ES2270634T3 - Conversion de compuestos de inhibicion de cox que no son inhibidores selectivos de cox-2 en derivados que son inhibidores selectivos de cox-2. - Google Patents
Conversion de compuestos de inhibicion de cox que no son inhibidores selectivos de cox-2 en derivados que son inhibidores selectivos de cox-2. Download PDFInfo
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Abstract
Procedimiento para alterar la especificidad de un compuesto inhibidor de ciclooxigenasa, que comprende los pasos de: (a)proporcionar un compuesto que tiene actividad inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, asociado con la actividad inhibidora de la ciclooxigenasa, estando el compuesto desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2; y (b)alterar la especificidad del compuesto en el paso (a), pasando de estar desprovisto de especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2 a tener especificidad para la actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2, mediante la conversión del compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un derivado que tiene un resto éster o un resto amida secundaria.
Description
Conversión de compuestos de inhibición de COX
que no son inhibidores selectivos de COX-2 en
derivados que son inhibidores selectivos de
COX-2.
Esta investigación fue financiada mediante una
beca de investigación procedente de los Nacional Institutes of
Health (Research Gran Nº. CA47479). Así pues, el gobierno de los
Estados Unidos tiene determinados derechos sobre la invención.
La presente invención está, en general,
relacionada con derivados éster y derivados amida de diversos
fármacos, más específicamente, con derivados de fármacos
anti-inflamatorios no esteroides (NSAIDs). Incluso
de forma más específica, la presente invención está relacionada con
derivados éster y con derivados amida secundaria de NSAIDs,
particularmente de indometacina (un NSAID), los cuales muestran un
grado de inhibición para ciclooxigenasa-2
(COX-2) que supera con creces el grado de inhibición
para ciclooxigenasa-1 (COX-1) y
asimismo, todavía muestran los efectos analgésicos,
anti-inflamatorios y/o antipiréticos de los NSAIDs,
en animales vertebrados de sangre caliente, incluyendo humanos.
TABLA DE
ABREVIATURAS
- \underline{Abreviaturas}
- \underline{Definiciones}
- NSAID
- Fármaco anti-inflamatorio no esteroide
- COOH
- Resto ácido carboxílico
- COX
- Ciclooxigenasa
- PGH_{2}
- Prostaglandina H_{2}
- PGD_{2}
- Prostaglandina D_{2}
- PGHS
- Prostaglandina-endoperóxido-sintasa
- PER
- Peroxidasa
- SAR
- Relación estructura-actividad
- GI
- Gastrointestinal
- IC_{50}
- Concentración en \muM de indometacina (o de un derivado de indometacina) a la cual se obtiene el 50% de inhibición de la actividad de COX. Cuanto más bajo es el valor de IC_{50}, más potente es el fármaco.
- BOC
- terc-butoxicarbonilo
- DMSO
- Dimetilsulfóxido
- ^{14}C-AA
- Ácido [1-^{14}C]-araquidónico
- HPLC
- Cromatografía líquida de elevado rendimiento
- TLC
- Cromatografía de capa fina
- Mg
- miligramo
- Kg
- Kilogramo
- mL
- Mililitro
- \muM
- Micromol/litro
- \muL
- Microlitro
- \underline{Abreviaturas}
- \underline{Definiciones}
- N
- Normal (cuando se utiliza conjuntamente con concentraciones de ácido)
- NMR
- Resonancia magnética nuclear
- Et_{2}O
- Éter dietílico
- EtOAc
- Acetato de etilo
- Et_{3}N
- Trietilamina
- AcOH
- Ácido acético
- CDCl_{3}
- Cloroformo deuterizado
- rt
- Temperatura ambiente (aproximadamente 72ºF, 22ºC)
- BOP-Cl
- Cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfórico (comercializado por Aldrich en Wisconsin) y ver también el artículo de publicación, Diago-Meseguer; Palomo-Coll; Fernandez-Lizarbe y Zugaza-Bilbao, "New Reagent for Activating Carbonil Groups; Preparation and Reactions of N,N-Bis[2-oxo-3-oxazolidinil]phosphorodiamidic Chloride", Síntesis (1980) pp. 547-551.
- mp
- Punto de fusión
- FBS
- Suero bovino fetal
- DMEM
- Medio esencial modificado por Dulbecco
- LPS
- Lipopolisacárido
- PBS
- Solución salina tamponada por fosfato
- IFN-g
- Interferon gamma
- DCC
- Diciclohexilcarbodiimida
- DMAP
- 4-dimetilaminopiridina.
Tal y como se discute más adelante con mayor
detalle, el enzima COX hace referencia, en realidad, a dos enzimas,
COX-1 y COX-2, los cuales desempeñan
funciones fisiológicas y patofisiológicas diferentes. Tal y como
resulta sabido, a dosis anti-inflamatorias y/o
analgésicas, la indometacina, la aspirina y otros NSAIDs llevan a
cabo una gran inhibición de COX-1, la cual protege
el revestimiento del estómago de los ácidos, además de una
relativamente mínima inhibición de COX-2, que
provoca inflamación en respuesta a lesiones de articulaciones o
enfermedades de tipo artrítico. Asimismo, determinados NSAIDs
muestran esencialmente la misma actividad inhibidora frente a
COX-1 y COX-2. Así pues, la
reducción a cero de únicamente la inhibición de
COX-2 ha constituido el objetivo de los que han
desarrollado fármacos durante varios años, con vistas a reducir o
eliminar la irritación GI provocada por la inhibición de
COX-1.
Más específicamente, tal y como se discute en
Smith, Garavito y DeWitt, "D.L. Prostaglandin Endoperoxide H
Synthases (Cyclooxygenases)-1 and -2", J. Biol.
Chem., (1996) Vol. 271, pp. 33157-33160, el paso
pertinente en la biosíntesis de prostaglandina y tromboxano conlleva
la conversión de ácido araquidónico en PGH_{2}, el cual es
catalizado a través de la acción secuencial de las actividades COX y
PER de PGHHS, tal y como se refleja en el siguiente esquema:
El hecho de que la actividad COX procede de dos
enzimas distintos regulados de forma independiente, denominados
COX-1 y COX-2, es descrito por
DeWitt y Smith en "Primary Structure of Prostaglandin G/H Synthase
from Sheep Vesicular Gland Determined from the Complementary DNA
Sequence", Proc. Natl. Acad. Sci; USA (1988) Vol 85, pp.
1412-1416; Yokohama and Tanabe, "Cloning of Human
Gene Encoding Prostaglandin Endoperoxide Synthase and Primary
Structure of the Enzyme", Biochem. Biophys. Res. Commun. (1989)
Vol. 165, pp 888-894; y Hla and Neilson, "Human
Cyclooxigenase-2-cDNA", Proc.
Natl. Acad. Sci. USA (1992) Vol. 89, pp.
7384-7388.
La COX-1 constituye la isoforma
constitutiva y es principalmente responsable de la síntesis de las
prostaglandinas protectoras en el tracto GI y de la síntesis de
tromboxano, el cual desencadena la agregación plaquetaria en las
plaquetas sanguíneas. Ver, Allison, Howatson, Torrence, Lee y
Russell, "Gastrointestinal Damage Associated with the Use of
Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs", N. Engl. J. Med. (1992)
Vol. 327, pp. 749-754.
Por otro lado, la COX-2 resulta
inducible y es de vida corta. Su expresión es estimulada en
respuesta a endotoxinas, citoquinas y mitógenos. Ver, Kujubu,
Fletcher, Varnum, Lim y Herschman, "TIS10, A Phorbol Ester Tumor
Promoter Inducible mRNA from Swiss 3T3 Cells, Encodes a Novel
Prostaglandin Synthase/Cyclooxygenase Homologue", J. Biol. Chem.
(1991) Vol. 266, pp. 12866-12872; Lee, Soyoola,
Chanmugam, Hart, Sun, Zhong, Liou, Simmons and Hwang, "Selective
Expression of Mitogen-Inducible Cyclooxygenase in
Macrophages Stimulated with Lipopolysaccharide", J. Biol.
Chem.(1992) Vol. 267, pp. 25934-25938; and
O’Sullivan, Huggins, Jr; and Mccall,
"Lipopolysaccharide-induced Expression of
Prostaglandin H Synthase-2 in Aveolar Macrophages is
inhibited by Dexamethasone by not by Aspirin", Biochem. Biophys.
Res. Commun. (1993) Vol. 191, pp. 1294-1300.
Es importante mencionar que la
COX-2 desempeña un papel importante en la
biosíntesis de prostaglandina en células inflamatorias
(monocitos/macrófagos) y en el sistema nervioso central. Ver,
Masferrer, Zweifel, Manning, Hauser, Leahy, Smith, Isakson y
Seibert, "Selective Inhibition of Inducible
Cyclooxigenase-2 in vivo is Antiinflammatory
and Nonuncleogenic", Proc. Natl. Acad. Sci, USA (1994) Vol 91,
pp. 3228-3232; Vane, Mitchell, Appleton, Tomlinson,
Bishop-Bailey, Croxtall and Willoughby, "Inducible
Isoforms of Cyclooxigenasase and Nitric Oxide Synthase in
Inflammation", Proc. Natl. Acad. Sci., USA (1994) Vol 91, pp.
2046-2050; Harada, Hatanaka, Saito, Majima, Ogino,
Kawamura, Ohno, Yang, Katori and Yamamoto, "Detection of Inducible
Prostaglandin H Synthase-2 in Cells in the Exudate
of Rat Carrageenin-induced Pleurisy", Biomed.
Res. (1994) Vol 15 pp. 127-130 Katori, Harada,
Hatanaka, Kawamura, Ohno, Aizawa and Yamamoto, "Induction of
Prostaglandin H Synthase-2 in Rat
Carragenin-Induced Pleuresy and Effect of a
Selective COX-2 inhibitor", Advances in
Prostaglandin, Thromboxane and Leukotriene Research (1995) Vol 23,
pp. 345-347; and Kennedy, Chan, Culp and Cromlish,
"Cloning and Expression of Rat Prostaglandin Endoperoxide
Synthase (Cyclooxygenase-2)cDNA", Biochem.
Biophys. Res. Commun. (1994) Vol. 197, pp.
494-500.
Por lo tanto, la distribución tisular
diferencial de COX-1 y COX-2
proporciona una base para el desarrollo de fármacos que son
inhibidores COX-2 selectivos (a saber, la
especificidad para la inhibición de COX-2 supera
con creces la inhibición de COX-1), como agentes
anti-inflamatorios, analgésicos y/o antipiréticos,
con minimización de, o ausencia de, responsabilidades hematológicas
y GI derivadas de la inhibición COX-1, que afectan a
la mayor parte de los NSAIDs comercializados en la actualidad,
muchos de los cuales inhiben tanto a la COX-1 como
a la COX-2, con la especificidad para la inhibición
COX-1 excediendo con creces la inhibición de
COX-2, si bien algunos presentan una actividad
inhibidora esencialmente similar frente tanto a
COX-1 como a COX-2. Ver, por
ejemplo, Meade, Smith y DeWitt, "Differential inhibition of
Prostaglandin Indoperoxide Synthase (Cyclooxigenase) Isozymes by
Aspirin and other Non-Steroidal Antiinflammatory
Drugs", J. Biol. Chem., (1993) Vol 268, pp.
6610-6614.
Se ha informado acerca de estudios SAR
detallados para dos clases estructurales generales de inhibidores
COX-2 selectivos (la especificidad para la
inhibición de COX-2 excede con creces la inhibición
COX-1) incluyendo determinadas sulfonamidas ácidas
y determinados diarilheterociclos. Las actividades in vivo de
estos inhibidores selectivos COX-2 validan el
concepto de que la inhibición selectiva COX-2
resulta anti-inflamatoria y no ulcerogénica, tal y
como se discute en los siguientes artículos de publicaciones: Gans,
Galbraith, Roman, Haber, Kerr, Schmidt, Smith, Hewes y Ackerman,
"Anti-inflammatory and Safery Profile of DuP 697,
a Novel Orally Effective Prostaglandin Syntesis Inhibitor", J.
Pharmacol. Exp. Ther. (1990) Vol. 254, pp. 180-187;
Penning, Talley, Bertenshaw, Carter, Collins, Doctor, Graneto, Lee,
Malecha, Miyashiro, Rogers, Yu, Anderson, Burton, Cogburn, Gregory,
Koboldt, Perkins, Seibert, Veenhuizen, Zhang and Isakson,
"Synthesis and Biological Evaluation of the
1,5-Diarylpyrazole Class of
Cyclooxigenase-2 inhibitors: Identification of
4-[5-(4-Methylphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1-H-pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide
(SC-58635, Celecoxib)", J. Med. Chem. (1997) Vol.
40, pp. 1347-1365; Khanna, Weier, Yu, Xu, Kosyk,
Collins, Koboldt, Veenhuizen, Perkins, Casler, Masferrer, Zhang,
Gregory, Seibert and Isakson,
"1,2-Diarylimidazoles as Potent
Cyclooxigenase-2 Selective, and Orally Active
Antiinflammatory Agents", J. Med. Hem. (1997) Vol. 40, pp.
1634-1647; Khanna, Weier, Yu, Collins, Miyashiro,
Koboldt, Veenhuizen, Curie, Siebert and Isakson;
"1,2-Diarylpyrroles as Potent and Selective
Inhibitors of Cyclooxigenase-2", J. Med. Chem.
(1997) Vol. 40, pp. 1619-1633; Tsuji, Nakamura,
Konishi, Tojo, Ochi, Senoh and Matsuo, "Synthesis and
Pharmacological Properties of 1,5-Diarylazoles and
Related Derivatives", Chem. Pham. Bull. (1997) Vol 45, pp.
987-995; Riendeau, Percival, Boyce, Brideau,
Charleson, Cromlish, Ethier, Evans, Falgueyret,
Ford-Hutchinson, Gordon, Greig, Gresser, Guay,
Kargman, Leger, Mancini, O’ Neill, Quellet, Rodger, Therien, Wang,
Webb, Wong, Xu, Young, Zamboni, Prasit and Chan, "Biochemical and
Pharmacological Profile of a Tetrasubstituted Furanone as a Highly
Selective COX-2 inhibitor", Br. J. Pharmacol
(1997) Vol 121, pp. 105-117; Roy, Leblanc, Ball,
Brideau, Chan, Chauret, Cromlish, Ethier, Gauthier, Gordon, Greig,
Guay, Kargman, Lau, O’ Neill, Silva, Therien, Van Staden, Wong, Xu
and Prasit, " A New Series of Selective COX-2
Inhibitors:
5,6-Diarylthiazolo[3,2-b][1,2,4]-triazoles",
Bioorg. Med. Chem. Lett. (1997) Vol 7, pp. 57-62:
Therien, Brideau, Chan, Cromlish, Gauthier, Gordon, Greig, Kargman,
Lau, Leblanc, Li, O’ Neill, Riendeau, Roy, Wang, Xu, and Prasit,
"Synthesis and Biological Evaluation of
5,6-Diarylimidazo[2,1-b]thiazoles
as Selective COX-2 Inhibitors", Bioorg. Med.
