ES2310006T3 - Fraccion activa por via oral de momordica charantia, peptidos activos de la misma y su uso en el tratamiento de diabetes. - Google Patents
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Abstract
Péptido anti-hiperglucémico aislado seleccionado del grupo que consiste en la SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2 y SEQ ID NO. 3.
Description
Fracción activa por vía oral de Momordica
charantia, péptidos activos de la misma y su uso en el
tratamiento de diabetes.
El campo de esta invención es la diabetes.
La diabetes mellitus no insulinodependiente
(NIDDM o tipo II) es la cuarta causa principal de muerte en los
Estados Unidos y afecta a desde el 5 hasta el 7% de la población
mundial total, con una prevalencia creciente en los países
occidentales. En la diabetes, el organismo o bien no produce
suficiente insulina o bien la insulina que se produce no es eficaz,
dando como resultado un aumento de la glucemia, un estado conocido
técnicamente como hiperglucemia. Aunque la diabetes puede afectar a
personas de cualquier edad, la mayoría de los diabéticos tienen más
de 45 años. La enfermedad tiende a producirse en familias y el
factor de riesgo de adquirir la enfermedad aumenta en individuos
con sobrepeso.
La diabetes es una enfermedad crónica sin
curación y está relacionada con varios trastornos distintos. Es la
causa principal de ceguera en personas con edades de
25-74 años. El diez por ciento de todas las personas
con diabetes desarrollan enfermedad renal. La diabetes es la causa
más frecuente de amputación no traumática de extremidades
inferiores. El riesgo de amputación de pierna es 30 veces mayor para
las personas con diabetes. Las personas con diabetes tienen de dos
a cuatro veces más posibilidades de desarrollar enfermedades
cardiacas, y tienen cinco veces más posibilidades de padecer
accidente cerebrovascular.
La causa de la diabetes es todavía un misterio,
aunque parece que tanto la genética como el entorno desempeñan un
papel. Existen dos tipos de diabetes: insulinodependiente (tipo I) y
no insulinodependiente (tipo II). La diabetes tipo I es una
enfermedad autoinmunitaria que aparece frecuentemente en niños y
adultos jóvenes. Todavía se desconoce el autoantígeno responsable
de provocar la diabetes tipo I y los pacientes tienen que tomar
insulina por vía i.v. diariamente para sobrevivir durante toda su
vida.
La diabetes tipo II es un trastorno metabólico
que resulta de la incapacidad del organismo de producir una
cantidad suficiente de insulina o de usar de manera apropiada la
insulina que produce, y se considera la forma más común de la
enfermedad. Aunque la secreción de insulina y la resistencia a
insulina se consideran los defectos principales, siguen siendo
desconocidos los factores genéticos precisos implicados. Los
pacientes con diabetes tienen normalmente uno o varios de los
siguientes defectos. Éstos son: menos producción de insulina por el
páncreas; secreción excesiva de glucosa por el hígado; alteración de
la captación de glucosa por el músculo esquelético; defectos en los
transportadores de glucosa (Glut-1,
Glut-4); desensibilización de los receptores de
insulina; y defecto en la degradación metabólica de
polisacáridos.
El tratamiento actual utiliza cuatro clases de
agentes hipoglucémicos a parte de insulina i.v. Éstas se resumen a
continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
Tal como es evidente a partir de la tabla
anterior, cada uno de los agentes actuales disponibles para su uso
en el tratamiento de la diabetes tiene ciertas desventajas. Por
consiguiente existe un interés continuo en la identificación y el
desarrollo de nuevos agentes para su uso en el tratamiento de
diabetes.
M. charantia es una planta tropical cuyos
frutos se usan como vegetal. Varios grupos han informado sobre la
actividad hipoglucémica de la M. charantia, tanto en modelos
de mamífero (Shibib et al., Biochem. J., 292,
267-270 (1993); Ali et al., Planta Med. 59,
408-412 (1993); Akhtar et al., Planta Med.
42, 205-212 (1981)) como en seres humanos
(Leatherdale et al., Br. Med. J. 282,
1823-1824 (1981); Aslam et al., Lancet, I.
607 (1979)). Sin embargo, siguen siendo desconocidos el componentes
hipoglucémico y el mecanismo de acción.
Se informa del aislamiento de un péptido de 11
kDal obtenido a partir de M. charantia que tiene actividad
de tipo insulina en: Khanna et al., "Hypoglycemic Activity
of Polipeptide-p from a Plant Source," 20th
Annual Meeting of the American Society of Pharmacology, Purdue
University, West Lafayette, 29 de julio - 3 de agosto, 1979; Baldwa
et al., Upsala J. med. Sci. (1977) 82:39-41 y
patente estadounidense número 3.945.988. En todos estos informes,
el polipéptido de tipo insulina se administró por vía no oral, por
ejemplo por vía i.v. o por vía subcutánea.
Un informe reciente indica que el extracto
alcohólico bruto de M. charantia disminuye parcialmente el
nivel de glucosa en plasma mediante la estimulación de la síntesis
de glucógeno en el hígado y es improbable que actúe como un agente
secretor de insulina (Sarkar et al., Pharmacol. Res., 33, 1 -
4 (1996)).
Los polipéptidos que muestran actividad
hipoglucémica se tratan en un artículo técnico por Khanna et
al. que se publicó en J. Nat. Prod., 1981, vol. 44, 648 -
655.
La presente invención proporciona un péptido
anti-hiperglucémico aislado según la reivindicación
1. La presente invención proporciona también composiciones
farmacéuticas que comprenden tales péptidos.
La presente invención proporciona además el uso
del péptido anti-hiperglucémico identificado en la
fabricación de medicamentos para reducir las glucemias de los
pacientes.
