ES2280559T3 - Compuestos tiofenilicos como medicamentos. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la **fórmula**, en la que: R1 representa NH2; X representa O; R2 representa hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, -NR6R7, -CONR6R7, -COOR6, NR6COR7, -S(O)mR6, -SO2NR6R7, NR6SO2R7, alquilo C1-C2, trifluorometilo, alquenilo C2-C3, alquinilo C2-C3, trifluorometoxi, alcoxi C1-C2 o alcanoilo C1-C2; A representa indol, benzotiofeno, benzofurano, tetrahidroisoquinolina, 1, 3-benzodioxolano (metilendioxifenilo) o 1, 4-benzodioxano (etilendioxifenilo), opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, nitro, -NR8COR9, -S(O)sR8, -SO2NR8R9, -NR8SO2R9 y alquilo C1-C6; n representa un número entero de 0, 1 ó 2; y cuando n representa 2, cada grupo R3 se puede seleccionar independientemente; R3 representa un grupo -W-Y-Z en el que: W representa O, S(O)r, NR13, CH2, -CH2-O- o un enlace; Y representa un enlace, o Y representa un grupo -(CH2)p-X-(CH2)q- en el que p y q representan independientemente un número entero de 0, 1 ó 2; y X representa O, -CO- o CR14R15; y sales farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Compuestos tiofenílicos como medicamentos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de tiofeno carboxamidas, a procedimientos e intermedios usados en su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia.

Antecedentes de la invención

La familia de NF-\kappaB (factor nuclear \kappaB) está compuesta de homo- y heterodímeros de la familia Rel de factores de transcripción. Un papel clave de estos factores de transcripción es inducir y coordinar la expresión de un amplio espectro de genes proinflamatorios, incluyendo citoquinas, quimioquinas, interferones, proteínas MHC, factores de crecimiento y moléculas de adhesión celular (para un repaso, véase Verma et al., Genes Dev. 9:2723-35, 1995; Siebenlist et al., Ann. Rev. Cell. Biol. 10:405-455, 1994; Baeuerle y Henkel, Ann. Rev. Immunol., 12:141-179, 1994; Barnes y Karin, New Engl. J. Med., 336:1066-1071, 1997).

El complejo dimérico de la familia Rel más comúnmente encontrado está compuesto de p50 NF\kappaB y p65 RelA (Baeuerle y Baltimore, Cell 53:211-217, 1988; Baeuerle y Baltimore, Genes Dev. 3:1689-1698, 1989). En condiciones de reposo, los dímeros de NF-\kappaB son retenidos en el citoplasma mediante un miembro de la familia I\kappaB de proteínas inhibidoras (Beg et al., Genes Dev., 7:2064-2070, 1993; Gilmore y Morin, Trends Genet. 9:427-433, 1993; Haskil et al., Cell 65:1281-1289, 1991). Sin embargo, con la activación celular mediante una variedad de citoquinas u otros estímulos externos, las proteínas I\kappaB se fosforilan en dos restos de serina críticos (Traenckner et al., EMBO J., 14:2876, 1995), y entonces se seleccionan como dianas para la ubiquitinación y la degradación mediada por proteosomas (Chen, Z.J. et al., Genes and Dev. 9:1586-1597, 1995; Scherer, D.C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:11259-11263, 1996; Alkalay, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:10599-10603, 1995). El NF-\kappaB liberado es entonces capaz de ubicarse en el núcleo y activar la transcripción génica (Beg et al., Genes Dev., 6:1899-1913, 1992).

Se ha demostrado que un amplio intervalo de estímulos externos son capaces de activar NF-\kappaB (Baeuerle, P.A., y Baichwal, V.R., Adv. Immunol., 65:111-136 1997). Aunque la mayoría de los activadores de NF-\kappaB dan como resultado la fosforilación de I\kappaB, está claro que múltiples rutas conducen a este suceso clave. La activación de NF-\kappaB mediada por receptores reside en interacciones específicas entre las moléculas receptoras y adaptadoras/señalizadoras (por ejemplo, TRADD, RIP, TRAF, MyD88) y las quinasas asociadas (IRAK, NIK) (Song et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:9792-9796, 1997; Natoli et al., JBC 272:26079-26082, 1997). El estrés medioambiental, tal como la luz UV y la radiación \gamma, parece que estimula NF-\kappaB mediante mecanismos alternativos, menos definidos.

Publicaciones recientes han elucidado parcialmente la activación de NF-\kappaB. Este trabajo ha identificado tres enzimas clave que regulan interacciones específicas de I\kappaB/NF-\kappaB: la quinasa inductora de NF-\kappaB (NIK) (Boldin et al., Cell 85:803-815, 1996), la quinasa-1 de I\kappaB (IKK-1) (Didonato et al., Nature 388:548, 1997; Regnier et al., Cell 90:373 1997) y la quinasa-2 de I\kappaB (IKK-2) (Woronicz et al., Science 278:866, 1997; Zandi et al., Cell 91:243, 1997).

La NIK parece representar un mediador común de cascadas señalizadoras de NF-\kappaB disparadas por el factor de necrosis tumoral e interleuquina-1, y es una inductora potente de la fosforilación de I\kappaB. Sin embargo, la NIK es incapaz de fosforilar directamente I\kappaB.

Se piensa que las IKK-1 e IKK-2 se encuentran inmediatamente en dirección 3’ de NIK, y son capaces de fosforilar directamente los tres subtipos de I\kappaB. La IKK-1 e IKK-2 son idénticas en un 52% a nivel de los aminoácidos, pero parece que tienen especificidades similares por el sustrato; sin embargo, las actividades enzimáticas parecen ser diferentes: la IKK-2 es varias veces más potente que IKK-1. Los datos de expresión, acoplados con estudios de mutagénesis, sugieren que la IKK-1 e IKK-2 son capaces de formar homo- y heterodímeros mediante sus motivos de cremallera de leucina C-terminal, prefiriéndose la forma heterodímera (Mercurio et al., Mol. Cell Biol., 19:1526, 1999; Zandi et al., Science; 281:1360, 1998; Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9319, 1998).

Las NIK, IKK-1 e IKK-2 son todas serina/treonina quinasas. Datos recientes han demostrado que las tirosina quinasas también desempeñan un papel regulando la activación de NF-\kappaB. Un gran número de grupos han demostrado que la activación de NF-\kappaB inducida por TNF-\alpha se puede regular mediante proteína tirosina fosfatasas (PTP) y tirosina quinasas (Amer et al., JBC 273:29417-29423, 1998; Hu et al., JBC 273:33561-33565, 1998; Kaekawa et al., Biochem. J. 337:179-184, 1999; Singh et al., JBC 271: 31049-31054, 1996). El mecanismo de acción de estas enzimas parece estar en la regulación del estatus de fosforilación de I\kappaB. Por ejemplo, la PTP1B y una tirosina quinasa no identificada parecen controlar directamente la fosforilación de un resto de lisina (K42) en I\kappaB-\alpha, que a su vez tiene una influencia crítica en la accesibilidad de los restos de serina adyacentes como dianas para la fosforilación mediante IKK.

Varios grupos han demostrado que IKK-1 e IKK-2 forman parte de una estructura "señalosómica" en asociación con proteínas adicionales que incluyen IKAP (Cohen et al., Nature 395:292-296, 1998; Rothwarf et al., Nature 395:297-300, 1998), MEKK-1, la fosfatasa MAP quinasa putativa (Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9319-9324, 1998), así como NIK e I\kappaB. Ahora aparecen datos que sugieren que aunque tanto la IKK-1 como la IKK-2 se asocian con NIK, se activan de forma diferente, y por lo tanto pueden representar un punto importante de integración para el espectro de señales que activan NF-\kappaB. De forma importante, se ha encontrado que MEKK-1 (uno de los componentes del señalosoma putativo y una diana para moléculas señalizadoras inducidas por luz ultravioleta y LPS, y pequeñas GTPasas) activa IKK-2 pero no IKK-1. De forma similar, la fosforilación de NIK de IKK-1 da como resultado un aumento dramático en la actividad de IKK-1 pero sólo un pequeño efecto sobre IKK-2 (para un repaso, véase Mercurio, F., y Manning, A.M., Current Opinion in Cell Biology, 11:226-232, 1999).

Es probable que la inhibición de la activación de NF-\kappaB sea de amplia utilidad en el tratamiento de enfermedad inflamatoria.

