ES2258330T3

ES2258330T3 - Cateter para obtener material celular de conductos mamarios.

Info

Publication number: ES2258330T3
Application number: ES99920083T
Authority: ES
Inventors: Susan M. Love; David Hung; Xuanmin He; Sanford H. Barsky
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 1998-04-28
Filing date: 1999-04-28
Publication date: 2006-08-16
Anticipated expiration: 2019-04-28
Also published as: EP1073476B1; EP1656953A1; IL138773A0; US6221622B1; CA2327514C; AU3766399A; JP2002512853A; ATE315418T1; US20020019017A1; NZ507070A; IL138773A; EP1073476A1; ZA200005020B; US20010001059A1; DE69929433D1; WO1999055384A1; US6494859B2; AU753939B2; CA2327514A1; DE69929433T2

Abstract

Catéter (50, 100) adaptado para el lavado de un conducto lacticífero de una glándula mamaria, comprendiendo el catéter un cuerpo de catéter (52) que tiene un primer lumen (56, 110) y un segundo lumen (54), donde el primer lumen (56, 110) es un lumen de entrada de flujo adaptado para la introducción de un fluido de lavado en un conducto lacticífero de una glándula mamaria y un segundo lumen (54) es un lumen de salida de flujo adaptado para la recogida del fluido desde el conducto lacticífero de la glándula mamaria, de forma que puede lograrse la entrada y salida de flujo de fluido de lavado en el catéter hacia y desde el conducto, donde el catéter tiene un extremo para la inserción en el conducto lacticífero de la glándula mamaria en el cual el primer lumen (56) termina en un puerto proximal (60, 120) y el segundo lumen (54) termina en un puerto distal (58), estando el extremo distal en la extremidad del catéter y estando el puerto proximal (60) espaciado en el catéter del puerto distal, teniendo el catéter una única región de lumen desde el puerto proximal al puerto distal y una región de lumen dual donde el primer y el segundo lumen se extienden uno a lo largo del otro, y donde el cuerpo del catéter (52) tiene un diámetro máximo en la región de lumen dual en el rango de 0, 8 milímetros a 2, 5 milímetros y tiene un diámetro en la región de lumen único en el rango de 0, 5 milímetros a 1, 5 milímetros.

Description

Catéter para obtener material celular de conductos mamarios.

La presente invención se refiere generalmente a un aparato para obtener fluidos y materiales celulares de un paciente. Más en particular, la presente invención se refiere a un aparato para obtener células epiteliales del revestimiento de un conducto lacticífero de la mama.

El cáncer de mama es el cáncer más común en las mujeres, con más de 100.000 nuevos casos diagnosticados cada año (ver por ejemplo Goodson WH & King EB, "Chapter 4: Discharges and Secretions of the Nipple, The Breast: Comprehensive Management of Benign and Malignant Diseases" 2ª Ed. Vol. 2, Bland & Kirby eds. W.B. Saunders Co, Philadelphia, PA pp. 51-74, (1998)). Incluso grandes cantidades de mujeres, sin embargo, tienen síntomas asociados con enfermedades de la mama, tanto benignas como malignas, y deben someterse a diagnósticos y evaluaciones adicionales para determinar si existe cáncer de mama. Con este fin, se ha desarrollado una variedad de técnicas de diagnóstico, las más comunes de las cuales son técnicas quirúrgicas que incluyen biopsia del núcleo y biopsia de extirpación. Recientemente, se ha desarrollado la citología de aspiración con aguja fina (FNA) la cual es menos invasiva que las técnicas quirúrgicas, pero que no siempre es un sustituto de la biopsia quirúrgica.

Una variedad de otras técnicas diagnósticas se ha propuesto con propósitos de investigación (ver por ejemplo Sukumar et al., "Molecular Medicine Today". 2(11):453-9,(1996); Sukumar et al., "Mutation Research". 333(1-2):37-44,(1995)). De particular interés para la presente invención, los fluidos de los conductos lacticíferos se han recolectado externamente, analizado y correlacionados en alguna medida con el riesgo de cáncer de mama. Dicha recolección de fluido, sin embargo, es generalmente tomada desde la superficie del pezón e incluye material de todas las estructuras del conducto. La información de la condición de un conducto individual generalmente no se proporciona. La información de los conductos individuales puede obtenerse a partir de la canalización y examen endoscópico o fluoroscópico, pero tales exámenes se realizan principalmente en mujeres con secreciones del pezón o con propósitos de investigación y generalmente no examinan cada conducto individual en la mama.

Debido a que el cáncer de mama usualmente aparece a partir de un sistema individual de conductos y existe en un estado precanceroso durante un número de años, la endoscopia y la recolección de fluido a partir de conductos individuales de la mama depara una gran promesa de diagnóstico para la identificación de marcadores intermedios. De interés particular para la presente invención, sería de gran valor ser capaz de recoger fluidos del conducto de forma fiable y materiales marcadores celulares y no celulares (por ejemplo epiteliales y otras células así como proteínas, carbohidratos, y otros materiales marcadores no celulares) a partir de conductos individuales de la mama sobre una base conducto-por-conducto. Mediante el examen de los materiales marcadores recogidos, pueden identificarse condiciones cancerosas y precancerosas dentro de cada conducto en un estadio muy temprano. Por otra parte, mediante la asociación de la condición con un conducto específico, el tratamiento puede dirigirse específicamente en un conducto en un intento de mejorar la efectividad del tratamiento y minimizar el trauma para el paciente.

La habilidad para realizar tales técnicas de diagnóstico, sin embargo, se ha limitado. Hasta ahora, ha sido muy difícil identificar los orificios de los conductos en una forma confiable y consistente. Este problema, no obstante, se ha encarado mediante la invención informada en la Solicitud presentada al mismo tiempo, de titularidad común Nº 08/931.786, ahora US-A-6168779. Mediante el etiquetado de los orificios de los conductos, puede establecerse la ubicación del orificio de entrada para cada conducto.

A pesar que ahora puede lograrse el acceso a todos los conductos, los procedimientos de diagnóstico exitosos dependerán de la habilidad para recolectar materiales celulares y no celulares de al menos, la mayoría, y preferentemente de todas, las regiones de cada red de conductos. Los conductos mamarios tienen geometrías altamente complejas e intrincadas en tres dimensiones, con porciones más remotas de la red que tienen diámetros cada vez más pequeños. Por lo tanto, obtener muestras representativas de material a partir de la totalidad de una red de conductos representa un desafío significativo.

Intentos anteriores para obtener material celular a partir de conductos mamarios individuales han sido exitosos sólo parcialmente. Como se informa aquí por parte del inventor, en Love and Barsky (1996) "The Lancet" 348:997-999(1996), los conductos mamarios se han canalizado con una cánula rígida y se infunden con volúmenes muy pequeños (0,2 ml a 0,5 ml) de suero fisiológico. El suero fisiológico se recupera separadamente a través de un tubo capilar, y se recupera el material celular del suero fisiológico. No estaba claro, sin embargo, si el material celular se recuperaba de la mayoría o de todas las porciones de la red de conductos. A menos que puedan obtenerse tales muestras representativas, no pueden realizarse diagnósticos confiables. Mientras que el documento propone el desarrollo de un catéter de dos lúmenes, ningún catéter como tal o su uso se describen en la publicación.

Por estas razones, para permitir la realización de técnicas de diagnóstico de conductos, será útil para proporcionar procedimientos y aparatos que permitan la recolección de fluidos y materiales marcadores a partir de redes de conductos individuales en una forma confiable y consistente. Tales procedimientos deben ser mínimamente traumáticos para la paciente, deben ser útiles para la revisión al menos en pacientes de alto riesgo, y deben proporcionar materiales celulares y no celulares adecuados para la detección fiable de condiciones cancerosas y precancerosas. Al menos algunos de estos objetivos se satisfacen con la invención descrita de aquí en adelante.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona un catéter según las reivindicaciones 1-7. Es útil para obtener fluidos, sustancias marcadoras, material celular, y similares (referidos de aquí en adelante como "materiales marcadores") a partir de conductos lacticíferos individuales en las mamas de pacientes humanas femeninas. En particular, los procedimientos descritos permiten el lavado confiable y la recuperación de materiales marcadores a partir de una red completa de un único conducto lacticífero para permitir el examen, diagnóstico, y monitorización de enfermedades asociadas con el revestimiento del conducto lacticífero, particularmente para identificar condiciones cancerosas y precancerosas. Como los materiales marcadores se obtienen íntegramente a partir de una única red de conductos, el diagnóstico puede hacerse sobre una base conducto-por-conducto. Mediante la obtención de espécimenes de cada una de las múltiples redes de conductos en una mama, sin embargo, puede también determinarse la presencia de enfermedad o incremento en la probabilidad de enfermedad en la mama completa.

