ES2271548T3 - Enfoque no hormonal de anticoncepcion masculina. - Google Patents
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Abstract
Método para hacer que resulte reversiblemente estéril un mamífero macho fértil, que comprende las etapas siguientes: (a) administrar a dicho mamífero una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable: en la que cada uno de R11, R11'', R12, R12'', R13, R13'', R14, R14'', R15 y R15'', se selecciona, independientemente uno del otro, de entre el grupo constituido por -H; -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH2; alquil- y dialquilamino; alquilo C1-6 lineal o ramificado, alquenilo y alquinilo C2-6; aralquilo; alcoxi C1-6 lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi; -(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO2, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril); -C(O)NH(alquilo C1-6); -C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil C1-6)sulfonilo; arilsulfonilo; sulfamoílo, (alquil C1-6)sulfamoílo; (alquil C1-6)tio; (alquil C1-6)sulfonamida; arilsulfonamida; -NHNH2; -NHOH; arilo y heteroarilo; en la que cada fracción alquilo, alquenilo, alquinilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituida por uno o más grupos independientemente seleccionados de entre el grupo constituido por -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH2; alquil- y dialquilamino; alquilo C1-6 lineal o ramificado, alquenilo y alquinilo C2-6; aralquilo; alcoxi C1-6 lineal o ramificado, ariloxi; aralcoxi; -(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO2, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril); - C(O)NH(alquil C1-6); -C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil C1-6)sulfonilo; arilsulfonilo; sulfamoílo, (alquil C1-6)sulfamoílo; (alquil C1-6)tio; (alquil C1-6)sulfonamida; arilsulfonamida; -NHNH2 y - NHOH; y en la que por lo menos dos de entre R11, R11'', R12, R12'', R13, R13'', R14, R14'', R15 y R15'' se seleccionan de entre el grupo constituido por -CH3, -CH2OH y -OH.
Description
Enfoque no hormonal de anticoncepción
masculina.
La presente solicitud reivindica prioridad
basándose en la solicitud provisional US nº 60/381.329 presentada
el 20 de mayo de 2002 y la solicitud provisional US nº 60/363.561
presentada el 13 de marzo de 2002.
La presente invención se refiere a un método de
esterilización reversible de un mamífero macho mediante la
administración de un anticonceptivo específico para mamíferos
macho.
Los glucoesfingolípidos (GSL) son moléculas
anfipáticas que se encuentran en las membranas del plasma de los
mamíferos y están constituidas por el compuesto hidrófobo ceramida y
una de las muchas estructuras diferentes de oligosacárido (véase
Svennerholm, (1994) Prog. Brain Res. 101,
XI-XIV para la nomenclatura de GSL), los GSL han
estado involucrados en múltiples procesos biológicos, incluyendo la
señalización de la transmembrana, adherencia celular,
diferenciación, migración y morfogénesis, transformación oncogénica
y desarrollo del sistema nervioso (estudiado en Hakomori e
Igarashi, (1993) Adv. Lipid Res. 25,
147-62; Kopitz, Glycolipids: Structure and Function
(1997) en Glycosciences, eds. Gabius, H. J. y Gabius, S.
(Chapman y Hall, Weinheim), págs. 163-189; Kester,
(1997) Trends Glycosci. Glycotech. 9,
447-460; Lloyd y Furukawa (1998) Glycoconj.
J. 15, 627-36; Hakomori, et al., (1998)
Glycobiology 8, xi-xix; Hakomori,
(1998) Acta Anat. (Basel) 161, 79-80;
Dickson, (1998) Annu. Rev. Biochem. 67,
27-48; Ledeen, et al., (1998) en Ann. NY
Acad. Sci. (NY Acad. Sci. New York), vol. 845; Schuette, et
al., (1999) Biol. Chem. 380,
759-66). Sin embargo, hasta hace poco, han sido
difíciles de obtener pruebas directas de significación biológica,
especialmente in vivo, debido a una falta de células y
organismos que sean escasas en GSL. En los últimos años, se han
identificado clones de ADNc que codifican las glucosiltransferasas
que desempeñan funciones clave en la serie de reacciones de
biosíntesis de GSL, incluyendo la ceramida glucosiltransferasa que
cataliza la primera etapa de la biosíntesis de todos los GSL a base
de glucosilceramida (estudiado en Lloyd y Furukawa (1998)
Glycoconj. J. 15, 627-36; Ichikawa y
Hirabayashi, (1998) Trends Cell Biol. 8,
198-202). La creación de una línea celular de
melanoma carente de esta última enzima ha demostrado que los GSL a
base de glucosilceramida no son esenciales para la viabilidad en
células individuales (Ichikawa, et al., (1994) Proc.
Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 2703-7). Las
células madre embrionarias murinas que carecen de esta enzima
pueden ser inducidas a diferenciación hematopoyética neuronal in
vitro, pero no forman tejidos bien diferenciados in
vitro. Los embriones murinos que carecen de ceramida
glucosiltransferasa no desarrollan ya la etapa de gástrula
(Yamashita, et al., (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA
96, 9142-7). Además, los ratones, en los que
se ha destruido el gen para la gangliósido GM2/GD2 sintetasa, y por
consiguiente desprovistos de todos los gangliósidos más complejos
que GM3/GD3, se desarrollan normalmente, pero presentan degeneración
axonal y mielinación reducida en sus sistemas nerviosos y presentan
deficiencias en el comportamiento psicomotor posteriormente a lo
largo de su vida (Sheikh, et al. (1999) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 96, 7532-7). Inesperadamente, la
ausencia de gangliósidos complejos en estos ratones está asociada
también a la espermatogénesis alterada y conduce a esterilidad
masculina (Takamiya, et al., (1998) Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 95, 12147-52).
Un enfoque no genético alternativo de
investigación de las funciones de GSL consiste en manipular sus
niveles con inhibidores valorables de la biosíntesis de GSL
(estudiado/descrito en Radin, et al., (1993) Adv. Lipid
Res. 26, 183-213; Platt y Butters, (1995)
Trends Glycosci. Glycotech. 7,
495-511; Kolter y Sandhoff, (1996) Chem. Soc.
Rev. 25, 371-381; Inokuchi, (1997)
Trends Glycosci Glycotech 9 suplemento,
S37-S45; van Echten-Deckert, et
al., (1998) J. Biol. Chem. 273,
1184-91; Lee, et al., (1999) J. Biol.
Chem. 274, 14662-9); los compuestos con
esta característica pueden tener varias aplicaciones clínicas
(estudiadas en Platt y Butters, (1998) Biochem. Pharmacol.
56, 421-30; Radin, (1999) Biochem.
Pharmacol. 57, 589-95). Se ha demostrado
anteriormente que los iminoazúcares alquilados reducen la velocidad
de síntesis de varios GSL a base de glucosilceramida inhibiendo la
ceramida glucosiltransferasa (Platt, et al., (1994) J.
Biol. Chem. 269, 8362-5; Platt, et
al., (1994) J. Biol. Chem. 269,
27108-14). Estos compuestos presentan la ventaja
exclusiva de que pueden administrarse por vía oral a animales
experimentales en un intervalo amplio de dosis y son bien tolerados
incluso a concentraciones elevadas de dosificación, permitiendo la
atenuación extensa y prolongada de la biosíntesis de GSL (Platt,
et al., (1997) J. Biol. Chem. 272,
19365-72; Andersson, et al., (2000)
Biochem. Pharmacol. 59: 821-29: Dwek,
R. A., Butters, T. D., Platt, F. M. y Zitzmann, N. (2002) Nature
Reviews Drug Discovery 1, 65-75). El
iminoazúcar alquilado N-butildeoxinojirimicina
(NB-DNJ) es un potente inhibidor de
alfa-glucosidasa 1 (implicado en la síntesis de
N-glucano), y un inhibidor aún más potente de
glucosilceramida glucosiltransferasa y es bien tolerado por el
hombre (Fishl, et al. (1994) J. Acquir. Immune Defic.
Syndr. 7, 139-47). Los inventores han
descubierto anteriormente que NB-DNJ es
terapéuticamente eficaz en modelos de ratón con degradación de GSL
alterada (Platt, et al., (1997) Science 276,
428-31; Jeyakurnar, et al., (1999) Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 96, 6388-93).
La sensibilidad de la espermatogénesis al
control hormonal ha atraído mucha atención al desarrollo de un
anticonceptivo masculino (Amory, et al., (2000) Trends
Endocrinol. Metab. 11, 61-66; Anderson, (2000)
Br. Med. Bull. 56, 717-728; Handelsman,
(2000) Int. J. Androl. 23 supl. 2, 8-12;
Oxynos, et al., (2000) Baillieres Best Pract. Res. Clin.
Endocrinol. Metab. 14, 473-487). Los hombres
pueden volverse azoospérmicos y por lo tanto estériles, por
secreción de gonadotropina (LH y FSH) procedente de la pituitaria.
Esto puede conseguirse por administración de progestógenos,
antiandrógenos, inhibidores de
5-alfa-reductasa o antagonistas de
la hormona de liberación de gonadotropina. Los problemas existentes
en estos enfoques son los siguientes (Anderson, (2000)
supra): en primer lugar, no son completamente eficaces; no
siempre se consigue la supresión completa de la espermatogénesis.