La presente invención proporciona también una
composición soluble en agua, obtenida a partir de MC6 de
Momordica Charantia, según la reivindicación 19. La presente
invención proporciona también una composición farmacéutica que
comprende tales composiciones solubles en agua.
La presente invención proporciona el uso de las
composiciones solubles en agua identificadas en la fabricación de
medicamentos para reducir las glucemias de los pacientes.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1A muestra los resultados de
electroforesis en gel sobre SDS-PAGE al 20% de
diversas fracciones solubles en agua de M. charantia;
la figura 1B muestra las preparaciones de MC6
purificadas; y la figura 1C muestra los resultados de HPLC de
MC6;
la figura 2A es una representación gráfica que
muestra el efecto de un extracto acuoso no purificado de M.
charantia y un control sobre los niveles de glucosa en plasma a
lo largo del tiempo en ratas SD; la figura 2B es una representación
gráfica que muestra el efecto de MC6 administrada por vía oral sobre
las glucemias a lo largo del tiempo en ratas SD;
las figuras 3A y B proporcionan representaciones
gráficas del efecto de MC6 sobre las glucemias en ratas que padecen
diabetes inducida por SZC;
la figura 4 es una representación gráfica que
demuestra que la administración oral de MC6 no aumenta el nivel de
insulina en suero; y
la figura 5 es una representación gráfica que
demuestra que la administración oral de MC6 es tan eficaz como la
administración i.v. de r-insulina para reducir las
glucemias.
Las figuras 6(a) y (b) muestran los
resultados del análisis en SDS-PAGE de MC6.1 en un
gel de gradiente de tris-glicina al
4-20% usando tinción con azul de coomassie y con
plata, respectivamente.
La figura 7 proporciona una representación
gráfica de los resultados obtenidos a partir de la purificación de
MC6.1 usando RP-HPLC en C18.
Las figuras 8a y b proporcionan los resultados
del análisis del punto isoeléctrico para MC6.1.
La figura 9 proporciona los resultados del
análisis de RMN de MC6.1
La figura 10 proporciona una representación
gráfica del efecto de MC6.1 sobre las glucemias.
La figura 11 proporciona una representación
gráfica de la actividad hipoglucémica de MC6.1, 6.2 y 6.3 en pruebas
de tolerancia a la glucosa oral en ratas normales.
La figura 12 proporciona una representación
gráfica de la capacidad de disminución de la glucosa de MC6.2 en
ratas diabéticas.
La figura 13 es una representación gráfica del
efecto hipoglucémico de MC6.2 en ratones diabéticos no obesos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se proporcionan una fracción soluble en agua de
M. charantia denominada MC6, un componente peptídico activo
de la misma denominado MC6.1, y derivados peptídicos del mismo,
MC6.2 y MC6.3, métodos para su preparación y su uso en el
tratamiento de trastornos hiperglucémicos. MC6 se caracteriza porque
comprende tres péptidos que se desplazan juntos como una única
banda sobre SDS-PAGE con un peso molecular de 10
kDal y tiene un tamaño más pequeño que la insulina recombinante.
MC6 y MC6.1 muestran actividad hipoglucémica y son activos por vía
oral. Para describir adicionalmente la presente invención, se
describirán adicionalmente en mayor detalle las características de
MC6 y MC6.1, seguido de una descripción de los métodos para su
preparación y su uso en el tratamiento de trastornos
hiperglucémicos, particularmente en el tratamiento de seres humanos
que padecen diabetes.
Los derivados, MC6.2 y MC6.3 son,
respectivamente, derivados peptídicos de 11 aa y 7 aa del péptido de
18 aa, MC6.1.
Antes de describir adicionalmente la presente
invención, ha de entenderse que la invención no se limita a las
realizaciones particulares de la invención descritas a continuación,
ya que pueden realizarse variaciones de las realizaciones
particulares y entrar todavía dentro del alcance de las
reivindicaciones adjuntas. También ha de entenderse que la
terminología empleada es para el fin de describir realizaciones
particulares y no pretende ser limitante. En cambio, el alcance de
la presente invención se establecerá por las reivindicaciones
adjuntas.
Debe observarse que tal como se usa en esta
memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas
singulares "un", "una" y "el", "la" incluyen
referencia plural a menos que el contexto dicte claramente lo
contrario. A menos que se defina lo contrario, todos los términos
técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el
mismo significado que entiende habitualmente un experto en la
técnica a la que pertenece esta invención.
MC6 de la presente invención es una fracción o
extracto soluble en agua de la especie vegetal M. charantia.
Aunque MC6 puede derivarse de uno o más tejidos o componentes de la
M. charantia, incluyendo las hojas, tallos, raíces, fruto,
semillas y similares, incluyendo toda la planta M. charantia,
MC6 se deriva normalmente del fruto de M. charantia,
preferiblemente del fruto de M. charantia no maduro que se ha
separado de las semillas.
MC6 se caracteriza porque se desplaza como una
única banda sobre SDS-PAGE al 20%, siendo el peso
molecular de la única banda inferior a 10 kDal, siendo la potencia
del campo eléctrico aplicado durante SDS-PAGE al
20% de 100 V. La MC6 tiene un tamaño más pequeño que la insulina
recombinante, y por tanto es inferior a aproximadamente 6 kDal. MC6
se caracteriza además porque eluye como tres picos tras la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), siendo las
condiciones de la HPLC de fase inversa en columnas C8 o C18. En
estas condiciones, el primer pico eluye a los 11,33 min., el
segundo pico eluye a 25,35 min. y el tercer pico eluye a 34,67
min.
