ES2311973T3 - Ctgf como objetivo para la terapia de microalbuminuria en pacientes con nefropatia diabetica. - Google Patents

Abstract

Uso de un agente que inhibe CTGF en la fabricación de un medicamento para tratar microalbuminuria en un paciente con nefropatía diabética incipiente, donde el agente es un anticuerpo de factor de crecimiento de tejido anticonector (CTGF), ácido nucleico anti-sentido anti-CTGF o siARN específico de CTGF, miARN o ribozima.

Description

CTGF como objetivo para la terapia de microalbuminuria en pacientes con nefropatía diabética.

Campo de la invención

La presente invención está referida a la fabricación de medicamentos para tratar microalbuminiria en nefropatía diabética incipiente.

Contexto de la invención

Un desorden renal es cualquier alteración en la fisiología y funcionamiento normal del riñón. Los desordenes renales pueden ser el resultado de una amplia variedad de condiciones precisas y crónicas y de acontecimientos, incluyendo daño físico, químico o biológico, ataque, o trauma, enfermedades tales como hipertensión, diabetes, fallo cardiaco congestivo, lupus, anemia drepanocítica, y varias enfermedades inflamatorias y autoinmunes, nefropatías asociadas con VIH, etc. Los desordenes renales pueden provocar una función reducida del riñón, hipertensión, fallo renal, influyendo seriamente en la calidad de vida, requiriendo en ocasiones diálisis y, en ciertas circunstancias, transplante de riñón.

La nefropatía diabética es una complicación principal a largo plazo de diabetes mellitus, y es la principal indicación para diálisis y transplante de riñón en los Estados Unidos. (Marks y Raskin, 1998, Med Clin North Am., 82:877-897). El desarrollo de nefropatía diabética se observa en 25 a 50% de individuos diabéticos del Tipo 1 y Tipo 2. Por consiguiente, la nefropatía diabética es la causa más común de enfermedad renal en fase final y de fallo renal en el mundo occidental.

Los factores de riesgo contribuidores asociados con el desarrollo de nefropatía diabética (y otros desordenes renales) en sujetos con diabetes de Tipo 1 y Tipo 2 incluyen hiperglucemia, hipertensión, hemodinámica glomerular alterada, y expresión aumentada o aberrante de varios factores de crecimiento, incluyendo la transformación del factor beta de crecimiento (TGF\beta), el factor de crecimiento similar a la insulina (IGF)-I, el factor de crecimiento a endotelial vascular (VEGF-A), y el factor de crecimiento conector de tejido (CTGF). (Ver, por ejemplo, Flyvbjerg (2000) Diabetología 43:1205-23; Brosius (2003) Exp Diab Res 4:225-233; Gilbert et al., (2003) Diabetes Care 26:2632-2636; y Publicación Internacional N° WO 00/13706).

Las estrategias de tratamientos actuales dirigidas a frenar la progresión de nefropatía diabética usando varias técnicas, incluyendo el control glicémico optimizado (a través de la modificación de la dieta y/o terapia con insulina) y control de hipertensión, han demostrado varios grados de éxito. Por ejemplo, tanto los inhibidores de enzima conversora de angiotensina (ACE) como bloqueadores de receptor de angiotensina (ARBs) administrados para reducir la hipertensión, han demostrado retrasar la progresión o desarrollo de nefropatía y macroalbuminuria. Varios ensayos clínicos han establecido los beneficios de inhibidores ACE y ARBs en pacientes con diabetes. Sin embargo, a pesar de que los inhibidores ACE han demostrado retrasar el descenso o la disminución renal en pacientes con diabetes de Tipo 1, el efecto renoprotector de estos agentes en pacientes con diabetes de Tipo 2 es menos claro. (Raij (2003) Am J Hypertens 16:46S-49S).

Además, mientras las terapias glicéricas y de control de presión arterial disminuyen de manera significativa la morbosidad y mortalidad asociadas con nefropatía diabética retrasando la progresión de patologías asociadas, tales terapias convencionales no detienen de manera adecuada la progresión de la enfermedad y por lo tanto no proporcionan efectos terapéuticos completos. Adicionalmente, la administración de inhibidores ACE o ARBS, el estándar actual de cuidado, no implica una eficacia universal y solamente retrasan mínimamente, pero no eliminan, la necesidad de transplante de riñón.

Otras estrategias para tratamientos se han concentrado en uno o más factores de crecimiento como objetivos terapéuticos. Se han examinado las terapias dirigidas a la inhibición de VEGF o TGF\beta, solos o en combinación con inhibidores ACE o ARBs. (Ver, por ejemplo, De Vriese et al. (2001) J Am Soc Nephrol 12:993-1000; Flyvbjert et al. (2002) Diabetes 51:3090-3094; Ziyadeh et al, (2000) Proc Natl Acd Sci 97:8015-8020; Chen et al. (2003) Biochem Biophys Res Commun 300:16-22; y Benigni et al. (2003) J Am Soc Nephrol 14:1816-1824). Sin embargo, tales técnicas terapéuticas no han facilitado mejora de todos los aspectos de patología renal (por ejemplo, función y estructura renal alterada y afectada) asociados con nefropatía diabética. Por ejemplo, la inhibición de TGF\beta como objetivo terapéutico para nefropatía diabética no fue efectiva al atenuar la albuminuria en ratones db/db, a pesar de los efectos beneficios que dichos tratamientos tuvieron en la expansión de matriz glomerular. (Ver Ziyadeh et al, supra). Además, mientras la administración de anticuerpos anti-VEGF a ratones diabéticos db/db proporcionó beneficios a la permeabilidad aumentada en el riñón asociada con la diabetes, tan sólo se observaron mínimos efectos beneficiales en la expansión mesangial. (Ver Flyvbjerg et al (2002), supra). Por lo tanto, a pesar de que tales terapias ofrecen promesas, solas o en combinación, ninguna ha dado como resultado la mejora de características patológicas tempranas (por ejemplo, hiperfiltración glomerular, mayor velocidad de filtración glomerular, microalbuminuria, etc) y tardías (por ejemplo, menor velocidad de filtración glomerular, macroalbuminuria, expansión excesiva de matriz mesangial, etc.) asociadas con fallo renal crónico, por ejemplo, nefropatía diabética. Por lo tanto, existe la necesidad de la técnica de una terapia completa para el tratamiento de nefropatía diabética que mejore tanto los síntomas de fases tempranas y tardías y patologías asociadas con el desarrollo y progresión de la enfermedad.

Además de las deficiencias antes mencionadas, las terapias actuales para nefropatía diabética han limitado su aplicabilidad/eficacia debido a la falta de especificidad. En particular, las terapias enfocadas a VEGF o TGF\beta pueden comprometerse con las actividades beneficiales de dichos factores de crecimiento, como angiogénesis, supresión tumoral, y desarrollo del sistema inmune apropiado. Por ejemplo, mientras TGF\beta ha sido asociado con el desarrollo de fibrosis, es también un factor importante de desarrollo inmune y supresión tumoral, sugiriendo que la inhibición de TGF\beta puede no desearse y puede provocar potenciales efectos secundarios adversos. Por consiguiente, existe la necesidad en la técnica de una técnica terapéutica más selectiva para nefropatía diabética.

En resumen, existe una necesidad en la técnica por una técnica terapéutica por tratar enfermedad renal, en particular nefropatía renal, que sea efectiva en varias fases (por ejemplo, nefropatía renal en fase temprana y fase tardía) en el desarrollo y progresión de esta enfermedad. En particular, existe una necesidad para un tratamiento completo de nefropatía renal, que se efectivo tanto para características de fase temprana como para características de fase tardía de nefropatía renal como, por ejemplo, hiperfiltración (fase temprana), mayor permeabilidad glomerular (fase temprana), mayor velocidad de filtración glomerular (fase temprana), microalbuminuria (fase temprana), macroalbuminuria (fase tardía), y menor velocidad de filtración glomerular (fase tardía). Existe una necesidad de una técnica terapéutica que se dirija más completamente hacia varios procesos diferentes con desarrollo y progresión de nefropatía diabética y otras enfermedades renales. En particular, existe una necesidad por terapias que vayan dirigidas tanto a procesos no fibróticos (por ejemplo, hiperfiltración) y fibróticos (por ejemplo, expansión de matriz mesangial) asociados con nefropatía diabética. Además, existe una necesidad de un enfoque terapéutico para tratar enfermedad renal en general, y nefropatía diabética en particular, que proporcione tanto beneficios estructurales como funcionales.

La presente exposición está dirigida a estas necesidades mediante la identificación del papel de CTGF en varios procesos asociados con el desarrollo y la progresión de desordenes renales tales como, por ejemplo, nefropatía diabética, y mediante la descripción de agentes para la inhibición y prevención de estos procesos. La exposición además se dirige a las necesidades existentes describiendo agentes que pueden aplicarse al tratamiento y prevención de enfermedades renales, en particular enfermedad renal asociada con la diabetes, y más en particular nefropatía diabética.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra el aumento de peso en riñón reducido por la administración de anticuerpo anti-CTGF en ratones diabéticos db/db.

La Figura 2 muestra la depuración de creatinina reducido por la administración de anticuerpo anti-CTGF en ratones diabéticos db/db.

La Figura 3 muestra excreción de albúmina urinaria reducida por la administración de anticuerpo anti-CTGF en ratones diabéticos db/db.

La Figura 4 muestra volumen de orina reducido por la administración de anticuerpo anti-CTGF en ratones diabéticos db/db.

La Figura 5 muestra engrosamiento reducido de membrana de base por la administración de anticuerpo anti-CTGF en riñones de ratones diabéticos db/db.

La Figura 6 muestra proteinuria reducida por la administración de anticuerpo anti-CTGF en un modelo de rata de nefropatía diabética.