Los procedimientos descritos proporcionan un acceso no quirúrgico y la recuperación de material celular y de otro tipo a partir de los conductos de una única mama, incluyendo un procedimiento de lavado de un conducto lacticífero de la glándula mamaria que comprende la inserción de una herramienta de acceso, tal como un catéter, que tiene al menos y preferentemente dos o más lúmenes en el conducto. El lavado puede realizarse utilizando cualquiera de las técnicas específicas descritas en otros sitios de este documento. La presente invención también describe el uso de una herramienta de acceso tal como un catéter, que tiene al menos un lumen para el lavado de un conducto lacticífero de una glándula mamaria, donde la herramienta puede usarse según cualesquiera de las técnicas específicas descritas en otros sitios de este documento. En todos los casos, los procedimientos pueden usarse para recoger material celular y otros materiales con cualquier propósito incluyendo propósitos no diagnósticos y/o no terapéuticos, además de los propósitos terapéuticos y diagnósticos que se describen con detalle en otros sitios de este documento.

Se describe un procedimiento para obtener materiales marcadores a partir de un conducto lacticífero de una mama que comprende ubicar un único conducto lacticífero, típicamente mediante el etiquetado de un orificio de un conducto presente en el pezón de la mama. Un fluido de lavado, típicamente suero fisiológico, se introduce en el conducto de forma que el mismo pase por completo a través de la totalidad de la red de conductos, preferentemente sin desgarrar el conducto. Al menos una porción del fluido de lavado se recoge entonces desde el conducto, y se identifican materiales marcadores que pueden estar presentes en el fluido recogido (incluyendo fluidos que podrían ser secretados de otra forma). Mientras que en algunos casos puede ser deseable recoger espécimenes solamente a partir de una única red de conductos, usualmente será preferible repetir las etapas para identificar la presencia de materiales marcadores en cada una de las redes de conductos presentes en la mama. Los materiales marcadores celulares pueden comprender células epiteliales del revestimiento del conducto mientras que los fluidos comprenderán normalmente fluidos secretados y no secretados presentes en los conductos. Las epiteliales y otras células obtenidas mediante el procedimiento usualmente se examinarán morfológica, histoquímica y/o inmunohistoquímicamente para determinar si son anormales y para calcular la probabilidad de una condición cancerosa o precancerosa presente en el revestimiento celular del conducto. Los materiales marcadores no celulares incluyen proteínas, péptidos, y otras especies químicas que pueden secretarse o liberarse de otra forma dentro del conducto en respuesta a una enfermedad u otra condición a identificar.

Un procedimiento preferido para obtener materiales marcadores a partir de un conducto lacticífero de una mama comprende ubicar al menos uno de los orificios del conducto en el pezón de la mama. Se introduce entonces una herramienta de acceso, tal como un catéter de lumen dual, a través del orificio y dentro del pasaje del conducto, usualmente sobre un cable guía. Se introduce entonces un fluido de lavado a través de uno de los lúmenes dentro del conducto. Preferentemente, se introduce suficiente fluido de forma que el fluido substancialmente llenará el volumen del conducto y pasará luego hacia fuera a través del otro lumen del catéter de forma que pueda ser recogido exteriormente de la mama. Los materiales marcadores, tales como epiteliales y otras células, presentes en el fluido de lavado pueden entonces aislarse, detectarse y/o examinarse, como se ha descrito generalmente con anterioridad. Adicionalmente, los fluidos presentes del conducto antes de la introducción del fluido de lavado pueden diluirse y recogerse y pueden examinarse para ver la presencia tanto de pequeñas moléculas como de macromoléculas, incluyendo proteínas, carbohidratos, y otros marcadores de enfermedad potencial.

El volumen de fluido de lavado introducido en la red de conductos usualmente será de al menos 5 ml, preferentemente siendo de entre 5 ml a 25 ml, usualmente siendo de aproximadamente 10 ml. El fluido de lavado típicamente se introducirá a través del lumen del catéter utilizando una jeringa a presión generalmente baja que no resultará en la ruptura de la red de conductos. El fluido de lavado se introducirá durante un período de tiempo relativamente corto, típicamente de 1 minuto a 5 minutos, y continuará su introducción aún después que las porciones iniciales del fluido comiencen a emerger desde el segundo lumen del catéter. Como antes, el procedimiento usualmente se repetirá para cada una de las redes de conductos presentes en la mama.

Se describe un procedimiento mejorado para obtener fluido y material celular de áreas distales de la arquitectura de conductos de un conducto lacticífero de la mama. El procedimiento comprende introducir un fluido de lavado en un conducto lacticífero, aplicar presión exterior a la mama, recoger al menos una porción del fluido de lavado del conducto, en el cual la porción del fluido de lavado recogido comprende fluido y células del conducto. La aplicación de presión externa puede ser manual o mecánica. La presión externa puede mezclar efectivamente fluido, células y otros contenidos del conducto juntos en un conducto. La presión externa puede aplicarse comenzando en la base de la mama y trabajar subiendo hasta las regiones de la areola y del pezón de la mama. La introducción del fluido de lavado puede comprender infusión continua o intermitente del fluido de lavado durante un período de tiempo. La presión externa puede aplicarse a la mama periódicamente, continuamente o cíclicamente durante la infusión del fluido de lavado. La introducción y la recogida puede comprender acceso a un conducto de una mama mediante una herramienta de acceso que tiene al menos un lumen. La recogida puede comprender la aplicación de succión a un lumen de salida de flujo de un catéter de lumen dual para extraer fluido fuera del conducto. El fluido de lavado puede comprender una mezcla de un gas (tal como aire o nitrógeno) y líquido.

Se describe un procedimiento para obtener fluido y material celular que incluya fluido y material celular de áreas distales de la arquitectura de conductos de un conducto lacticífero de una mama que comprende la introducción de un fluido de lavado en un conducto lacticífero, y proporcionar una infusión continua o intermitente del fluido de lavado durante un período de tiempo; aplicar presión externa a la mama y repetir la aplicación de presión externa periódicamente, continuamente o cíclicamente durante la infusión del fluido de lavado; recoger el fluido de lavado del conducto durante la infusión y la aplicación de presiones externas, donde el fluido de lavado recogido comprende fluido y células originadas en el conducto. La introducción y recogida puede comprender el acceso de un conducto de una mama mediante una herramienta de acceso que tiene al menos un lumen. La recogida puede comprender aplicar succión a un lumen de salida de flujo de un catéter de lumen dual a un fluido extraído del conducto. El fluido de lavado puede comprender una mezcla de aire y líquido.

Se describe un procedimiento para obtener material a partir de un conducto lacticífero en una mama de una paciente que comprende localizar al menos un orificio de conducto en un pezón de la mama; introducir una herramienta de acceso que tiene al menos un lumen a través de uno de los orificios de conducto y en el pasaje de conducto; introducir un fluido de lavado a través de un lumen dentro del pasaje del conducto; aplicar presión externa a la mama; recoger el fluido de lavado desde el pasaje del conducto a través de un lumen de la herramienta de acceso durante o después de la introducción del fluido y aplicar presión externa; e identificar los materiales presentes en el fluido de lavado recogido. El fluido de lavado puede comprender una mezcla de aire y líquido.

Un equipo para obtener materiales de marcado de un conducto de una mama puede comprender un catéter de lumen dual junto con instrucciones que exponen un procedimiento para utilizarlo como se describe con anterioridad. El equipo usualmente comprenderá además un envoltorio, tal como una bolsa, bandeja, tubo, caja, o similar. Las instrucciones para el uso pueden imprimirse en una pieza de papel separada, u opcionalmente pueden imprimirse en todo o en parte sobre una porción del envoltorio. Usualmente, el catéter de lumen dual estará esterilizado y se mantendrá en condición estéril dentro del envoltorio. Opcionalmente, otros componentes del sistema, como cables de guía, suero fisiológico y otro(s) fluido de lavado, medios de cultivo y mantenimiento de células, medios de fijación de células, bandejas de recogida de células, o similares, puede proporcionarse como parte del equipo.

Puede haber un equipo para obtener material a partir de un conducto lacticífero de una mama, que comprende una herramienta de acceso que tiene al menos un lumen, e instrucciones expuestas para un procedimiento para el uso de la herramienta de acceso según cualquiera de los procedimientos antes descritos que comprenden la aplicación de presión externa, y un contenedor para los contenidos del equipo. El equipo puede también comprender reactivos para el lavado, recogida, preservación o análisis del fluido del conducto.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es una vista anterior de una mama humana femenina, mostrada en sección, e ilustrando tres de los seis a nueve redes de conductos que se extienden por dentro desde el pezón.

La figura 2 es una vista aumentada del pezón de la figura 1 ilustrando los orificios que conducen a cada una de las tres redes de conductos.

La figura 3 es una vista en perspectiva de un catéter de lumen dual que es útil en la realización de los procedimientos de la presente invención.

La figura 4 es una vista detallada del extremo distal del catéter de la figura 3, mostrada en sección.

La figura 5 ilustra el uso del catéter de la figura 3 en la realización del procedimiento de la presente invención en una única red de conductos.

La figura 6 ilustra un equipo que comprende un catéter de lumen dual y otros componentes del sistema, incluyendo instrucciones para el uso.

Las figuras 7A-7C ilustran el catéter utilizado en los ejemplos de trabajo sucesivos.

