JP2003504073A

JP2003504073A - Ｂａｇ発現のレベルを測定することによる、癌患者の予後を決定するための方法

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Publication number: JP2003504073A
Application number: JP2001509546A
Authority: JP
Inventors: ジョンシー．リード，
Original assignee: ザバーナムインスティチュート
Priority date: 1999-07-09
Filing date: 2000-07-07
Publication date: 2003-02-04
Also published as: AU5789500A; WO2001004343A2; EP1200618A2; WO2001004343A3; IL147486A0; WO2001004343A9; US20080166733A1; US7951544B1; CA2379264A1

Abstract

(57)【要約】本発明に従って、癌に罹患した患者における、無疾患または全体の生存の予後を決定するための方法が提供される。本発明に従って、癌腫瘍を有する個体における、腫瘍の再発の危険性または腫瘍の拡大の危険性を予想するための方法もまた提供される。本発明に従って、腫瘍転移の危険性を決定するために癌患者をスクリーニングするための方法、癌に罹患した患者について適切な一連の処置を決定するための方法；および本発明の方法を実施する際に使用するキットもまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本明細書中に記載される発明の一部は、ＮＩＨ補助金ＣＡ−６７３２９の部分
的研究援助の過程でなされた。政府は、本発明に特定の権利を有し得る。

【０００２】（発明の分野）本発明は、概して癌の進行または拡大の危険性の決定に関する。

【０００３】（背景情報）臨床上の癌における予後は、多いに関心および興味がもたれる領域である。最
も効果的な治療の計画を立てるために、悪性細胞の攻撃性および腫瘍の再発また
は拡大の尤度を知ることは重要である。例えば、乳癌は、いくつかの選択肢のス
トラテジーにより処理される。９人に１人の女性が、遍くその寿命のある時点に
おいて乳癌を発症する。いくつかの場合において、局所部位治療が利用され、こ
の治療は乳房切除または放射線を用いるかもしくは用いない腫瘍摘除からなり、
一方で他の場合において、疾患の拡大が検出されるかまたは疑われる場合、全身
治療（例えば、化学療法またはホルモン治療）が始められる。腫瘍摘除および局
所放射線治療で処置された初期段階の乳癌を有する女性の中で、１０〜２０％が
再発を経験し、そして３０〜４０％が、しばしば死に至る遠隔転移疾患を発症す
る（Ｆｉｓｃｈｅｒｅｔａｌ．１９９１，Ｌａｎｃｅｔ３３８：３２７−
３３１）。

【０００４】個々の乳癌患者についての現在の処置決定は、しばしば以下に基づく：（１）
疾患に関与する腋窩リンパ節の数、（２）エストロゲンレセプターおよびプロゲ
ステロンレセプターの状態，（３）原発性腫瘍のサイズ、（４）診断時の疾患の
段階。ＤＮＡ異数性および増殖速度（Ｓ期パーセント）は、疾患の経過を推測す
る際に役立ち得る。さらに、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ腫瘍タンパク質（ｏｎｃｏｐｒｏ
ｔｅｉｎ）の過剰発現は、転移性疾患のおそれのある乳癌患者を予測することが
示されており、そして新規な治療ストラテジーが、このレセプターを標的化する
ために開発されてきた（Ｓｌａｍｏｎら、米国特許第４，９６８，６０３号；Ｓ
ｌａｍｏｎｅｔａｌ．１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：７０７−７１２
）。しかし、これらのさらなる因子を用いてさえ、開業医は、なお全ての乳癌患
者について疾患の経過を正確に予測することができない。より強力な処置の利益
を受け得るより再発しそうな患者から、さらなる治療を必要としなくてよい予後
の良好な患者を選別するために、新しいマーカーを同定する必要が明らかに存在
する。

【０００５】このことは、腋窩リンパ節に進行していない乳癌の場合に特に正しい。原発性
乳癌の外科的切除の直後に開始するアジュバント内分泌治療およびアジュバント
化学療法が、いくつかのこれらの節陰性（ｎｏｄｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ）患者に
おいて利益となり得るという証拠が、予想による無作為の臨床試験において現在
では存在する。これにより、全てでない場合は大部分の節陰性乳癌患者は、アジ
ュバント治療のいくつかの形態について考慮されるべきであるということが公式
および非公式に推奨された。しかし、これらの患者の大部分（約７０％）は、さ
らなる処置無しに、手術および／または放射線治療後の長期の生存を享受するの
で、これらの患者の全てにアジュバント治療を進めることは不適切である。従っ
て、「治癒した」節陰性の患者を、必然的に再発する患者と区別し、その結果後
者のみを処置する方法の必要性が存在する。従って、一般的に一旦原発腫瘍が検
出されると、腫瘍再発性または拡大性をこれらの患者および癌患者において推定
する一般的方法への多大な必要性が存在する。本発明は、これらの必要性を満た
し、そして関連する利点をも提供する。

【０００６】（発明の要旨）本発明に従って、癌を罹患する患者における疾患のないことまたは全体的な生
存の予後を決定するための方法が提供される。１つの実施形態において、原発腫
瘍組織における高レベルまたは「過剰産生」のＢＡＧタンパク質が、腫瘍再発ま
たは拡大の無いこと、および従って長期間の無疾患または全体的生存と、予期せ
ぬ驚くべき高い相関を示すことが見出された。従って、本発明は、癌処理におけ
る有意な進歩を、有利に提供する。なぜならば、腫瘍再発または拡大の危険性を
有する患者の初期の同定は、生存のための有意に増強された可能性を有する、集
中的な初期の処置を可能にするからである。

【０００７】癌腫瘍を有する個人における腫瘍再発または拡大の危険性を予測するための方
法；腫瘍転移の危険性を決定するために癌患者をスクリーニングするための方法
；癌を罹患する患者の処置の正確な経過を決定するための方法；および本発明の
方法を実施する際に使用するためのキットもまた提供される。

【０００８】（発明の詳細な説明）本発明に従って、癌を罹患する患者における無疾患生存または全体的生存の予
後を決定するための方法が提供され、この方法は、以下：（ａ）前述の患者由来の癌性組織サンプルにおけるＢＡＧ遺伝子発現レベルを
決定する工程；（ｂ）この患者を、患者の第１のグループまたは第２のグループに属するとし
て分類する工程を包含し、ここでＢＡＧ遺伝子の高レベルの発現を有する患者の第１のグループは、ＢＡＧ
遺伝子の低レベルの発現を有する患者の第２のグループと、腫瘍再発または拡大
に罹患する異なる可能性を有するとして分類される。

【０００９】本発明の方法は、癌性細胞にけるＢＡＧ発現の異常なレベルと、患者における
無癌生存の可能性との間の新しく発見された相関を利用する（例えば、実施例の
部を参照のこと）。本発明の方法は、患者の癌性組織におけるＢＡＧの発現のレ
ベルを決定する工程を包含する。次いで患者は、ＢＡＧの高レベルの発現を有す
る患者の第１のグループ、またあるいは、ＢＡＧの低レベルの発現を有する患者
の第２のグループに属するとして分類され得る。癌を罹患する患者についての予
後の決定は、その患者が帰属されたグループが、その患者が帰属されなかったグ
ループに対して、無疾患生存または全体的生存のより高いかもしくはより低い可
能性と相関するか否かを決定することによりなされ得る。

【００１０】例えば、本発明の１つの実施形態において、ＢＡＧ遺伝子の過剰産生または高
レベルが、腫瘍再発または拡大の減少した危険性（例えば、局所的再発もしくは
拡大および／または転移）を有する患者と相関するということが発見された。従
って、この実施形態において、高レベルのＢＡ遺伝子の発現を有する第１のグル
ープに属する患者は、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現を有する患者の第２のグル
ープと比較して、腫瘍再発または拡大の減少した危険性を有するとして分類され
る。この実施形態は、乳癌の患者の予後を評価する際に特に有用である。

【００１１】例えば、この実施形態において、ＢＡＧ遺伝子発現が、決定された基底レベル
（本明細書中では参照レベルともいう）を越える場合、減少した腫瘍再発または
拡大における有意な因子となることが見出されている。腫瘍細胞の決定された基
底レベルを超える場合、ＢＡＧ発現レベルは、「高い」または「過剰産生された
」として特徴付けられ、そして、特に乳癌の場合、腫瘍再発または拡大の減少し
た危険性を示す。ＢＡＧタンパク質発現の、過剰産生のない単なる存在は、これ
までに腫瘍再発または拡大の危険性とは全く関連付けられていない。

【００１２】本発明の別の実施形態において、高レベルのＢＡＧ遺伝子発現は、腫瘍再発ま
たは拡大の増加した危険性を有する患者と相関する。従って、この実施形態にお
いて、ＢＡＧ遺伝子の高レベルの発現を有する患者の第１のグループに属する患
者は、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現を有する患者の第２のグループと比較して
、腫瘍再発または拡大の増加した危険性を有するとして分類される。

【００１３】本発明のさらに別の実施形態において、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現は、腫
瘍再発または拡大の減少した危険性を有する患者と相関する。従って、この実施
形態において、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現を有する患者の第２のグループに
属する患者は、ＢＡＧ遺伝子の高レベルの発現を有する患者の第１のグループと
比較して、腫瘍再発または拡大の減少した危険性を有するとして分類される。

【００１４】本発明の別の実施形態において、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現は、腫瘍再発
または拡大の増加した危険性を有する患者と相関する。従って、この実施形態に
おいて、ＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現を有する患者の第２のグループに属する
患者は、ＢＡＧ遺伝子の高レベルの発現を有する患者の第１のグループと比較し
て、腫瘍再発または拡大の増加した危険性を有するとして分類される。

【００１５】本発明の方法は、新形成疾患（固形腫瘍および造血癌の両方を含む）を有する
個体の、疾患が無いかまたは全体的な生存の予後において有用である。例示的な
新形成疾患としては、癌（例えば、腺癌および黒色腫）；および肉腫（例えば、
種々の白血病またはリンパ腫）が挙げられる。特に目的の新形成疾患は、乳癌、
前立腺癌、肺癌、結腸癌、白血病、リンパ腫、および口部癌であり；さらに特に
乳癌である。

【００１６】本明細書中で使用される場合、用語「癌再発」および「腫瘍再発」、ならびに
その文法的変形は、癌の診断後の、新形成性細胞または癌性細胞のさらなる増殖
を言う。特に、さらなる癌性細胞増殖が癌性組織において起きる場合に、再発が
起こり得る。同様に、「腫瘍拡大」は、腫瘍細胞が局所的または遠隔の組織およ
び器官に播種する場合に、起きる；従って、腫瘍拡大は、腫瘍転移を含む。

