ES2291372T3

ES2291372T3 - Agonistas y antagonistas de urotensina-ii.

Info

Publication number: ES2291372T3
Application number: ES01987763T
Authority: ES
Inventors: David H. Coy; Wojciech J. Rossowski; John E. Taylor
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS; Tulane University
Current assignee: Ipsen Pharma SAS; Tulane University
Priority date: 2000-10-20
Filing date: 2001-10-19
Publication date: 2008-03-01
Anticipated expiration: 2021-10-19
Also published as: MXPA03003297A; HK1059938A1; DE60130802T2; EP1355940B1; AU3290302A; EP1355940A2; KR20060090768A; IL155127A0; CA2425804A1; ATE374786T1; CZ2003900A3; JP2005500244A; US20070287665A1; ZA200302505B; KR100820896B1; CZ299402B6; HUP0301384A2; US20050075480A1; KR20060090843A; WO2002032932A2

Abstract

Un octapéptido cíclico que tiene actividad antagonista de urotensina-II y que consiste en la fórmula: (R1)a-AA1-ciclo[AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Cys]-AA7-R2 en la que AA1 es el isómero L de un aminoácido aromático; AA2 es el isómero L o D de Cys; AA3 es un isómero L de un aminoácido aromático; AA4 es el isómero L de Trp; AA5 es el isómero L o D de Lys, N-Me-Lys u Orn; AA6 es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu o Nle; AA7 es el isómero L o D de Val, Thr, Ley, Ile, terc-Ley, Abu, Nle o un aminoácido aromático; R1 es H, alquilo inferior, alcanoilo inferior o un acilo inferior; a es 1 ó 2; y R2 es OH, OR3, N(R3)2 o NHR3, donde R3 es H, un alquilo inferior o arilalquilo; una sal farmacéuticamente aceptable de dicho péptido.

Description

Agonistas y antagonistas de urotensina-II.

Ámbito de la invención

La invención se refiere a antagonistas y agonistas polipeptídicos de urotensina-II y procedimientos para su uso.

Antecedentes de la invención

La urotensina-II (U-II) es un neuropéptido cíclico con efectos cardiovasculares potentes. Originariamente aislada del sistema neurosecretor caudal de peces teleósteos, la estructura primaria de la U-II se ha establecido para varias especies de vertebrados, incluyendo diversas especies de peces, ranas, y seres humanos. El análisis de la secuencia de diversos péptidos de U-II de diferentes especies ha puesto de manifiesto que mientras que la región N-terminal es altamente variable, la región cíclica C-terminal de la U-II está muy conservada. De hecho, esta región cíclica, que es responsable de la actividad biológica de la U-II, está completamente conservada desde peces a seres humanos (Coulouran, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (fisiología), 95:15803-15808 (1998)). El hecho de que la presión evolutiva ha actuado para conservar completamente la secuencia biológicamente activa de la U-II sugiere que este polipéptido desempeña un papel importante en la fisiología humana.

La región cíclica de la U-II incluye seis restos aminoacídicos (-Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys-) y estructuralmente es similar a la región central biológicamente importante de la somatostatina-14 (-Phe-Trp-Lys-Thr-). Sin embargo, la clonación molecular y el análisis de la secuencia del gen de la preprourotensina II de carpa sugieren que la U-II y la somatostatina no derivan de un ancestro común (Ohsako, S., y col., J. Neurosci., 6:2730-2735 (1986)).

Se ha demostrado que, en peces, los péptidos de U-II presentan varias actividades, incluyendo actividad contráctil de músculo liso general, aunque las respuestas varían entre especies y lechos vasculares (Davenport, A., y Maquire, J., Trends in Pharmacological Sciences, 21:80-82 (2000); Bern, H. A., y col., Recent Prog. Horm. Res., 45:533-552 (1995)). También se ha demostrado que la U-II de peces posee actividad constrictora en mamíferos, incluyendo las arterias principales de ratas, pero el o los receptor(es) que median en estas acciones peptídicas no están completamente caracterizados.