La MC6 de la presente invención es una
preparación libre de contaminantes de alto peso molecular, por
ejemplo proteínas, usándose contaminantes de alto peso molecular en
esta solicitud para denotar moléculas que tienen un peso molecular
en exceso de aproximadamente 50 kDal. Normalmente, la MC6 está libre
de cualquier contaminante que tenga un peso molecular en exceso de
10 kDal.
La MC6 muestra actividad hipoglucémica en
mamíferos. Actividad hipoglucémica significa que tras la
administración de MC6 al mamífero disminuye la glucemia del
mamífero, siendo la cantidad de disminución en la glucemia
proporcional a la cantidad de MC6 administrada al mamífero. MC6
muestra actividad hipoglucémica ya se administre por vía oral o por
vía intravenosa, y por tanto es activo por vía oral y biodisponible
por vía oral, lo que significa que no se inactiva al pasar desde el
tubo digestivo hacia el mamífero.
La MC6 puede prepararse usando cualquier medio
conveniente que proporcione la separación de MC6 del tejido de
M. charantia fuente. Un medio de obtención de MC6 a partir de
tejido de M. charantia es preparar en primer lugar una
suspensión de partida del tejido macerando el tejido en presencia de
un disolvente, por ejemplo solución salina tamponada con fosfato
(PBS), agua y similares, pudiéndose lograr la maceración usando una
mezcladora u otro medio de maceración. Entonces se separa la materia
particulada de la suspensión resultante y se desecha de la fase
líquida, pudiéndose lograr esta epata mediante centrifugación,
normalmente a una velocidad entre aproximadamente 10.000 y 16.000
rpm, seguido de filtración del sobrenadante, siendo la filtración
generalmente mediante filtros que tienen tamaños de poro que
oscilan desde 0,5 hasta 0,10 \mu, normalmente desde
aproximadamente 0,45 hasta 0,22 \mu, pudiendo ser la filtración a
vacío. Entonces se hace pasar el filtrado resultante secuencialmente
a través de membranas de corte molecular de 30 kDal y 10 kDal,
conociéndose en la técnica tales membranas e incluyendo membranas
representativas filtros de corte molecular Amicon M.W. y similares,
para obtener una fracción soluble en agua del tejido de M.
charantia inicial que contiene MC6. La fracción soluble en agua
resultante puede usarse tal como está o procesarse adicionalmente
para su uso posterior, pudiendo incluir el procesamiento adicional
deshidratación, por ejemplo liofilización, y similares. La fracción
soluble en agua resultante puede almacenarse también en forma
líquida a desde 1 hasta 5, normalmente de 2 a 4 C en presencia de
conservantes, tales como benzoato de sodio y similares.
MC6.1 es un componente peptídico específico de
MC6 que migra como una única banda en el análisis en
SDS-PAGE (gel de gradiente de
tris-glicina al 4-20%) y tiene un
peso molecular tal como se determina mediante
SDS-PAGE inferior a 2,5 kDa. MC6.1 tiene un punto
isoeléctrico de 8,2. MC6.1 es de 18 residuos de aminoácidos de
longitud, siendo la secuencia de aminoácidos de MC6.1:
- K-T-N-M-K-H-M-A-G-A-A-A-A-G-A-V-V-G (SEQ ID NO: 01)
MC6.1 muestra actividad hipoglucémica en
mamíferos. El MC6.1 de la presente invención es MC6.1 que se ha
separado de su entorno natural, por ejemplo está presente en MC6,
está en forma aislada o pura, y similares.
\newpage
También se proporcionan análogos y miméticos
peptídicos de MC6.1 que muestran actividad hipoglucémica. Los
análogos y miméticos de MC6.1 comprenderán, como secuencia de
motivos activos, al menos 8 aminoácidos, normalmente al menos
aproximadamente 12 aminoácidos, más normalmente al menos
aproximadamente 18 aminoácidos, y menos de aproximadamente 40
aminoácidos, más normalmente menos de 30 aminoácidos. Péptidos
específicos son MC6.2, un derivado de 11 aa de MC6.1 que tiene la
secuencia:
- K-T-N-M-K-H-M-A-G-A-A (SEQ ID NO: 02)
y un derivado de 7 aa que tiene la
secuencia:
- K-T-N-M-K-H-M (SEQ ID NO: 03).
Se entiende que pueden realizarse hasta
aproximadamente tres sustituciones o deleciones en las secuencias
objeto, en las que el cambio no será superior a aproximadamente el
20% en número, normalmente no superior a aproximadamente el 10% en
número del número de aminoácidos en el motivo activo. Se prefieren
sustituciones conservativas, tal como se conocen en la técnica,
incluyendo sustituciones dentro del gran grupo hidrófobo:
isoleucina, leucina, valina y fenilalanina; entre serina y treonina;
glicina y alanina; asparagina y glutamina; ácido aspártico y ácido
glutámico; o lisina, arginina e histidina.
Además de la purificación a partir de su fuente
natural, el MC6.1, así como análogos y miméticos peptídicos del
mismo, tales como MC6.2 y MC6.3, pueden prepararse según técnicas
convencionales, tales como síntesis (por ejemplo, el uso de un
sintetizador de péptidos Beckman modelo 990 u otro sintetizador
comercial). Pueden producirse péptidos directamente mediante
métodos recombinantes (véase Sambrook et al. Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, CSHL Press, Cold Spring Harbor, NY,
1989) o como una proteína de fusión, por ejemplo a una proteína que
es una de una pareja de unión específica, permitiendo la
purificación de la proteína de fusión por medio de reactivos de
afinidad, seguido de escisión proteolítica, normalmente en un sitio
modificado mediante ingeniería genética para proporcionar el
péptido deseado (véase por ejemplo Driscoll et al. (1993) J.
Mol. Bio. 232:342-350).