Descripción de las realizaciones especificas

La presente invención se refiere a obtener materiales marcadores de una o más redes de conductos en una mama humana femenina. Una mama típica B, como se ilustra en la figura 1, incluye un pezón N y de seis a nueve conductos D. Se ilustran tres redes de conducto D1-3 que se extienden hacia dentro desde el pezón N en el tejido de la mama. Como se ve mejor en la figura 2, cada red de conductos D_{1-3} comienza en un orificio O_{1-3} que yace en la superficie del pezón N y se extiende hacia dentro a través de un seno del conducto S_{1-3} y luego en una red ramificada. Cada red D comprende una serie de lúmenes sucesivamente más pequeños que se disponen en patrones complejos, tridimensionales. Las redes de cada conducto se superpondrá dentro del tejido de la mama pero no estarán interconectadas. El volumen total de cada red usualmente está en el rango de 0,1 ml a 0,5 ml, pero las paredes son un tanto amoldables de forma que el volumen interno puede crecer al introducirse fluido. La presente invención se base en acceder a la red(es) de conductos a través del orificio O del conducto D dentro del pezón N. Usualmente, habrá de seis a nueve orificios que se abren en un pequeño número de redes de conductos. La confirmación del número y la localización de los orificios de conducto puede hacerse mediante el etiquetado del pezón como se describe más adelante.

La presente invención se basa en recoger fluidos endógenos de los conductos y materiales marcadores celulares y no celulares de las redes individuales de conductos sobre una base conducto-por-conducto. Es decir, fluidos y materiales marcadores se obtienen de un único conducto sin obtener material de cualesquiera otros conductos. Esto contrasta con técnicas anteriores en las cuales, en algunos ejemplos, eran capaces de obtener materiales celulares y otros materiales de todos los conductos lacticíferos de una vez mediante la aplicación de un vacío suave al pezón. Debe notarse, sin embargo, que en algunas instancias tal examen de todos los conductos en una única etapa puede ser apropiado para identificar pacientes que muestran anormalidades para las cuales son apropiadas comprobaciones adicionales, específicas por conductos según la presente invención.

Como una primera etapa del presente procedimiento, una localización de al menos un conducto se determinará, típicamente mediante el etiquetado de todos los orificios de conductos como se describe en la patente US-A-6168779. Brevemente, una porción del revestimiento epitelial presente expuesto en el orificio del conducto puede etiquetarse con un marcador visible que permite al profesional del tratamiento identificar el orificio de entrada para cada una de las redes de conductos en la mama. A continuación de la identificación del orificio del conducto, se introducirá un fluido de lavado dentro del conducto para soltar y movilizar material celular del revestimiento del conducto, principalmente células epiteliales del revestimiento. El fluido de lavado se introduce en una cantidad y en una forma tal que substancialmente el volumen total del conducto se lavará con el fluido para obtener una muestra que es representativa de la red de conductos completa. Los componentes celulares de la muestra usualmente serán del mayor interés, pero los fluidos del conducto y especies moleculares secretadas (tanto moléculas pequeñas y más usualmente macromoléculas biológicas tales como proteínas y carbohidratos) también pueden analizarse. El fluido de lavado que transporta las células y otros materiales se recoge entonces, y los materiales se examinan morfológica, histológica, inmunohistológica, química, inmunológica, enzimáticamente o de otra forma para determinar cualesquiera condiciones anormales o patológicas dentro de la red de conductos, particularmente cáncer o condición precancerosa.

En una realización específica, el fluido de lavado se introduce utilizando un catéter de lumen dual que permite la introducción simultánea del fluido de lavado y la recogida del exceso del fluido de lavado que fluye retrocediendo hacia fuera desde la red de conductos. El fluido que se recoge usualmente no se aspira (debido a que la aspiración puede colapsar el conducto), y en cambio la presión del fluido introducido se basa tanto en purgar la totalidad de la red de conductos como en expeler el exceso de fluido a través del otro lumen de la cánula. Opcionalmente, la presión externa puede aplicarse a la mama para aumentar o acelerar la recolección de fluido. Típicamente, el fluido se introduce utilizando una jeringa, introduciendo el fluido a una tasa relativamente baja, típicamente en el rango de 0,1 ml/seg a 5 ml/seg, preferentemente de 0,5 ml/seg a 1 ml/seg. El volumen total introducido del fluido de lavado es típicamente al menos 5 ml, estando típicamente en el rango de 5 ml a 25 ml, siendo usualmente de aproximadamente 10 ml, siendo opcionalmente mayor. Un fluido de lavado preferido es suero fisiológico pero también pueden usarse medios de contraste y otros fluidos estériles fisiológicamente aceptables.

La herramienta de acceso de la presente invención se ilustra en las figuras 3 y 4. El catéter comprende un cuerpo de catéter 52, que típicamente tiene una longitud en el rango de 3 cm a 50 cm usualmente de 10 a 25 cm. El cuerpo de catéter 52 incluye al menos un primer lumen 54 y un segundo lumen 56. El primer lumen 54 termina en un puerto distal 58, como se ve mejor en la figura 4, mientras el segundo lumen termina en un puerto ubicado proximalmente 60, que típicamente está ubicado en una distancia d que es aproximadamente 0,1 cm a 1 cm, usualmente desde 0,1 cm a 0,25 cm, proximal al puerto distal 58. El cuerpo de catéter 52 tendrá un diámetro relativamente angosto, teniendo típicamente un diámetro máximo en la región del lumen dual en el rango de 0,8 mm a 2,5 mm, siendo preferentemente del rango de 0,8 mm a 1,2 mm. El diámetro de la región distal de lumen único puede ser menor, como en el rango de 0,5 mm a 1,5 mm, preferentemente de 0,6 mm a 1 mm. El centro proximal 62 incluye un puerto 64 que está acoplado fluidamente al segundo lumen 56 para suministrar el fluido de lavado en la red de conductos. El segundo puerto 66 se proporciona tanto para introducir el catéter sobre un cable de guía y para recoger el fluido de lavado desde la red de conductos a través del puerto 58.

En referencia a la figura 5, se describirá el uso del catéter 50 para recoger materiales marcadores desde una red de conductos D_{2}. Usualmente, la red de conductos D_{2} se accederá primero con un cable de guía, tal como un cable de guía 0,36 mm convencional (0,014 pulgadas) (no mostrado). Después de la introducción del cable de guía, típicamente al pasar una distancia en el rango de 0,25 cm a 2,5 cm del orificio O_{2}, el catéter 50 se introducirá sobre el cable de guía mediante el paso del puerto distal 58 del primer lumen 54 sobre el extremo externo del cable de guía. El puerto distal 58 se introduce en la red de conductos D2 típicamente a una profundidad de aproximadamente 0,25 cm a 2,5 cm, usualmente aproximadamente 0,75 cm a 1,5 cm. Como se comentó con anterioridad, el segundo puerto 60 se ubicará proximalmente del primer puerto en una distancia en el rango de entre 0,1 cm a 1 cm, y que por lo tanto estará más cercano al orificio O_{2}. Después que el catéter 50 está en su lugar, el cable de guía típicamente se extraerá y se introducirá el fluido de lavado a través del segundo lumen 56 a través del puerto 64 y la abertura 60. El fluido de lavado fluirá ahora dentro de la red de conductos y generalmente alcanzará la mayor parte del volumen de conductos, alcanzando típicamente al menos 75% del volumen de conducto, preferentemente al menos 85%, y algunas veces tanto como el 95%.

Alternativamente, el cable de guía y el catéter 50 pueden introducirse simultáneamente, típicamente con la punta distal del cable de guía extendiéndose una corta distancia por delante del extremo distal del catéter, usualmente aproximadamente 0,1 cm a 1 cm. El cable de guía se usa para conducir y el catéter 50 sigue la localización objetivo deseada en el conducto.

El volumen de fluido introducido en la red de conductos D2 será suficientemente grande para que substancialmente la totalidad del volumen de la red de conductos pueda llenarse con el fluido de lavado y el exceso de fluido fluirá de la red al ser desplazado por la entrada adicional de fluido. Usualmente, sólo una pequeña porción en la cantidad de fluido de lavado que se introduce será necesaria para llenar la red de conductos, usualmente menos de 1 ml, con frecuencia menor a 0,5 ml. El fluido remanente continuará introduciéndose y por lo tanto hará salir los materiales marcadores celulares y otros de la red de conductos en la abertura 58 en el primer lumen 54. Por lo tanto, este fluido pasará hacia fuera a través del catéter y puede recogerse desde el puerto 66 en el catéter. Preferentemente, no se aplicará vacío u otra presión de aspiración al catéter. En su lugar, el fluido fluirá hacia fuera en respuesta a la presión positiva creada mediante la entrada de flujo del fluido de lavado, opcionalmente con presión externa aplicada a la mama.