Chem. Lett. (1997) Vol 7, pp. 47-52; Li, Norton,
Reinhard, Anderson, Gregory, Isakson, Koboldt, Masferrer, Perkins,
Seibert, Zhang, Zweifel and Reitz, "Novel Terphenyls as Selective
Cyclooxygenase-2-inhibitors and
Orally Active Antiinflammatory Agents", J. Med. Cem. (1996) Vol
39, pp. 1846-1856; Li, Anderson, Burton, Cogburn,
Collins, Garland, Gregory, Huang, Isakson, Koboldt, Logusch, Norton,
Perkins, Reinhard, Seibert, Veenheuzen, Zhang and Reitz,
"1,2-Diarylcyclopentenes as Selective
Cyclooxygenase-2-Inhibitors and
Orally Active Antiinfallamtory Agents", J. Med. Chem. (1995) Vol
38, pp. 4570-4578; Reitz, Li, Norton, Reinhard,
Huang, Penick, Collins and Garland, "Novel
1,2-Diarylcyclopentenes are Selective Potent and
Orally Active Cyclooxygenase Inhibitors", Med. Chem. Res. (1995)
Vol. 5, pp. 351-363; Futaki, Yoshikawa, Arai,
Higuchi, Lizuka and Otomo, "NS-398, A Novel
Nonsteroidal Antiinflammatory Drug with Potent Analgesic and
Antipyretic effects, which Causes Minimal Stomach Lesions", Gen.
Pharmacol. (1993) Vol 24, pp. 105-110;
Wiesenberg-Boetcher, Schweizer, Green, Muller,
Maerki, and Pfeilschifter, "The Pharmacological profile of CGP
28238, A Novel Highly Potent Antiinfallamtory Compound", Drugs
Exctl. Clin. Es. (1989) Vol XV, pp. 501-509; Futaki,
Takahashi, Yokohama, Arai, Higuchi, and Otomo,
"NS-398, A New Anti-Inflammatory
Agent, Selectively Inhibits Prostaglandin G/H
Synthase/Cyclooxygenase (COX-2) Activity in
vitro", Prostaglandins (1994), Vol 47, pp.
55-59; Klein, Nusing, Pfeilschifter and Ullrich,
"Selective Inhibition of Cyclooxygenase-2",
Biochem. Pharmacol. (1994) Vol 48, pp. 1605-1610;
Li, Black, Chan, Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon,
Guay, Kargman, Lau, Mancini, Quimet, Roy, Vickers, Wong, Young,
Zamboni and Prasit,
"Cyclooxygenase-2-inhibitors.
Synthesis and Pharmacological Activities of
5-Methansulfonamido-1-indanone
Derivatives", J. Med. Chem, (1995) Vol 38, pp.
4897-8905; Prasit, Black, Chan,
Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon, Guy, Kargman,
Lau, Li, Mancini, Quimet, Roy, Tagari, Vickers, Wong, Young, and
Zamboni, "L-745,337: A Selective Cyclooxygenase
inhibitor", Med. Chem. Res. (1995) Vol 5, pp.
364-374; Tanaka, Shimotori, Makino, Aikawa, Inaba,
Yoshida and Takano, "Pharmacological Studies of the New
Anti-inflammatory Agent
3-Formylamino-7-methylsulphonylamino-6-phenoxi-4H-1-benzopyran-4-one.
1^{st} Communication: Anti-inflammatory, Analgesic
and Other Related Properties", Arzniem-Forsch.
IDrug Res. (1992) Vol 42, pp. 935-944; Nakamura,
Tsuji, Konishi, Okamura, and Matsuo, "Studies on
Anti-Inflammatory Agents.
1-Synthesis and Pharmacological Properties of
2’-(phenylthio)methanesulphonamides and Related
Derivatives", Chem Pharm. Bull 1993) Vol 41, pp.
894-906; Chan, Boyce, Brideau,
Ford-Hutchinson, Gordon, Guay, Hill, Li, Mancini,
Penneton, Prasit, Rasori, Riendeau, Roy, Tagari, Vickers, Wong and
Rodger, "Pharmacology of a Selective
Cyclooxygenase-2-inhibitor,
L-745,337: A novel Nonsteroidal
Anti-Inflammatory Agent with an Ulcerogenic Sparing
Effect in Rat and Nonhuman Primate Stomach", J. Pharmacol. Exp.
Ther. (1995) Vol 274, pp. 1531-1537; and Graedon and
Graedon, "Pills Promise Relief without Ulcers", The Raleigh,
North Carolina News and Observer, p 8D (September13, 1998) que
trata, en términos generales, acerca del desarrollo de celecoxib,
meloxicam, y vioxx como inhibidores COX-2
selectivos.
Constituyen sulfonamidas ácidas y
diarilheterociclos representativos, acerca de los cuales se ha
informado que son inhibidores COX-2 selectivos en
los artículos de la publicación mencionada en el párrafo
anterior:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A pesar de que las sulfonamidas ácidas y los
diarilheterociclos han sido estudiados de forma intensiva como
inhibidores COX-2 selectivos, existen muy pocos
informes acerca de la conversión de NSAIDs que son inhibidores
COX-1 selectivos en inhibidores
COX-2 selectivos. Ver, Black, Bayly, Belley, Chan,
Charleson, Denis, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Leblanc,
Mancini, Quellet, Percival, Roy, Skorey, Tagari, Vickers, Wong, Xu y
Prasit, "From Indomethacin to a Selective COX-2
Inhibitor: Development of Indolalkanoic Acids as Potent and
Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitors", Bioorg.
Med. Chem. Lett. 1996) Vol. 6, pp. 725-730; Luong,
Miller, Barnett, Chow, Ramesha y Browner, "Flexibility of the
NSAID Binding Site in the Structure of Human
Cyclooxigenase-2", Nature Structural Biol. (1996)
Vol. 3, pp. 927-933; y Kalgutkar, Crews, Rowlinson,
Garner, Seibert y Marnett, "Aspirin-Like Molecules
that Covalently Inactivate Cyclooxigenase-2",
Science (1998) Vol 280, pp. 1268-1270; Patente USA
Nº. 5.681.964 (concedida en 1997) a Ashton et al, cedentes a
la University of Kentucky Research Foundation, la cual muestra la
conversión de indometacina (un NSAID) en determinados derivados
éster con reducción concomitante de la irritación GI (ver la Fig. 1
de la patente USA nº. 5.681.964, para la estructura de los
derivados éster); y las patentes USA nº. 5.607.966 (inicial)
(concedida en 1997) y la nº. 5.811.438 (CIP) (concedida en 1998),
ambas a favor de Hellberg et al, cedentes a Alcon
Laboratoires, las cuales muestran la conversión de diversos NSAIDs
(tales como la indometacina) en determinados derivados éster y
derivados amida (que resultan de utilidad como antioxidantes e
inhibidores de 5-lipoxigenasa), pero que no tratan
la inhibición COX-2 selectiva.
Además, si bien las patentes USA nºs. 3.285.908
(concedida en 1966) y 3.336.194 (concedida en 1967), ambas a favor
de Shen, cedente para Merck & Co., Inc., describen diversos
derivados amida secundaria y terciaria de indometacina, las citadas
patentes no se refieren a la inhibición COX, debido probablemente a
que la inhibición COX (tanto la COX-1 como la
COX-2) no había sido descubierta en la década de
1960 y, por consiguiente, no reconocen que los derivados amida
terciaria no inhiben ni a la COX-1 ni a la
COX-2. (Ver también los ejemplos comparativos 36 y
37 en el Ejemplo II indicado más adelante). No obstante, las
patentes USA nºs. 5.436.265 (concedida en 1995) a favor de Black
et al. y la nº. 5.510.368 (concedida en 1996) a favor de Lau
et al., ambas cedidas a Merck Frosst Canada, Inc., describen,
respectivamente, ácidos
1-aroit-3-indotit-alcanoicos
y ácidos
N-bencil-3-indolacético
como inhibidores COX-2 selectivos.
En la presente investigación, se ha explorado la
posibilidad de designar inhibidores COX-2 selectivos
utilizando, como plantillas, diversos NSAIDs (1) que son
inhibidores COX-1 selectivos o (2) que presentan
esencialmente la misma capacidad inhibidora para la
COX-1 como para la COX-2. A estos
dos tipos de NSAIDs se les conoce como NSAIDs que no son
inhibidores COX-2 selectivos.
Más particularmente, el análisis de la
estructura cristalina de COX-2 complejada con
inhibidores COX-2 selectivos derivados de
zomepiraco indica que la base estructural para la selectividad por
los compuestos derivados de zomepiraco es diferente que la de los
diarilheterociclos. Ver, la referencia Luong et al.,
mencionada anteriormente. A diferencia de los diarilheterociclos,
los análogos de zomepiraco no utilizan el bolsillo lateral, por el
contrario, ubican la constricción en la boca del punto activo COX
ocupado por Arg 106 y Tyr 341 y se proyectan hacia la región de
entrada. La proyección hacia esta región estéricamente no
congestionada en el punto activo COX-2 abre la
posibilidad de que la preparación de una amplia diversidad de
fármacos análogos que contienen COOH, tales como análogos de
NSAIDs, cada uno de ellos con un grupo funcional colgante diferente
que sustituye al OH o al H del COOH, permitiría obtener muchos de
los objetivos relacionados con el descubrimiento o desarrollo de
fármacos. Por ejemplo, determinados grupos colgantes podrían mejorar
la solubilidad en agua, la biodisponibilidad o la farmacocinética.
Otra posibilidad residiría en la unión de un farmacóforo colgante,
con la finalidad de poder dirigirse a una proteína completamente
diferente que conduzca a compuestos con funciones farmacológicas
duales.
Abbott Laboratoires y
Parke-Davies han intentado el planteamiento de
farmacóforo. Ver, respectivamente, Kolasa, Brooks, Rodrigues,
Summers, Dellaria, Hulkower, Bouska, Bell, y Carter,
"Non-esteroidal Anti-inflammatory
Drugs as Scaffolds for the Design of 5-Lipoxygenase
Inhibitors", J. Med. Chem. (1997) Vol 40. pp.
819-824; y Flynn, Capiris, Cetenko, Connor, Dyer,
Kostlan, Niese, Schrier y Sircar, "Nonsteroidal Antiinfallamtory
Drug Hydroxamic Acids. Dual Inhibitors of both Cyclooxigenase and
5-Lypoxygenase", J. Med. Chem. (1990) Vol 33,
pp. 2070-2072. Dyer, Kostian, Niese, Schrier and
Sircar, "Nonsteroidal Antiinflammatory Drug Hydroxamic Acids.
Dual Inhibitors of Both Cyclooxigenase and
5-Lipoxygenase", J. Med. Che. (1990) Vol. 33. pp.
20270-2072. Tanto Kolasa et al como Flynn
et al informaron al respecto de que la sustitución del grupo
ácido carboxílico en NSAIDs por un resto ácido hidroxámico o un
resto hidroxiurea proporcionaba inhibidores duales de COX y de
5-lipoxigenasa. Sin embargo, ninguno de los análogos
desplegaba una inhibición significativa para COX-2
y, además, los hidroxamatos eran susceptibles de sufrir una fácil
hidrólisis.
Adicionalmente, resulta interesante destacar que
el sulfuro de sulindaco (un NSAID que contiene un resto COOH al
igual que un resto sulfuro de metilo) es un inhibidor 40 veces más
potente frente a COX-1 que frente a
COX-2. Por otro lado, un derivado, particularmente
el sulindaco sulfona (que contiene un resto COOH al igual que un
resto metilsulfona) no inhibe ni a COX-1 ni a
COX-2.
No obstante, nada en la literatura discutida con
anterioridad sugiere que la conversión de un NSAID que contiene un
COOH que no resulta selectivo para la inhibición de
COX-2, en un derivado éster o en un derivado amida
secundaria daría lugar a un derivado selectivo para la inhibición
COX-2. Por consiguiente, resultaría deseable
encontrar determinados fármacos que contienen COOH, tales como
NDAIDs, que no fueran inhibidores COX-2 selectivos
(o bien mostrasen una inhibición para COX-1 que
excediese con creces la inhibición COX-2 o
mostrasen esencialmente la misma inhibición para
COX-2 que para COX-1), los cuales,
una vez convertidos en determinados derivados, se conviertan en
inhibidores selectivos COX-2 (muestran una
inhibición para COX-2 que sobrepasa holgadamente la
inhibición para COX-1), al igual que mantengan el
efecto analgésico, anti-inflamatorio y/o
antipirético del fármaco, tal como el NSAID, con anterioridad a la
derivatizacion.
De forma sorprendente en la presente invención,
se ha averiguado que la derivatización del resto ácido carboxílico
o de la sal farmacéuticamente aceptable del resto de diversos
compuestos (por ejemplo, de determinados NSAIDs) que no son
inhibidores COX-2 selectivos, tales como la
indometacina, hacia análogos éster o hacia análogos de amida
secundaria, da lugar a especificidad de isoenzima para
COX-2. Además, el derivado éster o amida secundaria
resultante no es tan solo un inhibidor COX-2 sino
que también conserva los efectos analgésicos,
anti-inflamatorios y/o antipiréticos del compuesto,
a saber del NSAID.
Por lo tanto, la presente invención proporciona
un procedimiento para alterar la especificidad de un compuesto
inhibidor de la ciclooxigenasa, comprendiendo el procedimiento los
pasos de: (a) proporcionar un compuesto que tiene actividad
inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un resto ácido
carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo
asociada con la actividad inhibidora de ciclooxigensasa, presentando
el compuesto ausencia de especificidad para la actividad inhibidora
de ciclooxigenasas-2; y (2) alterar la
especificidad del compuesto en el paso (a) de tal forma que pase de
tener ausencia de especificidad para la actividad inhibidora de
ciclooxigensa-2 a presentar especificidad para la
actividad inhibidora de ciclooxigensa-2, mediante
la conversión del compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o
una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en un derivado que
tiene un resto éster o un resto amida secundaria.
Por consiguiente, constituye un objetivo de la
presente invención el de proporcionar un fármaco derivado que
minimice u obvie la irritación GI. Además, constituye una ventaja de
la presente invención la de que el fármaco derivado es también
analgésico, anti-inflamatorio, y/o antipirético, en
ausencia de la administración concomitante del fármaco no
derivatizado o de una sal farmacéuticamente aceptable del fármaco no
derivatizado.
