulos formados
con cuerpos lamelares sintéticos las fibras mostraban
configuraciones geométricas adicionales que eran curvilíneas o
circulares, reflejando la naturaleza vesicular de los cuerpos
lamelares sintéticos. Tal como se muestra mediante la microscopía
electrónica de barrido, la red era más suelta debido al
ensanchamiento de los espacios entre las fibras.
Los dos reactivos, el fibrinógeno y la trombina,
son solubles en solución electrolítica para dar un líquido
transparente con sólo absorbancia mínima de la luz. El proceso
dinámico de polimerización confiere una opacidad o una turbidez que
aumenta con el tiempo hasta un límite. Este proceso puede
registrarse con exactitud en un espectrofotómetro mediante la
medición de la absorbancia de la luz a 620 \ring{A}. En los
coágulos de fibrina habituales hay un rápido desarrollo de la
turbidez que alcanza un máximo dentro de un periodo relativamente
corto. Los cuerpos lamelares sintéticos poseen baja turbidez al
igual que los cuerpos lamelares naturales. La adición de cuerpos
lamelares sintéticos al mismo tiempo que el mezclado de trombina y
fibrinógeno produce un coágulo que muestra un patrón
significativamente diferente de absorbancia de la luz del que se
observa en el procedimiento de formación de coágulos habitual. La
turbidez se desarrolla más lentamente, y tras alcanzar una meseta a
un máximo, inferior al observado en el coágulo de fibrina habitual,
la turbidez vuelve a disminuir hasta niveles básicos durante un
periodo de 24 horas. Las observaciones de la turbidez indican que
los cuerpos lamelares sintéticos alteran extremadamente el proceso
de formación de coágulos, tanto cronológica como estructuralmente,
lo que se refleja en la alteración en la tasa y en la manera de
polimerización del fibrinógeno para dar fibrina. Esto muestra que
la incorporación de cuerpos lamelares sintéticos en un coágulo en
formación da como resultado su disolución tras de 24 horas a 5
días, dependiendo del volumen y de la concentración de cuerpos
lamelares sintéticos y del volumen del coágulo.
La comparación entre las velocidades de flujo de
un líquido a través de redes de gel es una medición del tamaño de
poro relativo en la prueba de material. Puede formarse un
experimento sencillo llevado a cabo usando un coágulo de fibrina
habitual y un coágulo de fibrina que contiene cuerpos lamelares
sintéticos en una jeringuilla de 2 ml. Se colocó un papel filtro
Whatman sobre la base de la jeringuilla para cubrir la abertura. A
una presión fija, puede medirse la velocidad de paso del tampón a
través de la jeringuilla. Esto muestra que el paso de líquido a
través de un coágulo que contiene cuerpos lamelares sintéticos es
al menos un 30% más rápido que en el coágulo de fibrina habitual,
lo que indica un tamaño de poro significativamente mayor en
coágulos formados en presencia de cuerpos lamelares sintéticos.
Usando las mismas concentraciones de cuerpos
lamelares sintéticos que se incorporaron en coágulos de fibrina que
se forman activamente, se llevaron a cabo experimentos en los que
se recubrieron disoluciones de cuerpos lamelares sintéticos a
diferentes intervalos de tiempo sobre coágulos de fibrina habituales
formados previamente. Se encontró que a temperatura ambiente y a
37ºC, la aplicación de los cuerpos lamelares sintéticos dio como
resultado una disolución del coágulo en de 24 horas a 5 días,
dependiendo del volumen y de la concentración de cuerpos lamelares
sintéticos y del volumen del coágulo. Los coágulos de fibrina en un
sistema in vitro usando sólo trombina poseían uniones
laterales no covalentes relativamente débiles entre las fibras.
Para un factor 13 de red de fibrina estable (factor estabilizador
de la fibrina), se requiere una transamidasa para efectuar la unión
lateral a través de la formación de enlaces peptídicos.
Se recoge sangre humana venosa extraída
recientemente y se permite que coagule en tubos. Tras una hora,
cuando se ha producido la retracción del coágulo, se decanta el
suero y se añade una solución salina que contiene cuerpos lamelares
sintéticos. Tras de 24 horas a 5 días, dependiendo del volumen y
de la concentración de cuerpos lamelares sintéticos y del volumen
del coágulo, se disuelve el coágulo casi completamente. Los
coágulos envejecidos en tampón a 37ºC durante de 24 horas a 5 días
también muestran un grado similar de disolución después de la
exposición tras de 24 horas a 5 días a disoluciones que contienen
cuerpos lamelares sintéticos.
Los cuerpos lamelares representan un agente
único para influir en la polimerización del fibrinógeno para dar
fibrina durante el proceso activo, y también influyen en la
fragmentación de la fibrina formada previamente. Su acción a este
respecto es única, ya que no son enzimas proteolíticas. Los cuerpos
lamelares sintéticos, como cuerpos lamelares sustitutos, son
microcuerpos de 0,4 a 3 \mu de diámetro, en comparación con las
moléculas de proteína globular que son los participantes
predominantes en las cascadas de coagulación y fibrinolítica.
Las investigaciones llevadas a cabo por el
inventor indican que parte del modo de acción de los cuerpos
lamelares sintéticos es secuestrar factores implicados en la
coagulación mediante su unión a las bicapas fosfolipídicas. Dado
que los cuerpos lamelares sintéticos son multilamelares y sumamente
deformables, pueden formarse y volver a formarse cuando están en
contacto entre sí. Esta propiedad de exponer una capa superficial
que cambia constantemente confiere a los cuerpos lamelares
sintéticos una capacidad masiva de adsorber y atrapar factores
cruciales para la cascada de coagulación.