【００１７】本明細書中で使用する場合、句「無疾患生存」とは、このような腫瘍再発およ
び／または拡大のないこと、および患者の寿命に対する癌の影響に関する、診断
後の患者の結果をいう。句「全体的生存」とは、患者の死因が直接癌の影響には
起因しない可能性に関わらず、診断後の患者の結果をいう。句「無疾患生存の可
能性」、「再発の危険性」およびその変形は、癌の診断後の患者における腫瘍再
発または拡大の確率をいい、ここでこの確率は、本発明のプロセスに従って決定
される。

【００１８】癌の性質に依存して、適切な患者サンプルが得られる。本明細書中で使用され
る場合、句「癌性組織サンプル」とは、癌性腫瘍から得られた任意の細胞をいう
。転移していない固形腫瘍の場合において、外科的に取り出された腫瘍由来の組
織サンプルは、代表的に得られ、そして従来の技術により試験するために調製さ
れる。あるいは、体液サンプル（例えば、リンパサンプル、血液サンプルまたは
血清サンプル）または滲出液サンプル（例えば、癌性器官滲出液（例えば、乳房
からの滲出液））は、集められ得、そして分析されるサンプルとして使用され得
る。白血病の場合、リンパ球または白血性細胞が得られ、そして適切に調製され
る。同様に、転移した癌の場合、細胞は、体液サンプル（例えば、リンパ液、血
液、血清）または遠位感染器官またはその滲出液から引き抜かれ得る。ＢＡＧレ
ベルは代表的には患者の癌性細胞内で測定されるが、ＢＡＧのレベルはまた、分
泌されたか、そうでなければ（例えば、細胞破裂により）細胞から放出されたＢ
ＡＧの結果として、体液（例えば、血清）において測定される。

【００１９】本明細書中に示されるように、癌患者の予後を決定するための本発明の方法は
、以下の工程：（ａ）患者の癌性腫瘍細胞におけるＢＡＧ遺伝子発現のレベルを
決定する工程、および（ｂ）参照レベルと比較した患者の腫瘍サンプルまたは体
液サンプル（例えば、血清）におけるＢＡＧ遺伝子発現に基づいて、腫瘍の再発
または拡散の低い可能性または高い可能性のいずれかを有するものとして患者を
分類する工程を包含する。

【００２０】（ＢＡＧ遺伝子発現のレベルの決定）一旦、患者の組織または細胞のサンプルを得て、無疾患または全体的な生存の
予後は、癌性腫瘍におけるＢＡＧ遺伝子の発現または増幅のレベルの決定を含む
。ＢＡＧ遺伝子発現の測定を、遺伝子発現のレベルが決定され得るように定量的
に行う。次いで、ＢＡＧ発現レベルを使用して、本明細書中に提供される相関に
基づいて、癌患者の無疾患または全体的な生存の予後を決定する。これは、腫瘍
の再発または拡散の可能性が、腫瘍細胞中のＢＡＧ発現のレベルと相関するので
、可能である。例えば、ＢＡＧ発現のレベルが高い場合、特定の癌（例えば、乳
癌）の転移の可能性は低いことが見い出されている。ＢＡＧ発現のレベルが、疾
患状態の評価における単独の因子として使用され得るか、またはさらなる因子（
乳癌の場合において、リンパ節状態、エストロゲンレセプター状態などを含む）
と共に使用され得る。

【００２１】本明細書中で使用される場合、「ＢＡＧ遺伝子」とは、Ｔａｋａｙａｍａら、
１９９９、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
２７４：７８１−７８６（これは、その全体が本明細書中で援用される）に示
されるような、ＢＡＧドメインを含むタンパク質をコードする核酸配列をいう。
例示的なＢＡＧタンパク質としては、ＢＡＧ−１タンパク質（ＢＡＧ−１Ｎ、Ｂ
ＡＧ−１ＭおよびＢＡＧ−１Ｌのようなアイソフォームを含む（以下の議論を参
照のこと））、ＢＡＧ−２タンパク質、ＢＡＧ−３タンパク質、ＢＡＧ−４タン
パク質、ＢＡＧ−５タンパク質の種々のアイソフォーム（好ましくは、ヒト）、
およびＢＡＧドメインおよびその任意の変異または部分欠失を含む任意の他のタ
ンパク質が挙げられ、これらの変異または部分欠失としては、ＢＡＧ遺伝子発現
の増強または低下を生じるか、過剰活性、過小活性または不活性なＢＡＧタンパ
ク質の発現を生じる、変異または部分欠失が挙げられる。他のＢＡＧタンパク質
としては、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ由来のＢＡＧ−１タ
ンパク質およびＢＡＧ−２タンパク質、ならびにＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ由来のＢＡＧ−１ＡおよびＢＡＧ−１Ｂ（Ｔａｋａｙａ
ｍａら、１９９９、前出）が挙げられる。従って、本明細書中で使用される場合
、ＢＡＧタンパク質は、Ｃ末端近辺の保存された４５アミノ酸領域を有し、これ
は、本明細書中でＢＡＧドメインと称する。

【００２２】本発明における使用のために好ましいＢＡＧタンパク質は、ヒトＢＡＧ−１で
ある。ＢＡＧ−１タンパク質は、元来、Ｂｃｌ−２（細胞死の強力なブロッカー
）を結合するその能力によって、アポトーシスの新規レギュレーターとして同定
された。その初期の特徴付け以来、ＢＡＧ−１は、Ｂｃｌ−２と相互作用するだ
けでなく、細胞死の制御に重要であることが公知である多くの他のタンパク質（
Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０、Ｒａｆ−１、ＨＧＦレセプター、ＰＤＧＦレセプター
、およびいくつかのステロイドホルモンレセプターを含む）とも相互作用するこ
とが見い出されている。

【００２３】以前の研究は、マウスおよびヒトの両方において、単一のサイズの転写された
ＢＡＧ−１ｍＲＮＡ分子のみが存在するが、複数のサイズのＢＡＧ−１ポリペ
プチドが翻訳されることを示している（Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、Ｃａｎ
ｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５８：３１１６−３１３１）。マウスにおいて、以
下の２つのアイソフォームが同定されている：正常な長さのＢＡＧ−１（本明細
書中で「ＢＡＧ−１Ｎ」と呼ばれる）；およびより長いＢＡＧ−１ポリペプチド
（すなわち、ＢＡＧ−１Ｌ）。ヒトにおいて、対応するＢＡＧ−１ＮおよびＢＡ
Ｇ−１Ｌアイソフォームの存在に加え、中程度の長さのＢＡＧ−１ポリペプチド
（ＢＡＧ−１Ｍと呼ばれる）もまた翻訳される。マウスおよびヒトについてのＢ
ＡＧ−１ｍＲＮＡに相補的なｃＤＮＡは、米国特許第５，５３９，０９４号、
およびＴａｋａｙａｍａら、１９９８、前出（これらの各々は、その全体が参考
として本明細書中に援用される）に示されている。この２つのマウスアイソフォ
ームＢＡＧ−１ＮおよびＢＡＧ−１Ｌのポリペプチド配列は、それぞれ、２１９
アミノ酸長および３５５アミノ酸長である（Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、前
出を参照のこと）。ヒトＢＡＧ−１１Ｎ（Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、前出
の図３ＣにおいてＢＡＧ−１と呼ばれる）、ＢＡＧ−１ＭおよびＢＡＧ−１Ｌの
ポリペプチド配列は、それぞれ、２３０アミノ酸長、２７４アミノ酸長および３
４５アミノ酸長である。

【００２４】ＢＡＧポリペプチド、および特にＢＡＧ−１（特に、ＢＡＧ−１ＮおよびＢＡ
Ｇ−１Ｌ）は、多くの正常ヒト組織中に存在する。ＢＡＧ−１ＮおよびＢＡＧ−
１Ｌの両方は、多くの癌において異常なレベルで存在することが見い出されてい
る（Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、前出；およびＹａｎｇら、１９９９、Ｅｘ
ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈ２４７：２００−２０７
）。これらの癌としては、例えば、以下が挙げられる：結腸癌、白血病、リンパ
腫、乳癌、前立腺癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌および腎臓癌。しかし、
無疾患または全体的な生存の予後とのＢＡＧ発現レベルの相関は、これまで利用
可能でなかった。

【００２５】ＢＡＧ遺伝子の発現または増幅のレベルの測定は、当業者に公知の１以上の方
法によって行われ得る。例えば、ＢＡＧの増幅または発現レベルは、（ａ）ＢＡ
Ｇポリペプチド、（ｂ）ＢＡＧタンパク質をコードするｍＲＮＡ、（ｃ）ＢＡＧ
遺伝子を構成するＤＮＡの部分、または（ｄ）それらの任意の組み合わせの検出
によって測定され得る。

【００２６】例えば、ＢＡＧ遺伝子発現のレベルは、ＢＡＧポリペプチドに特異的に結合す
る薬剤を使用してＢＡＧタンパク質のレベルを測定することによって検出され得
る。本明細書中で使用される場合、用語「ＢＡＧタンパク質を結合する薬剤」と
は、ＢＡＧタンパク質（例えば、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ−１Ｌ、ＢＡＧ−１Ｍを
含む）および／またはそのポリペプチドフラグメントに特異的に結合し、それに
よてＢＡＧ発現のレベルを検出する任意の分子をいう。このような薬剤は、好ま
しくは、当業者に周知の方法を使用して、検出のために標識される。種々の薬剤
が、ＢＡＧタンパク質（好ましくは、ＢＡＧ−１）を特異的に検出するために本
発明の使用に意図され、これらには、ＢＡＧに特異的に結合することが公知のタ
ンパク質、ＢＡＧに対する抗体（米国特許第５，６４１，８６６号（その全体が
参考として本明細書中に援用される）に記載のような）、またはＢＡＧを特異的
に結合するペプチドが挙げられる。ＢＡＧ−１への結合に好ましい薬剤（例えば
、本発明において使用される抗ＢＡＧ−１抗体（抗体の調製の詳細については、
例えば、Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、前出を参照のこと））は、ＢＡＧ−１
の全てのアイソフォームに結合する。