Los oligopéptidos (es decir MC6.1, análogos de
MC6.1, miméticos de MC6.1) pueden extenderse para proporcionar
sitios de unión convenientes, por ejemplo cisteína o lisina, para
potenciar la estabilidad, para unirse a receptores particulares,
para proporcionar acción dirigida al sitio, para proporcionar
facilidad de purificación, para alterar las características físicas
(por ejemplo solubilidad, carga, etc.), para estabilizar la
conformación, etc. Los oligopéptidos pueden estar unidos a regiones
flanqueantes no de tipo natural como proteínas fusionadas, unidos o
bien mediante grupos de unión o bien unidos covalentemente a través
de enlaces peptídicos o de cisteína (disulfuro). El oligopéptido
puede estar unido a través de una variedad de agentes bifuncionales,
tales como ácido maleimidobenzoico, ácido metilditioacético, ácido
mercaptobenzoico, ditiopropionato de S-piridilo,
etc. Los oligopéptidos pueden estar unidos a un único aminoácido en
el extremo N o C terminal de una cadena de aminoácidos, o pueden
estar unidos de manera interna. Por ejemplo, los péptidos objeto
pueden estar covalentemente unidos a una proteína inmunogénica, tal
como hemocianina de lapa californiana, ovoalbúmina, etc. para
facilitar la producción de anticuerpos frente a los oligopéptidos
objeto.
Alternativamente, los oligopéptidos objeto
pueden expresarse conjuntamente con otros péptidos o proteínas, de
modo que sea una parte de la cadena, o bien interna, o bien en el
extremo N o C terminal. Pueden lograrse diversas modificaciones
posteriores a la expresión. Por ejemplo, empleando las secuencias
codificantes apropiadas, puede proporcionarse farnesilación o
prenilación, de modo que el péptido objeto se unirá a un grupo
lipídico en un extremo y podrá insertarse en una membrana lipídica,
tal como un liposoma.
Los oligopéptidos objetos pueden pegilarse,
proporcionando el grupo polietilenoxilo un tiempo de vida potenciado
en la circulación sanguínea. Los oligopéptidos objeto pueden
combinarse también con otras proteínas, tales como la Fc de un
isotipo de IgG para potenciar la unión de complemento, o con una
toxina, tal como ricina, abrina, toxina diftérica, o similares,
particularmente la cadena A. Los oligopéptidos pueden unirse a
anticuerpos para la acción dirigida al sitio. Para técnicas de
conjugación, véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses
números 3.817.837; 3.853.914; 3.850.752; 3.905.654; 4.156.081;
4.069.105; y 4.043.989, que se incorporan al presente documento
como referencia.
MC6, MC6.1, MC6.2 y MC6.3 (así como análogos y
miméticos de los mismos) de la presente invención se usan en el
tratamiento de enfermedades caracterizadas por la presencia de
glucemias elevadas, por ejemplo trastornos hiperglucémicos, tales
como la diabetes mellitus, incluyendo tanto la diabetes tipo I como
tipo II, así como otros trastornos relacionados con la
hiperglucemia, tales como la obesidad, trastornos relacionados con
aumento del colesterol renales, y similares. "Tratamiento"
significa que MC6, MC6.1, MC6.2 y MC6.3 (así como análogos y
miméticos de los mismos) se administran para al menos reducir la
glucemia en el huésped que padece el trastorno hiperglucémico. Para
tratar los trastornos hiperglucémicos con MC6 y los oligopéptidos
objeto, se administran MC6 u oligopéptidos al huésped en una
cantidad suficiente para reducir la glucemia en el huésped hasta un
intervalo aceptable, significando intervalo
aceptable \pm 10%, normalmente \pm 8%, y más normalmente \pm 5% de la glucemia promedio normal para el huésped.
aceptable \pm 10%, normalmente \pm 8%, y más normalmente \pm 5% de la glucemia promedio normal para el huésped.
Una variedad de huéspedes pueden tratarse según
la presente invención para reducir sus glucemias, siendo tales
huéspedes mamíferos e incluyendo ganado, animales raros o valiosos,
animales domésticos, tales como perros y gatos, y seres
humanos.
Son de particular interés métodos de tratamiento
de trastornos hiperglucémicos humanos, tales como la diabetes,
incluyendo la diabetes tanto tipo I como tipo II, en los que se
administran MC6, MC6.1, MC6.2, MC6.3 y análogos y miméticos de los
mismos al ser humano que padece el trastorno hiperglucémico para al
menos reducir la glucemia del ser humano, reduciéndose la glucemia
hasta aproximadamente el intervalo de glucemia normal para el ser
humano. Aunque, los agentes activos pueden administrarse al ser
humano usando cualquiera de las técnicas convenientes descritas
anteriormente, es de particular interés la administración oral de
agentes activos.
Para el tratamiento con la fracción MC6 o los
péptidos MC6.1, 6.2 y/o 6.3, los compuestos activos pueden
administrarse al huésped que padece el trastorno hiperglucémico
usando cualquier técnica de administración conveniente, incluyendo
tales técnicas intravenosa, intradérmica, intramuscular, subcutánea,
oral y similares, siendo de particular interés las vías de
administración orales. La dosificación administrada al huésped
dependerá necesariamente de la vía mediante la que se administra la
dosificación, pero generalmente oscilará desde aproximadamente 50
hasta 500 mg/70 kb de peso corporal humano, normalmente desde
aproximadamente 100 hasta 200 mg/70 kg de peso corporal humano.
Para tratar los trastornos hiperglucémicos humanos con MC6, la
dosificación la fracción o el compuesto activos administrados al
ser humano generalmente oscilará desde aproximadamente 50 hasta 500,
normalmente desde aproximadamente 100 hasta 200 mg/70 kg de peso
corporal humano.