Existen signos acumulados de que la señalización de NF-\kappaB desempeña un papel significativo en el desarrollo de cáncer y metástasis. La expresión anormal de c-Rel, NF-\kappaB2 o I\kappaB\alpha se ha descrito en un número de tipos de tumores y de estirpes celulares tumorales, y ahora hay datos que demuestran que la señalización constitutiva de NF-\kappaB, vía IKK2, tiene lugar en un amplio intervalo de estirpes celulares tumorales. Esta actividad se ha enlazado a diversos defectos aguas arriba en la señalización del factor de crecimiento, tal como el establecimiento de bucles autocrinos, o la presencia de productos oncogénicos, por ejemplo Ras, AKT, Her2, que están implicados en la activación del complejo de IKK. Se cree que la actividad constitutiva de NF-\kappaB contribuye a la oncogénesis a través de la activación de un intervalo de genes antiapoptóticos, por ejemplo A1/Bfi-1, IEX-1, XIAP, conduciendo a la supresión de las vías de muerte celular, y al aumento transcripcional de ciclina D1 que promueve el crecimiento celular. Otros datos indican que esta ruta probablemente también está implicada en la regulación de la adhesión celular y de proteasas de la superficie celular. Esto sugiere un posible papel adicional para la actividad de NF-\kappaB en el desarrollo de metástasis. Los signos que confirman la implicación de la actividad de NF-\kappaB en la oncogénesis incluyen la inhibición del crecimiento de células tumorales in vitro e in vivo en la expresión de una forma modificada de I\kappaB\alpha (\kappaB\alpha super-represor).

Además de la señalización constitutiva de NF-\kappaB observada en muchos tipos de tumores, se ha dado a conocer que NF-\kappaB también se activa como respuesta a ciertos tipos de quimioterapia. La inhibición de la activación de NF-\kappaB a través de la expresión de la forma super-represora de I\kappaB\alpha, en paralelo con tratamiento de quimioterapia, ha demostrado que potencia el efecto antitumoral de la quimioterapia en modelos de xenoinjerto. Por lo tanto, la actividad de NF-\kappaB también está implicada en quimiorresistencia inducible.

La Solicitud de Patente del Reino Unido GB-A-1468012 describe compuestos tienílicos, que están sustituidos en la posición 1 con un grupo -NHR_{2} (en el que R_{2} puede ser un grupo -CORs), en la posición 2 con un grupo COR_{1} (en el que R_{1} es -NHR_{5} u OR_{5}), y en las posiciones 4 y 5 con R_{4} y R_{3}, respectivamente, en el que uno de R_{3} y R_{4} es un grupo fenilo sustituido y el otro es hidrógeno, alquilo inferior o fenilo opcionalmente sustituido. Se afirma que los compuestos son útiles en el tratamiento de estados inflamatorios tales como artritis.

La Solicitud de Patente Europea EP 853.083 describe compuestos furánicos y tienílicos que están sustituidos en la posición 5 con un grupo 4-piridilo. El grupo piridilo está sustituido con 0-4 grupos R^{4}, y se permite que dos grupos R^{4} se enlacen para formar un anillo bencénico. Los compuestos de furano y tienilo también están sustituidos en la posición 2 con R^{1}, que se puede escoger de una amplia variedad de grupos, incluyendo -C(O)NHR^{5} y -NHC(O)NH_{2}, y están sustituidos además con R^{2}, que se puede escoger de la misma lista que R^{1}, y R^{3}. Los compuestos se describen como inhibidores de la expresión de TNF\alpha y CAMs.

El documento WO 00/71532 describe compuestos que son inhibidores de la angiogénesis, y por lo tanto pueden ser de utilidad en el tratamiento del cáncer. Los compuestos son compuestos heteroarílicos de 5 miembros, y se definen para englobar compuestos tienílicos. Estos están sustituidos en la posición 2 con un grupo de la fórmula -N(R^{2})R^{3}, en la que R^{3} puede ser -COR^{5}R^{6} y R^{2} es hidrógeno, entre otras cosas. También están sustituidos en la posición 3 con R, que es, entre otros, un grupo de la fórmula -CONR^{5}R^{6}, y en la posición 4 con un grupo -X^{1}R^{1}.

Descripción de la invención

Según la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I)

1

en la que:

\global\parskip0.900000\baselineskip

R^{1} representa NH_{2};

X representa O;

R^{2} representa hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, -NR^{6}R^{7}, -CONR^{6}R^{7}, -COOR^{6}, NR^{6}COR^{7}, -S(O)_{m}R^{6}, -SO_{2}NR^{6}R^{7}, NR^{6}SO_{2}R^{7}, alquilo C_{1}-C_{2}, trifluorometilo, alquenilo C_{2}-C_{3}, alquinilo C_{2}-C_{3}, trifluorometoxi, alcoxi C_{1}-C_{2} o alcanoilo C_{1}-C_{2};

A representa indol, benzotiofeno, benzofurano, tetrahidroisoquinolina, 1,3-benzodioxolano (metilendioxifenilo) o 1,4-benzodioxano (etilendioxifenilo), opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, nitro, -NR^{8}COR^{9}, -S(O)_{s}R^{8}, -SO_{2}NR^{8}R^{9}, -NR^{8}SO_{2}R^{9} y alquilo C_{1}-C_{6};

n representa un número entero de 0, 1 ó 2; y cuando n representa 2, cada grupo R^{3} se puede seleccionar independientemente;

R^{3} representa un grupo -W-Y-Z en el que:

W representa O, 3(O)_{r}, NR^{13}, CH_{2}, -CH_{2}-O- o un enlace;

Y representa un enlace, o Y representa un grupo -(CH_{2})_{p}-X-(CH_{2})_{q}- en el que p y q representan independientemente un número entero de 0, 1 ó 2; y X representa O, -CO- o CR^{14}R^{15};

R^{14} y R^{15} representan independientemente H, CH_{3} o F;

o R^{14} representa H o CH_{3}, y R^{15} representa hidroxilo o OCH_{3};

o el grupo CR^{14}R^{15} representa en conjunto un anillo de cicloalquilo C_{3}-C_{6};

Z representa:

(a)

un anillo de fenilo o un anillo heteroaromático de 5 o 6 miembros que contiene uno hasta tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S; estando el anillo fenílico o heteroaromático opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, -NR^{16}R^{17}, -CONR^{16}R^{17}, -COOR^{16}, -COR^{16}, -NR^{16}COR^{17}, -S(O)_{u}R^{16}, -SO_{2}NR^{16}R^{17}, -NR^{16}SO_{2}R^{17}, hidroxilo, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxi C_{1}-C_{6}; estando dichos grupos alquilo o alcoxi opcionalmente sustituidos además con uno o más grupos seleccionados de halógeno, ciano, hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{4} y NR^{18}R^{19}; o

(b)

un anillo de 3 a 7 miembros saturado que incorpora opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, y que incorpora opcionalmente un grupo carbonilo; estando dicho anillo saturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, -NR^{16}R^{17}, -CONR^{16}R^{17}, -COOR^{16}, -COR^{16}, -NR^{16}COR^{17}, -S(O)_{u}R^{16}, -SO_{2}NR^{16}R^{17}, -NR^{16}SO_{2}R^{17}, hidroxilo, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxi C_{1}-C_{6}; estando dichos grupos alquilo o alcoxi opcionalmente sustituidos además con uno o más grupos seleccionados de halógeno, ciano, hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{4} y NR^{18}R^{19}; o

(c)

Z representa hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{6}, CF_{3}, CHF_{2}, CH_{2}F o NR^{20}R^{21}, en el que R^{20} y R^{21} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con alcoxi C_{1}-C_{4};

R^{4} y R^{5} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{4}; o el grupo NR^{4}R^{5} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene opcionalmente un grupo O, S o NR^{23} adicional; en el que R^{23} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{6} y R^{7} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{2};

R^{8} y R^{9} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6};

R^{13} representa H o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{16} y R^{17} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6}; o el grupo NR^{16}R^{17} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene un grupo O, S o NR^{24} adicional; en el que R^{24} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};

R^{18} y R^{19} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{4}; o el grupo NR^{18}R^{19} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene un grupo O, S o NR^{25} adicional; en el que R^{25} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

\global\parskip1.000000\baselineskip

m, r, s, u y v representan independientemente un número entero de 0, 1 ó 2;

y sales farmacéuticamente aceptable del mismo.

Ciertos compuestos de fórmula (I) son capaces de existir en formas estereoisómeras. Se entenderá que la invención engloba todos los isómeros geométricos y ópticos de los compuestos de fórmula (I), y mezclas de los mismos, incluyendo racematos. Los tautómeros y sus mezclas también forman un aspecto de la presente invención.

Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, tienen la ventaja de que son inhibidores de la enzima IKK2.

