ES2243941T3

ES2243941T3 - Metodo multi-facetico para reprimir la reproduccion de virus latentes en humanos y animales.

Info

Publication number: ES2243941T3
Application number: ES95935682T
Authority: ES
Inventors: Knox Van Dyke
Original assignee: HIV Diagnostics Inc
Current assignee: HIV Diagnostics Inc
Priority date: 1994-10-04
Filing date: 1995-10-02
Publication date: 2005-12-01
Anticipated expiration: 2015-10-02
Also published as: EP0784471A4; ATE297200T1; AU3760395A; DE69534264D1; CA2201774C; EP0784471A2; PT784471E; WO1996010402A1; US5686436A; US5846961A; AU699871B2; CA2201774A1; EP0784471B1; US6514955B1; DE69534264T2

Abstract

SE MUESTRAN METODOS PARA REPRIMIR LA REPRODUCCION DE VIRUS LATENTES, COMO HIV, EN ANIMALES MEDIANTE LA ADMINISTRACION NORMALMENTE DE FORMA CONCURRENTE DE (1) ANTIOXIDANTES QUE INCLUYEN UN AGENTE DE GLUTATION; Y (2) UN INHIBIDOR DE LA INDUCCION NFKB. TAMBIEN SE MUESTRAN COMPOSICIONES FARMACEUTICAS Y EQUIPOS PARA UTILIZAR EN LA REPRESION DE LA REPRODUCCION DE VIRUS LATENTES COMO EL HIV.

Description

Método multi-facético para reprimir la reproducción de virus latentes en humanos y animales.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere en general a la represión de la reproducción de virus latentes o retrovirus en humanos y animales. Los retrovirus son una clase de virus que se replican por vía de un flujo inverso de información genética. Por ejemplo, la presente invención se refiere a la represión de la reproducción de virus latentes o retrovirus tales como HIV-1, HIV-2, leucemia, Herpes I, II y VI y hepatitis A, B, C y D en el hombre y en ciertos animales.

El Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) es una de las infecciones más importantes que han aparecido en la última década. Esta epidemia no queda confinada a un solo segmento de la población ni su propagación resulta bloqueada por barreras naturales o fronteras internacionales. En Africa han muerto millones de personas y a escala mundial es cada vez mayor el número de individuos que están infectados. En los Estados Unidos han muerto más de 100.000 personas y en la actualidad al menos un millón más están infectadas con el virus. Esta pandemia no muestra signos de descenso.

El SIDA fue diagnosticado por primera vez en homosexuales varones que exhibían una variedad de infecciones de origen fúngico (Candida albicans), protozoario (Pneumocystis carinii) y vírico (Herpes zoster). Muchos de estos individuos presentaban también una mayor incidencia de sarcoma de kaposi y linfoma. Los mismos exhibían una relación deprimida de células linfocíticas T colaboradoras/T supresoras y una ausencia de respuestas de hipersensibilidad retardadas. De manera colectiva, dichas observaciones sugirieron una deficiencia en la inmunidad mediada por
células.

Se sospecha con gran fundamento que el agente causante del SIDA es un retrovirus de RNA conocido como el virus de inmunodeficiencia humana (HIV-1 o HIV-2). El HIV posee una glicoproteína de envoltura (gp120) que tiene una alta afinidad por el receptor CD_{4} en células T colaboradoras y en otras células diana. Estas otras células diana incluyen células impulsoras médula ósea, macrofagos, células endoteliales, células gliales, nódulos linfáticos, células dendríticas, células de enterocromafina intestinal, epitelio cervical y posiblemente células de Langerhans. Sin embargo, son los efectos de HIV sobre células T colaboradoras los que mejor se conocen. El proceso infeccioso comienza cuando el virus penetra en el cuerpo y entra en la corriente sanguínea. La unión de HIV a células diana CD_{4} implica la interacción de la molécula de glicoproteína de envoltura externa gp120 con la molécula de CD_{4}, aunque pueden estar implicados otros receptores celulares. El virus entra a continuación en la célula diana, o bien se internaliza, a través de la fusión de la envoltura vírica con la membrana de la célula diana. A través de esta fusión, el virus pierde su capa y libera su núcleo de RNA y enzima de transcriptasa inversa al citoplasma de la célula
hospedante.

La enzima de transcriptasa inversa de HIV copia el mensaje de RNA produciendo primero un DNA de una sola hebra y luego un DNA de doble hebra (DNA complementario circular). Este DNA de doble hebra nuevamente formado se incorpora en el DNA cromosómico del hospedante una vez que entra en el núcleo de la célula hospedante. Dicho DNA vírico incorporado puede permanecer dormido o, tras la activación, producirá RNA mensajero vírico (mRNA). El mRNA vírico codifica proteínas que son importantes en la replicación vírica. La glicoproteína envolverá entonces al genoma de RNA dando lugar a la producción de partículas víricas infecciosas; liberándose entonces partículas víricas completas para infectar otras células.

Greenspan, D. et al., "Aids and the Mouth", capítulo 4, pp. 50-51, Munksgaard Press, distribuido por Mosby Year Book, Inc., Chicago, Illinois, (1990), exponen que debido a que el DNA de HIV está integrado en el DNA cromosómico de la célula diana hospedante, el DNA de HIV sobrevive durante la vida de la célula infectada. De este modo, puede darse una forma de infección persistente en donde se producen unas cuantas partículas nuevas de HIV con poca, y acaso ninguna, destrucción de células hospedantes. Greenspan et al. exponen también que las células destruidas o inactivadas son predominantemente células T colaboradoras CD_{4} con la consecuente pérdida de números de células T colaboradoras, descenso de las relaciones de células T4 colaboradoras/T8 supresoras y reducción o pérdida de capacidad para producir una reacción inmunológica normal, particularmente en respuesta a antígenos dependientes de células T, tales como aquellos portados por virus, hongos y bacterias encapsuladas. Greenspan et al. indican igualmente que mientras otras células tales como monocitos y macrofagos son también infectadas, dichas células no se destruyen en general y que por el momento no se entienden plenamente los defectos funcionales en los que las mismas incurren como consecuencia de las infecciones por HIV.

Schreck et al., EMBO J., 10 (8):2247-2258, 1991 y Duh et al, Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA), 86:5974-5978, 1989, indican que cuando se utilizan células linfocíticas T de Jurkat infectadas con HIV, existe un factor en el interior de las células infectadas que controla la transcripción de ciertos genes nucleares de la célula hospedante. Este factor está constituido por tres proteínas que se unen entre sí, concretamente, p50, p65 e I kappa B. Por otro lado, Schreck et al. indican que normalmente las tres proteínas se forman en el citoplasma de la célula diana en esta triada (tres proteínas unidas entre sí) en un estado inactivo. Sin embargo, bajo condiciones tal como estrés oxidativo, se activa el mecanismo de reproducción vírica. El factor iKB se separa de la triada de proteínas y el complejo de p50, p65 que queda se conoce como NF-kappa B (NFKB).

Schreck et al. han reconocido que el NFKB es un factor de transcripción genética que migra al interior del núcleo de la célula infectada por HIV y conmuta a la producción del virus HIV de una célula víricamente infectada. Schreck et al. indican también que el peróxido de hidrógeno y los radicales oxígeno son agentes producidos normalmente durante el proceso inflamatorio y que concentraciones micromolares de peróxido de hidrógeno pueden inducir la expresión de HIV-1 en una línea de células T humanas. Dichos autores indican también que la expresión de HIV es mediada por el factor de transcripción NFKB que es activado de manera potente y rápida mediante un tratamiento con peróxido de hidrógeno de células de su forma citoplásmica inactiva. También indican que la N-acetilcisteína y otros compuestos tiólicos bloquean la activación de NFKB. Dichos autores llegan a la conclusión de que estos diversos agentes que al parecer activan NFKB por distintas vías intracelulares, podrían actuar a través de un mecanismo común que implica la síntesis de compuestos intermedios oxigenados reactivos. No sugieren candidatos posibles para dicho compuesto intermedio oxigenado reactivo.