Se describe un procedimiento para obtener fluido y material celular de conductos lacticíferos de una mama incluyendo la obtención de fluido y material celular de áreas distales de la arquitectura de conductos de un conducto lacticífero de una mama. El procedimiento comprende la introducción de un lavado o fluido de lavado en el conducto. De forma óptima, el conducto se trata con una cantidad suficiente de fluido de lavado de forma que el conducto se llena substancialmente con fluido de lavado. El lavado o fluido de lavado puede ser por ejemplo suero fisiológico, por ejemplo solución salina tampón fosfato (PBS) o suero fisiológico normal. Una vez que el conducto se ha llenado con fluido (como puede determinarse por ejemplo cuando el lumen de entrada de flujo encuentra resistencia a la infusión de más fluido) el profesional puede aplicar presión externa a la mama, y proceder con la recogida del fluido de lavado o de una porción del fluido de lavado del conducto como resultado de la presión externa. La aplicación de presión externa puede ser presión manual o mecánica aplicada a la mama. La presión mecánica aplicada a la mama puede ser de un dispositivo diseñado para manipular y exprimir la mama, por ejemplo un dispositivo que tenga rodillos, cámaras hinchables, y otro mecanismo efectivo para aplicar presión externa a la mama. La presión manual aplicada a la mama puede comprender masajeado de la mama o exprimido de la mama o una combinación de ambos. La presión manual puede aplicarse como masajeado o exprimido ya sea en la misma acción (es decir masajear y exprimir en una única acción) o en acciones alternas (es decir masajeando primero durante un período de tiempo luego exprimiendo durante un período de tiempo). La acción de masajeado puede comprender masajeado manual, por ejemplo que comprenda presión suave sobre la mama en una acción de amasado para mezclar de forma efectiva fluidos, células y otros contenidos del conducto juntos en los conductos. La acción de exprimido puede comprender exprimido manual para estimular al contenido de los conductos lacticíferos a desplazarse a los orificios de los conductos desde las regiones distales de la arquitectura de los conductos. El masajeado y/o el exprimido pueden lograrse a través de otros medios que la presión manual, por ejemplo aplicación automatizada o conducida mecánicamente de presión externa a la
mama.

La aplicación de presión externa a la mama que comprende masajeado y/o exprimido puede comprender masajeado primero, luego exprimido, seguido en ciclos repetitivos de masajeado y luego exprimido. Alternativamente, la presión externa puede aplicarse en una acción que combine masajeado con exprimido, quizás aplicado periódicamente al infundirse y vaciarse a la mama con fluido de lavado. Alternativamente, la presión externa puede aplicarse mediante la aplicación de masajeado durante la infusión de fluido, seguida por exprimido una vez que el conducto de la mama está lleno. El masajeado y exprimido puede también aplicarse continuamente o casi continuamente durante la infusión y recolección del fluido de lavado desde los conductos de mama. Las acciones de masajeado y exprimido aplicadas a la mama se destinan a mezclar el fluido y los contenidos del conducto en el conducto (mediante el masajeo) y para orientar el fluido y los otros contenidos del conducto hacia el orificio del conducto (mediante el exprimido). De forma óptima, el fluido y los contenidos del conducto son recuperados y recuperables mediante este procedimiento desde todas las áreas de los conductos lacticíferos de la mama, incluyendo las regiones distales de la arquitectura de los conductos. El masajeado manual y el exprimido proporcionan substancialmente control de la presión y posicionamiento durante el procedimiento de aplicación de presión externa. La acción de masajeado se dirige a mezclar los contenidos de los conductos incluyendo los fluidos y las células en los conductos. El exprimido puede empezar en la base de la mama y trabajar hacia arriba hacia la areola y el pezón. Las técnicas para masajear y exprimir (especialmente masajeado y exprimido manual) pueden modificarse según el tamaño de la mama y la sensibilidad de la paciente según se necesite durante el procedimiento.

El fluido de lavado a recoger puede dirigirse desde el conducto hacia un lumen de salida de flujo (por ejemplo cuando se utiliza un catéter de lumen dual) o puede recogerse en cualquier otra forma adecuada que incluya un tubo en el lumen de salida de flujo o un tubo u otro dispositivo de recogida en el orificio del conducto. Al menos una porción del lavado o fluido de lavado se recoge desde el conducto. Algo del lavado o del fluido de lavado puede permanecer en el conducto. El masajeado y/o exprimido de un conducto que se ha infundido con fluido de lavado resulta en un mejor rendimiento de fluido del conducto y células con origen en todas las áreas del conducto, incluyendo y especialmente de áreas distales de la arquitectura de conductos, en comparación a los rendimientos de fluido y de células sólo del purgado (por ejemplo lavado simple sin masajeado y/o exprimido).

La recolección puede comprender colocar un lumen de salida de flujo en el conducto para dirigir el fluido en el conducto hacia fuera. Los tubos pueden ubicarse o colocarse en el extremo exterior del lumen de salida de flujo para recoger fracciones. Las fracciones pueden recogerse seriadamente, es decir en alícuotas del mismo tamaño o aproximadamente del mismo tamaño. Un proceso de infusión continua de fluido de lavado, exprimido y recogida de las fracciones puede continuar para recoger una muestra representativa de fluido y células de los conductos de forma que pueda realizarse un análisis preciso de la condición del conducto mediante el análisis de este fluido y células. El fluido de lavado puede infundirse continuamente durante un período de tiempo, durante el cual el conducto se llena y opcionalmente permanece lleno durante el masajeado y/o exprimido y la recogida debida a la infusión continua de nuevo fluido de lavado en el conducto.

La periodicidad de aplicación de presión externa puede comprender por ejemplo masajear y/o exprimir la mama (por ejemplo manualmente) después de una infusión de fluido de lavado que llene el conducto y recoger el fluido; masajear y/o exprimir continuamente durante la infusión continua del fluido de lavado y recolección continua; o masajear y/o exprimir de forma intermitente mientras las mama se llena y se vacía y se vuelve a llenar con la correspondiente recogida de las fracciones de fluido que resulten. Los profesionales individuales determinarán una combinación de esfuerzos que funcionarán mejor para ellos y sus pacientes y que resultarán en el rendimiento óptimo de fluido y células con mínimo trauma para el tejido de la mama de la paciente. En todo caso es importante no romper la arquitectura de conductos con un masajeo y/o exprimido que sea muy vigoroso y en ningún caso se pretende que el masajeo y/o exprimido deba realizarse hasta un grado que amenace con dañar el tejido de la mama hasta una extensión que comprometa la integridad de las estructuras de los conductos dentro de la mama.

La recogida de fluido del conducto puede ayudarse adicionalmente mediante la aplicación de succión al extremo de un lumen de salida de flujo que se extiende desde un conducto accedido mediante un catéter de lumen dual. La succión puede aplicarse utilizando un dispositivo capaz de crear succión en un lumen, por ejemplo una jeringa y otro dispositivo de succión ubicado en el extremo del lumen de salida de flujo que se extiende fuera del conducto. La aplicación de succión en el lumen de salida de flujo puede ser breve, por ejemplo para establecer el fluido del conducto que fluye desde dentro hacia fuera del conducto, o la succión puede aplicarse durante un período de tiempo más extendido durante el procedimiento, por ejemplo durante una correspondiente infusión continua de fluido de lavado en el lumen de entrada de flujo.

El lavado o fluido de lavado puede comprender además aire mezclado con el fluido para el suministro al conducto. La presencia de aire u otro gas puede servir para incrementar la recuperación de células y fluido en comparación con un lavado con fluido que no tenga gas o burbujas de aire mezcladas con el fluido. El aire puede introducirse en el fluido mediante procedimientos estándares, incluyendo la introducción de aire o gas desde un contenedor presurizado.

Puede haber un equipo para obtener material de un conducto lacticífero de una mama. El equipo puede comprender una herramienta de acceso que tenga al menos un lumen. Por lo tanto, la herramienta de acceso puede ser, por ejemplo, un catéter de lumen único, un catéter de lumen dual, un catéter multilumen, una cánula, una sonda hueca, u otra herramienta de acceso que tenga al menos un lumen. El equipo puede comprender además instrucciones que expongan un procedimiento para la utilización de la herramienta de acceso según los procedimientos y realizaciones que incluyen aplicar presión externa a la mama como se describe con anterioridad. Las instrucciones pueden incluir orientación detallada y descripción para la aplicación de masaje manual o mecánico. Un equipo para aplicar presión externa mecánicamente comprenderá una herramienta para aplicar la presión mecánica. Las instrucciones para un equipo que dirige la aplicación de presión externa a la mama manualmente comprenderá instrucciones detallando las formas de masajear y/o exprimir la mama más efectivamente durante el procedimiento de lavado, incluyendo, por ejemplo detalles como los descritos con anterioridad. Las instrucciones pueden incluir una descripción completa con ilustraciones y aproximaciones sugeridas para el masajeado y/o exprimido de la mama que pueden aplicarse durante el procedimiento de lavado. El equipo también puede incluir un dispositivo para proporcionar succión a un lumen de salida de flujo, por ejemplo una jeringa, y directivas adicionales de cómo aplicar la succión. La succión aplicada puede ser aproximadamente recíproca con el flujo del fluido en el conducto desde el lumen de entrada de flujo. La fuerza y la tasa de la presión de salida del flujo posible dependerá en variables tales como el tamaño del conducto, la cantidad de fluido en el conducto, y la fuerza y la tasa de la presión de entrada de flujo. El fluido recogido puede tratarse o analizarse de forma convencional para identificar la presencia, cantidad(es), identidades, y/u otras características de cualesquiera materiales marcadores que puedan estar presentes en los fluidos recogidos. Por ejemplo, los materiales celulares pueden transferirse a un medio adecuado, tal como RPMI y otro medio de cultivo o mantenimiento. Las células pueden examinarse entonces morfológicamente bajo un microscopio y/o histológicamente utilizando colorantes reactivos histoquímicas e inmunoquímicos adecuados. Los marcadores químicos y moleculares puede identificarse y/o examinarse química, inmunológica, enzimáticamente, o mediante otras técnicas convencionales. Tales técnicas de análisis son bien descritas en la técnica.

