ES2304798T3 - Sales de acido (r)-2-(3-benzoilfenil)propionico y preparaciones farmaceuticas que las contienen. - Google Patents

Abstract

SE DESCRIBE UN NUEVO USO DEL ENANTIOMERO (R) - CETOPROFEN Y DE SUS SALES CON BASES ORGANICAS E INORGANICAS ADECUADAS, PARA LA TERAPIA DE ENFERMEDADES DEPENDIENTES DE LOS NEUTROFILOS Y DE PROCESOS FLOGISTICOS, ASI COMO PREPARADOS FARMACEUTICOS QUE CONTIENEN TALES COMPUESTOS Y QUE SON UTILES PARA ADMINISTRACION ORAL, PARENTERAL O TOPICA.

Description

Sales de ácido (R)-2-(3-benzoilfenil)propiónico y preparaciones farmacéuticas que las contienen.

El objeto de la presente invención son las sales enantioméricamente puras de ácido (R)-2-(3-benzoilfenil)propiónico con bases orgánicas aquirales y quirales para la preparación de medicamentos que se utilizan para la terapia de enfermedades inflamatorias dependientes de neutrófilos, tales como psoriasis, fibrosis idiopática pulmonar, insuficiencia respiratoria aguda, daño por reperfusión y glomerulonefritis.

Desde finales de los años ochenta, se sabe que la interleucina 8 (IL-8) es un agonista de neutrófilos potente. Entre otras funciones, la IL-8 induce el flujo de iones de Ca^{++} en los neutrófilos, siendo el aumento en la concentración de Ca^{++} ([Ca^{++}]_{i}) intracelular el episodio inicial que desencadena la activación de los neutrófilos y otros leucocitos, causando la liberación de L-selectina, quimiotaxia y desgranulación subsiguiente en presencia de citoclasina C.

Los datos recurrentes indican que la quimiocina IL-8 estaría implicada en el mantenimiento, el aumento y la ampliación de los síntomas inflamatorios dependientes de los neutrófilos que caracterizan una gran cantidad de enfermedades tales como psoriasis (B.J. Nicholoff et al., Am. J. Pathol. 138, 129, 1991), artritis reumatoidea (M. Seitz et al., J. Clin. Inv. 87,463, 1991), colitis ulcerosa (V.R. Mahida, Clin. Sci. 82, 273, 1992), fibrosis idiopática pulmonar e insuficiencia respiratoria aguda (P. C. Carre et al., J. Clin. Invest. 88, 1802, 1991 y E. J. Miller et al., Am. Rev. Respir. Dis. 146,427, 1992) y también que tiene una función decisiva en la ampliación del daño debido a reperfusión (N. Sekido et al., Nature 365, 654, 1993).

De hecho, se hallaron grandes cantidades de IL-8 en esputo y en fluidos edematosos de pacientes que sufren enfermedades inflamatorias crónicas del aparato respiratorio, incluyendo desde fibrosis quística hasta enfermedades pulmonares obstructivas, como bronquitis crónica, bronquiectasia, atelectasia, todas caracterizadas por la acumulación intrapulmonar de leucocitos polimorfonucleares (PMN) (J. B. Y. Richman-Eisenstat et al., Eur. Respir. J. 6, 1429, 1993 y H. Nakamura et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 149, 1037, 1994).

Las características más evidentes de las enfermedades mencionadas son la infección bacteriana crónica y la acumulación de grandes cantidades de neutrófilos PMN en las vías respiratorias. Los neutrófilos PMN a su vez son responsables de inducir el daño tisular y la hipersecreción. Las infecciones bacterianas recurrentes que caracterizan el curso de la enfermedad, que por lo general es desfavorable, colaboran aumentando estos síntomas. Pseudomonas aeruginosa, uno de los microorganismos infecciosos más contagiosos en dichas enfermedades, se caracteriza por la propiedad de inducir y estimular la producción de IL-8 de células epiteliales del aparato respiratorio, de modo que, contribuyendo a la activación de neutrófilos, empeora el daño tisular, o bien indirectamente, a través de la liberación de enzimas de neutrófilos, como la elastasa y las catepsinas, o directamente, causando la formación de radicales O_{2} y de ácido hipocloroso, es decir, especies citotóxicas (P. P. Massion et al., J. Clin. Inv. 93, 26,1994 y P.J. Jorens et al., 263, 1708, 1993).

En modelos experimentales de glomerulonefritis en conejos, inducida por albúmina bovina o endotoxina, la administración intravenosa de anticuerpos contra IL-8 ha tenido un efecto favorable, como lo demuestran la marcada disminución de la excreción de la proteína urinaria, de 3,2 mg/h a 0,9 mg/h, y la prevención de la fusión del podocito en el glomérulo (T. Wada et al., J. Exp. Med. 180,135, 1994).

En cuanto a otras citocinas, la inhibición selectiva de la síntesis o de la acción de IL-8 puede provocar una ventaja terapéutica; una de las formas posibles de alcanzar dicha meta podría ser neutralizar la actividad de la citocina en los fluidos extracelulares y en la circulación hemática, usando anticuerpos o receptores solubles o proteínas capaces de unirse a la IL-8 como una alternativa al uso de antagonistas de los receptores.