Estudios recientes han informado de que un receptor huérfano acoplado a proteína G humano, homólogo al GPR14 de rata y expresado predominantemente en tejido cardiovascular, funciona como un receptor de U-II (Ames, H., y col., Nature, 401: 282-286 (1999)). Se ha informado de que la U-II de peces (gobios) y humana se une a GPR14 recombinante humano con alta afinidad, y la unión está acoplada funcionalmente a la movilización de calcio. La U-II humana se encuentra en tejido vascular y cardiaco (incluyendo ateroma coronario) y constriñe eficazmente arterias aisladas de primates no humanos (Ames, H., y col., anteriormente). La potencia de la vasoconstricción de U-II es sustancialmente mayor que la de la endotelina 1, haciendo que la U-II humana sea uno de los vasoconstrictores de mamífero más potente conocido actualmente. In vivo, la U-II humana aumenta marcadamente la resistencia periférica total en primates no humanos anestesiados, una respuesta asociada a disfunción contráctil cardiaca intensa (Ames, H., y col., anteriormente).

Ya que se ha observado inmunorreactividad similar a U-II humana en tejido cardiaco y vascular (incluyendo ateroma coronario), se piensa que la U-II influye en la homeostasis y patología cardiovascular (por ejemplo, enfermedad cardiaca isquémica y fallo cardiaco congestivo). Además, la detección de inmunorreactividad de U-II en la médula espinal y tejidos endocrinos sugiere que la U-II puede tener actividades adicionales, incluyendo la modulación del sistema nervioso central y la función endocrina en seres humanos (Ames, H., y col., anteriormente). De hecho, varias enfermedades se han vinculado potencialmente a un exceso o una expresión disminuida de la actividad de U-II, incluyendo fallo cardiaco isquémico, hipotensión, hipertensión portal, angina de pecho, hemorragia varicosa, infarto de miocardio, úlceras, y ciertos trastornos psicológicos y neurológicos. Por tanto, hay una gran necesidad de desarrollar compuestos potentes capaces de modular la actividad de la U-II, incluyendo inhibidores o antagonistas de U-II.

Hocart S. J. y col (1999) J. Med Chem. 42: 1863-1871 describen ciertos antagonistas de somatostatina de disulfuro cíclico muy potentes.

El documento FR 2786489 describe el uso de péptidos que tienen en su extremo C un heptapéptido específico para tratamiento de enfermedades neurodegenerativas o traumatismo de la medula espinal.

Newby D. E. y Jalan R. (2000) Hepatology 31: 1201-1202 describen la identificación de un receptor huérfano acoplado a proteína G humano homologo a GPR14 de rata y expresado predominantemente en tejido cardiovascular, que funciona como un receptor de U-II.

Nishiki M. y col (1997) Endocrine J. 44: 655-660 describen el uso de una infusión subcutánea de octreótido en el tratamiento de cardiomiopatía acromegálica.

Resumen de la invención

La presente invención presenta una nueva clase de polipéptidos cíclicos que tienen actividad antagonista o agonista de U-II. Los polipéptidos de la invención son octapéptidos que tienen la fórmula general: (R^{1})_{a}-AA^{1}-ciclo[AA^{2}-AA^{3}-AA^{4}-AA^{5}-AA^{6}-Cys]-AA^{7}-R^{2} (Fórmula I), en la que AA^{1} es el isómero L de un aminoácido aromático; AA^{2} es el isómero L o D de Cys; AA^{3} es un isómero L de un aminoácido aromático; AA^{4} es el isómero L o D de Trp; AA^{5} es el isómero L o D de Lys, N-Me-Lys, u Orn; AA^{6} es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu, Nle, o un aminoácido aromático; AA^{7} es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu, Nle o un aminoácido aromático; R^{1} es H, un alquilo inferior, alcanoilo inferior o un acilo inferior; a es l o 2; y R^{2} es OH, OR^{3}, N(R^{3})_{2} o NHR^{3}, donde R^{3} es H, un alquilo inferior, o arilalquilo; con tal que el péptido no sea Cpa-c[D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Cpa-NH_{2}.

En una realización preferida, AA^{2} y AA^{4} son D-Cys y L-Trp, respectivamente.

En otro polipéptido preferido, AA^{1} es Cpa, AA^{2} es D-Cys, AA^{3} es Phe, AA^{4} es Trp, AA^{5} es Lys, AA^{6} es Thr, y AA^{7} es Val.

En una realización particularmente preferida, el polipéptido es un octapéptido que tiene la fórmula Cpa-c[D-Cys-Phe-Trp-Lys-Thr-Cys]-Val-NH_{2}.