Los equipos comprenden al menos un catéter 50 (que puede ser cualquier catéter de lumen dual o múltiple capaz de acceder una red de conductos individual) e instrucciones para el uso (IFU) 80 que se combinan juntas en una forma convencional, típicamente dentro de un contenedor 82, que puede ser en forma de una bolsa, bandeja, caja, tubo, o similar. Los equipos usualmente también incluyen al menos un cable de guía, y también pueden proporcionarse otros componentes del equipo. Por ejemplo, puede proporcionarse una jeringa 84, usualmente previamente llena con suero fisiológico u otro medio de lavado adecuado para lavar la red de conductos. Adicionalmente, también puede proporcionarse una bandeja de recogida 86 para recibir y mantener el material celular y los fluidos de lavado recogidos del catéter. Opcionalmente, la bandeja puede incluir un medio de recolección adecuada, tal como medio RPMI. Aún más, los equipos pueden incluir materiales para ensayar marcadores no celulares así como componentes para la identificación del orificio del conducto, tal como se describe en la patente US-A-6168779.

Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de ilustración, y no como limitación.

Experimental

Se preparó un catéter de doble lumen que puede permitir un flujo continuo de suero fisiológico a través de todo el sistema de conductos, como se ilustra en la figura 7. El catéter era un catéter 3 French de lumen doble con el lumen proximal más pequeño en diámetro y el distal más grande para permitir la aspiración. En particular, el catéter 100 tiene una longitud desde el centro 102 a la punta distal 104 de 31 cm, un diámetro exterior de D_{0} de 1,04 (0,041 pulgadas), un lumen de cable guía D_{GW} de 0,48 mm (0,019 pulgadas), y un lumen de forma creciente 110. El diámetro de la punta exterior D_{OT} fue de 0,84 mm (0,033 pulgadas) y el diámetro de la punta del lumen D_{LT} fue de 0,43 mm (0,017 pulgadas), reflejando un extremo distal afilado 116. Un puerto lateral 120 que tiene una geometría oval de 1,78 mm x 0,41 mm (0,07 pulgadas x 0,016 pulgadas) forma el extremo distal del lumen 110 y se proximalmente separado de la punta distal por una distancia D_{S} de 4,1 mm (0,16 pulgadas). El fluido se introduce a través del puerto 130 y el lumen 110 a través del puerto lateral 120 en el lumen del conducto. El fluido se recoge a través de la punta distal y vuelve a través del lumen de cable de guía (después de extraer el cable de guía), y luego a través del puerto 140. Inicialmente el catéter se probó en mamas que se habían extirpado quirúrgicamente. Se estudiaron diez mamas y se recuperaron células de siete. El catéter se utilizó también con doce mujeres anestesiadas antes de una cirugía de mama. Las células se recuperaron de diez de las doce (83%). Ver Tabla 1.

Materiales y procedimientos

Después de administrarse anestesia general, la mama de la paciente se preparó y se cubrió. Se aplicó succión leve al pezón para provocar la descarga. Un microscopio o lupa de disección se utilizó para magnificar el pezón e identificar los orificios. Se hizo un mapa para identificar los orificios. Comenzando por el orificio más prometedor (es decir con mayor cantidad de descarga, y/o el más grande), se hicieron intentos para canalizar uno o más orificios utilizando tanto un juego estándar de dilatadores de metal (juego de galactografía de Mahan), o un cable de guía muy pequeño del tipo utilizado en angiografía. Una vez que el conducto se ha canalizado y dilatado aproximadamente 0,7-1,0 mm, se enhebra el catéter de lumen doble en el conducto. Se instila suero fisiológico, estableciendo un flujo continuo hasta que se recogieron 10 cc. El procedimiento ocupa aproximadamente 15 minutos. Si no se recogieran 10 cc de fluido dentro del límite de 15 minutos, el procedimiento se detiene prematuramente. Los lavados se enviaron a citología para analizarlos.

Resultados

Los resultados se muestran en la Tabla 1.

TABLA 1

Paciente	Mama	Localización	Localización	Conducto	Patología	Citología
Nº		masa	conducto	Nº
Mamas
extirpadas
1	R	RLQ	central	1	Comedón carcinoma de	Acelular
					conducto
2	R	No canceroso	6:00	3		Células del conducto
	L	Mama	9:00,7:00	3	Micropapillar DCIS	Células del conducto
		izquierda
3	L	LLQ	12:00	3	Carcinoma infiltrado de	Células del conducto
					conducto
4	R	RUOQ	8:00	4	DCIS pagetoide	Células del conducto
5	L	LUOQ	11:00	5	Carcinoma intraconducto	Células del conducto
					in situ
6	R	No canceroso	9:00	2		Acelular
	L	3:00,9:00	6:00	4	Carcinoma invasivo de	acelular
					conducto, DCIS

TABLA 1 (continuación)

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Paciente	Mama	Localización	Localización	Conducto	Patología	Citología
Nº		masa	conducto	Nº
Mamas
extirpadas
7	L	LUOQ	6:00	4	Carcinoma infiltrado de	(1) acelular,
					conducto, DCIS	(2) células del conducto
8	L	LOQ, 3:00	central	2	Carcinoma lobular	Células del conducto
					infiltrado, infiltrando
					conducto
Mamas
unidas
1	R	RUOQ	12:00	2	Adeno ca	Células de carcinoma
2	L	Retroareolar	central	1	Carcinoma de conducto	Células deterioradas
					poco diferenciado
3	R	RUOQ	3:00	3	Carcinoma tubular,	Células
					micropapillar	deterioradas
4	L	Infraareolar	9:00	2	Carcinoma invasivo	Células
					del conducto	deterioradas
5	R	N/A (absceso)	central	1	Conducto lacticífero	Acelular
6	L	LUOQ	3-4:00	1	Fibroadenoma	Células epiteliales
						mamarias benignas
7	R		3:00		Fibroadenoma	Abund. células
						epiteliales, células
						epiteliales mamarias
						benignas
8	R	12:00	12:00	2	Carcinoma invasivo	Acelular, células
					del conducto	de conducto raras
9	R	11:00	11:00	3	Lobular invasivo	Acelular
10	L	UOQ	central	1	Lobular invasivo	Mod. macrófago, sin
						células de conducto
11	L	LUOQ	central	1	Adenocarcinoma	Células esponjosas,
						células de conducto
12	R	RUOQ	3:00	2	Carcinoma atip med	Células esponjosas,
						células de conducto
						raras
R: derecho
L: izquierdo
RLQ: cuadrante superior derecho
LLQ: cuadrante inferior izquierdo
LUOQ: cuadrante superior exterior izquierdo
LOQ: cuadrante exterior izquierdo
RUOQ: cuadrante superior exterior derecho
UOQ: cuadrante superior exterior
DCIS: carcinoma de conducto in situ

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Ejemplo 2

Recuperación de Tinta China de Pezones de Cerdo

El propósito de este experimento fue determina la eficiencia del procedimiento de la invención en la realización del lavado de conductos con un catéter de lumen doble en mamas de cerdos utilizando masaje y/o exprimido para recuperar fluido de los conductos lacticíferos de la mama que incluyen la región distal de los senos lacticíferos en aquellos conductos. Se realizaron tres experimentos, cada uno para probar distintos parámetros del lavado y los procedimientos de recuperación de fluido.

A. Una alícuota de 3 ml de tinta china (color negro) se infundió en un conducto de cerdo A sobre el pezón A mediante un catéter de lumen único. El catéter de lumen único se extrajo y se exprimió la mama resultando en la recuperación de 0,7 ml de tinta (es decir un fluido muy negro). Se insertó un catéter de lumen doble y el conducto se purgó con aproximadamente 10 ml de suero fisiológico tampón fosfato (PBS). Del lumen de salida de flujo del catéter, se recogió fluido de forma serial en 3 tubos, con un volumen de aproximadamente 1 ml cada uno. El primer tubo (T1) produjo fluido negro, y el segundo y el tercer tubo (T2, T3) produjeron fluido limpio. El conducto se purgó con otros 10 ml de PBS y al mismo tiempo se masajeó y se exprimió la mama. La salida de flujo se recogió en 4 tubos, de aproximadamente 1 ml de alícuota en cada tubo. T4-T7 todos produjeron fluido negro. El conducto se purgó con una tercera alícuota de 10 ml de PBS. Se recogieron tres alícuotas de 1 ml cada una sin masajear y exprimir. El fluido T8 fue negro, el fluido T9 fue negro claro, y el fluido T10 fue limpio. La mama se masajeó y exprimió y se recogieron otros tres tubos de aproximadamente 1 ml cada uno (T11, T12 y T13) todos de color negro. En resumen, la tinta total inyectada fue de 3 ml, y el total de PBS infundido fue de 30 ml para un total de 33 ml de fluido. Aproximadamente se recuperaron 15,7 ml de fluido y tinta (en 13 tubos) dejando aproximadamente 17,3 ml de fluido en el conducto. Después de completarse el experimento de lavado, la mama se extirpó para examinar la red de conductos. El conducto estaba intacto, y por lo tanto el procedimiento de lavado se ha realizado en un sistema de conductos intacto.

