CN101884789A - Ctgf作为糖尿病肾病的治疗靶点 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗糖尿病肾病的特定早期症状和晚期症状的方法和化合物。还提供了治疗与早期和晚期糖尿病肾病有关的各种生理特征的方法和化合物。

Description

CTGF作为糖尿病肾病的治疗靶点

本发明专利申请是国际申请号为PCT/US2005/004367、国际申请日为2005年2月11日、进入中国国家阶段的申请号为200580007689.X、名称为“CTGF作为糖尿病肾病的治疗靶点”的发明专利申请的分案申请。

本申请要求2004年2月11日提交的美国临时申请序列号60/544,121；2004年4月8日提交的美国临时申请序列号60/561,018；2004年6月9日提交的美国临时申请序列号60/578,401；和2004年10月20日提交的美国临时申请序列号60/620,802的优先权，各申请全文纳入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及治疗糖尿病肾病特定早期症状和晚期症状的方法和化合物。还提供了治疗与早期和晚期糖尿病肾病有关的各种生理特征的方法和化合物。

背景技术

肾病是肾脏的正常生理学和功能的任何改变造成的。肾病可由多种急性和慢性病症和事件引起，包括物理、化学或生物损伤、创伤或外伤，疾病，如高血压、糖尿病、充血性心力衰竭、狼疮、镰状细胞贫血、各种炎性和自身免疫疾病、HIV相关肾病等。肾病可导致肾功能降低、高血压和肾衰竭，严重降低生活质量，有时需要透析，某些情况下需要肾移植。

糖尿病肾病是糖尿病的主要长期并发症，并且在美国是进行透析和肾移植的主要指征。(Marks和Raskin，1998，Med Clin North Am，82：877-907。)25-50％的I型和2型糖尿病患者会发生糖尿病肾病。因此，糖尿病肾病在西方国家是造成晚期肾病和肾衰竭的最常见原因。

与1型或2型糖尿病患者发生糖尿病肾病(和其它肾病)有关的起作用的风险因子包括高血糖、高血压、改变的肾小球血流动力学以及各种生长因子增加或异常的表达，其中包括转化生长因子-β(TGFβ)、胰岛素样生长因子(IGF)-I、血管内皮生长因子-a(VEGF-A)和结缔组织生长因子(CTGF)。(见，例如，Flyvbjerg(2000)Diabetologia 43：1205-23；Brosius(2003)Exp Diab Res 4：225-233；Gilbert等，(2003)Diabetes Care 26：2632-2636；和国际公布号WO 00/13706。)

目前的治疗策略是用各种方法减缓糖尿病肾病的进展，包括最佳血糖控制(通过调节饮食和/或胰岛素治疗)和高血压控制，这些疗法的效果不同。例如，血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂和血管紧张素受体阻断剂(ARB)都被用来降低高血压，它们显示可延迟肾病和大白蛋白尿的进展或发展。一些临床试验已经证实了ACE抑制剂和ARB对糖尿病患者的功效。然而，尽管ACE抑制剂显示可延迟1型糖尿病患者的肾脏衰弱，但这些药剂对I型糖尿病患者的肾脏保护效果还不清楚。(Raij(2003)Am JHypertens 16：46S-49S。)

此外，由于控制血糖和血压的疗法通过延迟相关病理的进展而显著降低糖尿病肾病的发病率和死亡率，这种常规疗法不能充分停止疾病的进展，因此无法提供完全的治疗效果。此外，目前的护理标准是给予ACE抑制剂或ARB，这不是普遍有效的，只是最低限度地延迟而不排除肾移植的需要。

其它治疗手段集中在将一种或多种生长因子作为治疗靶点。已经研究了单独抑制或与ACE抑制剂或ARB联合抑制VEGF或TGFβ的疗法。(见，例如，De Vriese等，(2001)J Am Soc Nephrol 12：993-1000；Flyvbjerg等，(2002)Diabetes 51：3090-3094；Ziyadeh等，(2000)Proc Natl Acad Sci 97：8015-8020；Chen等，(2003)Biochem BiophysRes Commun 300：16-22；和Benigni等，(2003)J Am Soc Nephrol 14：1816-1824。)然而，这种治疗方法不能改善与糖尿病肾病有关的肾脏病理的所有方面(例如改变和削弱的肾功能和结构)。例如，抑制作为糖尿病肾病治疗靶点的TGFβ不能有效减轻db/db小鼠的白蛋白尿，尽管这种治疗对肾小球基质扩张有有益效果。(见Ziyadeh等，同上。)此外，尽管给予糖尿病db/db小鼠抗-VEGF抗体为糖尿病相关肾脏渗透性升高提供了益处，但观察到对肾小球系膜扩张只有极小益处。(见Flyvbjerg等，(2002)，同上。)因此，尽管单独或联合使用这种疗法是有希望的，但与慢性肾病例如糖尿病肾病有关的早期(例如肾小球过度滤过、肾小球滤过率升高、微白蛋白尿等)和晚期(例如肾小球滤过率降低、大白蛋白尿、肾小球系膜基质过度扩张等)病理特征均未得到改善。因此，本领域需要能改善早期和晚期症状以及与疾病发展和进展有关的病理的治疗糖尿病肾病的完全疗法。

除了上述缺点，目前的糖尿病肾病疗法由于缺乏特异性因此适用性/功效有限。具体说，靶向VEGF-或TGFβ的疗法可包括这些生长因子的有益活性，如血管生成、肿瘤抑制及免疫系统的适当发育。例如，由于TGFβ与纤维化发展有关，它也是免疫发育和肿瘤抑制的重要介质，提示抑制TGFβ可能有有害的潜在不良副作用。因此，本领域需要更具选择性的治疗糖尿病肾病的方法。

总之，本领域需要治疗肾病尤其是糖尿病肾病的治疗方法，该方法在疾病发展和进展的各阶段(例如早期和晚期糖尿病肾病)都有效。具体地说，需要糖尿病肾病的完全疗法，这种疗法可有效治疗糖尿病肾病的早期特征和晚期特征，所述特征例如：过度滤过(早期)、肾小球渗透性升高(早期)、肾小球滤过率升高(早期)、微白蛋白尿(早期)、大白蛋白尿(晚期)和肾小球滤过率降低(晚期)。需要更加完全针对与糖尿病肾病和其它肾病的发展和进展有关的各种不同过程的治疗方法。具体地说，需要以与糖尿病肾病有关的非纤维化(例如过度滤过)和纤维化(例如肾小球系膜基质扩张)过程为目标的疗法。此外，需要治疗肾病，尤其是糖尿病肾病的能提供结构和功能益处的治疗方法。

本发明鉴定了CTGF在与肾病如糖尿病肾病的发展和进展有关的各过程中的作用，并提供了抑制和预防这些过程的方法，满足了这些需要。本发明还提供了可用来治疗和预防肾病，尤其是与糖尿病有关的肾病，更具体说是糖尿病肾病的方法和药剂，满足了现有需要。

发明内容

本发明涉及治疗或预防糖尿病肾病特定早期症状和晚期症状的方法和化合物，并提供了治疗或预防与早期和晚期糖尿病肾病有关的各种生理特征的方法和化合物。

具体地说，在下述各方法的优选实施方案中，优选的对象是人类对象。

一实施方案中，本发明提供了一种降低糖尿病或早期糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的肌酸酐清除率的方法，所述方法包括予患者治疗有效量的CTGF抑制剂，从而降低对象的肌酸酐清除率。人的正常肌酸酐清除率水平约为97-137毫升/分钟(成年男性)和88-128毫升/分钟(成年女性)。因此，尤其考虑了将肌酸酐清除率水平降至这些水平或大约这些水平的方法。

这里还提供了减轻糖尿病或早期糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的肾小球过度滤过的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂，还提供了减轻肾小球过度灌注的方法。

另一方面，本发明包括减轻或预防糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象肾脏重量增加的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

本发明还提供了使糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的肾小球滤过率正常化的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。所述糖尿病肾病可以是，例如，早期、晚期、初期或明显性糖尿病肾病。在早期或初期糖尿病肾病的情况下，正常化将可能降低肾小球滤过率，而在晚期或明显性糖尿病肾病的情况下，正常化将可能升高肾小球滤过率。成人的正常GFR约为120毫升/分钟。当对象的GFR高于正常水平时需要降低GFR，特别考虑了将GFR降至低于约150毫升/分钟、低于约140毫升/分钟、低于约130毫升/分钟以及约120毫升/分钟的方法。当对象的GFR受损或低于正常水平时，需要将GFR升至高于约15毫升/分钟、高于约30毫升/分钟、高于约60毫升/分钟、高于约90毫升/分钟、约120毫升/分钟的方法。

另一实施方案中，本发明提供了减轻糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象肾小球肥大的方法，所述糖尿病肾病包括早期、晚期、初期或明显性糖尿病肾病，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

这里还提供了减轻糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的蛋白尿的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。本发明还包括减轻糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的白蛋白尿的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。还包括减轻糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的微白蛋白尿的方法，其中所述糖尿病肾病是早期或初期糖尿病肾病，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂，并提供了减轻糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的大白蛋白尿的方法，其中所述糖尿病肾病是晚期或明显性糖尿病肾病，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

成人的正常尿白蛋白排泄率通常约为15-30毫克/天。当对象的尿白蛋白排泄率约为30-300毫克/天时通常被诊断为微白蛋白尿。大白蛋白尿的典型特征为尿白蛋白排泄率大于约300毫克/天。因此，本发明特别提供了降低对象的尿白蛋白排泄率的方法，所述方法包括给予尿白蛋白排泄率升高(例如尿白蛋白排泄率高于正常水平)的对象有效量的CTGF抑制剂。这里特别考虑了将尿白蛋白排泄率降至低于约300毫克/天、低于约200毫克/天、低于约100毫克/天、低于约50毫克/天，及最优选低于约30毫克/天的实施方案。