【００２７】他の非抗体タンパク質もまた、「薬剤」として使用され得る。例えば、ＢＡＧ
タンパク質は、多くのタンパク質（例えば、Ｂｃｌ−１、Ｒａｆ−１、ＨＧＦ−
レセプター、ＰＤＧＦ−レセプター、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｃ７０、ステロイドホル
モンレセプターなど）を特異的に結合することが公知である。結果として、これ
らのタンパク質のいずれか、またはその活性なＢＡＧ結合フラグメントが、ＢＡ
Ｇを特異的に結合するために使用され得る。ＢＡＧ−１（ならびにＢＡＧ−２お
よびＢＡＧ−３もまた）を結合するタンパク質の例示の活性な結合フラグメント
は、Ｈｓｐ７０のＢＡＧ結合ドメインである。Ｈｓｐ７０のＡＴＰａｓｅドメイ
ンは、短縮型形態で発現され得、これは、そのカルボキシ末端ペプチド結合ドメ
インを欠いている。この形態において、Ｈｓｐ７０は、非ネイティブなコンフォ
メーションのタンパク質を無差別に結合しないが；しかし、このＨｓｐ７０のＡ
ＴＰａｓｅドメインは、ＢＡＧ−１（あるいはＢＡＧ−２またはＢＡＧ−３）タ
ンパク質をなお結合し得る。従って、ＢＡＧを特異的に結合することが公知のタ
ンパク質の活性に結合するフラグメントは、ＢＡＧタンパク質を特異的に結合す
る「薬剤」として使用され得る。

【００２８】抗体（モノクローナルおよびポリクローナルの両方）は、ＢＡＧタンパク質ま
たはそのポリペプチドフラグメントを結合する、特異的に結合する薬剤として使
用され得る。ＢＡＧを特異的に結合するタンパク質の任意の変異体もまた、それ
が、欠失（上記に例示されるような）、付加（例えば、ＧＳＴドメインまたはＧ
Ｆおドメインの付加）または配列改変（例えば、部位特異的変異誘発）などのい
ずれによるかに拘わらず、ＢＡＧ結合薬剤として本明細書中に意図される。

【００２９】１以上のＢＡＧ特異的結合薬剤が、ＢＡＧタンパク質レベルを測定するための
単一のアッセイにおいて使用され得ることもまた、本発明において意図される。
例えば、ＢＡＧ−１タンパク質の特異的部分と相互作用することが公知の特定の
タンパク質（例えば、ＢＡＧ−１Ｌタンパク質のＮ末端の６０アミノ酸に対して
惹起された第１の抗体のような）は、別の特異的に結合するタンパク質（例えば
、ＢＡＧ−１ＮおよびＢＡＧ−１Ｌの両方に含まれる配列に対して惹起される第
２の抗体）と結合され得る。単一のアッセイにおいてこれら２つの抗体を使用す
ることにより、示差的に翻訳されたＢＡＧ−１ポリペプチドの特異的レベルが、
この２つの抗体を示差的に測定することによって測定され得る。

【００３０】ＢＡＧタンパク質レベルの検出における使用のための薬剤の調製は、当業者に
公知の方法（例えば、ｔｈｅＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭ
ｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙおよび米国特許第５，８８２，８６４号に例
示される方法）を使用して行われる。同様に、ＢＡＧタンパク質レベルの検出は
、当業者に公知の方法のいずれかを使用して行われ得、これらには、組織化学的
染色、ウエスタンブロット分析、免疫沈降（または、非抗体薬剤についてのその
等価法）などが挙げられる。本発明の好ましい実施形態において、ＢＡＧタンパ
ク質レベルを検出する方法は、少なくとも１つの抗体の使用を含む、イムノアッ
セイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫ＰＣＲなど）である。ＢＡＧ遺伝子よってコー
ドされるポリペプチドの測定は、そのポリペプチドのフラグメントの測定を含み
得、ここで、そのフラグメントは、遺伝子の転写改変体または翻訳改変体から生
じるか；あるいは、異なる大きさのポリペプチドが、翻訳後修飾（ＢＡＧポリペ
プチドの大きい部分のタンパク質分解を含む）の結果として生じる。

【００３１】ＢＡＧタンパク質レベルを検出するための本発明の方法における使用のための
例示的なイムノアッセイは、免疫ポリメラーゼ連鎖反応（免疫ＰＣＲ）アッセイ
（米国特許第５，６６５，５３９号（これは、その全体が本明細書中に援用され
る）に記載される）である。免疫ＰＣＲは、ＢＡＧタンパク質を検出するために
抗体（または、ＢＡＧを結合する他の薬剤）を利用し、ここで、この抗体（また
は、他の薬剤）は、架橋分子（代表的には、アビジン）を特異的に結合する分子
（代表的には、ビオチン）に連結され、ここで、この架橋分子は、核酸マーカー
に結合された第２の分子（代表的には、ビオチン）を結合し得る。次いで、この
核酸マーカーは、ＰＣＲ法を使用して増幅される。この高感度の検出方法は、Ｂ
ＡＧレベルが、他の方法によって検出することがしばしば困難である場合（例え
ば、血清中のＢＡＧの検出）に、特に有用である。

【００３２】ＢＡＧ遺伝子によってコードされるポリペプチドの測定はさらに、以下を特異
的に測定するために行われ得る：（ａ）細胞全体において産生されたＢＡＧのレ
ベル、（ｂ）サイトゾル中で産生されたＢＡＧのレベル、（ｃ）核において産生
されたＢＡＧのレベル、（ｄ）無細胞抽出物（例えば、血清）中に存在するＢＡ
Ｇのレベル、および（ｅ）それらの任意の組み合わせ。このような測定において
使用され得る例示的な方法としては、インサイチュ方法（例えば、組織化学的染
色（特に、サイトゾルと核との間の示差的染色））およびインビトロ方法（例え
ば、核抽出物、サイトゾル抽出物、または血清のウエスタンブロット分析）が挙
げられる。

【００３３】ＢＡＧをコードするｍＲＮＡのレベルの検出はまた、ＢＡＧ発現の指標として
作用する。ｍＲＮＡレベルを検出するために使用される方法としては、ＢＡＧを
コードするｍＲＮＡでのハイブリダイゼーションまたは増幅の検出が挙げられる
。この検出は、ｔｈｅＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９
）；および米国特許第５，８８２，８６４号などに例示されるような当業者に公
知の方法の１つを使用して、インビトロまたはインサイチュ（例えば、組織サン
プル中で）のいずれかでのｍＲＮＡの分析によって行われ得る。検出されたＢＡ
ＧｍＲＮＡは、ＢＡＧ遺伝子の任意のＲＮＡ転写物、またはそのフラグメント
である。

【００３４】ＢＡＧをコードするＤＮＡの検出もまた、ＢＡＧ発現の指標として使用され得
る。ＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡの部分における野生型からの複数の変化は、
遺伝子発現のレベルに影響を及ぼし得る。例えば、遺伝子増幅は、各細胞内での
多くのＢＡＧ遺伝子のコピーを提供し、それによって、ＢＡＧをコードする多数
のｍＲＮＡ分子の産生を容易にし、これが、その細胞内でのＢＡＧタンパク質の
レベルの増加を生じ得る。別の例において、遺伝子の転座または部分遺伝子欠失
が、例えば、ＢＡＧ転写を抑制するリプレッサータンパク質の能力を低下させる
ことによって遺伝子発現の割合に影響を与え、細胞内により高いレベルのＢＡＧ
タンパク質を生じる。ＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡの部分の検出は、遺伝子の
増幅、転座、変異、部分欠失、あるいはＢＡＧ遺伝子の異常なレベルの発現を生
じるＢＡＧ遺伝子のコピー数、配列、位置または接近可能性の他の改変の出現を
示すことによって、適用を有し得る。

【００３５】ＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡの検出は、当業者に公知の種々の方法によって
生じ得る。このような方法は、代表的に、ＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡへのハ
イブリダイゼーションまたはＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡの増幅の検出を含む
。この方法は、インビトロまたはインサイチュのいずれかでの細胞ＤＮＡの分析
によって行われ得る。この検出を行うための多くの方法が、ｔｈｅＣｕｒｒｅ
ｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙおよび
米国特許第５，８８２，８６４号（これは、その全体が本明細書中で援用される
）に例示されるように、当業者に公知である。

【００３６】（患者の分類）特定の患者の分類は、参照レベル（基底レベルとも呼ばれる）に対する患者の
腫瘍細胞におけるＢＡＧ遺伝子発現のレベルを比較することを必要とする。例え
ば、患者の癌性腫瘍における細胞のＢＡＧ発現レベルの測定後に、その測定した
レベルを、参照レベルに対して比較する。この参照レベルは、患者の癌性細胞に
おけるＢＡＧの発現のレベルを評価するために使用されるＢＡＧの発現のレベル
である。詳細には、患者の癌性細胞におけるＢＡＧ発現のレベルが、参照レベル
よりも高い場合に、それらの細胞は、ＢＡＧの高レベルの発現、すなわち過剰産
生を有するとみなされる。逆に、患者の癌性細胞におけるＢＡＧ発現のレベルが
、参照レベルよりも低い場合、それらの細胞は、ＢＡＧの低いレベルの発現、す
なわち過小産生を有するとみなされる。

【００３７】本明細書中で使用される場合、用語「高レベル」または「過剰産生」のＢＡＧ
遺伝子発現は、決定された基本レベルより上のＢＡＧ遺伝子発現のレベルに関し
、そして各々のガンのタイプについて異なるようである。従って、本発明による
と、特定のガン細胞型におけるＢＡＧ遺伝子発現の基準または基本レベルは、「
カットオフ」値として同定され、この値より上では、ＢＡＧ遺伝子発現の存在と
増加または減少した腫瘍再発または拡散との間の有意な相関関係が存在する。当
業者は、臨床的相関関係がカットオフのいずれかの側の値の範囲にわたって有意
である点において、いくつかの「カットオフ」値が鋭くないことを理解する；し
かし、各ガン細胞型について、ＢＡＧ遺伝子発現の最適なカットオフ値（例えば
、変動するＨ−スコアなど）選択することが可能である。最適なカットオフ値に
おける改良点を、使用される統計方法のソフィスティケーション、および異なる
ガン細胞型の基準または基本値を決定するために使用されるサンプルの数および
供給源に基づいて、決定し得ることが理解される。

【００３８】このような「過剰産生」は、典型的には、絶対的なＢＡＧ遺伝子発現またはタ
ンパク質レベルの点において算出されないが、相対的な測定値を使用して決定さ
れる。これらの相対的な測定値は、「内部標準」を用いて、定量目的のために例
示される；しかし、測定の他の基準または方法（例えば、外部標準との比較、Ｂ
ＡＧｍＲＮＡ測定、ＢＡＧ遺伝子を構築するＤＮＡの測定、タンパク質、また
はｍＲＮＡもしくはＤＮＡの絶対値など）が使用され得ることが理解される。