Sherman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 191 (3):1301-1308, 1993, exponen que el ditiocarbamato de pirrolidina (PDTC) es un inhibidor de la activación de NFKB. También indican que este compuesto es un inhibidor de óxido nítrico sintasa (NO sintasa). También exponen que el estrés oxidativo en la infección por HIV se manifiesta por menores niveles de cisteína y glutationa en plasma y leucocitos. Sugieren que la regulación redox de macrofagos puede ser crucial para la activación de óxido nítrico sintasa y que el PDTC puede actuar como un barredor de especies oxigenadas reactivas que impide que las mismas participen en la activación de NFKB.

Staal et al., AIDS Research and Human Retroviruses, 9(4):299-306 (1993) indican que los antioxidantes tales como N-acetilcisteína, glutationa y vitaminas E y C inhiben la transcripción dirigida por LTR de HIV. También indican que los antioxidantes bloquean la estimulación de NFKB inducida por oxidantes.

Las medidas actuales para el tratamiento de HIV implican en general la inmunoterapia (por ejemplo, vacunas contra HIV muerto entero y una variedad de glicoproteínas de la superficie de HIV) dirigida en el HIV, así como intervención farmacológica en el proceso infeccioso por HIV. En teoría, cualquiera de las etapas de replicación o liberación vírica podrían ser puntos de ataque farmacológico contra el virus. El principal ataque quimioterapéutico por los fármacos disponibles ha sido a nivel de la inhibición de la transcriptasa inversa vírica. El primer fármaco permitido para utilizarse en el tratamiento de HIV apareció en 1987; se trata de la azidotimidina (AZT). A principio de la década de 1990, la FDA aprobó el uso de dideoxiinosina (DDI) y dideoxicitidina (DDC). La AZT y la DDI fueron aprobadas para monoterapia, mientras que la DDC se utiliza en combinación con uno de los otros fármacos.

Un problema básico de la investigación sobre HIV es que los experimentos destinados a destruir el virus in vitro e in vivo proporcionan al parecer resultados opuestos. Por ejemplo, la AZT es muy eficaz in vitro a la hora de destruir el virus de HIV. Valencia, E. et al., Ann. Med. International, 9, (11):531-537, 1992 y Baumgarten, R., Dermatol-Monatsschr., 175, (8):469-473, 1989, indican, sin embargo, que la AZT no prolonga la vida de las víctimas infectadas por HIV en un grado apreciable. Otros fármacos y terapias biológicas, tal como la terapia antioxidante, que han producido resultados alentadores in vitro, tampoco han resultado ser eficaces in vivo, tal como se indica en la bibliografía al respecto. [Véase, por ejemplo, Cathcart, Medical Hypothesis, 14:423-433, 1984; Kappus and Diplock, Free Radical Biol. and Med., 12:55-74, 1992; Muller, Free Radical Biol. and Med., 13:651-657, 1992; Fuchs. Medical Hypotheses, 36:60-64, 1991; Roederer. AIDS Res. and Human Retrovirus, 8:209-217, 1992; Harakeh et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci., 87:7245-7249, 1990; Hersh et al.. JAMA, 265:1538-1544, 1991; Staal, et al., AIDS Research and Human Retrovirus, 8:305-309, 1992].

Son y se han utilizado muchos regímenes de tratamiento diferentes para tratar la infección por HIV y el SIDA que aparece después de la infección latente. Aunque tales regímenes de tratamiento podrían prolongar la supervivencia y posiblemente reducir al mínimo los síntomas, a la vista de la preocupación a escala mundial en relación con la epidemia, dichos tratamientos no han tenido en general un éxito total. Por tanto, la dura realidad sigue siendo que una vez que el virus entra en el cuerpo y comienza el proceso de separación del revestimiento, es casi inevitable un resultado fatal. Dicho resultado revela la necesidad de continuar otras investigaciones para descubrir un método de tratamiento que pueda suprimir la reproducción de virus latentes tal como HIV.

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica o un estuche que comprende:

(i): un agente en una cantidad eficaz para causar el incremento de los niveles de glutationa en sangre de un animal cuando se administra el agente a dicho animal;

(ii): una cantidad eficaz de uno o más antioxidantes adicionales; y

(iii): una cantidad eficaz de un inhibidor de la inducción de NFKB, seleccionado entre un lazaroide no glucocorticoide; un esteroide anti-inflamatorio consistente en predonsona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona dehidroepiandrosterona, 9a-fluorcortisol, prednisona, aetiocolanolona, 2-metilcortisol, pregnanodiol, dexicorticosterona, cortisona, hidrocortisona, 6a-metilprednisolona, triamcinolona, estrógeno, o una combinación de dos o más de los anteriores; o un compuesto seleccionado del grupo consistente en glicirrizina, ditiocarbamato de pirrolidina, mevinolina, metiltioadenosina, rapamicina, interleuquina 10, FK 506 o una combinación de dos o más de los mismos.

En las reivindicaciones 2 a 13 se ofrecen características preferidas de la invención. En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición o estuche de acuerdo con el primer aspecto para suprimir la reproducción de un virus latente en un animal. En un tercer aspecto, la presente invención proporciona una composición o estuche de acuerdo con el primer aspecto como un preparado combinado para administración concurrente, simultánea, separada u otro tipo de administración para utilizarse en la supresión de la reproducción de un virus latente en un animal. En ciertas modalidades, el estuche o la composición del primer aspecto se proporciona para utilizarse en el tratamiento de humanos con HIV y para la administración concurrente, simultánea, separada u otro tipo de administración para utilizarse en el tratamiento de humanos con HIV.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 ilustra el mecanismo de activación del virus HIV.

La figura 2 ilustra varios agentes y mecanismos para inhibir la activación vírica de acuerdo con las modalidades preferidas de la presente invención.

La figura 3 ilustra los papeles de los antioxidantes, de un agente de glutationa y de esteroides en las modalidades preferidas de la presente invención.

Descripción detallada de la invención Introducción

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para reprimir la reproducción de virus latentes en humanos y animales. (Durante el resto de la descripción detallada de la invención e incluyendo las reivindicaciones, el término "animal" se refiere a todos los animales incluyendo seres humanos). A un animal infectado con un virus latente se puede administrar lo siguiente: (1) un precursor de glutationa, un realzador de la producción de glutationa o glutationa, (2) altas dosis de antioxidantes adicionales liposolubles y agua y (3) un inhibidor de la inducción de NFKB. Los antioxidantes liposolubles y agua se administran a un animal infectado con un virus latente para asistir en el mantenimiento en un estado eléctrico reducido de la glutationa del animal. La glutationa o un precursor de glutationa se administran también a un animal infectado con un virus latente para mantener o reforzar los niveles naturales de glutationa en el animal. Se han encontrado de manera sorprendente que mediante el uso de esta combinación de ingredientes, se puede reprimir la reproducción de virus latentes en
animales.

Otros ingredientes que pueden ser utilizados incluyen el inhibidor de NADPH que suprime la producción de peroxinitrito, una cantidad eficaz de un agente reductor de radicales aniónicos de superóxido, agentes reductores de NO\bullet e inhibidores de xantina oxidasa. Alternativamente, se pueden emplear varias combinaciones de estos inhibidores de la producción de peroxinitrito.

El papel de NFKB y peroxinitrito en la activación de una célula para reproducir HIV

El NFKB es un factor de transcripción genética que conmuta a la producción del virus HIV de una célula víricamente infectada. Se sabe que el NFKB activa una variedad de genes, incluyendo la transcripción de una variedad de citoquinas, virus y NO sintasa. En la figura 1 se muestra la activación de un virus particular, HIV, NO sintasa y NADPH oxidasa.