Tal como se mencionó anteriormente, la molécula
de fibrinógeno es un dímero asimétrico con forma de varilla que,
con la activación, polimeriza mediante asociación de extremo con
extremo y de lado con lado, formando así protofibrillas. Las
protofibrillas se asocian para formar fibras de fibrina y estas
últimas se unen en haces de anchuras más grandes. Las
protofibrillas se enrollan de manera helicoidal. Las fibras de
fibrina también se enrollan. El enrollamiento helicoidal determina
el diámetro absoluto de las fibras de fibrina, porque la acreción
de las fibras se detiene cuando la torsión de las fibras exteriores
aumenta hasta el punto en que la cantidad y la energía necesarias
para el estiramiento de las protofibrillas exteriores superan la
energía disponible para la unión. El enrollamiento innato de las
fibras de fibrina establece un límite en la agregación lateral y,
por consiguiente, en el crecimiento radial. Se sabe que las fibras
de fibrina se ajustan a una geometría rectilínea tridimensional en
la red de fibrina. Aunque tanto las protofibrillas como las fibras
se enrollan para conferir una resistencia máxima, las propias
fibras no son curvas sino rectilíneas. Cuando se consideran coágulos
de fibrina puros, el tamaño y la plasticidad de los cuerpos
lamelares sintéticos les permiten filtrarse a través y entre las
hebras de fibrina en el retículo en desarrollo. La presencia
esférica dentro de una red de fibrina rectilínea en desarrollo
impondrá una tensión estructural anómala sobre las fibrillas cuyo
propio montaje en la polimerización depende del enrollamiento
helicoidal. Por lo tanto, las fibras que se forman alrededor de
microcuerpos curvilíneos estarán sometidas a una tensión mecánica
adicional en la que la curvatura de las fibras creará un nivel de
energía superior en las protofibrillas en el aspecto exterior de la
convexidad y superará la energía de unión entre las protofibrillas.
Esto dará como resultado fibras de tamaño significativamente
reducido a través de la imposición de un nuevo límite inferior en
el diámetro radial de las fibras. Por tanto, la presencia de
cuerpos lamelares sintéticos dentro de un coágulo en desarrollo
introducirá una tensión mecánica que limita la formación de redes
de fibrina que se sostienen y se propagan por sí mismas.
Dado que los cuerpos lamelares sintéticos imitan
la acción de los cuerpos lamelares naturales, pueden usarse ambos
como agentes terapéuticos para varios usos. La disolución de
cuerpos lamelares sintéticos, con y sin adición de hialuronano y/o
sulfato de condroitina B, proporciona un método de modificación de
la deposición y/o la eliminación de fibrina in situ en la
mayoría de los tejidos, cavidades, vasos sanguíneos y conductos sin
requerir enzimas fibrinolíticas proteolíticas o anticoagulantes que
tienen efectos secundarios sistémicos potencialmente mortales. Por
tanto, el papel clave de los cuerpos lamelares sintéticos o
naturales en las terapias es que proporcionan la lisis o la
modificación local dirigida de fibrina o de coágulos de sangre
completa. Esto significa que pueden usarse cuerpos lamelares
sintéticos en terapias en las que se requieren propiedades de
antiadherencia o de anticoagulante.
En particular, pueden usarse cuerpos lamelares
en el tratamiento de dos grupos principales de trastornos:
- 1.
- La restauración de la función y las estructuras normales en sitios sometidos a reacción inflamatoria aguda, a través de la eliminación de la fibrina extravascular para permitir la cicatrización por primera intención. Pueden usarse cuerpos lamelares para prevenir o para modificar la formación de tejido de granulación, evitando así la escarificación y la pérdida de función.
- 2.
- También pueden usarse cuerpos lamelares para tratar la formación de coágulos de sangre completa intravasculares y extravasculares. Los cuerpos lamelares sintéticos se usarán o bien para prevenir o bien para modificar la coagulación intravascular en segmentos confinados del árbol vascular. Esto puede usarse como medida preventiva en situaciones que implican cirugía vascular y manipulaciones dentro de un vaso, tales como la angioplastia coronaria, que dan como resultado actividad procoagulante y/o microémbolos en lechos capilares y arteriolares distales. Pueden usarse cuerpos lamelares sintéticos para tratar la trombosis intravascular inyectándolos en coágulos formados previamente en vasos de todos los calibres en el árbol arterial. También pueden usarse cuerpos lamelares sintéticos en disolución para licuar hematomas mediante inyecciones directas. Este tratamiento sería aplicable cuando la hinchazón local está produciendo una alteración funcional aguda o cuando la dispersión más rápida del hematoma mediante cuerpos lamelares sintéticos prevendría la cicatrización lenta por el tejido de granulación, produciendo la escarificación y la desfiguración.
Pueden usarse cuerpos lamelares sintéticos como
agentes de antiadherencia en todas las formas de cirugía. En
particular, los cuerpos lamelares en disolución pueden usarse en
intervenciones quirúrgicas en las cavidades peritoneal, pleural,
pericárdica, articular y cubiertas de tendones. También pueden
usarse cuerpos lamelares en neurocirugía.