在某些方面，本发明提供了降低糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的BUN水平的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。成人的正常BUN水平为7-20毫克/分升。因此，提供了使BUN水平降至低于20毫克/分升的方法。本发明还提供了降低糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的菊糖清除率的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。在特定方面，所述糖尿病肾病是晚期糖尿病肾病或明显性糖尿病肾病。

再在另一实施方案中，本发明提供了在有糖尿病并发症风险的对象中预防这种并发症、降低其风险或延迟其发作的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。在不同实施方案中，所述糖尿病并发症包括至少一种选自以下的并发症：肌酸酐清除率升高、肾小球滤过率升高或降低、肾小球基底膜增厚、肾小球过度滤过、肾小球过度灌注、肾小球肥大、尿白蛋白排泄率升高、微白蛋白尿、大白蛋白尿、BUN水平升高、菊糖清除率升高、肾脏重量增加和肾功能受损。

本发明还包括治疗初期糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的初期糖尿病肾病的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂，并包括治疗早期糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的初期糖尿病肾病的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。这里还考虑了治疗明显性糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的明显性糖尿病肾病的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

本发明考虑了将本发明的方法与其它疗法联用。一实施方案中，所述方法与其它疗法联用，例如，以进一步增加对某些病理事件的治疗效果，等等。例如，在治疗时程期间或在疾病进展和缓解后两种处理可同时或连续给予。另一实施方案中，所述方法与另一种具有类似或不同作用模式的治疗方法联合使用，例如，ACE抑制剂、ARB、抑制素、高级糖基化终产物(AGE)抑制剂等。因此，在一具体实施方案中，本发明提供了治疗糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的糖尿病肾病的方法，所述方法包括与抑制量的血管紧张素转化酶抑制剂联合给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。本发明还提供了治疗糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的糖尿病肾病的方法，所述方法包括与抑制量的血管紧张素受体阻断剂联合给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

一实施方案中，提供了治疗对象的进行性肾衰竭的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。另一实施方案中，本发明提供了降低对象的微白蛋白尿风险或延迟微白蛋白尿发展的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。另一实施方案中，还提供了降低对象的大白蛋白尿风险或延迟大白蛋白尿发展的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

一特定方面，本发明涉及以下发现，即CTGF在这里被鉴定为包括糖尿病肾病并发症和玻璃体视网膜病在内的早期进行性疾病的关键因子。因此，一方面，本发明涉及治疗或预防进行性疾病患者或者有患病风险的对象的这种疾病早期症状的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。另一方面，所述进行性疾病与CTGF之外的生长因子有关，在一具体方面，所述其它生长因子是VEGF。一方面，所述进行性疾病是肾病，在一特定方面，所述进行性疾病与糖尿病或糖尿病并发症有关，或者是糖尿病肾病。

本发明还包括改善肾功能受损患者或者有患病风险的对象的肾功能的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的CTGF抑制剂。

如上所述，本发明涉及以下发现，即抗-CTGF疗法可有效治疗或预防早期和晚期糖尿病肾病的各种生理特征。因此，本发明提供了治疗或预防与至少一种选自以下的特征有关的肾病的方法：肌酸酐清除率升高；肾小球滤过增加或肾小球过度滤过；蛋白尿；尿白蛋白排泄增加；肾小球体积增大；肾小球肥大；肾脏重量增加；肾小球基底膜增厚；肾小球滤过率降低；BUN水平升高；和菊糖清除率升高。各种情况下，所述方法包括给予有此需要的对象有效量的CTGF抑制剂。这些方法都包括给予对象CTGF抑制剂以预防上述任一并发症的进展或发展。

本发明还包括CTGF抑制剂在制造用于以下用途的药物中的应用：降低肌酸酐清除率；减轻肾小球过度滤过；减轻肾小球过度灌注；减轻肾小球肥大；降低肾小球基底膜厚度；降低尿白蛋白排泄率；减轻蛋白尿(proteinuria)；减轻白蛋白尿(albuminuria)；减轻微白蛋白尿；减轻大白蛋白尿(macroalbuminuia)；降低BUN水平；使肾小球滤过率正常化；降低菊糖清除率；减轻或预防肾脏重量增加；预防糖尿病并发症、降低其风险或延迟其发作；治疗或预防初期糖尿病肾病进展；治疗或预防早期糖尿病肾病进展；治疗或预防明显性糖尿病肾病进展；治疗或预防进行性肾衰竭；治疗或预防对象的进行性疾病早期症状发展；和改善糖尿病或糖尿病肾病患者或者有患病风险的对象的肾功能。在不同实施方案中，所述试剂选自抗体、小分子抑制剂、反义核酸和siRNA。

在上述方法的优选实施方案中，所述对象是人类对象。

在任何上述方法中，特别考虑了抑制CTGF的试剂是多肽、多核苷酸或小分子；例如，结合CTGF的抗体、反义分子、siRNA、小分子化合物等。具体地说，本发明考虑可通过任何本领域熟知的方法实现抑制CTGF以调节CTGF的表达和活性。尽管本发明包括抑制CTGF编码基因表达、抑制CTGF产生或抑制CTGF活性的任何方法，但优选使用抗-CTGF试剂，例如抗CTGF的人单克隆抗体。例如，可用小分子化合物来抑制CTGF的表达、产生或活性。由于CTGF表达受环状核苷酸抑制，这种化合物可包括，例如，环状核苷酸类似物或磷酸二酯酶(PDE)抑制剂。(见，例如，Duncan等，(1999)FASEB J13：1774-1786。)此外，包括小干扰核糖核酸(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶和反义序列在内的多核苷酸可用于本发明的方法以抑制CTGF的表达和/或产生。(见，例如，Kondo等，(2000)Biochem Biophys Res Commun 278：119-124。)这种技术是相关领域熟练技术人员熟知的。用于本发明方法的抗体的例子描述在，例如，国际公布号WO 2004/108764中，该申请被全文纳入本文作为参考。

附图说明

图1显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病db/db小鼠的肾脏重量增加。

图2显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病db/db小鼠的肌酸酐清除率。

图3显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病db/db小鼠的尿白蛋白分泌。

图4显示了人玻璃体内CTGF和VEGF水平间的相关性。

图5显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病db/db小鼠的尿体积。

图6显示，给予抗-CTGF抗体减小了糖尿病db/db小鼠的肾基底膜增厚。

图7显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病肾病大鼠模型的蛋白尿。

图8显示，给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病肾病大鼠模型的BUN水平。

图9显示，给予抗-CTGF抗体改善了糖尿病肾病大鼠模型的肾小球滤过率。

具体实施方式

应理解，本发明不限于这里描述的具体方法、方案、细胞系、测定和试剂，这些是可以变化的。还应理解，这里所用的术语是用来描述本发明的具体实施方案的，而不是要以任何方式限制本发明的范围，本发明的范围由附加的权利要求限定。

必需注意，在文中和附加的权利要求中，除非文中另有明确说明，单数形式“一个”、“一种”和“这种”包括其复数。因此，例如，提及“一个片段”时包括多个这种片段，提及一个“抗体”时是指一个或多个抗体以及本领域的技术人员已知的它的等价物，等等。

除非另有定义，这里所用的所有技术和科学术语与本发明所属技术领域一般技术人员的常规理解具有相同含义。尽管与这里所述方法和材料类似或等价的任何方法和材料都可用来实践或测试本发明，但现在描述的是优选的方法、装置和材料。为描述和公开可与本发明结合使用的出版物中报道的方法、试剂和工具，这里引用的所有出版物被全文纳入本文作为参考。这里提到的所有出版物够不能解释为承认本发明没有资格早于在先发明的公开。

除非另有说明，本发明的实践将采用本领域已知的常规的化学、生化、分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学和药理学方法。这种技术在文献中有详细地解释。见，例如，Gennaro，A.R.编，1990，《雷明顿药物科学》(Remington′s PharmaceuticalSciences)，第18版，Mack Publishing Co.；Colowick，S.等编，《酶学方法》(MethodsIn Enzymology)，Academic Press，Inc.；《实验免疫学手册》(Handbook of ExperimentalImmunology)，第I-IV卷(D.M.Weir和C.C.Blackwell编，1986，Blackwell ScientificPublications)；Maniatis，T.等编，1989，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，第二版，第I-III卷，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Ausubel，F.M.等编，1999，《精编分子生物学实验指南》(Short Protocols in MolecularBiology)，第四版，John Wiley & Sons；Ream等编，1998，《分子生物学技术：实验精要》(Molecular Biology Techniques：An Intensive Laboratory Course)，AcademicPress)；《PCR(生物技术丛书导论)》(PCR(Introduction to Biotechniques Series))，第二版，Newton和Graham编，1997，Springer Verlag。

本发明部分涉及以下发现，即结缔组织生长因子(CTGF)在肾病特定早期症状中发挥关键作用，所述早期症状包括，例如，肾小球过度滤过、肾小球渗透性升高、肾小球滤过率升高、微白蛋白尿等。已知CTGF与肾病特定晚期症状如肾小球硬化症和肾小管间质性纤维化有关，但未被鉴定为影响各种早期肾脏病理学特征的关键靶点。特别考虑了治疗或预防包括例如糖尿病肾病在内的肾病的方法以及治疗或预防相关病理学的方法。