【００３９】基準レベルは、複数の方法によって決定され得るが、ただし、得られた基準レ
ベルは正確にＢＡＧ発現のレベルを提供し、このレベルより上では、第１グルー
プの患者は、この基準レベルより下のＢＡＧ発現レベルを有する第２グループの
患者の危険性とは異なる腫瘍再発または拡散の危険性を有する。この基準レベル
は、例えば、試験されるガン細胞の組織と同じ組織由来の非腫瘍性ガン細胞にお
けるＢＡＧの発現のレベルを測定することによって決定され得る。この基準レベ
ルはまた、腫瘍細胞をシミュレートするように操作されたかまたはされていなく
てもよいインビトロで培養された細胞のＢＡＧ発現のレベルであり得るか、また
は基準レベルを正確に決定する発現レベルを生じる任意の他の様式で操作され得
た。

【００４０】基準レベルは、必ずしも、内部標準を提供するために使用される培養細胞株に
おいて見出されるＢＡＧ発現のレベルではないことを認識することは重要である
。どちらかといえば、これらは、腫瘍細胞において生じるＢＡＧ遺伝子発現（例
えば、ＢＡＧタンパク質、ＢＡＧｍＲＮＡなど）の基準レベル量であり得る。
例えば、腫瘍サンプルにおける高レベルのＢＡＧ遺伝子発現は、内部標準におけ
る対応するＢＡＧタンパク質発現レベルより比較的低い発現レベルを有すること
が可能である。

【００４１】標準レベルはまた、同じガンを有する患者の集団におけるＢＡＧ発現レベルの
比較によって決定され得る。これは、ヒストグラム分析によって達成され、ここ
で、試験される患者のコホート全体は図表で表され、ここで、第１の軸は、ＢＡ
Ｇ発現のレベルを表し、第２の軸は、所定のレベルにおいて腫瘍細胞がＢＡＧを
発現する患者の数をコホートで表す。患者の２つ以上の別のグループは、ＢＡＧ
の同じかまたは類似の発現レベルを有するコホートのサブセット集団の同定によ
って決定され得る。標準レベルの測定は、次いで、これらの別のグループを最も
良く区別する発現レベルに基づいて行われ得る。

【００４２】標準レベルが、標準より下のレベルのＢＡＧを発現する癌患者対標準より上の
レベルのＢＡＧを発現する癌患者における腫瘍再発または拡散の可能性を識別す
るという証明は、単一変数分析または多変数分析を使用して行われる。これらの
方法は、１つ以上の変数と所定の結果との間の相関の可能性を決定する。特定の
場合において、これらの方法は、ＢＡＧ発現レベル（または別の変数と合わせら
れたＢＡＧ発現レベル）と疾患を有さないかまたは全生存の癌患者との間の相関
の可能性を決定する。これらの分析を行うための当業者に周知の複数の方法の任
意の１つが使用され得る。単一変数分析の例は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｒ方法ま
たはログランク（ｌｏｇ−ｒａｎｋ）試験である。多変数分析の例は、Ｃｏｘ比
例ハザード回帰モデルである。

【００４３】標準レベルの集団ベースの測定（例えば、ヒストグラム分析）は、異なるＢＡ
Ｇ発現レベルを有する患者の２つ以上の別のグループを決定するために、十分な
サイズの患者のコホートを使用して行われる。典型的には、このようなコホート
は、少なくとも２５人の患者、好ましくは、５０人の患者、より好ましくは、７
５人の患者、さらにより好ましくは、少なくとも１００人の患者を含む。同様に
決定された標準レベルの確認はまた、少なくとも２５人の患者、好ましくは、５
０人の患者、より好ましくは、７５人の患者、さらにより好ましくは、少なくと
も１００人の患者を含む。

【００４４】標準レベルは、全患者に対して等しく適用可能な単一の数であり得るか、また
はこの標準レベルは、患者の特定のサブ集団に従って変動し得る。例えば、同一
のガンについて、男性は女性の標準レベルとは異なるレベルを有する。さらに、
この標準レベルは、各患者個人について決定されるいくつかのレベルであり得る
。例えば、この標準レベルは、同じ患者における非腫瘍細胞におけるＢＡＧ発現
に対する、患者の腫瘍細胞におけるＢＡＧ発現の特定の比であり得る。従って、
各患者についての標準レベルは、ＢＡＧ発現の標準比によって排除され得、ここ
でこの標準比は、上記の標準レベルを決定するための任意の方法によって決定さ
れ得る。

【００４５】さらに、上記の標準レベルは患者の２つのグループを分ける数を議論するが、
複数の集団を分ける多数の標準値が存在し得ることが本発明の範囲内である。例
えば、２つの標準値は、高レベルのＢＡＧ発現を有する患者の第１のグループを
、中間レベルのＢＡＧ発現を有する患者の第２のグループから、および低レベル
のＢＡＧ発現を有する患者の第３のグループから分離し得る。異なる標準レベル
の数は、患者における疾患を有さないかまたは全生存の可能性を、その患者にお
けるＢＡＧ発現レベルの関数として表す曲線（例えば、連続的な線）を排除する
のに十分であり得る。このような曲線は、「連続した」ＢＡＧ標準レベルを構成
し、ここで、患者における疾患を有さないかまたは全生存の可能性は、その患者
におけるＢＡＧ発現レベルのレベルに比例する。

【００４６】標準レベルはまた、細胞の１つ以上の区画におけるＢＡＧタンパク質のレベル
を表し得る。典型的に、標準レベルは、（ａ）全細胞、（ｂ）核、または（ｃ）
サイトゾルにおけるＢＡＧタンパク質のレベルを表す。このレベルは、ＢＡＧタ
ンパク質の細胞区画化が、特定のガンの腫瘍再発または拡散の危険性と相関する
場合に、有用である。例えば、核におけるＢＡＧ発現のレベルはほとんど等しい
という事実にもかかわらず、乳ガン再発または拡散の低い危険性を有する患者の
サイトゾルにおいて、ＢＡＧタンパク質のレベルは、乳癌再発または拡散の高い
危険性を有する患者のサイトゾルＢＡＧタンパク質レベルより高いことが観察さ
れている。同様に、標準レベルは、異なる区画におけるＢＡＧタンパク質のレベ
ルの比（例えば、核ＢＡＧタンパク質対全細胞ＢＡＧタンパク質の比、または核
ＢＡＧタンパク質対サイトゾルＢＡＧタンパク質の比）であり得る。

【００４７】標準レベルは単一形態のＢＡＧ（例えば、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ−１Ｍ、ＢＡ
Ｇ−１Ｌ、ＢＡＧ−２、ＢＡＧ−３、ＢＡＧ−４、またはＢＡＧ−５）の発現の
レベルを表し得ることもまた、本明細書中において企図される。この標準レベル
は、単一の翻訳形態のＢＡＧが特定のガンの腫瘍再発または拡散の危険性と相関
する場合に、有用である。例えば、全ＢＡＧ−１発現のレベル（すなわち、ＢＡ
Ｇ−１Ｎ、ＢＡＧ−１Ｍ、またはＢＡＧ−１Ｌ発現レベルの合計）が全ての患者
について同じであるという事実にもかかわらず、肺癌再発または拡散の低い危険
性を有する患者において、ＢＡＧ−１Ｌ発現のレベルは、肺癌再発または拡散の
高い危険性を有する患者におけるＢＡＧ−１Ｌ発現のレベルより高いことが観察
され得る。同様に、この標準レベルは、異なる形態のＢＡＧの発現レベルの比（
例えば、ＢＡＧ−１Ｎ対ＢＡＧ−１Ｌの比、ＢＡＧ−２対ＢＡＧ−３の比など）
であり得る。

【００４８】ＢＡＧ発現の標準レベルは、特定のガンについて疾患を有さないかまたは全生
存の可能性の統計的に有意な指標であることが見出された別の変数と共に、さら
に使用され得る。このような指標は、他のタンパク質（例えば、ｒａｓ、Ｂｃｌ
−２など）のバイオマーカーの存在またはレベルを含むか、または臨床的または
病理学的指標（例えば、年齢、腫瘍サイズ、腫瘍組織学、臨床病期など）であり
得る。例えば、ガンの臨床病期はまた、疾患を有さないかまたは全生存の統計的
に有意な指標であり（ＢＡＧ発現レベルに加えて）、ここで、ＢＡＧ発現の標準
レベルは、ガンの臨床病期に従って変化し得る。例えば、所定の患者の癌の臨床
病期Ｉと関連した、ＢＡＧ発現のレベル、好ましくは、高レベルのＢＡＧ−１は
、疾患を有さないかまたは全生存の増加した可能性の特に好ましい指標である。
故に、ＢＡＧ発現の標準レベルは、特定のガンについての疾患を有さないかまた
は全生存の別の統計的に有意な指標の関数として変動し得る。

【００４９】当業者は、体液（例えば、血清）中のＢＡＧタンパク質のレベルを測定するこ
もまた可能であることを理解する。腫瘍は、血流中に放出された後、細胞脆弱性
に起因して破裂し得る細胞を、容易に放つことが知られている。例えば、乳癌患
者の約２／３において観察されるＢＡＧ−１の過剰発現は、ＢＡＧ−１タンパク
質の増加した分泌および／またはＢＡＧ−１タンパク質の血清への放出を生じる
ことが本明細書中において企図される。従って、体液（例えば、血清）中に存在
する、任意のＢＡＧレベル、好ましくは高いＢＡＧ−１レベルの検出は、組織サ
ンプルと共に示されたものと同様の様式で、疾患を有さないかまたは全生存の予
後を決定するための本発明の方法において使用するために企図される。体液中の
非常に少量のＢＡＧが、例えば、本明細書中に記載されるような免疫ＰＣＲ方法
において抗ＢＡＧ抗体を使用して測定され得る。

【００５０】従って、標準レベルは、体液サンプル（例えば、血清）中に存在するＢＡＧの
レベルを表し得ることが本明細書中において企図される。循環ＢＡＧ、好ましく
は、ＢＡＧ−１のレベル（すなわち、血液または血清中のＢＡＧのレベル）を測
定する本発明の方法は、患者の血清中の異常なレベル（例えば、高レベル）のＢ
ＡＧを有する患者において、癌再発または拡散の危険性の早期の診断およびスク
リーニング、ならびに早期の決定に特に好ましい用途を有する。