El ácido 4-[3-(4-fluorofenil)]-2-[[4-(N-3-(2-quinolinmetoxi) fenil)]amino]fenilpropilbenzoico (ETH-615), un inhibidor conocido de la síntesis de leucotrienos, inhibió claramente la quimiotaxia de leucocitos PMN inducida por la citocina IL-8 o por el leucotrieno LTB_{4}, pero inhibió solo levemente aquella inducida por la N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (FLMP o fLMP). Incluso aunque no tiene efectos sobre la migración de las células T estimulada por estos agonistas, se ha propuesto recientemente en estudios clínicos para la terapia de enfermedades inflamatorias de la piel, caracterizadas por altos niveles de leucotrienos IL-8 y LTB_{4} (M. Kristensen et al., Exper. Dermatol. 2, 165, 1993).

El aumento de [Ca^{++}]_{i} en neutrófilos PMN es el evento que marca e induce su activación tras la estimulación provocada por diferentes agonistas que incluyen, entre otros, estimulantes endógenos, el leucotrieno LTB_{4}, los factores PAF y C5a del complemento, además de la IL-8 y el tripéptido sintético N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (FLMP). La transducción de la señal, tanto en los niveles receptores y post-receptores, que causa un aumento de [Ca^{++}]_{i} en las células, depende del estímulo, y la producción del anión superóxido puede tomarse como medida de dicha activación.

La leumedina o N-Fmoc-L-leucina (NPC-15669), que pertenece a una serie Fmoc-aminoácido, inhibió el aumento de [Ca^{++}]_{i} estimulado por FLMP pero no el aumento de [Ca^{++}]_{i} estimulado por cualquier otro agonista en neutrófilos PMN (R.J. Smilth et al., Brit. J. Pharmacol. 114, 1694, 1995). Se han descrito otras leumedinas que inhiben la acumulación de neutrófilos mediada por IL-8 en el aparato respiratorio de perros (P.C. Jorensen et al., Europ. Respir. J. 7, 1935, 1994).

Se sabe además que los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), si bien inhiben la síntesis de prostaglandinas (PG), no interfieren con la producción y liberación de quimiocinas quimiotácticas MCP-1 y IL-8. Por el contrario, en un estudio comparativo, se halló que la dexametasona, en un modo óptimo, y algunos otros fármacos antirreumáticos, como metotrexato y tiomalato de sodio, en un modo subóptimo, inhiben la liberación de estas citocinas, pareciendo indicar así que parte de la actividad antirreumática de los glucocorticoesteroides puede deberse a la prevención de la acumulación de citocinas quimiotácticas que actúan sobre los neutrófilos y los monocitos (P. Loetscher et al., Cytokine 6, 162, 1994).

Por lo tanto, por ejemplo, en células sinoviales humanas, la producción de IL-8 estimulada por la interleucina 1 y el TNF-a, no fue inhibida por los agentes antiinflamatorios no esteroideos usuales, como el ácido tioprofénico, indometacina, naproxeno y piroxicam (P. Loetscher et al., Cytokine 6, 162, 1994).

La formación de un edema en un sitio inflamado parece necesitar la presencia contemporánea de IL-8 y PGE_{2}, mientras que los cofactores individuales, administrados por la vía intradérmica, no pudieron causar la formación de edemas, incluso si se había descrito un determinado efecto pro-edematoso para la citocina IL-8 sola (I. Colditz, id idem 134 , 755, 1989).

El uso de (\pm)ibuprofeno, o ácido p-isobutilhidratrópico, y de (\pm)flurbiprofeno, o ácido 3-fluoro-4-fenildratrópico, como también sus correspondientes ésteres alquílicos C1-8 y el uso de sus sales farmacéuticamente aceptables, se ha descrito y reivindicado para el tratamiento de enfermedades respiratorias, particularmente en el tratamiento de la insuficiencia respiratoria aguda en el documento EP 070 714 (07.05.1986).

El (\pm)cetoprofeno, (\pm)ibuprofeno y (\pm)flurbiprofeno, y el naproxeno, son ejemplos de AINE muy utilizados en la terapia de una diversidad de enfermedades. El cetoprofeno, ibuprofeno y flurbiprofeno se utilizan como racematos, mientras que el naproxeno se utiliza solamente en la forma del enantiómero (S). Las enfermedades tratadas incluyen, además de dolor de muela y otros síntomas dolorosos, inflamación aguda, enfermedades reumáticas y degenerativas de las articulaciones, adherencia de plaquetas de la sangre y, en el caso del ibuprofeno, también infarto cardíaco.

Se cree que, de modo similar al ácido acetilsalicílico, la potencia y eficacia terapéutica de estos ácidos 2-arilpropiónicos se debe a su propiedad común de inhibir la enzima cicloxigenasa (CO) que transforma el ácido araquidónico en PG inflamatorias algogénicas, de las cuales la PGE_{2} es el modelo más representativo.

Las PG tienen una función importante en la producción del dolor, la inflamación y la fiebre y, en consecuencia, los compuestos anteriormente mencionados se usan como analgésicos, antiinflamatorios y antipiréticos.

Cuando se administran como una dosis única o como terapia intermitente a corto plazo, proporcionan analgesia adecuada y pueden aliviar el dolor de intensidad leve a moderada, mientras que, en la mayoría de los casos, es necesario administrarlos durante varios días o incluso durante semanas, para obtener un efecto antiinflamatorio claro.

Incluso aunque se hayan publicado varios estudios comparativos entre compuestos antiinflamatorios no esteroideos individuales o estudios que comparan un compuesto individual con muchos otros, no existe una comparación general que permita establecer una lista de orden de eficacia. Usualmente, se cree que existen solamente pequeñas diferencias en actividad, y la opción del fármaco por parte de los médicos en general se realiza según una base empírica. Además, las respuestas individuales de los pacientes pueden variar en gran medida unas de otras, de manera que si un paciente no responde a un fármaco determinado, puede ser tratado con otro. No obstante, se recomienda el uso de AINE con el más bajo riesgo de toxicidad gastroentérica y en la dosis activa mínima.