本发明提供了通过抑制CTGF来减轻或缓解对象的与肾病如糖尿病肾病有关的多种不同病理过程相关的并发症的方法和组合物。一些实施方案中，所述对象是动物，更优选哺乳动物，最优选人。

本发明还提供了用于所述方法的组合物。这种组合物可包括小分子化合物；肽和蛋白质，包括抗体或其功能活性片段；以及多核苷酸，包括小干扰核糖核酸(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶和反义序列。(见，例如，Zeng(2003)Proc Natl Acad Sci USA100：9779-9784；和Kurreck(2003)Eur J Biochem 270：1628-1644。)

本发明部分基于在治疗肾病如糖尿病肾病的多个特定方面时发现了抑制CTGF的出乎意料的益处。本发明提供了能证明抑制CTGF减轻了以前与CTGF无关的肾病各病理方面的数据。在某些方面，本发明提供的证据表明，抑制CTGF为治疗或预防糖尿病肾病特定生理方面提供了治疗方法，所述特定生理方面与VEGF的生物学活性和病理活性有关，如肾小球过度滤过和过度灌注。

糖尿病肾病

糖尿病是全世界发病率和死亡率的主要原因，大约40％的糖尿病患者发展成糖尿病肾病，需要肾透析或肾移植。糖尿病是末期肾病的首要原因，因此，任何糖尿病患者都有发展成糖尿病肾病的风险。

糖尿病肾病的进程以可以预测的事件模式为特征。通常，糖尿病肾病发展的时程如下。肾小球过度滤过和肾肥大在糖尿病发病后的第一年发生，表现为肾小球滤过率升高(例如，人类的正常肾小球滤过率为约120毫升/分钟至约150毫升/分钟)。在糖尿病的前5年中能观察到肾小球肥大、肾小球基底膜增厚和肾小球系膜体积扩张等病理变化。肾小球滤过率逐渐恢复正常。糖尿病5-10年后，个体开始在尿液中排出小量白蛋白(微白蛋白尿)。微白蛋白尿(出现微白蛋白尿的糖尿病个体下文称为初期糖尿病肾病患者)是进展成明显性糖尿病肾病(部分以大白蛋白尿或明显性蛋白尿为特征)的重要指标。在疾病早期看到的基底膜增厚和肾小球体积扩张可累积在晚期糖尿病肾病中，导致毛细血管腔闭塞，最终导致肾小球硬化。一旦出现明显性糖尿病肾病，肾小球滤过率就会稳定下降，大约一半的患者在7-10年内发展到晚期肾病。

临床上已经良好描述了人类糖尿病肾病的发展和进展阶段。I期糖尿病肾病与肾脏(即肾小球(glormerular))滤过增加(即过度滤过，由于流过肾脏和肾小球的血液增加导致)、肾小球滤过率升高、肾小球肥大和肾肿大有关。II期糖尿病肾病是与继续过度滤过和肾肥大有关的临床沉默阶段。发生肾小球基底膜增厚和肾小球系膜扩张。III期糖尿病肾病(也称为初期糖尿病肾病)与微白蛋白尿和微蛋白尿(micro proteinuria)有关。微白蛋白尿被定义为在24小时收集的尿液中有30-300毫克/天尿白蛋白、20-200微克/分钟尿白蛋白，或者点收集(spot collection)中有30-300微克/毫克肌酸酐。肾脏逐渐丧失过滤废物的能力，同时肌酸酐和尿素氮的血液水平升高。肾小球基底膜增厚和肾小球系膜扩张随着病情加重继续发生。IV期糖尿病肾病(也称为明显性糖尿病肾病)与大白蛋白尿(即临床白蛋白尿)和血液中肌酸酐和血尿素氮(BUN)水平继续升高有关。大白蛋白尿被定义为在24小时收集的尿液中有大于300毫克/天尿白蛋白、大于200微克/分钟尿白蛋白，或者点收集中有大于300微克/毫克肌酸酐。一旦出现明显性糖尿病肾病，肾小球滤过率在数年内逐渐降低。V期糖尿病肾病随末期肾病和肾衰竭发生。

过度滤过和过度灌注

早期糖尿病肾病与肾功能受损有关，其部分特征为肾小球过度滤过和过度灌注。肾小球过度滤过是与高血糖和糖尿病有关的肾小球肾单位流失。随着功能性肾单位物质的流失，剩余的功能性肾单位肥大并承担增加的工作量，从而使肾功能的总体丧失最小化。其结果是发生肾小球过度滤过和过度灌注。

肾小球过度滤过和过度灌注反映为肾小球滤过率升高。肾小球滤过率是肾脏每分钟产生的滤液的体积测量。人类对象的肾小球滤过率测量是健康和疾病状态下最佳的肾功能全面指标。(Smith，《肾脏和尿路疾病》(Diseases of the kidney and urinarytract)，摘自《健康和疾病时的结构和功能》(Structure and Function in Health andDisease)，纽约；牛津大学出版社，1951：836-887。)肾小球滤过率可用各种方法确定，如测量过滤标记物如聚糖、碘酞酸盐或碘海醇的尿清除率。更常用的方法是，可通过确定肌酸酐(一种由肌肉产生并释放到血液中的蛋白质)清除率来估算肾小球滤过率。肌酸酐清除率(通常表示为毫升/分钟)可通过比较给定时间(例如12或24小时)内尿液中收集的肌酸酐水平和血液中的肌酸酐水平来确定。成年男性的典型肌酸酐清除率约为97-137毫升/分钟，成年女性约为88-128毫升/分钟。

临床实践中，最常见是从血清肌酸酐浓度估算肌酸酐清除率。肌酸酐清除率与尿肌酸酐排泄成正比，与血清肌酸酐浓度成反比。本领域已经建立并标准化了许多估算肌酸酐清除率的公式，因此可采用血清肌酸酐浓度、年龄、性别和体重等参数估算肾小球滤过率。(见，例如，Cockcroft和Gault(1976)Nephron 16：31-41；Levey等，(1999)Annals of Internal Medicine 130：462-470；Rule等，(2004)Ann Intern Med 141：929-937。)

本发明的方法和化合物可降低糖尿病动物模型的肌酸酐清除率。(见，例如，实施例1。)因此，本发明提供了用来降低肌酸酐清除率增加或升高或者肌酸酐清除率升高超过正常水平的对象的肌酸酐清除率的方法和化合物。本发明证实，抑制CTGF(例如，通过给予CTGF抗体)降低了与肾病尤其是糖尿病肾病有关的肌酸酐清除率。升高的肌酸酐清除率与肾小球过度滤过、过度灌注、肥大和肾小球滤过率升高有关，它是肾病例如糖尿病肾病发展早期肾功能改变或受损的指示。一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来降低肌酸酐清除率的方法和化合物。另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来降低肾小球肌酸酐渗透性以及恢复肾小球选择性和功能的方法和化合物。另一方面，提供了通过抑制CTGF来治疗或预防与高血糖或糖尿病有关的肾小球肥大、过度滤过和过度灌注的方法和化合物。再在另一方面，提供了通过抑制CTGF来治疗或预防与肾病尤其是糖尿病肾病有关的肾小球肥大、过度滤过和过度灌注的方法和化合物。一方面，所述肾病是早期糖尿病肾病。

另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来降低肾小球滤过率升高对象的肾小球滤过率的方法和化合物。一方面，本发明提供了通过给予肾小球滤过率受损或升高的对象或者有这种风险的对象CTGF抑制剂来降低肾小球滤过率的方法和化合物。一方面，所述肾小球滤过受损和肾小球滤过率升高与早期肾病有关。

某些实施方案中，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗与肌酸酐清除率升高有关或以此为特征的肾病的方法和化合物，从而治疗或预防这种疾病。其它实施方案中，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗与肾小球滤过增加或肾小球过度滤过有关或以此为特征的肾病的方法和化合物，从而治疗或预防这种疾病。

发现本发明的方法和化合物可提高晚期糖尿病肾病动物模型的肾小球滤过率。(见实施例3。)因此，本发明提供了通过抑制CTGF来提高或正常化肾小球滤过率低于正常值的肾小球滤过率降低或受损对象的肾小球滤过率的方法和化合物。一方面，本发明提供了通过给予肾小球滤过率受损或降低的对象或这有这种风险的对象CTGF抑制剂来提高或正常化肾小球滤过率的方法和化合物。另一方面，所述肾小球滤过率受损和肾小球滤过率降低与晚期肾病或明显性糖尿病肾病有关。

一方面，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗或预防与肾小球滤过率受损和肾小球滤过率降低有关的肾病的方法和化合物，从而预防或预防这种疾病。另一方面，所述肾小球滤过率受损和肾小球滤过率降低与晚期肾病有关。

考虑到本发明的方法可用于具有任何临床上接受的肾病或肾脏病测量指标标准的对象或者有发展成这种肾脏病风险的对象以改善肾功能、正常化肾小球滤过率、减轻肾小球过度滤过和过度灌注或者降低肌酸酐清除率。某些实施方案中，所述对象患有糖尿病肾病。在不同实施方案中，所述对象患有I期肾病、II期肾病、III期肾病、IV期肾病或V期肾病。

本发明的方法被用于预防、减轻或延迟有出现早期肾病相关肾脏并发症风险的对象这种并发症的发作，或用来制造药物，该药物用于具有与这里所述早期肾病有关的任何疾病或特征的对象，优选人类对象。一方面，所述对象患有糖尿病。糖尿病可用本领域熟练技术人员接受和采用的任何测量来定义。但人类对象的血糖水平超过200毫克/分升(用空腹血糖试验、口服葡萄糖耐量试验或随机血糖试验确定)时被诊断为糖尿病。因此，在某些方面，血糖水平高于约200毫克/分升的人类对象是可以用本发明提供的方法或药物用途治疗的合适对象。