La invención proporciona además un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Según la invención, también se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como un medicamento.

Otro aspecto de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades o estados en los que es beneficiosa la inhibición de la actividad de IKK2.

Otro aspecto de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de la enfermedad inflamatoria.

Según la invención, también se proporciona un método para tratar, o reducir, el riesgo de enfermedades o estados en los que es beneficiosa la inhibición de la actividad de IKK2, que comprende administrar a una persona que sufre o tiene el riesgo de dicha enfermedad o estado, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se proporciona un método para tratar o reducir el riesgo de enfermedad inflamatoria en una persona que sufre o tiene riesgo de dicha enfermedad, en el que el método comprende administrar a la persona una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En realizaciones particulares, el sistema anular A bicíclico condensado representa quinolina opcionalmente sustituida, indol, benzotiofeno, benzofurano, tetrahidroisoquinolina, 1,3-benzodioxolano (metilendioxifenilo) y 1,4-benzodioxano (etilendioxifenilo).

En una realización, el grupo R^{2} en la fórmula (I) representa H, halógeno o alquilo C_{1}-C_{2}. En otra realización, el grupo R^{2} representa H o metilo. En aún otra realización, el grupo R^{2} en la fórmula (I) representa H.

\vskip1.000000\baselineskip

Compuestos particulares de la invención incluyen los ejemplificados aquí:

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-benzofuranil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(3-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(5-indolil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(3-indolil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,3-benzodioxo-5-il)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(1H-indol-2-il)tiofeno-3-carboxamida;

3-[(aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-3-il)tiofeno-2-carboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-morfolin-4-ilmetilbenzo[b]tiofen-5-il)tiofeno-3-carboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-[4-(2-morfolin-4-iletoxi)-1-benzotien-2-il]-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-{2-[4-metilfenilsulfonil]-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il}tiofeno-3-carboxamida;

3-[(aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-2-il)tiofeno-2-carboxamida;

y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Compuestos particulares adicionales incluyen:

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(3-quinolinil)-3-tiofenocarboxamida; y

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(8-quinolinil)-3-tiofenocarboxamida;

y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alquilo C_{1}-C_{6}" citada aquí representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo y t-butilo. Las expresiones "alquilo C_{1}-C_{2}" y "alquilo C_{1}-C_{4}" se han de interpretar de forma análoga.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alquenilo C_{2}-C_{3}" citada aquí representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene 2 ó 3 átomos de carbono que incorporan al menos un doble enlace carbono-carbono. Ejemplos de tales grupos incluyen etenilo y propenilo. La expresión "alquenilo C_{2}-C_{6}" se ha de interpretar de forma análoga.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alquinilo C_{2}-C_{3}" citada aquí representa un grupo alquilo de cadena lineal que tiene 2 ó 3 átomos de carbono que incorporan un triple enlace carbono-carbono. Ejemplos de tales grupos incluyen etinilo y propinilo. La expresión "alquinilo C_{2}-C_{6}" se ha de interpretar de forma análoga.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "cicloalquilo C_{3}-C_{6}" citada aquí representa un anillo carbocíclico saturado que tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos incluyen ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alcoxi C_{1}-C_{4}" citada aquí representa un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada que tiene 1 a 4 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos incluyen metoxi, etoxi e isopropoxi. Las expresiones "alcoxi C_{1}-C_{2}" y "alcoxi C1-C6" se han de interpretar de forma análoga.

Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alcanoilo C_{1}-C_{2}" citada aquí representa un grupo formilo o acetilo.

Excepto que se indique de otro modo, el término "halógeno" citado aquí representa fluoro, cloro, bromo y yodo.

Ejemplos de anillo heteroaromático de 5 a 7 miembros que contiene 1 a 3 heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, incluyen furano, tiofeno, pirrol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, imidazol, pirazol, triazol, piridina, piridazina, pirimidina y pirazina. La expresión "anillo heteroaromático de 5 a 7 miembros que contiene uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S" se ha de interpretar de forma análoga.

Los ejemplos de anillo de 5 a 7 miembros saturado, que incorpora opcionalmente uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, incluyen ciclopentilo, ciclohexilo, tetrahidrofurano, pirrolidina, piperidina, piperazina y morfolina.

Los ejemplos de un sistema anular bicíclico condensado, en el que un anillo es un anillo de fenilo o un anillo heteroaromático de 5 a 7 miembros que contiene uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, y el otro anillo es un anillo fenílico condensado o un anillo heteroaromático de 5 a 7 miembros condensado, que contiene uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, o un anillo saturado de 5 a 7 miembros, condensado, que incorpora opcionalmente uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre, incluyen naftilo, quinolina, isoquinolina, tetrahidroisoquinolina, indol, benzotiofeno, benzofurano, bencimidazol, 1,3-benzodioxolano (metilendioxifenilo) y 1,4-benzodioxano (etilendioxifenilo).

Los ejemplos de un anillo azacíclico saturado de 5 ó 6 miembros, que contiene opcionalmente un grupo O, S o NR adicional, incluyen pirrolidina, piperidina, piperazina y morfolina.

Los ejemplos de un anillo de 3 a 7 miembros saturado, que incorpora opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, y que incorpora opcionalmente un grupo carbonilo, incluyen ciclopropilo, ciclohexilo, pirrolidina, piperidina, morfolina, tetrahidrofurano, piperidin-2-ona y piperidin-4-ona.

Según la invención, también se proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero o racemato del mismo, que comprende:

\newpage

(a)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II):

2

en la que A, R^{2}, R^{3} y n son como se definen en la fórmula (I), con un isocianato o isotiocianato o un derivado de acilo, R^{1}-CO-L, en el que L es un grupo saliente; o

(b)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III)

3

en la que R^{3}, n y A son como se definen en la fórmula (I)

con un compuesto de fórmula (IV)

4

en la que X, R^{1} y R^{2} son como se definen en la fórmula (I), y LG representa un grupo saliente; o

(c)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (V)

5

en la que R^{3}, n y A son como se definen en la fórmula (I), y LG representa un grupo saliente, con un compuesto de fórmula (VI)

6

en la que X, R^{1} y R^{2} son como se definen en la fórmula (I);

y, cuando sea necesario, convertir el compuesto resultante de fórmula (I), u otra sal del mismo, en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I); y, cuando se desee, convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en un isómero óptico del mismo.

En el proceso (a), los reactivos isocianato adecuados incluyen isocianato de trimetilsililo, isotiocianato de trimetilsililo, isocianato de clorosulfonilo, isocianato de tricloroacetilo e isocianato de sodio. La reacción con isocianato de trimetilsililo o isotiocianato de trimetilsililo se puede llevar a cabo en un disolvente tal como diclorometano/dimetilformamida a una temperatura elevada adecuada, por ejemplo, a la temperatura de reflujo de la mezcla de reacción. La reacción con isocianato de clorosulfonilo se puede llevar a cabo en un disolvente tal como tolueno a temperatura ambiente. La reacción con isocianato de sodio se puede llevar a cabo en un sistema disolvente adecuado tal como ácido acético acuoso a temperatura ambiente. La reacción con isocianato de tricloroacetilo se puede llevar a cabo en un sistema disolvente adecuado, tal como acetonitrilo, a temperatura ambiente, tratando subsiguientemente la mezcla con amoníaco para dar compuestos de la fórmula general (I).

Los derivados de acilo adecuados, de fórmula R^{1}-CO-L, incluyen haluros de acilo, particularmente cloruros de acilo, y anhídridos de ácido. Las reacciones con tales derivados de acilo generalmente se llevan a cabo a temperatura ambiente en un disolvente adecuado tal como piridina, o en un disolvente tal como diclorometano en presencia de una base adecuada tal como trietilamina o piridina. Los compuestos de fórmula (I), en la que X representa O, se pueden convertir subsiguientemente en compuestos correspondientes de fórmula (I), en la que X representa S, mediante reacción con, por ejemplo, el reactivo de Lawesson.

En los procesos (b) y (c), los compuestos de las fórmulas (III) y (IV), o de las fórmulas (V) y (VI), se hacen reaccionar juntos bajo catálisis proporcionada por un complejo de un metal de transición, tal como paladio o níquel. En compuestos de fórmulas (III) y (VI), en condiciones apropiadas, el "metal" puede ser un metal o un semimetal tal como magnesio, cinc, cobre, estaño, silicio, circonio, aluminio o boro. Los grupos salientes adecuados incluyen yodo, bromo, cloro, triflato o fosfonato.