Más recientemente, se ha supuesto que los AINE actúan a través de la inhibición de dos isoformas de la cicloxigenasa (COX-1 y COX-2); la inhibición de COX-1 estaría asociada con los efectos colaterales gastroentéricos que algunas veces se observan en el tratamiento con los ácidos arilacético y 2-arilpropiónico, mientras que aquellos AINE que son altamente selectivos contra COX-2 presentarían menos toxicidad gastroentérica (Martindale, The Extra Pharmacopoeia, 31 Ed., 72, 1996).

El proceso de inhibición enzimática de las dos isoformas de CO, es decir COX-1 y COX-2, y en consecuencia el bloque de PG pro-inflamatorias, pro-algogénicas y pro-piréticas, es un proceso estereoespecífico.

Solamente los enantiómeros (S) de los ácidos 2-arilpropiónicos, que inhiben la producción de PGE_{2}, se consideran eficaces como agentes antiinflamatorios (D. Mauleon et al., Drugs 52, 24, 1996).

Los enantiómeros (R) prácticamente no tienen ningún efecto en la síntesis de enzimas y PG; se observa cierta actividad solamente en concentraciones muy altas, de 100 a 1000 veces mayores que aquellas del enantiómero, y mayores que los niveles sanguíneos obtenidos después de la administración de estas sustancias (10^{-9}-10^{-6}M). Por consiguiente, los enantiómeros (R) de ácidos 2-arilpropiónicos se consideraron, durante un largo período de tiempo, desprovistos de toda utilidad terapéutica de interés.

En realidad, se convierten in vivo, particularmente en el hígado y solamente en cantidades insignificantes en otros tejidos, tales como macrófagos peritoneales de ratón, en los enantiómeros (S), a través de la activación estereoselectiva de sus tio-ésteres por medio de CoA (S.Menzel-Soglowek et al., Biochem. Pharmacol. 43,1487,1992) y por lo tanto contribuyen a la actividad global del racemato. El grado en el cual tiene lugar dicha bioconversión in vivo depende de la especie animal y de la estructura química del compuesto. Por lo tanto, por ejemplo, los enantiómeros (R) de ibuprofeno se convierten casi completamente en los enantiómeros (S) en el hombre y en la rata, mientras que los enantiómeros (R) de flurbiprofeno y cetoprofeno prácticamente no se convierten (<5%) en el hombre y en el cobayo, pero se convierten completamente en la rata (K. Brune et al., Experientia 47, 257, 1991; K. Brune et al, J. Clin, Pharmacol. 32, 944, 1992).

En el documento WO9809603 se describen composiciones farmacéuticas que contienen enantiómeros (R) puros de AINE, entre ellos el cetoprofeno, opcionalmente salificado con bases orgánicas, para el tratamiento y la prevención de enfermedades neoplásicas y el tratamiento de fibrosis quística. El (R)cetoprofeno, prácticamente libre de su enantiómero (S), opcionalmente salificado con una base adecuada, está contenido en las composiciones farmacéuticas descritas para uso como analgésicos en los documentos W093/16689 y USP 5.331.000 y, en esta última patente, el (R)cetoprofeno también se describe para tratar la pirexia. El documento WO94/20449 describe sales de (S) y (R)cetoprofeno con bases orgánicas aquirales y quirales, como también sus composiciones farmacéuticas para uso como agentes antiinflamatorios.

La rata ha sido siempre la especie preferida para los modelos experimentales usuales de inflamación, algesia e hiperalgesia. No obstante, en base a estudios recientes que muestran un alto índice de conversión enantiomérica de ácidos 2-arilpropiónicos en esta especie, no parece muy adecuada, ya que no permite predecir la actividad real de estos compuestos en el hombre, en quien la conversión puede no tener lugar u ocurrir solamente en un grado muy bajo. De hecho, solo recientemente se demostró que los enantiómeros (R) de dichos ácidos 2-arilpropiónicos que, al igual que el flurbiprofeno y el cetoprofeno, no son metabólicamente activados en el hombre, inhiben la percepción de dolor en el hombre con una eficacia por lo menos similar a aquella de los enantiómeros (S) (K. Brune et al., Experientia, 1991).

Con el fin de predecir el efecto terapéutico de los racematos en el hombre, es necesario saber cuánto contribuyen los enantiómeros individuales a la actividad global, usando modelos experimentales que excluyan la bioconversión metabólica. Esto es posible empleando al cobayo en lugar de la rata como especie animal experimental en el modelo experimental clásico de inyección de carragenina subplantar en la garra derecha (P. Ghezzi et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1997). Este modelo posibilita la evaluación contemporánea de la inhibición de la formación de edema y de hiperalgesia.