Habiendo sido expuestos algunos de los objetivos
de la presente invención, resultarán evidentes otros objetivos a
medida que se avanza en la descripción, cuando se tomen en
consideración en unión de los Ejemplos de Laboratorio descritos más
adelante.
La presente invención conlleva un procedimiento
para convertir un fármaco en un inhibidor COX-2
selectivo y también para utilizar el inhibidor
COX-2 selectivo para el tratamiento de un animal que
es un vertebrado de sangre caliente. Por consiguiente, la invención
está relacionada con mamíferos y con pájaros.
Se contempla el tratamiento de mamíferos, tales
como humanos; al igual que el de aquellos mamíferos que resultan
importantes debido a que se encuentran en peligro (tales como los
tigres siberianos), que resulten importantes desde el punto de
vista económico (animales criados en granjas para el consumo por
humanos), y/o de importancia social (animales conservados como
animales de compañía o en zoológicos) para los humanos, por
ejemplo, carnívoros distintos de los humanos (tales como gatos y
perros), porcinos (cerdos, cerdos castrados y jabalíes), rumiantes
(tales como reses, bueyes, ovejas, jirafas, ciervos, cabras,
bisontes y camellos), y caballos. Se contempla también el
tratamiento de pájaros, incluyendo el tratamiento de aquellos tipos
de pájaros que se encuentran en peligro, mantenidos en zoos, al
igual que el de aves, y más particularmente el de aves
domesticadas, a saber, volatería, tales como pavos, pollos, patos,
gansos, pintadas y similares, dada su relevancia económica para los
humanos. Por consiguiente, se contempla el tratamiento de ganado,
incluyendo, sin que ello represente ninguna imitación, el porcino
(cerdos y cerdos castrados), rumiantes, caballos, volatería y
similares.
Más particularmente, al animal vertebrado de
sangre caliente se le tiene que administrar una cantidad eficaz
para el tratamiento de un derivado éster o de un derivado amida
secundaria de un fármaco que contiene un ácido carboxílico, tal
como un derivado de un NSAID. Por consiguiente, la invención
comprende el uso médico del derivado en concentraciones que han
sido calculadas para proporcionarle al animal que está siendo
tratado con el medio adecuado un efecto analgésico,
anti-inflamatorio o antipirético.
Por fármaco que contiene ácido carboxílico (tal
como un NSAID) o fármaco que contiene COOH (tal como un NSAID), tal
y como se utiliza en el presente documento en conexión con la
presente invención, se pretende incluir sales de ácido
farmacéuticamente aceptables del fármaco. Por consiguiente, el resto
COOH incluye COOM, donde M es Na y similar.
Los compuestos derivados preferidos que resultan
de utilidad en el uso médico de la presente invención son derivados
amida secundaria o derivados éster de fármacos
anti-inflamatorios no esteroides que tienen un
resto carboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Se han identificado diversas clases químicas de NSAIDs y listado en
el CRC Handbook of Eicosanoids: Prostaglandins and related Lipids,
Vol. II, Drugs Actino Via the Eicosanoids, páginas
59-133, CRCPress, Boca Raton, Fla. (1989). Por lo
tanto, el NSAID puede ser elegido de entre una diversidad de clases
químicas que incluyen, sin que ello represente ninguna limitación,
ácidos fenámicos, tales como ácido flufenámico, ácido niflúmico, y
ácido mefenámico; indoles, tales como indometacina, sulindaco, y
tolmetina; ácidos fenilalcanoicos, tales como suprofeno, ketorolaco,
flurbiprofeno e ibuprofeno y ácidos fenilacéticos, tales como
diclofenaco. Se proporcionan seguidamente nuevos ejemplos de
NSAIDs:
| aceloferaco | ácido etodólico | loxoprofeno |
| alcofenaco | fenbufeno | meclofenamato |
| amfenaco | fenclofenaco | naproxeno |
| benoxaprofeno | fencloraco | orpanoxina |
| bromfenaco | fenoprofeno | pirprofeno |
| carprofeno | ácido flecózico | pranoprofeno |
| cicladanaco | indoprofeno | ácido tolfenámico |
| diflunisal | isofezolaco | zaltoprofeno |
| ácido efenámico | ketoprofeno | zomopiraco |
Mas específicamente, entre los derivados éster y
derivados amida secundaria preferidos que resultan de utilidad en
la presente invención se incluyen, sin que ello represente ninguna
limitación, derivados éster y derivados amida secundaria de los
siguientes NSAIDs que contienen COOH: ácido
6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético
(y su forma sal ácida de Na, conocida como naproxeno), ácido
meclofenámico, y diclofenaco, resultando preferidos los derivados
éster y derivados amida secundaria de indometacina. Asimismo, los
derivados éster y los derivados amida secundaria de indometacina,
en los que el Cl en la posición 4 del resto benzoilo ha sido
sustituido por Br o F, deberían funcionar en la presente invención.
Incluso más preferidos resultan ser los derivados amida secundaria
de indometacina, incluyendo, sin que ello represente ninguna
limitación,
indometacin-N-metilamida,
indometacin-N-etan-2-olamida,
indometacin-N-octilamida,
indometacin-N-nonilamida,
indometacin-N-(2-metilbencil)amida,
indometacin-(4-metilbencil)amida,
indometacin-N-((R)-4-dimetilbencilamida,
indometacin-N-((S)-4-dimetilbencil)amida,
indometacin-N-(2-fenetil)amida,
indometacin-N-(4-fluorofenil)amida,
indometacin-N-(4-clorofenil)amida,
indometacin-N-(4-acetamidofenil)amida,
indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida,
indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida,
indometacin-N-(4-metoxifenil)amida,
indometacin-N-(3-etoxifenil)amida,
indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida,
indometacin-N-(3-piridil)amida,
indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida,
indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida,
indometacin-N-(3-cloropropil)amida,
indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida,
indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida,
indometacin-N-2-(2-D-metoxicarbonilamida),
indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida,
indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida,
indometacin-N-(2-piracinil)amida,
indometacin-N-2-(4-metiltiazolil)amida,
indometacin-N-(4-bifenil)amida,
y combinaciones de las mismas.
El derivado éster o el derivado amida secundaria
puede ser administrado al animal en forma de supositorio, o como
suplemento a los fluidos que son administrados por vía interna o
parenteral, por ejemplo, los fluidos nutrientes tales como
soluciones de sucrosa intravenosa. Además, se contempla también la
administración intraoral (tal como la bucal o sublingual) o la
transdérmica (tal como el parche sobre la piel). En las patentes USA
nºs. 4.229.447, concedida el 21 de octubre de 1980 a Porter y en la
USA nº. 5.504.086, concedida el 2 de abril de 1996 a Ellinwood y
Gupta, puede observarse una buena discusión acerca de la
administración intraoral. En la patente USA nº. 5.016.652,
concedida el 21 de mayo de 1991 a Rose y Jarvik, se contiene una
buena discusión acerca de la administración transdérmica.
Adicionalmente, la administración al animal
puede ser efectuada a través de diversos procedimientos orales, por
ejemplo en forma de comprimido, cápsula, o polvo (forma cristalina)
que pueda ser engullido. Asimismo, la administración oral puede
también incluir el que el derivado éster o el derivado amida
secundaria sea mezclado en un soporte fluido adecuado para que
pueda ser administrado como líquido (solución o suspensión) que sea
bebible. Cuando el derivado es mezclado en un soporte fluido, entre
los fluidos adecuados se incluyen, sin que ello represente ninguna
limitación, agua, soluciones de rehidratación ( a saber, agua con
electrolitos tales como citrato potásico y cloruro sódico, por
ejemplo, la solución disponible bajo la marca RESOL® de Wyeth
Laboratoires), fluidos nutricionales (a saber, leche, zumo de
fruta), y combinaciones de los mismos. Así pues, la administración
oral puede ser aplicada en forma de componente de la dieta, tal como
alimento humano, alimento vegetal y combinaciones de los
mismos.
Además de la administración oral, tal como a
través de la boca, se contempla también la administración de una
solución o suspensión al esófago, estómago y/o duodeno, tal como a
través de sonda, a saber, a través de tubo de alimentación. La
administración a través de sonda resulta de utilidad cuando el
animal está muy enfermo y no puede engullir el alimento, medicina,
etc, a través de la boca.
Por lo tanto, se contempla también el que,
conjuntamente con el derivado, en cualquiera de sus formas, pueden
encontrarse presentes ingredientes adicionales, tales como diversos
excipientes, soportes, tensioactivos, nutrientes, y similares, al
igual que diversos medicamentos, distintos de los derivados éster o
de los derivados amida secundaria o de sus combinaciones. Entre los
medicamentos distintos a derivados éster o derivados amida
secundaria pueden incluirse, sin que ello represente ninguna
limitación, polioles osmolíticos y aminoácidos osmolíticos (a
saber, mioinositol, sorbitol, glicina, alanina, glutamina,
glutamato, aspartato, prolina, y taurina), cardiotónicos (a saber,
glicociamina), analgésicos, antibióticos, electrolitos (a saber,
electrolitos orgánicos o minerales, tales como sales) y
combinaciones de los mismos.
Una dosis adecuada de derivado éster o de
derivado amida secundaria para ser administrada al animal debería
oscilar entre aproximadamente 0,5 mg y aproximadamente 7,0 mg por Kg
de peso corporal del animal, por día, más preferiblemente entre
aproximadamente 1,5 mg y aproximadamente 6,0 mg de peso corporal de
animal por día, e incluso más preferiblemente entre aproximadamente
2,0 mg y aproximadamente 5,0 mg por kilogramo de peso corporal de
animal por día. La administración puede ser llevada a cabo una o más
veces por día, hasta alcanzar la dosis total diaria deseada.
Naturalmente, la cantidad puede variar en función de la gravedad de
la enfermedad y/o de la gravedad del animal.
La presente invención indica que los compuestos
que contienen ácido carboxílico que no son inhibidores selectivos
COX-2, tales como el NSAID conocido como
indometacina, cuando son convertidos en ésteres o en amidas
secundarias, dan lugar a especificidad de enzima para
COX-2 y presentan, por tanto, una estrategia eficaz
para la generación de potentes y selectivos inhibidores
COX-2. El estudio SAR extensivo descrito más
adelante, llevado a cabo con indometacina, sugiere que se tolera
una amplia diversidad de sustituyentes amida secundaria a la hora
de sustituir el H en el resto COOH de la indometacina y que se
tolera una amplia diversidad de sustituyentes amida secundaria a la
hora de sustituir el OH en el resto COOH de la indometacina, y estos
derivados resultantes son tan potentes y selectivos como
inhibidores COX-2 como lo son los diarilheterociclos
discutidos con anterioridad. Por lo tanto, la presente estrategia
presenta un elevado potencial en el desarrollo de agentes
anti-inflamatorios no ulcerogénicos.
En relación con los materiales y procedimientos
utilizados más adelante, se efectúan los siguientes comentarios.
Los ésteres que fueron preparados y sus
propiedades de inhibición selectivas COX-2 se
relacionan en la Tabla 1 que se indica más adelante. Se prepararon
un total de 29 análogos (29 derivados éster) de indometacina. Las
amidas que fueron preparadas y sus propiedades inhibidoras
selectivas de COX-2 se relacionan en la Tabla 2 que
se indica más adelante. Se prepararon un total de 31 análogos (31
derivados amida) de indometacina.
La mayoría de los ésteres NSAID fueron
preparados por medio de tratamiento del NSAID con el fenol o alcohol
adecuado, en presencia de DCC y DMAP, descrito en el presente
documento como Procedimiento B (más adelante se ofrecen detalles al
respecto de la preparación del éster a través del Procedimiento A).
El esquema de reacción para la preparación del éster a través del
Procedimiento B y el esquema de reacción para la preparación de la
amida eran, respectivamente, los siguientes:
Entre los diversos sustituyentes que contienen
nitrógeno (a saber, aminas), que sustituyen al OH del grupo COOH
con vistas a crear una amida, se incluyen restos aminoalquilo,
aminoarilo, aminoarilalquilo, aminoéteres, o aminopiridinilo,
formando parte del sustituyente que contiene nitrógeno. Los análogos
de amida más potentes en las series de derivados de indometacina
mostraron valores IC_{50} para la inhibición de
COX-2 humana purificada en la banda nanomolar baja,
con relaciones de selectividad para COX-2 que
oscilan entre > 1000-4000. En la síntesis de los
derivados amida de indometacina se utilizó una metodología bien
establecida, mediante tratamiento de la indometacina con la amina
adecuada (designada como R), utilizando BOP-Cl como
activador ácido carboxílico para sustituir el OH del grupo COOH por
R y crear una amida. Si R era una amina primaria, el derivado
resultante era una amida secundaria y si R era una amina secundaria,
el derivado resultante era una amida terciaria.
Más específicamente, una mezcla de reacción que
contiene indometacina (300 mg, 0,84 mmol) y BOP-Cl
(218 mg, 0,84 mmol) en 5 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro fue tratada
con Et_{3}N (167 mg, 0,84 mmol) y se mantuvo en agitación a
temperatura ambiente durante un período de 10 minutos. La mezcla fue
tratada después con la amina adecuada (0,94 mmol), designada como
R, y sometida a agitación durante el transcurso de una noche a
temperatura ambiente. Después de dilución con CH_{2}Cl_{2} (30
mL) se lavó la solución resultante con agua (2 x 25 mL), NaOH 3N (2
x 25 mL), agua (2 x 30 mL), se secó (en presencia de MgSO_{4}),
filtró y se concentró el disolvente al vacío. La amida cruda fue
purificada mediante cromatografía sobre gel de sílice o de
recristalización con el disolvente adecuado.
Los valores IC_{50} para la inhibición de
COX-2 humana purificada o de COX-1
ovina para los compuestos de prueba fueron determinados mediante
los ensayos TLC discutidos más adelante. Se utilizó
COX-1 ovina, dado que resulta muy fácil aislar y
purificar el enzima obtenido a partir de vesículas seminales de
oveja, mientras que la COX-1 humana se obtiene
normalmente mediante sobre-expresión en un sistema
celular de insecto y resulta muy difícil de manipular y,
especialmente, de purificar. La COX-1 procedente de
oveja es > 90% similar a la COX-1 obtenida a
partir de humanos. Finalmente, se ha informado en la literatura
acerca de la inhibición de COX-1 prodecente de
estas dos fuentes mediante NSAIDs y los valores IC_{50} resultan
similares, sugiriendo que no existen diferencias significativas en
los puntos activos. La COX-1 fue purificada a partir
de vesículas seminales de carnero obtenidas en Oxford Biomedical
Research, Inc. (Oxford, Michigan). La actividad específica de la
proteína era de 20 (\muMO_{2}/minuto)/mg, y el porcentaje de
holoproteína era del 13,5%. Se obtuvieron muestras de
COX-2 humana (1,62 \mug/\mul), mediante la
expresión de COX-2 humana clonada en células de
insectos, soportada sobre vectores bacilovirus, seguido de
purificación. Los enzimas obtenidos después de la purificación eran
apo (a saber, carecían del grupo hemprostético). Los mismos fueron
reconstituidos con hematina adquirida en Sigma Chemical Co. (St.