En segundo lugar, la carencia de gonadotropinas pituitarias produce
una disminución de la producción de la testosterona testicular, que
necesita la sustitución de la testosterona. Las preparaciones de
testosterona disponibles actualmente no son completamente
aceptables. En tercer lugar, la testosterona exógena presenta
numerosos efectos metabólicos indeseables. Por último, la mayoría de
los compuestos evaluados como anticonceptivos masculinos así como
la mayoría de las preparaciones de testosterona deben ser inyectadas
por vía intramuscular o ser implantadas por vía subdérmica. Por lo
tanto, continúa habiendo necesidad en la materia de enfoques no
endocrinos de intervención dermatológica en la generación y
maduración de células germinales masculinas. La presente invención
satisface este objetivo proporcionando un método no hormonal de
anticoncepción masculina.
La solicitud de patente WO 02/055498 que es una
técnica anterior según el artículo 54(3) CPE describe los
compuestos de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R es un alquilo
C_{1-16} de cadena lineal o ramificada,
opcionalmente sustituido por cicloalquilo
C_{3-7}, y opcionalmente interrumpido por -O- el
oxígeno que está separado del nitrógeno del anillo por al menos dos
átomos de carbono, o alquilarilo C_{1-10} en el
que arilo es fenilo, piridilo, tienilo o furilo en el que fenilo
está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes
seleccionados de entre F, Cl, Br, CF_{3}, OCF_{3}, OR^{1} y
alquilo C_{1-6} de cadena lineal o ramificada; y
R^{1} es hidrógeno, o alquilo C_{1-6} de cadena
lineal o ramificada; y su utilización en la esterilización
reversible de un mamífero macho
estéril.
La presente invención proporciona un método para
esterilizar de forma reversible un mamífero macho administrando a
dicho mamífero una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de iminoazúcar N-sustituido. Los
compuestos de iminoazúcar pueden representarse por la fórmula I con
la condición de la reivindicación 1
en la que cada uno de entre
R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'},
R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'}, se seleccionan,
independientemente uno del otro, de entre el grupo constituido por
-H; -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino;
alquilo C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi;
-(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO_{2}, -COOH,
-COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquilo C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-16})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2}; -NHOH; arilo y heteroarilo, en la que por lo menos 2
de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13},
R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} se seleccionan
de entre -CH_{3}, -CH_{2}OH y
-OH.
R^{2} es un sustituyente seleccionado de entre
el grupo constituido por alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-18}; y
aralquilo.
Cada porción alquilo, alquenilo, alquinilo y
arilo puede estar opcionalmente sustituida por uno o más grupos
independientemente seleccionados de entre el grupo constituido por
-OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino; alquilo
C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y alquinilo
C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado, ariloxi; aralcoxi;
-CN, -NO_{2}, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquil C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2}; y -NHOH, con la condición de que los compuestos de
fórmula I o su sal farmacéuticamente aceptable no presente la
fórmula siguiente
en la que R es un alquilo
C_{1-16} de cadena lineal o ramificada,
opcionalmente sustituido por cicloalquilo
C_{3-7}, y opcionalmente interrumpido por -O- el
oxígeno que está separado del nitrógeno del anillo por al menos dos
átomos de carbono, o alquilarilo C_{1-10} en el
que arilo es fenilo, piridilo, tienilo o furilo en el que fenilo
está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes
seleccionados de entre F, Cl, Br, CF_{3}, OCF_{3}, OR^{1} y
alquilo C_{1-6} de cadena lineal o ramificada;
y
R^{1} es hidrógeno, o alquilo
C_{1-6} de cadena lineal o ramificada;
Según un aspecto de la presente invención, la
composición se administra durante un tiempo suficiente para
esterilizar al mamífero macho; después del tratamiento, cuando la
composición ya no se administra, el mamífero macho vuelve a ser
fértil.
Según otro aspecto de la presente invención, la
composición se administra para esterilizar al mamífero macho, se
retira del mamífero con lo cual vuelve a ser completamente fértil, a
continuación se administra una vez más para esterilizar al
mamífero.
La administración de los compuestos de
iminoazúcar de la presente invención es la causa de que los ratones
macho sean estériles, pero no tiene efecto sobre la fertilidad
femenina. Por lo tanto, los compuestos de iminoazúcar de la
presente invención sirven efectivamente como anticonceptivos
masculinos.
La Figura 1A presenta los efectos de la
administración oral y de la retirada de
NB-DNJ sobre la fertilidad de ratones macho.
La Figura 1A demuestra que los animales eran no tratados o se les
administró NB-DNJ a razón de 2.400 mg/kg al
día durante una a cinco semanas, tras lo cual
NB-DNJ no se administró más. La Figura 1B
presenta los efectos de NB-DNJ y
NB-DGJ sobre los embarazos por macho después
de enjaular cada uno de los tres machos con cuatro ratones hembra
durante una semana.
Las Figuras 2A, 2B, 2C y 2D presentan la
dependencia de la dosis de la producción de esterilidad en ratones
machos a través de administración oral de
NB-DNJ.
La Figura 2A compara los embarazos por macho con
la dosis de NB-DNJ después de alimentar a los
machos con dietas que contenían NB-DNJ
durante cinco semanas y a continuación enjaular cada uno con cuatro
ratones hembra durante nueve días. La Figura 2B compara el número
de coágulos vaginales por macho con la dosis (no determinados para
1.200 mg/kg día). La Figura 2C compara el porcentaje de morfología
nuclear anormal con la dosis observado después de examinar los
espermatozoides del epidídimo. La Figura 2D compara el número de
células inmunofluorescentes debido a los antígenos acrosómicos con
la dosis (no determinadas, para 300 y 600 mg/kg día).
Las Figuras 3A, 3B, 3C y 3D presentan el efecto
de NB-DNJ en cuatro dosis diferentes sobre la
endocrinología reproductiva de cada ratón macho. La Figura 3A
presenta el efecto sobre la hormona luteinizante; la Figura 3B
presenta el efecto sobre la hormona estimulante del folículo; la
Figura 3C presenta el efecto sobre la testosterona del suero; y la
Figura 3D presenta el efecto sobre la testosterona testicular.
Las Figuras 4A, 4B, 4C, 4D, 4E y 4F comparan las
propiedades morfológicas de los espermatozoides de ratones normales
con las de los ratones tratados con NB-DNJ.
La Figura 4A presenta las secciones de los túbulos seminíferos de
la etapa I de un ratón de referencia; la Figura 4B presenta las
secciones en un ratón tratado con 50 mg/kg/día de
NB-DNJ; y los recuadros presentan los
primeros planos de las cabezas de espermátides de la etapa 13. Las
Figuras 4C, 4D, 4E y 4F presentan los espermatozoides del epidídimo
que se incubaron con 18.6 antiacrosómico monoclonal y se tiñeron
por contraste con el colorante nuclear Hoechst 33342. La Figura 4C
presenta los espermatozoides del epidídimo de ratones normales,
mientras que las Figuras 4D, 4E y 4F presentan los espermatozoides
del epidídimo de ratones tratados con 150 mg/kg/día. Las
ampliaciones originales fueron 1.000\times.
Las Figuras 5A y 5C presentan las propiedades
morfológicas de los espermatozoides del epidídimo de ratones
normales, mientras que las Figuras 5B, 5D, 5E y 5F presentan lo
mismo en ratones tratados con NB-DNJ (1.200
mg/kg/día). La Figura 5A presenta una cabeza normal y una pieza
media y la Figura 5B presenta una cabeza de espermatozoide similar
a una espátula con una vaina mitocondrial achaparrada desorganizada.
Las Figuras 5C presentan un espermatozoide normal y las Figuras D,
E y F presentan espermatozoides con alteraciones en la forma
nuclear, orientación de la cola y morfología y disposición de las
mitocondrias. La barra representa 2 \mum.
Las Figuras 6A, 6B, 6C, 6D y 6E presentan los
efectos de NN-DGJ (250 mg/kg/día) sobre
ratones macho. La Figura 6A demuestra que la ganancia de peso de
ocho ratones tratados con NN-DGJ fue la misma
que para los ratones no tratados. La Figura 6B compara las
concentraciones de glucógeno en el hígado en ratones tratados con
NN-DGJ y no tratados. La Figura 6C compara
los pesos del timo y del bazo entre los ratones tratados con
NN-DGJ y no tratados. La Figura 6D presenta
la fertilidad de cuatro ratones macho después de cinco semanas de
tratamiento con NN-DGJ, y de nuevo a las
seis semanas una vez interrumpido el tratamiento. Asimismo, la
Figura 6E demuestra el efecto de NN-DGJ
sobre el tamaño de la camada después de cinco semanas de tratamiento
y de nuevo una vez transcurridas seis semanas desde que se
interrumpió el tratamiento.
Las Figuras 7A, 7B y 7C presentan los efectos de
NN-6-MeDGJ (250 mg/kg/día)
sobre ratones macho. La Figura 7A compara la ganancia de peso de
ratones tratados con
NN-6-MeDGJ con la de los
ratones no tratados. La Figura 7B demuestra que los movimientos
espontáneos horizontales y verticales de los ratones tratados con
NN-6-MeDGJ en una prueba en
campo abierto no se diferenciaron de los de los ratones no tratados.
La Figura 7C compara los pesos de los intestinos, timo y bazo entre
los ratones tratados y no tratados con
NN-6-MeDGJ.
Las Figuras 8A y 8B demuestran el efecto de
NN-6-MeDGJ sobre la
fertilidad de ratones macho (15 mg/kg/día, bajo, bajo (bomba); o
250 mg/kg/día, alto). La Figura 8A compara el número de camadas, y
la Figura 8B compara el tamaño de la camada, en cada régimen de
dosificación durante el tratamiento hasta 5 semanas después
del
tratamiento.
tratamiento.