En la cirugía abdominal abierta, se pulverizan
ligeramente las superficies del peritoneo visceral y parietal, en
una zona lo más amplia posible, con 2 ml de cuerpos lamelares
sintéticos antes de llevar a cabo cualquier manipulación
quirúrgica. Los cuerpos lamelares sintéticos con su fluido atrapado
llegan a enredarse en la densa alfombra de superficie con
microvellosidades de las células mesoteliales expuestas, antes de
que comience el efecto nocivo del secado por aire. Una fina capa de
cuerpos lamelares sintéticos protege el mesotelio del secado. Por
lo tanto, los cuerpos lamelares sintéticos tienen in situ
una densidad aumentada al comienzo de la operación, cuando el
estímulo anómalo de abrir la cavidad induce la exudación de
fibrinógeno y la deposición de fibrina sobre la superficie del
revestimiento interior peritoneal expuesto. Por tanto, la fina red
de fibrina que se desarrolla normalmente al comienzo de las
intervenciones quirúrgicas tendrá lugar en un entorno de densidad
aumentada de cuerpos lamelares sintéticos. Por lo tanto, los
coágulos de fibrina extravasculares formados al inicio contendrán
cuerpos lamelares sintéticos, dando como resultado la formación de
una red de fibrina que es menos densa de lo normal y que estará
abierta a la degradación fibrinolítica mediante cuerpos lamelares
sintéticos y el sistema fibrinolítico.
La dosis media que se pulveriza en cada ocasión
cuando se usa es de 1 ml. La concentración ideal de cuerpos
lamelares sintéticos es de 10 x 10^{9}/ml. 100 microlitros de
disolución de lamelasoma sintético pulverizados uniformemente
cubrirán 1 m^{2} de superficie peritoneal hasta una profundidad
de 3 \mu. Según la naturaleza de la intervención quirúrgica, debe
pulverizarse un 1 ml adicional de disolución de cuerpos lamelares
sintéticos sobre toda la zona quirúrgica cada 30 minutos a lo largo
de toda la intervención. Deben pulverizarse 2 ml finales de
disolución de cuerpos lamelares sintéticos uniformemente alrededor
del peritoneo inmediatamente antes de cerrar el abdomen. En una
operación abdominal que dura 4 horas, el volumen total aplicado de
disolución de cuerpos lamelares sintéticos es de 10 ml.
Las disoluciones de cuerpos lamelares sintéticos
deben usarse en las laparotomías llevadas a cabo para tratar la
adherenciotomía de una manera similar a la descrita para la cirugía
abdominal abierta. De nuevo, en la cirugía abdominal laparascópica
que usa la técnica de neumoperitoneo, debe pulverizarse el
peritoneo con una dosis media de 1 ml al comienzo de la operación y
a una media de cada 30 minutos a lo largo de toda la
intervención.
Los cuerpos lamelares sintéticos que se
pulverizan en la cavidad peritoneal se eliminan posoperatoriamente
mediante drenaje a través de los opérculos del sistema linfático en
ambas zonas abovedadas del diafragma, pasando a través del
conducto torácico hacia la circulación general. Los cuerpos
lamelares sintéticos se fagocitan fácilmente (al igual que los
cuerpos lamelares naturales) mediante el sistema
reticuloendotelial. La carga obtenida a través del uso de una dosis
media total de 10 ml en una operación de cuatro horas no produciría
sobrecarga del sistema reticuloendotelial. Además de esta vía de
dispersión de cuerpos lamelares sintéticos, hay otros dos modos
principales de captación en el metabolismo. Al igual que ocurre con
cuerpos lamelares naturales, los cuerpos lamelares sintéticos se
fagocitan por macrófagos peritoneales que reciclan los
fosfolípidos, como ocurre en los alvéolos pulmonares, para la
absorción por el mesotelio como un sustrato para producir nuevos
cuerpos lamelares. Por tanto, cualquier exceso de cuerpos lamelares
sintéticos en el periodo posoperatorio proporciona una gran reserva
de sustrato fosfolipídico para soportar altos niveles de producción
de cuerpos lamelares. El mantenimiento de la secreción de cuerpos
lamelares en el periodo posoperatorio inicial no sólo sirve para la
regulación por disminución de la formación de fibrina
extravascular, sino que mejora el papel antiadherente en reducir la
fricción entre las capas del peritoneo.
De manera característica, las regiones de unión
entre células mesoteliales están inclinadas. Por tanto, las células
mesoteliales se solapan. Los núcleos de las células mesoteliales
muestran características nucleares específicas encontradas en las
células sometidas a extremos de estiramiento. Por tanto, el
mesotelio, en las zonas en las que puede expandirse hasta 10 veces
su circunferencia normal, debe someterse a grandes aumentos en el
área superficial con el fin de mantener una cubierta celular
intacta. Los cuerpos lamelares secretados en la superficie luminal
por el mesotelio pasan entre las células hacia las regiones de
unión, en las que se ubican en el peritoneo normal. Su presencia
regular en las regiones de unión alargadas, inclinadas, sirve como
una función importante para permitir el deslizamiento sin
fricciones entre los bordes celulares para permitir el estiramiento
sin exponer las zonas desnudas entre las células. Proporcionar un
exceso de cuerpos lamelares sintéticos en el periodo posoperatorio,
en el que el tejido submesotelial inflamado muestra diversos grados
de edema y estiramiento del mesotelio subyacente, sirve como una
protección añadida importante frente a la ruptura y la separación
de la capa de células mesoteliales y frente la continuación de la
exudación posoperatoria de fibrinógeno y la formación de
fibrina.
Los procedimientos que usan cuerpos lamelares en
disolución son aplicables en la prevención de adherencias durante
la cirugía llevada a cabo en las cavidades pericárdica y pleural.
En el pasado, no se prestó atención a la aparición de adherencias
pericárdicas a la pared torácica, ya que no se consideraba que la
interferencia con los movimientos cardiacos fuera perjudicial para
la función cardiaca. Además, se creía que una única operación
cardiaca abierta era todo lo que un paciente individual requeriría
en el resto de su vida. Sin embargo, más recientemente, las series
de operaciones cardiacas se han vuelto cada vez más comunes. Esto
significa que el tiempo invertido por el cirujano en la disección
laboriosa de adherencias entre el corazón y la pared torácica
anterior se ha añadido considerablemente tanto al tiempo como a la
dificultad en limpiar la zona antes de llevar a cabo una operación.