En el uso la fracción o los compuestos activos
según la presente invención, pueden combinarse con un vehículo
fisiológicamente aceptable para producir una composición
farmacéutica. La naturaleza del vehículo fisiológicamente aceptable
con el que se combina la fracción o el compuesto o activo para
producir la composición farmacéutica dependerá necesariamente del
método mediante el cual se pretende administrar la composición
farmacéutica. Los vehículos ilustrativos incluyen agua, por ejemplo
agua estéril para inyección, solución salina y similares. Serán de
interés particular los vehículos fisiológicamente aceptables
adecuados para su uso en la administración oral. Tales vehículos se
conocen en la técnica e incluyen agua, por ejemplo agua desionizada;
solución salina, por ejemplo solución salina tamponada con fosfato,
polvo liofilizado en forma de comprimidos y cápsulas, pudiendo
incluir tales formas diversas cargas, aglutinantes etc. y similares.
La cantidad de principio activo presente en la composición
farmacéutica se seleccionará en vista del método mediante el cual va
a administrarse la composición farmacéutica y puede determinarse
empíricamente por los expertos en la técnica.
Para el tratamiento, MC6.2 y/o MC6.3 y análogos
o miméticos oligopeptídicos de los mismos pueden administrarse por
vía oral, por vía tópica o por vía parenteral, por ejemplo mediante
inyección en un sitio particular, por ejemplo, por vía subcutánea,
por vía intraperitoneal, por vía intravascular, por vía intranasal,
por vía transdérmica o similares. Las formulaciones para la
administración oral incluyen aquéllas enumeradas anteriormente
adecuadas para su uso con MC6. Las formulaciones para inyección
comprenderán un medio fisiológicamente aceptable, tal como agua,
solución salina, PBS, etanol acuoso, etilenglicoles acuosos o
similares. Los conservantes solubles en agua que pueden emplearse
incluyen bisulfito de sodio, tiosulfato de sodio, ascorbato, cloruro
de benzalconio, clorobutanol, timerosal, borato fenilmercúrico,
parabenos, alcohol bencílico y feniletanol. Estos agentes pueden
estar presentes en cantidades individuales de desde aproximadamente
el 0,001 hasta aproximadamente el 5% en peso y de manera preferible
aproximadamente del 0,01 a aproximadamente el 2%. Los agentes de
tamponamiento solubles en agua adecuados que pueden emplearse son
carbonatos, fosfatos, bicarbonatos, citratos, boratos, acetatos,
succinatos alcalinos o alcalinotérreos y similares, tales como
fosfato, citrato, borato, acetato, bicarbonato y carbonato de
sodio. Aditivos tales como carboximetilcelulosa pueden usarse como
portador en cantidades de desde aproximadamente el 0,01 hasta
aproximadamente el 5% en peso. La formulación variará dependiendo
del fin de la formulación, el modo particular empelado para modular
la actividad del receptor, el tratamiento que se pretende y
similares. La formulación puede implicar parches, cápsulas,
liposomas, recubrimientos de liberación retardada, píldoras, o
puede formularse en bombas para la administración continua. La
dosificación específica puede determinarse empíricamente según los
modos conocidos. Véase, por ejemplo Harrison's, Principles of
Internal Medicine, 11ª ed. Braunwald et al. ed, McGraw Hill
Book Co., Nueva York, 1987.
Generalmente, una dosis terapéuticamente eficaz
de la fracción o los péptidos activos, análogos y miméticos de los
mismos estará en el intervalo de aproximadamente 0,005 - 10, más
normalmente desde aproximadamente 0,01 - 1 mg/kg de peso del
huésped. Una dosis de este tipo será suficiente para lograr la
actividad hipoglucémica deseada. La administración puede ser tan
frecuente como diaria; normalmente no más de una o más veces al día,
o tan infrecuente como semanalmente, dependiendo del nivel del
fármaco que se administra. La cantidad administrada de oligopéptido
se ajustará generalmente dependiendo de la semivida del péptido,
pudiéndose emplear dosificaciones en la parte inferior del
intervalo cuando el péptido tiene una semivida potenciada o se
proporciona como un medicamento de liberación lenta, tal como una
composición de liberación lenta que comprende partículas,
introducido en una matriz que mantiene el péptido durante un
periodo de tiempo prolongado, por ejemplo una matriz de colágeno,
el uso de una bomba que infunde continuamente el péptido durante un
periodo de tiempo prolongado en una velocidad sustancialmente
continua o similares. Heller, Biodegradable Polymers in Controlled
Drug Delivery, en: CRC Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier
Systems, vol. 1, CRC Press, Boca Raton, FL, 1987, páginas
39-90, describe la encapsulación para la
administración del fármaco controlada y Di Colo (1992) Biomaterials
13:850-856 describe la liberación del fármaco
controlada a partir de polímeros hidrófobos.
Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de
ilustración y no a modo de limitación.
Se lavaron frutos no maduros frescos de
Momordica Charantia, se limpiaron y se extrajeron las
semillas. Se mezcló la pulpa o bien en una solución salina
tamponada con fosfato (PBS) o bien en agua desionizada. Se
centrifugó la suspensión a 12.000 x g y se filtró a través de
filtros estériles de 0,22 : (obtenidos de Whatman) a vacío. Se hizo
pasar el sobrenadante transparente secuencialmente a través de
membranas de corte molecular de 30 kD, 10 kD y 3 kD obtenidas de
Amicon filtration. Se analizaron las fracciones de corte molecular
de 0,45 \mu (1ª etapa), 0,22 \mu (2ª etapa) y 10 kD (3ª etapa)
mediante SDS-gel de poliacrilamida al 20% y se
proporcionan los resultados en la figura 1A. La fracción purificada
de la 3ª etapa mostró una única banda con un tamaño más pequeño que
la insulina humana. Es evidente a partir del análisis en gel que la
fracción purificada está libre de diversas bandas de proteína de
alto peso molecular. Se purificaron varios lotes de MC6 marcada con
fracción de corte molecular de 10 K en cantidades de gramo, tal como
se muestra en la figura 1B. Se liofilizaron las fracciones
resultantes purificadas para obtener MC6 libre de agua sin
combinar.