Se apreciará por los expertos en la técnica que, en los procesos de la presente invención, puede ser necesario proteger mediante grupos protectores a ciertos grupos funcionales tales como los grupos hidroxilo o amino en los reactivos de partida o compuestos intermedios. De este modo, la preparación de los compuestos de fórmula (I) puede implicar, en una etapa apropiada, la adición y eliminación de uno o más grupos protectores.

La protección y desprotección de grupos funcionales se describe completamente en "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 3ª edición, T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Wiley-Interscience (1999).

La presente invención incluye compuestos de fórmula (I) en forma de sales, en particular sales de adición de ácidos. Las sales adecuadas incluyen las formadas con ácidos tanto orgánicos como inorgánicos. Tales sales de adición de ácidos normalmente serán farmacéuticamente aceptables aunque las sales de ácidos no farmacéuticamente aceptables pueden ser de utilidad en la preparación y purificación del compuesto en cuestión. De este modo, las sales preferidas incluyen las formadas a partir de los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, tartárico, láctico, pirúvico, acético, succínico, fumárico, maleico, metanosulfónico y bencenosulfónico.

Las sales de compuestos de fórmula (I) se pueden formar haciendo reaccionar la base libre, o una sal, enantiómero o racemato de la misma, con uno o más equivalentes del ácido apropiado. La reacción se puede llevar a cabo en un disolvente o en un medio en el que la sal es insoluble, o en un disolvente en el que la sal es soluble, por ejemplo, agua, dioxano, etanol, tetrahidrofurano o éter dietílico, o una mezcla de disolventes, que se puede eliminar a vacío o mediante liofilización. La reacción también puede ser un proceso metatético, o se puede llevar a cabo en una resina de intercambio iónico.

Los compuestos de fórmula (II) se pueden preparar mediante química estándar descrita en la bibliografía [por ejemplo, J. Het. Chem. 36, 333 (1999)] o mediante reacción de compuestos de fórmula (VII):

7

en la que A, R^{2}, R^{3} y n son como se definen en la fórmula (I), y L representa un grupo saliente, con amoníaco. Los grupos L adecuados incluyen halógeno, en particular cloro.

Los compuestos de fórmula (VII), en la que L es halo, se pueden preparar a partir del compuesto correspondiente de fórmula (VIII):

8

en la que A, R^{2}, R^{3} y n son como se definen en la fórmula (I), mediante tratamiento con un agente halogenante tal como cloruro de tionilo.

Los compuestos de fórmulas (III), (IV), (V), (VI) y (VIII) están comercialmente disponibles o se pueden preparar usando la química estándar como se ejemplifica aquí.

Ciertos compuestos intermedios nuevos forman un aspecto adicional de la invención.

Los compuestos de fórmula (I) tienen actividad como compuestos farmacéuticos, en particular como inhibidores de la enzima IKK2, y se pueden usar en el tratamiento (terapéutico o profiláctico) de estados/enfermedades en animales humanos y no humanos en los que es beneficiosa la inhibición de IKK2. Los ejemplos de tales estados/enfermedades incluyen enfermedades inflamatorias o enfermedades con un componente inflamatorio. Las enfermedades particulares incluyen artritis inflamatoria incluyendo artritis reumatoide, osteoartritis, espondilitis, síndrome de Reiters, artritis psoriática, lupus y enfermedad de resorción ósea; esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino que incluye la enfermedad de Crohn; asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfisema, rinitis, miastenia grave, enfermedad de Graves, rechazo de aloinjerto, psoriasis, dermatitis, trastornos alérgicos, enfermedades del complejo inmunitario, caquexia, ARDS, choque tóxico, insuficiencia cardíaca, infartos de miocardio, aterosclerosis, lesión por reperfusión, SIDA, cáncer y trastornos caracterizados por resistencia a insulina, tales como diabetes, hiperglucemia, hiperinsulinemia, dislipidemia, obesidad, enfermedad ovárica policística, hipertensión, enfermedad cardiovascular y síndrome X.

Los papeles dados a conocer de NF-\kappaB tanto en la oncogénesis como en la quimiorresistencia sugieren que la inhibición de esta ruta, a través del uso de un inhibidor de IKK2, tal como un inhibidor de IKK2 de molécula pequeña, podría proporcionar una nueva monoterapia para el cáncer, y/o una importante terapia coadyuvante para el tratamiento de tumores quimiorresistentes.

Es de particular interés las enfermedades seleccionadas de asma, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo la enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la enfermedad de resorción ósea, osteoartritis, control de la diabetes/glucémico, y cáncer.

De este modo, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define aquí anteriormente, para uso en terapia.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en terapia.

En aún un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o estados en los que es beneficiosa la modulación de la actividad de la enzima IKK2.

En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "terapia" también incluye "profilaxis", excepto que haya indicaciones específicas en sentido contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" se deben interpretar en consecuencia.

Es de esperar que la profilaxis sea particularmente importante para el tratamiento de personas que han sufrido un episodio previo o de otro modo se considera que tienen riesgo de la enfermedad o estado en cuestión. Las personas con riesgo de desarrollar un estado o enfermedad particular generalmente incluyen aquellas que tienen un historial familiar del estado o enfermedad, o aquellas que han sido identificadas mediante ensayos o detecciones genéticas y son particularmente susceptibles a desarrollar el estado o enfermedad.

La invención aún proporciona además un método para tratar una enfermedad mediada por IKK2, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define aquí anteriormente.

La invención también proporciona un método para tratar una enfermedad inflamatoria, especialmente asma, artritis reumatoide o esclerosis múltiple, en un paciente que sufre, o tiene riesgo de, dicha enfermedad, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define aquí anteriormente.

Para los usos terapéuticos anteriormente mencionados, la dosis administrada variará, por supuesto, con el compuesto empleado, el modo de administración, el tratamiento deseado y el trastorno indicado.

Los compuestos de fórmula (I), y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se pueden usar por sí mismos, pero generalmente se administrarán en forma de una composición farmacéutica en la que el compuesto/sal de fórmula (I) (ingrediente activo) está en asociación con un coadyuvante farmacéuticamente aceptable, diluyente o vehículo. Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá preferiblemente de 0,05 a 99% en peso (por ciento en peso), más preferiblemente de 0,05 a 80% en peso, aún más preferiblemente de 0,10 a 70% en peso, e incluso más preferiblemente de 0,10 a 50% en peso, del ingrediente activo, basándose todos los porcentajes en peso en la composición total.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en asociación con un coadyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptables.

La invención proporciona además un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de la invención, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, con un coadyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar tópicamente (por ejemplo, al pulmón y/o a las vías respiratorias, o a la piel) en forma de disoluciones, suspensiones, aerosoles de heptafluoroalcanos y formulaciones en polvo secas; o sistémicamente, por ejemplo mediante administración oral en forma de comprimidos, cápsulas, jarabes, polvos o gránulos, o mediante administración parenteral en forma de disoluciones o suspensiones, o mediante administración subcutánea o mediante administración rectal en forma de supositorios, o transdérmicamente. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de formulaciones farmacéuticas adecuadas se describen en, por ejemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

La invención se ilustra pero de ningún modo se limita mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(2-benzofuranil)-3-tiofenocarboxamida a) 2-Amino-3-tiofenocarboxamida

El compuesto del título se sintetizó según lo siguiente, usando el método descrito en Bull. Soc. Chim. France 2804 (1974).

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Una suspensión de 2,5-dihidroxi-1,4-ditiano (25 g) y cianoacetamida (19,3 g), en etanol (120 ml), se agitó y se calentó hasta 50ºC. Se añadió trietilamina (9,2 ml) durante 15 minutos, y la mezcla se agitó a 50ºC durante otras 2 h. Después de enfriar en hielo, el sólido se separó por filtración y se secó (21,4 g).

MS (ES) 143 (M+H)^{+}.

b) 2-[(Aminocarbonil)amino]-3-tiofenocarboxamida

Se suspendió 2-amino-3-tiofenocarboxamida (0,44 g) en acetonitrilo (25 ml), y se añadió gota a gota isotiocianato de tricloroacetilo (0,2 ml) con agitación durante 10 minutos. La agitación se continuó durante otras 3 h a temperatura ambiente, y luego se añadió una disolución de amoníaco en metanol (10 ml de una disolución 2 M), y la agitación se continuó durante otras 2 h. El disolvente se evaporó, y el residuo se trató con agua. El sólido resultante se separó por filtración y se lavó con más agua. La trituración con éter dio la urea del título (0,2 g). MS (ES) 186 (M+H)^{+}.

c) 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-bromo-3-tiofenocarboxamida

La 2-[(aminocarbonil)amino]-3-tiofenocarboxamida (1,0 g) se disolvió en ácido acético (20 ml), y se añadió durante 5 minutos una disolución de bromo (0,35 ml) en ácido acético (5 ml) con agitación rápida. La mezcla se agitó durante 90 minutos, y después se añadió a agua (50 ml). El producto se separó por filtración, y se lavó con agua y se secó a vacío (0,55 g).