La administración de disolución de cuerpos lamelares al abrir la
cavidad pericárdica puede llevarse a cabo como en las operaciones
abdominales, con una pulverización inicial de 1 ml al pericardio
parietal y visceral.
También pueden usarse disoluciones de cuerpos
lamelares en la cirugía pulmonar para mantener una pleura móvil
libremente. En varios trastornos y situaciones quirúrgicas, la
adherencia pleural puede ser beneficiosa y por lo tanto, no se
usarían disoluciones de cuerpos lamelares. Sin embargo, una pleura
móvil libre de adherencias puede ser importante cuando hay
implantación tumoral pleural y debe mantenerse el acceso a toda la
cavidad para la administración de quimioterapia intrapleural. En
particular, las implantaciones tumorales que contienen fibrina
densa producen adherencias densamente colagenosas que secuestran
depósitos metastásicos inaccesibles a los agentes
antitumorales.
La presente invención también engloba la opción
de incorporar otros agentes activos en y dentro de los cuerpos
lamelares para efectuar y proporcionar un beneficio terapéutico
dirigido durante la cirugía. Por ejemplo, en la endometriosis
peritoneal, pueden prepararse cuerpos lamelares para que contengan
compuestos antiestrógenos que servirán para suprimir el epitelio
endometrial, así como para suprimir la formación de fibrina densa
focal tras la adherenciotomía.
Además, pueden usarse cuerpos lamelares que
contienen agentes quimioterápicos antitumorales durante operaciones
en pacientes con carcinomatosis abdominal, ya que los depósitos
tumorales peritoneales se implantan clásicamente en zonas desnudas
del peritoneo, llegando a enredarse en coágulos de fibrina y
formando adherencias densas que contienen zonas de refugio de
depósitos tumorales metastásicos. Esta estrategia terapéutica
también es aplicable a las cavidades pleural y pericárdica.
Pueden usarse disoluciones de cuerpos en cirugía
abierta y artroscópica para modificar la deposición de fibrina y
para estimular la cicatrización por primera intención suprimiendo
la escarificación y previniendo las adherencias en articulaciones.
De manera apropiada, deben usarse volúmenes reducidos de disolución
de cuerpos lamelares, dependiendo del tamaño del espacio
articular.
Pueden usarse disoluciones de cuerpos lamelares
en operaciones en tendones para pulverizar superficies viscerales
cuando estén expuestas, así como pulverizando los aspectos
exteriores de la cubierta del tendón para prevenir la formación de
coágulos de fibrina densa.
En la cirugía del sistema nervioso periférico,
las disoluciones de cuerpos lamelares y las pulverizaciones deben
usarse cuando la cirugía se lleva a cabo en el perineurio.
En la cirugía intracraneal e intrarraquídea, las
meninges también se someten a reacción inflamatoria aguda a la
interferencia quirúrgica, como en otras cavidades corporales.
Cuando la exudación de fibrina puede dar como resultado la
escarificación con efectos disfuncionales, el uso de disolución de
cuerpos lamelares es una opción. Asimismo, el líquido
cefalorraquídeo también contiene cuerpos lamelares secretados por
el epéndimo. Por lo tanto, las operaciones para aliviar el bloqueo
intracisternal pueden beneficiarse del uso de disoluciones de
cuerpos lamelares para contrarrestar cualquier actividad
procoagulante estimulada por la cirugía que, en caso contrario,
invertiría el desenlace deseado de la intervención quirúrgica.
En la artritis reumatoide, la inflamación aguda
es el procedimiento patológico cíclico que conduce a la destrucción
de las articulaciones. En la inflamación aguda, hay una exudación
masiva de fibrinógeno desde los vasos hiperpermeables del sinovio
inflamado, sumamente vascular. Por tanto, la fibrina se deposita en
los tejidos periarticulares y en el espacio articular. En la
artritis reumatoide, la fibrina puede constituir hasta el 34% del
volumen del líquido sinovial en el que está presente como los
denominados copos y granos de arroz, mientras que capas
estratificadas gruesas cubren la totalidad de las superficies
articulares. Las redes de fibrina también se infiltran ampliamente
por todos los tejidos periarticulares. La deposición generalizada
repetida de fibrina en el tejido de granulación y en los espacios
articulares da como resultado la cicatrización por segunda
intención, lo que conduce a adherencias fibrosas, escarificación y
obliteración del espacio articular. Vale la pena mencionar que la
deposición intraarticular de fibrina también es una característica
de otros tipos de inflamación articular aguda, como en la gota, la
seudogota y la enfermedad de Reiters.
Las inyecciones intraarticulares de disolución
de cuerpos lamelares pueden usarse en la inflamación articular
aguda para prevenir la formación de coágulos de fibrina densa y
para estimular la disolución y la fragmentación de fibrina. Esto
puede llevarse a cabo conjuntamente con la administración de
medicación antiinflamatoria.
La trompa de Eustaquio conecta las cavidades del
oído medio con la faringe. Su única función es la ecualización de
la presión de aire en ambos lados del tímpano. Si la trompa de
Eustaquio está bloqueada, se eleva la presión del aire en el oído
medio, produciendo la disminución creciente de la agudeza auditiva.