可以用本发明的方法治疗的其它合适对象有肾小球滤过率受损。一实施方案中，人类对象的肾小球滤过率高于正常肾小球滤过率，例如，高于约120毫升/分钟。因此，肾小球滤过率高于约120毫升/分钟、高于约130毫升/分钟、高于约140毫升/分钟或高于约150毫升/分钟的人类对象是可以用本发明提供的方法或药物用途治疗的合适对象。在不同实施方案中，还考虑降低肾小球滤过率升高的对象(例如，肾小球过度滤过和过度灌注的对象)肾小球滤过率的方法可用来降低人类对象的肾小球滤过率到低于约150毫升/分钟、低于约140毫升/分钟、低于约130毫升/分钟的水平或者到约120毫升/分钟的水平。

本发明的方法和化合物可降低糖尿病动物模型与糖尿病或早期糖尿病肾病有关的肾脏重量增加。(见实施例1。)因此，本发明考虑了治疗或预防与肾脏重量增加有关的肾病的方法，该方法包括给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂，从而治疗或预防这种疾病。本发明还考虑了治疗或预防与肾小球体积增加有关的肾病的方法，该方法包括给予患者或者疑似患者CTGF抑制剂，从而治疗或预防这种疾病。

本发明的方法和化合物也用于预防、减轻或延迟有出现晚期肾病相关肾脏并发症风险的对象这种并发症的发作，或用来制造药物，该药物用于具有与这里所述晚期肾病有关的任何疾病或症状的对象，优选人类对象。一方面，所述人类对象的肾小球滤过率低于正常肾小球滤过率，例如，低于约120毫升/分钟。因此，肾小球滤过率低于约120毫升/分钟、低于约90毫升/分钟、低于约60毫升/分钟、低于约30毫升/分钟或低于约15毫升/分钟的人类对象被认为是用本发明提供的方法或药物用途治疗的合适对象。

在不同实施方案中，还考虑升高肾小球滤过率降低或受损的人类对象(例如，明显性糖尿病肾病患者)肾小球滤过率的方法可用来升高肾小球滤过率到高于约15毫升/分钟、高于约30毫升/分钟、高于约60毫升/分钟、高于约90毫升/分钟的水平以及到约120毫升/分钟的水平。

某些实施方案中，所述肾病与1型或2型糖尿病有关。其它实施方案中，所述肾病是糖尿病肾病。

微白蛋白尿

包括糖尿病肾病在内的肾病的早期临床证据是尿液中白蛋白水平异常降低，这种症状被称为微白蛋白尿。有微白蛋白尿的个体被认为患有初期肾病，或者，如果与糖尿病有关则患有初期糖尿病肾病。有微白蛋白尿的糖尿病个体发展成明显性糖尿病肾病的风险比正常白蛋白尿(normoalbuminuria)个体高42％(Bruno等，2003，Diabetes Care 26：2150-2155)。因此，糖尿病个体出现和发展微白蛋白尿与发展成明显性糖尿病肾病(即大白蛋白尿)以及最终的末期肾病和肾衰竭的风险大大提高有关。(见，例如，Mogensen和Christensen(1984)N Engl J Med 311：89-93；Mogensen等，(1983)Diabetes 32[增刊2]：64-78；Viberti等(1982)Lancet 1：1430-1432。)

微白蛋白尿可用各种方法确定，其中包括：(1)在随机尿液点收集中测量白蛋白：肌酸酐比例；(2)24小时尿液收集测量肌酸酐，同时测量肌酸酐清除率；和(3)定时(例如，4小时或一夜)收集。人类的正常尿白蛋白排泄率小于30微克/毫克肌酸酐(点收集)，小于30毫克/24小时(24小时收集)，或者小于20微克/分钟(定时收集)。微白蛋白尿患者的尿白蛋白排泄率为30-299微克/毫克肌酸酐(点收集)，30-299毫克/24小时(24小时收集)，或者20-199微克/分钟(定时收集)。大白蛋白尿(例如，临床白蛋白尿)患者的尿白蛋白排泄率大于或等于300微克/毫克肌酸酐(点收集)，大于或等于300毫克/24小时(24小时收集)，或者大于或等于200微克/分钟(定时收集)。

本发明第一时间证实，抑制CTGF(例如，通过给予CTGF抗体)可降低与肾病尤其是糖尿病肾病有关的尿白蛋白排泄率。(见，例如，实施例1。)尿白蛋白排泄率升高与肾小球的白蛋白渗透性和选择性的变化有关，并且是早期或发展中肾病肾功能改变或受损的指示。一方面，本发明提供了通过抑制CTGF降低尿白蛋白排泄率的方法。另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF降低肾小球白蛋白渗透性和恢复肾小球选择性的方法。再在另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF减轻微白蛋白尿的方法。因此，通过降低微白蛋白尿和尿白蛋白排泄率，本发明的方法提供了治疗早期肾病和初期肾病的方法。

如上所述，在早期肾病中，微白蛋白尿(即初期肾病)的发生和发展与糖尿病患者发生大白蛋白尿、明显性肾病、末期肾病和肾衰竭的风险增加有关。因此，本发明的方法和组合物也可用于预防、减轻或延迟有出现晚期肾病相关肾脏并发症风险的对象这些并发症的发作，所述并发症包括大白蛋白尿、明显性肾病、末期肾病和肾衰竭。

本发明证实，抑制CTGF(例如，通过给予CTGF抗体)可降低与肾病有关的蛋白尿、BUN水平和肌酸酐清除率。蛋白尿、BUN水平和肌酸酐清除率升高是肾功能改变或受损以及肾病发展的指示。一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来减轻蛋白尿的方法和化合物。另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF降低BUN水平的方法和化合物。另一方面，提供了通过抑制CTGF降低肌酸酐清除率的方法和化合物。

本发明证实，抑制CTGF(例如，通过给予CTGF抗体)能改善肾功能。当糖尿病肾病进行到晚期肾病时，例如通过菊糖清除率降低测得的肾小球滤过率下降是肾功能改变或受损的指示。本发明还证实，抑制CTGF(例如，通过给予CTGF抗体)改善了与晚期肾病有关的肾小球滤过率受损或降低。(见实施例3。)一方面，本发明提供了通过抑制CTGF提高肾小球滤过率的方法和化合物。另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF降低菊糖清除率的方法和化合物。再在另一方面，提供了通过抑制CTGF治疗或预防肾功能受损，尤其是与糖尿病肾病等肾病有关的肾功能受损的方法和化合物。另一方面，所述肾病与肾小球滤过率降低、大白蛋白尿或明显性肾病有关。

晚期糖尿病肾病与肾脏的各种病理和形态变化有关。这种变化包括与基质产生增加和肾小球系膜胞外基质累积有关的肾小球系膜扩张；肾小球系膜细胞细胞扩大；晚期糖尿病肾病中与肾小球硬化症有关的肾小球基底膜增厚；以及肾小管间质性纤维化的发展。(Gilbert等，(1999)Kidney Int 56：1627-1673。)肾小球硬化症和肾小管间质性纤维化是伴有肾机能不全从而导致肾小球滤过率降低并可能导致末期肾病和肾衰竭的晚期糖尿病肾病的结构性晚期肾病标志。

在本发明之前，CTGF与肾脏病理的晚期特征有关，尤其是产生过量胞外基质、肾小球系膜基质过分扩张和发生肾小球硬化症(glomeruloscleorsis)和肾小管间质性纤维化。(见，例如，国际公布号WO 00/13706。)认为VEGF等其它因子引起与早期肾病有关的过程、病理和各种特征，例如过度滤过和肾小球渗透性增加。相反，本发明提供的数据证明，在肾病的早期和晚期症状的发展和进展中发挥重要作用，因此是完全且有效治疗糖尿病肾病的理想靶点。

本发明提供了治疗和预防早期及晚期糖尿病肾病各种临床和病理方法的方法。具体地说，本发明的方法和组合物可用于治疗或预防肾小球过度滤过和肾小球系膜基质扩张。因此，本发明考虑了治疗肾病各个方面，包括诸如肾脏和肾小球肥大及过度滤过(测量为肌酸酐清除率升高、尿白蛋白排泄率升高、肾小球滤过率升高等)等早期糖尿病肾病特征以及晚期糖尿病肾病特征(肾小球滤过率降低、肾小球系膜基质扩张、基底膜增厚等)的方法。

本发明提供了用于治疗以结缔组织生长因子(CTGF)作为介导因子的疾病或症状的方法和组合物。文献中已经描述了一些CTGF相关疾病；然而在本发明之前都认为CTGF主要与纤维增殖性症状，尤其是那些与TGFβ有关的症状有关。尽管已经提到许多涉及纤维增殖过程的疾病以及用针对提供或防止CTGF活性的疗法来治疗这些疾病，本发明扩大了这种理解，因此CTGF定向的疗法用来治疗与糖尿病肾病和肾病有关的各种非纤维增殖性症状和并发症。

通过测量例如肾小球滤过率、尿白蛋白排泄率、白蛋白尿和/或蛋白尿可知，本发明的方法，例如，抑制CTGF，有效降低了肾脏的过度滤过并使肾功能正常或恢复。因此，本发明的方法和组合物可用来治疗有糖尿病肾病风险的患者，包括例如早期糖尿病肾病和初期糖尿病肾病。这种对象包括诊断有高血糖、高血压和/或糖尿病的个体。此外，本发明的方法可用来治疗被诊断有肾小球硬化症、肾小球肾炎或糖尿病肾病等肾病的患者。