La Figura 7 muestra niveles BUN reducidos por la administración de anticuerpo anti-CTGF en un modelo de rata de nefropatía diabética.

La Figura 8 muestra velocidad de filtración glomerular mejorada por la administración de anticuerpo anti-CTGF en un modelo de rata de nefropatía diabética.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a la fabricación de medicamentos para tratar microalbuminuria en un paciente con nefropatía diabética incipiente. Específicamente, la invención proporciona el uso de la reivindicación 1 adjunta.

Específicamente se contempla que, en realizaciones preferentes de cada uno de los usos descritos a continuación, el paciente preferente es un sujeto humano.

En una realización, el medicamento reduce la depuración de creatinina en el paciente. Los niveles normales de depuración de creatinina en humanos oscilan normalmente entre 97 y 137 ml/min (hombres adultos) y entre 88 y 128 ml/min (mujeres adultas). Por lo tanto, se considera específicamente la reducción de niveles de depuración de creatinina a esos niveles o aproximadamente a esos niveles.

Aquí también se proporcionan los medicamentos que reducen la hiperfiltración glomerular en el paciente, ya que son medicamentos que reducen la hiperperfusión glomerular en un paciente.

En otro aspecto, la invención engloba un medicamento que reduce o previene el aumento de peso en riñón en el paciente.

La invención además proporciona medicamentos que normalizan la velocidad de filtración glomerular en el paciente. La normalización probablemente será una disminución en la velocidad de filtración glomerular. La velocidad de filtración glomerular en un sujeto adulto humano es aproximadamente 120 ml/min. En el caso de que el sujeto tenga un GFR (velocidad de filtración glomerular) más alta que los niveles normales, y se desee un descenso de GFR, específicamente se considera disminuir GFR a niveles por debajo de aproximadamente 150 ml/min, por debajo de aproximadamente 140 ml/min, por debajo de aproximadamente 130 ml/min, y hasta aproximadamente 120 ml/min. En el caso de que el sujeto tenga GFR dañada o por debajo de los niveles normales, se considera aumentar GFR hasta aproximadamente por encima de 15 ml/min, aproximadamente por encima de 30 ml/min, aproximadamente por encima de 60 ml/min, aproximadamente por encima de 90 ml/min, hasta aproximadamente 120 ml/min.

En otra realización, la invención proporciona un medicamento que reduce la hipertrofia glomerular en el paciente.

Los medicamentos que reducen la proteinuria en el paciente también se incluyen en la presente exposición. Adicionalmente, la invención engloba medicamentos que reducen albuminuria en el paciente. Un medicamento para reducir la microalbuminuria en el paciente también se contempla de manera adicional, así como la prevención de macroalbuminuria en el paciente.

Los niveles normales de excreción urinaria de albúmina en humanos adultos es normalmente aproximadamente 15-30 mg por día. Generalmente, la microalbuminuria se diagnostica cuando un sujeto tiene una excreción urinaria de albúmina de aproximadamente 30-300 mg/día. La macroalbuminuria generalmente se diagnostica por la excreción urinaria de albúmina superior a 300 mg/ml. Por lo tanto, la presente invención proporciona de manera específica medicamentos que disminuyen la excreción urinaria de albúmina en el paciente, donde el paciente tiene elevada excreción urinaria de albúmina, por ejemplo, excreción urinaria de albúmina superior a los niveles normales ya señalados. Se consideran aquí específicamente las realizaciones en las que la excreción urinaria de albúmina se reduce a por debajo de aproximadamente 300 mg/día, por debajo de aproximadamente 200 mg/día, por debajo de aproximadamente 100 mg/día, por debajo de aproximadamente 50 mg/día, y, más preferentemente, por debajo de aproximadamente
30 mg/día.

En ciertos aspectos, la invención proporciona medicamentos para reducir los niveles BUN en el paciente. Los niveles normales BUN para adultos humanos oscilan entre 7 y 20 mg/dL. Por consiguiente, se consideran específicamente los medicamentos que reducen los niveles hasta por debajo de 20 mg/dL. La invención además proporciona un medicamento para reducir la depuración de inulina en le paciente.

La presente invención contempla la administración de los presentes medicamentos en combinación con otras terapias. En una realización, el medicamento se administra en combinación con otra terapia, por ejemplo, para aumentar de manera adicional el efecto terapéutico en ciertos aspectos patológicos, etc. Los dos tratamientos pueden administrarse al mismo tiempo o de manera consecutiva, por ejemplo, durante el curso en el que dura un tratamiento o tras la progresión o remisión de la enfermedad. En otra realización, el medicamento se administra en combinación con otro método terapéutico que tiene un modo similar o diferente de acción, por ejemplo, inhibidores ACE, ARBs, estatina, inhibidor de producto final de glicación avanzada (AGE), etc. Por lo tanto, en una realización particular, el medicamento se administra en combinación con una cantidad inhibidora de un inhibidor de enzima conversora de angiotensina. En otra realización, el medicamento se administra en combinación con una cantidad inhibidora de un bloqueador de receptor de angiotensina.

En un aspecto particular, la invención hace referencia al presente descubrimiento de que CTGF aquí se identifica como un factor crítico en enfermedades progresivas en fases iniciales que incluyen complicaciones diabéticas renales.

La invención además incluye un medicamento que mejora la función del riñón en el paciente.

Tal y como se ha resumido en la anterior descripción, la invención se refiere al descubrimiento de que la terapia anti-CTGF es efectiva en el tratamiento o prevención de varias características fisiológicas de nefropatía diabética en fases temprana y en fase tardía.

En realizaciones preferentes de los usos arriba mencionados, el paciente es un sujeto humano.

En los usos descritos anteriormente, el agente puede ser un anticuerpo monoclonal humano dirigido contra CFGF. También pueden emplearse pequeños ácidos ribonucleicos obstaculizadores (siRNAs), micro-RNAs (miRNAs), ribozimas, y secuencias anti-sentido. (Ver, por ejemplo, Kondo et al. (2000) Biochem Biophys Res Commun 278:119-124). Dichas técnicas son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica relevante. Los anticuerpos ejemplares para uso en los métodos de la presente invención se describen, por ejemplo, en la Publicación Internacional N° WO 2004/108764.

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Descripción de la invención

Se debe entender que la invención no se limita a las metodologías particulares, protocolos, líneas celulares, ensayos, y reagentes aquí descritos, y estos pueden variar. También debe entenderse que la terminología aquí empleada pretende describir realizaciones particulares de la presente invención, y de ninguna manera se pretende limitar el alcance de la presente invención tal y como se establece en las reivindicaciones adjuntas.

Debe señalarse que, tal y como aquí y en las reivindicaciones adjuntas se emplea, las formas singulares "un", "una", y "el" o "ella" incluyen referencias plurales a menos que el contexto claramente dictamine lo contrario. Por lo tanto, por ejemplo, una referencia a "un fragmento" incluye un conjunto de tales fragmentos, una referencia a "un anticuerpo" es una referencia a uno o más anticuerpos y a equivalentes de los mismos conocidos por aquellos expertos en la técnica, y etcétera.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos aquí empleados tienen los mismos significados que los comúnmente entendidos por aquellos expertos en la técnica a la cual esta invención pertenece. A pesar de que algunos métodos y materiales similares o equivalentes a los aquí descritos pueden emplearse en la práctica o pruebas de la presente invención, a continuación se describen lo métodos, dispositivos y materiales preferentes. Todas las publicaciones aquí citadas se incorporan como referencia en su totalidad tonel fin de describir o exponer las metodologías, reagentes, y herramientas señaladas en las publicaciones que pueden emplearse en relación con la invención. En la presente, nada debe interpretarse como una admisión de que la invención no tiene derecho a preceder tal exposición en virtud de técnica anterior.

La práctica de la presente invención empelará, a menos que se indique lo contrario, métodos convencionales de química, bioquímica, biología molecular, biología celular, genética, inmunología y farmacología, dentro de la capacidad de la técnica. Dichas técnicas se explican con detalle en la bibliografía. Ver, por ejemplo, Gennaro, A. R, ed. (1990) Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^{th} ed, Mack Publishing Co.; Colowick, S. et al., eds., Methods In Enzymology, Academic press, Inc.; Handbook for Experimental Immunology, Vols. I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell eds., 1986; Blackwell Scientific Publications); Maniatis, T. et al., eds. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2^{nd} Edition, Vols. I-III, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel; F. M. et al., eds. (1999) Short Protocols in Molecular Biology, 4^{th} Edition, John Wiley & Sons; Ream et al., eds. (1998) Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, Academic Press); PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2^{nd} Ed. (Newton & Graham eds., 1997, Springer Verlag).

La invención se refiere en parte al descubrimiento de que el factor de crecimiento de tejido conector (CTGF) juega un papel esencial en aspectos específicos de fase temprana de enfermedad renal incluyendo, por ejemplo, hiperfiltración glomerular, mayor permeabilidad glomerular, mayor velocidad de filtración glomerular, microalbuminuria, etc. CTGF se ha asociado previamente con aspectos específicos de fase tardía de enfermedad renal, por ejemplo, glomeruloesclerosis y fibrosis tubulointersticial, pero no se había identificado como un objetivo crítico por afectar varias características de patologías renales en fase inicial. Se contemplan de manera específica los medicamentos para tratar microalbuminuria en un paciente con nefropatía diabética incipiente, y los medicamentos que tratan o previenen patologías asociadas.

En algunas realizaciones, el paciente es un animal, más preferentemente un mamífero, y más preferentemente un humano.

Los agentes presentes pueden ser anticuerpos o fragmentos de los mismos funcionalmente activos; y pequeños ácidos ribonucleicos obstaculizadores (siRNAs), micro-RNAs (miRNAs), ribozimas, y secuencias anti-sentido. (Ver, por ejemplo, Zeng (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:9779-9784; y Kurreck (2003) Eur J Biochem 270:1628-1644).