Las sales de L-lisina de (S)- y (R)-cetoprofeno se evaluaron mediante la prueba en el cobayo anteriormente mencionada en comparación con la sal de L-lisina de racemato de cetoprofeno que usa indometacina, un ácido arilacético aquiral, como patrón interno positivo. En el intervalo de dosis de 25 a 750 mmoles/kg, la sal del enantiómero (S) inhibió la formación de edema en un modo dependiente de la dosis, alcanzando un efecto estadísticamente significativo a 75 mmoles/kg y el efecto máximo a 250 mmoles/kg, y demostrando menos efecto con dosis más altas. Además, la sal del enantiómero (R) inhibió significativamente la formación de edema, pero solo comenzando por una dosis de 250 mmoles/kg; la actividad fue dependiente de la dosis también en este caso, aunque con una pendiente diferente de la curva de dosis y efecto, indicando así un mecanismo de acción distinto. Por el contrario, la sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno mostró un acentuado efecto inhibidor dependiente de la dosis sobre la hiperalgesia en dosis de 75 a 250 mmoles/kg. Este efecto fue máximo en la dosis más alta. La sal de L-lisina de (S)-cetoprofeno exhibió solamente un efecto inhibidor leve sobre la hiperalgesia, que fue estadísticamente significativo únicamente en la dosis más alta de 750 mmoles/kg. Los efectos anti-edema y anti-hiperalgesia de la sal de L-lisina del racemato fueron constantemente intermedios entre aquellos evaluados para los dos enantiómeros tomados solos, indicando de este modo que, en ausencia de cualquier bioconversión del enantiómero (R), la actividad global del racemato se atribuye al enantiómero (S) en lo que respecta a la actividad anti-edema y al enantiómero (R) en lo que respecta a la inhibición de la hiperalgesia. Esta conclusión coincide en gran medida con lo publicado en el trabajo de K. Brune anteriormente mencionado.

El cobayo es una especie naturalmente resistente a la acción gastrolesiva de los AINE, de modo que no es posible comparar los dos enantiómeros con respecto a este parámetro en esta especie, a menos que sea usando dosis muy altas, sin valor diagnóstico. Con este fin, la rata es necesariamente una vez más la especie elegida, aunque la menos adecuada. Los resultados de un estudio comparativo de sales de L-lisina de (S)- y (R)-cetoprofeno que usa este modelo animal, demostraron claramente que el enantiómero (R) tiene menos propiedades inductoras de úlceras. Las diferencias entre los enantiómeros y el racemato fueron estadísticamente significativas comenzando por la dosis de 40 mmoles/kg: en esta dosis se evaluó una "puntuación de úlcera" de 2 para el enantiómero (R), en comparación con las "puntuaciones de úlcera" de 3 y 4 para el racemato y el enantiómero (S), respectivamente.

Una evaluación paralela de los efectos inhibidores de las sales de L-lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno y de la sal de L-lisina de cetoprofeno racémico sobre la PGEZ estimulada por lipopolisacáridos, liberación de TNF-a y IL-1b de macrófagos peritoneales de ratón permitió una interpretación interesante de la cuestión descrita anteriormente. La sal de L-lisina de (S)-cetoprofeno inhibió la formación de PGEZ dentro del intervalo completo de dosificación de 10^{-6}-10^{-9} M,
mientras que se observó el mismo efecto para (R)-cetoprofeno únicamente en el intervalo de 10^{-6}-10^{-5} M. Por otra parte, sorprendentemente, las sales de L-lisina de (S)-cetoprofeno y del racemato estimularon la formación de TNF-a e IL-lb en un modo dependiente de la dosis, alcanzando la significación estadística en el intervalo de 10^{-8}-10^{-6} M en el caso de TNF-a, y una concentración de 10^{-5} M en el caso de IL-lb. Por el contrario, la sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno fue absolutamente ineficaz y no estimuló la liberación de estas citocinas dentro del intervalo de concentración total de 10^{-9}-10^{-5} M. De manera especulativa, la baja tolerabilidad gástrica de las sales de lisina de (S)- cetoprofeno y de cetoprofeno racémico podría ser la consecuencia directa de la estimulación de liberación de TNF-a ("elevación") (C.B. Appleyard et al., Am. J. Physiol., 270, G-42,1996) en vez del bloqueo de la síntesis de PGEZ, como se creía hasta ahora. Además, la "elevación" del TNF-a puede proporcionar una comprensión clave de la eficacia inferior de la sal del racemato y de la sal del (S)-cetoprofeno, en comparación con la sal del enantiómero (R), en el control de la hiperalgesia, por el simple hecho de que este último enantiómero, a diferencia de los anteriores, no amplía la formación de las citocinas inflamatorias.

Estos resultados concuerdan en gran medida con aquellos obtenidos en un estudio comparativo sobre la actividad antiinflamatoria del cetoprofeno racémico y de los enantiómeros individuales en la prueba del eritema epidérmico inducido por radiación ultravioleta en cobayos. Se calculó que la protección obtenida por el uso del enantiómero (R) fue de 53,1 \pm 4,6%, bastante similar y de significación estadística (p<0,05) con respecto a aquella obtenida con el cetoprofeno racémico (56,1 \pm 3,1), e inferior a aquella obtenida con el enantiómero (S) (73,4 \pm 4,0 %). No obstante, los resultados totales obtenidos en otros modelos experimentales de inflamación, como el edema inducido por carragenina en la rata y el edema de oído inducido por aceite de crotón en el ratón, posibilitan que los autores concluyan que la eficacia antiinflamatoria in vivo del enantiómero (R) fue significativamente inferior que aquella del racemato y del enantiómero (S).

Svesc et al. (Chirality, 5,589,1993) arribaron a conclusiones similares en base a la inhibición de la síntesis de TBX_{2} en leucocitos PMN humanos y en plaquetas de rata. En esta prueba, el (R)-cetoprofeno estuvo activo en dosis 2-3 veces mayores que el enantiómero (S) y el racemato.

Por el contrario, en el modelo de inflamación inducida por ácido en la rata, la producción de interleucina IL-8 se redujo significativamente (p <0,1) de 53,8 pg/ml a 22,4 y 16,9 pg/ml después de la administración de 200 y 100 mg/kg de (\pm)cetoprofeno, respectivamente (L.M. Wang et al., Drugs Exper. Clin. Res., 23, 1, 1997).