Louis, Missouri) en ensayos para convertirlos en su estado natural,
que es holo (a saber, la COX-1 y
COX-2 de origen natural contienen el grupo
hemprostético), por lo que la inhibición por parte de los compuestos
objeto de comprobación tenía relevancia
fisiológica.
fisiológica.
HoloCOX-2 (66 nM) u
holoCOX-1 (44 nM) en Tris-HCl 100
mM, pH 8,0, conteniendo 500 \muM fenol, fue tratada con diversas
concentraciones de indometacina, un éster derivado de indometacina o
un derivado amida de indometacina, a 25ºC, por espacio de 20
minutos. Dado que la COX-2 recombinante presentaba
una actividad específica más baja que la COX-1
ovina, las concentraciones de proteína fueron ajustadas de tal forma
que los porcentajes totales de producto obtenido después de
catálisis de ácido araquidónico (adquirido en Nu Check Prep,
Elysian, Minnesota) mediante las dos isoformas resultaban
comparables. Más específicamente, utilizando el ensayo TLC se
determinó, de acuerdo con lo que se indica seguidamente, la
inhibición dependiente del tiempo y la concentración de la
actividad de ciclooxigenasa para la COX-1 ovina (44
nM) y para la COX-2 humana (66 nM). Las mezclas de
reacción de 200 \muL contenían proteína reconstituida con hematina
en Tris HCl 100 mM, pH 8,0; 500 \muL fenol y ácido
[1-^{14}C]araquidónico (50 \muM, \sim
55-57 mCi/mmol). Para el ensayo de inhibición
dependiente del tiempo, la COX-1 reconstituida por
hematina (44 nM) o COX-2 (66 nM) fue preincubada a
temperatura ambiente durante un período de 20 minutos, con
concentraciones variantes de inhibidor en DMSO, seguido de adición
de ácido [1-^{14}C]araquidónico (50
\muM), durante un período de 30 segundos a 37ºC. El ácido
[1-^{14}C] araquidónico (\sim
55-57 mCi/mmol) fue adquirido en New England Nuclear
Dupont, o en American Radiolabeled Chemicals (St. Louis,
Missouri).
Las reacciones finalizaron mediante la
extracción con disolvente en Et_{2}O/CH_{3}OH/ citrato 1M, pH
4,0 (30:4:1). Las fases fueron separadas mediante centrifugación a
2000 g de fuerza durante un período de 2 minutos y la fase orgánica
fue depositada sobre una placa de TLC (obtenida en J.T.Baker,
Phillipsburg, New Jersey). La placa fue revelada en
EtOAc/CH_{2}Cl_{2}/AcOH glacial (75:25:1) a 4ºC. Los productos
prostanoides radiomarcados fueron determinados cuantitativamente
con un escáner de radioactividad (obtenido en Bioscan, Inc.,
Washington, D.C.). El porcentaje de productos totales observados a
diferentes concentraciones de inhibidor fue dividido por el
porcentaje de productos observado para muestras de proteína
preincubadas durante el mismo tiempo con DMSO.
El control de experimentos en ausencia de
indometacina indicaba que \sim 25-30% de
conversión de sustrato de ácido graso en productos, lo cual
resultaba suficiente para valorar las propiedades inhibidoras de la
totalidad de compuesto objeto de comprobación. En estas
condiciones, la indometacina desplegaba inhibición selectiva de
COX-1 en función del tiempo y de la concentración (a
saber, IC_{50} (COX-1) \sim 0,050 \muM;
IC_{50} (COX-2) \sim 0,75 \muM), mientras que
los derivados éster y los derivados amida secundaria mostraban
inhibición COX-2 selectiva pero los derivados amida
terciaria no inhibían ni a la COX-1 ni a la
COX-2 (a saber, la medición de COX-2
se detuvo a una IC_{50} extremadamente elevada y todavía
permanecía una inhibición de la actividad de COX-2
> 80%). Asimismo, lo siguiente es valido para
NS-398 y
2-metil-4-fenil-5-sulfoamidofeniloxazol,
dos de las sulfonamidas ácidas mencionadas anteriormente, es decir,
NS-398: IC_{50} (COX-2) \sim
0,12 \muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM; y
2-metil-4-fenil-5-sulfoamidofeniloxazol:
IC_{50} (COX-2) \sim 0,06 \muM; IC_{50}
(COX-1)> 66 \muM.
Para determinadas pruebas comparativas, la
inhibición de la actividad COX-2 en células RAW264.7
de múrido activadas fue determinada del siguiente modo. Células
RAW264.7 de múrido de número de paso bajo fueron cultivadas en DMEM
conteniendo un 10% de FBS inactivado por calor. Las células (6,2 x
10^{6} células/matraz T25) fueron activadas con 500 ng/mL de LPS
y 10 unidades/mL de IFN-g en DMEM libre de suero,
durante un período de 7 horas. Se añadió vehículo (DMSO) o inhibidor
en DMSO (de 0 a 1 \muM) durante un período de 30 minutos a 37ºC.
La inhibición del metabolismo de ácido araquidónico exógeno o la
inhibición de la síntesis de PGD_{2} fue determinada mediante
incubación de las respectivas células con
^{14}C-AA 20 \muM, durante un período de 15
minutos a 25ºC. Se extrajeron alícuotas (200 \muL) como solución
final y todos los productos fueron determinados cuantitativamente
mediante ensayo de TLC.
Los puntos de fusión se determinaron utilizando
un aparato Gailenkamp para determinación de puntos de fusión y no
se corrigieron. Los rendimientos químicos eran ejemplos específicos
no optimizados de una preparación. Los NSAIDs (a saber,
indometacina) fueron adquiridos en Sigma (St. Louis, Missouri). La
totalidad de productos químicos restantes fueron adquiridos en
Aldrich (Milwaukee, Wisconsin). El cloruro de metileno fue adquirido
en forma anhidra en Aldrich y se utilizó tal cual se había
recibido. La totalidad de disolventes restantes tenían pureza HPLC.
Para seguir el transcurso de las reacciones se utilizó analítica TLC
(Analtech uniplates ™). Para la columna de cromatografía se utilizó
gel de sílice (Fisher, malla 60-100). Los espectros
de ^{1}H NMR y de ^{13}C NMR en CDCl_{3} se registraron en un
espectrómetro Broker WP-360 o en un espectrómetro
AM-400. Los desplazamientos químicos se expresaron
en partes por millón (ppm) en relación con tetrametilsilano, como
estándar interno. Las multiplicidades de spin fueron reportadas como
s (singulete), d (doblete, dd (doblete de dobletes), t (triplete), q
(quartete) y m (multiplete). Las constantes de acoplamiento (J)
fueron expresadas en hertz (Hz).
Derivados con resto éster. Se prepararon
los siguientes derivados éster de indometacina, designados como
compuestos 2 a 29.
Procedimiento
A
A una mezcla de reacción que contenía el NSAID
(1 mmol) adecuado en 40 mL del alcohol deseado se le añadieron 2
gotas de HCL concentrado y se calentó la mezcla en condiciones de
reflujo durante un período de 2 horas. Se dejó que la mezcla de
reacción volviera a la temperatura ambiente y se extrajo el
disolvente al vacío. El resto fue diluido con agua y extraído con
Et_{2}O (3 x 10 mL). La solución orgánica combinada fue lavada con
NaOH 1N (2 x 20 mL), agua (\sim 50 mL), secada (en presencia de
MgSO_{4}), filtrada y concentrada al vacío. El resto fue
cromatografiado sobre gel de sílice y eluido con el disolvente
adecuado.
El éster metílico de indometacina (compuesto
2) fue obtenido en forma de un producto sólido blanco velloso
(251 mg, 67%) mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:hexanos; 20:80) seguido de recristalización con Et_{2}O.
punto de fusión: 94-96ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,65-7,68 (d, 2H, J= 8,3
Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,2 Hz, ArH);
6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz, y 2,4 Hz, ArH); 3,84
(s, 3H, CH_{3}); 3,72 (s, 3H, CH_{3}); 3,67 (s, 2H, CH_{2});
2,38 (s, 3H, CH_{3}).
El éster etílico de indometacina (compuesto
3) fue obtenido en forma de producto sólido blanco de aspecto
velloso (300 mg, 81%) mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:hexanos; 10:90) seguido de recristalización con Et_{2}O.
Punto de fusión: 100-101ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,4
Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH);
4,12-4,19 (q, 2H, J= 7,1 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H,
CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3});
1,24-1,28 (t, 3H,
J= 7,1 Hz, CH_{3}).
J= 7,1 Hz, CH_{3}).
El éster propílico de indometacina (compuesto
4) fue obtenido mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos; 10:90), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (321 mg, 83%). Punto de fusión: 74-76ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,44-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,03-4,08 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,70 (m, 2H, CH_{2}; 0,88-0,93 (t, 3H, J= 7,5 Hz, CH_{3}).
hexanos; 10:90), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (321 mg, 83%). Punto de fusión: 74-76ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,44-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,03-4,08 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,70 (m, 2H, CH_{2}; 0,88-0,93 (t, 3H, J= 7,5 Hz, CH_{3}).
El éster isopropílico de indometacina
(compuesto 5) fue obtenido en forma de producto sólido
cristalino de color blanco (325 mg, 84%) mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos; 10:90) seguido de
recristalización con Et_{2}O. Punto de fusión =
73-75ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,5 z, ArH);
7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH);
6,86-6,89 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,5 Hz, ArH);
4,99-5,03 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,62
(s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}); 1,22-1,24
(d, 6H,
2CH_{3}).
2CH_{3}).
El éster butílico de indometacina (compuesto
6) fue obtenido mediante cromatografía sobre gel de sílice en
forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras
congelación (354 mg, 88%). Punto de fusión =
77-78ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,63-7,68 (d, 2H, J= 8,7 Hz, ArH);
7,44-7,49 (d, 2H, J= 8,8 Hz, ArH);
6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz; ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH);
4,07-4,12 (t, 2H, J= 6,6 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H,
CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3});
1,56-1,65 (m, 2H, CH_{2});
1,30-1,40 (m, 2H, CH_{2});
0,87-0,92 (t, 3H, J= 7,3 Hz, CH_{3}).
\newpage
Procedimiento
B
Una mezcla de reacción conteniendo indometacina
(300 mg, 0,84 mmol) en 6 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro fue tratada
con diclorohexilcarbodiimida (192 mg, 0,92 mmol),
4-dimetil-aminopiridina (10 mg, 84
\mumol) y el alcohol adecuado (0,92 mmol). Tras agitación a
temperatura amiente durante un período de 5 horas, se filtró la
mezcla de reacción y se concentró el filtrado al vacío. El resto se
diluyó con agua (\sim 30 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL).
La solución orgánica combinada fue lavada con AcOH 5% (2 x 30 mL),
NaOH 1N (2 x 30 mL), agua (\sim 100 mL), se secó en presencia de
MgSO_{4}), filtró y se concentró el disolvente al vacío. El
producto crudo fue purificado mediante cromatografía sobre gel de
sílice.
El éster pentílico de indometacina (compuesto
7) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos; 20:80), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (326 mg, 91%). Punto de fusión = 80-81ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H; J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,20-1,30 (m, 4H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).
hexanos; 20:80), en forma de goma de color amarillo que finalmente solidificó tras congelación (326 mg, 91%). Punto de fusión = 80-81ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H; J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,20-1,30 (m, 4H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).
El éster hexílico de indometacina (compuesto
8) se preparó mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos; 10:90) en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (290 mg, 79%). Punto de fusión = 62-64ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 8dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,25-1,33 (m, 6H, CH_{2}); 0,83-0,87 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).
hexanos; 10:90) en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (290 mg, 79%). Punto de fusión = 62-64ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 8dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,25-1,33 (m, 6H, CH_{2}); 0,83-0,87 (t, 3H, J= 6,8 Hz, CH_{3}).
El éster ciclohexílico de indometacina
(compuesto 9) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:
hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color blanco de aspecto velloso (455 mg, 93%). Punto de fusión = 129-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,7 Hz, ArH); 7,45-7,47 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,97-6,98 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,76-4,78 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,63 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}); 1,79-1,83 (m, 2H, CH_{2}); 1,65-1,68 (m, 2H, CH_{2}); 1,28-1,53 (m, 6H, CH_{2}).
hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color blanco de aspecto velloso (455 mg, 93%). Punto de fusión = 129-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,63-7,67 (d, 2H, J= 8,7 Hz, ArH); 7,45-7,47 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,97-6,98 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,76-4,78 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,63 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}); 1,79-1,83 (m, 2H, CH_{2}); 1,65-1,68 (m, 2H, CH_{2}); 1,28-1,53 (m, 6H, CH_{2}).
El éster ciclohexiletílico de indometacina
(compuesto 10) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de producto sólido de color
amarillo (390 mg, 96%). Punto de fusión = 94-95ºC;
^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67
(d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5
Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH);
4,10-4,15 (t, 2H, J= 6,8 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H,
CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3});
1,62-1,65 (m, 5H, CH_{2} y CH);
1,46-1,52 (q, 2H, CH_{2});
1,09-1,27 (m, 4H, CH_{2});
0,84-0,91 (m, 2H, CH_{2}).
El éster heptílico de indometacina (compuesto
11) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos, 5:95), en forma de producto sólido de color amarillo (342 mg, 89%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,27 (m, 8H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).
hexanos, 5:95), en forma de producto sólido de color amarillo (342 mg, 89%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,11 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,56-1,63 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,27 (m, 8H, CH_{2}); 0,83-0,88 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).
El éster butoxietílico de indometacina
(compuesto 12) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de aceite de color amarillo
el cual solidificó tras congelación (368 mg, 96%). Punto de fusión
= 58-59ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,65-7,68 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,9 Hz, ArH);
7,45-7,48 (dd, 2H,
J= 6,8 Hz y 2,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,24-4,27 (t, 2H, J= 4,8 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 3,60-3,64 (t, 2H, J= 4,7 Hz, CH_{2}); 3,40-3,45 (t, 2H, J= 6,6 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,50-1,56 (m, 2H, CH_{2}); 1,26 (m, 2H, CH_{2}); 0,88-0,92 (t, 3H, J= 7,3 Hz, CH_{3}).