La presente invención se base en parte en el descubrimiento de beneficios inesperados de inhibición de CTGF en tratamiento de múltiples y específicos aspectos de desordenes renales, por ejemplo, nefropatía diabética. La presente invención proporciona datos que demuestran que la inhibición de CTGF redujo varios aspectos patológicos de enfermedad renal previamente no asociados con CTGF. En ciertos aspectos, la presente invención proporciona pruebas que demuestran que la inhibición de CTEGF proporciona un enfoque terapéutico para tratar o prevenir aspectos fisiológicos específicos de nefropatía diabética previamente asociados con actividades biológicas o patológicas de VEGF, como, por ejemplo, hiperfiltración glomerular e hiperperfusión.

Nefropatía Diabética

Diabetes es la principal causa de morbididad y mortalidad en todo el mundo, con aproximadamente el 40% de todos los individuos con diabetes que desarrollan nefropatía diabética, requiriendo bien diálisis renal o transplante. Diabetes es la principal causa de enfermedad renal en fase final, y por lo tanto, cualquier individuo diagnosticado con diabetes tiene corre el riesgo de desarrollar nefropatía diabética.

La progresión de nefropatía diabética se caracteriza por un patrón apenas predecible de hechos. Generalmente, el curso temporal de desarrollo de nefropatía diabética es el siguiente. La hiperfiltración glomerular y la hipertrofia renal ocurren en primer año tras la aparición de diabetes y se reflejan por un mayor índice de filtración glomerular (por ejemplo, de un índice de filtración glomerular normal de aproximadamente 120 ml/min a aproximadamente 150 ml/min en humanos). Durante los primeros 5 años de diabetes, se observan los cambios patológicos, como hipertrofia glomerular, engrosamiento de la membrana base glomerular, y la expansión de volumen mesangial glomerular. El índice de filtración glomerular vuelve gradualmente a su nivel normal. Después de 5 a 10 años de diabetes, lo individuos comienzan a excretar pequeñas cantidades de albúmina en la orina (microalbuminuria). La microalbuminuria (los individuos diabéticos con microalbuminuria son referidos por tener nefropatía diabética incipiente) es un indicador importante de progresión hacia una manifiesta nefropatía diabética (caracterizada, en parte, por macroalbuminuria o proteinuria manifiesta). El engrosamiento de la membrana base y la expansión de volumen glomerular vistos en las fases iniciales de la enfermedad pueden acumularse en nefropatía diabética de última fase, llevando a la destrucción de lumen capilar, y, finalmente, la glomeruloesclerosis. Una vez que se está presente la nefropatía diabética, se da un descenso constante en el índice de filtración glomerular, y aproximadamente la mitad de los individuos alcanzan la fase final de enfermedad renal en 7-10 años.

Clínicamente, se han descrito de manera muy adecuada las fases de desarrollo y progresión de nefropatía diabética en humanos. La fase I de nefropatía diabética está asociada con mayor filtración en riñón (es decir, infiltración glomerular) (es decir, hiperfiltración, que resulta del aumento de flujo sanguíneo a través de riñones y glomérulo), mayor índice de filtración glomerular, hipertrofia glomerular, y riñones dilatados. La fase II de nefropatía diabética es clínicamente una fase silenciosa con hiperfiltración continuada e hipertrofia renal. Tiene lugar el engrosamiento de membrana base glomerular y la expansión mesangial. La fase III de nefropatía diabética (también conocida como nefropatía diabética incipiente) se asocia con la microalbuminuria y micro proteinuria. La microalbuminuria se define como albúmina urinaria entre 30 y 300 mg/día en una recolección de 24 horas, albúmina urinaria entre 20 y 200 \mug/min, o creatinina entre 30 y 300 \mug/min en una recolección de una mancha. Los riñones pierden de manera progresiva la habilidad para filtrar desperdicios y los niveles sanguíneos de creatinina y urea-nitrógeno aumentan. El engrosamiento de membrana base glomerular y la expansión mesangial continúan ocurriendo con creciente severidad. La Fase IV de nefropatía diabética (también conocida como nefropatía diabética manifiesta) se asocia con macroalbuminuria (es decir, albuminuria clínica) y los niveles de creatinina y sangre urea-nitrógeno (BUN) en la sangre continúan aumentando. La macroalbuminuria se define como superior a 300 mg/día albúmina urinaria en una recolección de 24 horas, mayor que 200 \mug/min albúmina urinaria, o mayor que 300 \mug/min creatinina en recolección de mancha. Una vez que aparece la nefropatía diabética manifiesta, el índice de filtración glomerular desciende de manera gradual durante un periodo de varios días. La fase V de nefropatía diabética ocurre con la enfermedad renal en fase final y el fallo del riñón.

Hiperfiltración e Hiperperfusión

La nefropatía diabética en fase inicial se asocia con función renal dañada, y se caracteriza por hiperfiltración e hiperperfusión glomerular. La hiperfiltración glomerular es una adaptación glomerular a la pérdida de nefrón asociada con hiperglucemia y diabetes. Con la pérdida del funcionamiento de la masa del nefrón, el resto de los nefrones funcionales se hipertrofian y adquieren un exceso de carga de trabajo, intentando de este modo minimizar la pérdida total de función renal. Como resultado, ocurre la hiperfiltración y la hiperperfusión glomerular.

La hiperfiltración y la hiperperfusión glomerular se reflejan en un aumento de velocidad de filtración glomerular. La velocidad o el índice de filtración glomerular es una medida del volumen de filtrado realizado por los riñones por minuto. La medida de velocidad de filtración glomerular en sujetos humanos ha sido aceptada como el mejor índice total de función renal tanto en salud como en enfermedad. (Smith, Diseases of the kidney and urinary tract, In: Structure and Function in Health and Disease, New York; Oxford Univ. Press, 1951:836-887). La velocidad de filtración glomerular puede determinarse mediante varios métodos, tales como la medición de depuración urinaria de un marcador de filtración, como inulina, iotalamato, o iohexol. Más comúnmente, la velocidad de filtración glomerular se calcula determinando la depuración de creatinina, una proteína producida por los músculos y liberada en la sangre. La depuración de creatinina (a menudos expresado como ml/min) puede determinarse comparando el nivel de creatinina recogida en orina guante un periodo de tiempo determinado, por ejemplo, 12 o 24 horas, con el nivel de creatinina en sangre. Un índice normal de depuración de creatinina es aproximadamente entre 97 y 137 ml/min en hombres adultos, y aproximadamente entre 88 y 128 ml/min en mujeres adultas.

En la práctica clínica, la depuración de creatinina se calcula a partir de la concentración de creatinina en suero. La depuración de creatinina está directamente relacionada con la excreción de creatinina urinaria e inversamente relacionada con la concentración de creatinina en suero. Se han desarrollado y son consideradas estándar en la técnica varias fórmulas que proporcionan cálculos de depuración de creatinina y por lo tanto el cálculo de índice de filtración glomerular empleando parámetros como la concentración de creatinina en suero, edad, sexo, y tamaño corporal (Ver, por ejemplo, Cockcroft y Gault (1976) Nephron 16:31-41; Levey et al (1999) Annals of Internal Medicine 130:462-470; Rule et al (2004) Ann Intern Med 141:929-937).

Los medicamentos de la presente invención redujeron la depuración de creatinina en un modelo animal de diabetes (Ver, por ejemplo, Ejemplo 1). Por lo tanto, la presente invención proporciona medicamentos que reducen la depuración de creatinina en el paciente, donde el paciente tiene depuración superior o elevada o depuración de creatinina por encima de los niveles normales. La presente invención demuestra que la inhibición de CTGF (por ejemplo, mediante la administración de un anticuerpo a CTGF) reduce la depuración de creatinina asociada con la nefropatía, y en particular, la nefropatía diabética. La mayor depuración de creatinina se asocia con hiperfiltración glomerular, hiperperfusión, hipertrofia, y mayor velocidad de filtración glomerular, y es un indicativo de función renal dañada o alterada en fases tempranas de desarrollo de nefropatía, por ejemplo, nefropatía diabética.

En otros aspectos, la presente invención proporciona medicamentos que reducen la velocidad de filtración glomerular en el paciente donde e paciente tiene una mayor velocidad de filtración.

Como referencia, los medicamentos de la presente invención resultaron aumentar el índice de filtración glomerular en un modelo animal en fase tardía de nefropatía diabética. (Ver Ejemplo Referencial 1). Por lo tanto, la presente invención proporciona medicamentos que aumentan o normalizan el índice de filtración glomerular en el paciente, donde el paciente tiene un índice de filtración glomerular reducida o dañada o en el que el índice de filtración glomerular está por debajo de lo normal.

Se considera que los medicamentos mejoran la función renal, normalizan el índice de filtración glomerular, reducen la hiperfiltración glomerular y la hiperperfusión, o reducen la depuración de creatinina en el paciente, donde el paciente ha aceptado clínicamente cualquier estándar de medida indicativa de nefropatía diabética incipiente.

Los presentes medicamentos son para tratar, donde se incluye reducir, microalbuminuria en un paciente, preferentemente un sujeto humano, que tiene nefropatía diabética incipiente, tal y como aquí se describe. En un aspecto, el sujeto tiene diabetes. La diabetes puede determinarse mediante cualquier medida aceptada y utilizada por aquellos expertos en la técnica. Un sujeto humano sería diagnosticada diabetes con un nivel de glucosa en sangre por encima de aproximadamente 200 mg/dL (tal y como se determina en un test de glucosa en sangre en ayuno, o test tolerancia a la glucosa oral, o un test arbitrario de glucosa oral). Por lo tanto, en ciertos aspectos, se considera que un sujeto humano que tiene un nivel de glucosa por encima de aproximadamente 200 mg/dL es un sujeto adecuado para tratamiento con medicamentos provistos por la presente invención.