A menos que se especifique de otro modo, los
términos "un" o "una" significan "uno/una o más".
A menos que se especifique de otro modo, el
término "alquilo" tal como se utiliza en la presente memoria se
refiere a radicales alquilo de cadena lineal y ramificada que
contienen 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono e incluye, por
ejemplo, metilo, etilo, butilo y nonilo.
El término "arilo" tal como se utiliza en
la presente memoria se refiere a un grupo monocíclico aromático tal
como fenilo o un grupo aromático benzofusionado tal como indanilo,
naftilo o fluorenilo y similares.
El término "heteroarilo" se refiere a
compuestos aromáticos que contienen uno o más heteroátomos. Los
ejemplos incluyen piridilo, furilo y tienilo o un aromático
benzofusionado que contiene uno o más heteroátomos tales como
indolilo y quinolinilo.
El término "heteroátomo" tal como se
utiliza en la presente memoria se refiere a átomos no de carbono
tales como N, O y S.
El término "cicloalquilo" tal como se
utiliza en la presente memoria se refiere a un anillo carbocíclico
que contiene 3, 4, 5, 6, 7 u 8 carbonos e incluye, por ejemplo,
ciclopropilo y ciclohexilo.
A menos que se especifique de otra forma, el
término "alcoxi" tal como se utiliza en la presente memoria se
refiere a un alcoxi de cadena lineal o ramificada que contiene 1, 2,
3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, metoxi y
etoxi.
El término "alquenilo" tal como se utiliza
en la presente memoria se refiere a un alquilo de cadena lineal o
ramificada que contiene uno o más dobles enlaces tales como
propenilo y vinilo.
El término "aralquilo" tal como se utiliza
en la presente memoria se refiere a un alquilo sustituido con un
arilo tales como bencilo y fenetilo.
El término "alquinilo" tal como se utiliza
en la presente memoria se refiere a un alquilo de cadena lineal o
ramificada que contiene uno o más triples enlaces tales como etinilo
y propinilo.
El término "ariloxi" tal como se utiliza en
la presente memoria se refiere a un sustituyente creado por
sustitución del átomo de hidrógeno en un grupo -OH con un grupo
arilo, e incluye, por ejemplo, fenoxi.
El término "aralcoxi" tal como se utiliza
en la presente memoria se refiere a un grupo alcoxi sustituido por
un grupo arilo, tal como 2-feniletoxi.
El término "alquilamino" tal como se
utiliza en la presente memoria se refiere a un grupo amino
sustituido con un grupo alquilo tales como metilamino (-NHCH_{3})
y etilamino (-NHCH_{2}CH_{3}).
El término "dialquilamino" tal como se
utiliza en la presente memoria se refiere a un grupo amino
sustituido con dos grupos alquilo tales como dimetilamino
(-NH(CH_{3})_{2}) y dietilamino
(-NH(CH_{2}CH_{3})_{2}).
Los compuestos empleados en el método de la
presente invención son eficaces como anticonceptivos masculinos. En
el aspecto más amplio, los compuestos están representados por la
fórmula I con la condición de la reivindicación 1
en la que cada uno de R^{11},
R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14},
R^{14'}, R^{15} y R^{15'}, se selecciona, independientemente
uno del otro, de entre el grupo constituido por -H; -OH; -F; -Cl;
-Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino; alquilo
C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi;
-(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO_{2}, -COOH,
-COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquilo C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2}; -NHOH; arilo y heteroarilo, en con por lo menos uno de
R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'},
R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} y seleccionándose de
entre -CH_{3}, -CH_{2}OH y
-OH.
En una forma de realización preferida, por lo
menos uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'},
R^{13}, R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} es un
grupo hidroximetilo (-CH_{2}OH). Alternativamente, por lo menos
uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13},
R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} es un grupo
hidroxi (-OH).
R^{2} es un sustituyente seleccionado de entre
alquilo C_{1-18} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-18} y aralquilo, opcionalmente
sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados de
entre -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino;
alquilo C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi;
-CN, -NO_{2}, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquilo C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-16})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6}) sulfamoílo; (alquil
C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2} y -NHOH.
Preferentemente, R^{2} es un grupo alquilo
C_{1-18} lineal o ramificado opcionalmente
sustituido. Aún más preferentemente, R^{2} es un grupo alquilo
C_{4-9} lineal o ramificado opcionalmente
sustituido. Ejemplos de R^{2} incluyen sustituyentes de alquilo
tales como metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo,
octilo y nonilo. Un ejemplo de R^{2} que es un grupo alquilo
sustituido es 7-oxanonanilo
(-CH_{2}(CH_{2})_{5}-O-CH_{2}CH_{3}).
Más preferentemente, R^{2} es n-butilo, n-nonilo o
7-oxanonilo.
En determinadas formas de realización de Fórmula
I, el compuesto puede representarse por una de las fórmulas
siguientes:
La estereoquímica de cada átomo de carbono del
anillo en las fórmulas anteriores puede variar independientemente
de la de en los demás átomos de carbono del anillo. Más
preferentemente, el compuesto presenta una de las fórmulas
indicadas en la Tabla I:
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\vskip1.000000\baselineskip
Aun más preferentemente, el compuesto es
N-alquil sustituido en el que R^{2} es un grupo alquilo
C_{1-18} lineal o ramificado opcionalmente
sustituido por un grupo alcoxi C_{1-6}. Los
compuestos más preferidos incluyen
N-butildesoxigalac-
tonojirimicina (NB-DGJ), N-butildesoxi-nojirimicina (NB-DNJ), N-nonildesoxinojirimicina (NN-DNJ), N-nonil-6-metildesoxinojirimicina (NN-6-MeDNJ) y N-7-oxanonil-6-metildesoxigalactonojirimicina (N-7-oxanonil-6-MeDGJ):
tonojirimicina (NB-DGJ), N-butildesoxi-nojirimicina (NB-DNJ), N-nonildesoxinojirimicina (NN-DNJ), N-nonil-6-metildesoxinojirimicina (NN-6-MeDNJ) y N-7-oxanonil-6-metildesoxigalactonojirimicina (N-7-oxanonil-6-MeDGJ):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Todavía en otra forma de realización, la
presente invención proporciona un método en el que en la primera
etapa se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto descrito anteriormente, como composición farmacéutica, a
un mamífero macho fértil. La duración de la administración de la
composición es suficiente para esterilizar al mamífero macho
siempre que se administra la composición. Al retirar la composición
en una segunda etapa, el mamífero macho experimenta una inversión
completa a su estado previo de fertilidad. En una forma de
realización preferida, la primera y segunda etapas pueden repetirse
sucesivamente, sometiendo de este modo al mamífero macho a periodos
alternativos de esterilidad y fertilidad siempre que se desee.
Todavía en una forma de realización más de la
presente invención se proporciona un método como el descrito
anteriormente, pero con la tercera etapa adicional de resumen de la
administración de una composición de la presente invención durante
un periodo suficiente para una vez más de nuevo esterilizar a un
mamífero macho. En una forma de realización preferida, las tres
etapas pueden repetirse sucesivamente. De esta manera, el mamífero
macho experimenta periodos de esterilidad, seguidos de fertilidad y
por último esterilidad.
La presente invención es aplicable a todos los
mamíferos macho. En particular, es aplicable al hombre, y a los
mamíferos de compañía incluyendo perros, gatos y caballos. Además,
es aplicable a los mamíferos económicamente importantes tales como
ungulados, particularmente vacas, ovejas, cabras, búfalos, camellos
y cerdos, así como, por ejemplo, simios, monos, llamas, roedores
(p. ej. ratas o ratones) y conejos.
Los compuestos de la presente invención pueden
prepararse a partir de los compuestos imino disponibles en el
mercado utilizados como materiales de partida. Los proveedores
comerciales incluyen Sigma, St. Louis, MO; Cambridge Research
Biochemicals, Norwich, Cheshire, Reino Unido; y Toronto Research
Chemicals, Ontario, Canadá.
Alternativamente, los presentes compuestos
pueden prepararse por los métodos de síntesis conocidos por los
expertos en la materia. Por ejemplo, la síntesis de una variedad de
derivados de desoxinojirimicina (DNJ) se describen en las patentes
US nº 5.622.972; nº 5.200.523; nº 5.043.273; nº 4.944.572; nº
4.246.345; nº 4.266.025; nº 4.405.714 y nº 4.806.650. Ejemplos de
métodos y procedimientos para la producción de
N-butildesoxi-nojirimicina
(NB-DNJ) se publican en los documentos
EP-B-0012278;
EP-A-0624652; patentes US nº
4.182.767; nº 4.266.025; nº 4.405.714 y nº 5.151.519.
N-butildesoxigalactonojirimicina
(NB-DGJ) puede producirse tal como se
describe en Platt et al., (1994), J. Biol. Chem.,
269:27108-14. Se conocen otros compuestos de
iminoazúcar descritos en la presente memoria y pueden prepararse
por los métodos publicados en las patentes US nº 4.861.892; nº
4.894.388; nº 4.910.310; nº 4.996.329; nº 5.011.929; nº 5.013.842;
nº 5.017.704; nº 5.580.884; nº 5.286.877; nº 5.100.797 y nº
6.291.657.
Los compuestos de la invención pueden formularse
para una variedad de modos de administración. Las técnicas y
formulaciones generalmente pueden encontrarse en REMINGTON'S
PHARMACEUTICAL SCIENCES (18ª ed.), Mack Publishing Co. (1990).