La NO sintasa actúa en la célula para producir \bulletNO. La NADPH oxidasa actúa en la célula para producir el superóxido \bulletO_{2}^{-}. En la célula se combinan \bulletNO y \bulletO_{2}^{-} para producir peroxinitrito [OONO^{-}] (Fig. 1), el material más oxidativo conocido a producir por macrofagos. Trabajos recientes han demostrado que las células Kupfer del hígado (macrofagos residentes procedentes de monocitos de la sangre) producen también peroxinitrito. Esta sustancia es 1.000 veces más oxidativa que una cantidad molar equivalente de peróxido de hidrógeno. De hecho, se trata este del mecanismo de destrucción bacteriana del macrofago alveolar. Estudios realizados con la enfermedad del pulmón negro y silicosis han demostrado que los macrofagos alveolares, activados hacia el proceso inflamatorio por instilación de sílice en pulmones de animales, producen grandes cantidades de peroxinitrito. Esto ocurre debido a que el óxido nítrico sintasa del macrofago es inducible. La presencia de sílice activa el gen de NO sintasa para producir mucha más enzima de NO sintasa.

Otros estudios de maduración y liberación de oxidante en macrofagos de hibridomas se tradujeron en la observación de que el oxidante producido a partir de lipopolisacárido (LPS) o macrofagos de hibridomas activados por interferones se estimula en alrededor de 40 veces empleando miristato acetato de forbol (PMA). El PMA activa el estallido oxidativo. El oxidante detectado es el mismo oxidante apreciado en células hepáticas de Kupfer y macrofagos de pulmón: peroxinitrito.

El peroxinitrito es importante ya que activa el NFKB. El NFKB es inactivado por I Kappa B (IKB) que actúa sobre NFKB por vía de la subunidad P65. Como se muestra en la figura 1, el peroxinitrito escinde IKB, liberando con ello el NFKB activo.

El reconocimiento de que el peroxinitrito hace que el virus de HIV y otros virus latentes en una célula infectada se repliquen, sugiere que la inhibición del mecanismo de oxidación podría detener la replicación del virus. Sin embargo, debido a que todos los sistemas biológicos han incorporado sistemas redundantes que operan en caso de fallo de uno de los sistemas, es necesario utilizar múltiples antioxidantes simultáneamente para bloquear la replicación del virus. El uso de múltiples agentes para bloquear una vía metabólica similar produce en general un sinergismo entre los agentes, lo cual permite administrar dosis más bajas de los agentes para producir los mismos resultados.

En la figura 2 se ilustra el uso de múltiples agentes sinérgicos para inhibir la activación vírica. Los ingredientes administrados al paciente o acrecentados en este último en varias combinaciones alternativas, se muestran en cajas en la figura 2.

Acrecentamiento de glutationa reducida

El mecanismo antioxidante de células es controlado principalmente por glutationa reducida (ingrediente 1, figura 2), un tripéptido que contiene ácido L-glutámico, L-cisteína y L-glicina. La cisteína contiene una estructura sulfhidrilo que es la porción antioxidante del péptido. La glutationa reducida reacciona con peroxinitrito para reducirlo a NO_{2}^{+}. La composición o estuche de la presente invención comprende, por tanto, un agente en una cantidad eficaz para causar el incremento de los niveles de glutationa en sangre de un animal cuando el agente se administra al animal. Un ejemplo de dicho agente es glutationa reducida, sus precursores o realzadores de su producción.

Puesto que el hecho que limita la velocidad en la síntesis de glutationa reducida es la concentración de L-cisteína, el acrecentamiento de los niveles de L-cisteína en sangre causa el incremento de los niveles de glutationa en sangre. Como precursores de glutationa pueden actuar N-acetilcisteína, N-cisteína o ácido 2-oxo-4-tiazolidencarboxílico, así como otras sustancias. Dado que la ingestión de grandes cantidades de L-cisteína puede producir toxicidad, se prefiere la ingestión de N-acetilcisteína. Hasta 40 mg aproximadamente por kilogramo de peso corporal de N-acetilcisteína se pueden emplear diariamente en el hombre sin efectos secundarios tóxicos. La N-acetilcisteína (polvo) se encuentra disponible en forma de cápsulas. Empleando una dosis de alrededor de 40 mg/kg por día, un hombre de 150 libras de peso puede ingerir aproximadamente 2.800 mg/día sin efectos secundarios tóxicos (150 libras es aproximadamente 70 kg, 70 kg x 40 mg/kg\cdotdía es igual a 2.800 mg/día). Si se presenta diarrea después de unos pocos días, la dosis se puede bajar a la mitad o a un cuarto de dicha cantidad por día. Se pueden administrar por vía oral, sin toxicidad, dosis de alrededor de 0,15 a 0,45 mMol/kg de ácido 2-oxo-4-tiazolidencarboxílico. Además, se sabe que dos sustancias de origen natural ebselen (AS-2) y oltipraz (AS-3) aumentan el nivel de glutationa.

Ejemplos de otros precursores de glutationa adecuados, además de los ya indicados, incluyen éster (etílico o metílico) de N-acetilcisteína; cistamina (2,2',ditio-bis[etilamina]); cisteamina; penicilamina; 2,3 dimercapto-1-propanol; L-2-oxotiazolidona-4-carboxilato; maleato de dietilo; ésteres de glutationa incluyendo ésteres de monoetilo, metilo e isopropilo; y oxazolidona.

El agente se puede administrar en estallidos de dosis relativamente altas durante periodos de tiempo limitados. Así, en la administración de N-acetilcisteína, puede ser preferible utilizar dosis mucho más altas que 40 mg/kg por día, tal como alrededor de 140 mg/kg por día, durante un periodo de varios días a una semana, seguido por una reducción de la dosis a la mitad o a un cuarto. Puede ser conveniente reducir adicionalmente la dosis a 10-20 mg/kg por día aproximadamente durante 4 a 6 semanas, en función de la duración de la terapia.

Antioxidantes adicionales

Se administran antioxidantes adicionales (ingrediente 2, figura 2), incluyendo preferentemente antioxidantes solubles en agua y/o liposolubles, con el fin de regenerar la glutationa reducida y/o con el fin de actuar directamente sobre peroxinitrito para reducirlo. El nivel de glutationa es protegido por antioxidantes tales como ácido L-ascórbico y vitamina E en un ciclo redox. L-ascorbato (reducido) + glutationa (S-S) (oxidada) \rightarrow glutationa (SH) (reducida) + L-ascorbato (oxidado). Dado que los niveles de ácido L-ascórbico en tejidos pueden aumentarse en gran medida por el suministro de ácido L-ascórbico en sangre, la ingestión de varios miles de miligramos de ácido L-ascórbico preserva a la glutationa en un estado reducido y activo. Por tanto, la ingestión diaria de N-acetilcisteína u otros precursores de glutationa en combinación con grandes cantidades de ácido L-ascórbico, sirve para mantener o incrementar los niveles de glutationa en sangre en un estado reducido y activo.