本发明的方法，例如，抑制CTGF，减轻了肾小球系膜基质扩张和肾小球基底膜增厚。因此，本发明的方法可用来治疗有糖尿病肾病危险的患者以预防白蛋白尿、肾小球滤过率降低等。这种对象包括诊断有高血糖、高血压和/或糖尿病的个体。此外，本发明的方法可用来治疗有明显性糖尿病肾病或者其它肾病如肾小球硬化症、肾小球肾炎等的患者。

因此，一方面，本发明考虑了通过抑制CTGF来治疗或预防与早期肾病或晚期肾病有关的过程的方法。这些病理状况包括，例如，过度滤过、白蛋白尿、蛋白尿、肾小球肥大和肾小球系膜体积扩张。特别考虑了用本发明的方法来治疗或预防以前与VEGF和TGFβ有关的早期和晚期肾病的方面。如上所述，该方法可用来治疗有糖尿病肾病或相关病理风险的患者以及治疗患有肾小球硬化症(glomeruloscerosis)、肾小球肾炎、糖尿病肾病等肾病的患者。

本发明考虑将本发明的方法与其它疗法联用。一实施方案中，所述方法与另一种疗法联用，例如，以进一步增强对某些病理事件的治疗效果。例如，可在治疗时程内或在疾病进展和缓解后同时或相继给予这两种治疗。另一实施方案中，所述方法与另一种具有类似或不同作用模式的治疗方法联用，例如ACE抑制剂、ARB、抑制素、高级糖基化终产物(AGE)抑制剂等。目前治疗糖尿病肾病的治疗方案是本领域熟练技术人员已知的，例如有ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、抑制素、高级糖基化终产物抑制剂、肝细胞生长因子基因治疗、吡哆胺、依那普利(Enapril)、PPAR拮抗剂、磺酰脲类、基质金属蛋白酶抑制剂、COX-2抑制剂、吡非尼酮、舒洛地希、高剂量硫胺素和苯磷硫胺、钙通道阻断剂等。特别考虑到与本发明的方法联用的任何这些治疗剂的用途。

本发明首次提供了已经证实的对两种不同肾病相关病理方面(例如糖尿病肾病的早期特征和晚期特征)的疗效。尽管抗-CTGF疗法在这里举例是采用抗CTGF的人单克隆抗体，但本发明包括任何抑制CTGF编码基因表达、抑制CTGF产生或抑制CTGF活性的方法。例如，可用小分子化合物来抑制CTGF表达、产生或活性。用环状核苷酸抑制CTGF表达时，这种化合物可包括，例如，环状核苷酸类似物或磷酸二酯酶(PDE)抑制剂。(见，例如，Duncan等，(1999)FASEB J 13：1774-1786。)此外，包括小干扰核糖核酸(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶和反义序列在内的多核苷酸可用于本发明的方法以抑制CTGF表达和/或产生。(见，例如，Kondo等，(2000)BiochemBiophys Res Commun 278：119-124；和Shimo等，同上。)这种技术是相关领域熟练技术人员熟知的。

本发明提供了示例性证据证明，这里所述的在糖尿病动物模型中使用抗-CTGF单克隆抗体方法能改善肌酸酐清除率和肾小球肥大、降低肾脏重量、抑制TGFβ诱导的和CTGF介导的肾小球纤维化和肾小球系膜扩张。因此，本发明的方法改善了糖尿病肾病的两种病理，即即肾小球系膜扩张和肾小球滤过。

在某些方面，本发明提供了通过抑制CTGF来治疗TGFβ相关疾病的方法和组合物。另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来治疗VEGF相关疾病的方法和组合物。再在另一方面，本发明提供了通过抑制CTGF来治疗TGFβ和VEGF相关疾病的方法和组合物。本发明的方法和组合物还可用来治疗与其它生长因子如IGF-1、内皮缩血管肽等有关的疾病。

一方面，本发明提供了治疗或预防与肌酸酐清除率升高有关的肾病的方法，该方法包括给予患者或者有患病风险的对象抑制CTGF的试剂(例如，抑制或降低CTGF表达或CTGF活性)，从而治疗或预防这种肾病。另一方面，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗或预防与肾小球滤过增加和过度滤过有关的肾病的方法，从而治疗或预防这种疾病。另一方面，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗或预防与基底膜增厚有关的肾病的方法，从而治疗或预防这种疾病。另一方面，本发明提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗或预防与尿体积增加有关的肾病的方法，从而治疗或预防这种疾病。还提供了通过给予患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来治疗与尿白蛋白排泄率升高有关的肾病的方法，从而治疗或预防这种肾病。

一方面，本发明提供了降低需要这种治疗的对象的肌酸酐清除率的方法，所述方法包括给予患者CTGF抑制剂。还提供了在需要这种治疗的对象中降低尿白蛋白排泄率、降低肾小球滤过和过度滤过、减轻肾小球体积扩张或减轻肾脏重量增加的方法，所述方法包括给予患者CTGF抑制剂。一实施方案中，本发明提供了治疗或预防与肾病有关的蛋白尿的方法，该方法包括给予肾病患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂。再一实施方案中，所述蛋白尿是白蛋白尿。在各实施方案中，所述白蛋白尿是微白蛋白尿或大白蛋白尿。另一实施方案中，本发明提供了治疗或预防肾脏基底膜增厚的方法，该方法包括给予肾脏基底膜增厚的患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂。再在另一实施方案中，本发明提供了通过给予尿体积增加的患者或者有患病风险的对象CTGF抑制剂来减轻或预防尿体积增加的方法。

本发明的方法包括给予需要治疗的对象治疗有效量的抑制CTGF的试剂(例如，降低CTGF表达或活性)。某些实施方案中，所述试剂是CTGF抗体。在优选的实施方案中，所述抗体是CTGF的单克隆抗体。在另一优选实施方案中，所述抗体是人或人源化CTGF抗体。另一实施方案中，所述试剂是小分子。另一实施方案中，所述试剂是反义寡核苷酸。

已经鉴定了抑制CTGF的各种试剂。美国专利No.5,408,040；国际公布号WO99/07407；国际公布号WO 99/33878；和国际公布号WO 00/35936中描述了结合CTGF的抗体。用于本发明方法的一种示例性抗体描述于国际公布号WO 2004/108764，该文献全文纳入本文作为参考。可采用本领域熟练技术人员已知的任何方法施用这种抗体或其片段。例如，抗体通常是静脉内、腹膜内或皮下注射的。

抑制CTGF表达和/或活性的小分子也已经描述过；例如，国际公布号WO96/38172将cAMP调节物如霍乱毒素和8Br-cAMP作为CTGF表达抑制剂。因此，诸如前列腺素和/或前列环素类似物如伊洛前列素(见，例如，国际公布号WO00/02450；Ricupero等，(1999)Am J Physiol 277：L1165-1171；也可参见Ertl等，(1992)Am Rev Respir Dis 145：A19)以及潜在的磷酸二酯酶IV抑制剂(见，例如，Kohyama等，(2002)Am J Respir Cell Mol Biol 26：694-701)等化合物可用来调节CTGF表达。同时，丝氨酸/苏氨酸促分裂原活化的蛋白激酶的抑制剂尤其是p38、依赖于细胞周期蛋白的激酶如CDK2以及糖元合酶激酶(GSK)-3也可降低CTGF的表达。(见，例如，Matsuoka等，(2002)Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 283：L103-L112；Yosimichi等，(2001)Eur J Biochem 268：6058-6065；国际公布号WO01/38532；和国际公布号WO03/092584。)这些试剂可用来降低CTGF表达从而改善或预防关节病中CTGF诱导的病理过程。这种化合物可按照本领域已知方法来配制和施用。

反义技术，包括针对CTGF表达的小干扰核糖核酸(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酶和反义序列也可用来治疗关节病。(见，例如，Zeng(2003)Proc Natl Acad Sci USA100：9779-9784；和Kurreck(2003)Eur J Biochem 270：1628-1644。)靶向CTGF表达的反义构建物已经描述过并被用来降低各种细胞类型中CTGF的表达。(见，例如，国际公布号WO 96/38172；国际公布号WO 00/27868；国际公布号WO 00/35936；国际公布号WO 03/053340；Kothapalli等，(1997)Cell Growth Differ 8(1)：61-68；Shimo等，(1998)J Biochem(Tokyo)124(1)：130-140；和Uchio等，(2004)Wound Repair Regen12：60-66。)这种反义构建物可用来降低CTGF的表达从而缓解或预防关节疾病中CTGF诱导的病理过程。可用合适的载体和表达调节物来设计这种构建物以细胞-或组织-特异性表达和组成型或诱导型表达。可用本领域已经建立的方法来制造和施用这种遗传构建物。

药物制剂和给药途径

如该领域所熟知，本发明的组合物可直接传递或从含赋形剂的药物组合物形成传递。本发明的治疗方法可包括给予患有糖尿病肾病，尤其是与例如肾小球过度滤过和肾小球过度灌注(hyperperfusion)、微白蛋白尿、初期糖尿病肾病、大白蛋白尿、明显性肾病等有关疾病的对象或者有患病风险的对象治疗有效量的本发明化合物。在一优选实施方案中，所述对象是哺乳动物，在最优选的实施方案中，所述对象是人。