Los medicamentos pueden adaptarse para la
administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo por vía
oral (que incluye bucal o sublingual, rectal, nasal, tópica (que
incluye bucal, sublingual o transdérmica), o parenteral (que
incluye subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica) si
bien se prefiere la administración oral. Dicha composición se puede
preparar por cualquier método conocido en la técnica farmacéutica,
por ejemplo administrando el ingrediente activo con un portador en
condiciones estériles.
Las sales farmacéuticamente aceptables son
generalmente bien conocidas por los expertos en la materia, y pueden
incluir, a título de ejemplo pero no de limitación, acetato,
bencenosulfonato, besilato, benzoato, bicarbonato, bitartrato,
bromuro, edetato cálcico, camsilato, carbonato, citrato, edetato,
edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato,
glutamato, glucolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina,
hidrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato,
lactato, lactobionato, malato, maleato, maridelato, mesilato,
mucato, napsilato, nitrato, pamoato (embonato), pantotenato,
fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato,
subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato o teoclato. Otras
sales farmacéuticamente aceptables pueden encontrarse, por ejemplo,
en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (18ª ed.), supra.
Las sales farmacéuticamente aceptables
preferidas incluyen, por ejemplo, acetato, benzoato, bromuro,
carbonato, citrato, gluconato, hidrobromuro, hidrocloruro, maleato,
mesilato, napsilato, pamoato (embonato), fosfato, salicilato,
succinato, sulfato o tartrato.
Para inyectables, los agentes de la invención
pueden formularse en soluciones acuosas, preferentemente en
tampones fisiológicamente compatibles tal como la solución de Hank,
solución de Ringer o solución salina fisiológica. Para dicha
administración a través de las mucosas, en la formulación se
utilizan penetrantes apropiados para la barrera que debe permearse.
Dichos penetrantes son generalmente conocidos en la técnica.
La utilización de portadores farmacéuticamente
aceptables para formular los compuestos dados a conocer en la
presente memoria para la puesta en práctica de la invención en dosis
adecuadas para la administración generalizada está comprendida
dentro del alcance de la invención. Con la selección apropiada del
portador y la puesta en práctica de la preparación adecuada, las
composiciones de la presente invención, en particular, las
formuladas como soluciones, pueden administrarse por vía
parenteral, tal como mediante inyección intravenosa. Los compuestos
pueden formularse fácilmente utilizando portadores farmacéuticamente
aceptables bien conocidos en la materia en dosis adecuadas para
administración oral. Dichos portadores permiten formular los
compuestos de la invención como comprimidos, píldoras, cápsulas,
líquidos, geles, jarabes, lechadas, suspensiones y similares, para
ingestión oral por un paciente en tratamiento.
Las composiciones adecuadas para su utilización
en la presente invención incluyen las composiciones en las que los
ingredientes activos están contenidos en una cantidad eficaz para
conseguir el propósito deseado. La determinación de las cantidades
eficaces está comprendida dentro de la capacidad de los expertos en
la materia, especialmente de la descripción detallada proporcionada
en la presente memoria.
Además de los ingredientes activos, estas
composiciones farmacéuticas pueden contener portadores
farmacéuticamente aceptables adecuados que comprenden excipientes y
productos auxiliares que facilitan el tratamiento de los compuestos
activos en las preparaciones que pueden utilizarse
farmacéuticamente. Las preparaciones formuladas para administración
oral pueden estar en forma de comprimidos, grageas, cápsulas o
soluciones.
Los medicamentos o anticonceptivos descritos en
la presente memoria y que son asimismo para su utilización en los
métodos proporcionados en la misma, pueden incluir uno o más de los
siguientes: agentes conservantes, agentes solubilizantes, agentes
estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes,
colorantes, odorizantes, sales, tampones, agentes de recubrimiento
o antioxidantes. Pueden contener además agentes terapéuticamente
activos además de los compuestos y/o agentes descritos en la
presente memoria. Las preparaciones farmacéuticas para su
utilización oral pueden obtenerse combinando los compuestos activos
con excipientes sólidos, opcionalmente moliendo una mezcla
resultante y tratando la mezcla de gránulos, después de añadir los
productos auxiliares adecuados, si se desea, para obtener
comprimidos o núcleos de gragea. Los excipientes adecuados son, en
particular, cargas tales como azúcares, incluyendo lactosa,
sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa, por
ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz,
almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa,
hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica (CMC) y/o
polivinilpirrolidona (PVP:povidona). Si se desea, pueden añadirse
agentes disgregadores, tales como la polivinilpirrolidona
reticulada, agar-agar o ácido algínico o una sal
del mismo tal como alginato sódico.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden
utilizarse por vía oral incluyen las cápsulas duras de gelatina,
así como las cápsulas blandas, selladas de gelatina, y un
plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras
pueden contener los ingredientes activos mezclados con cargas tal
como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes
tal como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente,
estabilizantes. En las cápsulas blandas, los compuestos activos
pueden disolverse o ponerse en suspensión en líquidos adecuados,
tales como ácidos grasos, parafina líquida o polietilenglicoles
líquidos (PEG). Además pueden añadirse estabilizantes.
\newpage
A continuación se considerarán varias vías de
administración con mayor detalle:
Los medicamentos adaptados para su
administración oral pueden proporcionarse en forma de cápsulas o
comprimidos; como polvos o gránulos; como soluciones, jarabes o
suspensiones (en líquidos acuosos o no acuosos); como espumas o
batidos; o como emulsiones.
Los comprimidos o las cápsulas de gelatina dura
pueden comprender lactosa, almidón de maíz o derivados del mismo,
ácido esteárico o sales del mismo.
Las cápsulas de gelatina pueden comprender
aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semisólidos o líquidos,
etc.
Las soluciones y jarabes pueden comprender agua,
polioles y azúcares. Para la preparación de suspensiones, pueden
utilizarse aceites (p. ej. aceite vegetales) para proporcionar
suspensiones de aceite en agua o de agua en aceite.
Los medicamentos adaptados para la
administración transdérmica puede proporcionarse como parches
individuales que se desea que permanezcan en íntimo contacto con la
epidermis del receptor durante un periodo de tiempo prolongado. Por
ejemplo, puede administrarse el agente activo en el parche por
iontoforesis (la iontoforesis se describe en Pharmaceutical
Research, 3(6):318 (1986)).
Los medicamentos adaptados para administración
tópica pueden proporcionarse como pomadas, cremas, suspensiones,
lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, atomizadores, aerosoles
o aceites.
Para las infecciones de los ojos o de otros
tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, se utiliza
preferentemente una pomada o crema tópica. Cuando se formula en
pomada, el ingrediente activo puede emplearse con una base de
pomada parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el
ingrediente activo puede formularse en una crema con una base de
aceite en agua o una base de agua en aceite.
Los medicamentos adaptados para administración
tópica al ojo comprenden los colirios. El ingrediente activo puede
disolverse o ponerse en suspensión en un portador adecuado, p. ej.
en un disolvente acuoso.
Los medicamentos adaptados para administración
oral en la boca comprenden caramelos, pastillas y colutorios.
Los medicamentos adaptados para administración
rectal pueden proporcionarse como supositorios o enemas.
Los medicamentos adaptados para administración
nasal que utilizan portadores sólidos incluyen un polvo grueso, (p.
ej. con un tamaño de partícula comprendido en el intervalo entre 20
y 500 micras). Éstos pueden administrarse de la manera en la que se
tome la inhalación, es decir por inhalación rápida a través de la
nariz de un recipiente de polvo mantenido cerca de la nariz.
Las composiciones adoptadas para administración
nasal que utilizan portadores líquidos comprenden los atomizadores
nasales o los colirios. Éstas pueden comprender soluciones acuosas o
de aceite del ingrediente activo.
Los medicamentos adaptados para administración
por inhalación comprenden los polvos o nieblas en partículas finas,
que pueden generarse por medio de varios tipos de aparatos, por
ejemplo aerosoles, nebulizadores o insufladores a presión. Dichos
aparatos pueden construirse con el fin de proporcionar dosis
predeterminadas de ingrediente activo.
Los medicamentos adaptados para administración
parenteral comprenden soluciones o suspensiones inyectables
esterilizadas acuosas y no acuosas. Éstos pueden contener
antioxidantes, tampones, bacterioestáticos y solutos que convierten
a las composiciones sustancialmente isotónicas con la sangre de un
receptor deseado. Otros componentes que pueden estar presentes en
dichas composiciones comprenden, por ejemplo, agua, alcoholes,
polioles, glicerina y aceites vegetales. Las composiciones
adaptadas para administración parenteral pueden presentarse en
recipientes de dosis unitaria o de dosis múltiple, por ejemplo
ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en estado secado
por congelación (liofilizado) que contiene únicamente la adición de
un portador líquido esterilizado, p. ej. agua esterilizada para
inyectables, inmediatamente antes de su utilización. Las soluciones
y suspensiones inyectables improvisadas pueden prepararse a partir
de polvos, gránulos y comprimidos esterilizados.
Las dosis pueden determinarse fácilmente
mediante pruebas de rutina, y estarán bajo el control del médico o
clínico. El principio orientador para determinar una dosis adecuada
será la administración de una cantidad de material convenientemente
eficaz pero no tóxico o aceptablemente tóxico. Para
NB-DNJ o un compuesto similar, una dosis
diaria para un adulto podría esperarse que estuviera comprendida en
el intervalo entre 0,1 g y 5 g de ingrediente activo, y puede estar
comprendida en el intervalo entre 3 y 2.400 mg, preferentemente
entre 5 y 800 mg, más preferentemente entre 15 y 400 mg, y lo más
preferentemente entre 15 y 100 mg. La dosis puede administrarse en
una dosis diaria única o alternativamente en dos, tres o más dosis
durante el día.