El ácido ascórbico o vitamina C es una sustancia única debido a que es un antioxidante soluble en agua que puede ser tomado en dosis mucho más grandes que la necesidad diaria mínima (60 mg/día en el hombre). La vitamina C es el antioxidante soluble en agua más preferido. Si se toma ácido ascórbico en dosis de alrededor de 2.000 a 10.000 mg por día en seres humanos, el mismo aumenta el contenido en antioxidante en la sangre y células y protege frente a oxidantes celulares fuertes tal como (OONO^{-}). Es sumamente preferible administrar un nivel de dosificación de alrededor de 2.000 a 4.000 mg/día de una dosis oral de liberación en el tiempo, dos veces al día durante toda la duración de la terapia. Estas grandes dosis de ácido ascórbico son bien toleradas por la mayoría de los individuos. Es el único antioxidante soluble en agua que puede ser tomado de forma continua en grandes dosis sin una toxicidad importante. Actúa no solo para proteger la glutationa (rojo) como se muestra en la figura 2, sino también directamente contra peroxinitrito:

Vit. C + OONO^{-} \rightarrow Vit. C(OX) + NO_{2}{}^{+} + O_{2}

Las vitaminas A, E y K son compuestos liposolubles que actúan como antioxidantes en el cuerpo para oponerse a peroxinitrito y otros oxidantes fuertes que el cuerpo puede producir. Por tanto, dichas vitaminas A y K se emplean en dosis de hasta 1-8 veces aproximadamente la necesidad diaria mínima (MDR) en humanos, y con suma preferencia en dosis de alrededor de 1 a 4 veces la necesidad diaria mínima, como se indica en la siguiente tabla 1. La vitamina E se puede tomar en dosis de alrededor de 3 a 100 veces la MDR y con suma preferencia en dosis de alrededor de 65 a 100 veces la necesidad diaria mínima de 30 unidades internacionales en humanos. La vitamina E es el antioxidante liposoluble más preferido. La vitamina K se toma en cantidades más pequeñas y probablemente juega un menor papel antioxidante que la vitamina A o vitamina E.

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TABLA 1

	MDR	Modalidad preferida	Modalidad sumamente
			preferida
Vitamina A (\beta-caroteno)	5.000 IU	5.000-40.000 IU	5.000-20.000 IU
Vitamina E	30 IU	90-3.000 IU	2.000-3.000 IU
Vitamina K	25 mcg	25-200 mcg	25-100 mcg

Las necesidades diarias mínimas proporcionan recomendaciones para los aportes diarios de una variedad de vitaminas, nutrientes y minerales. Esta norma casi universal proporciona una medida del nivel de dosificación para administrar las vitaminas, nutrientes y minerales particulares en humanos. Los expertos en la materia podrán apreciar fácilmente que si se llevan a cabo los métodos aquí descritos en animales distintos de seres humanos, deberá efectuarse el ajuste adecuado del nivel de dosificación en base al peso corporal del animal que ha de ser tratado.

Preferentemente, se emplean también minerales antioxidantes solubles en agua, tales como cobre, zinc y hierro y selenio. Es preferible administrarlos en dosis de alrededor de 3 veces la necesidad diaria mínima, como se indica en la siguiente tabla 2. Los minerales antioxidantes solubles en agua se pueden administrar en forma de una multivitamina que contiene minerales. Un nivel de dosificación habitual es de un comprimido por día durante todo el periodo de tratamiento.

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TABLA 2

	MDR	Modalidad preferida
Cobre (como óxido cúprico)	2 mg	6 mg
Zinc (como óxido de zinc)	15 mg	45 mg
Hierro (como sal ferrosa)	18 mg	54 mg
Selenio (selenato sódico)	25 mcg	75 mcg

Se puede emplear una amplia variedad de otros antioxidantes. La mayoría de los fármacos anti-inflamatorios no esteroidales funcionan como antioxidantes no específicos. Por tanto, la mejor elección sería el uso de un fármaco que pudiera reaccionar con peroxinitrito pero sin agotar los niveles de glutationa de las células. De este modo, el ibuprofeno sería una buena elección, mientras que tilenol (acetaminofeno) o aspirina (ácido acetilsalicílico) serían una pobre elección. Para esta finalidad, podrían utilizarse otros compuestos de sulfhidrilo; por ejemplo, al British antilewisita se emplea como un radio-protector contra daños derivados de la radioactividad. Su fórmula es 2,3-dimercaptopropanol o la siguiente estructura:

CH_{2-}SH

CH_{2-}OH

Este compuesto podría utilizarse como antioxidante contra peroxinitrito.

Inhibidores de la inducción de NFKB

Los inhibidores de la inducción de NFKB son agentes que inhiben la unión del factor de transcripción de NFKB a DNA. Este bloquea la inducción de HIV u otra reproducción vírica al suprimir directamente el mecanismo de activación de la reproducción vírica. Los inhibidores de NFKB (caja 7, figura 2) suprimen también la síntesis de peroxinitrito, al evitar que el NFKB active genes de células para producir NO sintasa.

Si bien la ingestión de precursores de L-cisteína o antioxidantes tales como vitaminas C, E y A, soportan la actividad de glutationa frente a peroxinitrito, se obtienen también ventajas sinérgicas mediante el ataque de las vías bioquímicas mediante las cuales se sintetiza el peroxinitrito. Los macrofagos y los linfocitos T necesitan óxido nítrico y superóxido para producir peroxinitrito. Por tanto, la inhibición de NO sintasa (véase ingrediente 3, figura 2), que produce óxido nítrico, y la inhibición de NADPH oxidasa (véase ingrediente 4, figura 2), que produce superóxido, bien solas o bien en combinación, pueden inhibir la producción de peroxinitrito.

La NO sintasa puede ser inhibida por esteroides anti-inflamatorios debido a que los mismos bloquean la inducción de NO sintasa. El ditiocarbamato de pirrolidina suprime el peroxinitrito al actuar como un antioxidante contra peroxinitrito. La NO sintasa produce óxido nítrico que, junto con superóxido, produce peroxinitrito (OONO^{-}). En el caso de que no se produzca excesivo \bulletNO, entonces no se produce el peroxinitrito y no sucede la activación de la proteasa vírica que escinde el factor inhibidor (i Kappa B) n F-Kappa B del tricomplejo de p50, p65 e i Kappa B. Una vez que la NO sintasa dentro del macrofago ha sido inducida (algunas veces 30-40 veces), es muy difícil controlar la cantidad de peroxinitrito que se produce (una onza de prevención es equivalente a una libra de curación).

El inhibidor de la inducción de NFKB se elige entre uno o más esteroides anti-inflamatorios seleccionados entre predonsona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona dehidroepiandrosterona, 9a-fluorcortisol, prednisona, aetiocolanolona, 2-metilcortisol, pregnanodiol, dexicorticosterona, cortisona, hidrocortisona, 6a-metilprednisolona, triamcinolona, estrógeno, y derivados de los mismos, y uno o más lazaroides no glucocorticoides adecuados. Los lazaroides preferidos incluyen, pero no de forma limitativa, U-74006F, que es 21-[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-16-metil-(16.alfa.)-pregna-1,4,9(11)-trieno-3,20-diona monometanosulfonato o TIRILAZAD mesilato o Freedox; U-74389G, que es 21-[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-pregna-1,4, 9(111)-trieno-3,20-diona, (Z)-2-butenodioato (1:1); U-74500A, que es pregna-1,4,9(11)-triene-3,20-diona, 21-[4-[5,6-bis (dietilamino)-2-piridinil]-1-piperazinil]-16-metil, hidrocloruro, (16-alfa.); U-75412E que es 21-[4-[3-(etilamino)-2-piridmil]-1-piperazinil-16-metil-pregna-1,4,9(11)-trien-3,20-diona, (16.alfa.)-,(Z)-2-butenodioato (1:1); U-78517F que es 2-[[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-2H-1-benzopiran-6-ol, dihidrocloruro; U-78517G que es 2H-1-benzopiran-6-ol, 2-[[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-, 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato (1:2); U-78518E que es 2H-1-benzopiran-6-ol, 2-[[4-[3-(etilamino)-2-piridinil]-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-, hidrocloruro; U-79206 que es etanol, 2-[(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)metilamino]-; y U-83836E que es (-)-2-[[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-2H-1-benzopiran-6-ol, dihidrocloruro. Estos lazaroides se pueden administrar en dosis intravenosas individuales que oscilan entre 0,1 y 10,0 mg por kilogramo de peso corporal aproximadamente, o bien en dosis orales individuales que oscilan entre 1 y 30 mg por kilogramo de peso corporal aproximadamente durante cada día de la terapia. En la siguiente tabla 3 se ofrece una lista ejemplificativa de esteroides adecuados comercialmente disponibles y de los correspondientes
proveedores:

TABLA 3

Fármaco	Nombre comercial	Duración de la acción	Compañía
Dexametasona	DECADRON	larga	Merck
Metil-prednisolona	DOSE PAK	corta	Upjohn
Metil-prednisolona^{1}	DEPO-MEDROL	muy larga	Upjohn
Triamcinolona	-----------	corta o intermedia	Fujisama
Cortisona	CORTONE	corta	Genérico
Prednisona	DELTASONA	corta	Genérico
^{1}DEPO-MEDROL: inyección intramuscular cada 5-10 días y en una forma de lenta liberación.