化合物或药物的有效量，如剂量，不难用常规试验确定，可作为有效和方便的给药途径和适当的制剂。该领域已有各种制剂和药物输递系统(见，例如，Gennaro编，(2000)《雷明顿药物科学》，同上；和Hardman，Limbird以及Gilman编，(2001)，《治疗的药理学基础》(The Pharmacological Basis ofTherapeutics)，同上)。

合适的给药途径可包括，例如，口服、直肠、局部、鼻、肺、眼、肠道和肠胃道外给药。主要的肠胃道外给药途径包括静脉内、肌肉内和皮下给药。第二种给药途径包括腹膜内、动脉内、关节内、心内、脑池内、皮内、病灶内、眼内、胸膜内、鞘内、子宫内和心室内给药。应优选要治疗的指征与药物的物理、化学和生物学性能一起，规定制剂类型和所用的给药途径，以及是否局部或全身输递。

本发明化合物的药物剂型可以即释、控释、缓释或靶向药物输递系统提供。常用的剂型包括例如，溶液、悬浮液、(微)乳剂、软膏、凝胶和贴片、脂质体、片剂、糖衣丸、软或硬胶囊、栓剂、卵状小体、植入物、无定形或结晶形粉末、气溶胶和冻干制剂。取决于使用的给药途径，可能需要特殊装置来施加或给予药物，例如，注射器和针头、吸入器、泵、注射笔、涂药器或专用瓶。药物剂型常包含药物、赋形剂和容器/密封系统。可在本发明的化合物中加入一种或多种称为无活性成分的赋形剂，以改善或有利于制造、稳定性、药物的给药和安全性，可提供一种实现药物所需释放方式的工具。因此，加入该药物中的赋形剂的类型取决于多种因素，例如药物的理化性能、给药途径和制造方法。药学上可接受的赋形剂该领域已具有，包括各种药典中所列出的那些(见，例如，美国药典(USP)、日本药典(JP)、欧洲药典(EP)和英国药典(BP)；美国食品药品管理局网页(www.fda.gov)，《惰性成分指南》(InactiveIngredient Guide)1996，和《药物添加剂手册》(Handbook ofPharmaceutical Additives)，Ash编；Synapse Information Resources Inc.，2002。)

可用该领域熟知的任何方法制备本发明化合物的药物剂型，如常规的混合法、过筛、溶解、融化、制粒、糖衣丸制备、制片、悬浮、挤压、喷雾干燥、研磨、乳化、(纳米/微米)包裹、截留或冻干加工。如上所述本发明的组合物可包含一种或多种生理上可接受的无活性成分，以有利于将活性分子加工成制剂用于药物用途。

适当的制剂取决于所需的给药途径。对于静脉注射，例如，该组合物可配制成水溶液，如果需要，可采用生理相容性缓冲剂，包括例如，磷酸、组氨酸或柠檬酸来调节制剂的pH，和采用张力调节剂如氯化钠或葡萄糖。对于经粘膜或鼻内给药，优选半固体、液体制剂或贴片，可含渗透增强剂，这类渗透增强剂是该领域通常知道的。对于口服给药，可将该化合物配制成液体或固体剂型，和即释或控释/缓释制剂。适合对象口服的剂型包括片剂、丸药、糖丸、硬和软壳胶囊、液体、凝胶、糖浆、糖浆、悬浮液和乳剂。该化合物也可配制在直肠组合物中，如栓剂或保留灌肠剂中，如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油。

可采用赋形剂获得固体口服剂型，所述赋形剂包括填充剂、崩解剂、粘合剂(干或湿的)、溶解阻滞剂、润滑剂、助流剂、防粘剂、阳离子交换树脂、润湿剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂和芳香剂。这些赋形剂可以是合成或天然来源的。这类赋形剂的例子包括纤维素衍生物、柠檬酸、磷酸二钙、明胶、碳酸镁、月桂酸硫酸镁/钠、甘露醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸盐、二氧化硅、苯甲酸钠、山梨醇、淀粉、硬脂酸及其盐、糖(即葡萄糖、蔗糖、乳糖等)、滑石粉、西黄蓍胶浆、植物油(氢化的)和蜡。乙醇和水可作为制粒助剂。在某些情况下，需要用例如掩蔽气味的膜、抗胃酸膜、或释放延缓膜来包裹片剂。常常联用天然和合成的聚合物与着色剂、糖、有机溶剂和水来包裹片剂，产生糖丸。当胶囊优选与片剂时，药粉、悬浮液或溶液可以相容的硬或软壳胶囊来输递。

在一实施方案中，可局部，例如通过皮肤贴片、半固体或液体制剂，如凝胶、(微)乳剂、软膏、溶液、(纳米/微米)悬浮液、或泡沫给予本发明的化合物。可采用例如，渗透促进剂；适当选择和组合亲脂性、亲水性和两性赋形剂，包括水、有机溶剂、蜡、油、合成和天然的聚合物、表面活性剂、乳化剂，通过调节pH、采用络合剂，来调节药物对皮肤和其下组织的渗透。可采用其它技术，如离子电渗疗法，来调节本发明化合物对皮肤的渗透。优选经皮或局部给药，例如在需要最低限度全身接触的情况下局部输递药物。

对于吸入给药或鼻内给药，本发明的化合物可以溶液、悬液、乳剂或加压包装的半固体气溶胶形式或通常采用推进剂的喷雾器，如甲烷和乙烷、二氧化碳或任何其它合适的气体产生的卤化碳方便地传送。对于局部气溶胶，可采用丁烷、异丁烷和戊烷类碳氢化合物。就加压气溶胶而言，可通过提供一输递确定量气溶胶的阀门来确定适当的剂量单位。可配制用于吸入器或吹入器中的胶囊和例如明胶盒。这些胶囊或盒通常含有化合物的混合粉末和适合的粉末基质，如乳糖和淀粉。

通常以单位剂型，如在安瓿、注射器、注射笔或多剂量容器(常含有防腐剂)中，提供配制的用于胃肠道外注射的无菌组合物。此组合物可采取悬液、溶液或油性乳剂或水性载体形式，可含有配制试剂，如缓冲剂、渗透剂、粘性增强剂、表面活性剂、悬浮和分散剂、抗氧化剂、生物相容性聚合物、螯合剂和防腐剂。取决于注射部位，载体可含水、合成的油或植物油、和/或有机共溶剂。某些情况下，如冻干产品或浓缩产品时，可在给药之前重建或稀释胃肠道外给药制剂。可提供本发明化合物控释或缓释的长效制剂，可包含纳米/微米粒或纳米/微米级或非微化晶体的可注射悬浮液。聚合物，除该领域熟知的那些外，如聚(乳酸)聚(羟乙酸)，或其共聚物或用作控释/缓释基质。可以植入物和需要切割的泵形式提供其它长效输递系统。

本领域熟知适合静脉注射本发明分子的载体，包括能形成离子化化合物的含碱如氢氧化钠的、作为渗透剂的蔗糖或氯化钠的水基溶液，例如，含磷酸或组氨酸的缓冲液。可加入共溶剂，如聚乙二醇。这些水基系统能有效溶解本发明的化合物，在全身给药时产生低毒性。溶液系统的组分比例可相当不同而不破坏溶解性和毒性特征。另外，组分的同一性可以改变。例如，可采用低毒的表面活性剂，如聚山梨酯或波洛沙姆，可加入聚乙二醇或其它共溶剂、生物相容性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，其它糖和多元醇来代替葡萄糖。

对于目前治疗方法所用的组合物，起初可用本领域熟知的各种技术估计治疗有效剂量。动物研究所用的最初剂量可根据细胞培养试验确定的有效浓度而定。适合人用的剂量范围可用动物研究和细胞培养所获得的数据确定。

本发明的化合物、药剂或药物的治疗有效量或剂量，指该化合物或药物可导致对象的症状缓解或生存延长的量或剂量。这类分子的毒性和治疗效果可通过在细胞培养或试验动物中进行标准的药学程序来确定，例如，通过测定LD50(导致50％群体死亡的剂量)和ED50(50％群体治疗有效的剂量)来确定。毒性和疗效的剂量比值是治疗指数，可用LD50/ED50比值表示。优选显示高治疗指数的制剂。

有效量或治疗有效量是研究者、兽医、医生或其它临床人员所寻找的组织、系统、动物或人诱发生物学或医学反应的所述化合物或药物组合物的量，例如，能降低肌酸酐清除率、肾小球过度滤过和过度灌注、尿白蛋白排泄或微白蛋白尿，或治疗早期或晚期糖尿病肾病，等等。

优选的剂量应在包括ED50并有小或没有毒性的循环浓度范围内。剂量可在此范围内根据所用的剂型和/或给药途径而变化。应按照本领域已知方法根据对象状况的特征选择精确的制剂、给药途径、剂量和剂量间隔。

可个别调整剂量和间隔以提供能充分获得所需效果，如调节葡萄糖代谢、减少血糖水平等，即最低有效浓度(MEC)。各化合物的MEC不同但可从例如体外数据和动物试验估计。需要获得MEC的剂量取决于个体的特征和给药途径。就局部给药或选择性摄入而言，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。

可根据多种因素，包括待治疗对象的性别、年龄和体重、疾病的严重程度、给药方式和医生的判断确定给予的制剂或组合物的量。

如果需要，本发明的组合物可以装在含一个或多个单位剂型(含有活性成分)的填装或分散装置中。例如，这种填装或装置可包括金属或塑料箔，如起泡填装物或玻璃和橡皮塞如小瓶中。该填装或分散装置可装有给药说明书。也可制备用相容性药学载体配制的含本发明化合物的组合物，置于适当的容器中，贴上治疗某种标明疾病的标签。