【００５１】患者の腫瘍細胞におけるＢＡＧの発現のレベルが決定され、そして標準レベル
と比較された後、次いで、この患者は、疾患を有さないかまたは全生存の特定の
可能性を有するグループに分類される。次いで、患者の、疾患を有さないかまた
は全生存の可能性は、このグループ内の患者の疾患を有さないかまたは全生存の
可能性に基づいて評価される。例えば、特定の乳癌患者の腫瘍細胞は、標準レベ
ルに対して高いレベルのＢＡＧ発現を有することが決定され得る。この患者は、
次いで、高レベルのＢＡＧ発現を有する患者のグループに分類される。本発明に
よると、乳癌細胞において高レベルのＢＡＧ−１を発現する患者のグループの疾
患を有さないかまたは全生存の増大した可能性があることが発見されているため
（乳癌細胞において低レベルのＢＡＧ−１を発現する患者と比較して）、特定の
乳癌患者は、疾患を有さないかまたは全生存の増大した可能性を有すると考えら
れる。

【００５２】本発明の別の実施形態において、癌腫瘍を有する個体の疾患を有さないかまた
は全生存の予後のための方法が提供される。詳細には、この方法は、ＢＡＧタン
パク質がこのような腫瘍のサンプルにおいて過剰産生されるか否かを決定する工
程を包含し、ここで、このような過剰産生は、疾患を有さないかまたは全生存と
確実に相関している。従って、高レベルのＢＡＧタンパク質を産生する患者は、
低レベルのＢＡＧタンパク質を産生する患者に対して、増加した生存の可能性を
有する。

【００５３】本発明の別の実施形態は、癌患者をスクリーニングして、腫瘍転移の危険性を
決定するための方法を提供する。この方法は、患者由来の癌性組織サンプル中の
ＢＡＧ遺伝子の増幅または発現のレベルを決定する工程を包含する。標準レベル
に対して、ＢＡＧ遺伝子の高レベルの増幅または発現を有することが見出された
患者は、腫瘍転移をあまり罹患していないかもしれないか、または生存の増大し
た機会を有するとして分類される。

【００５４】本明細書中で使用される場合、用語「転移」とは、本来の癌性腫瘍の器官に直
接関連しない器官または身体の部分における癌性腫瘍の増殖をいう。転移は、微
小転移を含むことが理解される。微小転移は、本来の癌性腫瘍の器官に直接関連
しない器官または身体の部分における検出不可能な量の癌性細胞の存在である。
従って、本発明は、本来の癌性腫瘍の器官に直接関連しない器官または身体の部
分における１つ以上の癌性腫瘍のさらなる増殖の危険性を決定する方法を意図す
る。

【００５５】本発明のなお別の実施形態において、腫瘍の発達の初期において癌患者におけ
るＢＡＧ発現のレベルの決定のための方法が提供される。本明細書中で使用され
る場合、用語「段階（期）」は、腫瘍の発達に適用される場合、腫瘍の進行の程
度をいう。腫瘍の発達の種々の段階は、Ｍａｒｋｍａｎ１９９７，Ｂａｓｉｃ
ＣａｎｃｅｒＭｅｄｉｃｉｎｅにおいて例示されるように当業者に周知であ
る。異なる癌の段階は、異なる診断基準（代表的には、Ｔｕｍｏｒ−Ｎｏｄｅ−
Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（ＴＮＭ）系を用いて）に従って規定される。例えば、乳
癌の第Ｉ期は、リンパ節の介入を要件とせず、そして乳癌の第ＩＩ期は、リンパ
節の非介入および大きな原発性腫瘍、またはリンパ節の初期の介入および小さな
原発性腫瘍のいずれかに関与する（Ｍａｒｋｍａｎ（前出）、３５頁および３６
頁を参照のこと）。種々の臨床的な段階の同様の説明は、肺癌（５４〜５５頁）
、および前立腺癌（６４〜６５頁）、結腸癌（７８〜７９頁）ならびに卵巣癌（
３８〜３９頁）についてＭａｒｋｍａｎ（前出）において見出され得る。腫瘍の
発達の初期は、腫瘍が原発性腫瘍の器官に局所的なリンパ節よりもさらに検出可
能に広がらない段階をいうことが理解されるべきである。代表的には、初期は、
第Ｉ期および第ＩＩ期であることが考慮される。本明細書中で使用される場合、
句「リンパ節介入前」とは、原発性腫瘍の器官において癌細胞が検出可能に存在
するが、原発性腫瘍の器官に最も近位のリンパ節を含むいずれのリンパ節におい
ても癌細胞の検出可能な存在を欠くことをいう。

【００５６】本発明の方法の予測価は、癌の初期における患者の場合において特に効果的で
ある。これは、本発明の方法が、検査の時点において測定可能な転移を実証しな
い患者における転移の危険性を決定することに有利に効果的であるからである。
当業者は、第Ｉ期の癌に罹患している癌患者についての生存の予後指標が第ＩＶ
期の癌に罹患している癌患者についての生存の予後指標とは異なり得ることを理
解する。例えば、第Ｉ期の癌患者についての予後は、癌の連続した増殖および／
または転移の可能性に関して正しく判断され得るが、第ＩＶ期の癌患者について
の予後は、癌の処置についての治療方法の適当な有効性に関して正しく判断され
得る。

【００５７】本発明の別の実施形態において、キットは、患者の癌性腫瘍細胞におけるＢＡ
Ｇ発現のレベルを決定するために提供される。このようなキットは、ＢＡＧをコ
ードするＤＮＡ、ＢＡＧをコードするｍＲＮＡ、ＢＡＧポリペプチド、またはそ
の任意の組み合わせのいずれかを検出するための試薬を含む。この試薬は、ＢＡ
Ｇをコードする核酸配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、またはＢＡＧポリペプチドを
特異的に結合し得る１つ以上の分子を含む。

【００５８】このキットは、ＢＡＧをコードするＤＮＡ、ＢＡＧをコードするｍＲＮＡのい
ずれか、または両方を検出するための１つ以上の核酸試薬を含み得る。この１以
上の核酸試薬は、ＢＡＧをコードするＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡを用いるハ
イブリダイゼーションまたは増幅のために使用され得る。このキットは、ＢＡＧ
をコードするＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡを増幅するためのプライマーの１つ
以上の対を含み得る。このキットはさらに、種々の生理学的状態（例えば、正常
、および転移性進行腫瘍）の組織由来の全ｍＲＮＡのサンプルを含み、例えば、
コントロールとして使用され得る。このキットはまた、ハイブリダイゼーション
反応および／または増幅反応において使用するための緩衝液、ヌクレオチド塩基
、および他の組成物を含み得る。各々の溶液または組成物は、バイアルまたはビ
ンに封入され、そして全てのバイアルが市販のために厳重に箱詰めして保持され
る。本発明の別の実施形態は、生物学的サンプル中の癌細胞においてＢＡＧをコ
ードするＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡを検出することに使用するためのキット
を包含し、このキットは、インビトロまたはインサイチュでＢＡＧをコードする
ＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡに高親和性で結合するのに効果的なオリゴヌクレ
オチドプローブならびにこれらの各々のプローブのための容器を含む。

【００５９】さらなる実施形態において、本発明は、生物学的サンプルにおけるＢＡＧ発現
のレベルを決定することにおける使用のためのキットを包含し、このキットは、
１つ以上の薬剤（例えば、１つ以上のＢＡＧポリペプチドに対して特異的な１つ
以上の抗体）を含む。１つの特定の実施形態において、キットは、１つ以上の薬
剤および１つ以上の核酸マーカーを含み、ここでこの薬剤および核酸マーカーは
、免疫ポリメラーゼ連鎖反応アッセイを実施するのに適切な様式において改変さ
れる。

【００６０】本発明の別の実施形態は、癌に罹患している患者に対する処置の適切な経過を
決定するための方法を提供する。この方法は、患者由来の癌性組織におけるＢＡ
Ｇ遺伝子の発現レベルを決定する工程を包含する。次いで、第１の群の患者が、
細胞においてＢＡＧ遺伝子の低レベルの発現を有するとして同定される。この第
１の群の患者は、生存のより小さな可能性または腫瘍の再発または拡散に対する
減少した時間を有する患者に適切な処置を必要とし得る。この方法はさらに、細
胞におけるＢＡＧ遺伝子の高レベルの発現を有するとして第２の群の患者を同定
する工程を包含する。この第２の群の患者は、生存のより大きな可能性を有し、
かつあまり腫瘍の再発または拡散に罹患しそうにない患者に適切な処置を必要と
し得る。

【００６１】生存のより大きな可能性またはより小さな可能性を有する患者のための適切な
処置は、適用可能な治療方法に従って当業者によって他の因子の適切な考慮とと
もに決定され得る。本明細書中で使用される場合、「処置の経過」は、癌の診断
後の患者の処置（例えば、手術、化学療法、照射など）、および患者が処置され
る時間の長さを示すことが理解されるべきである。従って、「処置の経過中」で
あると考慮される時点は、処置の経過の開始と処置の経過の終結との間の任意の
時間を示す。

【００６２】本発明のさらなる実施形態において、癌に罹患している患者に対する処置の経
過の有効性をモニターするための方法を提供する。この方法は、以下：（ａ）この処置の前にこの患者由来の癌性組織サンプルまたは体液サンプルに
おける第１のＢＡＧ遺伝子発現レベルを決定する工程；および（ｂ）その後、この処置中のこの患者由来の癌性組織サンプルまたは体液サン
プルにおける第２のＢＡＧ遺伝子発現レベルを決定する工程、を包含する。次いで、この第１のＢＡＧ発現レベルの、この第２のＢＡＧ発現レ
ベルとの比較は、この処置の有効性を示す。

【００６３】処置の経過の文脈において使用される場合、「有効性」とは、腫瘍の再発また
は拡散の危険性を減少し、従って、患者が、疾患を有さないかまたは患者の全体
としての生存の可能性を増加する処置の経過の能力をいう。患者の非腫瘍細胞中
のＢＡＧ発現レベルと比較して、その患者の腫瘍細胞中のＢＡＧ発現レベルが異
常な場合、この方法は特定の有用性を有する。これによって、第１のＢＡＧ発現
レベルと第２のＢＡＧ発現レベルとの比較は、ＢＡＧ発現レベルが非腫瘍細胞の
発現レベルに戻っている（このことは、より効果的な処置の経過を示す）か否か
を示すように作用するか、またはＢＡＧ発現レベルが異常なままであるか、また
は異常性が増加するか（より効果的ではない処置の経過を示す）を示すように作
用する。ＢＡＧ発現のレベルは、本明細書に記載されるように、患者由来の複数
のサンプルを使用して決定され得る。この実施形態のための好ましいサンプルの
形態は、体液サンプル（例えば、血清サンプル、滲出液サンプルなど）である。