En general, estos fármacos se emplean mejor cuando un esteroide glucocorticoide de corta actividad, tal como prednisona, prednisolona, metilprednisolona y ésteres, se puede administrar de la siguiente manera similar a un procedimiento de pack de dosis para hiedra venenosa (cada comprimido es de aproximadamente 4 mg).

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 6 comprimidos \+  \hskip1,2cm  \+ primer día\cr  5
comprimidos \+ \+ segundo día\cr  4 comprimidos \+ \+ tercer día\cr 
3 comprimidos \+ \+ cuarto día\cr  2 comprimidos \+ \+ quinto día\cr
 1 comprimido \+ \+ sexto
día\cr}

Este programa se puede utilizar de forma continua, es decir, administración de 1-4 comprimidos por día en combinación con antioxidantes durante el periodo de duración del tratamiento hasta que la persona da un análisis negativo a HIV empleando el procedimiento de anticuerpos y/o ELISA. Este sería el procedimiento en el caso de que se utilice metilprednisolona (4 mg/comprimido). Esto de acuerdo con PURAMED pharmaceuticals, Chincinnati, Ohio 45213 (NDC 51285-30121). Se puede inyectar DEPO-MEDROL (metilprednisolona) cada dos semanas intramuscularmente en dosis de 40 mg por kilogramo de peso corporal. En su lugar se pueden emplear otros esteroides anti-inflamatorios en dosis adecuadas, tal como se indica en Physicians' Desk Reference. La administración de un inhibidor de la inducción de NFKB, tal como un esteroide anti-inflamatorio, es una de las etapas más importantes en el tratamiento de la enfermedad relacionada con HIV, SIDA. Sin embargo, ha de utilizarse con precaución en las fases posteriores de la enfermedad de SIDA. La dosis real de esteroide puede variar en función del estado de la enfermedad y la persona, por lo que se establecen intervalos de dosis.

Otros esteroides inflamatorios de corta actividad, tal como hidrocortisona y cortisona se pueden administrar en dosis preferentemente de alrededor de 100 mg/día por persona durante la primera semana de terapia. A continuación, los niveles de dosificación se pueden reducir a 15-25 mg/día por persona, aproximadamente, durante el periodo de duración del tratamiento.

Los glucocorticoides de actuación prolongada o intermedia, tal como dexametasona y triamcinolona, podrían utilizarse para inhibir la inducción de NO sintasa, pero los mismos podrían producir una mayor supresión a largo plazo de la secreción esteroidal adrenal, causando la posibilidad de insuficiencia adrenal. Para un esteroide de larga actividad, tal como dexametasona, es preferible administrar una dosis de alrededor de 10 mg/día por persona durante la primera semana de tratamiento. A continuación, la dosis se puede reducir a 2-5 mg/día por persona aproximadamente durante el tiempo en el cual continúe el tratamiento. Para esteroides de actividad intermedia, los niveles de dosificación preferidos son de alrededor de 50 mg/día por persona durante la primera semana de tratamiento, seguido por una reducción a 10-20 mg/semana aproximadamente en lo que dure el tratamiento.

Además de los esteroides y lazaroides anti-inflamatorios antes indicados, el inhibidor de la inducción de NFKB se elige entre ditiocarbamato de pirrolidina y otros ditiocarbamatos, ácido glicirrízico (de la raíz de regaliz), mevinolina, metiltioadenosina, rapamicina, interleuquina 10 y FK 506. Un nivel de dosificación preferido, cuando se administra glicirrizina, es de alrededor de 100 mg/día por persona por cada día de terapia. El FK 506 es suministrado por Merck. La interleuquina 10 tiene al parecer un efecto similar a la combinación de esteroides anti-inflamatorios y antioxidantes. La mevinolina es un fármaco que evita la isoprenilación y la metiltioadenosina (MTA) es un inhibidor de varias reacciones de mutilación dependientes de S adenoxilmetionina.

Supresores opcionales de la producción de peroxinitrito

El superóxido que es necesario para la producción de peroxinitrito, puede ser inhibido empleando nucleótidos antisentido RAC contra el sistema genético que produce superóxido. Dorseuil et al., J. of Biol. Chem., 267:20540, 1990, indican que el contenido en proteína RAC de linfocitos descendió en un 60% en células pretratadas con RAC antisentido y la producción de superóxido descendió en 50-60% de una manera dependiente de la dosis en linfocitos pretratados con antisentido. Esto demuestra un papel fisiológico de las proteínas RAC en la inhibición de NADPH oxidasa. Otros inhibidores de NADPH oxidasa incluyen difenil iodonio o difenilen iodonio (1,5 x 10^{-8} M) o bisulfato de difenilen iodonio; 17 hidroxi wortmanina (HWT), un metabolito fúngico; ácido okadaico; alfa-1-antiquimiotripsina; estaurosporina; Ebselen-[2-fenil-1,2-b-en3isoselanazol-3[2H]ona]; y apocinina (4-hidroxi-3-metoxiaceto-
fenona).

El superóxido se puede producir en la membrana de ciertas células (neutrófilos, macrofagos, etc) por el sistema de NADPH oxidasa que utiliza O_{2} y varios cofactores. Cuando la xantina oxidasa cataliza la oxidación de xantina e hipoxantina, también produce anión superóxido [\bulletO_{2}]_{-}. Dado que se puede hacer reaccionar superóxido con óxido nítrico para producir (OONO^{-}) peroxinitrito, sería importante la inhibición de la producción de superóxido por cualquier fuente o barrer su actividad. Se sabe que fármacos tales como alopurinol y su metabolito oxipurinol inhiben la xantina oxidasa (ingrediente 8, figura 2), funcionando también como antioxidantes contra peroxinitrito.

En lugar de la inhibición de NADPH oxidasa, cualquier superóxido producido se puede reducir a peróxido de hidrógeno empleando un agente reductor de superóxido (ingrediente 5, figura 2), tal como una enzima conocida como Cu, Zn superóxido dismutasa (SOD). Esta enzima se inyecta en la corriente sanguínea. Debido a que la enzima tiene una vida media corta en la sangre, la conjugación con polietilenglicol prolonga la vida media de SOD. También se ha comprobado que la IgA SOD y la SOD encapsulada en liposomas tienen una vida media en circulación prolongada en comparación con la SOD natural. Además, podrían utilizarse también imitaciones de SOD debido a que las mismas penetran células en donde la SOD tiene alguna dificultad. Estas imitaciones son compuestos que pueden contener cobre, zinc o la combinación de estos elementos, pero sin los aminoácidos (porción proteica). La SOD no puede penetrar células para barrer el superóxido del interior de la célula, pero las imitaciones de superóxido dismutasa podrían penetrar células y actuar destruyendo el superóxido del interior de las células. Ejemplos de tales imitaciones de SOD se ofrecen en Yaping, T. et al.: The Inhibitory Effect of 21 Mimics of SOD; Inhibition of Superoxide Formation. Free Rd. Biol. Med., 13:533-541, 1992.

Igualmente, pueden emplearse agentes reductores de NO para reducir al mínimo la producción de peroxinitrito (véase caja 6, figura 2). Estos agentes podrían ser también, según se cree, ligantes, por ejemplo, hemoglobina o azul de metileno.