MS (ES) 262/264 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 7,15 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,8 (s, 1H), 7,9 (m, 1H), 10,63 (br s, 1H).

d) 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(2-benzofuranil)-3-tiofenocarboxamida

Una disolución de 2-[(aminocarbonil)amino]-5-bromo-3-tiofenocarboxamida (0,26 g), carbonato de sodio (0,23 g), y ácido benzofuran-2-borónico (0,32 g), en dimetoxietano (60 ml) y agua (2 ml), se purgó con argón durante 10 minutos. Luego se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,2 g), y la mezcla se puso a reflujo con agitación durante 7 h. Después de enfriar, la mezcla se tamizó y se evaporó. El residuo se repartió entre acetato de etilo y disolución de carbonato sódico 3 N, y la capa de la interfaz sólida se separó por filtración (0,2 g).

MS (ES) 300 (M-H).

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,9 (s, 1H), 7,05 (m, 2H), 7,2 (m, 2H), 7,3 (m, 1H), 7,6 (m, 3H), 7,8 (m, 2H), 11,15 (br s, 1H).

Ejemplo 2 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(3-quinolinil)-3-tiofeno-carboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 1 (d), pero usando ácido quinolin-3-borónico.

MS (ES) 311 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 7,0 (m, 2H), 7,4 (m, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 8,0 (m, 2H), 8,4 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 11,06 (br s, 1H).

Ejemplo 3 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(8-quinolinil)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 1 (d), pero usando ácido quinolin-8-borónico.

MS (ES) 311 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,9 (m, 2H), 7,2 (m, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,7 (m, 1H), 7,8 (d, 1H), 8,1 (m, 2H), 8,4 (d, 1H), 9,0 (m, 1H), 11,01 (br s, 1H).

Ejemplo 4 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(2-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 1 (d), pero usando ácido benzotiofeno-2-borónico.

MS (ES) 316 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 7,0 (m, 2H), 7,35 (m, 3H), 7,4 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,8 (d, 1H), 7,85 (m, 1H), 7,9 (d, 1H), 11,09 (s, 1H).

Ejemplo 5 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(3-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 1 (d), pero usando ácido benzotiofeno-3-borónico.

MS (ES) 316 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,95 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,7 (s, 1H), 7,8 (m, 1H), 8,0 (d, 1H), 8,2 (d, 1H), 11,08 (br s, 1H).

Ejemplo 6 2-[(Aminocarbonil)aminol]-5-(5-indolil)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 1 (d), pero usando ácido indol-5-borónico.

MS (ES) 299 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,4 (s, 1H), 6,8 (m, 2H), 7,2 (m, 1H), 7,3 (m, 3H), 7,6 (s, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,7 (s, 1H), 10,91 (s, 1H), 11,0 (br s, 1H).

Ejemplo 7 2-[(Aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofenocarboxamida a) 2-Amino-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofeno-carboxamida

Se agitó 1,4-benzodioxan-6-ilacetona (1,7 g), cianoacetamida (0,84 g), azufre (0,36 g) y morfolina (1 ml) en etanol (5 ml), y se calentó a 55ºC durante 6 h. La mezcla de reacción se enfrió y se tamizó a partir de un pequeño insoluble, antes de añadir agua (150 ml). El sólido precipitado se separó por filtración, se lavó con agua y después se secó. El producto se trituró luego con éter, y se recogió (1,0 g).

MS (EI) 266 (M)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 7,4 (2H, d), 7,3 (2H, d), 6,9 (2H, s), 6,8 (2H, s), 2,2 (3H, s).

b) 2-[(Aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofenocarboxamida

La 2-amino-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofenocarboxamida (0,44 g) se disolvió en tetrahidrofurano (10 ml), se enfrió hasta 0ºC, y se añadió gota a gota isocianato de tricloroacetilo (0,11 ml) con agitación. La agitación se continuó durante otros 30 minutos a temperatura ambiente, y luego se añadió una disolución de amoníaco en metanol (8 ml de una disolución al 10%), y la agitación se continuó durante otras 3 h. El disolvente se evaporó, y el residuo se trató con acetato de etilo y el producto se separó por filtración.

MS (ES) 332 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,2 (s, 3H), 4,25 (s, 4H), 6,7 (m, 2H), 6,8 (m, 2H), 6,9 (m, 1H), 7,2 (br, 1H), 10,01 (br s, 1H).

Ejemplo 8 2-[(Aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(3-indolil)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 7, pero usando indol-3-acetona.

MS (ES) 313 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,2 (s, 3H), 6,65 (br s, 2H), 7,05 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,2 (m, 2H), 7,4 (m, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 10,14 (br s, 1H), 11,3 (m, 1H).

Ejemplo 9 2-[(Aminocarbonil)aminol-4-metil-5-(1,3-benzodioxolan-5-il)-3-tiofenocarboxamida

Preparado mediante el método del Ejemplo 7, pero usando 1,3-benzodioxolan-5-acetona.

MS (ES) 318 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,2 (s, 3H), 6,05 (s, 2H), 6,8 (m, 1H), 6,9 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 7,1 (m, 2H), 7,2 (m, 2H).

Ejemplo 10 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(1H-indol-2-il)tiofeno-3-carboxamida

a)

El compuesto del título se preparó tratando 2-[(aminocarbonil)amino]-5-(1H-1-terc-butiloxicarbonilindol-2-il)tiofeno-3-carboxamida con una mezcla de 90% de ácido trifluoroacético/10% de agua, a temperatura ambiente durante 4 h. La evaporación dio un sólido (250 mg) que se lavó con agua.

MS (ES) 301 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,5 (s, 1H), 6,95 (m, 4H), 7,35 (m, 2H), 7,45 (d, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,62 (br s, 1H), 10,9 (s, 1H), 11,32 (br s, 1H).

b)

2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[1H-1-terc-butiloxicarbonilindol-2-il)tiofeno-3-carboxamida

El compuesto del título (500 mg) se preparó a partir de ácido 1H-1-(terc-butoxicarbonil)indol-2-ilbóronico de manera similar al Ejemplo 1(d), excepto que el producto se obtuvo como un sólido por filtración de la mezcla de reacción, y se lavó secuencialmente con disolución 2 N de hidróxido sódico, con agua y con metanol.

MS (ES) 401 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 1,4 (s, 9H), 6,7 (m, 1H), 6,95 (br s, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,4 (m, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,65 (br s, 1H), 8,0 (m, 1H), 11,04 (br s, 1H).

Ejemplo 11 3-[(Aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-3-il)tiofeno-2-carboxamida a) Ácido 2-bromotiofeno-4-carboxílico

Preparado según el método descrito en J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 2445. MS (ES) 205 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 7,45 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 12,94 (br s, 1H).

b) 2-Bromo-4-(N-t-butiloxicarbonil)aminotiofeno

Se disolvió ácido 2-bromotiofeno-4-carboxílico (3 g) en t-butanol tibio seco (24 ml). Se añadió trietilamina (2,02 ml), seguido de la azida difenilfosforílica (3,12 ml). La disolución se calentó lentamente a reflujo, y el calentamiento se continuó a reflujo toda la noche. La mezcla de reacción se dejó enfriar luego, se vertió en agua (150 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se evaporaron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con acetato de etilo al 5% en hexano, para dar un sólido blanco (1,69 g).

MS (ES) 276 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 1,44 (s, 9H), 7,03 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 9,65 (s, 1H).

c) Ácido 5-bromo-3-[(t-butiloxicarbonil)amino]tiofeno-2-carboxílico

El 2-bromo-4-(N-t-butiloxicarbonil)aminotiofeno (1,68 g) se agitó en THF seco (45 ml) en argón, y la disolución se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota diisopropilamiduro de litio (7,55 ml, disolución 2 M), y la agitación se continuó durante 3,5 h. Se añadió CO_{2} en polvo (exceso), y la mezcla se agitó durante otros 10 minutos antes de permitir que se calentara hasta la temperatura ambiente. Se añadió agua (50 ml), el THF se eliminó a vacío, y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolución 1 M de HCl (50 ml), con agua (50 ml) y con salmuera (50 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se evaporó el disolvente. El residuo se trituró con diclorometano, y el producto se recogió por filtración como un sólido amarillo pálido (1,57 g).