En 1982 se descubrió que las células del revestimiento interior en
la trompa de Eustaquio secretaban surfactante pulmonar. Hasta el
día de hoy, los otorrinolaringólogos no aprecian ampliamente que
este hallazgo poco común es de crucial importancia en la causalidad
de la enfermedad en esta parte del cuerpo. La propiedad de
surfactante de los cuerpos lamelares secretados en este conducto ha
dificultado quizá su comprensión de que el papel principal de la
secreción de cuerpos lamelares no es la de un surfactante, sino la
de proporcionar superficies antiadherentes que pueden desbloquear
los exudados y trombos de fibrina.
La trompa de Eustaquio cuida una función vital
en la supervivencia de un animal protegiendo la agudeza auditiva
tanto del predador como de la presa. En los homínidos, la reciente
adopción de la posición erguida ha dado como resultado un drenaje
inferior al óptimo del oído medio, dado que ha habido un tiempo
evolutivo insuficiente para la modificación de un sistema habitual
en todos los cuadrúpedos de un cráneo horizontal y un movimiento
hacia delante constante. Esta deficiencia anatómica, junto con la
reciente agrupación de las especies en grandes grupos, ha dado como
resultado una situación en la que la otitis media con derrame u
"otitis media adhesiva" es una epidemia actual que afecta
hasta una tercera parte de todos los niños en algún momento del
inicio de sus vidas (Bull PD. En: Diseases of the ear, nose and
throat. Blackwell Science Ltd. Oxford. 1996, págs.
57-60). Este estado se debe a la acumulación de
líquido, a menudo viscoso, dentro de la fisura del oído medio a
través del bloqueo de la trompa de Eustaquio y al escaso drenaje
resultante en la faringe. Esto conduce a sordera conductiva
significativa lo que produce una alteración educacional y del
desarrollo.
La patología de este estado se deriva de la
inflamación aguda de la trompa de Eustaquio a través de la
extensión desde la faringe de una infección viral y/o bacteriana.
Como en todos los sitios, el exudado inflamatorio agudo contiene
una alta proporción de fibrina extravascular cuya función es
localizar la infección y prevenir su propagación. De nuevo, el
exudado fibrinoso masivo o persistente cicatrizará por segunda
intención, produciendo fibrosis submucosa, sinequia luminal
(adherencias finas), estrechamiento y bloqueo del conducto. Como en
otros sitios, las secuelas patológicas se derivan de lo
insostenible de la capacidad de los cuerpos lamelares para
garantizar la eliminación inicial de la fibrina extravascular. Por
tanto, el uso de disolución de cuerpos lamelares en un estadio
inicial y apropiado, a través de la administración de modo continuo
o intermitente mediante inyección directa o a través de arandelas
que dan acceso al oído medio y a la trompa de Eustaquio modificará
la fibrina en su formación mientras que también lisa el exudado
fibrinoso anterior formado previamente.
Los hallazgos de las investigaciones in
vitro llevadas a cabo con respecto a la presente invención de
la acción biológica sumamente potente de los cuerpos lamelares
sobre la formación y la eliminación de fibrina ha ocasionado una
nueva evaluación crítica de la validez de los conceptos
establecidos de la etiopatogenia de todos los trastornos pulmonares
que implican una respuesta inflamatoria. Estos hallazgos revelan
la existencia de un papel fundamental no reconocido hasta ahora de
los cuerpos lamelares en la resolución satisfactoria de
enfermedades pulmonares que implican inflamación aguda y su
deposición inevitable de fibrina intraalveolar. A la inversa, ahora
puede predecirse que cualquier trastorno que reduce la secreción de
cuerpos lamelares pulmonares va a tener efectos patológicos graves
en la resolución de la respuesta inflamatoria en virtud de que no
potencia la eliminación inicial de fibrina, dando como resultado la
cicatrización por segunda intención, tejido de granulación y
fibrosis. Por tanto, el papel de los cuerpos lamelares como cuerpos
lamelares sustitutos asume un potencial terapéutico novedoso para
la mejor resolución de la mayoría, sino todos, los trastornos
pulmonares en los que se produce la exudación intraalveolar de
fibrina.
Los alvéolos pulmonares poseen paredes
microscópicamente finas, de 20 - 40 micras de espesor, que contiene
la red capilar rica. Si un agente que provoca una reacción
inflamatoria logra pasar a través de las vías respiratorias
proximales, tendrá lugar una reacción inflamatoria aguda en una
región con una arquitectura microscópica sumamente delicada que
delimita los alvéolos pulmonares. Por tanto, en virtud de la
hipervascularidad de la estructura de panal de paredes finas del
pulmón, es obvio que el efecto del derrame de fibrina en tal sitio
tendría efectos inmediatos y catastróficos sobre la función
pulmonar. Como en otros sitios, la inflamación aguda da como
resultado la congestión vascular de la red de capilares en las
paredes alveolares, lo que conduce a marginación de los
granulocitos, aumento de la permeabilidad de las paredes de los
vasos y derrame del exudado rico en fibrinógeno alrededor y a
través del epitelio pulmonar hacia el espacio alveolar. Por tanto,
se deposita fibrina alrededor de las paredes de los alvéolos
pulmonares en una situación en la que los neumocitos tipo II
secretan cuerpos lamelares como surfactante pulmonar.
Debido a la ausencia de cualquier conocimiento
en el mundo biológico o médico del efecto de los cuerpos lamelares,
tal como se demuestra por la investigación realizada con cuerpos
lamelares sintéticos en la formación y la eliminación de fibrina, a
partir de este momento, debe considerarse cualquier explicación
actual del curso de la evolución o la resolución patológica de la
respuesta inflamatoria en el pulmón.