B. Se infundió una alícuota de 0,5 ml de tinta china en un conducto de cerdo B sobre un pezón B mediante un catéter de lumen único. Se infunde una alícuota de 5 ml de PBS en el mismo conducto mediante el mismo catéter de lumen único para empujar la tinta china hacia las regiones distales del conducto. El catéter de lumen único utilizado para la inyección de fluido de esta forma fue para cuantificar precisamente la cantidad de fluido infundido en el conducto. El catéter de lumen único se extrajo y la mama y el pezón se masajeo y se exprimió. Se recogió una alícuota de 0,3 ml de tinta china/fluido (tubo T1). Un catéter de lumen doble se insertó en el conducto y el conducto se purgó con 10 ml de PBS. Las primeras dos recolecciones de 1 ml cada una se hicieron sin masajear ni exprimir. T2 produjo fluido negro y T3 produjo fluido limpio. Se usaron entonces acciones de masaje y exprimido para recoger alícuotas de 1 ml en 4 tubos más: T4, T5, T6, y T7 produjeron fluido negro. Se infundieron 10 ml más de PBS en el conducto y se aplicó masaje y exprimido para producir 4 tubos de 1 ml cada uno de fluido negro (T8-T11). T12 fue fluido recogido con purgado solamente, y el fluido estaba limpio. Se infundieron 10 ml de PBS en el conducto, seguidos y concurrentes con masajeado y exprimido para recoger 5 tubos de 1 ml cada uno, T13-T17; todo el fluido recogido en estos tubos fue negro. Para resumir, el volumen total infundido de tinta y PBS fue de aproximadamente 35,5 ml; aproximadamente 17,3 ml de fluido se recogieron (en 17 tubos), y el fluido remanente estimado en la mama fue de aproximadamente 18,2 ml. El experimento muestra que el lavado de conductos con masaje y exprimido puede recuperar tinta china infundida desde regiones distales del conducto lacticífero de la mama. La mama se extirpó y analizó para mostrar que no se produjo penetración o fuga en el conducto accedido.

C. Se infundió el conducto C en el pezón C con 0,1 ml de tinta china mediante un catéter de lumen único. El mismo catéter se utilizó para inyectar 8 ml de PBS inmediatamente a continuación de la infusión de tinta. El catéter se extrajo y la mama se masajeó y exprimió para producir 50 \mul de fluido limpio (0,05 ml). Se insertó un catéter de lumen doble y el conducto se purgó con PBS mediante la combinación de purgado, masaje y exprimido (purgado con 10 ml de PBS cada vez, por un total de 30 ml), y el fluido recogido en 22 tubos (de aproximadamente 1 ml cada uno). Para resumir, el fluido total infundido en el conducto (incluyendo la tinta) fue de 38,1 ml; se recogieron aproximadamente 22,05 ml. El fluido restante en la mama se estimó que era aproximadamente 16,05 ml. La mama se extirpó y se analizó para ver ruptura de conductos o fugas y no encontrándose ninguna de las dos. Para cuantificar la recuperación de tinta infundida, los 22,05 ml se llevaron a volumen de 40 ml con PBS, y se hizo un tubo de control con 0,1 ml de tinta más 39,9 ml de PBS, para un volumen total para el control de 40 ml. Se hicieron diluciones seriadas, por ejemplo ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64. La dilución de 1/8 se utilizó en ambas muestras para hacer un escáner de longitud de onda en un espectrofotómetro para determinar qué longitud de onda es óptima para la lectura de tinta china. La absorción de luz para cada muestra se registró a 224 y 227 nm. La tasa de recuperación del fluido de lavado se calculó como sigue:

Tasa = densidad óptica de la muestra de prueba (OD) dividida por el control OD en la misma dilución.

Los resultados del juego completo de experimentos de tinta china indican que el lavado de conductos que usa una combinación de purgado con PBS y concomitante y/o subsiguiente masaje y/o exprimido de la mama puede lavar no sólo los senos lactitíferos, así como también regiones más distales de la arquitectura de conductos. Los experimentos también demuestran que el procedimiento de lavado con un catéter de lumen dual resulta en el mantenimiento de la integridad estructural de los conductos que se lavaron.

Ver la Tabla 2 para los resultados de rendimiento de conductos de cerdos A & B.

La Tabla 3 muestra los valores de absorción para el fluido que contiene tinta china producido del conducto C. A partir de estos valores utilizando la tasa anterior, se determinó un rendimiento promedio de 87,5%. Por ejemplo a una absorción de longitud de onda de 227 nm, a una dilución de 1/32 la muestra produjo una absorción de 0,2803; este valor dividido por la absorción del control de la dilución 1/32 (valor 0,3272) produce 0,86. Para una dilución 1/16, el valor de muestra 0,5824 dividido por el valor de control 0,6801 (ambos a 227 nm) produjo 0,86; y para una dilución 1/8, valor de muestra 1,0897 dividido por el valor de control 1,2332 produjo 0,88; para una dilución de ¼ valor de muestra 2,4340 dividido por el valor de control 2,7111 produjo 0,90; para un promedio de los 4 valores de recuperación de 87,5% en los tubos de muestra.

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TABLA 2 Conductos A & B de Recuperación de Fluido & Tinta

	Conducto	Tubo/rendimiento	Acción tomada	Color del fluido recogido
1	A	T0/0,7 ml	\begin{minipage}[t]{57mm}Se inyectaron 3 ml de tinta en el pezón y se exprimió el pezón\end{minipage}	Negro
2	A	T1	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml de PBS en el pezón y se usan 3 tubos para recoger fluido - no se masajea ni exprime\end{minipage}	Negro
3	A	T2	''	Limpio
4	A	T3	''	Limpio
5	A	T4	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml de PBS y se masajeó y se exprimió durante la infusión y la recogida de fluido en 4 tubos\end{minipage}	Negro
6	A	T5	''	Negro
7	A	T6/	''	Negro
8	A	T7	''	Negro
	A	T8/	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml de PBS y se recogió fluido serialmente en 3 tubos cada uno de 1 ml; no se masajeó ni exprimió\end{minipage}	Negro
9	A	T9	''	Negro claro
10	A	T10	''	Limpio
11	A	T11	La mama se masajeó y se exprimió	Negro
12	A	T12	''	Negro
13	A	T13	''	Negro
14	B	T1/0,3	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 0,5 ml de tinta negra en el conducto; mediante exprimido y masaje se recogió algún fluido\end{minipage}	Negro
15	B	T2	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml en el conducto usando el nuevo catéter de lumen dual, las dos primeras recogidas de aproximadamente 1 ml cada una se hicieron sin masaje ni exprimido\end{minipage}	Negro
16	B	T3	''	Limpio
17	B	T4	\begin{minipage}[t]{57mm}Se utilizaron masajes y exprimido para recoger 4 alícuotas de 1 ml cada una\end{minipage}	Negro

TABLA 2 (continuación)

	Conducto	Tubo/rendimiento	Acción tomada	Color del fluido recogido
18	B	T5	''	Negro
19	B	T6	''	Negro
19	B	T7	''	Negro
20	B	T8	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml de PBS y se usaron 4 tubos para recoger seriadamente alícuotas de 1 ml; se utilizó masaje y exprimido a lo largo de todo el procedimiento de recolección\end{minipage}	Negro
21	B	T9	''	Negro
22	B	T10	''	Negro
23	B	T11	''	Negro
24	B	T12	\begin{minipage}[t]{57mm}Se recogió fluido para este tubo utilizando sólo purgado, ni masaje ni exprimido\end{minipage}	Limpio
25	B	T13	\begin{minipage}[t]{57mm}Se infundieron 10 ml de PBS y se usaron 5 tubos más para recoger seriadamente 1 ml de fluido cada uno\end{minipage}	Negro
26	B	T14	''	Negro
27	B	T15	''	Negro
28	B	T16	''	Negro
29	B	T17	''	Negro

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TABLA 3 Absorbancia de la Muestra vs. Control

Identificación de muestra	224 nm longitud de onda	227 nm longitud de onda
Control 1/64	0,1244	0,1365
Control 1/32	0,3088	0,3272
Control 1/16	0,6527	0,6807
Control 1/8	1,1899	1,2332
Control ¼	2,6388	2,7111
Control ½	3,5350	3,5562
Control 1	3,4839	3,5562

Muestra 1/64	0,1445	0,1543
Muestra 1/32	0,2712	0,2803
Muestra 1/16	0,5720	0,5824

TABLA 3 (continuación)

Identificación de muestra	224 nm longitud de onda	227 nm longitud de onda
Muestra 1/8	1,0854	1,0897
Muestra ¼	2,4469	2,4340
Muestra ½	3,3967	3,4593
Muestra 1	3,6600	3,5562

Ejemplo 3

Recolección de Células en el Fluido de Lavado de Conducto Lacticífero de Piel de Cerdo Utilizando Infusión de Fluido, Exprimido, Masaje & Succión

El propósito del experimento era determinar la eficiencia de un procedimiento de lavado con y sin exprimir y masajear mediante la comprobación de la densidad de células del fluido recuperado y células en fracciones recogidas seriadamente de fluido de conducto lacticífero de cerdo.