Los ejemplos siguientes se proporcionan
únicamente para ilustrar la invención descrita anteriormente; no se
pretende limitar en modo alguno el alcance de la presente invención.
En toda la memoria, cualquiera de las referencias disponibles al
público y están incorporadas específicamente en su totalidad en esta
solicitud de patente como referencia.
Los ejemplos siguientes demuestran que los
ratones macho, pero no hembra, se vuelven estériles siguiendo por
lo menos tres semanas de administración oral de los compuestos de la
presente invención, y que vuelve a obtenerse fertilidad a la cuarta
semana después de la retirada del fármaco. Los pesos testiculares y
las concentraciones de testosterona no se vieron afectados. Los
espermatozoides epididímicos de ratones tratados estaban en parte
móviles, pero presentaban numerosas anomalías: un espectro de formas
de cabeza irregular (desde formas casi normales y triangulares
hasta espatuladas redondas y achatadas) ausencia de antígenos
acrosómicos y en un subconjunto de células de espermatozoides
acortamiento y espesamiento de la vaina mitocondrial.
Compuestos -
NB-DNJ se adquirió en Searle/Monsanto y
Oxford GlycoSciences. NB-DGJ se adquirió en
Toronto Research Chemicals. DNJ se adquirió en Synergy
Pharmaceuticals, Inc.
Animales - Se alojaron ratones C57BL/6 en
condiciones normales no estériles. Se proporcionó a los ratones de
agua a discreción y antes de la administración del fármaco fueron
alimentados con pienso en gránulos (pienso 3 para ratas y ratones
expandido, SDS Ltd.).
Tratamiento de los ratones - Se alojaron
ratones C57BL/6 en condiciones normales no estériles. Se proporcionó
a los ratones de agua a discreción y antes de la administración del
fármaco fueron alimentados con pienso en gránulos (pienso 3 para
ratas y ratones expandido, SDS Ltd.). Para administrar los
compuestos de la presente invención, se alimentaron los ratones con
una dieta de pienso en polvo para ratones (pienso 1 para ratas y
ratones expandido, molido, SDS Ltd.) que contenía
NB-DNJ, NB-DGJ,
NN-6-MeDGJ o DNJ. El alimento
y el compuesto (ambos como sólidos secos) se mezclaron a fondo, se
almacenaron a temperatura ambiente y se utilizaron dentro de los 7
días de mezclado.
Ensayos de apareamiento - Para evaluar la
fertilidad de ratones macho que se alimentaron con una dieta que
contenía un iminoazúcar, se utilizó un ensayo de apareamiento: de
forma típica, a ratones C57BL/6 macho de seis semanas en grupos de
tres se les administró dieta que contenía compuesto para cinco
semanas (a menos que se especifique de otro modo), tras lo cual
cada uno de ellos se enjauló con cuatro ratones C57B/6 hembra no
tratados, y se les proporcionó pienso normal en gránulos. Las
hembras eran por lo menos de 11 semanas, y de edades iguales en
cada experimento. Se separaron los machos de las hembras tras 7 ó 9
días, dependiendo del experimento; se controló en las hembras los
coágulos mucosos vaginales, embarazos y, en caso de existir,
tamaños de la camada. Para estudiar cualquier efecto sobre la
fertilidad de las hembras, se trataron ratones C57BL/6 hembra de
seis semanas con NB-DNJ durante cinco
semanas, tras las cuales cada una de ellas se enjauló con un macho
no tratado de la misma edad durante cuatro días.
Ensayos endocrinológicos - Tras la muerte
de los ratones por asfixia en CO_{2} y dislocación cervical, se
extrajo sangre mediante punción cardiaca, que se dejó coagular a
temperatura ambiente (TA). Se obtuvo el suero por centrifugación, y
se almacenó a -80ºC hasta su utilización. Se determinaron la
testosterona, las hormonas luteinizante y estimulante del folículo
por métodos bien conocidos en la materia (Huhtaniemi, I., Nikula,
H. y Rannikko, S. (1985) J. Clin. Endocrinol. Metab.
61, 698-704; Haavisto, A. M., Pettersson, K.,
Bergendahl, M., Perheentupa, A., Roser, J. F. y Huhtaniemi, I.
(1993) Endocrinology 132, 1687-91; van
Casteren, J. I., Schoonen, W. G. y Kloosterboer, H. J. (2000)
Biol. Reprod. 62, 886-94).
Microscopía de fluorescencia - Para la
inmunofluorescencia, se extrajeron vasos deferentes recién
extirpados y se disociaron con fórceps los epidídimos caudales en
medio M2, y se dejó dispersar los espermatozoides durante 15 min.
Las suspensiones resultantes se utilizaron para preparar frotis
sobre portaobjetos de vidrio. Después del secado al aire durante 1
h, se fijaron las células en metanol durante 2 min., se secaron y se
almacenaron a temperatura ambiente o a 4ºC durante uno a cinco
días. Antes de que los frotis de inmunotinción se sumergieran en
metanol durante 5 min., se secaron y se humedecieron en PBS que
contenía BSA al 0,5% y glicina 0,15 M (PBG). Se tiñeron los
portaobjetos con anticuerpos monoclonales, Mab18.6 (1:20 en PBG
(Moore, H. D., Smith, C. A., Hartman, T. D. y Bye, A. P. (1987)
Gamete Res. 17, 245-9)),
anti-sp56 (1:67 en PBG, clon 7C5, QED Bioscience
(Cheng, A., Le, T., Palacios, M., Bookbinder, L. H., Wassarman, P.
M., Suzuki, F. y Bleil, J. D. (1994) J. Cell Biol.
125, 867-78), e inmunoglobulinas \gamma
antirratón de cabra y conjugado de isotiocianato de fluoresceína
específico para cadenas ligeras (Ortho) según van Dongen et
al. (van Dongen, J. M., Willemsen, R., Ginns, E. I., Sips, H.
J., Tager, J. M., Barranger, J. A. y Reuser, A. J. (1985) Eur. J.
Cell Biol. 39, 179-189). Tras la
inmunotinción, se tiñeron los núcleos durante 2 min en 5 \mug/ml
de Hoechst 33342 (Molecular Probes); se enjuagaron los portaobjetos
en agua destilada y se montaron con Vectashield (Vector). Se
examinaron las sondas fluorescentes utilizando un microscopio
Olympus BX50 equipado con una cámara CCD de Princeton Instruments.
Se tomaron imágenes, de colores falsos y se superpusieron con el
programa informático Metamorph v3.5 y se procesaron además con
Adobe Photoshop. Para la cuantificación de los porcentajes de
células teñidas con reactivos fluorescentes se observaron por lo
menos 100 células con un microscopio Zeiss Axioplan.
Histología y microscopía de barrido
electrónico - Se extrajeron los testículos de los ratones
perfundidos con paraformaldehído al 4%, glutaraldehído al 1%, se
mantuvieron en el fijador durante dos días y se transfirieron a
etanol al 70%. Los tejidos se fijaron después con tetróxido de osmio
al 2%, se empaparon en araldite, se seccionaron a 1 \mum y se
tiñeron con azul de toluidina. Se examinaron las secciones con un
Zeiss Axioskop II y se tomaron imágenes con una cámara Axiocam,
accionada con el programa informático Axiovision 3.0.
Para la microscopía de barrido electrónico, se
prepararon frotis secos de espermatozoides murinos como se
describió anteriormente. Se fijaron las células durante 20 min en
paraformaldehído al 4% en PBS, se transfirieron a etanol 70, 80 y
95%, se secaron en el punto crítico en un instrumento Polaron
CPD7501, se recubrieron de oro utilizando Nanotech Semprep2 y se
examinaron en un Hitachi S800 FEG-SEM a 3 kV. Para
microscopía electrónica de transmisión, se extrajeron
espermatozoides del epidídimo en 1 mg/ml de alcohol polivinílico en
PBS soluble en agua fría, y se centrifugaron durante 10 min. a
600\timesg. Se fijaron las células sedimentadas durante la noche
a 4ºC con glutaraldehído al 1%, ácido pícrico al 0,2% en ácido
cacodílico 0,2 M pH 7,4, se lavaron una vez en ácido cacodílico 0,1
M pH 7,4 y se almacenaron en etanol al 70%. Las células se
postfijaron con tetróxido de osmio al 2%, se empaparon en araldite,
se seccionaron a 7 nm, se tiñeron con acetato de uranilo/citrato de
plomo y se examinaron con un microscopio JEOL
JEM-100CX a 80 kV.
Análisis de movilidad - Se sacrificaron
ratones por asfixia en CO_{2} y dislocación cervical y se
extrajeron epididimidas caudales con vasos deferentes. Se
extrajeron espermatozoides en medio M2 (Sigma) precalentado
mediante extracción de los vasos deferentes y aplicando presión
suave a los epidídimos caudales; se incubaron las células a 37ºC
durante 1 hora, y se grabó en vídeo utilizando un microscopio Leica
DM IRB equipado con una cámara JVC TK-1281. Se
realizó el análisis de movilidad del espermatozoide asistido por
ordenador utilizando un Hobson Sperm Tracker (Hobson Vision, Ltd.,
UK) a 50 imágenes por segundo. Los parámetros de movilidad de cada
muestra de espermatozoide se midieron por triplicado, recogiendo
datos de 200 trayectorias de espermatozoide por determinación.