Por lo tanto, según el papel de la fibrina en la
respuesta inflamatoria aguda, considerado a la luz de la
vulnerabilidad estructural y funcional de los alvéolos pulmonares,
no puede ser una coincidencia que el pulmón fuera el primer sitio
en el que se reconoció la secreción de cuerpos lamelares, y ahora
se muestra que además de cualquiera que sean las propiedades de
surfactante que proporcionan, los cuerpos lamelares tienen un
profundo efecto en la formación y la eliminación de fibrina
extravascular.
\vskip1.000000\baselineskip
Los fosfolípidos tensioactivos que se acumulan
en los pulmones durante la última fase de la gestación, disminuyen
la tensión superficial del líquido pulmonar fetal y reducen la
resistencia a la aireación debida a la capilaridad en las vías
respiratorias más finas. Por tanto, debe estar presente una
cantidad adecuada de surfactante pulmonar secretado como cuerpos
lamelares en el nacimiento para el inicio y el mantenimiento de la
respiración.
La falta de surfactante neonatal da lugar a un
estado conocido a veces como síndrome disneico o a veces como
enfermedad de la membrana hialina. Su causa más común es la
prematuridad, en la que los neumocitos tipo II en el pulmón
inmaduro no consiguen secretar una suficiencia de surfactante para
establecer condiciones fisiológicas normales para el mantenimiento
de la respiración. El concepto biológico básico que domina
totalmente el entendimiento de la fisiopatología de este síndrome y
que es responsable exclusivamente de la única estrategia
terapéutica, es el papel del surfactante en el establecimiento de
un intercambio gaseoso adecuado entre los alvéolos y los capilares
pulmonares. No se reconoce ningún otro papel para la presencia de
bicapas fosfolipídicas en los alvéolos pulmonares. Por tanto, todos
los esfuerzos farmacéuticos se concentran en proporcionar
surfactante en su forma más completa y natural para cumplir con
todos los criterios físicos y con la mecánica pulmonar del
intercambio gaseoso. Sin embargo, el nombre más antiguo de
enfermedad de la membrana hialina señala históricamente la
preocupación de los patólogos que acuñaron este término, sobre los
sorprendentes hallazgos histológicos en los alvéolos pulmonares de
los recién nacidos que mueren de este estado. El uso del término
"membrana" indica una barrera física entre el aire alveolar y
los vasos sanguíneos subyacentes. "Membrana hialina" fue un
término patológico impreciso para el material acelular eosinófilo.
La histoquímica moderna y la microscopía electrónica han demostrado
que, de hecho, la membrana hialina consiste en su mayor parte en
fibrina.
La investigación del solicitante ha demostrado
que no sólo se requieren cuerpos lamelares para establecer las
condiciones físicas apropiadas para el intercambio gaseoso, sino
que los cuerpos lamelares son un elemento de equilibrado clave en
la modificación de la deposición y la eliminación de fibrina. Por
tanto, se usarán cuerpos lamelares sintéticos o naturales y se
aplicarán a las vías respiratorias y a los alvéolos de los recién
nacidos para obtener la disolución de la membrana hialina (fibrina)
como una parte clave de una terapia doble, junto con surfactantes
que contienen factores de propagación para el establecimiento del
intercambio gaseoso adecuado.
La mortalidad actual, pese al uso de
surfactante, se debe al hecho de que estas preparaciones no
suministran una densidad de fosfolípidos suficiente como para que
los cuerpos lamelares lisen y fragmenten la membrana de fibrina
que, si no se elimina, invalida completamente cualquier
administración de fosfolípidos tensioactivos con factores de
propagación.
\vskip1.000000\baselineskip
Frecuentemente se produce la exudación de
fibrina desde el peritoneo en la diálisis peritoneal en respuesta a
una amplia variedad de estímulos que provocan una respuesta
inflamatoria. Éstos incluyen infecciones bacterianas y fúngicas,
endotoxinas, agentes antisépticos usados en los procedimientos de
intercambio, que se han introducido en la ruta del líquido de
diálisis, agentes farmacológicos añadidos al líquido de diálisis,
por ejemplo, antibióticos. Como forma novedosa de tratamiento para
prevenir las secuelas patológicas reconocidas que pueden dar como
resultado el abandono de esta terapia de mantenimiento de la vida,
puede usarse la infusión intraperitoneal de una disolución que
contiene una alta concentración de cuerpos lamelares sintéticos
para disolver la fibrina formada y para modificar la fibrina en
formación, para prevenir la formación de fibrosis peritoneal y la
formación de adherencias intraabdominales, adherencias del epiplón
al catéter peritoneal y el bloqueo del catéter.
Cuando se está retirando a un paciente de
diálisis peritoneal, deben infundirse disoluciones de cuerpos
lamelares sintéticos por catéter en el peritoneo tras el cese de la
diálisis. Esto es para prevenir la formación de adherencias entre
zonas de la superficie peritoneal que se han despojado de la
cubierta de células mesoteliales.
La peritonitis esclerosante, una complicación
poco frecuente pero grave de la diálisis peritoneal, en la que la
pérdida global de mesotelio que conduce a pérdida de producción
intraperitoneal de cuerpos lamelares y a exudación global de
fibrina da como resultado adherencias generalizadas que no pueden
eliminarse mediante intervención quirúrgica. Esta complicación
habitualmente mortal debe tratarse ahora mediante infusiones por
catéter de disoluciones de cuerpos lamelares sintéticos en el
peritoneo. Al comienzo de este estado, el paciente debe recibir
diálisis continua en la que el líquido de diálisis contiene una
cantidad valorada de cuerpos lamelares sintéticos. Si va a llevarse
a cabo la adherenciotomía quirúrgica generalizada, la exposición a
las disoluciones de cuerpos lamelares sintéticos debe comenzar
intraoperatoriamente y debe continuarse bajo monitorización
ecográfica abdominal regular hasta que se regenera una capa de
células mesoteliales a partir de células madre para cubrir las
superficies disecadas de partida del peritoneo visceral y parietal,
durante un periodo que debe oscilar desde doce hasta veinte
días.