J= 6,8 Hz y 2,0 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,24-4,27 (t, 2H, J= 4,8 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 3,60-3,64 (t, 2H, J= 4,7 Hz, CH_{2}); 3,40-3,45 (t, 2H, J= 6,6 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,50-1,56 (m, 2H, CH_{2}); 1,26 (m, 2H, CH_{2}); 0,88-0,92 (t, 3H, J= 7,3 Hz, CH_{3}).
El éster
trans-hept-2-enílico
de indometacina (compuesto 13) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de aceite de
color amarillo que solidificó tras congelación (380 mg, 97%). Punto
de fusión = 76-78ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5
Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH);
5,69-5,77 (m, 1H, H olefínico);
5,49-5,59 (m, 1H, H olefínico);
4,53-4,45 (d, 2H, J= 6,5 Hz, CH_{2}); 3,83 (s, 3H,
CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3});
2,00-2,06 (m, 2H, CH_{2});
1,23-1,36 (m, 4H, CH_{2});
0,85-0,90 (t, 3H, J= 7,0 Hz, CH_{3}).
El éster
hept-2-inílico de indometacina
(compuesto 14) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos, 5:95), en forma de aceite de color amarillo
que solidificó tras congelación (317 mg, 81%). Punto de fusión =
77-79ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH);
4,68-4,70 (t, 2H, J= 2,0 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H,
CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3});
2,18-2,23 (m, 2H, CH_{2});
1,31-1,52 (m, 4H, CH_{2});
0,87-0,91 (t, 3H, J= 6,9 Hz, CH_{3}).
El éster
2-(hept-4-inílico) de indometacina
(compuesto 15) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos, 5:95), en forma de aceite de color amarillo
(329 mg, 84%). Punto de fusión = 69-71ºC; ^{1}H
NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J=
8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH);
4,94-5,02 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,64
(s, 2H, CH_{2}); 2,33-2,47 (m unido con un s, 5H,
CH_{2} y CH_{3}); 2,04-2,13 (m, 2H, CH_{2});
1,29-1,31 (d, 3H, J= 6,3 Hz, CH_{3});
1,04-1,09 (t, 3H, J= 7,4 Hz, CH_{3}).
El éster octílico de indometacina (compuesto
16) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos, 5:95), en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (355 mg, 90%). Punto de fusión = 56-57ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,10 (t, 2H, J= 6,6 z, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,62 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,24 (m, 10H, CH_{2}); 0,84-0,88 (t, 3H, J= 7,1 Hz, CH_{3}).
hexanos, 5:95), en forma de goma de color amarillo que solidificó tras congelación (355 mg, 90%). Punto de fusión = 56-57ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,96-6,97 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,64-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,06-4,10 (t, 2H, J= 6,6 z, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,58-1,62 (m, 2H, CH_{2}); 1,23-1,24 (m, 10H, CH_{2}); 0,84-0,88 (t, 3H, J= 7,1 Hz, CH_{3}).
El éster fenílico de indometacina (compuesto
17) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (155 mg, 43%). Punto de fusión = 138-140ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,33-7,38 (m, 2H, ArH); 6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,90 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (155 mg, 43%). Punto de fusión = 138-140ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,33-7,38 (m, 2H, ArH); 6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,90 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).
El éster 3,5-dimetilfenílico
de indometacina (compuesto 18) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de
color amarillo que solidificó tras congelación (219 mg, 54%). Punto
de fusión = 143-145ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,67-7,69 (d, 2H, J= 8,3
Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,05-7,06 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,89-6,92 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,85 (s, 1H,
ArH); 6,67-6,71 (m, 3H, ArH); 3,88 (s, 2H,
CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}), 2,29 (s,
6H, 2CH_{3}).
El éster
4-metilmercaptofenílico de indometacina (compuesto
19) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que
solidificó tras congelación (307 mg, 76%). Punto de fusión =
132-133ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,66-7,69 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
7,22-7,23 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
7,04-7,05 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,97-7,00 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH);
6,87-6,90 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,89
(s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,46 (s, 3H, CH_{3});
2,45 (s, 3H, CH_{3}).
El éster
2-metilmercaptofenílico de indometacina (compuesto
20) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:hexanos, 15:85), en forma de producto sólido de color
blancuzco (335 mg, 85%). Punto de fusión =
147-148ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,67-7,70 (dd, 2H, J= 6,5 Hz y 1,8 Hz, ArH);
7,46-7,49 (dd, 2H, J= 6,8 Hz y 1,9 Hz, ArH);
7,17-7,26 (m, 3H, ArH); 7,02-7,05
(dd, 1H, J= 7,7 Hz y 1,2 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d,
1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y
2,5 Hz, ArH); 3,98 (s, 2H, CH_{2}); 3,86 (s, 3H, CH_{3}); 2,47
(s, 3H, CH_{3}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).
El éster 4-metoxifenílico de
indometacina (compuesto 21) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de
color amarillo que solidificó tras congelación (355 mg, 88%). Punto
de fusión = 136-138ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,65-7,69 (d, 2H, J= 8,5
Hz, ArH); 7,46-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
7,04-7,05 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,84-6,98 (m, 5H, ArH); 6,67-6,71
(dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,88 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s,
3H, CH_{3}); 3,78 (s, 3H, CH_{3}); 2,44 (s, 3H, CH_{3}).
El éster 4-acetamidofenílico
de indometacina (compuesto 22) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80, después 30:70), en forma
de sólido de color amarillo (345 mg, 83%). Punto de fusión =
191-193ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,66-7,69 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,8 Hz, ArH);
7,46-7,49 (m, 4H, ArH); 7,16 (bs, 1H, NH);
6,99-7,04 (m, 3H, ArH); 6,87-6,89
(d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 8,9
Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,88 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3});
2,44 (s, 3H, CH_{3}), 2,04 (s, 3H, CH_{3}).
El éster 4-fluorofenílico de
indometacina (compuesto 23) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 10:90), en forma de producto
sólido de color blancuzco (359 mg, 95%). Punto de fusión =
143-144ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,66-7,69 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,8 Hz, ArH);
7,46-7,49 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,9 Hz, ArH);
7,01-7,04 (m, 5H, ArH); 6,86-6,89
(d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,71 (dd, 1H, J= 9,0
Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,89 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3});
2,45 (s, 3H, CH_{3}).
El éster 3-piridílico de
indometacina (compuesto 24) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (191 mg, 67%). Punto de fusión =
134-136ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,46-8,47 (d, 1H, J= 4,6 Hz piridil-H); 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,5 Hz, piridil-H); 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,43-7,48 (d y m 3H, 2ArH, J= 8,5 Hz y 1-piridil-H); 7,28-7,32 (m, 1H, piridil-H); 7,02-7,03 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,70 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,93 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,46 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos, 20:80), en forma de aceite de color amarillo que solidificó tras congelación (191 mg, 67%). Punto de fusión =
134-136ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,46-8,47 (d, 1H, J= 4,6 Hz piridil-H); 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,5 Hz, piridil-H); 7,66-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,43-7,48 (d y m 3H, 2ArH, J= 8,5 Hz y 1-piridil-H); 7,28-7,32 (m, 1H, piridil-H); 7,02-7,03 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,67-6,70 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,93 (s, 2H, CH_{2}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 2,46 (s, 3H, CH_{3}).
El éster \beta-naftílico de
indometacina (compuesto 25) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color amarillo (166 mg, 41%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 2H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,76-7,79 (m, 1H, ArH); 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,54-7,55 (d, 1H, J= 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,50 (m, 4H, ArH); 7,17-7,21 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,1 Hz,ArH); 7,10-7,11 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 3,97 (s, 2H, CH_{2}); 3,85 (s, 3H, CH_{3}); 2,49 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos, 20:80), en forma de producto sólido cristalino de color amarillo (166 mg, 41%). Punto de fusión = 70-72ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 2H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,76-7,79 (m, 1H, ArH); 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,54-7,55 (d, 1H, J= 1,8 Hz, ArH); 7,46-7,50 (m, 4H, ArH); 7,17-7,21 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,1 Hz,ArH); 7,10-7,11 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 6,90-6,93 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 3,97 (s, 2H, CH_{2}); 3,85 (s, 3H, CH_{3}); 2,49 (s, 3H, CH_{3}).
El éster
N-4-etilmorfolínico de indometacina
(compuesto 26) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos, 40:60), en forma de aceite de color amarillo
que solidificó tras congelación (348 mg, 86%). Punto de fusión =
83-84ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,63-7,66 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,44-7,47 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,94-6,95 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH);
4,20-4,24 (t, 2H, J= 5,8 Hz, CH_{2}); 3,82 (s, 3H,
CH_{3}); 3,66 (s, 2H, CH_{2}); 3,58-3,61 (t,
4H, J= 4,8Hz, 2CH_{2}); 2,55-2,59 (t, 2H, J= 5,7
Hz, CH_{2}); 2,38-2,40 (s, unido con un t, 7H,
CH_{3} y 2 CH_{2}).
El éster 3-fenilpropílico de
indometacina (compuesto 27) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 20:80), en forma de aceite de
color amarillo que solidificó tras congelación (393 mg, 95%). Punto
de fusión = 81-83ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,61-7,64 (dd, 2H, J=
8,4 Hz y 1,6 Hz, ArH); 7,41-7,44 (dd, 2H, J= 8,5 Hz
y 1,9 Hz, ArH); 7,16-7,24 (m, 2H, ArH);
7,03-7,06 (d, 2H, = 8,0 Hz, ArH);
6,97-6,98 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,64-6,68 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH);
4,08-4,12 (t, 2H, J= 6,4 Hz, CH_{2}); 3,81 (s, 3H,
CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,55-2,60 (t, 2H,
J= 8,1 Hz, CH_{2}); 2,39 (s, 3H, CH_{3});
1,87-1,96 (m, 2H, CH_{2}).
El éster \alpha-naftílico
de indometacina (compuesto 28) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:
hexanos, 30:70), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (378 mg, 93%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,61-7,71 (m, 3H, ArH); 7,41-7,49 (m, 6H, ArH); 7,37-7,39 (m, 1H, ArH); 7,22-7,24 (d, 1H, J= 7,2 Hz, ArH); 6,91-6,94 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 4,07 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 2,51 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos, 30:70), en forma de producto sólido cristalino de color blanco (378 mg, 93%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,82-7,85 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 7,61-7,71 (m, 3H, ArH); 7,41-7,49 (m, 6H, ArH); 7,37-7,39 (m, 1H, ArH); 7,22-7,24 (d, 1H, J= 7,2 Hz, ArH); 6,91-6,94 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,2 Hz, ArH); 4,07 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 2,51 (s, 3H, CH_{3}).
El éster
(2-terc-BOC-aminoetílico)
de indometacina (compuesto 29) se obtuvo mediante cromatografía
sobre gel de sílice (EtOAc:hexanos, 30:70 y después 40:60), en forma
de aceite de color amarillo pálido que finalmente solidificó tras
congelación (221 mg, 53%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,65-7,68 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,5 H, ArH);
6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,65-6,69 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 4,65
(bs, 1H, NH); 4,14-4,18 (t, 2H, J= 5,4 Hz,
CH_{2}); 3,68 (s, 2H, CH_{2}); 3,36-3,38 (s, 2H,
CH_{2}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}); 1,42 (s, 9H, CH_{3}).
Las estructuras y los valores IC_{50} para la
indometacina y para los compuestos 2 a 29 se muestran en la Tabla 1
que sigue a continuación
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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| ^{a} \begin{minipage}[t]{145mm}Los valores IC_{50} fueron determinados incubando diversas concentraciones de inhibidor en DMSO con COX-2 humana (66 nM) o COX-1 ovina (44 nM) durante un período de 20 minutos a temperatura ambiente, seguido de inicio de la reacción de ciclooxigenasa con la adición de ^{14}C\text{-}AA (50 \mu M) a 37^{o}C, durante un período de 30 segundos. El aislamiento y la cuantificación de productos prostanoides fue llevada a cabo tal como se ha descrito anteriormente. Los ensayos se llevaron a cabo por duplicado. ^{b} Relación de IC_{50} (COX-1):IC_{50} (COX-2). Si c > 90% subsiste actividad a estas concentraciones de inhibidor.\end{minipage} |
La conversión del grupo ácido carboxílico libre
en la indometacina en el éster metílico proporcionó el compuesto 2,
el cual mostró inhibición COX-2 selectiva. El
compuesto 2 era 132 veces selectivo como inhibidor
COX-2 (compuesto 2: IC_{50}
(COX-2) \sim 0,25 \muM; IC_{50}
(COX-1) \sim 33 \muM]. Por lo tanto, la
esterificación del ácido carboxílico en la indometacina
incrementaba la potencia inhibidora frente a COX-2,
pero presentaba un efecto negativo sobre la potencia para la
inhibición de COX-1. Estudios relativos a la
extensión de la cadena del grupo metilo en el compuesto 2 hasta
obtener homólogos alquílicos más elevados revelaron incrementos
significativos en la potencia y en la selectividad frente a
COX-2. Por ejemplo, el éster heptílico (compuesto
11) mostraba una potencia incrementada (IC_{50}
(COX-2) \sim 40 nM) y una selectividad
incrementada (> 1650) para la COX-2 en
comparación con el éster metílico (compuesto 2). La incorporación de
un átomo de oxígeno en la posición 3 (compuesto 12) o un enlace
doble trans en la posición 2,3 (compuesto 13) conducía también a
una potencia y selectividad incrementada para COX-2.
No obstante, el éster ciclohexiletílico (compuesto 10) y el análogo
hept-2-inílico (compuesto 14)
resultaban menos eficaces como inhibidores COX-2
[compuesto 10: IC_{50} (COX-2) \sim 0,25
\muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM].
La transformación del resto ácido carboxílico en
la indometacina en un éster fenílico (compuesto 17) condujo también
a un inhibidor COX-2 selectivo [IC_{50}
(COX-2) \sim 0,40 \muM; IC_{50}
(COX-1) > 66 \muM] (Tabla 1). La introducción
de espaciadores metileno entre el anillo fenílico y el oxígeno del
éster generaba el éster 3-fenilpropílico (compuesto
27), el cual resultaba ser un inhibidor COX-2 mucho
más potente y selectivo que el compuesto 17 [IC_{50}
(COX-2) \sim 0,040 \muM; IC_{50}
(COX-1) > 66 \muM, mientras que los más
voluminosos éster 3,5-dimetilfenílico (compuesto
18) y éster \beta-naftílico (compuesto
25)resultaban menos activos frente a la
COX-2 [IC_{50} (COX-2) > 8
\muM; IC_{50} (COX-1) > 66 \muM]. De forma
interesante, la inhibición selectiva de COX-2 por
parte de los compuestos que tienen un sustituyente éster aromático
resultaba extremadamente sensible al tipo y posición de los
diversos sustituyentes sobre el anillo de fenilo. Por ejemplo, la
presencia de un grupo metilmercapto en la posición 4 del grupo
fenilo proporcionó el compuesto 19, el cual resultaba tan solo 8,5
veces selectivo como inhibidor COX-2, mientras que
el correspondiente isómero 2-metilmercaptofenilo
(compuesto 20) era > 1064 veces selectivo como inhibidor
COX-2. Además, la sustitución del grupo
4-metilmercapto por un grupo
4-metoxi proporcionó el compuesto 21, el cual
mostraba una extremadamente elevada afinidad para la
COX-2 y era > 1650 veces como inhibidor
COX-2. Al igual que el éster
4-metilmercaptofenílico (compuesto 19), el éster
4-fluorofenílico (compuesto 23)y el éster
3-piridílico (compuesto 24) resultaban también menos
selectivos como inhibidores COX-2.