Los polipéptidos de la presente invención son capaces de alterar la actividad de U-II y pueden afectar a la unión de la U-II a un receptor. Por tanto, estos polipéptidos se pueden administrar a un sujeto como un medio para prevenir o tratar dolencias médicas o psicológicas caracterizadas por un exceso o una deficiencia o una expresión disminuida de la actividad de Urotensina-II. Tales dolencias incluyen, pero sin limitación, enfermedad cardiaca isquémica, fallo cardiaco congestivo, hipertensión portal, hemorragia varicosa, hipotensión, angina de pecho, infarto de miocardio, úlceras, ansiedad, esquizofrenia, depresión maniaca, delirio, demencia, retraso mental y disquinesias.

La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido de la Fórmula I en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los vehículos adecuados incluyen, pero sin limitación, solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol, y combinaciones de los mismos. La composición se puede adaptar al modo de administración y puede estar en forma de una píldora, un comprimido, una cápsula, un pulverizador, un polvo o un líquido.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la misma, y a partir de las reivindicaciones.

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Definiciones

Por "polipéptido" se entiende cualquier péptido (incluyendo péptidos cíclicos) o proteína que comprende dos o más aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos o enlaces peptídicos modificados. "Polipéptido" se refiere a cadenas cortas, denominadas comúnmente péptidos, oligopéptidos u oligómeros, y a cadenas más largas, denominadas generalmente proteínas. Los polipéptidos pueden contener aminoácidos diferentes de los 20 aminoácidos codificados por genes. Los "polipéptidos" incluyen secuencias aminoacídicas modificadas por procedimientos naturales o por técnicas de modificación química que son bien conocidas en la técnica. Las modificaciones pueden suceder en cualquier sitio en un polipéptido, incluyendo la cadena principal del péptido, las cadenas laterales del aminoácido y los extremos amino o carboxilo.

Las notaciones usadas en este documento para los restos aminoacídicos polipeptídicos son las abreviaturas usadas comúnmente en la técnica. Las abreviaturas menos comunes Abu, Cpa, Nle, Pal, Tle, Dip, 4-Fpa, y Nal indican ácido 2-amino-butírico, p-clorofenilalanina, norleucina, 3-piridil-2-alanina, terc-leucina, 2,2-difenilalanina, 4-fluoro-fenilalanina, y 3-(2-naftil)-alanina o 3-(1-naftil)-alanina, respectivamente.

Por "alquilo" se entiende un grupo de hidrocarburo alifático de cadena ramificada o recta. Un alquilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes que pueden ser los mismos o diferentes, e incluyen, pero sin limitación, grupos halo, cicloalquilo, hidroxi, alcoxi, amino, carbamoilo, acilamino, aroilamino, carboxi, alcoxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, o heteroaralquiloxicarbonilo. Los grupos alquilo representativos incluyen, pero sin limitación, metilo, trifluorometilo, ciclopropilmetilo, ciclopentilmetilo, etil, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, 3-pentilo, metoxietilo y carboximetilo. Por "alquilo inferior" se entiende un grupo alquilo de cadena ramificada o recta que tiene menos de 11 átomos de carbono, preferentemente un alquilo C_{1}-C_{8}.

Por "acilo" se entiende un grupo que tiene la estructura

1

en el que R es H o un grupo alquilo como se describe en este documento. Por "acilo inferior" se entiende un grupo acilo que tiene menos de 11 átomos de carbono (cadena ramificada o recta), preferentemente entre 1-8 átomos de carbono (es decir, R es H o un alquilo inferior).

Por "alcanoílo inferior" se entiende un grupo acilo como se ha descrito anteriormente en el que R es un alquilo inferior.

Por "arilo" se entiende un grupo aromático monocíclico o bicíclico que contiene de 6 a 12 carbonos en la parte de anillo, preferentemente 6-10 carbonos en la parte de anillo, tales como fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo. Por "arialquilo" se entiende un grupo alquilo como se describe en este documento que tiene un sustituyente arilo, tales como bencilo, feniletilo o 2-naftilmetilo.

Por "sal farmacéuticamente aceptable" se entiende sales de adición de ácidos no tóxicas o complejos metálicos que se usan comúnmente en la industria farmacéutica. Los ejemplos de sales de adición de ácidos incluyen ácidos orgánicos tales como ácidos acético, láctico, pamoico, maleico, cítrico, málico, ascórbico, succínico, benzoico, palmítico, subérico, salicílico, tartárico, metanosulfónico, toluenosulfónico o trifluoroacético o similares; ácidos poliméricos tales como ácido tánico, carboximetil celulosa o similares; y ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico o similares. Los complejos metálicos incluyen cinc, hierro y similares.