Se sometieron de 100 a 500 mg de la MC6
liofilizada a cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) (HPLC
de fase inversa que usa gradiente lineal de TFA/acetonitrilo usando
una columna C8 o C18 (analítica)) y se proporcionan los resultados
en la figura 1C. El análisis de HPLC mostró tres picos principales
con tiempos de retención de 17,35, 25,35 y 34,67 minutos
respectivamente, lo que demuestra que MC6 comprende 3 péptidos.
Se comparó el efecto hipoglucémico de la
fracción purificada con la preparación de extracto bruto de partida.
Se privó de comida a las ratas SD (200 gramos promedio obtenidas de
Charles River, MA) durante 3 horas y se les extrajo una alícuota de
sangre de la vena de la cola para medir el nivel de glucosa en
plasma basal. Se administraron por vía oral a cada rata 5 ml de
preparación de extracto bruto o 1 ml de fracción purificada MC6
(500 :g) en PBS (tal como se preparó en la parte A anterior). Los
animales control recibieron un volumen igual de PBS. Se
anestesiaron las ratas usando suritol (por vía i.p.) (0,08
\mug/ml/kg, propanolol (1,7 \mug/min./kg)). Se canuló la vena
yugular de cada rata y se infundió glucosa (18 mg/min./kg de peso
corporal) en disolución de KCl 5 mM y NaCl 140 mM durante 3 horas.
Se extrajo sangre de la arteria carótida a los 30, 60, 90, 150 y
180 minutos. Se estimó el nivel de glucosa en plasma mediante los
métodos calorimétricos establecidos descritos en Kadish et
al., Clin. Chem. (1968) 14: 116.
Los resultados se presentan en la figura 2A. Los
resultados demuestran que los animales a los que se administró
extracto bruto tienen una disminución significativa en la glucemia
en todos los puntos, siendo el efecto sustancialmente alto a los 60
minutos (con una diferencia relativa de casi el 100%).
Paralelamente, tal como se muestra en la figura 2B, un 1 ml de
fracción purificada acuosa de MC6 (500 :g) en PBS administrado por
vía oral tiene un efecto similar al extracto bruto, lo que sugiere
que la combinación de polipéptidos aislados de MC6 es el principio
activo principal en el extracto bruto.
El siguiente conjunto de experimentos se llevó a
cabo para demostrar la eficacia de la fracción purificada tanto en
los modos preventivo como de tratamiento de diabetes en un modelo
animal. Se indujo diabetes en ratas SD macho
(200-225 g cada una) usando estreptozotocina (40
mg/kg de peso corporal) (obtenida de Sigma Chem., MO). En el modelo
preventivo, los animales recibieron por vía oral 1 ml (500 :g) de la
fracción purificada MC6 diariamente a partir del día 0. En el
modelo de tratamiento, los animales recibieron por vía oral 1 ml de
la fracción purificada MC6 (500 :g) al comienzo de la enfermedad en
el día 5. Se monitorizaron los niveles de glucosa en suero
diariamente durante un periodo de 15 días. Tal como se muestra en la
figura 3A y 3B, la fracción purificada MC6 es sumamente eficaz
tanto en los modos preventivo como de tratamiento (p<0,001 en el
día 10).
El efecto de MC6 en el modo preventivo de la
diabetes inducida por estreptozotocina apoya también fuertemente la
idoneidad de usar MC6 para tratar la diabetes autoinmunitaria tipo
I.
Se midieron los niveles de insulina en suero de
animales en diferentes días del experimento descrito en la parte C
para examinar el papel de MC6 en la regulación de la insulina
sistémica durante el efecto hipoglucémico. Se llevó a cabo la
medición cuantitativa del nivel de insulina en suero mediante
radioinmunoanálisis (ensayo LINKO) tal como se describe en Hales
& Randle, Biochem. J. (1963) 88:137. La figura 4 muestra que la
administración oral de esta fracción no tuvo ningún efecto sobre la
potenciación del nivel de insulina en suero, lo que sugiere que el
efecto de esta fracción no está mediado a través de la secreción de
insulina por el páncreas. En la figura 4, la diabetes se indujo con
estreptozotocina. Al grupo sin tratar se le administró PBS
solamente; al grupo con SZC se le administraron 40 mg/kg de SZC; al
grupo preventivo se le administró MC6 por vía oral a partir del día
1; y al grupo de tratamiento se le administró MC6 a partir del día
5. Se midió la insulina mediante RIA (radioinmunoanálisis)
habitual. Los datos representan el promedio de la determinación por
triplicado.
En el siguiente experimento, se comparó la
fracción MC6 (500 :g) purificada administrada por vía oral con la
inyección i.v. de insulina (150 mU) en ratas SD. Se dividieron los
animales en cuatro grupos y se les privó de comida durante tres
horas. El grupo 1 recibió PBS solamente; al grupo 2 se le administró
MC6 por vía oral 60 minutos antes de la infusión de glucosa; el
grupo 3 recibió 150 mU de r-insulina
(Humalin-R® de Novo-Nordisk) por
vía i.v. a 60 minutos tras la infusión de glucosa a través de la
vena yugular y el grupo 4 recibió 500 :g de MC6 en 1 ml de PBS (por
vía i.v.) a los 60 minutos tras la infusión de glucosa a través de
la vena yugular. En todos los casos, la infusión de glucosa fue a
18 mg/min./kg. Se extrajeron muestras de sangre de la arteria
carótida a diferentes intervalos de tiempo y se midieron los niveles
cuantitativos de glucosa en plasma mediante calorimetría.