Se prepararon los siguientes derivados amida de
ácido carboxílico de indometacina, designados como compuestos 28 a
58. (Nota: los compuestos 28, 29 y 36 a 40 se describen también en
las patentes USA nºs 3.285.908 y 3.336.194, comentadas
anteriormente, concedidas a favor de Shen, cedente de Merck &
Co., Inc.
La
indometacin-N-metilamida (compuesto
28) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos, 10:90, después 50:50), en forma de producto sólido amarillo brillante (271 mg, 79%). Punto de fusión = 187-189ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (dd, 2H, J= 6,6 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,88-6,89 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 5,22 (bs, 1H, NH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,75-2,76 (d, 3H, J= 4,8 Hz, CH_{3}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos, 10:90, después 50:50), en forma de producto sólido amarillo brillante (271 mg, 79%). Punto de fusión = 187-189ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (dd, 2H, J= 6,6 Hz y 1,9 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,88-6,89 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 5,22 (bs, 1H, NH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,75-2,76 (d, 3H, J= 4,8 Hz, CH_{3}); 2,39 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-etan-2-olamida
(compuesto 29) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc), en forma de producto sólido de color amarillo
pálido (143 mg, 39%). Punto de fusión = 162-164ºC;
^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,66-7,68
(dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,7 Hz, ArH); 7,47-7,50 (dd,
2H, J= 6,9 Hz y 1,9 Hz, ArH); 6,85-6,89 (d y s, 2H,
J= 9,2 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5
Hz, ArH); 6,03 (bs, 1H, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,67 (bs, 4H,
2CH_{2}); 3,35-3,40 (q, 2H, J= 4,8 Hz, CH_{2});
2,44 bs, 1H, OH); 2,39 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-octilamida (compuesto
30) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (164 mg, 42%). Punto de fusión = 109-111ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,62-7,65 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 6,85-6,89 (m, 2H, ArH); 6,68-6,71 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 5,67 (s, 1H, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,39 (m, 2H, CH_{2}), 1,19 (m, 10H, 5CH_{2}); 0,83-0,88 (t, J= 6,2 Hz, CH_{3}).
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (164 mg, 42%). Punto de fusión = 109-111ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,62-7,65 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,46-7,49 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 6,85-6,89 (m, 2H, ArH); 6,68-6,71 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 5,67 (s, 1H, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,39 (m, 2H, CH_{2}), 1,19 (m, 10H, 5CH_{2}); 0,83-0,88 (t, J= 6,2 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-nonilamida (compuesto
31) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de sílice
(EtOAc:
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (191 mg, 47%). Punto de fusión = 128-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,47-7,50 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,89 (s, 1H, ArH); 6,85-6,88 (d, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,60-5,63 (bt, J= 5,3 Hz, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,36-1,41 (m, 2H, CH_{2}); 1,19-1,28 (m, 12H, 6CH_{2}); 0,84-0,89 (t, J= 6,5 Hz, CH_{3}).
hexanos 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo (191 mg, 47%). Punto de fusión = 128-130ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,47-7,50 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 6,89 (s, 1H, ArH); 6,85-6,88 (d, J= 8,9 Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,60-5,63 (bt, J= 5,3 Hz, NH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,64 (s, 2H, CH_{2}); 3,16-3,22 (m, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,36-1,41 (m, 2H, CH_{2}); 1,19-1,28 (m, 12H, 6CH_{2}); 0,84-0,89 (t, J= 6,5 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-(2-metilbencil)amida
(compuesto 32) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos 50:50), en forma de producto sólido de color
amarillo (218 mg, 56%). Punto de fusión =
177-179ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,60-7,61 (d, 2H, J= 8,1 Hz, ArH);
7,44-7,46 (d, 2H, J= 8,1 Hz, ArH);
7,06-7,15 (m, 4H, ArH); 6,83-6,89
(m, 2H, ArH); 6,67-6,70 (d, 1H, J= 8,1 Hz, ArH);
5,84 (s, 1H, NH); 4,40-4,41 (d, 2H, J= 5,3 Hz,
CH2); 3,79 (s, 3H, CH_{3}); 3,70 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H,
CH_{3}), 2,19 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-metilbencil)amida
(compuesto 33) se obtuvo mediante recristalización a partir de
metanol, en forma de producto sólido de color amarillo (142 mg,
37%). Punto de fusión = 191-192ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,63-7,60 (d, 2H, J= 8,5
Hz, ArH); 7,46-7,44 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,08-7,01 (m, 4H, ArH); 6,88 (s, 1H, ArH);
6,87-6,85 (d, 1H, J= 6,3 Hz, ArH);
6,71-6,67 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,89
(bt, 1H, NH); 4,38-4,36 (d, 2H, J= 5,9 Hz,
CH_{2}); 3,78 (s, 3H, CH_{3}); 3,69 (s, 2H, CH_{2}), 2,35 (s,
3H, CH_{3}); 2,30 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-((R)-dimetilbencil)amida
(compuesto 34) se obtuvo mediante recristalización a partir de
metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (124
mg, 31%). Punto de fusión = 201-202ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,62-7,64 (d, 2H, J= 8,4
Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH);
7,01-7,08 (m, 4H, ArH); 6,87-6,90
(d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,83-6,84 (d, 1H, J= 2,3
Hz, ArH); 6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz,
ArH); 5,76-5,78 (bd, 1H, J= 8,0 Hz, NH);
5,09-5,14 (m, 1H, CH); 3,76 (s, 3H, CH_{3});
3,63-3,64 (d, 2H, J=2,8 Hz, CH_{2}); 2,34 (s, 3H,
CH_{3}); 2,30 (s, 3H, CH_{3}); 1,35-1,38 (d, 3H,
J= 6,8 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-((S)-dimetilbencil)amida
(compuesto 35) se obtuvo mediante recristalización a partir de
metanol, en forma de producto sólido de color amarillo pálido (163
mg, 41%). Punto de fusión = 200-201ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,53-7,55 (d, 2H, J= 8,3
Hz, ArH); 7,37-7,40 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
6,94-7,01 (m, 4H, ArH); 6,76-6,82
(m, 2H, ArH); 6,61-6,64 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz,
ArH); 5,77-5,79 (bd, 1H, J= 7,8 Hz, NH);
5,02-5,07 (m, 1H, CH); 3,69 (s, 3H, CH_{3});
3,58-3,59 (d, 2H, J=2,9 Hz, CH_{2}); 2,27 (s, 3H,
CH_{3}); 2,23 (s, 3H, CH_{3}); 1,28-1,30 (d, 3H,
J= 6,9 Hz, CH_{3}).
Comparación La
indometacin-N-metilfenetilamida
(compuesto 36) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 50:50), en forma de producto sólido de color
amarillo (288 mg, 72%). Punto de fusión = 61-63ºC;
^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67
(d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5
Hz, ArH); 7,02 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84
(d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0
Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2});
3,57-3,60 (t, 2H, J=5,4 Hz, CH_{2});
3,43-3,46 (t, 2H, J= 5,3 Hz, CH_{2}); 2,38 (s,
3H, CH_{3}); 1,59-1,61 (m, 2H, CH_{2});
1,42-1,43 (m, 2H, CH_{2}).
Comparación La
indometacin-N-piperidinilamida
(compuesto 37) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color
amarillo pálido (146 mg, 41%). Punto de fusión =
161-163ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,02 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 3,57-3,60 (t, 2H, J=5,4 Hz, CH_{2}); 3,43-3,46 (t, 2H, J= 5,3 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,59-1,61 (m, 2H, CH_{2}); 1,42-1,43 (m, 2H, CH_{2}).
161-163ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,64-7,67 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,02 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,81-6,84 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,63-6,66 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 3,57-3,60 (t, 2H, J=5,4 Hz, CH_{2}); 3,43-3,46 (t, 2H, J= 5,3 Hz, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}); 1,59-1,61 (m, 2H, CH_{2}); 1,42-1,43 (m, 2H, CH_{2}).
La
indometacin-N-(2-fenetil)amida
(compuesto 38) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo claro (169 mg, 44%). Punto de fusión = 148-150ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,58-7,60 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,46-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,12-7,14 (m, 3H, ArH); 6,85-6,95 (m, 4H, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,61 (s, 1H, NH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,59 (s, 2H, CH_{2}); 3,43-3,49 (m, 2H, CH_{2}); 2,68-2,72 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 2,04 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color amarillo claro (169 mg, 44%). Punto de fusión = 148-150ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 7,58-7,60 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,46-7,48 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,12-7,14 (m, 3H, ArH); 6,85-6,95 (m, 4H, ArH); 6,69-6,73 (dd, 1H, J= 8,9 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,61 (s, 1H, NH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,59 (s, 2H, CH_{2}); 3,43-3,49 (m, 2H, CH_{2}); 2,68-2,72 (t, 2H, J= 6,7 Hz, CH_{2}); 2,04 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-fluorofenil)amida
(compuesto 39) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 5:95 a 20:80), en forma de producto sólido de
color naranja (217 mg, 57%). Punto de fusión =
200-202ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,65-7,67 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH);
7,47-7,50 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH);
7,32-7,35 (m, 3H, ArH); 6,94-6,99
(m, 3H, ArH, NH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,70-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,0 Hz, ArH); 3,81
(s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s, 2H, CH_{2}); 2,45 (s, 3H,
CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-clorofenil)amida
(compuesto 40) se obtuvo mediante recristalización con metanol,
en forma de producto sólido de color amarillo pálido (234 mg, 56%).
Punto de fusión = 209-210ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,58-7,61 (d, 2H, J= 8,2
Hz, ArH); 7,40-7,42 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH);
7,13-7,27 (m, 5H, ArH); 6,84 (s, 1H, NH);
6,77-6,80 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,62-6,65 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 3,72 (s, 2H,
CH_{2}); 3,72 (s, 2H, CH_{3}); 2,37 (s, 3H,
CH_{3}).
CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-acetamidofenil)amida
(compuesto 41) se obtuvo mediante recristalización con metanol,
en forma de producto sólido de color amarillo pálido (221 mg, 54%).
Punto de fusión = 256-257ºC; ^{1}H NMR
(DMSO-d_{6}) \delta 10,14 (s, 1H, NH); 9,86 (s,
1H, NH); 7,62-7,70 (m, 4H, ArH); 7,48 (s, 4H, ArH);
7,18 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); 7,18 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH);
6,90-6,93 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,68-6,72 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,73
(s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 2H, CH_{2}); 2,27 (s, 3H, CH_{3}),
1,99 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida
(compuesto 42) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 50:50), en forma de producto sólido de color
amarillo claro (162 mg, 40%). Punto de fusión =
195-196ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,67-7,70 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,48-7,50 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH);
7,30-7,33 (d, 2H, J= 8,6 Hz, ArH);
7,17-7,22 (m, 3H, 2ArH y NH);
6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH);
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz ArH);
6,69-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 3,80
(s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s, 2H, CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3});
2,44 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida
(compuesto 43) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 15:85), en forma de producto sólido de color
amarillo (218 mg, 54%). Punto de fusión =
129-131ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,62-7,64 (d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH);
7,45-7,48 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,39 (s, 1H,
NH); 7,09-7,18 (m, 2H, ArH);
6,94-6,96 (m, 3H, ArH); 6,86-6,89
(d, 1H, J= 9,0 Hz); 6,69-6,72 (d, 1H, J= 8,9 Hz,
ArH); 3,80 (s, 3H, CH_{3}); 3,78 (s, 2H, CH_{2}); 2,42 (s, 3H,
CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-metoxifenil)amida
(compuesto 44) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 10:90 a 25:75), en forma de producto sólido
de color naranja (239 mg, 61%). Punto de fusión =
201-202ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,67-7,70 (dd, 2H, J= 6,8 Hz y 1,8 Hz, ArH);
7,48-7,51 (d, 2H, J= 7,1 Hz, ArH);
7,28-7,29 (d, 1H, J= 2,0 Hz, ArH); 7,20 (s, 1H, NH);
6,94-6,95 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH);
6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,78-6,84 (m, 2H, ArH), 6,69-6,73
(dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,79 (s,
2H, CH_{2}); 3,76 (s, 3H, CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(3-etoxifenil)amida
(compuesto 45) se obtuvo a partir de recristalización con
metanol, en forma de producto sólido de color amarillo claro (297
mg, 74%). Punto de fusión = 152-154ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3})\delta 7,68-7,70 (d, 2H, J= 8,4
Hz, ArH); 7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,24
(s, 1H, NH); 7,13-7,18 (m, 2H, ArH);
6,94-6,82 (m, 3H, ArH); 6,70-6,73
(dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz); 6,61-6,65 (dd, 1H, J=
8,2 Hz y 1,7 Hz, ArH); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 3,80 (s, 2H,
CH_{2}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}), 1,36-1,40 (t, 3H,
J= 7,0 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida
(compuesto 46) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 10:90 a 30:70), en forma de producto sólido
de color naranja claro (191 mg, 44%). Punto de fusión =
239-241ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta
7,67-7,69 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,20 (s, 1H, NH);
6,94 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,70-6,74 (m, 3H,
ArH); 3,78-3,81 (m, 14H, 3CH_{3} & CH_{2});
2,45 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(3-piridil)amida
(compuesto 47) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:
hexanos; 50:50 a 75:25), en forma de producto sólido de color amarillo (190 mg, 52%). Punto de fusión = 204-205ºC; ^{1}H NMR (COCl_{3})\delta 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,1 Hz, ArH); 8,32-8,34 (d, 1H, J= 4,4 Hz, ArH); 8,04-8,08 (m, 1H, ArH); 7,66-7,70 (m, 2H, ArH); 7,48-7,52 (m, 2H, ArH); 7,38 (s, 1H, NH); 7,22-7,25 (m, 1H, ArH); 6,93-6,94 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos; 50:50 a 75:25), en forma de producto sólido de color amarillo (190 mg, 52%). Punto de fusión = 204-205ºC; ^{1}H NMR (COCl_{3})\delta 8,39-8,40 (d, 1H, J= 2,1 Hz, ArH); 8,32-8,34 (d, 1H, J= 4,4 Hz, ArH); 8,04-8,08 (m, 1H, ArH); 7,66-7,70 (m, 2H, ArH); 7,48-7,52 (m, 2H, ArH); 7,38 (s, 1H, NH); 7,22-7,25 (m, 1H, ArH); 6,93-6,94 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,1 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida
(compuesto 48) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 5:95 a 50:50), en forma de producto sólido de
color amarillo pálido (221 mg, 56%). Punto de fusión =
196-198ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,19-8,20 (d, 1H, J= 2,8 Hz, ArH); 8,03-8,06 (dd, 1H, J= 8,7 Hz y 2,9 Hz, ArH); 7,59-7,63 (m, 2H, ArH); 7,46-7,51 (m, 3H, ArH); 7,24 (s, 1H, NH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}), 2,46 (s, 3H, CH_{3}).