Otros sujetos adecuados considerados para tratamiento con los presentes medicamentos han afectado al índice de filtración glomerular. En una realización, el sujeto humano tiene un índice de filtración glomerular por encima del índice normal de filtración glomerular, es decir, por encima de aproximadamente 200 ml/min. Por lo tanto, se considera que un sujeto humano que tiene un índice de filtración glomerular por encima de 200 mgl/min, por encima de aproximadamente 130 mg/min, o por encima de aproximadamente 150 ml/min es un sujeto adecuado para tratamiento con los medicamentos provistos por la presente invención. Además se considera en varias realizaciones que los medicamentos que reducen el índice de filtración glomerular en un sujeto con índice aumentado de filtración glomerular (es decir, en sujeto con hiperfiltración e hiperperfusión) pueden aplicarse para reducir el índice de filtración glomerular en un sujeto humano hasta un nivel por debajo de aproximadamente 150 ml/min, por debajo de aproximadamente 140 ml/min, por debajo de aproximadamente 130 ml/min, o hasta un nivel de aproximadamente 120 ml/min.

Los medicamentos de la presente invención redujeron el aumento de peso de riñón asociado con diabetes y nefropatía diabética en fase temprana en un modelo animal de diabetes (Ver Ejemplo 1). Por consiguiente, la presente invención considera un medicamento que trate o prevenga el aumento de peso de riñón en el paciente.

Además se considera, en varias realizaciones, que los medicamentos aumentan el índice de filtración glomerular en un paciente humano, donde el paciente tiene un índice afectado o reducido de filtración glomerular, por ejemplo, hasta un nivel por encima de aproximadamente 15 ml/min, por encima de aproximadamente 30 ml/min, por encima de aproximadamente 60 mi/min, por encima de aproximadamente 90 ml/min, y hasta un nivel de aproximadamente 120 ml/min.

En ciertas realizaciones, la nefropatía diabética incipiente se asocia con diabetes de Tipo 1 y Tipo 2.

Microalbuminuria

Evidencia clínica temprana de nefropatía, incluyendo nefropatía diabética, es la aparición de niveles bajos pero anormales de albúmina en orina, una condición referida como microalbuminuria. Los individuos con microalbuminuria son referidos por tener nefropatía incipiente, o, si se asocia con diabetes, nefropatía diabética incipiente. Los individuos diabéticos con microalbuminuria tienen un 46% de riesgo creciente de progresión hacia nefropatía diabética manifiesta en comparación con aquellos que tienen albuminuria normal (Bruno et al. 2003, Diabetes Care 26:2150-2155). Por lo tanto, la aparición y desarrollo de albuminuria en individuos con diabetes se asocia con un riesgo aumentado en gran medida de progresión hacia nefropatía diabética manifiesta (es decir, microalbuminuria) y posible enfermedad renal en fase final y fallo en el riñón. (Ver, por ejemplo, Mogensen y Christensen (1984) N Eng J Med 311:89-93; Mogensen et al (1983) Diabetes 32 [Suppl 2]:64-78; Viberti et al (1982) Lancet 1:1430-1232).

La microalbuminuria puede determinarse mediante varios métodos, incluyendo: (1) medida del radio albúmina-a-creatinina en una recopilación de orina de manchas aleatorias; (2) recopilación de orina tras 24 horas con creatinina, permitiendo la medida simultánea de depuración de creatinina; y (3) recolección cronometrada (por ejemplo, 4 horas o durante toda la noche). La excreción normal de albúmina urinaria en humanos es inferior a 30 \mug/mg creatinina (recolección de mancha), inferior a 30 mg/24-horas (recolección tras 24 horas), o inferior a 20 \mug/min (recolección cronometrada). La microalbuminuria en humanos supone tener una excreción de albúmina urinaria de 30 a 299 \mug/mg creatinina (recolección de mancha), de 30 a 299 mg/24-horas (recolección tras 24 horas), o de 20 a 199 \mug/min (recolección cronometrada). La macroalbuminuria (por ejemplo, la albuminuria clínica) en humanos supone tener una excreción de albúmina urinaria mayor que o igual a de 300 \mug/mg creatinina (recolección de mancha), mayor que o igual que 300 mg/24-horas (recolección tras 24 horas), o mayor que o igual a 200 \mug/min (recolección cronometrada).

La presente invención demuestra por primera vez que la inhibición de CTGF (por ejemplo, mediante administración de un anticuerpo a CTGF) reduce la excreción de albúmina urinaria asociada con nefropatía, y en particular, nefropatía diabética (Ver, por ejemplo, el Ejemplo 1). La mayor excreción de albúmina urinaria está relacionada con los cambios en la permeabilidad y selectividad de albúmina glomerular, y es un indicativo de función renal alterada o afectada en fases tempranas de desarrollo de nefropatía. En un aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que reducen la excreción de albúmina urinaria inhibiendo CTGF. En otro aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que reducen la permeabilidad de albúmina glomerular y restablecen la selectividad glomerular inhibiendo CTGF. Incluso en otro aspecto, la presente invención proporciona medicamentos para reducir microalbuminuria inhibiendo CTGF. Mediante la reducción de microalbuminuria y excreción de albúmina urinaria, los presentes medicamentos, por lo tanto, proporcionan medios para tratar nefropatía diabética incipiente.

Tal y como se ha descrito anteriormente, en la enfermedad de riñón en fase temprana, la aparición y desarrollo de microalbuminuria (es decir, nefropatía incipiente) están asociados con un riesgo creciente de desarrollo de macroalbuminuria, nefropatía manifiesta, y enfermedad renal en fase final, y fallo renal en individuos con diabetes.

La presente invención demuestra que la inhibición de CTGF (por ejemplo, mediante la administración de un anticuerpo para CTGF) reduce la proteinuria, niveles BUN, y depuración de creatinina asociados con nefropatía. La proteinuria aumentada, los niveles BUN, y la depuración de creatinina son indicativos de función renal alterada o afectada y de desarrollo de nefropatía. En un aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que reducen proteinuria inhibiendo CTGF. En otro aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que reducen los niveles BUN inhibiendo CTGF. En otro aspecto, se proporcionan medicamentos que reducen la depuración de creatinina mediante la inhibición de CTGF.

La presente invención demuestra que la inhibición de CTGF (por ejemplo, mediante la administración de un anticuerpo para CTGF) mejora la función renal. A medida que la nefropatía diabética avanza hacia fase tardía de enfermedad renal, el descenso de la velocidad de filtración glomerular tal y como se mide, por ejemplo, con depuración disminuida de inulina, es indicativo de función renal alterada o afectada. La presente invención demuestra además que la inhibición de CTGF (por ejemplo, mediante la administración de un anticuerpo para CTGF) mejora la velocidad de filtración afectada o reducida asociada con enfermedad renal en fase tardía. (Ver, Ejemplo de Referencia 1). En un aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que aumentan la velocidad de filtración glomerular mediante la inhibición de CTGF. En otro aspecto, la presente invención proporciona medicamentos que disminuyen la depuración de inulina mediante la inhibición de CTGF. Incluso en otro aspecto, se proporcionan medicamentos para tratar o prevenir la función dañada del riñón.

La nefropatía diabética en fase tardía se asocia con varios cambios patológicos y morfológicos en el riñón. Tales cambios incluyen expansión mesangial, ahocicada con una mayor producción de matriz y acumulación de matriz extracelular mesangial; expansión celular mesangial; engrosamiento de membrana base glomerular, que en nefropatía diabética en fase tardía se asocia con glomeruloesclerosis; y desarrollo de fibrosis tubulointersticial. (Gilbert et al (1999) Kidney Int 56:1627-1673). La glomeruloesclerosis y la fibrosis tubulointersticial son los distintivos estructurales de enfermedad renal en fase tardía de nefropatía diabética avanzada con insuficiencia renal, dando como resultado la reducción de índice de filtración glomerular y, posiblemente, enfermedad renal en fase tardía y fallo en el riñón.

Previamente a la presente invención, CTGF ase había asociado con características de fases tardías de patología renal, específicamente, producción de exceso de matriz extracelular, exceso de expansión de matriz mesangial, y desarrollo de glomeruloesclerosis y fibrosis tubulointersticial. (Ver, por ejemplo, Publicación Internacional WO 00/13706). Se pensaba que otros factores, por ejemplo, VEGF, eran responsables de procesos, patologías y varias características asociadas con enfermedad renal en fase temprana, por ejemplo, hiperfiltración y mayor permeabilidad glomerular. Sin embargo, la presente invención proporciona datos que demuestran que es CTGF el que juega un papel esencial en el desarrollo y progresión de aspectos tanto de fase temprana como de fase tardía de nefropatía, y por lo tanto representa un objetivo ideal para una técnica terapéutica completa y efectiva en nefropatía diabética.

La presente invención proporciona medicamentos para tratar y prevenir varios aspectos clínicos y patológicos de nefropatía diabética tanto en fase temprana como en fase tardía. Específicamente, los medicamentos de la presente invención tratan o previenen hiperfiltración glomerular y expansión de matriz mesangial. Por lo tanto, la presente invención contempla medicamentos que tratan varios aspectos de enfermedad renal, incluyendo características de enfermedad de riñón en fase temprana, como por ejemplo, hipertrofia renal y glomerular e hiperfiltración (medida como mayor depuración de creatinina, mayor excreción de albúmina urinaria, mayor índice de filtración glomerular, etc.), y características de enfermedad de riñón en fase tardía (menor índice de filtración glomerular, expansión de matriz mesangial, engrosamiento de membrana base, etc.).