Estadística - Se analizaron los datos
cuantitativos en grupos experimentales múltiples utilizando análisis
de comparaciones múltiples. ANOVA de una vía con la prueba
posterior de Tukey o ANOVA no paramétrico (prueba de
Kruskal-Wallis) con la prueba posterior de Dunn se
realizó utilizando la versión 3.0a de GraphPad InStat para
Macinstosh (programa informático GraphPad).
Ejemplo
1
Para determinar los efectos de
NB-DNJ sobre la fertilidad de ratones macho,
se trataron machos C57BL/6 de seis semanas con 2.400 mg/kg de
NB-DNJ al día aumentando los periodos de
tiempo con aumentos semanales (Fig. 1a) y se sometieron a
continuación a un ensayo de apareamiento, durante el cual se
enjaularon con ratones hembra no tratados durante una semana. La
Fig. 1A demuestra que, al principio del experimento, los machos
eran fértiles y podían engendrar camadas normales y que, después de
una o dos semanas de tratamiento con NB-DNJ,
se mantuvo esta capacidad. Los ratones eran estériles después de por
lo menos tres semanas de consumo del fármaco (Fig. 1A). Al retirar
el fármaco a los ratones macho después de cinco semanas de
tratamiento, recobraron la fertilidad a la cuarta semana y
engendraron camadas de tamaño normal (Fig. 1A). El tratamiento de
machos de 13 semanas a la misma dosis durante cinco semanas condujo
también a esterilidad completa (datos no mostrados). Por lo tanto,
durante el tratamiento con NB-DNJ, los
ratones macho se volvieron estériles, y este efecto fue
completamente reversible.
Ejemplo
2
La labor inicial ha demostrado que la reducción
in vivo de las concentraciones de GSL producidas por
NB-DNJ depende de la dosis; por ejemplo,
dosis comprendidas entre 600 y 2.400 mg/kg al día producen una
reducción del 10 al 70% de las concentraciones de gangliósido GM1
en la superficie de los esplenocitos de ratón, respectivamente
(Platt, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272,
19365-72). Una vez demostrado que los ratones macho
se vuelven estériles cuando se tratan con 2.400 mg/kg al día de
NB-DNJ (Figs. 1A y 1B), se expusieron a dosis
progresivamente reducidas del compuesto para determinar la dosis
menor a la cual se produce la esterilidad. Los resultados se
presentan en las Figuras 2A y 2B. Aunque 1 mg/kg al día no afectó a
los machos, 5 mg/kg al día redujeron su fertilidad (Fig. 2A) y el
tamaño de la camada (Fig. 2B) y 15 mg/kg al día les volvieron
completamente estériles. Por lo tanto, el sistema genital masculino
del ratón es excepcionalmente sensible a
NB-DNJ. La pérdida provocada por el fármaco
no fue producida por un cambio en el comportamiento en el
apareamiento, ya que la frecuencia de los coágulos mucosos
vaginales después del coito no se vieron afectados por el
tratamiento con NB-DNJ (Fig. 2B).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
En contraste con los ratones macho, el
tratamiento con NB-DNJ a razón de 1.200
mg/kg/día no produjo ratones hembra que fueran estériles. Tras un
periodo de apareamiento de cuatro días con machos no tratados, el
100% de las hembras tratadas (n = 5) así como no tratadas (n = 4)
quedaron preñadas. Estos ratones presentaban 6,2 \pm 2,7 y 7,8
\pm 1,0 de crías por camada, respectivamente.
Se administró NB-DNJ a
razón de 2.400 mg/kg al día durante 12 semanas a ratones hembra de
15 semanas de la cepa 129. Después de esto, se retiró el fármaco y
las hembras se enjaularon con machos no tratados de la cepa 129.
Todas las hembras quedaron preñadas rápidamente y tuvieron camadas
de una media de 6 crías. Los ratones en este experimento eran
heterozigóticos durante una interrupción en el gen que codifica la
ceramida galactosiltransferasa. Estos ratones son fenotípicamente
indistinguibles de los ratones 129 salvajes y se reproducen
normalmente (Coetzee et al, (1996), Cell,
86:209-219).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Se determinaron las concentraciones en el suero
de testosterona, hormona estimulante del folículo (FSH), hormona
luteinizante (LH) y testosterona testicular en los ratones tratados
con NB-DNJ. Las Figs. 3A a 3D demuestran que
15, 150 ó 1.200 mg/kg/día del compuesto no alteraron estos
parámetros endocrinológicos. En cambio, 2.400 mg/kg/día produjeron
una reducción significativa (p<0,001) en todas estas
concentraciones hormonales. Por lo tanto, la endocrinología
reproductiva de los machos tratados con iminoazúcar es distinta de
la de los animales con insuficiencia del complejo de gangliósido.
Además, estos resultados indican que la esterilidad producida por
NB-DNJ (que requiere por lo menos 15
mg/kg/día) no está mediada por una disminución de las hormonas
genitales.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
En este estudio, el tratamiento con
NB-DNJ a baja dosis (15 a 150 mg/kg/día) no
afectó al peso corporal o de las gónadas. Entre 1.200 y 2.400
mg/kg/día los pesos de los testículos y de los compartimentos del
epididímo disminuyeron de formar proporcional al peso corporal. La
única excepción se observó a la dosis más elevada, a la que el peso
combinado de epidídimo caudal/vasos deferentes se redujo más
(p<0,05) que el peso corporal total (43 \pm 7% frente a 60
\pm 5% de referencia, respectivamente, (n = 10)). Por lo tanto, la
pérdida de peso de las gónadas es un efecto de un régimen de
NB-DNJ a alta dosis y no está relacionada con
la producción de esterilidad masculina. Además, la pérdida de
fertilidad producida por el fármaco no estaba asociada a una
reducción en el recuento de espermatozoides epididímicos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
En los túbulos seminíferos de animales tratados
con NB-DNJ se observó una vacuolización más
extensa, con una frecuencia mayor, que en las referencias (Figs. 4A
y B). Además, tras la administración del fármaco, los núcleos de
los espermátides maduros presentaban una morfología heterogénea y
aberrante. El recuadro de la Fig. 4B presenta un ejemplo de dichos
espermátides de la etapa 13: con frecuencia presentaban hendiduras y
eran mucho menos alargados que los espermátides normales de la
etapa 13 (recuadro de la Fig. 4A) (para la clasificación de los
espermátides y de la estadifición testicular véase Russell et
al. (1990), Histological and Histopathological Evaluation of
the Testis, Cache River Press, Clearwater, FL, USA).
\newpage
Ejemplo
8
Se examinaron los espermatozoides de ratones
tratados con NB-DNJ para ver si presentaban
una morfología alterada.
El núcleo de un espermatozoide del epidídimo
murino normal se aplana lateralmente y presenta típicamente una
forma curvada, en forma de hoz. Cubriendo el núcleo está el
acrosoma, un orgánulo delineado por la membrana relativamente
grande, que contiene varias enzimas hidrolíticas, y puede
considerarse como una vesícula secretora regulada especializada; el
acrosoma es esencial para la fecundación (estudiado en Yanagimachi,
R. (1994) en The Physiology of Reproduction, eds. Knobil, E. y
Neill, J. D. (Raven Press, New York), págs.
189-317). De acuerdo con las observaciones
histológicas de los testículos (véase el Ejemplo 7 anterior), las
células caudales de espermatozoide epididímico de los ratones
tratados con NB-DNJ presentaban varios
núcleos con forma anormal: eran casi normales, triangulares,
achatadas o alargadas, siendo la mayoría espatuladas (Figs. 4D, 4E y
4F) (categorías morfológicas descritas por Hollander et al.
(1960) Fertil Steril 11, 316-324). Algunos de
estos núcleos presentaban una hendidura lateral próxima a la punta
anterior. Los espermatozoides procedentes de la cabeza del
epidídimo estaban asimismo afectados. El porcentaje de
espermatozoides caudales con núcleos (casi) normales disminuyó
drásticamente aumentando la dosificación de
NB-DNJ, no pudiendo por debajo del 6% de
dosis mínima conseguir la esterilidad completa (Fig. 2C).
Curiosamente, la morfología nuclear normal se observó
significativamente con más frecuencia (p<0,01) a 1.200 mg/kg/día
que entre 50 y 150 mg/kg/día de NB-DNJ (Fig.
2C).
Para caracterizar más estos espermatozoides, se
empleó inmunofluorescencia indirecta con los anticuerpos
monoclonales Mab18.6 y anti-sp56, que reconocen
antígenos acrosómicos distintos (Moore et al., supra;
Cheng et al. (1994) J. Cell Biol. 125,
867-878). Solamente una pequeña fracción de los
espermatozoides procedentes de los ratones tratados con
NB-DNJ se tiñeron con Mab18.6 (Fig. 4D) o
anti-sp56 (datos no mostrados), disminuyendo con la
dosis de fármaco por debajo del 10% a 15 mg/kg/día (Fig. 2D). De
nuevo 1.200 mg/kg/día fueron excepcionales: la tinción del
anticuerpo a esta dosis fue más frecuente que entre 15 y 150
mg/kg/día (Fig. 2D). Sin embargo, muchas de las células de
espermatozoides positivas a Mab18.6 procedentes de ratones tratados
con el fármaco no presentaban la fluorescencia acrosómica normal en
forma de arco, sino que presentaban un modelo de tinción irregular
(Figs. 4E y 4F). De hecho, entre las células positivas a Mab18.6 la
frecuencia de la tinción acrosómica (casi) normal fue realmente
baja desde 15 a 1.200 mg/kg/día, de promedio 31 \pm 10% (n = 3).