MS (ES) 320 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 9,38 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 1,42 (s, 9H).

d) 5-Bromo-3-(t-butiloxicarbonil)aminotiofeno-2-carboxamida

Se agitó ácido 5-bromo-3-[(t-butiloxicarbonil)-amino]tiofeno-2-carboxílico (0,80 g) en acetonitrilo (80 ml). Se añadieron hidroxibenzotriazol (1,41 g) e hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,62 g), y la agitación se continuó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió disolución concentrada de amoníaco acuoso (8 ml), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 h. El acetonitrilo se eliminó por evaporación. Se añadió agua (100 ml), y la mezcla se sometió a ultrasonidos y se trituró. El sólido blanquecino resultante se recogió entonces por filtración, se lavó con agua y se secó a vacío (0,763 g).

MS (ES) 319 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 1,45 (s, 9H), 7,63 (br s, 2H), 7,78 (s, 1H), 10,40 (s, 1H).

e) 3-Amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida

Se agitó 5-bromo-3-(t-butiloxicarbonil)aminotiofeno-2-carboxamida (0,76 g) en diclorometano (30 ml). Se añadió ácido trifluoroacético (5 ml), la disolución se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, se vertió en disolución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (200 ml), y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). Los extractos combinados se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron y se evaporaron para dar un sólido amarillo (0,511 g).

MS (ES) 221 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,50 (br s, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,87 (br s, 2H).

f) 3-[(Aminocarbonil)amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida

El compuesto del título se preparó a partir de 3-amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida de manera similar al Ejemplo 1 (b).

MS (ES) 264 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,63 (br s, 2H), 7,41 (br s, 2H), 7,97 (s, 1H), 10,02 (s, 1H).

g) 3-[(Aminocarbonil)amino-5-(1-benzotien-3-il)tiofeno-2-carboxamida

Se trataron con ultrasonidos la 3-[(aminocarbonil)amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida (0,222 g) y el ácido 1-benzotien-3-ilborónico (0,449 g) en 1,2-dimetoxietano (15 ml) y disolución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (3,5 ml), y se purgó con argón. Se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (95 mg), y la mezcla se calentó a reflujo con agitación durante 4,5 h, después se dejó enfriar y se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La disolución se filtró y se lavó con 1,2-dimetoxietano y agua. El filtrado se concentró a vacío y se recogió en diclorometano (20 ml) y disolución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml). El producto sólido se recogió por filtración, se lavó con diclorometano, con agua, con éter dietílico, y se secó (226 mg).

MS (ES) 318 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,60 (br s, 2H), 7,35-7,56 (m, 4H), 8,04 (s, 1H), 8,10 (t, 2H), 8,25 (s, 1H), 10,08 (s, 1H).

Ejemplo 12 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-(2-morfolin-4-ilmetil-benzo[b]tiofen-5-il)tiofeno-3-carboxamida

La 4-(5-bromobenzo[b]tiofen-2-ilmetil)morfolina (Registro Beilstein nº 1115497) (230 mg), en THF seco, se trató con borato de triisopropilo (291 mg), y se enfrió en argón hasta < -70ºC con agitación. Después de la adición gota a gota de n-butil-litio (0,921 ml, 1,6 M en hexanos), la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. El disolvente se evaporó y se sustituyó por una mezcla de dimetoxietano (20 ml) e hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (9 ml). A esta mezcla se añadió, en argón, 2-[(aminocarbonil)amino]-5-bromotiofen-3-carboxamida (98 mg) y tetraquis-trifenilfosfinapaladio (0) (25 mg), y la reacción se calentó hasta 90ºC durante 1,5 h. La mezcla de reacción se evaporó para eliminar la mayor parte de los orgánicos, y el residuo se distribuyó entre hidróxido sódico acuoso 2 M (30 ml) y diclorometano. Después de filtrar, la fase orgánica se separó y se extrajo con un volumen adicional de disolución de hidróxido sódico (10 ml). Los extractos acuosos combinados se acidificaron hasta pH 8, y se filtraron. Después de secar, el sólido se trituró con éter dietílico, y se secó para dar un polvo (27 mg). LCMS 417 (M+H)^{+}.

\newpage

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,47 (m, 4H), 3,65 (m, 4H), 3,80 (s, 2H), 6,95 (br s, 2H), 7,3 (br s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,5 (m, 1H), 7,69 (br s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 11,0 (s, 1H).

Ejemplo 13 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-[4-(2-morfolin-4-iletoxi)-1-benzotien-2-il]-3-tiofenocarboxamida

a)

El compuesto del título se preparó a partir de 4-[2-(1-benzotien-4-iloxi)etil]morfolina de manera similar al Ejemplo 12, excepto que la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 4 h. Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo se trató con carbonato sódico 3 M/diclorometano, y el sólido se filtró a partir de la interfaz. La purificación mediante HPLC preparativa dio el producto.

MS (ES) 447 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,5 (m, 4H), 2,8 (t, 2H), 3,55 (m, 4H), 4,25 (t, 2H), 7,0 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 7,35 (m, 3H), 7,8 (m, 1H), 11,05 (br s, 1H).

b)

4-[2-[(1-Benzotien-4-iloxi)etil]morfolina

Se calentaron hidrocloruro de 4-(2-cloroetil)morfolina (0,74 g), 1-benzotiofen-4-ol (0,5 g) y carbonato potásico (1,1 g) en dimetilformamida (15 ml), y se agitó a 80ºC durante 6 h. Después de enfriar, la mezcla se vertió en agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo. La fase del disolvente combinada se lavó dos veces con salmuera, se secó (sulfato de magnesio) y se evaporó para dar el producto (0,7 g).

MS (ES) 264 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,5 (m, 4H), 2,8 (t, 2H), 3,55 (m, 4H), 4,25 (t, 2H), 6,9 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,6 (d, 1H).

c)

1-Benzotiofen-4-ol

El compuesto se preparó como se describe en J. Amer. Chem. Soc., 1955, 77, 5939.

Ejemplo 14 2-[(Aminocarbonil)amino]-5-{2-[4-metilfenilsulfonil]-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il}tiofeno-3-carboxamida

a)

El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2-[4-metilfenilsulfonil]-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina de manera similar al Ejemplo 13, excepto que la mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 18 h. Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo se trató con hidróxido sódico 2 M y diclorometano, y la fase acuosa separada se ajustó hasta pH 8 usando ácido clorhídrico al 36%. El producto bruto se purificó mediante HPLC preparativa.

MS (ES) 471 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 2,4 (s, 3H), 2,8 (m, 2H), 3,2 (m, 2H), 4,1 (s, 2H), 6,9 (br, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 2H),7,5 (m, 1H), 7,7-7,9 (m, 5H), 11,0 (s, 1H).

b)

6-Bromo-2-[4-metilfenilsulfonil]-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolina

Se agitó 2-[3-bromofenil]-N-(4-metilfenilsulfonil)-etilamina (7,44 g) en cloroformo (100 ml) en argón a 5ºC durante la adición secuencial de formaldehído al 37-40% (3,5 ml) y oxicloruro de fósforo (30 ml). La mezcla se puso a reflujo entonces durante 3 h, se enfrió, se vertió en diclorometano (250 ml)/bicarbonato sódico saturado (300 ml), y se añadió cuidadosamente, en porciones, bicarbonato sódico sólido (160 g), a 5ºC. La fase acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado y con agua, se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron para dar un aceite, el cual cristalizó en isohexano/tolueno para dar el producto (3,48 g).

MS (ES) 365 (M)^{+}.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) 2,43 (s, 3H), 2,89 (t, 2H), 3,34 (t, 2H), 4,18 (s, 2H), 6,89 (d, 1H), 7,23 - 7,30 (m, 2H oscurecido), 7,33 (d, 2H), 7,72 (d, 2H).

c)

2-[3-Bromofenil]-N-(4-metilfenilsulfonil)etilamina

Se añadió hidrocloruro de 3-bromofeniletilamina (9,44 g) a THF (60 ml) que contiene trietilamina (12,24 ml), y se agitó en argón a 5ºC durante la adición en porciones, durante 15 minutos, de cloruro de 4-metilfenilsulfonilo (11,44 g). La suspensión se diluyó con THF (50 ml), y se agitó durante 16 h. El sólido se separó por filtración, se lavó con THF, y el filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en acetato de etilo, se lavó con ácido clorhídrico 1 N, con agua, con salmuera, y se secó (MgSO_{4}). La cromatografía sobre sílice ultrarrápida, eluyendo con cero hasta 25% de acetato de etilo en isohexano, dio el producto (9,67 g).