En la bibliografía relacionada se han descrito varios desórdenes asociados con CTGF; sin embargo, hasta la presente invención, CTGF se asociaba principalmente con condiciones fibroproliferativas, en particular aquellas asociadas con TGF\beta. A pesar de que numerosos desórdenes incluyen procesos fibroproliferativos, y a pesar de que se ha sugerido que el tratamiento de estos desórdenes emplean terapias dirigidas a proporcionando o previenen actividad CTGF, la presente invención extiende la interpretación y, por lo tanto, el uso de terapias dirigidas a CTGF para tratar varias condiciones o complicaciones no proliferativas asociadas con nefropatía diabética y desórdenes renales.

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Los medicamentos de la presente invención reducen de manera eficaz la hiperfiltración por el riñón y normalizan o restablecen la función del riñón tal y como se mide, por ejemplo, mediante índice de filtración glomerular, excreción de albúmina urinaria, albuminuria, y/o proteinuria.

Los medicamentos de la presente invención reducen la expansión de matriz mesangial y el engrosamiento de membrana base glomerular.

Por lo tanto, en un aspecto, la presente invención contempla medicamentos que tratan o previenen procesos asociados con nefropatía diabética incipiente. Estas condiciones patológicas incluyen, por ejemplo, hiperfiltración, albuminuria, proteinuria, hipertrofia glomerular, y expansión de volumen mesangial.

La presente invención contempla el uso de la administración de los presentes medicamentos en combinación con otras terapias. En una realización, el medicamento se administra en combinación con otra terapia, por ejemplo, para aumentar de manera adicional el efecto terapéutico en ciertos aspectos patológicos, etc. Los dos tratamientos pueden administrarse al mismo tiempo o de manera consecutiva, por ejemplo, durante el curso en el que dura un tratamiento o tras la progresión o remisión de la enfermedad. En otra realización, el medicamento se administra en combinación con otro método terapéutico que tiene un modo similar o diferente de acción, por ejemplo, un inhibidor ACE, ARBs, estatina, inhibidor de producto final de glicación avanzada (AGE), etc. Las técnicas terapéuticas actuales para tratar nefropatía diabética son conocidas por aquellos expertos en la técnica, e incluyen, por ejemplo, inhibidores ACE, bloqueadores de receptor de angiotensina, estatinas, inhibidores de producto final de glicación avanzada, terapia de gen de factor de crecimiento hepatocito, piridoxamina, Enalapril, antagonistas PPAR, sulfonilureas, inhibidores de metaloproteinasa de matriz, inhibidores COX-2, pirfenidona, sulodexido, tiamina en dosis elevadas y benfotiamina, bloqueadores de canal cálcico, etc. Se contempla específicamente el uso de cualquiera de estos agentes terapéuticos en combinación con los medicamentos de la presente invención.

La presente invención representa por primera vez la eficacia terapéutica de dos aspectos patológicos distintos asociados con enfermedad renal (por ejemplo, características de fase temprana y características de fase tardía de nefropatía diabética). A pesar de que aquí se ejemplifica la terapia anti-CTGF usando un anticuerpo humano monoclonal dirigido contra CTGF, la presente invención contempla otros métodos que inhiben la expresión del gen que codifica CTGF, inhibiendo la producción de CTGF, o inhibiendo la actividad de CTGF. Por ejemplo, pueden usarse polinucleótidos que incluyen pequeños ácidos ribonucleicos obstaculizadores (siRNAs), micro-RNAs (miRNAs), ribozimas, y secuencias anti-sentido para inhibir expresión y/o producción de CTGF. (Ver, por ejemplo, Kondo et al. (2000) Biochem Biophys Res Commun 278:119-124; y Shimo et al., supra.). Dichas técnicas son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica relevante.

La presente invención proporciona pruebas ejemplares que demuestran que los medicamentos aquí descritos, usando un anticuerpo monoclonal anti-CTCF en modelos animales de diabetes, proporcionan una mejorar en la depuración de creatinina e hipertrofia glomerular, y un descenso en el peso del riñón, un indicador de fibrosis glomerular inducida por TGF\beta y mediada por CTGF y de expansión mesangial. Por lo tanto, los medicamentos de la presente invención mejoran dos patologías que contribuyen en la nefropatía diabética, es decir, expansión mesangial y filtración glomerular.

Los medicamentos de la presente invención se fabrican usando un agente que inhibe CTGF (por ejemplo, reduce la expresión o actividad CTGF). En ciertas realizaciones, el agente es un anticuerpo para CTGF. En una realización preferente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal para CTGF. En otra realización preferente, el anticuerpo es un anticuerpo humano o humanizado para CTGF. En otra realización, el agente es un oligonucleótido antisentido.

Se han identificado varios agentes que inhiben CTGF. Los anticuerpos que se enlazan con CTGF se describen en la Patente U.S N° 5,408,040; Publicación Internacional N° WO 99/07407; Publicación Internacional N° WO 99/33878; y Publicación Internacional N° WO 00/35936. Un anticuerpo ejemplar para uso en los métodos de la presente invención se ha descrito en la Publicación Internacional N° WO 2004/108764. Dichos anticuerpos, o fragmentos de los mismos, pueden administrarse mediante varios medios conocidos por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, los anticuerpos a menudo se inyectan por vía intravenosa, intraperitoneal o subcutánea.

Las tecnologías antisentido, que incluyen pequeños ácidos ribonucleicos obstaculizadores (siRNAs), micro-RNAs (miRNAs), ribozimas, y secuencias anti-sentido dirigido a expresión CTGF, también puede emplearse. (Ver, por ejemplo, Zeng (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:9779-9784; y Kurreck Eur J Biochem 270:1628-1644). Las construcciones antisentido que se dirigen a la expresión CTGF han sido descritas y utilizarse para reducir la expresión de CTGF en varios tipos de células. (Ver, por ejemplo, Publicación Internacional N° WO 96/38172; Publicación Internacional N° WO 00/27868; Publicación Internacional N° WO 00/35936; Publicación Internacional N° WO 03/053340; Kothapalli et al. (1997) Cell Growth Differ 8(1):61-68; Shimo et al. (1998) J Biochem (Tokio) 124(1):130-140; y Uchio et al. (2004) Wound Repair Regen 12:60-66). Dichas construcciones antisentido pueden emplearse para reducir la expresión de CTGF y mejorando o previniendo de este modo los procesos patológicos inducidos por CTGF. Dichas construcciones pueden diseñarse empleando vectores apropiados y reguladores de expresión para expresión específica de célula o tejido y expresión constitutiva o inducible. Dichas construcciones genéticas pueden formularse y administrarse de acuerdo con los procedimientos establecidos en la técnica.

Formulaciones Farmacéuticas y Rutas de Administración

Los agentes de la presente invención pueden enviarse directamente o como composiciones farmacéuticas que contienen excipientes, como es bien conocido en la técnica. El paciente tiene nefropatía diabética incipiente. En una realización preferente, el paciente es un sujeto mamífero, y en una realización más preferente, el paciente es un sujeto humano.

Una cantidad efectiva, es decir, dosis, de compuesto o fármaco puede fácilmente determinarse mediante experimentación rutinaria, al igual que una ruta conveniente y efectiva y una formulación apropiada. Varias formulaciones y sistemas de envío de fármacos están disponibles en la técnica. (Ver, por ejemplo, Gennaro, ed. (2000) Remington's Pharmaceutical Sciences, supra; y Hardman, Limbird, y Gilman, eds. (2001) The Pharmacological Basis of Therapeutics, supra.).

Rutas adecuadas de administración pueden incluir, por ejemplo, administración oral, rectal, tópica, nasal, pulmonar, ocular, intestina, y parenteral. Las rutas principales para administración parenteral incluyen administración intravenosa, intramuscular, y subcutánea. Rutas secundarias de administración incluyen administración intraperitoneal, intra-arterial, intra-articular, intracardiaca, intracisternal, intradérmica, intralesional, intraocular, intrapleural, intratraqueal, intrauterina e intraventricular. La indicación a tratarse, junto con las propiedades físicas, químicas y biológicas del fármaco, dictan el tipo de formulación y la ruta de administración que debe usarse, así como si es preferible un envío local o sistémico.

Las formas de dosis farmacéuticas de un agente de la invención pueden proporcionarse en una liberación instantánea, una liberación controlada, una liberación sostenida, o un sistema de envío de fármaco con objetivo. Las formas de dosis más comúnmente empleadas incluyen, por ejemplo, soluciones y suspensiones, (micro-) emulsiones, pomadas, geles y parches, liposomas, pastillas, grageas, cápsulas con cubierta blanda y dura, supositorios, óvulos, implantes, polvos amorfos o cristalinos, aerosoles, y formulaciones liofilizadas. Dependiendo de la ruta de administración empleada, pueden ser necesarios dispositivos especiales para la aplicación o administración del fármaco, como por ejemplo, jeringuillas y agujas, inhaladores, bombas, inyecciones, aplicadores, o frascos especiales. Las formas de dosis farmacéuticas a menudo están compuestas por el fármaco, un excipiente y un sistema de cierre y de envase. Pueden añadirse uno o varios excipientes, también referidos como ingredientes inactivos, a un agente de la invención para mejorar o facilitar la fabricación, estabilidad, administración y seguridad del fármaco, y pueden proporcionar medios para conseguir un perfil deseado de liberación del fármaco. Por lo tanto, el tipo de excipiente a añadir al fármaco puede depender de varios factores, como por ejemplo, las propiedades físicas y químicas del fármaco, la ruta de administración, y el procedimiento de fabricación. Los excipientes farmacéuticamente aceptables se encuentran disponibles en la técnica, e incluyen aquellos listados en algunas farmacopeas (Ver, por ejemplo, USP, JP, EP, y BP, página web de FDA (www.fda.gov), Inactive Ingredient Guide 1996, y Handbook of Pharmaceutical Additives, ed. Ash; Synapse Information Resources, Inc. 2002).