Con anti-sp56 se obtuvieron resultados similares.
Muestras de espermatozoides procedentes de los ratones administrados
con 2.400 mg/kg/días presentaron similares características a las de
los ratones tratados con 1.200 mg/kg/día (datos no mostrados). Por
último, también en el nivel ultraestructural, no se observaron
elementos acrosómicos típicos cubriendo los núcleos de los
espermatozoides del epidídimo (Figs. 5D, 5E y 5F).
Un segmento (pieza de la mitad) de la cola de un
espermatozoide murino normal próximo a la cabeza del espermatozoide
lleva las mitocondrias que se ordenan en dos hélices paralelas, y
forman una única vaina alrededor de los elementos del núcleo de la
cola (estudiado en (Eddy et al., supra)). Estas
mitocondrias son de aspecto y anchura muy uniformes. El tratamiento
con NB-DNJ produjo numerosas anomalías en las
colas y mitocondrias de los espermatozoides del epidídimo. En
primer lugar, en un subconjunto de espermatozoides procedente de
ratones tratados con NB-DNJ, se encontraron
mitocondrias en una disposición mucho más corta y más amplia justo
detrás o adyacentes a la cabeza del espermatozoide (Figs. 5B y 5F).
Las estructuras fibrosas del núcleo de la cola (fibras densas
exteriores/axonema) de este tipo de célula estaban desprovistas de
un revestimiento mitocondrial en una gran parte de la media, desde
el extremo posterior de la funda mitocondrial alterada al comienzo
del segmento siguiente de la cola, la pieza principal. Estas fundas
acortadas estaban muy desorganizadas: las mitocondrias se
dispusieron de forma irregular y se apilaron unas encima de otras;
variaron ampliamente de tamaño y forma (Figs. 5B y
5F).
5F).
La cola de un espermatozoide murino normal se
extiende desde la cabeza y puede estar curvada ligeramente. Sin
embargo, en una fracción espermatozoides del epidídimo del ratón
tratados con NB-DNJ, la parte proximal de la
cola se enrolló alrededor de la cabeza o núcleo del espermatozoide,
desde una media o única espira (Fig. 5E) hasta varios bucles
completos (Fig. 5D). El enrollamiento de la cola colocó de este modo
la sección de la cola que lleva la funda de la mitocondria al menos
en parte en la cabeza del espermatozoide, adyacente al núcleo (Fig.
5E). Por último, el tratamiento con el fármaco proporcionó los
núcleos de los espermatozoides menos condensados, presentando
pequeños focos electrocentes (Figs. 5D, 5E y 5F), que eran mucho
menos frecuentes en las células de referencia
(Fig. 5C).
(Fig. 5C).
Por lo tanto, el tratamiento con
NB-DNJ conduce a la dismorfia nuclear de los
espermatozoides, provoca anomalías acrosómicas y produce la
desorganización de la cola, incluyendo la funda mitocondrial. Una
dosis farmacéutica relativamente baja produjo una proporción muy
grande de células de espermatozoide anormales. Sorprendentemente,
en las dosis más altas utilizadas, este efecto se invirtió
parcialmente. El análogo NB-DGJ de galactosa,
utilizado a 1.200 mg/kg/día, produjo una gama similar de
aberraciones morfológicas como las observadas con
NB-DNJ (datos no mostrados).
\newpage
Ejemplo
9
Para evaluar si los defectos estructurales de
los espermatozoides epididímicos procedentes de ratones tratados
con NB-DNJ tenían algunas consecuencias
funcionales, los investigadores realizaron el análisis de movilidad
del espermatozoide asistido por ordenador. A 15 mg/kg/día el
porcentaje móvil fue significativamente inferior al normal
(p<0,05), ya que existía velocidad curvilínea y velocidad
rectilínea (p<0,001) (Tabla 1).
| NB-DNJ | % móvil | VCL | VSL |
| (mg/kg/día) | (\mum/s) | (\mum/s) | |
| 0 | 74\pm12 | 182\pm19 | 52\pm10 |
| 15 | 26\pm16 | 74\pm31 | 27\pm9 |
| 150 | 15\pm6 | 89\pm31 | 27\pm8 |
| 1.200 | 17\pm7 | 49\pm17 | 18\pm9 |
| 2.400 | 9\pm2 | 28\pm21 | 9\pm5 |
| VCL, velocidad curvilínea; VSL, velocidad rectilínea. | |||
| Los datos se presentan como media \pm SD; n\geq3. |
Además, a 2.400 mg/kg/día ambas velocidades
fueron significativamente inferiores a 150 mg/kg/día (p<0,001)
(Tabla 1). Por lo tanto, la ingestión de
NB-DNJ conduce a una movilidad del
espermatozoide rigurosamente disminuida, que es progresiva con la
dosis de fármaco.
Ejemplo
10
En este ejemplo, se trataron ocho ratones (n =
8) con 250 mg/kg/día de NN-DGJ durante un
periodo de 40 días. Como se muestra en la Figura 6A,
NN-DGJ no afectó al peso corporal de los
ratones tratados en comparación con los ratones no tratados.
Se midieron las concentraciones de glucógeno en
el hígado en los ratones no tratados y tratados con
NN-DGJ (Fig. 6B), a los que se les
proporcionó la dieta o se les hizo pasar hambre.
NN-DGJ no inhibió la descomposición de
glucógeno en el hígado durante la inanición.
NN-DGJ no afectó al peso
del timo y a los pesos del bazo en los ratones tratados. Como se
muestra en la Figura 6C, los pesos del timo y del bazo entre los
ratones tratados y no tratados con NN-DGJ
fueron prácticamente idénticos.
NN-DGJ presentaban un
potente y reversible efecto sobre la fertilidad de los ratones macho
en un experimento análogo que involucra a cuatro ratones tratados y
tres ratones no tratados. Como se muestra en la Figura 6D, la
administración de NN-DGJ suprimió
completamente la fertilidad de los ratones tras cinco semanas de
tratamiento, pero a las seis semanas después de la retirada de
NN-DGJ, los ratones recobraron completamente
la fertilidad. Este efecto reversible se manifestó también en el
tamaño de la camada: seis semanas después de la retirada de
NN-DGJ, el tamaño de la camada de las hembras
emparejadas con machos tratados fue casi el mismo que el tamaño de
la camada de las hembras emparejadas con machos no tratados (Figura
6E).
Ejemplo
11
Se trataron seis ratones macho por vía oral a
razón de 15 (baja) o 250 mg/kg/día (alta) de
NN-6-MeDGJ (Figs. 8A y 8B).
Además, se administró
NN-6-MeDGJ a razón de 15
mg/kg/día mediante un dispositivo de administración implantado por
vía subcutánea (minibomba Alzet; "bomba"). Después del
tratamiento durante cinco semanas, se evaluó la fertilidad de los
ratones macho en un ensayo de apareamiento como se describió
anteriormente. Las Figuras 8A y 8B demuestran que a alta dosis, los
ratones macho se volvieron estériles; los ratones tratados a baja
dosis presentaban fertilidad reducida; y la fertilidad de los
ratones a los que se les administró
NN-6-MeDGJ con bomba fue
inferior a la de los ratones a dosis baja alimentados por vía oral.
Tras cinco semanas de retirada de
NN-6-MeDGJ, la fertilidad de
los ratones a dosis alta fue la misma que la de los ratones de
referencia. Por lo tanto, la fertilidad de los ratones macho se
había suprimido completamente y se recobró a continuación
completamente.
Los efectos de
NN-6-MeDGJ sobre los cuerpos
de los ratones macho y el comportamiento no se diferenciaron
sustancialmente de los de los ratones no tratados. Se alimentaron
ocho ratones con NN-6-MeDGJ a
razón de 250 mg/kg/día durante un periodo de 40 días, durante el
cual los pesos corporales de los ratones tratados con
NN-6-MeDGJ fueron los mismos
que los de los ratones no tratados (Fig. 7A). Además,
NN-6-MeDGJ no afectó a los
pesos del aparato digestivo, timo y bazo de los ratones macho (Fig.
7C). Por último, el comportamiento espontáneo en los ratones
tratados con NN-6-MeDGJ se
comparó con el de los ratones no tratados. Como se muestra en la
Figura 7B, NN-6-MeDGJ no
afectó al movimiento de los ratones tratados.
Aunque lo anterior se hace referencia a formas
de realización específicas preferidas, debe entenderse que por
tanto la presente invención no está limitada. Los expertos en la
materia apreciarán que pueden introducirse varias modificaciones a
las formas de realización expuestas y que dichas modificaciones
están dentro del alcance de la presente invención, que está
definida por las reivindicaciones siguientes.
Claims (26)
1. Método para hacer que resulte reversiblemente
estéril un mamífero macho fértil, que comprende las etapas
siguientes:
- (a)
- administrar a dicho mamífero una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que cada uno de R^{11},
R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14},
R^{14'}, R^{15} y R^{15'}, se selecciona, independientemente
uno del otro, de entre el grupo constituido por -H; -OH; -F; -Cl;
-Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino; alquilo
C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi;
-(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO_{2}, -COOH,
-COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquilo C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2}; -NHOH; arilo y
heteroarilo;
en la que cada fracción alquilo, alquenilo,
alquinilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituida por
uno o más grupos independientemente seleccionados de entre el grupo
constituido por -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y
dialquilamino; alquilo C_{1-6} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-6};
aralquilo; alcoxi C_{1-6} lineal o ramificado,
ariloxi; aralcoxi; -(alquilen)oxi(alquil); -CN,
-NO_{2}, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquil C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2} y -NHOH;
y en la que por lo menos dos de entre R^{11},
R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14},
R^{14'}, R^{15} y R^{15'} se seleccionan de entre el grupo
constituido por -CH_{3}, -CH_{2}OH y -OH.