196-198ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3})\delta 8,19-8,20 (d, 1H, J= 2,8 Hz, ArH); 8,03-8,06 (dd, 1H, J= 8,7 Hz y 2,9 Hz, ArH); 7,59-7,63 (m, 2H, ArH); 7,46-7,51 (m, 3H, ArH); 7,24 (s, 1H, NH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,70-6,74 (dd, 1H, J= 9,1 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,84 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}), 2,46 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida
(compuesto 49) se obtuvo mediante recristalización con metanol,
en forma de producto sólido de color amarillo pálido (153 mg, 40%).
Punto de fusión = 193-194ºC; ^{1}H NMR
(CDCl_{3}) \delta 7,99 (bs, 1H, NH); 7,66-7,68
(d, 2H, J= 8,2 Hz, ArH); 7,47-7,50 (m, 3H, ArH);
7,00 (s, 1H, ArH); 6,83-6,86 (d, 1H, J= 9,0 Hz,
ArH); 6,69-6,72 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,35 (s,
1H, ArH); 4,01-4,04 (bd, 2H, J= 6,8 Hz, CH_{2});
3,90 (s, 2H, CH_{2}); 3,82 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H,
CH_{3}), 1,24-1,29 (t, 3H, J= 7,1 Hz,
CH_{3}).
La
indometacin-N-(3-cloropropil)amida
(compuesto 50) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color
blancuzco (153 mg, 40%). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6})
\delta 8,11 (bs, 1H, NH); 7,62-7,69 (m, 4H, ArH):
7,09 (s, 1H, ArH); 6,92-6,95 (d, 1H, J= 8,9 Hz,
ArH); 6,68-6,71 (d, 1H, J= 8,8 Hz, ArH); 3,80 (s,
3H, CH_{3}); 3,58-3,67 (t, 2H, 6,3 Hz, CH_{2});
3,52 (s, 2H, CH_{2}); 3,15-3,17 (m, 2H, CH_{2});
2,20 (s, 3H, CH_{3}), 1,81-1,85 (t, 2H, J= 6,5 Hz,
CH_{2}).
La
indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida
(compuesto 51) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 30:70), en forma de producto sólido de color
amarillo (265 mg, 76%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,66-7,68 (dd, 2H, J= 6,7 Hz y 1,7 z, ArH);
7,47-7,50 (dd, 2H, J= 6,9 Hz y 1,9 Hz, ArH);
6,92-6,95 (m, 2H, ArH): 6,70-6,73
(m, 1H, ArH); 6,03 (bs, 1H, NH); 3,98-4,00 (d, 2H,
J= 5,5 Hz, CH_{2}); 3,84 (s, 3H, CH_{3}); 3,71 (s, 3H,
CH_{3}), 3,69 (2, 2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida
(compuesto 52) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 30:70 y después 50:50), en forma de producto
sólido de color amarillo (300 mg, 84%). ^{1}H NMR (CDCl_{3})
\delta 7,67-7,70 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,85 Hz,
ArH); 7,47-7,50 (dd, 2H, J= 8,4 Hz y 1,9 Hz, ArH);
6,91-6,96 (m, 2H, ArH): 6,69-6,73
(m, 1H, ArH); 6,16-6,18 (d, 1H, J= 7,4 Hz, NH);
4,57-4,62 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,70
(s, 3H, CH_{3}); 3,65 (s, 2H, CH_{2}); 2,37 (s, 3H, CH_{3}),
1,32-1,34 (d, 3H, J= 7,2 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida
(compuesto 53) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color
amarillo (803 mg, 67%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,67-7,70 (dd, 2H, J= 8,5 Hz y 1,85 z, ArH);
7,47-7,50 (dd, 2H, J= 8,4 Hz y 1,9 Hz, ArH);
6,91-6,96 (m, 2H, ArH); 6,69-6,73
(dd, 1H, ArH); 6,16-6,18 (d, 1H, J= 7,4 Hz, NH);
4,57-4,62 (m, 1H, CH); 3,83 (s, 3H, CH_{3}); 3,70
(s, 3H, CH_{3}), 3,65 (2, 2H, CH_{2}); 2,36 (s, 3H, CH_{3}),
1,32-1,34 (d, 3H, J= 7,2 Hz, CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida
(compuesto 54) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 40:60), en forma de producto sólido de color
amarillo (198 mg, 47%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,91-7,94 (d, 2H, J= 6,8 Hz, ArH);
7,61-7,65 (d, 2H, J=8,7 Hz, ArH);
7,45-7,48 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH);
7,19-7,21 (d, 2H, J= 8,3 Hz, ArH);
6,83-6,88 (m, 2H, ArH): 6,68-6,72
(dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 5,97-5,99 (bt,
1H, J= 5,9 Hz, NH); 4,45-4,47 (d, 2H, J= 6,1 Hz,
CH_{2}); 3,90 (s, 3H, CH_{3}); 3,83 (s, 3H, CH_{3}), 3,72 (2,
2H, CH_{2}); 2,38 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida
(compuesto 55) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 20:80), en forma de producto sólido de color
amarillo (100 mg, 23%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,67-7,70 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
7,48-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH);
7,33-7,36 (d, 2H, J= 8,4 Hz,
ArH);7,18-7,23 (d y bs, 3H, ArH y NH);
6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,3 Hz, ArH); ArH):
6,85-6,88 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,70-6,73 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,0 Hz, ArH); 3,81
(s, 5H, CH_{2} y CH_{3}); 3,67 (s, 3H, CH_{3}); 3,56 (s, 3H,
CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-(2-pirazinil)amida
(compuesto 56) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70 a 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo claro (251 mg, 69%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 9,58 (d, 1H, J= 1,4 Hz, ArH); 8,33-8,34 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 8,16-8,17 (m, 1H, ArH); 7,86 (bs, 1H, NH); 7,69-7,71 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,49-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,70-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,86 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos; 30:70 a 50:50), en forma de producto sólido de color amarillo claro (251 mg, 69%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 9,58 (d, 1H, J= 1,4 Hz, ArH); 8,33-8,34 (d, 1H, J= 2,5 Hz, ArH); 8,16-8,17 (m, 1H, ArH); 7,86 (bs, 1H, NH); 7,69-7,71 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 7,49-7,51 (d, 2H, J= 8,5 Hz, ArH); 6,92-6,93 (d, 1H, J= 2,4 Hz, ArH); 6,84-6,87 (d, 1H, J= 8,9 Hz, ArH); 6,70-6,72 (dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,5 Hz, ArH); 3,86 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
La
indometacin-N-2-(4-metiltiazolil)amida
(compuesto 57) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:hexanos; 30:70 y después 70:30), para proporcionar el
producto puro en forma de sólido de color amarillo pálido, el cual
fue recristalizado a partir de éter etílico (241 mg, 63%). ^{1}H
NMR (CDCl_{3}) \delta 8,68 (bs, 1H, NH);
7,70-7,74 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH);
7,48-7,52 (d, 2H, J= 9,0 Hz, ArH);
6,79-6,85 (m, 2H, ArH); 6,67-6,71
(dd, 1H, J= 9,0 Hz y 2,4 Hz, ArH); 6,52 (s, 1H,
Tiazol-H); 3,88 (2, 2H, CH_{2}); 3,79 (s, 3H,
CH_{3}); 2,45 (s, 3H, CH_{3}); 2,27 (s, 3H,
CH_{3}).
CH_{3}).
La
indometacin-N-(4-bifenil)amida
(compuesto 58) se obtuvo mediante cromatografía sobre gel de
sílice (EtOAc:
hexanos; 30:70), para proporcionar el producto puro en forma de sólido de color amarillo pálido, el cual fue recristalizado a partir de éter etílico (421 mg, 59%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,32-7,55 (m, 11H, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,0 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,73-6,74 (dd, 1H, J= 1,7 Hz, ArH); 3,83 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
hexanos; 30:70), para proporcionar el producto puro en forma de sólido de color amarillo pálido, el cual fue recristalizado a partir de éter etílico (421 mg, 59%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,68-7,71 (d, 2H, J= 8,4 Hz, ArH); 7,32-7,55 (m, 11H, ArH); 6,95-6,96 (d, 1H, J= 2,0 Hz, ArH); 6,86-6,89 (d, 1H, J= 9,0 Hz, ArH); 6,73-6,74 (dd, 1H, J= 1,7 Hz, ArH); 3,83 (2, 2H, CH_{2}); 3,81 (s, 3H, CH_{3}); 2,47 (s, 3H, CH_{3}).
Las estructuras y valores de IC_{50} para la
indometacina y los compuestos 28 a 58 se indican en la siguiente
Tabla 2
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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| ^{a} \begin{minipage}[t]{150mm} Los valores IC_{50} fueron determinados incubando varios de los inhibidores en DMSO con COX-2 humana (66 nM) o COX-1 ovina (44 nM), durante un período de 20 minutos, seguido de tratamiento con 1-^{14}C\text{-}AA (50 \mu M) a 37^{o}C, durante un período de 30 segundos. Los ensayos se efectuaron por duplicado. ^{b} Relación de IC_{50} (COX-1):IC_{50}(COX-5). ^{c} >80% de la actividad COX-1 se conservaba a esta concentración. \end{minipage} |
El derivado N-metilamida
(compuesto 28) mostró inhibición selectiva COX-2
(IC_{50} (COX-2) \sim 0,70 \muM; IC_{50}
(COX-1) > 66 \muM). Con el homólogo octilo más
elevado (compuesto 3) se observaron incrementos en la selectividad y
potencia inhibidora de COX-2; no obstante,
incrementos adicionales en la longitud de la cadena hasta el
derivado nonilo (compuesto 4) condujo a alguna pérdida de
selectividad COX-2 (compuesto 3: IC_{50}
(COX-2) \sim 37,5 nM; IC_{50}
(COX-1) 66 \muM, compuesto 4: IC_{50}
(COX-2) \sim 40 nM; IC_{50}
(COX-1) \sim 16,5 \muM).
La incorporación de unidades espaciadoras de
metileno (compuesto 38) entre el nitrógeno de la amida y el anillo
de fenilo generaba también potentes y selectivos inhibidores
COX-2. Tal y como se ha observado con los ésteres
aromáticos discutidos anteriormente, la selectividad dependía del
tipo y de la posición de los sustituyentes sobre el anillo de
fenilo.
Por ejemplo, el derivado
4-metilbencilamida (compuesto 33) era 133 veces
selectivo para COX-2, mientras que el
correspondiente isómero 2-metilbencilo (compuesto 5)
era > 440 veces más selectivo como inhibidor
COX-2. Además, el enantiómero
R-metil-(4-metilbencilo) (compuesto
34) era mejor inhibidor de COX-2 que el
correspondiente S-metil enantiómero (compuesto
8).
Adicionalmente, las amidas aromáticas que
contienen el sustituyente 4-fluoro (compuesto 39),
el sustituyente 4-metilmercapto (compuesto 15) o el
sustituyente 3-piridilo (compuesto 47) mostraban una
potente y selectiva inhibición COX-2, tal y como se
indica más adelante.
Otro interesante aspecto en los estudios SAR con
amidas de indometacina era que los derivados amida
N,N-metil-2-fenetilo
(Compuesto 36) y piperidinilo (compuesto 37), ambas amidas
terciarias, resultaban inactivos frente a COX-2. En
otras palabras, tan solo las amidas secundarias resultaban
selectivas como inhibidores COX-2, mientras que las
amidas terciarias estaban desprovistas de cualquier tipo de efecto
inhibidor hacia cualquier isozima, a saber, la medición de la
inhibición COX-2 para las amidas terciarias se
detenía en un valor IC extremadamente elevado (ver el valor de 33
para ambos compuestos 9 y 10) y todavía subsistía > 80% de
actividad COX-1.
Un estudio SAR similar fue hecho publico
anteriormente en la anteriormente mencionada publicación, por parte
de Li et al., en relación con sulfonamidas ácidas. (Ver, las
estructuras dibujadas anteriormente para los compuestos
L-745.337 y NS-398).
Específicamente, Li et al., averiguaron que la sustitución
del protón N-H en el resto NHSO_{2}CH_{3} de
L-745.337 o NS-398 por un grupo
metilo conducía a la completa pérdida de la potencia inhibidora
hacia cualquiera de los isoenzimas COX-1 o
COX-2.
Este comportamiento puede ser explicado a partir
de la recientemente resuelta estructura cristalina de
COX-2 de múrido complejado con
NS-398. Ver, Kurumbail et al., Abstract 197,
Eicosanoids and Other Bioactive Lipids in Cancer, Inflammation and
Related Diseases, Fifth Internacional Conference, La Jolla,
California (17-20 septiembre 1997). A diferencia de
los diarilheterociclos, el NS-398 no utiliza la
bolsa lateral, incluso en el caso de que la misma contiene un grupo
sulfonamida. Por el contrario, la sulfonamida se une a Arg 106 de
manera similar a los NSAIDs que contienen ácido carboxílico.