Las formas de dosis farmacéutica de un agente de la presente invención pueden realizarse empleando cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica como, por ejemplo, la mezcla convencional, el tamizado, disolución, fundición, granulado, transformación en grageas, transformación en pastillas, suspensión, extrusión, secado mediante spray, cepillado, emulsión, (nano/micro-) encapsulado, entrampamiento, o procesos de liofilización. Tal y como se ha mencionado anteriormente, las composiciones de la presente invención pueden incluir uno o más ingredientes inactivos fisiológicamente aceptables que faciliten el proceso de moléculas activas en preparaciones para uso farmacéutico.

La formulación apropiada depende de la ruta deseada de administración. Para inyección intravenosa, por ejemplo, la formulación puede formularse en solución acuosa, si es necesario empleando búferes fisiológicamente compatibles, incluyendo, por ejemplo, fosfato, histidina, o citrato para el ajuste del pH de la formulación, y un agente de tonicidad, como por ejemplo, cloruro sódico o dextrosa. Para administración transmucosal o nasal, puedes ser preferentes formulaciones semisólidas, líquidas, o parches, conteniendo posiblemente potenciadores de penetración. Tales penetradores son generalmente conocidos en la técnica. Para administración oral, los agentes pueden formularse en forma de dosis líquida o sólida y como formulaciones de liberación instantánea o controlada/sostenida. Formas de dosis adecuadas para ingestión oral por parte de un sujeto incluyen pastillas, píldoras, grageas, cápsulas con envoltura blanda y dura, líquidos, geles, jarabes, compuestos acuosos, suspensiones y emulsiones. Los agentes también pueden formularse en composiciones rectales, como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases supositorios tales como manteca de coco u otros glicéridos.

Las formas de dosis orales sólidas pueden obtenerse usando excipientes, que pueden incluir, rellenos, desintegrantes, aglutinantes (secos o húmedos), retardantes de disolución, lubricantes, deslizantes, antiadherentes, resinas de intercambio catiónico, agentes humectantes, antioxidantes, conservantes, agentes colorantes y saborizantes. Estos excipientes pueden proceder de fuente sintética o natural. Ejemplos de tales excipientes incluyen derivados de celulosa, ácido cítrico, fosfato de dicalcio, gelatina, carbonato de magnesio, sulfato lauril de magnesio/sodio, manitol, glicol de polietileno, polivinil pirrolidona, silicatos, dióxido de silicio, benzoato sódico, sorbitol, almidones, ácido esteárico o una sal del mismo, azúcares (es decir, dextrosa, sacarosa, lactosa, etc.), talco, mucílago de tragacanto, aceites vegetales (hidrogenadas), y ceras. El etanol y el agua pueden servir como ayudas para la granulación. En ciertos casos, es deseable cubrir pastillas con, por ejemplo, una capa que tapa el sabor, una capa resistente al ácido estomacal, o una capa retardante de liberación. Los polímeros naturales y sintéticos, en combinación con colorantes, azúcares, y disolventes orgánicos o agua, a menudo se emplean para cubrir pastillas, dando como resultado grageas. Cuando se prefiere una cápsula a una pastilla, el polvo del fármaco, la suspensión, o una solución de la misma puede enviarse en una cápsula compatible con envoltura dura o blanda.

En una realización, los agentes de la presente invención pueden administrarse tópicamente, como por medio de un parche cutáneo, una formulación semisólida o líquida, por ejemplo, un gel, una (micro-) emulsión, una pomada, una solución, una (nano/micro-)suspensión, o una espuma. La penetración del fármaco en la piel y los tejidos subyacentes puede regularse, por ejemplo, usando potenciadores para la penetración; la elección apropiada y la combinación con excipientes lipofílicos, hidrofílicos y anfifílicos, incluyendo el agua, disolventes orgánicos, ceras, aceites, polímeros sintéticos y naturales, surfactantes y emulsionantes pueden regularse mediante ajuste de pH; y el uso de agentes complejos. Otras técnicas, como iontoporesis o iontoterapia, pueden emplearse para regular la penetración cutánea de un agente de la invención. La administración trasndérmica u oral sería preferente, por ejemplo, en situaciones en las cuales se desea el envío local con la mínima exposición sistémica.

Para administración mediante inhalación, o administración por la nariz, los agentes para uso de acuerdo con la presente invención se envían de manera conveniente en la forma de una solución, suspensión, emulsión o aerosoles semisólidos de paquetes presurizados, o un nebulizador, normalmente con el uso de un propelente, por ejemplo, carbonos halogenados derivados de metano o etano, dióxido de carbono, u otro gas adecuado. Para aerosoles tópicos, hidrocarbonos como el butano, isobuteno, y pentano son útiles. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis apropiada puede determinarse proporcionando una válvula para enviar una cantidad medida. Pueden formularse cápsulas o cartuchos de, por ejemplo, gelatina, para uso como un inhalador o respirador. Normalmente, éstas contienen una mezcla con polvos de un agente y de una base con polvos adecuada como lactosa o almidón.

Las composiciones formuladas para administración parenteral mediante inyección son normalmente estériles y pueden presentarse en formas de dosis de unidad, por ejemplo, en ampollas, jeringuillas, inyecciones, o en envases multi-dosis, conteniendo este envase un conservante. Las composiciones pueden tomar tales formas como suspensiones, soluciones, o emulsiones en excipientes grasos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, como búferes, agentes de tonicidad, agentes potenciadores de viscosidad, agentes suspensores y dispersantes, antioxidantes, polímeros biocompatibles, agentes quelantes, y conservadores. Dependiendo del punto de inyección, el excipiente puede contener agua, un aceite sintético o vegetal, y/o co-disolventes orgánicos. En ciertos casos, como con un producto liofilizado o concentrado, la formulación parenteral se reconstituiría o diluiría antes de la administración. Las formulaciones en depósito que proporcionan liberación controlada o sostenida de un agente de la invención, pueden incluir suspensiones inyectables de nano/micro partículas o nano/micro cristales o cristales no micronizados. Los polímeros tales como poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), o copolímeros de los mismos, pueden servir como matrices de liberación controlada/sostenida, además de otros bien conocidos en la técnica. Otros sistemas de envío de depósito pueden presentarse en forma de implantes y bombas que precisan incisión.

Los portadores adecuados para inyección intravenosa para las moléculas de la invención son bien conocidos en la técnica e incluyen soluciones basadas en agua que contienen una base, por ejemplo, hidróxido sódico, para formar un compuesto ionizado, sacarosa o cloruro sódico como un agentes de tonicidad, por ejemplo, el búfer contiene fosfato o histidina. Pueden añadirse co-disolventes, como por ejemplo, glicoles de polietileno. Estos sistemas basados en agua son efectivos en el proceso de disolución de agentes de la invención y producen baja toxicidad tras la administración sistémica. Las proporciones de los componentes de un sistema de solución pueden varias considerablemente, sin destruir las características de solubilidad y toxicidad. Además, la identidad de los componentes puede variar. Por ejemplo, los surfactantes de baja toxicidad, como polisorbatos y poloxámeros, pueden emplearse tal y como lo pueden hacer el glicol de polietileno u otros co-disolventes, pueden añadirse polímeros biocompatibles como polivinil pirrolidona y otros azúcares y polioles pueden sustituir la dextrosa.

Para composiciones útiles para los presentes medicamentos una dosis terapéuticamente efectiva puede estimarse inicialmente usando una variedad de técnicas bien conocidas en la técnica. Las dosis iniciales empleados en estudios con animales pueden basarse en concentraciones efectivas establecidas en ensayos de cultivo de células. Los rangos de dosis apropiados para sujetos humanos pueden determinarse, por ejemplo, empleando datos obtenidos a partir de estudios con animales y de ensayos con cultivos celulares.

Una dosis o cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de la presente invención se refiere a una cantidad o dosis del agente que da como resultado una mejora de síntomas o una prolongación de supervivencia en el sujeto. La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichas moléculas pueden determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o en animales experimentales, por ejemplo, mediante la determinación de LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva para el 50% de la población). El radio de dosis de efectos tóxicos o terapéuticos es el índice terapéutico que puede expresare como el radio LD50/ED50. Los agentes que muestran elevados índices terapéuticos son preferentes.

La cantidad efectiva o cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad del agente o composición farmacéutica que provocará la respuesta biológica o medica de un tejido, sistema, animal, o humano que está siendo investigado por un científico, veterinario, médico, doctor, u otro especialista, por ejemplo, reduciendo la depuración de creatinina, hiperfiltración glomerular e hiperperfusión, excreción de albúmina urinaria, o microalbuminuria, o tratamiento de fase temprana o tardía de nefropatía diabética, etc.

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Las dosis preferentemente se encuentran en un rango de concentraciones circulantes que incluye la ED50 con muy poco o con nada de toxicidad. Las dosis pueden varia dentro de este rango dependiendo de la forma de dosis empleada y/o la ruta de administración utilizada. La formulación exacta, la ruta de administración, la dosis, y el intervalo de dosis deberían elegirse de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica, a la vista de las características de la condición del sujeto.

La cantidad de dosis y el intervalo pueden ajustarse de manera individual para proporcionar niveles de plasma de la molécula activa que son suficientes para conseguir los efectos deseados, es decir, la mínima concentración efectiva (MEC). La MEC variará para cada agente pero puede estimarse a partir de, por ejemplo, información in vitro y experimentos con animales. Las dosis necesarias para conseguir MEC dependerán de las características individuales y de la ruta de administración. En casos de administración local o toma selectiva, la concentración local efectiva del fármaco puede no estar relacionada con la concentración de plasma.

La cantidad de agentes o composición administrada puede ser dependiente de una variedad de factores que incluyen el sexo, edad, y peso del sujeto a ser tratado, la severidad de la aflicción, la manera de administración y el juicio del especialista que emite la receta.