【００６４】本発明のこの実施形態は、癌患者における腫瘍の再発または拡散の危険性を決
定し、それによって癌患者における適切な処置経過を決定する方法と組み合わせ
る場合、特に有用である。具体的には、癌患者処置の適切な経過は、患者由来の
サンプル中のＢＡＧ発現レベルを決定し、次に、ＢＡＧ発現レベルによって、患
者が疾患を有さない可能性または全体としての生存の可能性を分類することによ
って決定され得る。次に、処置の経過を、処置の経過の有効性を決定する１つ以
上の場合において、本発明の本実施形態に従って、モニターし得る。

【００６５】本発明のさらなる実施形態において、癌に罹患している患者において疾患を有
さないまたは全体としての生存の予後を決定するための方法が提供される。この
方法は、以下：（ａ）この患者由来の癌性腫瘍サンプルまたは体液サンプルにおけるＢＡＧ活性
レベルを決定する工程；および（ｂ）患者の第１群または第２群のいずれかに属するようにこの患者を分類する
工程であって、高レベルのＢＡＧ活性を有する上記の第１群の患者が、低レベル
のＢＡＧ活性を有する第２の群の患者とは異なる腫瘍の再発または拡散に罹患す
る可能性を有するとして分類される、工程、を包含する。

【００６６】本明細書中で使用される場合、「ＢＡＧ活性レベル」または「ＢＡＧ活性」の
レベルとは、腫瘍細胞または体液に存在する活性は、阻害されていないＢＡＧポ
リペプチドのレベル、およびこれらのポリペプチドの活性の程度をいう。従って
、活性のレベルは、以下を含む複数の因子によって影響される：ＢＡＧのレベル
、ＢＡＧのより低い活性形態またはより高い活性形態（アイソフォームを含む）
の存在、ＢＡＧのより活性の低い変異体またはより活性の高い変異体の存在、Ｂ
ＡＧ活性を上昇させるタンパク質または他の分子の存在、ＢＡＧ活性を減少させ
るタンパク質または他の分子の存在。例えば、ＢＡＧに対するアンタゴニストの
レベル（例えば、Ｈｉｐ）（ＢＡＧ−１に対するアンタゴニスト（例えば、Ｈｏ
ｈｆｅｌｄおよびＪｅｎｔｓｃｈ１９９７、ＥＭＢＯＪ１６：６０２９−
６２１６を参照のこと））は、ＢＡＧタンパク質レベルが変化しないままである
場合でも、ＢＡＧ活性を比例的に低下させることが理解される。従って、ＢＡＧ
活性の決定は、複数の方法によって実行されるべきであり、この方法としては、
ＢＡＧの生物学的活性（例えば、細胞死を防御する能力のアッセイまたは他のア
ポトーシスアッセイ（例えば、米国特許第５，５５０，０１９号を参照のこと）
）のアッセイ、ＢＡＧタンパク質レベルのアッセイ、ＢＡＧタンパク質をコード
するｍＲＮＡのアッセイ、ＢＡＧ遺伝子を構成するＤＮＡのアッセイ、ＢＡＧ活
性を上昇または減少させるタンパク質（またはこのタンパク質をコードするｍＲ
ＮＡもしくはＤＮＡ）または他の分子のアッセイ、およびこれらの任意の組み合
わせが挙げられる。

【００６７】本明細書中に言及された全ての米国特許および全ての刊行物は、本明細書中に
その全体が参考として援用される。本発明は、ここで、以下の非限定的な実施例
の言及によってより詳細に記載される。

【００６８】（実施例）（１．０ＢＡＧ１免疫染色は、腫瘍陰性リンパ節を有する乳癌患者において
より長い生存を予測する）乳癌を有する女性の予後評価のためのＢＡＧ１（ＲＡＰ４６およびＨＡＰ−１
としてもまた公知である）免疫染色の役割を、第Ｉ期の疾患を有する女性のコホ
ートの分析によって、陰性リンパ節生検（すなわち、組織学的検査のために外科
的に除去された腋窩節における腫瘍の証拠がない）を有する患者について評価す
る。本実施例は、乳癌患者におけるＢＡＧ−１発現の参照レベルの決定、および
異なるＢＡＧ−１発現レベルを有する別個の群が疾患を有さないかまたはそれら
の群の全体としての生存を予測することにおける参照レベルの正確さの評価を例
証する。

【００６９】ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ−１ＭおよびＢＡＧ−１Ｌを検出し得るモノクロナール
抗体を用いてＢＡＧ−１の遡及的相関分析（ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｃｏ
ｒｒｅｌａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ）を実施した（Ｔａｋａｙａｍａら、１
９９８（前出）を参照のこと）。エストロゲンレセプター（ＥＲ）、プロゲステ
ロンレセプター（ＰＲ）、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ｐ５３、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ（こ
れらは全て、乳癌形成に関係している）をまたアッセイした。免疫組織化学的方
法を、ランペクトミーを用いて処置された初期（第Ｉ期：ｎ＝７３（６３％）；
および第ＩＩ期：ｎ＝４３（３７％））の乳癌を有する１１６人の女性由来のア
ーカイブパラフィンブロックに対して実施し、次いでインタクトな乳房に対して
４８グレイ（Ｇｙ）の中央値用量を用いて放射線治療を行い、次いで６４Ｇｙの
全用量を生じるようにランペクトミー部位に対する電気ブーストを行った。アジ
ュバント全身性化学療法を用いて処置した１７／１１６（１５％）の患者および
タモキシフェン治療を用いて処置した２０／１１６（１７％）の患者が存在した
。患者は、中央値１２．４年（最少４年の追跡）の追跡を行った（表１）。

【００７０】

【表１】この研究に使用した患者の特徴を要約する：数（左列）；パーセンテージ（右列
）。転移性疾患は、診断および処置の後に臨床的に検出可能な転移性の疾患を発
症した患者の数（およびパーセンテージ）を示す。

【００７１】免疫染色を、ジアミノベンジジン（茶）を使用して比色定量抗体検出によって
行い、続いて核のヘマトキシリン（青）対比染色をした。乳癌の侵襲性成分の免
疫染色を、強度（０〜４、ここで０は染色なし、そして４は最も強い染色）およ
び免疫陽性細胞のパーセント（０〜１００％、最低限２００個の細胞について）
によってスコアし、臨床的な詳細を知らされていない病理学者が、全体の組織切
片を評価した。組織染色（Ｈ）−スコア（０〜４００）を、産物の強度（０〜４
のスケール）およびパーセント（０〜１００％）を決定することによって得た。
高レベルの発現および低レベルの発現を有する群におけるデータの二分化につい
てのカットオフを設定するために、全体のデータセットについてのＨ−スコアデ
ータを、ｘ−軸上のＨ−スコアおよび所定のｙ軸上の所定のＨ−スコアを有する
患者サンプルの数を用いてドットヒストグラムとして示した。１５０以上のＨ−
スコアを、このアプローチによって、高レベルのＢＡＧ−１発現についてのカッ
トオフとしての使用に適切であるかを決定した。Ｈ−スコアデータを、ヒストグ
ラムとして示し、そしてＢＡＧ−１（１５０以上のＨ−スコア）、Ｂｃｌ−２（
１８０以上のＨ−スコア）、およびＢａｘ（１４０以上のＨ−スコア）について
最適化したカットオフを使用して、高発現レベル群対低発現レベル群に二分した
。ＥＲ、ＰＲ、ｐ５３、およびＨＥＲ２／Ｎｅｕについての免疫スコアリングを
、確立された基準によって行った（Ｋｉｎｇら、１９８５、ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓｅａｒｃｈ４５：２９３−２９６）。

【００７２】ＢＡＧ−１は、いくつかの型の細胞の核に存在することが知られており、そし
て核の免疫染色は、強力なサイトゾルの免疫染色が異常であるが、乳房上皮につ
いては正常である（Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、前出）。この現象は、本実
施例で確認された：同じ組織切片において、しばしば腫瘍細胞と共に存在する正
常乳房上皮（ＮＢＥ）細胞と比較して、ＢＡＧ−１についてのサイトゾルの免疫
染色は、侵襲性の乳癌細胞内で明白に上方制御され、上昇されたレベルのタンパ
ク質が、ＮＢＥの９／８３（１１％）に比較して、初期段階の乳癌の７７／１１
６（６６％）またはおよそ２／３について観察された（ｐ＜０．００１）。

【００７３】同じ腫瘍標本のいくつかはまた、組織学的に明らかなインサイチュでの腺管癌
（ＤＣＩＳ）を含んだ；高レベルのＢＡＧ−１核免疫染色は、ＤＣＩＳ標本にお
いて、高レベルの細胞質ＢＡＧ−１タンパク質レベルを有した９／１２（７５％
）および６／１２（５０％）の切片において、見出された。このことは、ＢＡＧ
−１の上方制御は、腫瘍形成の相対的初期の事象として生じ得ること、および細
胞質への核からのタンパク質の転座は、細胞の形質転換に重要であり得ることを
示唆する。

【００７４】免疫染色のデータは、離れた転移のない生存（ＤＭＦＳ）および全体的な生存
（ＯＳ）に相関した。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析により、ＢＡＧ−１のレベ
ルの上昇は、より長いＤＭＦＳ（ｐ＜０．００１）およびＯＳ（ｐ＜０．００１
）に有意に関連した（即ち、ｐは０．０５以下）ことが明らかになった（図１）
。高いＢＡＧ−１タンパク質レベルを有する患者の群（ＢＡＧ−１陽性）は、低
い（ＢＡＧ−１ネガティブ）ＢＡＧ−１タンパク質レベル（９０％の高い群対４
０％の低い群）およびＯＳ（８４％の高い群対４０％の低い群）を有する患者よ
り良好な１０年間のＤＭＦＳを経験した。他の評価されたバイオマーカーにおい
て、Ｂｃｌ−２のみが、より長いＤＭＦＳ（ｐ＜０．００１）およびＯＳ（ｐ＜
０．００１）の予報値としての一変量分析において有意であった。ＥＲ、ＰＲ、
ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ｐ５３、およびＢａｘは、患者のこのコホートについて生存
を予測する際に、すべて有意であった。臨床的および病理学的変数（例えば、年
齢；腫瘍の大きさ；段階；腫瘍の組織学）において、臨床段階Ｉ対臨床段階ＩＩ
は、生存を予測するための一変量分析において、有意であった。