Por "variante" se entiende un polipéptido que difiere de un polipéptido de referencia, pero que mantiene propiedades esenciales. Generalmente, las diferencias son limitadas de forma de las secuencias del polipéptido de referencia y la variante son muy similares en conjunto y, en muchas regiones, idénticos. Una variante y un polipéptido de referencia pueden diferir en la secuencia aminoacídica por una o más sustituciones, adiciones y/o deleciones, en cualquier combinación. Un resto aminoacídico sustituido o insertado puede ser o no uno codificado por el código genético. Una variante de un polipéptido puede ser uno de origen natural tal como una variante alélica, o puede ser una variante que no se conoce que sea de origen natural. Las variantes que no son de origen natural de polipéptidos se pueden hacer por técnicas de mutagénesis o por síntesis directa.

Generalmente, la variante difiere del polipéptido de referencia por sustituciones aminoacídicas conservativas, por lo que un resto se sustituye por otro con características similares (por ejemplo, acídico, básico, aromático, etc.). Las sustituciones típicas son entre Ala, Val, Leu e Ile; entre Ser y Thr; entre los restos acídicos Asp y Glu; entre Asn y Gln; y entre los restos básicos Lys y Arg; o restos aromáticos Phe y Tyr.

Por "sujeto" se entiende un animal o ser humano que padece una dolencia fisiológica o psicológica relacionada con U-II. El sujeto puede ser un mamífero, incluyendo, pero sin limitación, mamíferos humanos y no humanos tales como primates, perros, gatos, cerdos, vacas, ovejas, cabras, caballos, ratones, ratones y similares.

Por "vehículo farmacéuticamente aceptable" se entiende un vehículo que es fisiológicamente aceptable para un animal al que se le administra mientras que conserva las propiedades terapéuticas del compuesto con el que se administra. Un vehículo farmacéuticamente aceptable ejemplar es la solución salina fisiológica. Otros vehículos fisiológicamente aceptables y sus formulaciones se conocen por los expertos en la materia y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, (18ª edición), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, PA.

Por "aminoácido aromático" se entiende un aminoácido que contiene un grupo aromático. En realizaciones preferidas, el aminoácido aromático tiene la siguiente fórmula:

2

(Fórmula II), en la que X representa un enlace o H, y Ar es un resto que contiene un anillo aromático opcionalmente sustituido. Los Ejemplos de Ar incluyen, pero sin limitación, las siguientes estructuras en las que Y_{n} representa en sustituyentes opcionales y n es 0, 1, 2 o 3:

3

4

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5

En realizaciones preferidas, cada sustituyente Y representa independientemente grupos NO_{2}, CN, Cl, Br, I, F, Me, COR^{4}, COOR^{4} u OR^{4}, en los que R^{4} es H o alquilo C_{1}-C_{8}. Los ejemplos de aminoácidos aromáticos incluyen, pero sin limitación, Phe, Cpa, Trp, Pal, His, \beta-Nal, 3-piridil-Ala, 4-piridil-Ala, 2,4-dicloro-phe, pentafluoro-Phe, p-Z-Phe, y o-Z-Phe, en los que Z se selecciona del grupo constituido por Me, Cl, Br, F, OH, OMe y NO_{2}.

Descripción detallada

Se ha observado que la parte mínima de la secuencia de U-II que conserva toda la actividad biológica era el octapéptido Asp-c[Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys]-Val-OH (ID SEC Nº: 3), que se corresponde a hUII(4-7). Este octapéptido posee de hecho una potencia mayor que todas las secuencias completas de U-II humana y de peces al inducir la contracción de aorta de rata y al unirse a este tejido.