Si se desea, las presentes condiciones pueden presentarse en un paquete o dispositivo dispensador que contiene uno o más formas de dosis de unidad que contiene el ingrediente activo. Dicho paquete o dispositivo puede, por ejemplo, incluir un envoltorio metálico o plástico, como un paquete ampolla, o tapones de cristal o goma, como viales. El paquete o dispositivo dispensador puede ir acompañado de instrucciones para la administración. También pueden formularse composiciones que contienen un agente de la invención formulada en un portador farmacéuticamente aceptable, colocados en un envase apropiado, y etiquetados para tratamiento de una condición indicada.

Estas y otras realizaciones de la presente invención serán fácilmente ocurrentes para aquellos expertos en la técnica a la vista de la exposición aquí presente.

Ejemplos

La invención además se entenderá por referencia a los siguientes ejemplos, que pretenden ser puramente ejemplares de la invención. Se incluyen estos ejemplos únicamente para ilustrar la invención reivindicada. La presente invención no está limitada al alcance de las realizaciones ejemplificadas, que solamente pretender ser ilustraciones de aspectos únicos de la invención.

Cualquier método que sea funcionalmente equivalente se encuentra dentro del alcance de la invención. Varias modificaciones de la invención además de las aquí descritas resultarán evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción precedente y de las figuras acompañantes. Dichas modificaciones pretenden encontrarse dentro de los límites del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplo 1

Tratamiento de características en fase temprana de nefropatía diabética

Los métodos de la invención se emplearon para demostrar eficacia de amplio espectro en un modelo animal para ciertos aspectos de nefropatía diabética en fase temprana del siguiente modo. Se obtuvieron ratones de ochos semanas de edad con una mutación de pérdida de función en el receptor de leptina (Ob-R; codificado por el gen db) de Harlan, Indianápolis, IN. Estos ratones db/db sirven como modelo de animal de diabetes obesa del tipo 2, y en particular, un modelo de nefropatía diabética obesa del tipo 2 caracterizada por aspectos tempranos de nefropatía diabética, incluyendo, por ejemplo, hiperfiltración en el riñón y proteinuria con mínimo desarrollo de fibrosis intersticial. Esto es un modelo de animal de fase inicial de nefropatía diabética más que de fase tardía de nefropatía diabética, tal y como se muestra por el desarrollo mínimo de fibrosis intersticial. Los homocigotos db/db (diabéticos) son hiperglicémicos a las 8 semanas de edad. Los animales homocigotos db/db (diabéticos) y heterocigotos db/+ (no diabéticos) fueron tratados (inyección intraperitoneal) con anticuerpo monoclonal anti-CTGF (\alphaCTGF) (preparado tal y como se describe en la Publicación Internacional N° WO 2004/108764 o mediante la línea celular identificada por ATCC N° de Acceso PTA-6006, depositado el 20 de mayo de 2004) o control humano IgG (clgG). En todos los animales una inyección inicial de 300 \mug de anticuerpo fue seguida por dosis de 100 \mug administradas 3 veces por semana durante 60 días. Las muestras de sangre se recogieron y los pesos corporales fueron medidos al comienzo y periódicamente durante el periodo del tratamiento. El consumo de comida también fue registrado.

La Tabla 1 a continuación muestra el peso corporal medio (BW), el nivel de glucosa en sangre (BG), y el consumo de comida (FC) el día 0 y el día 60 en ratones db/+ tratados con clgG, ratones db/+ tratados con \alphaCTGF, ratones diabéticos db/db tratados con clgG y ratones db/db tratados con \alphaCTGF. Todos los datos se expresan como Promedio \pm SEM. El número de ratones por grupo (n) osciló entre 9 y 15. Los animales no diabéticos (db/+) que presentaron riñón poliquístico fueron excluidos del análisis. Tal y como se muestra en la Tabla 1, existió una clara distinción entre los animales diabéticos (db/db) y los animales no diabéticos (db/+) con respecto al peso corporal, niveles de glucosa en sangre, y consumo de comida. El tratamiento tanto con el anticuerpo anti-CTGF como con IgG no afectó de manera considerable el total de peso ganado, los niveles de glucosa en sangre, o el consumo de comida tanto en animales diabéticos (db/db) como en los animales no diabéticos (db/+).

TABLA 1

1

Inhibición de Progresión de Características de Fase Inicial de Nefropatía Diabética

Tras el periodo de tratamiento con el anticuerpo anti-CTGF descrito anteriormente, se obtuvieron varias medidas de función renal y nefropatía, incluyendo el peso del riñón, la depuración de creatinina, la excreción de albúmina urinaria, y volumen urinario. La Tabla 2 a continuación muestra el peso medio de riñón (KW), la depuración de creatinina (CrCl), y la excreción de albúmina urinaria en 24 horas (UAE) el día 60 en ratones db/+ tratados con clgG, ratones db/+ tratados con \alphaCTGF, ratones db/db tratados con clgG y ratones db/db tratados con \alphaCTGF. Todos los datos se expresan como Promedio \pm SEM. El número de ratones por grupo (n) osciló entre 9 y 15. Tal y como se ha mencionado anteriormente, los animales no diabéticos (db/+) que presentaron riñón poliquístico fueron excluidos del análisis.

TABLA 2

2

Tal y como se muestra en la Tabla 2, los ratones db/db mostraron riñones que hiperfuncionaban tal y como se indica por el aumento o dilatación renal (es decir, el aumento de peso del riñón) (Figura 1), la mayor depuración de creatinina (Figura 2), y una mayor excreción de albúmina urinaria (Figura 3, * P<0.01 vs. db/+ tratados con anti-CTGF). Los animales diabéticos tratados con anticuerpo anti-CTGF mostraron un aumento reducido de peso de riñón en comparación con los animales diabéticos tratados con clgG.

La depuración de creatinina en animales db/db tratados con clgG fue aproximadamente el doble del valor observado en los animales db/+, indicando la función renal afectada, hipertrofia, e hiperfiltración en animales diabéticos. La excreción de albúmina urinaria también aumentó en animales diabéticos db/db en comparación con la excreción de albúmina urinaria observada en animales no diabéticos db/+. Los animales db/db tratados con anticuerpo anti-CTGF tuvieron una depuración de creatinina y unos niveles de excreción de albúmina urinaria considerablemente más bajos que aquellos observados en animales db/db tratados con cTgG. Específicamente, los ratones diabéticos tratados con anti-CTGF tuvieron unos niveles de depuración de creatinina 82% más bajos que los observados en los ratones diabéticos tratados con clgG. Los ratones diabéticos tratados con anti-CTGF tuvieron unos niveles de excreción de albúmina urinaria 69% más bajos que los observados en ratones diabéticos tratados con clgG. Estos resultados proporcionan evidencias de una mejora exagerada en la función renal en los ratones tratados con anticuerpo anti-CTGF. El tratamiento de animales diabéticos usando métodos de la invención no mostró ningún efecto adverso en el peso o función del riñón. Estos datos demostraron que la administración de anticuerpo anti-CTGF en animales diabéticos dio como resultado un aumento reducido en el peso del riñón, menor depuración de creatinina, y menor excreción de albúmina urinaria.

Además, los ratones diabéticos (db/db) mostraron un aumento en el volumen urinario en comparación con ratones no diabéticos (db/+). La administración de anticuerpo anti-CTGF tal y como se ha descrito anteriormente redujo el volumen urinario en ratones diabéticos (db/db). (Ver Figura 5, *P<0.01 vs. db/+ tratados con anti-CTGF). Estos datos indicaron que la administración de anticuerpo anti-CTGF a animales diabéticos redujo el volumen urinario. Estos resultados también indicaron que la inhibición de CTCF proporciona un método para reducir el incremento de volumen urinario asociado con nefropatía diabética, y por lo tanto proporciona un método para mejorar la función renal.

Los análisis de cambios en volumen glomerular (es decir, reducción en la expansión de volumen glomerular) y el engrosamiento de la membrana base demostraron además la eficacia de inhibición de CTGF en el tratamiento y prevención de desarrollo y progresión de nefropatía diabética. Tal y como se muestra en la Figura 6 (*no diferente de db/+ tratados con anti-CTGF), el tratamiento de animales diabéticos (db/db) con anticuerpo anti-CTGF redujo el engrosamiento de la membrana base.

En conjunto, estos datos mostraron que el tratamiento de animales diabéticos (db/db) con anticuerpo anti-CTGF redujo la hipertrofia del riñón (tal y como lo demuestra el descenso de peso del riñón en animales diabéticos tratados con anti-CTGF) y restableció la función renal (tal y como lo demuestra el aumento reducido de depuración de creatinina y el rango de excreción urinario en animales diabéticos tratados con anti-CTGF). Estos resultados también indicaron que la inhibición de CTGF proporcionó un método para reducir la permeabilidad e hiperfiltración glomerular, así como para reducir la expansión mesangial y el engrosamiento de membrana base. Por lo tanto, la inhibición de CTGF proporciona un enfoque terapéutico para tratar características en fase temprana de nefropatía diabética.

Ejemplo 1 de Referencia

Tratamiento de Características de Fase Tardía de Nefropatía Diabética

Se examinó el efecto de terapia anti-CTGF en un modelo animal de nefropatía diabética en fase tardía. Tal y como se ha descrito anteriormente usando este modelo animal, las ratas con diabetes mellitus mostraron elevada susceptibilidad a reperfusión unilateral de isquemia renal, dando como resultado una rápida y progresiva nefropatía y fallo renal en fase final, asociado con el desarrollo de fibrosis, atrofia del riñón, y rango de filtración glomerular severamente comprometida (Ver, por ejemplo, Melin et al. (1997) Kidney Int 52:985-991). En este modelo animal de diabetes mellitus, la isquemia severamente dañó la función renal en ratas diabéticas. En este modelo animal, los efectos renales sobre la función renal y la patología de hiperglicemia e isquemia son similares a aquellos observados en nefropatía diabética humana en fase tardía y en enfermedad renal en fase final (ERSD).