MS (ES) 352 (M-H)^{-}.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) 2,44 (s, 3H), 2,74 (t, 2H), 3,23 (q, 2H), 4,36 (t, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,14 (t, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,30 (d, 2H), 7,35 (dd, 1H), 7,69 (dd, 2H).

d)

Hidrocloruro de 3-bromofeniletilamina

La base libre del compuesto del título tiene el número 58971-11-2 del Registro de CAS, y un número 2716071 del Registro de Beilstein.

Ejemplo 15 3-[(Aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-2-il)tiofeno-2-carboxamida

El compuesto del título se preparó a partir de 3-[(aminocarbonil)amino-5-bromotiofeno-2-carboxamida y ácido 1-benzotien-2-il-borónico de una manera similar a la del Ejemplo 11 (g).

MS (ES) 318 (M+H)^{+}.

RMN ^{1}H (DMSO-D_{6}) 6,64 (br s, 2H), 7,33-7,47(m, 2H), 7,49 (br s, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,80 - 7,90 (m, 1H), 7,90 - 8,02 (m, 1H), 8,23 (s, 1H), 10,05 (s, 1H).

\vskip1.000000\baselineskip

Evaluación farmacológica de los compuestos Ensayo de Quinasa en Filtro para IKK2

Los compuestos se ensayaron para determinar la inhibición de IKK2 usando un ensayo de quinasa en filtro. Los compuestos de ensayo se disolvieron hasta 10 mM en dimetilsulfóxido (DMSO). Los compuestos se diluyeron entonces 1 en 40 en tampón de quinasa (50 mM de Tris, pH 7,4, que contiene 0,1 mM de EGTA, 0,1 mM de ortovanadato de sodio y 0,1% de \beta-mercaptoetanol). Se realizaron a partir de esta disolución diluciones en serie de 1 en 3 con 2,5% de DMSO en tampón de quinasa. Se añadieron 20 \mul de dilución del compuesto a los pocillos de una placa de 96 pocillos, por duplicado. Se añadieron 20 \mul de 2,5% de DMSO en tampón de quinasa, en lugar del compuesto, a los pocillos del control (0% de inhibición). Se añadieron 20 \mul de EDTA 0,5 M, en lugar de compuesto, a los pocillos del fondo (100% de inhibición).

Se añadieron 10 \mul de una mezcla de acetato de magnesio, ATP sin marcar, y ATP marcado con ^{33}P, a cada pocillo, y se realizó de forma que la concentración final fue 10 mM de acetato de magnesio, 1 \muM de ATP y 0,1 \muCi de ^{33}P-ATP. Al comienzo de la reacción se añadieron a cada pocillo 20 \mul de una mezcla de IKK2 (0,15 \mug/pocillo), 1-53 GST-I\kappaB (0,5 \mug/pocillo) y seroalbúmina bovina (BSA) (8,5 \mug/pocillo). El volumen final de la reacción fue 50 \mul.

Las reacciones de quinasa se incubaron a 21ºC durante 80 minutos, y la reacción se detuvo precipitando la proteína por adición de un volumen igual (50 \mul) de ácido tricloroacético al 20% (TCA). Se dejó que el precipitado se formara durante 10 minutos y después se filtró en una placa de 96 pocillos de unifiltro GF/C. Cada filtro se lavó dos veces con aproximadamente 1 ml de TCA al 2%. La placa del filtro se secó a 30-40ºC durante 60 minutos, se añadieron 20 \mul de producto para centelleo a cada pocillo, y la placa se cerró herméticamente y se contó la radioactividad en un contador de centelleo para microplacas Packard Topcount.

Cuando se ensayan en el ensayo anterior, los compuestos de los Ejemplos 1 a 15 dieron valores de IC_{50} menores que 10 \muM, indicando que es de esperar que muestren una actividad terapéutica útil.

Ensayo de Quinasa en Filtro para IKK1

La selectividad de los compuestos se determinó ensayándolos en busca de la inhibición de IKK1 usando un ensayo de quinasa en filtro. Las condiciones del ensayo fueron idénticas al ensayo de quinasa en filtro para IKK2, excepto que se añadió a cada pocillo, al comienzo de la reacción, una mezcla de IKK1 (0,25 \mug/pocillo) y 1-53 GST I\kappaB (9 \mug/pocillo).

Inhibición mediante PBMC de la producción de TNF\alpha inducida por LPS

Se determinó el efecto de los compuestos de ensayo sobre la activación del factor nuclear \kappaB (NF\kappaB) en células midiendo la inhibición de la producción de factor alfa de necrosis tumoral (TNF\alpha) por células mononucleares de sangre periférica (PBMC) estimuladas mediante lipopolisacárido bacteriano (LPS).

Se recogió sangre humana (250 ml), anticoagulada con heparina, procedente de voluntarios sanos. Se colocaron alícuotas de sangre (25 ml) en 20 ml de Lymphoprep (Nycomed) en tubos de centrífuga de polipropileno de 50 ml. Los tubos se centrifugaron (Sorval RT600B) a 2.500 rpm durante 30 minutos. Se recogió la capa turbia que contiene las PBMC, con una pipeta Pasteur de punta fina, se transfirieron en 8 tubos limpios de centrífuga de polipropileno (aproximadamente 10 ml por tubo) y se diluyeron hasta 50 ml con disolución salina tamponada con fosfato (PBS). Estos tubos se centrifugaron a 2.000 rpm durante 8 minutos. Se añadió PBS (10 ml) a cada pelete celular, y las células se resuspendieron suavemente. Las células se agruparon en 4 tubos de centrífuga, se añadió PBS a cada tubo para completar el volumen hasta 50 ml, y los tubos se centrifugaron a 1.400 rpm durante 8 minutos. Los peletes celulares se resuspendieron nuevamente en 10 ml de PBS, se reunieron en 2 tubos de centrífuga, el volumen se completó hasta 50 ml con PBS, y los tubos se centrifugaron a 900 rpm durante 10 minutos.

Los peletes celulares finales se resuspendieron suavemente en 10 ml de medio de cultivo de tejidos (RPMI que contiene 1% de suero humano inactivado por calor, L-glutamina y penicilina y estreptomicina), se combinaron en un tubo, y el volumen se completó hasta 30 ml con medio RPMI. Las células se contaron, y la suspensión celular se diluyó hasta 2,6 x 10^{6} células/ml.

Los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO hasta 10 mM, y se diluyeron 1 en 250 (40 \muM) con medio RPMI. Los compuestos se diluyeron entonces en serie de 1 en 3 con 0,4% de DMSO en medio RPMI. Se transfirieron alícuotas de las diluciones del compuesto de ensayo (50 \mul) a los pocillos de una placa de 96 pocillos. Los pocillos del control contenían 0,4% de DMSO en RPMI, en lugar del compuesto.

Se añadieron a cada pocillo alícuotas de la suspensión celular (100 \mul), y las placas se incubaron a 37ºC durante 30 minutos. Se añadieron a los pocillos 50 \mul de 40 \mug/ml de LPS (Sigma, L-4130) para estimular la producción de TNF\alpha por las células, y las placas se incubaron toda la noche a 37ºC. Se añadió medio RPMI (50 \mul) a los pocillos de control negativo, en lugar de LPS. El volumen final de la incubación fue 200 \mul.

Las placas se centrifugaron durante 4 minutos a 1.200 rpm, y los sobrenadantes se retiraron para medir la concentración de TNF\alpha. Se midió la viabilidad del pelete celular que queda, usando el reactivo WST-1 (Boehringer Mannheim, 1044807). Se añadieron 100 \mul de medio RPMI que contiene 10 \mul de reactivo WST-1, a cada pocillo, y las placas se incubaron durante 0,5 a 3 h. Entonces se midió la absorbancia a 450 nm usando un espectrofotómetro de placas de 96 pocillos.

Se midió el TNF\alpha en los sobrenadantes (recientemente recogidos o almacenados congelados a -20ºC), usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). La placa de ELISA se preparó revistiendo los pocillos de una placa de 96 pocillos con un anticuerpo monoclonal anti-TNF\alpha humano de oveja (100 \mul de 1 \mug/ml de anticuerpo diluido en tampón de revestimiento; 0,5 M de tampón de carbonato/bicarbonato, pH 9,6 que contiene 0,2 g/l de azida sódica), e incubando toda la noche a 4ºC. Los pocillos del blanco no se revistieron. Los pocillos se lavaron una vez con 0,1% de BSA en PBS que contiene 0,05% de Tween (PBS/Tween) y después se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente con 1% de BSA en tampón de revestimiento (200 \mul). Los pocillos se lavaron entonces 3 veces con 0,1% de BSA en PBS/Tween.