【００７５】変数（ＢＡＧ−１、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、ｐ５３、ＥＲ、ＰＲ、ＨＥＲ２／Ｎ
ｅｕ、年齢および臨床段階を含む）を用いてＣｏｘ回帰分析を使用する多変量モ
デルにおいて、ＢＡＧ−１のみが、ＤＭＦＳ（ｐ＝０．００８）およびＯＳ（ｐ
＝０．０２）の予測値として、統計学的な有意性を保持した。すべての他のバイ
オマーカーは、明白な統計学的有意性に到達せず、そして臨床段階（段階Ｉ対段
階ＩＩ）は、ＤＭＦＳ（ｐ＝０．０２９）についてのみ有意であった（ＯＳでは
有意ではなかった）。従って、腫瘍が高レベルのサイトゾルＢＡＧ−１タンパク
質を含む患者は、低レベルのサイトゾルＢＡＧ−１を含む腫瘍を有する患者と比
較して、長期間の生存を享受するようであり、そして腫瘍の再発または拡大およ
び遠位の転移がないようである。これらの結果は、ＢＡＧが、新規かつ独立した
予後の因子を表し、この因子は、初期段階の乳癌を有する患者における好ましい
結果に関連することを実証した。

【００７６】（２．０ＢＡＧ１免疫染色は、腫瘍陽性リンパ節を有する乳癌患者における
より長い生存を予測する）結節陽性疾患（ｎｏｄｅｐｏｓｉｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅ）を有する女性
についての予後因子としてのＢＡＧ１免疫染色の役割を説明するために、実施例
１．０に記載される抗ＢＡＧ１モノクローナル抗体を使用する免疫組織化学評価
を、結節陽性乳癌を有する３４２人の患者のコホート由来の腫瘍標本に行った。
１７９人を、手術のみで処置し、そして２０９人は外科的切除、続いて１２ヶ月
のサイクルのシクロホスファミド、メトトレキセート、フロオロウラシル（「Ｃ
ＭＦ」）アジュバント療法を受けた。サイトゾルＢＡＧ１免疫陽性を有する腫瘍
細胞のパーセントを、光学顕微鏡評価によって評価し、そして０〜１０％、１１
〜５０％、５１〜８０％、および８０％より大きい免疫陽性腫瘍細胞を表すデー
タを４分位数に収集した。

【００７７】データと、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｙｅｒ方法による再発のない生存（ＲＦＳ）お
よび原因特異的生存（ＣＳＳ）との相関によって、はじめの３つの４分位数が同
様に振舞うことが明らかになったが、第４の４分位数（８０％より高いＢＡＧ１
免疫陽性腫瘍細胞）は、有意に異なった。３４２人の患者の全体のコホートを試
験することは、一変量分析（ＲＦＳおよびＣＳＳの両方について、ｐ＝０．０５
）によって決定されるように、より高いレベルのＢＡＧ１免疫染色（８０％より
高く陽性）は、より長いＦＲＳおよびＣＳＳと関連した（図２および図３を参照
のこと）。例えば、癌に起因して死なない患者のパーセントは、より低いパーセ
ントのＢＡＧ１陽性細胞を含む腫瘍を有する３４％の患者と比較して、患者の腫
瘍が８０％より高いＢＡＧ１免疫陽性悪性細胞を含む患者の４２％であった（表
２）。患者が、アジュバントＣＭＦ療法を受けたかまたは受けなかったかによら
ず、患者の腫瘍が、エストロゲンレセプター（ＥＲ）を発現したかまたはしなか
ったかによらず、陽性節（３より高い対３より低い）の数はまた、予後の有意性
の数であった。他の変数（閉経期の状態、腫瘍の大きさ（２ｃｍより小さい対２
ｃｍより大きい）、または他のバイオマーカー（例えば、Ｂｃｌ−２（表２）お
よびｐ５３）を含む）は、結果の予測ではなかった。

【００７８】

【表２】手術のみで処置された１７９人の女性が別々に評価された場合、再び高レベル
のＢＡＧ１免疫陽性は、一変数分析においてより長いＲＧＳおよびＣＳＳ（ＲＦ
Ｓについてｐ＝０．０２７；ＣＳＳについてｐ＝０．０３９）と関連した（表３
）。例えば、腫瘍が低いＢＡＧ１発現を有した、わずか１９％の患者と比較して
、腫瘍が高いＢＡＧ１免疫染色を示した２８％の患者は、初めの診断および治療
の後、２０年間再発がなかった（表３）。しかし、アジュバント化学療法を受け
た２０９人の患者が別々に試験された場合に、ＢＡＧ１免疫染色データは、生存
と有意に相関しなかった。このことは、ＢＡＧ１が、この設置条件においてその
予後の有意性をゆるがすことを示唆する。

【００７９】

【表３】Ｃｏｘ回帰分析を使用する多変量分析（表４）はまた、すべての３４２人の患
者を一緒に考慮した場合に、より長いＣＳＳを有した高レベルのＢＡＧ１免疫染
色の有意な相関を実証した（ｐ＝−０．０４６）。ＢＡＧ１はまた、手術のみで
処置された患者（１７９人）を評価した場合、より長いＣＳＳと有意に関連した
（Ｐ＝０．０２２）が、アジュバント療法をうけた患者のサブグループにおいて
は、関連しなかった。従って、ＢＡＧ１は、他の変数（結節性介入の程度、閉経
期の状態、およびＥＲ状態を含む）を考慮する場合でさえ、手術後にアジュバン
ト化学療法を受けない結節陽性乳癌を有する女性におけるＲＦＳおよびＣＳＳの
独立した予測値である。

【００８０】

【表４】（３．０前立腺癌におけるＢＡＧ１の免疫組織化学分析）（前立腺癌におけるＢＡＧ１Ｌの病理学的上昇）免疫組織化学方法を使用して、原発性および転移性前立腺癌標本におけるＢＡ
Ｇ１Ｎ（サイトゾル）タンパク質およびＢＡＧ１Ｌ（核）タンパク質の発現を評
価した。以前に、ＢＡＧ１Ｎはサイトゾルにあり、一方ＢＡＧ１Ｌは核にあるこ
とが、決定された（（ＢＡＧ１Ｎは、Ｔａｋａｙａｍａら、１９９８、Ｃａｎｃ
ｅｒＲｅｓ．５８：３１１６−３１３１においてＢＡＧ−１と呼ばれる）、お
よびＰａｃｋｈａｍら、１９９７、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２８：８０７−８１
３））。抗ＢＡＧ１モノクローナル抗体を使用して（Ｔａｋａｙａｍａら、１９
９８、前出）、免疫組織化学方法および保存用パラフィン包埋前立腺癌標本を使
用して、８００の症例を超える前立腺癌において、核（ＢＡＧ１Ｌ）タンパク質
およびサイトゾル（ＢＡＧ１Ｎ）タンパク質の発現を評価した。正常前立腺およ
び良性前立腺肥大におけるＢＡＧ１免疫染色の結果を比較をした。多数の腫瘍標
本の分析を可能にする組織マイクロアレイ技術を、多くのこの分析のために開発
した（Ｋｏｎｏｎｅｎら、１９９８、ＮａｔｕｒｅＭｅｄ．４：８４４−８４
７）。

【００８１】正常前立腺に比較して、サイトゾルＢＡＧ１Ｎ免疫染色は、前立腺癌の８７６
人のうちの７４６人（８５％）において、上昇した。核ＢＡＧ１（ＢＡＧ１Ｌ）
免疫染色は、正常前立腺腺上皮と比較して、前立腺癌の６７６人の１７１人（２
５％）において、不適切に増大した。臨床的な追跡データまたは他の型の実験情
報は、これらの患者のいく人かについて利用可能であった。このことは、より進
行性の腫瘍表現型を有するＢＡＧ１発現の種々の相関を実証する。例えば、初期
段階（Ｔ１、Ｔ２）疾患および低いグリーソンの分類（ｇｒ２〜６）を有する６
２人の患者のコホートにおいて、より高いパーセントのＢＡＧ１免疫陽性腫瘍細
胞は、放射療法前のより高いＰＳＡレベル（ｐ＝０．０５）と関連し、そして治
療の後の遠位の転移のより高頻度（ｐ＝０．０５）と関連した。より高い強度の
ＢＡＧ１免疫染色はまた、放射療法後のより高い頻度（ｐ＜０．０００１）の転
移再発と関連した。さらに、マイクロアレイフォーマットにおける７２２人の前
立腺癌標本の免疫組織化学分析は、正常前立腺（ｎ＝５４）に比較して腫瘍にお
けるより高いパーセントのＢＡＧ１免疫陽性細胞（ｎ＝７２２）を、明らかにし
た：平均＋ＳＥ：４１＋３％正常対７８＋１％癌（ｐ＜０．０００１）。関連性
をまた、より高いパーセントのＢＡＧ１免疫陽性腫瘍細胞と、局所的に進行した
疾患（ｐ＝０．０５）（ｎ＝６２５患者）との間、およびホルモン治療抵抗性疾
患（ｐ＜０．００１）（ｎ＝２６３患者）との間で同定した。

【００８２】核ＢＡＧ−１免疫染色（ＢＡＧ１Ｌ）、ならびにより高い強度の核ＢＡＧ１Ｌ
（ＢＡＧ１Ｌ強度）染色を有するより高いパーセント腫瘍細胞はまた、ホルモン
治療抵抗性疾患に関連する：それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．０００１
（ｎ＝２６３）。より高い強度のＢＡＧ１核免疫染色はまた、手術の前に抗アン
ドロゲン療法で処置された局所的に進行した疾患を有する、９２人の前立腺癌患
者のコンホートにおけるホルモン治療抵抗性（ＨＲ）疾患に相関した（５０％対
９％ＨＲ；ｐ＜０．００１）。