Mecanismos propuestos de las modalidades preferidas

Sin que ello suponga una imitación a cualquier teoría en particular, la figura 3 ilustra los mecanismos teóricos en cuanto al papel de antioxidantes, agentes de glutationa y esteroides con respecto a la producción de HIV. La replicación de HIV es bloqueada por una combinación de antioxidantes e inhibidor de la inducción de NFKB. Se cree que alrededor del 70% de la acción bloqueante de la replicación de HIV proviene del inhibidor de la inducción de NFKB, el cual preferentemente consiste en uno o más esteroides anti-inflamatorios. Aunque dichos esteroides no tienen una actividad inhibidora directa, los mismos controlan la síntesis vírica al bloquear la inducción de NFKB. Como se recordará, el NFKB es un factor de transcripción de DNA constituido por proteína. El NFKB controla toda una serie de citoquinas inflamatorias y NO sintasa, así como la replicación de HIV y FIV. Tras la introducción de esteroides en el sistema biológico, los esteroides impiden la entrada o bloquean alrededor del 70% del HIV u otra producción vírica, dependiendo de la dosis de esteroides, del HIV, de citoquinas y de la NO sintasa.

Sin embargo, para que el NFKB sea activo debe desprenderse de su factor inhibidor I kappa B. Dicho desprendimiento requiere la oxidación debido a que los enlaces que retienen al factor inhibidor a las proteínas P50 y P65 son sensibles a la oxidación. De este modo, los antioxidantes mantienen al factor inhibidor I kappa B unido a NFKB y, por tanto, inactivo. Se cree que el papel de los antioxidantes en el mecanismo ilustrado en la figura 3 es responsable del 30% aproximadamente de la actividad productiva de NFKB y evita la replicación de HIV.

Todos los componentes aquí indicados se pueden administrar al animal necesitado de tratamiento por cualquier método conocido para los expertos en la materia. Aunque resulta sumamente preferido administrar los antioxidantes que incluyen agente de glutationa e inhibidor de la inducción de NFKB de manera concurrente o simultánea, ello no es un requisito. Así, los diversos componentes se pueden administrar por separado y durante un periodo de tiempo tan prolongado para que se presente todavía el sinergismo procedente de su presencia combinada o mecanismos conjuntos. Por tanto, los componentes se administran en general de forma concurrente, de manera que los mismos estén presentes en el sistema del animal de forma concurrente. Los modos de administración incluyen la administración oral y la inyección, tal como inyección intramuscular.

Composiciones y estuches farmacéuticas

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden utilizarse en la represión de la reproducción de virus latentes o retrovirus tal como HIV. Las composiciones preferidas comprenden mezclas de los componentes anteriormente descritos con los vehículos y diluyentes farmacéuticos usuales. Así, una composición de una modalidad preferida comprende: (1) un agente de glutationa; (2) una cantidad eficaz de uno o más antioxidantes adicionales; y (3) una cantidad eficaz de un inhibidor de la inducción de NFKB. En una modalidad sumamente preferida, las composiciones farmacéuticas comprenden: (1) una cantidad eficaz de un agente de glutationa, por ejemplo, glutationa, un precursor de glutationa y/o un realzador de la producción de glutationa, (2a) una cantidad eficaz de un antioxidante soluble en agua, (2b) una cantidad eficaz de un antioxidante liposoluble y (3) una cantidad eficaz de un esteroide anti-inflamatorio como el inhibidor de la inducción de NFKB. También se pueden incluir los otros ingredientes anteriormente descritos.

Las composiciones farmacéuticas según la invención se pueden administrar por vía oral (en forma de comprimidos, cápsulas o soluciones) o por vía parenteral (en forma de inyecciones o pellets). Estos preparados se pueden obtener por los métodos usuales empleando vehículos y excipientes comunes. Para comprimidos, por ejemplo, se emplean, como vehículos y excipientes, agua, glucosa, maltosa, goma arábiga, gelatina, manitol, pasta de almidón, trisilicato de magnesio, talco, almidón de maíz, silicato coloidal, almidón de patata y urea.

Las soluciones incluyen suspensiones acuosas u oleosas, jarabes y elixires, que se pueden preparar por las técnicas tradicionalmente empleadas. Además, la presente invención proporciona estuches farmacéuticos que contienen los ingredientes de la composición farmacéutica aquí descrita, sin embargo, envasados individualmente. Es decir, se proporciona un estuche que puede contener un suministro de antioxidantes, preferentemente un antioxidante soluble en agua y un antioxidante liposoluble, un suministro de un agente de glutationa y un suministro de un esteroide anti-inflamatorio. El usuario administra entonces los ingredientes, con preferencia de un modo generalmente concurrente. También se pueden incluir los otros ingredientes anteriormente descritos.

Aplicaciones de la presente invención

Además del tratamiento de humanos, la presente invención resulta particularmente muy adecuada para el tratamiento de aves tales como pavos y pollos. Dichas aves constituyen animales diana excelentes para el SIDA o virus de inmunodeficiencia dado que toda la manada puede ser destruida en un momento dado. Las composiciones se pueden administrar a las aves mediante introducción en el alimento. Se conoce una amplia variedad de otros animales que resultan infectados por retrovirus y que de este modo podrían ser tratados de acuerdo con los métodos aquí descritos. Se sabe que las vacas resultan infectas por virus bovinos. Los primates tales como monos, simios y macacos pueden resultar infectados por el virus de la inmunodeficiencia simia. Los gatos de casi todas las variedades, tales como leones, tigres, gatos domésticos, pumas, leopardos y panteras, pueden resultar afectados por el virus de la inmunodeficiencia felina. Las ovejas y cabras pueden resultar infectadas por visna-maedi. Los caballos pueden resultar infectados por anemia infecciosa equina. Además, otros animales pueden resultar infectados por retrovirus, tales como ratas, ratones, cerdos, perros, visones, animales marinos tales como leones marinos y salmón de lomo azul y salmón de río. Todos los tratamientos aquí descritos o expuestos pueden realizarse en otros animales que los descritos anteriormente mediante ajustes adecuados de las dosis de acuerdo con el peso corporal del animal.

Las modalidades aquí descritas se pueden emplear para el tratamiento de una amplia variedad de virus, incluyendo retrovirus. Ejemplos de dichos virus incluyen, pero no de forma limitativa, virus de la leucemia murina de Abelson, virus de la leucemia de células T del adulto, virus de la leucemia murina AKR, virus de la leucemia aguda aviar, virus de la eritroblastosis aviar, virus de la influenza aviar, virus del sarcoma y leucemia aviar, virus de la leucemia aviar, virus de la leucosis aviar, virus de la micloblastosis aviar, virus del sarcoma aviar, virus del sarcoma-leucemia aviar, retrovirus endógeno de papión, virus de la inmunodeficiencia bovina, virus de la leucemia bovina, virus sincitial bovino, virus formador del sincitio bovino, virus de la artritis encefalitis caprina, virus sincitial en pollos, virus sincitial de gallinas, virus de la anemia infecciosa de patos, virus de la anemia infecciosa equina, virus del sarcoma osteogénico murino FBJ, virus del sarcoma murino FBJ, virus de la inmunodeficiencia felina, virus de la leucemia felina, virus del sarcoma felino, virus formador del sincitio felino, virus espumosos, virus de la leucemia murina de Friend, virus formador del foco de bazo de Friend, virus del sarcoma de Fujinami, virus del sarcoma felino de Gardner-Rashed, virus de la leucemia del mono gibón, virus de Gross, virus formador del sincitio en hámsters, virus del sarcoma felino de Hardy-Zuckerman, virus del sarcoma murino de Harvy, inmunodeficiencia humana I, inmunodeficiencia humana II, virus de la inmunodeficiencia humana, virus de la espuma humana, virus de la leucemia de células T humanas, virus de la leucemia de células T humanas de tipo I, virus de la leucemia de células T humanas de tipo II, virus de la leucemia de células T humanas de tipo III, virus del sarcoma murino de Kirsten, lentivirus (términos generales), virus del mono de Mason pfizer, virus de la leucemia murina formador del foco de células de Mink, virus de células T de Mo, virus de la leucemia murina de Moloney, virus del sarcoma murino de Moloney, virus del tumor mamario del ratón, parvovirus murino, virus asociado con al mieloblastosis, virus 29 de mielocitomastosis, virus del sarcoma mieloproliferativo, virus de la leucemia murina, parvovirus murino, oncovirus, virus de la enfermedad del salmón de lomo azul de Oregon, virus de PO-I-Lu, virus del papiloma de Rabbitpox, cepa T de reticuloendoteliosis, asociada con reticuloendoteliosis, virus del sarcoma de Rous, enfermedad crónica del río de sacramento (salmón), virus espumoso del león marino, virus espumoso simio, inmunodeficiencia simia, retrovirus simio de tipo I, retrovirus simio de tipo II, retrovirus simio de tipo III, retrovirus simio e tipo IV, retrovirus simio de tipo V, virus asociado con el sarcoma simio, virus del sarcoma simio, virus de la leucemia de células T de simios, virus de la leucemia de células T de simios de tipo III, virus del linfoma T simio de tipo I, virus del sarcoma felino de Snider-Thelin, virus de macdi-visma ovino de Africa del sur, virus formador del foco de bazo, virus de Spima, espimavirus, retrovirus del mono Squrrel (Aotus) y virus de Spuma-Maedi.