Según esta secuencia parental, se ha sintetizado una serie de octapéptidos cíclicos que tienen actividad antagonista de U-II. Se descubrió que estos péptidos tienen afinidad moderada por receptores de U-II y son capaces de bloquear contracciones fásicas inducidas por U-II en tiras circulares de aorta torácica de rata. Los polipéptidos de la presente invención tienen la fórmula general: (R^{1})_{a}-AA^{1}-ciclo [AA^{2}-AA^{3}-AA^{4}-AA^{5}-AA^{6}-Cys]-AA^{7}-R^{2} (Fórmula I) en la que AA^{1} es el isómero L de un aminoácido aromático; AA^{2} es el isómero L o D de Cys; AA^{3} es un isómero L de un aminoácido aromático; AA^{4} es el isómero L o D de Trp; AA^{5} es el isómero L o D de Lys, N-Me-Lys u Orn; AA^{6} es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu, Nle, o un aminoácido aromático; AA^{7} es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu, Nle o un aminoácido aromático; R^{1} es H, un alquilo inferior, alcanoilo inferior o un acilo inferior; a es l ó 2; y R^{2} es OH, OR^{3}, N(R^{3})_{2}, o NHR^{3}, donde R^{3} es H, un alquilo inferior, o arilalquilo.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se puede administrar por vía oral, por vía parenteral (por ejemplo, inyección intramuscular, intraperitoneal, intravenosa o subcutánea, o implante), por vía nasal, por vía vaginal, por vía rectal, por vía sublingual o por vía tópica, en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable adaptado a la vía de administración.

Los procedimientos bien conocidos en la técnica para hacer formulaciones se encuentran, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, (18ª edición), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, PA. Las composiciones destinadas para uso oral se pueden preparar en formas sólidas o líquidas según cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas. Las composiciones pueden contener opcionalmente agentes edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y/o conservantes para proporcionar una preparación más palatable. Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un vehículo o excipiente inerte farmacéuticamente aceptable. Los mismos pueden incluir, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, sacarosa, almidón, fosfato cálcico, fosfato sódico o caolín. También se pueden usar agentes aglutinantes, agentes tamponantes y/o agentes lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio). Los comprimidos y las píldoras se pueden preparar adicionalmente con revestimientos entéricos.

Las fórmulas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y cápsulas de gelatina blanda farmacéuticamente aceptables. Estas formas contienen diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua o un medio oleoso. Aparte de tales diluyentes inertes, las composiciones también pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes de suspensión.

Las formulaciones para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones o emulsiones estériles. Los ejemplos de vehículos adecuados incluyen propilen glicol, polietilen glicol, aceites vegetales, gelatina, naftalenos hidrogenados, y ésteres orgánicos inyectables, tal como oleato de etilo. Tales formulaciones también pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y dispersantes. Se puede usar polímero de láctico biocompatible, biodegradable, copolímero de láctico/glicólico o copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno para controlar la liberación de los compuestos. Otros sistemas de administración parenteral potencialmente útiles para los polipéptidos de la invención incluyen partículas de copolímero de etileno- acetato de vinilo, bombas osmóticas, sistemas de infusión implantables y liposomas.

Las formulaciones líquidas se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro de retención de bacterias, incorporando agentes esterilizantes a las composiciones o irradiando o calentando las composiciones. Alternativamente, también se pueden fabricar en forma de composiciones estériles, sólidas que se pueden disolver en agua estéril o en algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes del uso.

Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferentemente supositorios que pueden contener, además de sustancias activas, excipientes tales como manteca de cacao o una cera de supositorio. Las composiciones para administración nasal o sublingual también se preparan con excipientes convencionales conocidos en la técnica. Las formulaciones para inhalación pueden contener excipientes, por ejemplo, lactosa, o pueden ser soluciones acuosas que contienen, por ejemplo, polioxietileno-9-lauril éter, glicocolato y desoxicolato, o pueden ser soluciones oleosas para la administración en forma de gotas o pulverizadores nasales, o como un gel.

Se puede variar la cantidad de ingrediente activo en las composiciones de la invención. Un experto en la materia entenderá que las dosificaciones individuales exactas se pueden ajustar en cierta manera dependiendo de una diversidad de factores, incluyendo el polipéptido que se administra, el momento de administración, la vía de administración, la naturaleza de la formulación, la velocidad de excreción, la naturaleza de las dolencias del sujeto, y la edad, el peso, la salud y el sexo del paciente. Además, la gravedad de la dolencia relacionada con U-II que se trata también tendrá un impacto sobre el nivel de dosificación. Generalmente, se administran diariamente niveles de dosificación entre
0,1 \mug/kg y 100 mg/kg de peso corporal como una dosis única o dividida en dosis múltiples. Preferentemente, el intervalo de dosificación general está entre 250 \mug/kg y 5,0 mg/kg de peso corporal por día. Se esperan grandes variaciones en la dosificación necesaria en vista de las eficacias que difieren de las diversas vías de administración. Por ejemplo, generalmente se esperaría que la administración oral requerirá niveles de dosificación mayores que la administración por inyección intravenosa. Las variaciones en estos niveles de dosificación se pueden ajustar usando rutinas empíricas convencionales para optimización, que se conocen bien en la técnica. En general, la dosificación terapéuticamente eficaz precisa se determinará por el médico a cargo del caso en considerando los factores identificados anteriormente.