通过阅读本文内容，本领域普通技术人员不难实施本发明的这些和其它实施方案。

实施例

参见以下实施例纯粹是说明本发明的实施例将进一步了解本发明。提供这些实施例只是为了说明本发明的权利要求。本发明不限于目的是说明本发明一个方面的示范性实施例所述的范围。功能上相等的任何方法都在本发明的范围内。本领域技术人员懂得按照以上描述和附图可对本发明作出本文所述以外的各种修改。这类修改是在附加的权利要求书的范围内。

实施例1：治疗糖尿病肾病的早期特征

用本发明的方法来证实对早期糖尿病肾病某些方面动物模型的广谱功效，如下进行。从Harlan，Indianapolis IN获得缺失瘦蛋白受体(Ob-R；由db基因编码)功能突变的8周龄小鼠。这些db/db小鼠作为2型糖尿病肥胖动物模型，尤其是以糖尿病肾病的早期方面为特征的2型糖尿病肾病肥胖模型，所述早期方面包括，例如，肾脏过度滤过和蛋白尿并伴有轻微间质纤维化。通过轻微间质纤维化可以证明这是早期糖尿病肾病而不是晚期糖尿病肾病动物模型。纯合db/db(糖尿病)在8周龄时有高血糖。纯合db/db(糖尿病)和杂合db/+(非糖尿病)动物用抗-CTGF单克隆抗体(αCTGF)(按国际公布号WO 2004/108764的描述制备或用ATCC鉴定的于2004年5月20日保藏的登录号为PTA-6006的细胞系制备)或对照人IgG(cIgG)处理(腹膜内注射)。对所有动物注射300微克抗体，然后注射100微克，每周3次，共60天。在处理期开始时和期间周期性地收集血样并测量体重。同时记录食物消耗。

下表1显示了第0天和第60天cIgG处理的db/+小鼠、αCTGF处理的db/+小鼠、cIgG处理的糖尿病db/db小鼠和αCTGF处理的db/db小鼠的平均体重(BW)、血糖水平(BG)和食物消耗(FC)。所有数据表示为平均值±SEM。每组小鼠的数目(n)为9-15。出现多囊肾的非糖尿病(db/+)动物被排除在分析之外。如表1所示，糖尿病(db/db)动物和非糖尿病(db/+)动物的体重、血糖水平和食物消耗有显著差别。用抗-CTGF抗体或cIgG处理对糖尿病(db/db)或非糖尿病(db/+)动物的总体重增加、血糖水平或食物消耗没有显著影响。

表1

数据表示为平均值±SEM。^*相比db/+小鼠P＜0.01。

抑制糖尿病肾病的早期特征的进展

在上述抗-CTGF抗体处理期之后获得肾功能和肾病的各种测量，包括肾脏重量、肌酸酐清除率、尿白蛋白排泄率和尿体积。下表2显示了cIgG处理的db/+小鼠、αCTGF处理的db/+小鼠、cIgG处理的db/db小鼠和αCTGF处理的db/db小鼠第60天的平均肾脏重量(KW)、肌酸酐清除率(CrCl)和24小时尿白蛋白排泄率(UAE)。所有数据表示为平均值±SEM。每组小鼠的数目(n)为9-15。如上所述，出现多囊肾的非糖尿病(db/+)动物被排除在分析之外。

表2

组，处理(动物数)	KW(毫克)	CrCl(毫升/小时)	UAE(微克/24小时)
				db/+，cIgG(n＝11)	133.8±5.1	2.17±0.29	0.30±0.02
db/+，αCTGF(n＝9)	141.0±4.3	2.37±0.19	0.23±0.04
				db/db，cIgG(n＝15)	207.8±3.9**	5.39±0.36**	2.52±0.20**

组，处理(动物数)	KW(毫克)	CrCl(毫升/小时)	UAE(微克/24小时)
				db/db，αCTGF(n＝14)	177.4±4.5*	2.76±0.31△	0.98±0.09□

数据表示为平均值±SEM。^**相比db/+小鼠P＜0.01。^*相比db/+小鼠P＜0.01

和相比cIgG处理的db/db小鼠P＜0.05。^△相比cIgG处理的db/db小鼠P＜0.01。

^□相比db/+小鼠和cIgG处理的db/db小鼠p＜0.01。

如表2所示，如肾脏扩张(即肾脏重量增加)(图1)、肌酸酐清除率升高(图2)和尿白蛋白排泄率升高(图3，^*相比抗-CTGF处理的db/+小鼠P＜0.01)所指出的，db/db小鼠的肾脏显示功能亢进。用抗-CTGF抗体处理的糖尿病动物相比用cIgG处理的糖尿病动物显示出肾脏重量增加较少。

cIgG处理的db/db动物的肌酸酐清除率约为在db/+动物中观察到的值的两倍，说明糖尿病动物有肾功能受损、肥大和过度滤过。相比在非糖尿病db/+动物中观察到的尿白蛋白排泄率，糖尿病db/db动物的尿白蛋白排泄率也提高了。用抗-CTGF抗体处理的db/db动物的肌酸酐清除率和尿白蛋白排泄率水平显著低于在cTgG处理的db/db动物中观察到的值。具体地说，抗-CTGF处理的糖尿病小鼠的肌酸酐清除率水平比在cIgG处理的糖尿病小鼠中观察到的值低82％。抗-CTGF处理的糖尿病小鼠的尿白蛋白排泄率水平比在cIgG处理的糖尿病小鼠中观察到的值低69％。这些结果证实，抗-CTGF抗体处理的小鼠的肾功能有惊人改善。用本发明的方法处理非糖尿病动物显示对肾脏重量或功能无不良作用。这些数据显示，给予糖尿病动物抗-CTGF抗体能降低肾脏重量增加、肌酸酐清除率和尿白蛋白排泄率。

此外，相比非糖尿病(db/+)小鼠，糖尿病(db/db)小鼠显示出增加的尿体积。如上所述给予抗-CTGF抗体降低了糖尿病(db/db)小鼠的尿体积。(见图5，^*相比抗-CTGF处理的db/+小鼠P＜0.01。)该数据指出，给予糖尿病动物抗-CTGF抗体降低了尿体积。这些结果还指出，抑制CTGF能降低与糖尿病肾病有关的尿体积增加，因此提供了改善肾功能的方法。

分析肾小球体积(例如，肾小球体积扩张的减少)和基底膜增厚的变化还证实了抑制CTGF对于治疗和预防糖尿病肾病发展和进展的作用。如图6所示(^*没有不同于抗-CTGF处理的db/+)，用抗-CTGF抗体处理糖尿病(db/db)动物降低了基底膜增厚。

总之，这些数据显示，用抗-CTGF抗体处理糖尿病(db/db)动物减轻了肾肥大(由降低了抗-CTGF处理的糖尿病动物的肾脏重量可以证实)并恢复了肾功能(由降低了抗-CTGF处理的糖尿病动物的肌酸酐清除率和尿排泄率可以证实)。这些结果还指出，抑制CTGF能够降低肾小球渗透性和过度滤过，同时减轻肾小球系膜扩张和基底膜增厚。因此，抑制CTGF能够治疗糖尿病肾病的早期特征。

实施例2：CTGF参与进行性玻璃体视网膜病的早期特征

之前已经建立了CTGF和包括视网膜病症在内的眼病的关系。(见，例如，国际公布号WO 03/049773。)这里检测了CTGF和VEGF的眼浓度与新血管形成和纤维化程度之间的关系以确定，如果有的话，玻璃体CTGF和VEGF表达之间的关系。提示CTGF和早期和晚期眼病症状有关。从准备进行睫状环玻璃体切割术的增生性玻璃体视网膜病变(PVR)、增生型糖尿病性视网膜病变(PDR)、黄斑皱褶或黄斑裂孔患者获得未稀释的玻璃体样品(0.5-1毫升)。玻璃体液样品收集在无菌管中，立即用干冰冷冻，并于-80℃储存到测定CTGF和VEGF。

与所有视网膜病症有关的新血管形成如下分级：0级，无新血管形成；1级，静态新血管形成，只存在未灌注的胶质管(gliotic vessel)；和2级，动态新血管形成，有灌注的视网膜前毛细管。(见Aiello等，(1994)N Engl J Med 331：1480-1487。)

通过ELISA测量玻璃体样品内CTGF和VEGF的水平。简言之，将玻璃体样品在14,000rpm离心15分钟，并于4℃收集上清。用人CTGF的两种单克隆抗体通过夹心ELISA测量CTGF水平，每种单抗特异性识别CTGF N-末端部分的不同区域，如上所述。将捕获的抗-CTGF单克隆抗体(10微克/毫升)加入涂布缓冲液(50mM硼酸钠，pH 9.6)，在4℃用其涂布微量滴定板过夜。平板用100微升以磷酸缓冲盐水缓冲的1％BSA在室温封闭2小时，然后用洗涤缓冲液(含有0.05％Tween 20的磷酸缓冲盐水)洗涤。玻璃体样品用分析缓冲液(50mM TRIS，pH 7.7，0.1％BSA，4mM MgCl₂，400mM ZnCl₂，0.05％ NaN₃，50毫克/升肝素钠和0.1％ Triton X-100)稀释5倍。在每个孔中加入50微升稀释的玻璃体样品以及50微升生物素化的单克隆抗人CTGF检测抗体(稀释于分析缓冲液)。平板在37℃培育2小时，用洗涤缓冲液洗涤，并与100微升/孔链霉抗生物素蛋白偶联的碱性磷酸酶(1微克/毫升，稀释于分析缓冲液)(Jackson Immunoresearch Laboratories)在室温培育1小时。这次培育之后用洗涤缓冲液洗涤平板并在每个孔中加入100微升稀释于二乙醇胺缓冲液(1M二乙醇胺，0.5mM MgCl₂，0.02％NaN₃，pH 9.8)的底物溶液(1毫克/毫升，对硝基苯磷酸，SigmaChemical Co.)。在Bio-Rad微板阅读器上读取405纳米的吸光度。用纯化的重组人CTGF作为标准。用市售的夹心ELISA按照制造商(R & D Systems)的说明测定VEGF-165的玻璃体水平。