Ejemplos

Se llevó a cabo un ensayo in vivo para demostrar la eficacia de protección de los tratamientos aquí descritos. Se realizó una serie de ensayos de laboratorio en gatos infectados por retrovirus. En el régimen de tratamiento preferido, el animal que padece de HIV (+), se administra con dosis relativamente grandes de antioxidantes tanto solubles en agua como liposolubles, tales como vitaminas C, A y E; con una cantidad eficaz de al menos un precursor de glutationa tal como N-acetilcisteína; seguido por un inhibidor de la inducción de NFKB, tal como uno o más esteroides o lazaroides anti-inflamatorios. Como se resume en la siguiente tabla IV, de acuerdo con los métodos aquí descritos y reivindicados, se trataron 7 gatos infectados fuertemente con HIV o FIV. Cada uno de los gatos tenía un peso de aproximadamente 10 a 18 libras. Los gatos se trataron inicialmente con una sola dosis de una cantidad eficaz de un inhibidor de la inducción de NFKB, es decir, una dosis de esteroide anti-inflamatorio DEPO-MEDROL (20-25 mg), y una serie de dosis orales de un precursor de glutationa, N-acetilcisteína. La cantidad de N-acetilcisteína administrada con alimento a cada gato fue de 1.200 mg por día. Además, se administraron oralmente a los gatos dosis grandes de antioxidantes liposolubles y solubles en agua, vitaminas E, C y A, diariamente, mezclándolos con el alimento de los gatos. La vitamina E se administró en una dosis de 400 IU por día a cada gato y la vitamina C se administró a un nivel de 500 mg por día a cada gato. A cada uno de los gatos se administraron también vitaminas A, K y cobre y zinc por medio de 1 PET TABS por día. PET TABS es una multivitamina comercialmente disponible para mascotas, tales como gatos, y es suministrada por Smith-Kline Beecham.

Los gatos tratados se controlaron mediante un análisis ELISA para un ensayo de antígeno de virus de la leucemia felina/anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia felina (CITE PRO COMBO: Programmed Biodetection suministrado por IDEXX Corp. de Portland, Maine) durante dos semanas aproximadamente. De los siete gatos ensayados, todos ellos parecían haberse curado de su infección inicial de leucemia felina, SIDA felino o de ambas. El tratamiento duró de uno a dos meses de tratamiento continuo con N-acetilcisteína y altas dosis de vitaminas C, E y A y administración periódica de esteroides anti-inflamatorios.

TABLA 4 Efecto de la terapia antirretrovirica en gatos infectados por retrovirus

Edad	Sexo	Nombre	Análisis	Síntomas	Análisis
8	H	Champagne	FELV (+), FIV (+)	pérdida pelo, pérdida dientes	FELV (-), FIV (-)
8	M	Precious	FELV (+), FIV (+)	vómitos, problemas dentales	FELV (-), FIV (-)
9	H	Missy	FELV (+), FIV (+)	diarrea sanguinolenta,	FELV (-), FIV (-)
				problemas dentales
11	M	Sampson	FIV (+)	vómitos, encías rojas	FIV (-)
8	M	Josey	FELV (+)	pérdida dientes, sin apetito,	FELV (-)
				problemas pulmonares
10	M	Patch	FIV (+)	pobre apetito, letargo	FIV (-)
12	M	Bud	FIV (+)	pérdida peso, sin apetito	FIV (-)

Notas:

1): Uno de los gatos con FELV (+)/FIV (+) murió sin el tratamiento como un control.

2): Tratamientos: los gatos fueron inyectados intramuscularmente con 20 mg de DEPO-MEDROL (esteroide anti-inflamatorio) y dispensados con 1.200 mg de N- acetilcisteína en polvo, 200 IU de vitamina E, 500 mg de vitamina C y uno PET TAB/día.

3): Se necesitaron de 3 a 6 semanas para que los gatos cambiaran desde una reacción positiva a retrovirus a una reacción negativa después del tratamiento.

4): Los síntomas de Champagne, Precious y Missy, tales como problemas dentales, diarrea sanguinolenta y pérdida de apetito, cesaron por completo después del tratamiento con esteroides/antioxidantes. Los síntomas de Sampson, tales como vómitos, encías enfermas y pérdida de apetito, desaparecieron por completo después del tratamiento. Los síntomas de Josey de problemas pulmonares, pérdida de apetito e infección de encías, desaparecieron después del tratamiento. Los gatos se mantuvieron con PET TABS después del tratamiento con esteroides/antioxidantes.

5): Al término del ensayo, todos los gatos permanecieron negativos a FIV o virus de la leucemia.

6): Se extrajo sangre para análisis de cuatro de los gatos tratados (Sampson, Josey, Match y Bud). Los análisis incluyeron cultivos de células, estimulación de mitógenos y ensayo de reacción en cadena de la polimerasa para el retrovirus. Todos los ensayos indicaron que los gatos se habían curado por completo y ninguno de ellos mostró signo alguno del virus.

Estos experimentos en gatos demuestran por primera vez que el SIDA puede curarse en un modelo in vivo. Los tratamientos fueron realizados por un veterinario titulado. Los tratamientos fueron realizados también por un segundo veterinario. La segunda serie de tratamientos tuvo también éxito.

En un régimen de tratamiento opcional, a seguir cuando el animal que padece de HIV(+), exhibe SIDA (es decir, un recuento de linfocitos T o linfocitos CD_{4} menor de 100 células/mm^{3}), se administran dosis relativamente grandes de antioxidantes tanto solubles en agua como liposolubles y una cantidad eficaz de al menos un precursor de glutationa, tal como N-acetilcisteína. Antes de administrar un inductor de la inducción de NFKB, se aumenta el recuento de CD_{4} (linfocitos T) a 100 células/mm^{3} o más aproximadamente. El recuento de CD_{4} puede aumentarse mediante la administración, tal como por inyección, de GM-CSF para estimular monocitos. La GM-CSF es una hormona estimuladora de células de monocitos de granulocitos. Alternativamente, o además de administrar GM-CSF, se pueden suministrar concentrados de células blancas que contienen monocitos, tal como por vía de transfusiones. Una vez que los recuentos de CD_{4} son de aproximadamente 100 células/mm^{3} o más, se administra un inductor de la inducción de NFKB.