Si bien los derivados amida secundaria de ácido
carboxílico de indometacina de la presente invención no contienen
ningún sustituyente sustractor de electrones, las observaciones SAR
discutidas anteriormente acerca de la falta de inhibición por parte
de los derivados amida terciaria de ácido carboxílico sugiere que el
grupo -CONH-R_{1} se une también probablemente a
Arg 106. Esto puede ser observado a partir del contraste de datos
indicado seguidamente para el derivado amida secundaria inventivo
(compuesto 11) con los derivados amida terciaria e comparación
(compuestos 9 y 10) y el derivado de comparación del compuesto del
estado de la técnica NS-398, en el cual el protón
N-H en el resto NHSO_{2}CH_{3} fue sustituido
por un metilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 38. La base estructural para la
selectividad de COX-2 para el compuesto 38 fue
también demostrada mediante mutagénesis directa en un punto. Mas
particularmente, la potencia inhibidora de la indometacina,
comparada con la de la
indometacin-N-fenetilamida
(compuesto 38) fue evaluada frente a mutantes de
COX-2 de múrido, dirigidos a un punto específico
(Arg 106Gin y Tyr341Ala), los cuales representan restos clave
involucrados en la unión de los NSAIDs que contienen ácido
carboxílico. Arg 106 es el único resto cargado positivamente en el
punto de unión de ácido graso y resulta importante para la unión del
resto ácido carboxílico de un NSAID con Tyr341Ala, el cual es
yuxtapuesto a Arg 106 en el punto de constricción y es responsable
de la unión selectiva de los enantiómeros S pero no de los
enantiómeros R en la clase 2-fenilpropionato de
NSAIDs, que incluye el flurbiprofeno. Además, de estos mutantes, se
analizó también el perfil de inhibición del mutante
Val509IIeArg499HisVal420IIe (conocido también como mutante VRV), el
cual incorpora los cambios más relevantes entre
COX-2 y COX-1 en la región del
bolsillo lateral y es responsable de unión a diarilheterociclos. Los
resultados indicaron que la indometacina desplegaba una potencia
ligeramente mejor frente a la COX-2 de ratón de
origen natural que la mostrada por el compuesto 38 (indometacina:
IC_{50} (COX-2 de ratón) \sim 25 nM; compuesto
38:IC_{50} (COX-2 de ratón) \sim 35 nM). Además,
la Tyr341Ala y el mutante triple VRV resultaban ser resistentes a la
inhibición por parte de la indometacina y el compuesto 38, mientras
que el mutante Arg106 resultó ser resistente a la inhibición por
parte de la indometacina pero era inhibido de forma eficaz por parte
del compuesto 38 (IC_{50} \sim 25 nM).
Compuesto 44. La inhibición de la actividad
COX-2 en células de ratón intactas por parte del
Compuesto 44 fue objeto de ensayo en macrófagos RAW264,7 múridos,
en los cuales la actividad COX-2 era inducida
mediante estímulos patológicos. Los macrófagos fueron tratados con
LPS (500 ng/mL) de interferon-g (10 U/mL), durante
un período de 7,5 horas para inducir COX-2 y después
tratados con diversas concentraciones del derivado
4-metoxifenilamida de indometacina (Compuesto 44),
durante un período de 30 minutos a 37ºC. El valor IC_{50} para
PGD_{2} por parte del compuesto 44 era de 62,5 nM. Bajo estas
condiciones, la indometacina resultó ser un mejor inhibidor de la
actividad COX-2 en células de ratón intactas
(IC_{50} \sim 10 nM) que el compuesto 44.
Ciertamente, la comparación de la potencia de la
indometacina como inhibidor de COX-2 de ratón
purificada frente a la COX-2 humana purificada,
reveló que la indometacina mostraba una mayor grado de inhibición
del enzima de ratón que de la isoforma humana
(IC_{50}(COX-2 de ratón) \sim 350 nM;
IC_{50} (COX-2 humana) \sim 1 \muM). Por otra
parte un derivado amida-indometacina (compuesto 38)
resultaba ser mejor inhibidor de la COX-2 humana que
de la COX-2 de múrido (Compuesto 38: IC_{50}
(COX-2 de ratón) \sim 120 nM; IC_{50}
(COX-2 humana) \sim 75 nM).
Estos resultados refuerzan otras observaciones
efectuadas anteriormente por parte de otros investigadores, las
cuales sugieren que los enzimas COX procedentes partir de rata
resultan farmacológicamente diferentes de los procedentes de los
humanos, según se ha reportado por parte de Ramesha, "Human and
Rat Cyclooxigenases are Pharmacologically Distint", Adv. Exp.
Mol. Biol. (1997) Vol 407, pp. 67-71.
El compuesto 41 fue objeto de comprobación en un
ensayo de inflamación estándar, el modelo in vivo de edema
plantar en pie de rata. Este ensayo es ampliamente utilizado en la
industria farmacéutica para evaluar compuestos
anti-inflamatorios. Las ratas fueron inyectadas con
carragenano, el cual desencadena un rápido enema (hinchazón) al
cabo de 3 horas, el cual puede ser medido de forma cuantitativa
mediante el desplazamiento de volumen. Una única dosis de compuesto
41 (2 mg/kg) proporcionada por vía oral 1 hora después de la
inyección de carragenano, provocó un descenso muy importante en la
hinchazón.
En estos experimentos, el carragenano que fue
inyectado se encontraba en 0,1 mL de salina acuosa, por lo que el
incremento de 0,1 m en el volumen fue debido únicamente a la
inyección. Tomando esto en consideración, se averiguó que tenía
lugar entre un 80 y un 85% de reducción en la inflamación después
del tratamiento con el compuesto 41. A efectos comparativos, la
indometacina fue también objeto de comprobación en este ensayo, a
una dosis de 2 mg/kg por vía oral y también se averiguó la
existencia de una reducción comparable en la inflamación.
Más específicamente, ratas macho
Sprague-Dawley (150 g) recibieron una inyección
subplantar de carragenano (0,1 mL de una suspensión al 1% de
carragenano en solución salina acuosa estéril) en la planta trasera
derecha, con moderada anestesia a base de metoxiflurano. Una vez
transcurrida 1 hora desde la administración de la inyección, las
ratas fueron alimentadas con sonda con 0,5 mL de aceite de maíz que
contenía o bien 90 \muL de DMSO o 90 \muL del compuesto 41, a
las dosis específicadas más adelante. Se midió el volumen plantar
ipsilateral (mL) con un pletismómetro de desplazamiento de agua, al
cabo de 3 horas de haberse aplicado la inyección y se comparó con el
volumen de la pata a tiempo cero, es decir anterior a la aplicación
de la inyección, a los efectos de cálculo de edema.
Para cada una de las dosis, 6 ratas fueron
objeto de inyección, resumiéndose los resultados seguidamente:
| Compuesto 41 | ||
| Concentración (mg/mL) | Edema a las 3 horas (mL) | Desviación estándar |
| 0 | 0,87 | 0,1 |
| 0,2 | 0,55 | 0,04 |
| 0,5 | 0,47 | 0,07 |
| 1,0 | 0,39 | 0,03 |
| 2,0 | 0,38 | 0,07 |
Se da por entendido que pueden modificarse
diversos detalles de la invención sin apartarse del campo de
protección de la misma. Además, la siguiente descripción se
proporciona tan solo a efectos ilustrativos y no con el propósito
de limitar la invención definida a través de las
reivindicaciones.
Claims (16)
1. Procedimiento para alterar la especificidad
de un compuesto inhibidor de ciclooxigenasa, que comprende los pasos
de:
(a) proporcionar un compuesto que tiene
actividad inhibidora de ciclooxigenasa, teniendo el compuesto un
resto ácido carboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, asociado con la actividad inhibidora de la ciclooxigenasa,
estando el compuesto desprovisto de especificidad para la actividad
inhibidora de ciclooxigenasa-2; y
(b) alterar la especificidad del compuesto en el
paso (a), pasando de estar desprovisto de especificidad para la
actividad inhibidora de ciclooxigenasa-2 a tener
especificidad para la actividad inhibidora de
ciclooxigenasa-2, mediante la conversión del
compuesto que tiene el resto ácido carboxílico o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo en un derivado que tiene un
resto éster o un resto amida secundaria.
2. Procedimiento de la reivindicación 1, en el
que el compuesto es un fármaco anti-inflamatorio no
esteroide.
3. Procedimiento de la reivindicación 2, en el
que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es
seleccionado de entre el grupo que comprende ácidos fenámicos,
indoles, ácidos fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos, sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos y combinaciones de los
mismos.
4. Procedimiento de la reivindicación 2, en el
que el fármaco anti-inflamatorio no esteroide es
seleccionado de entre el grupo que comprende indometacina, ácido
6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético,
ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido
niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno,
ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco,
amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco,
diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno,
fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico,
indoprofeno, isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato,
naproxeno, orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico,
zaltoprofeno, zomopiraco, y ácidos farmacéuticamente aceptables de
los mismos y combinaciones de los
mismos.
mismos.
5. Procedimiento de la reivindicación 1 en el
que el derivado amida secundaria es seleccionado de entre el grupo
que comprende
indometacin-N-metilamida,
indometacin-N-etan-2-ol-amida,
indometacin-N-octilamida,
indometacin-N-nonilamida,
indometacin-N-(2-metilbencil)amida,
indometacin-N-(4-metilbencil)amida,
indometacin-N-((R)-,
4-dimetilbencilamida, indometacin-N((S)-,4-dimetilbencilamida, indometacin-N-((2-fenetil)amida, indometacin-N-(4-fluorofenil)amida, indometacin-N-(4-clorofenil)amida, indametacin-N-(4-acetamidofenil)amida, indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida, indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida, indometacin-N-(4-metoxifenil)amida, indometacin-N-(3-etoxifenil)amida, indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida, indometacin-N-(3-piridil)amida, indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida, indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida, indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-pirazinil)amida, indometacin-N-2-(4-metoxitiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)
amida y combinaciones de las mismas.
4-dimetilbencilamida, indometacin-N((S)-,4-dimetilbencilamida, indometacin-N-((2-fenetil)amida, indometacin-N-(4-fluorofenil)amida, indometacin-N-(4-clorofenil)amida, indametacin-N-(4-acetamidofenil)amida, indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida, indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida, indometacin-N-(4-metoxifenil)amida, indometacin-N-(3-etoxifenil)amida, indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida, indometacin-N-(3-piridil)amida, indometacin-N-5-((2-cloro)piridil)amida, indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida, indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-pirazinil)amida, indometacin-N-2-(4-metoxitiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)
amida y combinaciones de las mismas.
6. Uso de un derivado éster de ácido carboxílico
o de un derivado amida secundaria de ácido carboxílico, en el
que:
- (1)
- el derivado es selectivo para la inhibición de ciclooxigenasa-2, y
- (2)
- el compuesto (a) es un inhibidor de ciclooxigenasa pero carece de selectividad para la inhibición de ciclooxigenasa-2 y (b) contiene un resto ácido carboxílico o una de sus sales farmacéuticamente aceptables
para la preparación de un
medicamento que contiene una cantidad eficaz del citado derivado,
suficiente para crear un tratamiento analgésico,
anti-inflamatorio o antipirético en un animal
vertebrado de sangre caliente, incluyendo
humanos.
7. Uso de la reivindicación 6, en el que la
cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto
analgésico, anti-inflamatorio o antipirético oscila
entre aproximadamente 0,5 miligramos y aproximadamente 7,0
miligramos por kilogramo de peso corporal de animal por día.
8. Uso de la reivindicación 6, en el que la
cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto
analgésico, anti-inflamatorio o antipirético, oscila
entre aproximadamente 1,5 miligramos y aproximadamente 6,0
miligramos por kilogramo de peso corporal de animal y día.
9. Uso de la reivindicación 6, en el que la
cantidad para tratamiento eficaz, suficiente para crear un efecto
analgésico, anti-inflamatorio o antipirético, oscila
entre aproximadamente 2,0 miligramos y aproximadamente 5,0
miligramos por kilogramo de peso corporal de animal y día.
10. Uso de la reivindicación 6, en el que el
compuesto es un fármaco anti-inflamatorio no
esteroide.
11. Uso de la reivindicación 10, en el que el
fármaco anti-inflamatorio no esteroide es
seleccionado de entre el grupo que comprende ácidos fenámicos,
indoles, ácidos fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos, sus sales
farmacéuticamente aceptables y combinaciones de los mismos.
12. Uso de la reivindicación 10, en el que el
fármaco anti-inflamatorio no esteroide es
seleccionado de entre el grupo que comprende indometacina, ácido
6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético,
ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido
niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno,
ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco,
amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco,
diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno,
fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico, indoprofeno,
isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato, naproxeno,
orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico,
zaltoprofeno, zomopiraco, y ácidos farmacéuticamente aceptables de
los mismos y combinaciones de los mismos.
13. Uso de la reivindicación 6, en el que el
derivado es un derivado de un fármaco
anti-inflamatorio no esteroide.
14. Uso de la reivindicación 13, en el que el
derivado es un derivado de un fármaco
anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de
entre el grupo que comprende ácidos fenámicos, indoles, ácidos
fenilalcanoicos, ácidos fenilacéticos y combinaciones de los
mismos.
15. Uso de la reivindicación 13, en el que el
derivado es un derivado de un fármaco
anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de entre
el grupo que comprende indometacina, ácido
6-metoxi-\alpha-metil-2-naftilacético,
ácido meclofenámico, diclofenaco, ácido flufenámico, ácido
niflúmico, ácido mefenámico, sulindaco, tolmetina, suprofeno,
ketorolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, aceloferaco, alcofenaco,
amfenaco, benoxaprofeno, bromfenaco, carprofeno, clidanaco,
diflunisal, ácido efenámico, ácido etodólico, fenbufeno,
fenclofenaco, fencloraco, fenoprofeno, ácido flecózico,
indoprofeno, isofezolaco, ketoprofeno, loxoprofeno, meclofenamato,
naproxeno, orpanoxina, pirprofeno, pranoprofeno, ácido tolfenámico,
zaltoprofeno, zomopiraco y combinaciones de los mismos.
16. Uso de la reivindicación 13, en el que el
derivado es un derivado de un fármaco
anti-inflamatorio no esteroide seleccionado de
entre el grupo que comprende
indometacin-N-metilamida,
indometacin-N-etan-2-ol-amida,
indometacin-N-octilamida,
indometacin-N-nonilamida,
indometacin-N-(2-metilbencil)amida,
indometacin-N-(4-metilbencil)amida,
indometacin-N-((R)-,4-dimetilbencilamida,
indometacin-N((S)-,4-dimetilbencilamida,
indometacin-N-((2-fenetil)amida,
indometacin-N-(4-fluorofenil)amida,
indometacin-N-(4-clorofenil)amida,
indametacin-N-(4-acetamidofenil)amida,
indometacin-N-(4-metilmercapto)fenilamida,
indometacin-N-(3-metilmercaptofenil)amida,
indometacin-N-(4-metoxifenil)amida,
indometacin-N-(3-etoxifenil)amida,
indometacin-N-(3,4,5-trimetoxifenil)amida,
indometacin-N-(3-piridil)amida,
indometacin-N-5-(2-cloro)piridil)amida,
indometacin-N-5-((1-etil)pirazolo)amida,
indometacin-N-(3-cloropropil)amida, indometacin-N-metoxicarbonilmetilamida, indometacin-N-2-(2-L-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-2-(2-D-metoxicarboniletil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilbencil)amida, indometacin-N-(4-metoxicarbonilmetilfenil)amida, indometacin-N-(2-pirazinil)amida, indometacin-N-2-(4-metoxitiazolil)amida, indometacin-N-(4-bifenil)amida y combinaciones de las mismas.
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