观察到CTGF水平和新血管形成程度明显正相关(p＝0.0153)。如下表3所示，新血管形成程度最高(2级)的患者的CTGF水平明显高于新血管形成程度较低(0级或1级)的患者。图4显示玻璃体内CTGF和VEGF水平正相关(r＝0.544，p＝0.001)。显然，这些结果首次证实，从疾病相同阶段的同一样品测得的CTGF和VEGF水平之间直接相关。

表3

新血管形成级别	CTGF水平	95％CI
			0级	8.7纳克/毫升	6.9-11.0
1级	14.0纳克/毫升	11.2-17.5
			2级	20.8纳克/ml	16.2-26.9

上述实验结果显示，CTGF存在于人玻璃体内且其浓度与新血管形成的存在和程度显著且强烈地相关，同时CTGF的玻璃体水平与VEGF的玻璃体水平强烈相关。虽然已知CTGF与眼纤维化和视网膜病其它晚期方面的发展和进展有关，将该结果和文中实施例1和实施例3的结果结合可以看出，CTGF和VEGF是包括糖尿病肾病和各种玻璃体视网膜病在内的进行性疾病早期发展的关键因子。因此，本发明提供了治疗PVR、PDR等视网膜病早期(例如，新血管形成)和晚期(例如，纤维化)阶段的方法。

实施例3：治疗糖尿病肾病的晚期特征

在晚期糖尿病肾病动物模型中检测了抗-CTGF疗法的效果。如上所述，采用对单侧肾缺血再灌注高度易感的糖尿病大鼠作为动物模型，单侧肾缺血再灌注会迅速导致进行性肾病和末期肾衰竭，同时伴有纤维化发展、肾萎缩和肾小球滤过率严重受损。(见，例如，Melin等，(1997)Kidney Int 52：985-991。)在这种糖尿病动物模型中，缺血严重损害了糖尿病大鼠的肾功能。在这种动物模型中，对肾功能以及高血糖和缺血病理学的肾脏效应类似于在人晚期糖尿病肾病和末期肾病(ESRD)中观察到的效应。

通过静脉注射一次链脲菌素(STZ)(50毫克/千克)在雄性Sprague Dawley大鼠内诱发糖尿病。夹住左肾动脉30分钟在一个肾中造成单侧肾缺血再灌注(IR)，从而防止血液流到左肾。肾缺血再灌注前1天(即糖尿病发展2周后)开始用抗-CTGF单克隆抗体(腹膜注射5毫克/千克)治疗，治疗每周3次，持续10周。给予未接受抗-CTGF抗体的对照动物PBS(腹膜注射5毫升/千克)。从尾静脉获得血样。在第0、4、8和10周由Quality Clinical Labs，Inc.(Mountain View，CA)分析血液临床化学。在第5和9周确定24小时总尿蛋白。将各大鼠放在代谢笼中并收集24小时尿样。测量尿液体积并用BCA蛋白质测定试剂盒(Pierce Chemical Co.)分析尿蛋白。

肾小球滤过率(GFR)是肾功能的最广泛测量。菊糖清除率是肾小球滤过率的测量。在这些实施方案中，通过测量尿体积和菊糖清除率确定了个体肾脏的肾小球滤过率(例如，肾功能)。通过输尿管收集尿液并从股动脉收集血液。通过重量分析估算尿体积。用蒽酮法确定菊糖浓度。用以下公式确定GFR的指示-菊糖清除率：(U_浓度×U_体积)/S_浓度。在试验结束时切除肾脏进行生化和组织病理学评价。

数据表示为平均值+/-SEM。采用单向方差分析(ANOVA)和Student-Newman-Keuls法(SIGMASTAT)比较各时间点时实验组的数据。当只比较两组时采用t-检验(两样品假设等同方差分析工具，Microsoft Excel)。P＜0.05的值被认为是显著的。

从血糖水平上升可知，给予单次剂量STZ的动物患上糖尿病。血糖水平从对照(非STZ处理的)动物的低于200毫克/分升上升到STZ处理的动物大于600毫克/分升的水平，说明这些动物患有糖尿病。非糖尿病(即非STZ处理的)动物的肾IR未使血糖水平上升超过对照动物的水平(数据未显示)。在单侧肾IR后的10周内，STZ处理的动物的血糖水平仍旧升高。(数据未显示。)

晚期蛋白尿

早期糖尿病肾病的微白蛋白尿特征进展成大白蛋白尿和晚期蛋白尿。在糖尿病动物中观察到24小时总尿蛋白显著升高(即晚期蛋白尿)，说明肾小球过度滤过增加和肾衰竭发展。如图7所示，非糖尿病动物(伪处理(sham)+PBS；IR+PBS)的总尿蛋白约为100毫克/24小时。(在图7中，在相应的周，*表示高于非糖尿病(p＜0.001)，#表示低于DM+IR+PBS(p＜0.05)。)然而，有肾IR的糖尿病动物的总尿蛋白水平超过350毫克/24小时。与未处理的糖尿病动物相比，给予有肾IR的糖尿病动物抗-CTGF抗体导致第5和9周的24小时总尿蛋白分别显著降至约225毫克/24小时和250毫克/24小时。(见图7。)该数据显示，给予CTGF抗体降低了糖尿病动物的蛋白尿。这些结果说明，抑制CTGF是降低肾脏过度滤过的一种治疗方法。这些结果首次证实，抗-CTGF疗法可用来预防晚期蛋白尿的发展和进展。

血尿素氮(BUN)

BUN水平升高是与晚期糖尿病肾病有关的肾功能受损的指示。在这些糖尿病动物中观察到BUN水平显著升高。在研究的第0、4和10周对照非糖尿病动物(伪处理+PBS；IR+PBS)的BUN水平低于20毫克/分升。在有肾IR的糖尿病动物中，BUN水平从第0周的约22毫克/分升升高到40毫克/分升以上。(见图8，在第4周，^*表示高于伪处理+PBS和IR+PBS(p＜0.01)，#表示低于DM+IR+PBS(p＜0.01)。)与在未给予抗-CTGF抗体的糖尿病动物中观察到的值相比，给予有肾IR的糖尿病动物抗-CTGF单克隆抗体导致第4周和第10周的BUN水平分别下降到约30毫克/分升和35毫克/分升。(见图8。)这些结果首次显示，抗-CTGF疗法能用于降低糖尿病(对象)的BUN水平，提示抑制CTGF提供了一种改善肾功能的治疗方法。

肾小球滤过率

确定上述各种不同试验条件下个体肾脏的肾小球滤过率。在对照动物(即非糖尿病，非-IR)中，GFR大于0.3毫升/分钟/肾脏/100克。有肾IR的非糖尿病动物的GFR约为0.28毫升/分钟/肾脏/100克。无肾IR的糖尿病动物的GFR约为0.17毫升/分钟/肾脏/100克。(数据未显示。)

糖尿病动物缺血肾脏的肾小球滤过率在第10周急剧降至约0.01毫升/分钟/肾脏/100克。(见图9。)给予抗-CTGF抗体使受肾IR影响的糖尿病动物个体肾脏的肾小球滤过率显著提高至高于0.035毫升/分钟/肾脏/100克的水平。该数据显示，给予CTGF抗体使患有晚期肾病是糖尿病动物的肾小球滤过率升高。这些结果首次证实，抗-CTGF疗法可有效提高晚期糖尿病肾病的肾小球滤过率，因此提供了一种改善晚期肾病(对象)的肾功能的治疗方法。

除了本文所示和描述的以外，本领域技术人员懂得可根据上述描写对本发明作各种修改。这些修改都在本发明权利要求的范围内。

本文引用的所有参考文献的内容纳入本文作参考。

Claims (13)

1.结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂在制备用于治疗患有糖尿病的对象中的蛋白尿用的药剂中的用途，其中，所述抑制剂是抗CTGF抗体、抗CTGF反义核酸或对CTGF特异的siRNA、miRNA或核酶。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述药物用于降低该对象的蛋白尿。

3.如权利要求1所述的用途，其中所述对象患有糖尿病肾病。

4.如权利要求1所述的用途，其中，所述抗CTGF抗体从2004年5月20日保藏的ATCC保藏号为PTA-6006的细胞系获得。

5.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述对象是人。

6.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物降低所述对象肌酸酐清除率。

7.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物减少所述对象中的肾小球过度滤过、肾小球过度灌注、肾小球肥大和/或肾小球滤过率。

8.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物减少该对象的尿白蛋白排泄或白蛋白尿。

9.如权利要求8所述的用途，其中所述白蛋白尿是微白蛋白尿和大白蛋白尿。

10.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物降低该对象中的血尿素氮(BUN)水平。

11.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物降低该对象中的菊糖清除率。

12.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物改善该对象的肾功能或减轻或预防该对象的肾脏重量增加。

13.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抑制剂或药物与抑制量的血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素受体阻断剂联合给予。

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