En un estudio en pacientes con artritis reumatoidea inicial, la administración de 200 mg de cetoprofeno durante 10 días causó la normalización del aumento del índice quimiotáctico y la adherencia, y una reducción de la fagocitosis de los leucocitos PMN, mientras que la función bactericida no se vio afectada. Además, la actividad quimiotáctica inducida por zymosan, un activador del complemento, se inhibió tanto en voluntarios sanos como en los pacientes estudiados (E. Bacino et al., Clin. Exper. Reumatol., 5, 50, 1987).

Sucesivamente, la cuestión de una actividad antiinflamatoria de los AINE independiente de la inhibición de la síntesis de PG se analizó y estudió ampliamente en relación con la inhibición de la actividad de los neutrófilos PMN humanos y con los mecanismos que regulan la función de estas células, que aún prácticamente se desconocen. Entonces, por ejemplo, se creía que los fármacos como el cetoprofeno, flurbiprofeno, sudoxicam, fenofreno e indometacina, después de la administración oral, inhibían la formación inducida por carragenina del exudado pleural en la rata, debido a su capacidad de inhibir la migración de células PMN, pero no aquella de los monocitos, hacia la cavidad pleural (A. Blackam and R.T. Owen, J. Pharm. Pharmacol., 27, 201, 1975). Pero luego se demostró exactamente lo opuesto para algunos de los fármacos, entre ellos, el cetoprofeno (S. C. R. Meacockand E. Ann Kitchen, Future Trends Inflammation, Proc. Int. Meet., 2a (1975)320, J. P. Giroud et al, Ed, Birkhaeuser, Basel).

Más recientemente, se suponía que en el caso de los fenamatos, un subgrupo particular de AINE, como los ácidos flufenámicos y tolfenámicos, la inhibición de la activación de neutrófilos inducida por el ionóforo Ca^{++} y por el péptido quimiotáctico FLMP (N-formil-metionil-leucil-fenilalanina) se debía al bloqueo de la entrada del ión de Ca^{++}, como lo indican los resultados de ensayos que evalúan el flujo de iones Mn^{++} y ^{45}Ca^{++}. Los fenamatos parecen especiales en este sentido, en comparación con otros AINE, ya que el cetoprofeno, que se toma como el inhibidor típico de la síntesis de prostanoides, fue completamente inactivo como la nifedipina, un inhibidor de los canales de Ca^{++} independientes del voltaje y, a diferencia de 1-[2-(4-metoxifenil-2-[3-(4-metoxifenil)propoxi]etil]I H-imidazol (SK&F 96365), un bloqueador del canal de Ca^{++} selectivo (H. Kankaanranta and E. Moilanen, Molec. Pharmacol., 47, 1006, 1995).

Se ha descubierto ahora, y es el objeto de la presente invención, que las sales de (R)- y (S)-cetoprofeno con bases orgánicas quirales y aquirales inhiben, en un modo dependiente de la dosis, a concentraciones entre 10^{-9} y 10^{-6} M, correspondientes a niveles sanguíneos observados en el hombre después de la administración de dosis terapéuticas, el aumento de la concentración de iones de Ca^{++} intracelulares inducido por IL-8 en leucocitos PMN humanos.

La Tabla 1 muestra los resultados obtenidos usando, en el modelo experimental descrito por C. Bizzarri et al. (Blood, 86,2388, 1995), las sales diastereoisoméricas de L-lisina con (R)- y (S)-cetoprofeno, preparadas según lo indican E. Bosone et al. en la patente WO 94/20449 (15.09.94).

TABLA 1 Efecto dependiente de la dosis de las sales de L-lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno sobre el aumento de [Ca^{++}]_{i} inducido por IL-8

1

\vskip1.000000\baselineskip

Los resultados indicados en la Tabla 1 son datos acumulativos obtenidos de 8 ensayos (8 donantes que dieron su consentimiento explícito, 3 a 7 células por muestra). Los leucocitos se consideraron sensibles a la estimulación de IL-8 cuando [Ca^{++}]_{i} aumentó por lo menos 34% del valor basal (estandarizado como 100%). Las respuestas, expresadas como porcentaje del valor basal de [Ca^{++}]_{i}, son la media entre todas las células sensibles; también se indican el error estándar de la media (\pm SEM) y el número de replicaciones (entre paréntesis). En cada grupo experimental, el porcentaje de células no sensibles fue inferior a 30%, excepto en el caso del pretratamiento con 10^{-6} M concentraciones de los fármacos. La concentración de IL-8 fue de 50 ng/ml.

Los efectos inhibidores exhibidos por los fármacos estudiados sobre la respuesta a la estimulación de IL-8 se consideran una consecuencia directa del bloqueo selectivo del flujo de entrada de iones de Ca^{++} a los leucocitos PMN, según lo indica un estudio de competencia comparativo con iones de lantano en presencia de IL-8 (véase Tabla 2), en lugar de una consecuencia de una interacción con los receptores o de un efecto sobre la expresión de los receptores, es decir, el número de receptores.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 Función de los canales de Ca^{++} en la acción inhibidora de las sales de L-lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno sobre el aumento de [Ca^{++}]_{i} inducido por IL-8

2

\vskip1.000000\baselineskip

Los resultados indicados en la Tabla 2 son valores acumulativos de 3 ensayos (3 donantes, 3-7 células por muestra). Los neutrófilos PMN humanos se consideraron sensibles a la estimulación de IL-8 cuando el [Ca^{++}]_{i} aumentó por lo menos 34% del valor basal (estandarizado hasta 100%). Las respuestas se expresan como el porcentaje del valor de [Ca^{++}]_{i} basal y son la media entre los valores de todas las células sensibles. También se indican el error estándar de la media (SEM) y el número de replicaciones (entre paréntesis). El porcentaje de células no sensibles estuvo dentro de 30% para todos los grupos experimentales. La concentración de sal de L-lisina de cetoprofeno fue 10^{-8} M, aquella de La^{+++} 10 \muM, y aquella de IL-8 50 ng/ml.