Se obtuvo para el experimento una piel de cerdo con 4 mamas. Se lavaron cuatro conductos de cerdo en 4 pezones con un catéter de lumen dial (Fuji I) para aspiración de fluido de conducto con PBS.

El catéter de lumen dual Fuji I es construido especialmente por Windy Hill Technology (artículo IEE 4N
WH081598-1) por Infinity Extrusion & Engineering, ubicado en Santa Clara, CA; el catéter tenía las siguientes especificaciones: 0,61 mm (0,024 pulgadas) de diámetro exterior de lumen de infusión; 0,48 mm (0,019'') de diámetro interior de lumen de infusión; 0,43 mm (0,017'') de diámetro interior de lumen de recogida; la longitud del catéter es 40 cm, hecho de material polimérico; marcadores de profundidad colocados sobre el catéter a 0,6, 0,8, 1,0 y 1,2 cm.

Para cada conducto, el catéter de lumen dual se insertó en el conducto lacticífero de cerdo. El purgado se produjo con PBS desde el lumen de entrada de flujo del catéter, y el fluido de lavado se recogió de los lúmenes de salida de flujo. Se recogieron los primeros 2 tubos. El lumen de salida de flujo se cerró y se infundió suficiente fluido hasta que se sintió resistencia (aproximadamente 5 ml de PBS). La mama y el pezón de la piel se masajearon y se exprimieron y se aplicó succión al lumen de salida de flujo para recoger el fluido de lavado. Se infundió nuevo PBS periódicamente hasta un punto de resistencia y la mama y el pezón se masajearon y exprimieron, y el fluido se recuperó mediante succión en la salida; por ejemplo masaje; exprimido; succión 100 infusión 100 masaje; exprimido; succión 100
infusión 100 repetido varias veces. Se infundieron por conducto un total de aproximadamente 30 a 35 ml de fluido de lavado. El fluido de lavado se recogió seriada y fraccionariamente en volúmenes de aproximadamente 1 ml por tubo. La cantidad total de recogida para cada conducto fue de 12 tubos de aproximadamente 1 ml cada uno; los primeros 2 ml recogidos sin exprimir, masajear o succionar, y los restantes 10 tubos recogidos mediante infusión, masaje y exprimido, etc. cíclicos como se acaba de describir. Los tubos 1 y 2 (T1 & T2) recogieron fluido sólo de purgado. Los tubos 3-12 (T3-T12) recogieron fluido resultante de una combinación de purgado junto con masaje y exprimido de la mama y del pezón y succión aplicada al catéter de salida de flujo con una jeringa.

Las células recogidas de cada fracción se centrifugaron sobre un portaobjeto de vidrio para su análisis. Una alícuota de 50 \mul de fluido recogido de cada tubo se utilizó para preparar un portaobjeto Cytospin^{TM} utilizando cytospin 3 cytocentrifuge (Shandon Lipshaw, ubicada en Pittsburg, PA). Las células se secaron al aire y se tiñeron mediante el procedimiento Diff-Quick^{TM} (disponible en Dade Behring, Inc., Newark, DE distributors; tinte hecho en Suiza por Dade Behring). La densidad celular de cada portaobjetos se estimó mediante porcentaje de semejanzas de confluencia de cultivo de células.

Los resultados de las recogidas y análisis de las células preparadas se informa en la Tabla 4. Las conclusiones que pueden extraerse de este experimento es que el lavado con exprimido (incluyendo masaje) y succión incrementa los números de células en el fluido de lavado recogido en comparación con el número de células recogido con el simple lavado sin exprimido o succión. El procedimiento de lavado con masaje y exprimido y succión recupera células no sólo de los conductos y senos lacticíferos, sino también de las regiones de la arquitectura de conductos más distal que el seno, como se indica mediante la recuperación de células antes y después de masajear y exprimir en estos experimentos de recogida fraccionada.

TABLA 4

Tubo de recogida	Pezón Nº 1	Pezón Nº 2	Pezón Nº 3	Pezón Nº 4	Promedio
1	disperso	disperso	disperso	poco	disperso
2	60-80%	90-100%	0	poco	41%
3	10%	5-20%	90%	100%	53%
4	100%	100%	90-100%	100%	99%
5	60-80%	100%	90-100%	100%	93%
6	100%	100%	50%	80-90%	84%
7	90-100%	50-70%	50%	50-60%	65%
8	60-80%	30%	50%	10-20%	41%
9	40-50%	20-30%	20%	20-30%	29%
10	30%	20%	20%	20%	23%
11	20%	10-20%	10%	10%	14%
12	15-20%	10-20%	<5%	10%	12%
%= porcentaje de similitud de confluencia de cultivos celulares

Ejemplo 4

Lavado de Conductos Lacticíferos de Conejos Vivos con Exprimido y Masaje para Obtener Células que tengan un Origen en el Conducto Distal del Seno Lacticífero

Se utilizaron conejos de Nueva Zelanda de Kralek Farm (ubicada en Turlock, CA). Se usaron los conejos WHT#8 y WHT#9. Los conductos lacticíferos se lavaron con PBS utilizando un catéter Fuji modificado. El catéter de lumen dual Fuji I está hecho especialmente como se describe en el Ejemplo 3, con modificaciones adicionales de tamaño para su uso en conejos. El fluido de lavado se recogió seriada y fraccionadamente en cantidades de aproximadamente 200 \mul por tubo. Las primeras dos fracciones de cada conducto se recogieron a partir de la recuperación de fluido de purgado sin la aplicación de presión externa a las mamas. Las siguientes cuatro fracciones se recogieron después de la infusión de fluido seguida y concurrente con exprimido y masaje de la mama y el pezón.

Cada fracción de 200 \mul se utilizó para preparar un portaobjetos Cytospin^{TM} (Shandon Lipshaw, ubicada en Pittsburg, PA). Las células se secaron al aire y se tiñeron mediante el procedimiento Diff-Quick^{TM} (disponible en Dade Behring, Inc., Newark, DE distributors; tinte hecho en Suiza por Dade Behring). Seis conductos del conejo WHT#8 se lavaron, y así se recogieron 6 fracciones de cada conducto para un total de 36 fracciones de 200 \mul cada una, y los correspondientes 36 portaobjetos. Del conejo WHT#9 se lavaron cinco conductos, se recogieron 6 fracciones de cada conducto para un total de 30 fracciones de 200 \mul cada una, y los correspondientes 30 portaobjetos. Se evaluaron el tipo de célula y el número de células a partir de estos portaobjetos. La citología se describe a continuación: "Racimos" de células que contienen más de 11 células en un grupo epitelial; "Grupos" de células conteniendo de aproximadamente 4 a 10 células en un grupo epitelial; "Células Mezcladas" incluidas macrófagas, células esponjosas, leucocitos, y células epiteliales individuales (incluyendo por ejemplo células simples, dobles o triples). El "Número de Célula" de las células mezcladas o individuales se determinó mediante la observación del portaobjetos bajo un microscopio a 40X de aumento y tomando una cuenta promedio de 4 campos sobre ese portaobjetos. Para las células mixtas de cantidades inferiores que pueden contarse en un campo objetivo de 40X: "Pocas" representa menos de 50 células totales en cada portaobjeto; "Disperso" representa más de 50 células en un portaobjeto; pero no suficientes para contarse por un campo objetivo de 40X.

Los resultados del experimento se muestran en la Tabla 5, e indica un bolo de células recuperado con una fracción de purgado inicial (Tubos 1) seguido por una recuperación baja en la segunda recogida de fracción de purgado (Tubos 2). Con la adición de infusión o más fluido y masaje y exprimido, se recuperó un nuevo bolo de células (Tubos 3). El experimento demuestra que el valor y el requerimiento de masaje y exprimido en un procedimiento de lavado para recuperar células en el sistema distal de conductos del conducto y seno lacticíferos.