Los polipéptidos de la invención se pueden administrar en una composición de liberación retardada, tales como las descritas en, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 5.672.659 y 5.595.760. El uso de composiciones de liberación inmediata o retardada depende del tipo de dolencia que se está tratando. Si la dolencia consiste en un trastorno agudo o sobreagudo, se preferirá un tratamiento con una forma de liberación inmediata antes que una composición de liberación prolongada. Alternativamente, para tratamientos preventivos o a largo plazo, generalmente se preferirá una composición de liberación retardada.

Los polipéptidos de la presente invención se pueden preparar de cualquier manera adecuada. Los polipéptidos se pueden aislar de fuentes de origen natural, producirse recombinantemente o producirse sintéticamente, o producirse por una combinación de estos procedimientos. La síntesis de péptidos cortos se conoce bien en la técnica. Véase, por ejemplo, Stewart y col., Solid Phase Peptide Synthesis (Pierce Chemical Co., 2ª ed. 1984). Los péptidos de la presente invención se pueden sintetizar según procedimientos de síntesis peptídica convencionales conocidos en la técnica.

La presente invención se ilustra por los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1

Uso de tira circular de aorta de rata para ensayar antagonistas de U-II

Se sacrificaron por decapitación ratas Sprague-Dawley macho (250-350 g), que se habían sometido a cuarentena durante 5-7 días antes de los experimentos (los experimentos se aprobaron por el Advisory Committee For Animal Resources, Escuela de Medicina de la Universidad de Tulane). Se diseccionó la aorta torácica, se liberó de tejido conectivo, y se cortó en anillos de aproximadamente 1,5 mm de anchura. Los anillos se suspendieron en un baño orgánico de 15 ml que contenía solución de Krebs rica en potasio (9,15 g/l de cloruro potásico, 2,1 g/l de bicarbonato sódico, 1,0 g/l de glucosa, 0,16 g/l de fosfato potásico monobásico, 0,14 g/l de sulfato de magnesio (anhidr.) y 0,22 g/l de cloruro cálcico (dihidr.)).

Se aplicó una tensión óptima (0,2 g) a los tejidos y se mantuvo el medio de baño a 37ºC y se burbujeó con una mezcla de O_{2} al 95%/ CO_{2} al 5%. Antes de montarlas en el baño orgánico, las preparaciones seleccionadas se frotaron con un hisopo de algodón humedecido para retirar la capa celular endotelial, y el efecto de este procedimiento se ensayó usando un ensayo de relajación por acetilcolina (Gibson, A., Br. J. Pharmacol. 91:205 (1987)). Se dejaron equilibrar los anillos de aorta durante 90 minutos a las tensiones óptimas. Durante el periodo de equilibrado se sustituyó cada 15 min. la solución de baño. Las respuestas contráctiles de los anillos aórticos a diversas concentraciones de péptidos se expresaron en voltios. Los cambios en la tensión de músculo liso arterial se registraron isométricamente usando un transductor de fuerza-desplazamiento (Radnoti) y un AcqKnowledge ACK100 Versión 3.2 (BIOPAC Systems, Inc., Santa Barbara, CA).

Se disolvieron los péptidos en tubos de vidrio siliconados disueltos en agua desionizada a una concentración de
1 \mug/1 \mul (solución madre) y después se diluyeron 1:10 con solución salina-BSA estéril (BSA al 0,1%, fracción V, Sigma, St. Louis en NaCl al 0,9%). Todas las soluciones peptídicas se prepararon de forma recién hecha directamente antes de los experimentos. Los péptidos en la concentración en el intervalo de 10^{-6} a 10^{-12} M/l en un volumen final de 16-80 \mul se introdujeron directamente en el baño orgánico ensayado que contenía tampón de Krebs gaseado continuamente con O al 95% y CO_{2} al 5%, y los anillos aórticos a una tensión de reposo óptima (1-0,2 g). Los cambios inducidos por péptidos en la tensión de los anillos aórticos se registraron por transductores de fuerza-desplazamiento y se procesaron por el sistema de ordenador BIOPAC Inc., como se ha descrito anteriormente. Cada anillo solamente se expuso a una concentración peptídica.