Los resultados obtenidos demuestran una nueva propiedad de los compuestos estudiados, no conocida hasta el momento, a saber, que actúan en el nivel post-receptor como antagonistas del aumento de [Ca^{++}]_{i}, que depende de la apertura de los canales de las membranas (este proceso se previene con las sales de lantano), de modo que se evita la secuencia de eventos inducidos por IL-8 en neutrófilos a través del efecto primario del aumento de [Ca^{++}]_{i}. Dicha secuencia de eventos, también llamada activación neutrófila, consiste en la desgranulación de los neutrófilos seguida de la liberación de elastasa, catepsina y otras enzimas, y de quimiotaxia.

En la Figura 2, se indican gráficamente los resultados de ensayos que demuestran los efectos inhibidores específicos de las sales de lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno y de las sales de lantano sobre la desgranulación de neutrófilos PMN humanos.

\vskip1.000000\baselineskip

3

\vskip1.000000\baselineskip

Los neutrófilos PMN humanos (10^{7}/ml) se estimularon en presencia de citoclasina B (10^{-5} M) añadiendo IL-8 (50 ng/ml) e incubándolos durante 30 min a 37ºC. Se añadió La^{+++} 5 min antes que la IL-8, y las sales de lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno 15 min antes que la IL-8. La desgranulación se evaluó en base a la cantidad de elastasa liberada en el sobrenadante libre de células y se expresa como DODx10^{3}/min.

Los resultados, indicados como la desviación estándar de la media (mean \pm SD) de 3 ensayos independientes
(** p <0,05 contra IL-8), muestran un efecto paralelo de las sustancias estudiadas y concuerdan absolutamente con el mecanismo de acción propuesto.

En la Figura 3, se muestran los resultados de los ensayos que demuestran los efectos inhibidores específicos de las sales de lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno sobre la migración quimiotáctica estimulada por IL-8. Además, se descubrió que los efectos de estos fármacos no estaban limitados a la quimiotaxia estimulada por IL-8, sino que también se exhibían, sorprendentemente, en el proceso inducido por otros estimulantes fisiológicos (C5a) y no fisiológicos (FMLP) que actúan, aunque en formas distintas, a través de las variaciones en [Ca^{++}]_{i}.

Los neutrófilos se incubaron a 37ºC en presencia o ausencia (columna blanca) de sales de lisina de (R)-y (S)-cetoprofeno (10^{-6} M) durante 10 min; se evaluó luego su capacidad para migrar en respuesta a los estimulantes de CaS, FLMP y IL-8. Los resultados se expresan como la desviación estándar de la media (mean \pm SD) de 3 ensayos separados (** p <0,01 contra cada grupo).

4

En la Tabla 3, se indican los resultados que muestran la acción antagonista del Ca (intencionada como inhibición del aumento de [Ca^{++}]_{i} de las sales de L-lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno contra los estimulantes no fisiológicos y fisiológicos FLMP (10^{-7}M) y C5a (10^{-8}M). Los valores son acumulativos de 6 ensayos (6 donantes, 3-7 -células por muestra). Los neutrófilos PMN humanos se consideraron sensibles a la estimulación por FLMP y C5a, uno de los componentes del complemento, si el aumento de [Ca^{++}]_{i} era mayor que 34% del valor basal (que se estandarizó hasta 100%). Los resultados se expresan como porcentaje del valor basal de [Ca^{++}]_{i} y son la media de los valores de todas las células sensibles. También se indican el error estándar de la media (SEM) y el número de replicaciones (n, entre paréntesis). El porcentaje de células no sensibles fue 0 en el caso de estimulación FLMP y 50% en el caso de estimulación C5a y del tratamiento con las sales de L-lisina de (R)- y (S)-cetoprofeno.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 3 Efecto de las sales de L-lisina de (R) - y (S) - cetoprofeno sobre el aumento de [ca^{++}]_{i} inducido por FMLP y C5a

\vskip1.000000\baselineskip

5

Los datos anteriormente expuestos demuestran claramente que las sales de L-lisina de los dos enantiómeros (R)- y (S)-cetoprofeno actúan como inhibidores de quimiotaxia inducida por IL-8 hacia el sitio de inflamación y de desgranulación de los neutrófilos humanos, previniendo el aumento en [Ca^{++}]_{i} inducido por este estimulante en estas células. La inhibición de este efecto específico de la IL-8, como también del aumento de [Ca^{2+}]_{i} inducido por el complemento (C5a) y por FMLP, es una marca específica, como el incremento en [Ca^{2+}]_{i} es la señal que desencadena la activación de neutrófilos para ampliar y sostener la inflamación, independientemente del estímulo flogístico, que puede ser bacteriano o no. El efecto de los dos enantiómeros es el mismo y, por lo tanto, no depende de la configuración estérica del sustituyente metilo de este ácido 2-arilpropiónico. Además, la acción inhibidora es también completamente independiente de la base orgánica utilizada para la formación de la sal; si se desea, la base puede escogerse entre D-lisina, arginina, levodropropizina y dextrodropropizina y/o bases orgánicas aquirales farmacéuticamente adecuadas, tales como las comúnmente utilizadas en tecnología farmacéutica, a saber, glucamina, trometamina, dietilamina, imidazol y glicina.