【００８３】これらの観察から、３つの結論に達し得る。第１に、サイトゾルＢＡＧ１およ
び核ＢＡＧ１Ｌレベルの腫瘍特異的な増加は、前立腺癌において共通に生じる。
第２に、ＢＡＧ１Ｎ（サイトゾル）およびＢＡＧ１Ｌ（核）発現の免疫組織化学
分析は、前立腺癌患者についての予後情報（ホルモン李朝抵抗性疾患に対する進
行についての予後情報を含む）を提供する。第３に、乳癌での状況とは異なり、
より高いレベルのサイトゾルＢＡＧ１Ｎ発現は、好ましい予後よりむしろ、好ま
しくない予後に関連する。

【００８４】本発明は、開示された実施形態に関して記載されたが、種々の変更が、本発明
の精神から逸脱することなくなされ得ることが理解されるべきである。従って、
本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、実施例１に記載されるように、高ＢＡＧ−１タンパク質レベルが、乳
癌患者におけるより長期の生存と関連するということを示す。初期段階乳癌患者
の割合を含むＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存率曲線を、全体的生存率（ＯＳ）（
上；Ａ）および遠隔無転移生存率（ＤＭＦＳ）（下；Ｂ）についての時間（年）
に対してプロットする。これらの患者の腫瘍は、低レベルのＢＡＧ−１タンパク
質（黒丸；図中でＢＡＧ−１陰性という）に対して、高レベルのＢＡＧ−１タン
パク質（白丸；ＢＡＧ−１陽性という）を含む。

【図２】図２は、実施例２に記載のように、腫瘍位置のリンパ節を有する乳癌患者にお
ける無再発生存（Ｒｅｌａｐｓｅ−ＦｒｅｅＳｕｒｖｉｖａｌ）の結果を示す
。

【図３】図３は、実施例２に記載のように、腫瘍位置のリンパ節を有する乳癌患者にお
ける原因特異的生存（ＣａｕｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＳｕｒｖｉｖａｌ）の結
果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4B063 QA19 QQ02 QQ03 QQ42 QQ53 QQ58 QR08 QR14 QR20 QR32 QR33 QR36 QR42 QR55 QR56 QR59 QR62 QS25 QS32 QS33 QS34

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】前立腺癌に罹患した患者における、腫瘍の再発または拡大の
危険性を決定するための方法であって、該方法は、以下：（ａ）該患者由来の癌性前立腺組織サンプルにおけるＢＡＧ遺伝子発現レベル
を決定する工程；および（ｂ）該患者における該ＢＡＧ遺伝子発現レベルを、参照ＢＡＧ遺伝子発現レ
ベルと比較する工程であって、該参照ＢＡＧ遺伝子発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子
発現の水準であり、この水準を超えることは腫瘍の再発または拡大の増大した危
険性に関連し、そしてこの水準よりも低いことは腫瘍の再発または拡大の低下し
た危険性に関連する、工程であり、それによって、該患者における腫瘍の再発ま
たは拡大の危険性を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項２】前記腫瘍の拡大が、腫瘍転移を含む、請求項１に記載の方法
。
【請求項３】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベルを
測定することにより決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異的
な抗体を用いて決定される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコード
する核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、請
求項１に記載の方法。
【請求項９】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコード
する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】請求項１に記載の方法であって、前記参照ＢＡＧ遺伝子発
現レベルは、ＢＡＧ遺伝子発現の水準であり、この水準を超えることは、該参照
レベルよりも低いＢＡＧ遺伝子発現レベルを有する第２の群の患者と比較して、
第１の群の患者における腫瘍の再発または拡大の増大した危険性と関連する、方
法。
【請求項１４】前立腺癌に罹患した患者における生存の予後を決定するた
めの方法であって、該方法は、以下：（ａ）該患者に由来する癌性前立腺組織サンプルにおけるＢＡＧ遺伝子発現レ
ベルを決定する工程；および（ｂ）該患者における該ＢＡＧ遺伝子発現レベルを、参照ＢＡＧ遺伝子発現レ
ベルと比較する工程であって、該参照ＢＡＧ遺伝子発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子
発現の水準であり、この水準を超えることは低下した生存に関連し、そしてこの
水準よりも低いことは増大した生存に関連する、工程であり、それによって、該
患者における生存の予後を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１５】前記生存が、全体的な生存である、請求項１４に記載の方
法。
【請求項１６】前記生存が、離れた転移のない生存である、請求項１４に
記載の方法。
【請求項１７】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベル
を測定することにより決定される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異
的な抗体を用いて決定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコー
ドする核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項１４に記載の方法
。
【請求項２０】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、
請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコー
ドする、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】請求項１４に記載の方法であって、前記参照ＢＡＧ遺伝子
発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子発現の水準であり、この水準を超えることは、該参
照レベルよりも低いＢＡＧ遺伝子発現レベルを有する第２の群の患者と比較して
、第１の群の患者における低下した生存と関連する、方法。
【請求項２８】前立腺癌に罹患した患者についての一連の処置の効果をモ
ニタリングするための方法であって、該方法は、以下：（ａ）該処置の前に、該患者に由来する癌性前立腺組織における第１のＢＡＧ
遺伝子発現レベルを決定する工程；および（ｂ）次いで、該処置の間に、該患者に由来する癌性前立腺組織における第２
のＢＡＧ遺伝子発現レベルを決定する工程であって、それによって、該第１のＢ
ＡＧ発現レベルと比較して、低下した第２のＢＡＧ発現レベルが、有効な処置を
示す、工程、を包含する、方法。
【請求項２９】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベル
を測定することにより決定される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異
的な抗体を用いて決定される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコー
ドする核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項２８に記載の方法
。
【請求項３２】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、
請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコー
ドする、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】乳癌に罹患した患者における、腫瘍の再発または拡大の危
険性を決定するための方法であって、該方法は、以下：（ａ）該患者由来の癌性乳房組織サンプルにおけるＢＡＧ遺伝子発現レベルを
決定する工程；および（ｂ）該患者における該ＢＡＧ遺伝子発現レベルを、参照ＢＡＧ遺伝子発現レ
ベルと比較する工程であって、該参照ＢＡＧ遺伝子発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子
発現の水準であり、この水準を超えることは腫瘍の再発または拡大の低下した危
険性に関連し、そしてこの水準よりも低いことは腫瘍の再発または拡大の増大し
た危険性に関連する、工程であり、それによって、該患者における腫瘍の再発ま
たは拡大の危険性を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項４０】前記腫瘍の拡大が、腫瘍転移を含む、請求項３９に記載の
方法。
【請求項４１】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベル
を測定することにより決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異
的な抗体を用いて決定される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコー
ドする核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項３９に記載の方法
。
【請求項４４】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、
請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコー
ドする、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の前
に決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５２】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の後
に決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５３】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のステージＩまたは
ステージＩＩの間に決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５４】請求項３９に記載の方法であって、前記参照ＢＡＧ遺伝子
発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子発現の水準であり、この水準を超えることは、該参
照レベルよりも低いＢＡＧ遺伝子発現レベルを有する第２の群の患者と比較して
、第１の群の患者における腫瘍の再発または拡大の減少した危険性に関連する、
方法。
【請求項５５】乳癌に罹患した患者における生存の予後を決定するための
方法であって、該方法は、以下：（ａ）該患者に由来する癌性乳房組織サンプルにおけるＢＡＧ遺伝子発現レベ
ルを決定する工程；および（ｂ）該患者における該ＢＡＧ遺伝子発現レベルを、参照ＢＡＧ遺伝子発現レ
ベルと比較する工程であって、該参照ＢＡＧ遺伝子発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子
発現の水準であり、この水準を超えることは増大した生存に関連し、そしてこの
水準よりも低いことは低下した生存に関連する、工程であり、それによって、該
患者における腫瘍の再発または拡大の危険性を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項５６】前記生存が、全体的な生存である、請求項５５に記載の方
法。
【請求項５７】前記生存が、離れた転移のない生存である、請求項５５に
記載の方法。
【請求項５８】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベル
を測定することにより決定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異
的な抗体を用いて決定される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコー
ドする核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項５５に記載の方法
。
【請求項６１】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、
請求項５５に記載の方法。
【請求項６４】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコー
ドする、請求項５５に記載の方法。
【請求項６５】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項５５に記載の方法。
【請求項６６】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６７】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の前
に決定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６９】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の後
に決定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項７０】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のステージＩまたは
ステージＩＩの間に決定される、請求項５５に記載の方法。
【請求項７１】請求項５５に記載の方法であって、前記参照ＢＡＧ遺伝子
発現レベルは、ＢＡＧ遺伝子発現の水準であり、この水準を超えることは、該参
照レベルよりも低いＢＡＧ遺伝子発現レベルを有する第２の群の患者と比較して
、第１の群の患者における増大した生存に関連する、方法。
【請求項７２】乳癌に罹患した患者についての一連の処置の効果をモニタ
リングするための方法であって、該方法は、以下：（ａ）該処置の前に、該患者に由来する癌性乳房組織における第１のＢＡＧ遺
伝子発現レベルを決定する工程；および（ｂ）次いで、該処置の間に、該患者に由来する癌性乳房組織における第２の
ＢＡＧ遺伝子発現レベルを決定する工程であって、それによって、該第１のＢＡ
Ｇ発現レベルと比較して、増大した第２のＢＡＧ発現レベルが、有効な処置を示
す、工程、を包含する、方法。
【請求項７３】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質レベル
を測定することにより決定される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】前記ＢＡＧタンパク質レベルが、ＢＡＧタンパク質に特異
的な抗体を用いて決定される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、ＢＡＧタンパク質をコー
ドする核酸のレベルを測定することにより決定される、請求項７２に記載の方法
。
【請求項７６】前記核酸が、ＤＮＡである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】前記核酸が、ＲＮＡである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】前記ＢＡＧ遺伝子が、核ＢＡＧタンパク質をコードする、
請求項７２に記載の方法。
【請求項７９】前記ＢＡＧ遺伝子が、サイトゾルＢＡＧタンパク質をコー
ドする、請求項７２に記載の方法。
【請求項８０】前記ＢＡＧ遺伝子が、ＢＡＧ−１、ＢＡＧ−１Ｎ、ＢＡＧ
−１Ｍ、およびＢＡＧ−１Ｌからなる群より選択されるタンパク質をコードする
、請求項７２に記載の方法。
【請求項８１】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、イムノアッセイを用いて
決定される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８２】前記イムノアッセイが、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（
イムノ−ＰＣＲ）アッセイである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の前
に決定される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８４】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のリンパ節介入の後
に決定される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８５】前記ＢＡＧ遺伝子発現レベルが、該癌のステージＩまたは
ステージＩＩの間に決定される、請求項７２に記載の方法。