Usando técnicas de ensayo conocidas en la técnica, se observó que la secuencia mínima, completamente potente de U-II era el octapéptido Asp-c[Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys]-Val-OH (ID SEC Nº: 3), que de hecho era más potente que las secuencias completas humanas y de peces al inducir contracciones de aorta de rata. Se descubrió que diversos antagonistas de somatostatina (SRIF) tienen la capacidad de bloquear las contracciones fásicas inducidas por UII en las tiras circulares de aorta torácica de rata. El polipéptido Cpa-c[D-Cys-Phe-Trp-Lys-Thr-Cys]-Val-NH_{2} era un fuerte antagonista de U-II con una CI_{50} de 2 nM. Otros compuestos que se ensayaron se resumen a continuación en la
Tabla 1.

TABLA 1 CI_{50} (nM) de Antagonista de SRIF contra la Estimulación por U-II de Contracciones Fásicas de Aorta de Rata

6

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Bibliografía citada en la descripción

Esta lista de referencias citadas por el solicitante únicamente es para comodidad del lector. Dicha lista no forma parte del documento de patente Europea. Aunque se ha tenido gran cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO rechaza toda responsabilidad a este respecto.

Documentos de patentes citados en la descripción

\bullet FR 2786489: \bullet US 5595760 A

\bullet US 5672659 A

Bibliografía no relativa a patentes citada en la descripción

\bulletCOULOURAN y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA physiology, 1998, vol. 95, 15803-15808

\bulletOHSAKO, S. y col. J. Neurosci., 1986, vol. 6, 2730-2735

\bulletDAVENPORT, A.; MAQUIRE, J. Trends in Pharmacological Sciences, 2000, vol. 21, 80-82

\bulletBERN, H.A. y col. Recent Prog. Horm. Res., 1995, vol. 45, 533-552

\bulletAMES, H. y col. Nature, 1999, vol. 401, 282-286

\bulletHOCART S.J. y col. J. Med Chem., 1999, vol. 42, 1863-1871

\bulletNEWBY D.E.; JALAN R. Hepatology, 2000, vol. 31, 1201-1202

\bulletNISHIKIM. y col. Endocrine J., 1997, vol. 44, 655-660

\bulletRemington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, 1990

\bulletGIBSON, A. Br. Pharmacol., 1987, vol. 91, 205

Claims

1. Un octapéptido cíclico que tiene actividad antagonista de urotensina-II y que consiste en la fórmula:

(R^{1})a-AA^{1}-ciclo[AA^{2}-AA^{3}-AA^{4}-AA^{5}-AA^{6}-Cys]-AA^{7}-R^{2}

en la que

AA^{1}: es el isómero L de un aminoácido aromático;

AA^{2}: es el isómero L o D de Cys;

AA^{3}: es un isómero L de un aminoácido aromático;

AA^{4}: es el isómero L de Trp;

AA^{5}: es el isómero L o D de Lys, N-Me-Lys u Orn;

AA^{6}: es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu o Nle;

AA^{7}: es el isómero L o D de Val, Thr, Ley, Ile, terc-Ley, Abu, Nle o un aminoácido aromático;

R^{1}: es H, alquilo inferior, alcanoilo inferior o un acilo inferior; a es 1 ó 2; y R^{2} es OH, OR^{3}, N(R^{3})_{2} o NHR^{3}, donde R^{3} es H, un alquilo inferior o arilalquilo;

una sal farmacéuticamente aceptable de dicho péptido.

2. El octapéptido de la reivindicación 1, en el que dicho aminoácido aromático tiene la fórmula:

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en la que X es H o un enlace, y Ar representa un resto seleccionado del grupo constituido por

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en el que n es 0, 1, 2 ó 3 y cada sustituyente Y representa independientemente grupos NO_{2}, CN, Cl, Br, I, F, Me, COR^{4}, COOR^{4}, o OR^{4}, en los que R^{4} es H o alquilo C_{1-}C_{8}.

3. El octapéptido de la reivindicación 1, en el que AA^{3} se selecciona del grupo constituido por Phe, Trp, Pal, His, \beta-Nal, 3-piridil-Ala, 4-piridil-Ala, 2,4-dicloro-phe, pentafluoro-Phe, p-Z-Phe y o-Z-Phe, en el que Z se selecciona del grupo constituido por Me, Cl, Br, F, OH, OMe y NO_{2}.