El (R)-cetoprofeno y sus sales difieren del cetoprofeno racémico y del enantiómero (S) y sus sales debido a que no inhiben las enzimas CO (COX-1 y COX-2) y, por lo tanto, están sustancialmente desprovistos de los efectos biológicos asociados a la inhibición de estas isoformas de la enzima, como lo son la acción gastrolesiva y la acción inhibidora sobre la agregación plaquetaria. En este sentido, tomando la inhibición de la síntesis de TXB2 en la sangre humana como el índice de las propiedades antiagregantes de plaquetas de los compuestos, se calculó que las concentraciones que inhiben por 50% dicha síntesis (CI_{50}) eran 0,42\pm0,04, 0,16\pm0,04 y 9,75\pm0,75 mM para cetoprofeno racémico, (S)-cetoprofeno y (R)-cetoprofeno, respectivamente, por lo tanto de acuerdo con su potencia para inhibir la isoforma COX-1 de la cicloxigenasa.

Por lo tanto, el (R)-cetoprofeno y sus sales son más adecuados que el (S)-cetoprofeno y el cetoprofeno racémico para la preparación de formulaciones. farmacéuticas útiles para el tratamiento de enfermedades inflamatorias dependientes de neutrófilos, tales como psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, insuficiencia respiratoria aguda, daño por reperfusión y glomerulonefritis; su uso para los usos ya mencionados es completamente nuevo e inespe-
rado.

La síntesis de cetoprofeno racémico puede realizarse comenzando por 4-benzoil-2-(1-metilprop-2-en-1-il)fenol de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente italiana nº MI96A 001683 presentada el 02/08/1996 en nombre del solicitante. La separación óptica de los dos enantiómeros de cetoprofeno y la posterior preparación del las sales enantioméricamente puras de (R)-cetoprofeno con bases orgánicas quirales y aquirales se puede realizar de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente WO 94/20499 presentada el 15/09/1994 en nombre del solicitante. Esta patente incluye también las preparaciones farmacéuticas que contienen dichas sales.

Los compuestos particularmente preferidos para los usos previstos en la presente invención son (R)-cetoprofeno como el ácido libre y sus sales con bases inorgánicas y orgánicas farmacéuticamente aceptables. Más particularmente, se prefieren las sales de (R)-cetoprofeno con bases orgánicas aquirales tales como trometamina y con bases orgánicas quirales elegidas entre L-lisina, D-lisina, L-arginina, (R)- y (S)-3-(4-fenilpiperazin-1-il)propan-2,3-diol. La preparación de estas entidades químicas individuales y su uso para la formulación de composiciones farmacéuticas que las contienen en la forma de comprimidos, cápsulas, polvos granulados, polvos, soluciones, cremas, pomadas, supositorios, espumas y pulverizaciones, líquidos, gotas y soluciones estériles inyectables, ya se han descrito. El alcance de la presente invención incluye además preparaciones improvisadas de las sales anteriormente mencionadas obtenidas salificando cantidades determinadas de (R)-cetoprofeno con cantidades equimoleculares de un aminoalcohol farmacéutico comúnmente utilizado. Los aminoalcoholes útiles para la salificación improvisada se seleccionan del grupo que consiste en etanolamina, 3-amino-1-propanol, (R)-1-amino-2-propanol, (S)-1-amino-2-propanol, 2-amino-1,3-propandiol, N-(2-hidroxietil)pirrolidina, D-glucamina y L-prolinol, D-glucosamina y N-metilglucosamina. La salificación improvisada puede llevarse a cabo en agua, en disolventes hidroalcohólicos, preferiblemente etanol acuoso, o en alcoholes de bajo peso molecular tales como metanol y etanol.

La cantidad de fármaco activo, en términos de ácido libre de cetoprofeno, que se administrará diariamente depende de la vía de administración, la edad y el estado de salud del paciente.

En el caso de administración oral, la dosis diaria oscila entre 15 y 200 mg y puede administrarse dividida en múltiples dosis o como una dosis única en el caso de formulaciones de liberación controlada. En el caso de administración por inyección, la dosis diaria oscila entre 5 y 100 mg y puede eventualmente dividirse, si se desea, en + múltiples dosis. Para administración tópica, son adecuadas las concentraciones de 0,5 a 10%. En el caso de administración sublingual, las dosis únicas de 5 a 50 mg pueden administrarse hasta una dosis diaria total que no exceda 200 mg. Las dosis únicas de 5 a 100 mg pueden administrarse por aerosol hasta alcanzar 800 mg como dosis diaria total mediante esta vía. Las concentraciones de 0,1 a 2% se prevén para administración como pulverización nasal, mientras que las concentraciones de 5 a 10% se utilizan para la preparación de formulaciones para enjuague
bucal.

En el caso de formulaciones de liberación lenta de (R)-cetoprofeno y de sus sales, es posible combinar, en la misma formulación, una forma de liberación lenta del fármaco activo con una forma de liberación inmediata.

Ambos tipos de formulaciones se conocen en la técnica y se preparan usando métodos convencionales.

En dichas formulaciones, la masa de soporte, que constituye entre 10 y 80% del total, puede consistir en excipientes tales como lactosa, celulosa microcristalina, celulosa en polvo, almidón y diversas maltodextrinas, hidrógeno-fosfato calcio, sílice y sus mezclas en presencia de sustancias aglutinantes (a una concentración de 2 a 10%), tales como polivinilpirrolidona, alginatos, carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa de almidón, en presencia o ausencia de lubricantes, a una concentración entre aproximadamente 1 y 5%.