Las muestras de sobrenadante procedentes de la incubación de PBMC se diluyeron 1 en 3 con 1% de BSA en PBS/Tween. Se añadieron a la placa de Elisa alícuotas de 100 \mul de estas diluciones. Otros pocillos contenían 100 \mul de patrón de TNF\alpha (10, 3,3, 1,1, 0,37, 0,12, 0,04, 0,014 y 0 ng/ml). La placa de ELISA se incubó a temperatura ambiente durante 2 h antes de que los pocillos se lavaran 3 veces con 0,1% de BSA en PBS/Tween. Se añadió a cada pocillo un anticuerpo anti-TNF\alpha humano de conejo (100 \mul de una disolución de 2,5 \mug/ml), y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 1,5 h. Los pocillos se lavaron entonces 3 veces con 0,1% de BSA en PBS/Tween. Se añadió a cada pocillo conjugado de IgG anti-conejo de cabra con peroxidasa de rábano picante (ICN, 674371; 100 \mul de una dilución 1 en 10.000), y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 1,5 h. Los pocillos se lavaron 3 veces con 0,1% de BSA en PBS/Tween.

El sustrato de peroxidasa se preparó disolviendo un comprimido de TMB de 1 mg (Sigma, T-5525) en 100 \mul de DMSO (100 \mul), y añadiendo éste y 36 \mul de UHPO (BDH, 30559; comprimido de 1 g disuelto en 25 ml de agua destilada) a 10 ml de tampón de citrato/acetato 0,1 M, pH 6. Se añadieron 100 \mul de sustrato a cada pocillo, y la placa se incubó en la oscuridad a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. La reacción se detuvo añadiendo 25 \mul de ácido sulfúrico 2 M a cada pocillo. La absorbancia se midió a 450 nm en un espectrofotómetro de placas de 96 pocillos.

Claims (14)

1. Un compuesto de la fórmula (I)

9

en la que:

R^{1} representa NH_{2};

X representa O;

R^{2} representa hidrógeno, halógeno, ciano, nitro, -NR^{6}R^{7}, -CONR^{6}R^{7}, -COOR^{6}, NR^{6}COR^{7}, -S(O)_{m}R^{6}, -SO_{2}NR^{6}R^{7}, NR^{6}SO_{2}R^{7}, alquilo C_{1}-C_{2}, trifluorometilo, alquenilo C_{2}-C_{3}, alquinilo C_{2}-C_{3}, trifluorometoxi, alcoxi C_{1}-C_{2} o alcanoilo C_{1}-C_{2};

A representa indol, benzotiofeno, benzofurano, tetrahidroisoquinolina, 1,3-benzodioxolano (metilendioxifenilo) o 1,4-benzodioxano (etilendioxifenilo), opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, nitro, -NR^{8}COR^{9}, -S(O)_{s}R^{8}, -SO_{2}NR^{8}R^{9}, -NR^{8}SO_{2}R^{9} y alquilo C_{1}-C_{6};

n representa un número entero de 0, 1 ó 2; y cuando n representa 2, cada grupo R^{3} se puede seleccionar independientemente;

R^{3} representa un grupo -W-Y-Z en el que:

W representa O, S(O)_{r}, NR^{13}, CH_{2}, -CH_{2}-O- o un enlace;

Y representa un enlace, o Y representa un grupo -(CH_{2})_{p}-X-(CH_{2})_{q}- en el que p y q representan independientemente un número entero de 0, 1 ó 2; y X representa O, -CO- o CR^{14}R^{15};

R^{14} y R^{15} representan independientemente H, CH_{3} o F;

o R^{14} representa H o CH_{3}, y R^{15} representa hidroxilo o OCH_{3};

o el grupo CR^{14}R^{15} representa en conjunto un anillo de cicloalquilo C_{3}-C_{6};

Z representa:

(a)

un anillo de fenilo o un anillo heteroaromático de 5 o 6 miembros que contiene uno hasta tres heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S; estando dicho anillo fenílico o heteroaromático opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, -NR^{16}R^{17}, -CONR^{16}R^{17}, -COOR^{16}, -COR^{16}, -NR^{16}COR^{17}, -S(O)_{u}R^{16}, -SO_{2}NR^{16}R^{17}, -NR^{16}SO_{2}R^{17}, hidroxilo, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxi C_{1}-C_{6}; estando dichos grupos alquilo o alcoxi opcionalmente sustituidos además con uno o más grupos seleccionados de halógeno, ciano, hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{4} y NR^{18}R^{19}; o

(b)

un anillo de 3 a 7 miembros saturado que incorpora opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, y que incorpora opcionalmente un grupo carbonilo; estando dicho anillo saturado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, ciano, -NR^{16}R^{17}, -CONR^{16}R^{17}, -COOR^{16}, -COR^{16}, -NR^{16}COR^{17}, -S(O)_{u}R^{16}, -SO_{2}NR^{16}R^{17}, -NR^{16}SO_{2}R^{17}, hidroxilo, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxi C_{1}-C_{6}; estando dichos grupos alquilo o alcoxi opcionalmente sustituidos además con uno o más grupos seleccionados de halógeno, ciano, hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{4} y NR^{18}R^{19}; o

(c)

Z representa hidroxilo, alcoxi C_{1}-C_{6}, CF_{3}, CHF_{2}, CH_{2}F o NR^{20}R^{21}, en el que R^{20} y R^{21} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con alcoxi C_{1}-C_{4};

R^{4} y R^{5} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{4}; o el grupo NR^{4}R^{5} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene opcionalmente un grupo O, S o NR^{23} adicional; en el que R^{23} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{6} y R^{7} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{2};

R^{8} y R^{9} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6};

R^{13} representa H o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{16} y R^{17} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6}; o el grupo NR^{16}R^{17} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene un grupo O, S o NR^{24} adicional; en el que R^{24} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};

R^{18} y R^{19} representan independientemente H o alquilo C_{1}-C_{4}; o el grupo NR^{18}R^{19} representa un anillo azacíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene un grupo O, S o NR^{25} adicional; en el que R^{25} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

m, r, s, u y v representan independientemente un número entero de 0, 1 ó 2;

y sales farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto de la fórmula (I), según la reivindicación 1, en el que R^{2} representa H o metilo.

\vskip1.000000\baselineskip

3. Un compuesto de fórmula (I), según la reivindicación 1, seleccionado de:

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-benzofuranil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(3-benzotiofenil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(5-indolil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,4-benzodioxan-6-il)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(3-indolil)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-4-metil-5-(1,3-benzodioxo-5-il)-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(1H-indol-2-il)tiofeno-3-carboxamida;

3-[(aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-3-il)tiofeno-2-carboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(2-morfolin-4-ilmetilbenzo[b]tiofen-5-il)tiofeno-3-carboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-[4-(2-morfolin-4-iletoxi)-1-benzotien-2-il]-3-tiofenocarboxamida;

2-[(aminocarbonil)amino]-5-{2-[4-metilfenilsulfonil]-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il}tiofeno-3-carboxamida;

3-[(aminocarbonil)amino]-5-(1-benzotien-2-il)tiofeno-2-carboxamida;

y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

4. Un compuesto seleccionado de:

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(3-quinolinil)-3-tiofenocarboxamida; y

2-[(aminocarbonil)amino]-5-(8-quinolinil)-3-tiofenocarboxamida;

y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\newpage

5. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I), según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende:

(a)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II):

10

en la que A, R^{2}, R^{3} y n son como se definen en la reivindicación 1, con un isocianato o isotiocianato o un derivado de acilo, R^{1}-CO-L, en el que L es un grupo saliente; o

(b)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III)

11

en la que R^{3}, n y A son como se definen en la reivindicación 1

con un compuesto de fórmula (IV)

12

en la que X, R^{1} y R^{2} son como se definen en la reivindicación 1, y LG representa un grupo saliente; o

(c)

hacer reaccionar un compuesto de fórmula (V)

13

en la que R^{3}, n y A son como se definen en la reivindicación 1, y LG representa un grupo saliente, con un compuesto de fórmula (VI)

14

en la que X, R^{1} y R^{2} son como se definen en la reivindicación 1;

y, cuando sea necesario, convertir el compuesto resultante de fórmula (I), u otra sal del mismo, en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I); y, cuando se desee, convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en un isómero óptico del mismo.

6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en asociación con un coadyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptables.

7. Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica, según la reivindicación 6, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, con un coadyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptables.

8. Un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso como medicamento.

9. Uso de un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades inflamatorias.

10. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es asma.

11. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es artritis reumatoide.

12. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es esclerosis múltiple.

13. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

14. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es cáncer.