4. El octapéptido de la reivindicación 1, en el que AA^{2} es D-Cys.

5. El octapéptido de la reivindicación 4, en el que AA^{3} es Phe, AA^{5} es Lys, AA^{6} es Thr, AA^{7} es Val, y AA^{1} es Cpa.

6. El octapéptido de la reivindicación 5, en el que dicho polipéptido tiene la fórmula Cpa-c[D-Cys-Phe-Trp-Lys-Thr-Cys]-Val-NH2 (ID SEC Nº: 5).

7. Una composición farmacéutica que comprende un octapéptido cíclico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que tiene actividad antagonista de urotensina II, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos.

9. El uso de un octapéptido cíclico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que tiene actividad antagonista de urotensina-II en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia anormal caracterizado por un exceso de actividad de urotensina-II.

10. El uso de la reivindicación 9, en el que dicha dolencia se selecciona del grupo constituido por enfermedad cardiaca isquémica, fallo cardiaco congestivo, hipertensión portal, hemorragia varicosa, hipotensión, angina de pecho, infarto de miocardio, úlceras, ansiedad, esquizofrenia, depresión maniaca, deliro, demencia, retraso mental y disquinesias.

11. El uso de la reivindicación 10, en el que dicha dolencia es enfermedad cardiaca isquémica.

12. El uso de la reivindicación 10, en el que dicha dolencia es fallo cardiaco congestivo.

13. El uso de la reivindicación 10, en el que dicha dolencia es hipertensión portal.

14. El uso de la reivindicación 10, en el que dicha dolencia es hemorragia varicosa.

15. Un octapéptido cíclico que tiene actividad agonista de urotensina-II y que consiste en la fórmula:

(R^{1})a-AA^{1}-ciclo[AA^{2}-AA^{3}-AA^{4}-AA^{5}-AA^{6}-Cys]-AA^{7}-R^{2}

en la que

AA^{1}: es el isómero L de un aminoácido aromático;

AA^{2}: es el isómero L o D de Cys;

AA^{3}: es un isómero L de un aminoácido aromático;

AA^{4}: es el isómero L de Trp;

AA^{5}: es el isómero L o D de Lys, N-Me-Lys u Orn;

AA^{6}: es el isómero L o D de Val, Thr, Leu, Ile, terc-Leu, Abu o Nle;

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una sal farmacéuticamente aceptable de dicho péptido.

16. El octapéptido de la reivindicación 15, en el que dicho aminoácido aromático tiene la fórmula:

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en el que n es 0, 1, 2 ó 3 y cada sustituyente Y representa independientemente grupos NO_{2}, CN, Cl, Br, I, F, Me, COR^{4}, COOR^{4} o OR^{4}, en los que R^{4} es H o alquilo C_{1-}C_{8}.

17. El octapéptido de la reivindicación 15, en el que AA^{3} se selecciona del grupo constituido por Phe, Trp, Pal, His, \beta-Nal, 3-piridil-Ala, 4-piridil-Ala, 2,4-dicloro-phe, pentafluoro-Phe, p-Z-Phe y o-Z-Phe, en el que Z se selecciona del grupo constituido por Me, Cl, Br, F, OH, OMe, y NO_{2}.

18. El octapéptido de la reivindicación 15, en el que AA^{2} es D-Cys.

19. El octapéptido de la reivindicación 15, en el que AA^{3} es Phe, AA^{5} es Lys, AA^{6} es Thr, AA^{7} es Val, y AA^{1} es Cpa.

20. Una composición farmacéutica que comprende un octapéptido cíclico según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19 que tiene actividad agonista de urotensina-II, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 20, en la que dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos.

22. El uso de un octapéptido cíclico según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19 que tiene actividad agonista de urotensina-II en la preparación de un medicamento para tratamiento de una dolencia anormal caracterizado por una deficiencia o expresión disminuida de actividad urotensina-II.

23. El uso de la reivindicación 22, en el que dicha dolencia se selecciona del grupo constituido por enfermedad cardiaca isquémica, hipertensión portal, hemorragia varicosa, hipotensión, angina de pecho, infarto de miocardio, úlceras, ansiedad, esquizofrenia, depresión maniaca, delirio, demencia, retraso metal y disquinesias.