Los resultados se presentan en la figura 5. Los
resultados muestran que la administración oral de MC6 es comparable
a la inyección i.v. de r-insulina en un periodo de
tiempo de 120 minutos. Además, la inyección sistémica de esta
fracción y r-insulina mostró un perfil hipoglucémico
idéntico. Estos resultados demuestran que la fracción purificada es
eficaz por vía oral y por vía sistémica.
\vskip1.000000\baselineskip
Se caracterizó MC6.1 adicionalmente mediante
análisis en SDS-PAGE en gel de gradiente de
tris-glicina del 4 al 20% usando o bien tinción con
plata o bien azul de coomassie para la visualización de las bandas
resueltas. Los resultados se proporcionan en las figuras 6a y
6b.
\vskip1.000000\baselineskip
Se purificó MC6.1 adicionalmente y se analizó
mediante RP HPLC en C-18 (gradiente de tampón A en
TFA al 0,1%; 60% de AcN en 0,1% de TFA. Los resultados se
proporcionan en la figura 7.
\vskip1.000000\baselineskip
Se analizó el punto isoeléctrico de MC6.1 y se
encontró que era 8,2. Los resultados se proporcionan en las figuras
8a y 8b.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizó el análisis de RMN de protón de MC6.1
y los resultados se proporcionan en la figura 9.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sometió a ensayo la actividad hipoglucémica
de MC6.1 de una manera análoga al ejemplo B. anterior. Se utilizaron
ratas SD macho que pesaban en promedio 220 g. Se les administraron
por vía oral a las ratas 50 \mug de MC6.1 en 500 \mul. A las
ratas control se les administró PBS. Los resultados se proporcionan
en la figura 10. Los resultados demuestran que MC6.1 muestra
actividad hipoglucémica tras la administración oral.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 11 representa la actividad
hipoglucémica de MC6.1 y sus derivados MC6.2 y 6.3 análogos en una
prueba de tolerancia a la glucosa oral en ratas normales. Los tres
péptidos fueron eficaces para disminuir la glucemia en este
experimento en comparación con los animales tratados con
vehículo.
Se evaluó adicionalmente la capacidad de
disminución de la glucosa de MC6.2 (péptido de 11 aminoácidos) en
ratas diabéticas. Se inyectó estreptozotocina a una dosis de 40
mg/kg de peso corporal en ratas SD de 200 g promedio. Tal como se
muestra en la figura 12, el tratamiento oral de las ratas diabéticas
(glucemia promedio de 330 mg/dl) con MC6.2 a una dosis de 100
-g/rata (0,5 mg/kg de peso corporal) disminuyó la glucemia de manera
significativa en comparación con el grupo control.
Se evaluó el efecto hipoglucémico de MC6.2
(péptido de 11 aminoácidos) en el modo de tratamiento en ratones
diabéticos no obesos (DNO). Tal como se muestra en la figura 13, la
administración oral de MC6.2 en ratones DNO diariamente tiene un
efecto significativo sobre la glucemia en comparación con los
animales tratados con vehículo.
Estos resultados demuestran que los residuos de
7-11 aminoácidos N-terminales de
MC6.1 son importantes para reducir la glucemia lo que es útil para
el desarrollo de compuestos terapéuticos para el tratamiento de la
diabetes humana.
Es evidente a partir de la discusión y los
resultados anteriores que se proporcionan un extracto novedoso de
M. charantia y agentes peptídicos específicos que son útiles
en el tratamiento de trastornos hiperglucémicos, particularmente la
diabetes. Puesto que los agentes activos de la invención no provocan
una regulación por incremento en la cantidad de insulina producida
por el organismo, proporcionan un mecanismo alternativo útil para
regular las glucemias. Además, puesto que MC6 y el péptido MC6.1,
6.2 y 6.3 son activos por vía oral, proporcionan ventajas
significativas con respecto a los productos de insulina
convencionales que se han usado en el tratamiento de la diabetes
que deben introducirse por medios de administración menos
convenientes y más invasivos, tales como por vía i.v.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: Natpro, Inc.
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: FRACCIÓN ACTIVA POR VÍA ORAL DE MOMORDICA CHARANTIA, PÉPTIDOS ACTIVOS DE LA MISMA Y SU USO EN EL TRATAMIENTO DE DIABETES
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 3
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DIRECCIÓN: Fish & Richardson, P.C.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 2200 Sand Hill Road, Suite 100
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Menlo Park
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: CA
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: EE.UU.
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 94025
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: Compatible con IBM
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: FastSEQ para Windows Versión 2.0
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: Desconocido
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 1 de abril de 1998
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
- (vii)
- DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: 08/850.855
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 02 DE MAYO DE 1997
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: 08/831.039
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 01 DE ABRIL DE 1997
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN DEL REPRESENTANTE/AGENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Suyat, Reginald J
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- NÚMERO DE REGISTRO: 28.172
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: 08948/006WO1
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIONES:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: 650-322-5070
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FAX: 650-854-0875
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TELEX:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<110> CALYX THERAPEUTICS, INC.