TABLA 5

GRUPO EPITELIAL	CELULAS MEZCLADAS
Conejo \textamp	Racimo	Grupo	# por 40X	Disperso	Pocos	Sin células
Tubo #	#/conductos	#/conductos	#/conductos	(conductos)	(conductos)	(conductos)
WHT#8-1	101/5	122/5	115/2	2	2	-
WHT#8-2	31/3	37/3	39/2	1	2	1
WHT#8-3	116/5	152/5	118/2	4	-	-
WHT#8-4	54/4	46/4	39/2	2	1	1
WHT#8-5	25/2	35/3	58/2	1	2	1
WHT#8-6	13/3	21/2	16/1	1	3	1

WHT#9-1	68/4	87/3	75/3	-	1	-
WHT#9-2	30/3	24/3	43/3	-	1	1
WHT#9-3	70/4	68/4	132/5	-	-	-
WHT#9-4	4/1	11/2	117/2	2	1	-
WHT#9-5	8/3	17/3	52/4	-	1	1
WHT#9-6	9/3	13/3	39/3	1	-	1

Ejemplo 5

Recuperación de Tinte y Rendimiento Celular mediante Lavado del Conducto en Paciente Humano Utilizando Masaje y Exprimido

Una paciente femenina de 47 años de edad (ID #9025) se presentó voluntaria para el procedimiento de lavado y masaje y exprimido de un único conducto lacticífero. Se administró anestesia local al pezón derecho en un bloque sellado mediante inyección subcutánea de lidocaina (sin epinefrina) desde la periferia de la areola hacia el pezón. El médico administró un volumen total de 10 cc de lidocaina (concentración 10 mg/ml) utilizando múltiples inyecciones.

Se accedió un orificio de conducto de la mama derecha mediante una serie de dilatadores de galactografía (disponibles en Medical Device Technologies, Inc., Gainsville, Florida) incrementándose en tamaño para dilatar el orificio del conducto y proporcionar una abertura suficientemente grande para permitir el acceso de un catéter de lumen
dual.

Se insertó un catéter de lumen dual Fuji I en el conducto, fabricado como se describe en el Ejemplo 3, después de la extracción del dilatador de galactografía más grande. El conducto se infundió con 1 cc de tinte de lymphazurin 1% (fabricado por U.S. Surgical Corp., Norwalk, CT 06858 de Ben Venue Labs, Inc. Bedford OH 44146). A continuación de la infusión del tinte, se infundieron 5 cc de suero fisiológico utilizando el mismo catéter. El conducto se infundió entonces con más suero fisiológico. Durante el purgado (infusión), el fluido de la salida de flujo se recogió en 4 tubos, de aproximadamente 1 cc cada uno (tubos T1-T4). No se aplicó masaje ni exprimido a la mama o al pezón. El color del líquido recogido en los tubos cambió de azul (T1) a azul muy claro (T4). Para recoger una muestra final, la mama se masajeó y se exprimió y se recogió un quinto tubo de aproximadamente 1 cc (T5). T5 era de color azul. El color del fluido se midió con un espectrofotómetro en el pico de densidad óptica (OD) para lymphazurin (634 nm de longitud de onda). Los resultados se mostraron en la Tabla 6.

Las muestras de fluido se centrifugaron en una centrífuga (IEC Centra CL3R; disponible en Shandon Lipshaw, ubicada en Pittsburg, PA) a 2500 rpm durante 10 minutos. Se descartó el sobrenadante. Las células se suspendieron en 100 \mul de PBS. Cada tubo/muestra se centrifugó sobre un portaobjetos de vidrio utilizando la centrífuga Cytospin® y las células se secaron al aire. Las células sobre el portaobjetos se tiñeron con tinte Diff-Quick® (disponible en Dade Behring, Inc., Newark, DE Distributors; tinte hecho en Suiza por Dade Behring). Los resultados de la recuperación celular se muestran en la Tabla 6. Las células se contaron y clasificaron como se describe en el Ejemplo 4, y la Tabla 5. El último tubo, T5 produjo significativamente más células como resultado del masaje y exprimido que el tubo previo T4 que recogió la última serie de recogidas realizadas sin el beneficio de masajear y exprimir la mama.

TABLA 6

Tubos/acción	-OD@634 nm	Racimo epitelial	Grupo epitelial	Células mezcladas por campo 40x
T1/sólo purgado	No realizado	93	105	62
T2/sólo purgado	4,5	10	24	17
T3/sólo purgado	4,5	29	63	34
T4/sólo purgado	1,2	2	7	disperso
T5/lavado + masaje y exprimido	4,5	11	17	42

Ejemplo 6

Rendimiento de Células por Lavado de Conductos de Paciente Humana Utilizando Masaje y Exprimido

Se lavó un único conducto en una paciente femenina humana (69 años de edad) ID #9014 para demostrar que el rendimiento celular se incrementa y optimiza con técnicas de lavado combinadas con exprimido y masaje de la mama. Se recogieron muestras de fluido seriadas y fraccionarias durante el procedimiento de lavado, y las muestras se analizaron para cuantificar el rendimiento celular. Se administró anestesia local al pezón derecho en un bloque sellado mediante inyección subcutánea de lidocaina (sin epinefrina) desde la periferia de la areola al pezón. El médico administró un volumen total de 12 cc de lidocaina (concentración 10 mg/ml) utilizando múltiples inyecciones.

Se accedió un orificio de conducto sobre la mama derecha mediante una serie de dilatadores de galactografía (disponibles en Device Technologies, Inc., Gainsville, Florida) incrementando el tamaño para dilatar el orificio del conducto y proporcionar una abertura suficientemente grande para permitir el acceso de un catéter de lumen dual.

Se insertó un catéter Fuji I (ver el Ejemplo 3 anterior) con un lumen dual en el conducto. El conducto se lavó con suero fisiológico, y este primer fluido se recogió en un tubo en el lumen de salida de flujo (T1 = 1 cc). El fluido de lavado se introdujo entonces de forma continua y la mama se masajeó y se exprimió. El fluido se recogió seriada y fraccionadamente en tres tubos (T2, T3 y T4), recogiendo un volumen de aproximadamente 1 cc en cada tubo. Los tubos se centrifugaron en la centrífuga como se describe en el Ejemplo 5, se volvieron a suspender en 100 ml de PBS, y se centrifugaron sobre portaobjetos como se describe en el Ejemplo 5. Los resultados de la cuantificación de las células en cada portaobjetos puede resumirse como sigue: T1 produjo sólo unas pocas células individuales; T2 y T3 (recogidos después y durante el masaje y exprimido) produjeron más de 100 células mezcladas por campo de objetivo de lente 40x (bajo un microscopio); T4 (también recogido durante y después de la ampliación) produjo 34 células por campo de objetivo de lente 40x.

A pesar que la invención anterior se ha descrito en algún detalle a modo de ilustración y ejemplo con propósitos de clarificar la interpretación, será fácilmente evidente para aquellos con conocimientos ordinarios en la técnica en vista de las indicaciones de esta invención que pueden hacerse algunos cambios y modificaciones a la misma.

Claims

1. Catéter (50, 100) adaptado para el lavado de un conducto lacticífero de una glándula mamaria, comprendiendo el catéter un cuerpo de catéter (52) que tiene un primer lumen (56, 110) y un segundo lumen (54), donde el primer lumen (56, 110) es un lumen de entrada de flujo adaptado para la introducción de un fluido de lavado en un conducto lacticífero de una glándula mamaria y un segundo lumen (54) es un lumen de salida de flujo adaptado para la recogida del fluido desde el conducto lacticífero de la glándula mamaria, de forma que puede lograrse la entrada y salida de flujo de fluido de lavado en el catéter hacia y desde el conducto, donde el catéter tiene un extremo para la inserción en el conducto lacticífero de la glándula mamaria en el cual el primer lumen (56) termina en un puerto proximal (60, 120) y el segundo lumen (54) termina en un puerto distal (58), estando el extremo distal en la extremidad del catéter y estando el puerto proximal (60) espaciado en el catéter del puerto distal, teniendo el catéter una única región de lumen desde el puerto proximal al puerto distal y una región de lumen dual donde el primer y el segundo lumen se extienden uno a lo largo del otro, y donde el cuerpo del catéter (52) tiene un diámetro máximo en la región de lumen dual en el rango de 0,8 milímetros a 2,5 milímetros y tiene un diámetro en la región de lumen único en el rango de 0,5 milímetros a 1,5 milímetros.

2. Dispositivo médico según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que la distancia entre el puerto distal (58) y el puerto proximal (60) está en el rango de 0,1 centímetros a 1 centímetro.

3. Dispositivo médico según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por el hecho de que el cuerpo del catéter (52) tiene una longitud en el rango de 3 centímetros a 50 centímetros.

4. Dispositivo médico según la reivindicación 3, caracterizado por el hecho de que el cuerpo del catéter (52) tiene una longitud en el rango de 10 centímetros a 25 centímetros.

5. Dispositivo médico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por el hecho de que incluye además un centro proximal (62) que incluye dos puertos de centro (64, 66), cada uno acoplado de forma fluida a uno de dichos lúmenes (54, 56).

6. Dispositivo médico según la reivindicación 7, caracterizado por el hecho de que uno de dichos puertos de centro (66) está adaptado para introducir el catéter en el conducto lacticífero de una glándula mamaria sobre un cable de guía.

7. Dispositivo médico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por el hecho de que el puerto proximal (60) está dispuesto sobre un lado lateral del cuerpo del catéter (52).