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En este documento se ha tratado el uso de
cuerpos lamelares sintéticos y a continuación se proporciona
información relacionada un método para llevar esto a cabo. En esta
invención se construyen microcuerpos multilamelares fosfolipídicos
usando fosfolípidos específicos en proporciones similares a las
encontradas en cuerpos lamelares en tejidos normales. La
característica clave que distingue los microcuerpos multilamelares
fosfolipídicos descritos en la presente solicitud de los liposomas
es su bajo contenido o ausencia de colesterol. En las aplicaciones
biomédicas, los liposomas, como constructos sintéticos, están
diseñados principalmente para la contención compartimental y la
conservación de productos farmacéuticos y agentes diversos. Por
tanto, se construyen con altos niveles de colesterol lo que
confiere estabilidad de membrana y baja porosidad, imitando las
membranas celulares de los mamíferos. Por lo tanto, se deduce que
la concentración de colesterol en la bicapa es el factor
determinante clave de la semivida circulatoria para los liposomas
diseñados como vehículos farmacológicos. El efecto inhibitorio del
colesterol en la captación de liposomas por parte del sistema
linforreticular, tal como se mide en el hígado y en el bazo, está
bien establecido (Patell HM et al. 1983). En el contraste
directo, los microcuerpos multilamelares fosfolipídicos, modelados
según las propiedades de los cuerpos lamelares, se captan
fácilmente por las células fagocíticas y como en el caso de los
liposomas con bajo contenido en colesterol, se eliminan rápidamente
de la circulación por el tejido linforreticular.
Los constituyentes fosfolipídicos principales de
los cuerpos lamelares son fosfatidilcolina (PC), esfingomielina
(SPH), fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilserina (PS),
fosfatidilinositol (PI) y lisolecitina (LPC). La composición de
fosfolípidos de los cuerpos lamelares muestra una ligera variación
según la célula de origen.
La PC es el fosfolípido principal en los cuerpos
lamelares, independiente del sitio de origen. La concentración de
PC en porcentaje varía desde aproximadamente el 70% en el lavado
pulmonar hasta el 45% en el líquido sinovial (Refs). El siguiente
fosfolípido en la concentración de clasificación es la SPH
(5-15%). A continuación, PE, PS, PI, PG y LPC están
presentes en concentraciones en porcentaje diversas, de un sólo
dígito, en los cuerpos lamelares según el sitio de origen.
La composición de fosfolípidos y colesterol
preferida para los microcuerpos multilamelares fosfolipídicos
comprende: 54% de PC : 19% de SPH : 8% de PE : 4% de PS: 3% de PI :
10% de colesterol. Estos valores son medias y se ha encontrado el
siguiente intervalo de composiciones en los cuerpos lamelares
naturales (investigación privada): 44-60% de PC,
15-23% de SPH, 6-10% de PE,
2-6% de PS, 2-4% de PI,
4-12% de colesterol. Estas cifras son en porcentaje
en peso.
La LPC también puede incorporarse en los
microcuerpos multilamelares en el 2% en peso de lo que se deduce el
intervalo encontrado en los cuerpos lamelares naturales del
0-3%.
Naturalmente, se conocen bien vesículas
fosfolipídicas en la forma de liposomas. Sin embargo, los expertos
en la técnica obtienen liposomas con altas concentraciones de
colesterol para mejorar su rigidez. Debe considerarse que los
liposomas que contienen colesterol al 20% o inferior tienen un
escaso contenido en colesterol (Love WG et al, 1990). Los
liposomas que incorporan una razón alta (50%) de colesterol, en los
que es equimolar con los fosfolípidos, tienen una estructura
sumamente estable (Kirby et al, 1980, Senior et al,
1982) y por tanto, hasta esta invención, que se sepa, no ha sido
obvio intentar usar microcuerpos multilamelares con bajo contenido
en colesterol. Se ha encontrado que el contenido en colesterol de
los cuerpos lamelares derivados de alvéolos pulmonares contiene
aproximadamente el 10% de colesterol (Schmitz G, Muller J 1991) (J
Lipid Research. 32:1539).
Es importante la presencia de esfingomielina en
los cuerpos lamelares naturales y en los microcuerpos
multilamelares fosfolipídicos reivindicados en la presente
invención. Que se sepa, generalmente no se usa la esfingomielina en
los liposomas y sirve para dar flexibilidad y blandura a los
cuerpos lamelares. La tecnología de liposomas convencional enseña
que es mejor la rigidez para la administración productos químicos;
sin embargo, se ha encontrado que los microcuerpos multilamelares
fosfolipídicos flexibles, con bajo contenido en colesterol, que
contienen esfingomielina son ideales para la administración de
antígeno a células presentadoras de antígenos.