La diabetes mellitus fue provocada en ratas macho Sprague Dawley por una única dosis intravenosa de estreptozotocina (STZ) (50 mg/kg). Se consiguió reperfusión unilateral de isquemia renal (IR) en un riñón sujetando la arteria izquierda ranal durante 30 minutos, previniendo de este modo el flujo sanguíneo al riñón izquierdo. El tratamiento con anticuerpo monoclonal anti-CTGF (i. p. 5 mg/kg) se inició 1 día antes de la reperfusión de isquemia renal (es decir, 2 semanas después del desarrollo de diabetes) y continuó 3 veces por semana durante 10 semanas. Los animales control que no recibieron anticuerpo anti-CTGF fueron administrados PBS (i. p. 5 ml/kg). Se obtuvieron muestras de sangre a partir de la vena de la cola. La química clínica sanguínea, llevada a cabo por Quality Clinical Labs, Inc. (Mountain View, CA), se analizó en las semanas 8, 4, 8, y 19. La proteína urinaria total de 24 horas fue determinada en las semanas 5 y 9. Las ratas individuales se colocaron en jaulas metabólicas y se recogieron especimenes urinarios a las 24 horas. El volumen urinario se midió y la proteína urinaria se analizó usando el Kit de Ensayo de Proteína BCA (Pierce Chemical Co.).

El rango de filtración glomerular (GFR) es la medida más extendida de la función renal. La depuración inulina es una medida de rango de filtración glomerular. En estos experimentos, el rango de filtración glomerular (es decir, la función renal) se determinó para riñones individuales midiendo el volumen urinario y la depuración de inulina. La orina se recogió por medio de una uretra con cánula y la sangre se recogió de la arteria femoral. El volumen urinario se estimó gravimétricamente. La concentración de inulina se determinó usando el método Antrona. La depuración de inulina, indicativo de GFR, se determinó empleando la fórmula: (U_{conc}xU_{vol})/S_{conc-}. Al final del experimento, los riñones fueron retirados para evaluación bioquímica e histopatológica.

Los datos se presentan como media +/- SEM. Los datos se comparan en grupos experimentales en cada punto en el tiempo usando un análisis de un sentido de discrepancia (ANOVA) y el método Student-Newman-Keuls (SIGMASTAT). Cuando solamente se compararon dos grupos, se empleó un Test t (Dos muestras asumiendo una herramienta de análisis de discrepancias iguales, Microsoft Excel). Un valor de P<0.05 fue considerado significativo.

Los animales a los que se les administró una única dosis de STZ se convirtieron en diabéticos, tal y como lo indican los elevados niveles de glucosa en sangre. Los niveles de glucosa en sangre aumentaron desde menos de 200 mg/dL en animales de control (no tratados con STZ) a niveles superiores a 600 mg/dL en animales tratados con STZ, indicando que estos animales fueron diabéticos. La IR renal de animales no diabéticos (no tratados con STZ) no aumentó los niveles de glucosa en sangre por encima de los de los animales control (datos no mostrados). Los niveles de glucosa en sangre permanecieron elevados en animales tratados con STZ a lo largo de las 10 semanas tras IR renal unilateral. (Datos no mostrados).

Proteinuria de Fase Tardía

Microalbuminuria característica de nefropatía diabética en fase temprana progresa hasta macroalbuminuria y proteinuria en fase tardía. En animales con diabetes mellitus, se observaron aumentos significativos en proteína urinaria total en 24 horas (es decir, proteinuria de fase tardía), indicando un aumento de hiperfiltración glomerular y desarrollo de fallo renal. Tal y como se muestra en la Figura 7, la proteína de orina total en animales no diabéticos (sham + PBS; IR + PBS) fue aproximadamente 100 mg/24 horas. (En la Figura 7, * mayor que no diabético (p<0.001), # menor que DM+IR+PBS (p<0.05) en semanas correspondientes). Sin embargo, los animales diabéticos con IR renal tuvieron unos niveles de proteína urinaria total que excedían los 350 mg/24 horas. La administración de anticuerpo anti-CTGF a animales diabéticos con IR renal dio como resultado una reducción significativa en proteína urinaria total en 24 horas en las semanas 5 y 9, aproximadamente 225 mg/24-horas y 250 mg/24-horas, respectivamente, en comparación con animales diabéticos no tratado. (Ver Figura 7). Estos datos demostraron que la administración de anticuerpo a CTGF redujo proteinuria en animales diabéticos. Estos resultados indicaron que la inhibición de CTGF proporciona un medio terapéutico para disminuir la hiperfiltración de riñón. Estos resultados demuestran por primera vez que la terapia anti-CTGF es útil para prevenir el desarrollo y progresión de proteinuria en fase tardía.

Urea-Nitrógeno en Sangre (BUN)

Los niveles aumentados de BUN son indicativos de función renal afectada asociada con nefropatía diabética en fase tardía. Se observaron incrementos significativos en niveles BUN en estos animales diabéticos. Los niveles BUN en animales no diabéticos de control (sham + PBS; IR + PBS) fueron por debajo de 20 mg/dL en las semanas 0, 4 y 10 del estudio. En animales diabéticos con IR renal, los niveles BUN aumentaron desde aproximadamente 22 mg/dL en la semana cero, a hasta más de 40 mg/dL en 4 semanas. (Ver Figura 8, * mayor que sham + PBS e IR + PBS (p<0.01), # menor que DM+IR+PBS (p<0.01) en 4 semanas). La administración de anticuerpo monoclonal anti-CTGF a animales diabéticos con IR renal dio como resultado una reducción de niveles BUN en 4 semanas (hasta aproximadamente 30 mg/dL) y en 10 semanas (hasta aproximadamente 35 mg/dL), en comparación con lo observado en animales diabéticos sin la administración de anticuerpo CTGF. (Ver Figura 8). Estos resultados demostraron por primera vez que la terapia anti-CTGF es útil para reducir los niveles BUN en diabéticos, indicando que la inhibición de CTGF proporciona un enfoque terapéutico para mejorar la función del riñón.

Índice de Filtración Glomerular

El índice de filtración glomerular se determinó para riñones individuales para cada una de las varias condiciones descritas anteriormente. En animales de control (es decir, no diabéticos, no-IR), GFR fue superior a 0.3 mL/min/ri-
ñón/100 g. Los animales no diabéticos con IR renal tuvieron un GFR de aproximadamente 0.28 mL/min/riñón/100 g. Los animales diabéticos sin IR renal tuvieron un GFR de aproximadamente 0.17 mL/min/riñón/100 g. (Datos no mostrados).

El índice de filtración glomerular se redujo drásticamente en el riñón isquémico de animales con diabetes mellitus a las 10 semanas, hasta aproximadamente 0.01 ml/min/riñón/100 g. (Ver Figura 9). La administración de anticuerpo anti-CTGF mejoró de manera significativa el índice de filtración glomerular en riñones individuales en animales diabéticos afectados por IR renal, hasta un nivel superior a 0.035 mL/min/riñón/100 g. Estos datos demostraron que la administración de un anticuerpo a CTGF incrementó el índice de filtración glomerular en animales diabéticos con enfermedad renal en fase tardía. Estos resultados demostraron por primera vez que la terapia anti-CTGF es efectiva al mejorar el índice de filtración glomerular en nefropatía diabética en fase tardía, y por lo tanto, proporciona un enfoque terapéutico para mejorar la función del riñón en enfermedad renal en fase tardía.

Varias modificaciones de la invención, además de las aquí mostradas y descritas, resultarán aparentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción precedente. Tales modificaciones pretenden estar dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (22)

1. Uso de un agente que inhibe CTGF en la fabricación de un medicamento para tratar microalbuminuria en un paciente con nefropatía diabética incipiente, donde el agente es un anticuerpo de factor de crecimiento de tejido anti-conector (CTGF), ácido nucleico anti-sentido anti-CTGF o siARN específico de CTGF, miARN o ribozima.

2. El uso de la reivindicación 1, donde el medicamento es para reducir la microalbuminuria en un paciente con nefropatía diabética incipiente.

3. El uso de la reivindicación 1 o reivindicación 2, donde el agente es un anticuerpo anti-CTGF.

4. El uso de la reivindicación 3, donde el anticuerpo anti-CTGF se obtiene a partir de la línea celular identificada por ATCC N° de Acceso PTA-6006, depositado el 20 de mayo de 2004.

5. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento es para el tratamiento de nefropatía incipiente en individuos con microalbuminuria.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la microalbuminuria se diagnostica como excreción de albúmina urinaria de aproximadamente 30-300 mg/día.

7. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento se administra en combinación con una cantidad inhibidora de una angiotensina que convierte el inhibidor de enzima.

8. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento se administra en combinación con una cantidad inhibidora de un bloqueador de receptor de angiotensina.

9. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el paciente es un sujeto humano.

10. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la depuración de creatinina en el paciente.

11. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la hiperfiltración glomerular en el paciente.

12. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la hiperperfusión glomerular en el paciente.

13. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la excreción de albúmina urinaria en el paciente.

14. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce o previene el aumento de peso del riñón en el paciente.

15. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento normaliza el índice de filtración glomerular en el paciente.

16. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la hipertrofia glomerular en el paciente.

17. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la proteinuria en el paciente.

18. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la albuminuria en el paciente.

19. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento previene la macroalbuminuria en el paciente.

20. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce los niveles de urea-nitrógeno en sangre (BUN) en el paciente.

21. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento reduce la depuración de inulina en el paciente.

22. El uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento es para mejorar la función renal en el paciente.