\newpage

Ejemplo 1

Un comprimido de sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno contiene, en miligramos:

sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno *

100

polivinilpirrolidona insoluble

10

celulosa microcristalina

125

estearato de magnesio

10

* el contenido de fármaco activo puede oscilar entre 23 y 315 mg por comprimido.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2

Una solución inyectable de sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno distribuida, bajo flujo de nitrógeno, en viales sellados contiene, en mg por ml de solución acuosa:

sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno

80

ácido cítrico

2,5

hidrato de sodio

1,5

el pH de la solución está en el intervalo de 7,0-7,5.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 3

A una suspensión de 762,8 g (3 moles) de (R)-cetoprofeno finamente distribuida en 3 l de agua estéril previamente desaireada se le añadió, bajo agitación y burbujeo de nitrógeno, una solución de 543,57 g (3 moles) de D-glucamina en 1 l de agua estéril previamente desaireada bajo agitación hasta completar la solución.

Luego se diluyó la masa mediante una solución que contenía 37,5 g de ácido cítrico (aproximadamente 0,195 moles) y 22,5 g de hidrato de sodio (0,5625 moles) en 8 l de agua estéril previamente desaireada. Si era necesario, se añadía hidróxido de sodio a la solución obtenida hasta un valor de pH entre 7,0 y 7,5. Se ajustó hasta un volumen final de 15 l y se agitó para asegurar que la solución estuviese completamente homogénea. Luego se filtró, a presión y nitrógeno, a través de filtros de 0,22 mm, se vertió en recipientes adecuados protegidos contra luz y radiación UV, y se dejó introducir en la máquina de llenado para repartición a viales de vidrio, de la capacidad deseada, que sucesivamente se sellaron en flujo de nitrógeno.

La composición de la solución inyectable obtenida es, en mg por ml de solución:

sal de D-glucamina de (R)-cetoprofeno

80,42

ácido cítrico

2,5

hidrato de sodio

1,5

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4

Se obtienen soluciones inyectables que contienen las sales de (R)-cetoprofeno relevantes usando, para salificación improvisada, en lugar de D-glucamina como en el Ejemplo 3, cantidades equimoleculares de una amina farmacéuticamente adecuada seleccionada entre etanolamina, 3-amino-1-propanol, (R)-1-amino-2-propanol, (S)-1- amino-2-propanol, 2-amino-1,3-propandiol, N-(2-hidroxietil)pirrolidina, D-glucosamina y L-prolinol y N-metilglucosamina.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5

Se disuelven 100 ml de agua desmineralizada, 3 g de polivinilpirrolidona, 3 g de sacarinato de sodio y 11,75 g de D-glucosamina. Después de la solubilización, se añaden 16,67 g de (R)-cetoprofeno y se agita hasta completar la disolución.

\newpage

Esta solución, si se desea, puede usarse como fase de unión en los procedimientos de granulación que prevén el uso de granuladores de tipo lecho fluido o "mezcladora de cizalladura superior" como también de una mezcladora para granulación húmeda.

En un procedimiento de granulación de lecho fluido, la solución de unión anteriormente mencionada se rocía en una mezcla de excipientes que tiene la siguiente composición, en gramos:

manitol

335

sacarosa

600

glicirricinato de amonio

13

cloruro de sodio

7

saborizante

10

El polvo granulado resultante se seca hasta un contenido de agua inferior a 1% y luego se calibra mediante un tamiz vibrador con malla de 1 mm; si se desea se puede dividir en sobres de 3 g.

Ejemplo 6

Se obtienen polvos granulados que contienen, como fármacos activos, las sales de (R)-cetoprofeno relevantes usando, para salificación improvisada, en lugar de D-glucosamina como en el Ejemplo 5, cantidades equimoleculares de una amina farmacéutica adecuada seleccionada del grupo de etanolamina, 3-amino-1 -propanol, (R)-1-amino-2-propanol, (S)-1-amino-2-propanol, 2-amino-1,3-propandiol, N-(2-hidroxietil)pirrolidina, D-glucamina y L-prolinol y N-metilglucosamina.

Claims (7)

1. El uso del enantiómero (R)-cetoprofeno, opcionalmente salificado con una base adecuada seleccionada del grupo que consiste en bases inorgánicas y bases orgánicas quirales y aquirales, para la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades dependientes de neutrófilos y procesos flogísticos, caracterizados por quimiotaxia inducida por IL-8, como psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, insuficiencia respiratoria aguda, daño por reperfusión y glomerulonefritis.

2. El uso de sales de (R)-cetoprofeno con una base adecuada seleccionadas del grupo que consiste en bases orgánicas quirales y aquirales para la preparación de medicamentos para el tratamiento enfermedades dependientes de neutrófilos y procesos flogísticos, caracterizados por quimiotaxia inducida por IL-8, como psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, insuficiencia respiratoria aguda, daño por reperfusión y glomerulonefritis.

3. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que la sal de (R)-cetoprofeno es la sal de L-lisina de (R)-cetoprofeno.

4. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que la sal de (R)-cetoprofeno es la sal de dextrodropropizina de (R)-cetoprofeno.

5. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que la sal de (R)-cetoprofeno es la sal de levodropropizina de (R)-cetoprofeno.

6. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que la sal de (R)-cetoprofeno es la sal de D-glucamina de (R)-cetoprofeno.

7. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el medicamento es para administración tópica, parenteral y oral.