R^{2} es un sustituyente seleccionado de entre
el grupo constituido por alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-18}; y
aralquilo,
en la que cada porción alquilo, alquenilo,
alquinilo y arilo puede estar opcionalmente sustituida por uno o
más grupos independientemente seleccionados de entre el grupo
constituido por -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y
dialquilamino; alquilo C_{1-6} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-6};
aralquilo; alcoxi C_{1-6} lineal o ramificado,
ariloxi; aralcoxi; -CN, -NO_{2}, -COOH, -COO(alquil);
-COO(aril); -C(O)NH(alquil
C_{1-6}); -C(O)NH(aril);
sulfonilo; (alquil C_{1-6})sulfonilo;
arilsulfonilo; sulfamoílo, (alquil
C_{1-6})sulfamoílo; (alquil
C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2} y -NHOH;
con la condición de que los compuestos de
fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables no presenten la
fórmula siguiente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la que R es un alquilo
C_{1-16} de cadena lineal o ramificada,
opcionalmente sustituido por cicloalquilo
C_{3-7}, y opcionalmente interrumpido por -O- el
oxígeno que está separado del nitrógeno del anillo por al menos dos
átomos de carbono, o alquilarilo C_{1-10} en el
que arilo es fenilo, piridilo, tienilo o furilo en el que el fenilo
está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes
seleccionados de entre F, Cl, Br, CF_{3}, OCF_{3}, OR^{1} y
alquilo C_{1-6} de cadena lineal o ramificada;
y
R^{1} es hidrógeno, o alquilo
C_{1-6} de cadena lineal o ramificada;
administrándose dicha composición en una
cantidad y durante un tiempo suficiente para hacer que dicho
mamífero macho resulte estéril; y
- (b)
- cesar de administrar dicha composición a dicho mamífero, con lo cual dicho mamífero se vuelve fértil.
2. Método según la reivindicación 1, en el que
por lo menos uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'},
R^{13}, R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} es
-CH_{2}OH.
3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el
que por lo menos uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12},
R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y
R^{15'} es -OH.
4. Método según la reivindicación 1 a 3, en el
que R^{2} es un grupo alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado.
5. Método según la reivindicación 4, en el que
R^{2} es un grupo alquilo C_{4-9} lineal o
ramificado.
6. Método según la reivindicación 1 a 5, en el
que el compuesto es el seleccionado de entre el grupo constituido
por:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y sus
estereoisómeros.
7. Método según la reivindicación 6, en el que
el compuesto es el seleccionado de entre el grupo constituido por
los compuestos expuestos en la tabla siguiente:
8. Método según la reivindicación 7, en el que
R^{2} es un grupo alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado opcionalmente sustituido con alcoxi
C_{1-6}.
9. Método según la reivindicación 8, en el que
el compuesto es el seleccionado de entre el grupo constituido
por:
10. Método según las reivindicaciones 1 a 9, que
comprende además las etapas de repetir secuencialmente las etapas
(a) y (b).
11. Método para hacer que resulte
reversiblemente estéril un mamífero macho fértil, que comprende las
etapas siguientes:
- (a)
- administrar a dicho mamífero una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, una sal o un solvato del mismo farmacéuticamente aceptable:
en la que cada uno de R^{11},
R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14},
R^{14'}, R^{15} y R^{15'}, se selecciona, independientemente
uno del otro, de entre el grupo constituido por -H; -OH; -F; -Cl;
-Br; -I; -NH_{2}; alquil- y dialquilamino; alquilo
C_{1-6} lineal o ramificado, alquenilo y
alquinilo C_{2-6}; aralquilo; alcoxi
C_{1-6} lineal o ramificado; ariloxi; aralcoxi;
-(alquilen)oxi(alquil); -CN, -NO_{2}, -COOH,
-COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquilo C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2}; -NHOH; arilo y
heteroarilo;
en la que cada porción alquilo, alquenilo,
alquinilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituida por
uno o más grupos independientemente seleccionados de entre el grupo
constituido por -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y
dialquilamino; alquilo C_{1-6} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-6};
aralquilo; alcoxi C_{1-6} lineal o ramificado,
ariloxi; aralcoxi; -(alquilen)oxi(alquil); -CN,
-NO_{2}, -COOH, -COO(alquil); -COO(aril);
-C(O)NH(alquil C_{1-6});
-C(O)NH(aril); sulfonilo; (alquil
C_{1-6})sulfonilo; arilsulfonilo;
sulfamoílo, (alquil C_{1-6})sulfamoílo;
(alquil C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2} y -NHOH;
y en la que por lo menos dos de entre R^{11},
R^{11'}, R^{12}, R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14},
R^{14'}, R^{15} y R^{15'} se seleccionan de entre el grupo
constituido por -CH_{3}, -CH_{2}OH y -OH.
R^{2} es un sustituyente seleccionado de entre
el grupo constituido por alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-18}; y
aralquilo,
en la que cada porción alquilo, alquenilo,
alquinilo y arilo puede estar opcionalmente sustituida por uno o
más grupos independientemente seleccionados de entre el grupo
constituido por -OH; -F; -Cl; -Br; -I; -NH_{2}; alquil- y
dialquilamino; alquilo C_{1-6} lineal o
ramificado, alquenilo y alquinilo C_{2-6};
aralquilo; alcoxi C_{1-6} lineal o ramificado,
ariloxi; aralcoxi; -CN, -NO_{2}, -COOH, -COO(alquil);
-COO(aril); -C(O)NH(alquil
C_{1-6}); -C(O)NH(aril);
sulfonilo; (alquil C_{1-6})sulfonilo;
arilsulfonilo; sulfamoílo, (alquil
C_{1-6})sulfamoílo; (alquil
C_{1-6})tio; (alquil
C_{1-6})sulfonamida; arilsulfonamida;
-NHNH_{2} y -NHOH;
con la condición de que los compuestos de
fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables no presenten la
fórmula siguiente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R es un alquilo
C_{1-16} de cadena lineal o ramificada,
opcionalmente sustituido por cicloalquilo
C_{3-7}, y opcionalmente interrumpido por -O- el
oxígeno que está separado del nitrógeno del anillo mediante por lo
menos dos átomos de carbono, o alquilarilo
C_{1-10} en el que arilo es fenilo, piridilo,
tienilo o furilo en el que el fenilo está opcionalmente sustituido
por uno o más sustituyentes seleccionados de entre F, Cl, Br,
CF_{3}, OCF_{3}, OR^{1} y alquilo C_{1-6} de
cadena lineal o ramificada;
y
R^{1} es hidrógeno, o alquilo
C_{1-6} de cadena lineal o ramificada;
administrándose dicha composición en una
cantidad y durante un tiempo suficiente para hacer que dicho
mamífero macho resulte estéril; y
- (b)
- cesar de administrar dicha composición a dicho mamífero, con lo cual dicho mamífero se vuelve fértil; y
- (c)
- repetir las etapas (a) y (b) una o más veces.
12. Método según la reivindicación 11, en el que
por lo menos uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12}, R^{12'},
R^{13}, R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y R^{15'} es
-CH_{2}OH.
13. Método según la reivindicación 11 ó 12, en
el que por lo menos uno de entre R^{11}, R^{11'}, R^{12},
R^{12'}, R^{13}, R^{13'}, R^{14}, R^{14'}, R^{15} y
R^{15'} es -OH.
14. Método según la reivindicación 11 a 13, en
el que R^{2} es un grupo alquilo C_{1-18} lineal
o ramificado.
15. Método según la reivindicación 14, en el que
R^{2} es un grupo alquilo C_{4-9} lineal o
ramificado.
16. Método según la reivindicación 11 a 15, en
el que el compuesto es uno seleccionado de entre el grupo
constituido por:
\vskip1.000000\baselineskip
y sus
estereoisómeros.
17. Método según la reivindicación 16, en el que
el compuesto es uno seleccionado de entre el grupo constituido por
los compuestos expuestos en la tabla siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
18. Método según la reivindicación 17, en el que
R^{2} es un grupo alquilo C_{1-18} lineal o
ramificado opcionalmente sustituido con alcoxi
C_{1-6}.
19. Método según la reivindicación 18, en el que
el compuesto es uno seleccionado de entre el grupo constituido
por:
20. Método según las reivindicaciones 11 a 19,
que comprende además las etapas de repetir secuencialmente las
etapas (a), (b) y (c).
21. Método según las reivindicaciones 1 a 20, en
el que dicho mamífero es el hombre.
22. Método según las reivindicaciones 1 a 20, en
el que dicho mamífero es un mamífero de compañía.
23. Método según la reivindicación 22, en el que
dicho mamífero es uno seleccionado de entre el grupo constituido
por perros, gatos y caballos.
24. Método según las reivindicaciones 1 a 20, en
el que dicho mamífero es un ungulado.
25. Método según la reivindicación 24, en el que
dicho mamífero es uno seleccionado de entre el grupo constituido
por vacas, ovejas, cabras, búfalos de agua, camellos y cerdos.
26. Método según las reivindicaciones 1 a 20, en
el que dicho mamífero es uno seleccionado de entre simios, monos,
llamas, roedores y conejos.
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