\vskip0.400000\baselineskip
<120> FRACCIÓN ACTIVA POR VÍA ORAL DE
MOMORDICA CHARANTIA, PÉPTIDOS ACTIVOS DE LA MISMA Y SU USO EN
EL TRATAMIENTO DE DIABETES
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 121633-40128408
\vskip0.400000\baselineskip
<140> EP 98914405.0
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
01-04-1998
\vskip0.400000\baselineskip
<150> PCT/US98/06450
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
01-04-1998
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 08/831,039
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
01-04-1997
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 08/850,855
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
02-05-1997
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 3.3
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Momordica Charantia
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
{}\hskip1cm4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Momordica Charantia
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
{}\hskip1cm5
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Momordica Charantia
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
{}\hskip1cm6
Claims (22)
1. Péptido anti-hiperglucémico
aislado seleccionado del grupo que consiste en la SEQ ID NO. 1, SEQ
ID NO. 2 y SEQ ID NO. 3.
2. Péptido aislado según la reivindicación 1,
que consiste en la secuencia de aminoácidos: KTNMKHMAGAAAA
GAVVG (SEQ ID NO. 1).
GAVVG (SEQ ID NO. 1).
3. Péptido aislado según la reivindicación 1,
que consiste en la secuencia de aminoácidos: KTNMKHMAGAA (SEQ ID
NO. 2).
4. Péptido aislado según la reivindicación 1,
que consiste en la secuencia de aminoácidos: KTNMKHM (SEQ ID NO.
3).
5. Composición farmacéutica que comprende una
cantidad eficaz de al menos uno de los péptidos según las
reivindicaciones 1 a 4 en un vehículo fisiológicamente
aceptable.
6. Composición farmacéutica según la
reivindicación 5, en la que el vehículo permite que se administre la
composición por vía oral o por vía intravenosa.
7. Uso de al menos un péptido, seleccionado del
grupo que consiste en: SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3 y
cualquier análogo o mimético del mismo, en la fabricación de un
medicamento para reducir las glucemias en un huésped, en el que los
análogos o miméticos consisten en secuencias variantes de cualquiera
de las SEQ ID NO. 1 a 3 que tienen hasta 3 sustituciones o
deleciones, seleccionadas dichas sustituciones del grupo que
consiste en sustituciones dentro del gran grupo hidrófobo:
isoleucina, leucina, valina y fenilalanina; sustituciones entre
serina y treonina; sustituciones entre glicina y alanina;
sustituciones entre asparagina y glutamina; sustituciones entre
ácido aspártico y ácido glutámico; o sustituciones entre lisina,
arginina e histidina, y mediante lo cual las sustituciones o
deleciones constituyen menos del 20% en número del número de
aminoácidos.
8. Uso según la reivindicación 7, en el que las
sustituciones o deleciones constituyen menos del 10% en número del
número de aminoácidos.
9. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que
el al menos un péptido es un análogo o mimético que es una secuencia
variante de cualquiera de las SEQ ID NO. 1 a 3 que consiste en al
menos una sustitución dentro del grupo de residuos de valina,
leucina, isoleucina y fenilalanina.
10. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que
el al menos un péptido es un análogo o mimético que es una secuencia
variante de cualquiera de las SEQ ID NO. 1 a 3 que consiste en al
menos una sustitución de un residuo de glicina por un residuo de
alanina o un residuo de alanina por un residuo de glicina.
11. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que
el al menos un péptido es un análogo o mimético que es una secuencia
variante de cualquiera de las SEQ ID NO. 1 a 3 que consiste en al
menos una sustitución entre un residuo de treonina y un residuo de
serina.
12. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que
el al menos un péptido es un análogo o mimético que es una secuencia
variante de cualquiera de las SEQ ID NO. 1 a 3 que consiste en al
menos una sustitución entre un residuo de asparagina y un residuo
de glutamina.
13. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que
el al menos un péptido es un análogo o mimético que es una secuencia
variante de cualquiera de las SEQ ID NO. 1 a 3 que consiste en al
menos una sustitución de residuos de histidina, lisina y
arginina.
14. Uso según la reivindicación 7, en el que el
al menos un péptido se selecciona del grupo que consiste en: SEQ ID
NO. 1, SEQ ID NO. 2 y SEQ ID NO. 3.
15. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
7 a 16, en el que el huésped padece un trastorno hiperglucémico.
16. Uso según la reivindicación 17, en el que el
trastorno hiperglucémico es diabetes tipo I o tipo II.
17. Composición soluble en agua obtenida a
partir de MC6 de Momordica Charantia, caracterizada
porque migra como una única banda inferior a 10 kDa sobre
SDS-PAGE al 20% que comprende tres péptidos, que
muestra actividad hipoglucémica y que es activa mediante
administración oral.
18. Composición farmacéutica que comprende una
cantidad eficaz de la composición soluble en agua según la
reivindicación 19 en un vehículo fisiológicamente aceptable.
\newpage
19. Composición farmacéutica según la
reivindicación 20, en la que el vehículo fisiológicamente aceptable
comprende agua desionizada o solución salina tamponada con
fosfato.
20. Uso de la composición soluble en agua según
la reivindicación 19 en la fabricación de un medicamento para
reducir las glucemias en un huésped.
21. Uso según la reivindicación 22, en el que el
huésped padece un trastorno hiperglucémico.
22. Uso según la reivindicación 23, en el que el
trastorno hiperglucémico es diabetes del tipo I o del tipo II.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US831039 | 1986-02-19 | ||
| US83103997A | 1997-04-01 | 1997-04-01 | |
| US85085597A | 1997-05-02 | 1997-05-02 | |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2310006T3 true ES2310006T3 (es) | 2008-12-16 |
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ID=27125412
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98914405T Expired - Lifetime ES2310006T3 (es) | 1997-04-01 | 1998-04-01 | Fraccion activa por via oral de momordica charantia, peptidos activos de la misma y su uso en el tratamiento de diabetes. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6127338A (es) |
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