Los microcuerpos multilamelares fosfolipídicos
(cuerpos lamelares sintéticos) se preparan mediante una técnica
similar a la usada para producir vesículas multilamelares agitadas
a mano (New RRC, 1990). Se disuelve la mezcla de fosfolípidos,
junto con el colesterol en los porcentajes dados en peso, en una
mezcla de disolventes de cloroformo/metanol (2:1 vol/vol). Se
introduce la disolución lipídica en un matraz de fondo redondo y se
une a un evaporador giratorio. Se vacía el matraz y se hace girar a
60 r.p.m. en un baño de agua controlado termostáticamente a una
temperatura de 30ºC hasta que se deposita una película lipídica
seca. Se introduce nitrógeno en el matraz y se elimina el
disolvente residual antes de su conexión a un liofilizador en el
que se somete a un alto vacío a temperatura ambiente durante una
hora. Tras liberar el vacío y tras una purga con nitrógeno, se
añade solución salina que contiene solutos (antígeno seleccionado)
para su atrapamiento. Se hidrata el lípido dentro del matraz, se
purga con nitrógeno, se une al evaporador y se hace girar a 60
r.p.m. a temperatura ambiente durante treinta minutos. Se deja
reposar la suspensión durante dos horas a temperatura ambiente para
completar el procedimiento de hinchamiento.
Por lo tanto, puede observarse que existen
muchos usos para las disoluciones de cuerpos lamelares en
intervenciones quirúrgicas. También debe observarse que las
realizaciones dadas a conocer anteriormente son simplemente a modo
de ejemplo de la invención.
Claims (38)
1. Cuerpos lamelares, que comprenden
fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y colesterol para su uso
como una sustancia terapéutica activa.
2. Composición que comprende cuerpos lamelares,
que comprenden ellos mismos fosfatidilcolina, esfingomielina,
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y
colesterol para su uso como un medicamento o agente
profiláctico.
3. Composición farmacéutica que comprende
cuerpos lamelares, que comprenden ellos mismos fosfatidilcolina,
esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilinositol y colesterol para la prevención de la formación
de coágulos de fibrina.
4. Composición farmacéutica que comprende
cuerpos lamelares, que comprenden ellos mismos fosfatidilcolina,
esfingomielina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilinositol y colesterol para la modificación de coágulos de
fibrina.
5. Composición farmacéutica según la
reivindicación 3, para la prevención de adherencias.
6. Composición farmacéutica según la
reivindicación 4, para el tratamiento de adherencias.
7. Composición farmacéutica según la
reivindicación 3, para la prevención de coágulos
intravasculares.
8. Composición farmacéutica según la
reivindicación 4, para la modificación de coágulos
intravasculares.
9. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 8, en la que los cuerpos lamelares se
proporcionan en una disolución.
10. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 9, en la que los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con cualquier vehículo o excipiente
farmacéutico convencional.
11. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 10, en la que los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con hialuronano y/o sulfato de
condroitina B.
12. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 11, en la que los cuerpos lamelares son cuerpos
lamelares sintéticos.
13. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 11, en la que los cuerpos lamelares proceden
de una fuente natural.
14. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 11, en la que se usa una mezcla de cuerpos
lamelares naturales y sintéticos.
15. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 14, que está en forma de un aerosol.
16. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 15, en la que la concentración de dosificación
de los cuerpos lamelares en la composición es de 10 x 10^{9} por
ml.
17. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 16, en la que los cuerpos lamelares incorporan
otros agentes activos.
18. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 17, en la que los cuerpos lamelares incorporan
compuestos antiestrógenos.
19. Composición farmacéutica según las
reivindicaciones 2 a 18, en la que los cuerpos lamelares pueden
incorporar además agentes quimioterápicos antitumorales.
20. Uso de cuerpos lamelares, que comprenden
ellos mismos fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y colesterol, para la
preparación de un agente para la prevención de la formación de
coágulos de fibrina.
21. Uso de cuerpos lamelares, que comprenden
ellos mismos fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y colesterol, para la
preparación de un agente para la modificación de coágulos de
fibrina.
22. Uso de cuerpos lamelares según la
reivindicación 20, para la preparación de un agente para la
prevención de adherencias.
23. Uso de cuerpos lamelares según la
reivindicación 21, para la preparación de un agente para el
tratamiento de adherencias.
24. Uso de cuerpos lamelares según la
reivindicación 20, para la preparación de un agente para la
prevención de coágulos intravasculares.
25. Uso de cuerpos lamelares según la
reivindicación 21, para la preparación de un agente para la
modificación de coágulos intravasculares.
26. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 26, en el que los cuerpos lamelares se
proporcionan en disolución.
27. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 26, en el que los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con cualquier vehículo o excipiente
farmacéutico convencional.
28. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 27, en el que los cuerpos lamelares se
proporcionan en combinación con hialuronano y/o sulfato de
condroitina B.
29. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 28, en el que los cuerpos lamelares son
cuerpos lamelares sintéticos.
30. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 28, en el que los cuerpos lamelares proceden
de una fuente natural.
31. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 28, en el que se usa una mezcla de cuerpos
lamelares naturales y sintéticos.
32. Uso de cuerpos lamelares según la
reivindicación 20 a 31, durante intervenciones quirúrgicas.
33. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 32, en el que la concentración de dosificación
de los cuerpos lamelares es de 10 x 10^{9} por ml.
34. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 33, en el que los cuerpos lamelares incorporan
otros agentes activos.
35. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 34, en el que los cuerpos lamelares incorporan
compuestos antiestrógenos.
36. Uso de cuerpos lamelares según las
reivindicaciones 20 a 35, en el que los cuerpos lamelares pueden
incorporar además agentes quimioterápicos antitumorales.
37. Procedimiento para fabricar un medicamento
destinado a la prevención de la formación de coágulos de fibrina,
caracterizado porque se usan cuerpos lamelares, que
comprenden ellos mismos fosfatidilcolina, esfingomielina,
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y
colesterol.
38. Procedimiento para fabricar un medicamento
destinado a la modificación de coágulos de fibrina,
caracterizado porque se usan cuerpos lamelares, que
comprenden ellos mismos fosfatidilcolina, esfingomielina,
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y
colesterol.
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