Tanto en el régimen de tratamiento preferido como en el régimen de tratamiento opcional, el inhibidor de la inducción de NFKB se administra hasta que se indica SIDA(-) en un análisis de sangre SIDA(+), por medio de ELISA, transferencia Western y PCR (reacción en cadena de la polimerasa). También es preferible administrar, junto con los antioxidantes, una multivitamina diaria que contenga todos los minerales recomendados con cobre y zinc. La administración de GM-CSF y/o la transfusión de concentrados nuevos de células blancas que contienen monocitos, se puede realizar de forma simultánea o en combinación con la administración de multivitaminas, antioxidantes solubles en agua, antioxidantes liposolubles y/o precursor de glutationa.

A continuación se describe un ejemplo de tratamiento en humanos de acuerdo con la modalidad preferida. Los pacientes humanos se dividen en dos grupos:

1. Grupo 1 con HIV(+) pero sin SIDA (recuento de linfocitos T, es decir linfocitos CD_{4} igual a o mayor de 200 células por mm^{3}).

2. Grupo 2 con SIDA.

El grupo 1 de pacientes de HIV(+) con SIDA, se trata como sigue.

Cada paciente se administra con:

1. Una multivitamina diaria con una composición completa de minerales recomendados, vitamina A, un contenido en beta-caroteno de 4-8 veces el normal y cantidades eficaces de cobre y zinc.

2. Vitamina E a un nivel de dosificación de 2.000 IU/día.

3. Vitamina C a un nivel de dosificación de 3.000 mg/día.

4. N-acetilcisteína a un nivel de dosificación inicialmente de alrededor de 140 mg/kg por día que gradualmente se reduce a un nivel de alrededor de 40 mg por kilogramo de peso corporal, cada día.

5. Metilprednisolona a un nivel de dosificación de 4-16 mg por día o 40 mg de DEPO-MEDROL inyectado cada dos semanas intramuscularmente (zonas carnosas, por ejemplo deltoideo), por kilogramo de peso corporal. Se administró DEPO-MEDROL puesto que el mismo utiliza una forma de liberación lenta de metilprednisolona.

Con preferencia, los componentes 1-5 se administran de forma simultánea durante todo el periodo de tratamiento. El tratamiento se continúa hasta que se obtiene un análisis en sangre SIDA(-) basado en técnicas ELISA, transferencia Western y PCR (reacción en cadena de la polimerasa). Queda contemplado, como es evidente, que podrían administrarse niveles de dosificación de A, E, C, N-acetilcisteína y metilprednisolona u otros esteroides o lazaroides a niveles como los indicados en el conjunto de esta descripción. Además, queda contemplado también que podrían utilizarse otros precursores de glutationa adecuados en lugar de N-acetilcisteína. Similarmente, podrían utilizarse uno o más inhibidores diferentes de la inducción de NFKB en lugar de la metilprednisolona.

El segundo grupo de pacientes de HIV(+), con SIDA, se trata de la misma manera que el primer grupo, con la excepción de que a la administración del esteroide anti-inflamatorio, metilprednisolona, se añade GM-CSF (hormona estimuladora de células de monocitos de granulocitos) hasta que el recuento de CD_{4} (linfocitos T) es de al menos 200 células por mm^{3}. Esto se lleva a cabo mediante inyección con GM-CSF para estimular monocitos, o bien por transfusión para proporcionar concentrados nuevos de células blancas que contienen monocitos. Una vez que los recuentos de CD_{4} han sido aumentados a valores próximos a los normales, se interrumpe la administración de GM-CSF. El tratamiento se continúa hasta obtener un análisis de sangre SIDA(-) basado en técnicas ELISA, transferencia Western y PCR.

Hasta la fecha, la modalidad preferida ha sido efectuada en un sujeto humano infectado con HIV y que exhibe SIDA. Antes del tratamiento, el sujeto tenía un recuento de células CD_{4} de 44 a 49. Después de un periodo de tratamiento de tres meses, el recuento de células CD_{4} del sujeto aumentó a 180. Además, todas las otras enfermedades que padecía el sujeto, demencia por SIDA, infección de herpes e infección fúngica, desaparecieron o quedaron bajo control después del periodo de tres meses de tratamiento. Este tratamiento se efectuó sin GM-CSF.

El presente inventor contempla una amplia disposición de tratamientos y disposiciones que son variaciones de las modalidades preferidas aquí descritas. Por ejemplo, se ha descubierto que los virus Herpes son tratados eficazmente mediante un régimen de tratamiento que comprende administrar, generalmente de forma concurrente, (1) al menos un agente de glutationa, (2) al menos un antioxidante soluble en agua a dosis mayores de las necesidades mínimas diarias recomendadas, (3) al menos un antioxidante liposoluble a dosis mayores de las necesidades mínimas diarias recomendadas y, con preferencia, cantidades pequeñas o nulas de un inhibidor de la inducción de NFKB. En un régimen de tratamiento sumamente preferido, el sujeto que padece de síntomas del virus Herpes se administra, en general de forma concurrente, con (1) al menos un agente de glutationa, (2) vitamina C a dosis mayores de las necesidades mínimas diarias recomendadas y (3) vitamina E a dosis mayores de las necesidades mínimas diarias recomendadas. Los niveles de dosificación de (1), (2) y (3) están de acuerdo con lo descrito aquí anteriormente. Igualmente, en relación con estos tratamientos preferidos, se describen composiciones farmacéuticas y estuches para el tratamiento de Herpes que comprenden (1) al menos un agente de glutationa, (2) al menos un antioxidante soluble en agua y (3) al menos un antioxidante liposoluble. Las cantidades o proporciones de cada uno de sus componentes están de acuerdo con lo descrito aquí anteriormente. Se ha comprobado que este tratamiento resulta sorprendentemente eficaz a la hora de prevenir la reproducción del virus Herpes.

Claims

1. Una composición farmacéutica o un estuche que comprende:

(ii): una cantidad eficaz de uno o más antioxidantes adicionales; y

2. Una composición o estuche según la reivindicación 1, en donde el antioxidante adicional se elige entre un antioxidante soluble en agua, un antioxidante liposoluble o una combinación de los mismos.

3. Una composición o estuche según la reivindicación 2, en donde el antioxidante soluble en agua adicional es vitamina C.

4. Una composición o estuche según la reivindicación 2 o 3, en donde el antioxidante liposoluble es vitamina E, vitamina K, vitamina A o una combinación de dos o más de las mismas.

5. Una composición o estuche según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el agente es glutationa reducida.

6. Una composición o estuche según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el agente se elige entre N-acetilcisteína, L-cisteína, ácido 2-oxo-4-diazolidencarboxílico, ebselen, oltipraz, éster etílico de N-acetilcisteína, éster metílico de N-acetilcisteína, cistamina, cisteamina, penicilamina, 2,3-dimercapto-1-propanol, L-2-oxotiazolidon-4-carboxilato, maleato de dietilo, éster etílico de glutationa, éster metílico de glutationa, éster isopropílico de glutationa, oxazolidona o una combinación de dos o más de los anteriores.

7. Una composición o estuche según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el lazaroide no glucocorticoide es 21-[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-16-metil-(16.alfa.)-pregna-1,4,9(11)-trieno-3,20-diona monometanosulfonato o 21-[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-pregna-1,4, 9(11)-trieno-3,20-diona, (Z)-2-butenodioato (1:1); pregna-1,4,9(11)-triene-3,20-diona, 21-[4-[5,6-bis (dietilamino)-2-piridinil]-1-piperazinil]-16-metil, hidrocloruro, (16-alfa.); 21-[4-[3-(etilamino)-2-piridmil]-1-piperazinil-16-metil-pregna-1,4, 9(11)-trien-3,20-diona, (16.alfa.)-,(Z)-2-butenodioato (1:1); 2-[[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]-metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-2H-1-benzopiran-6-ol, dihidrocloruro; 2H-1-benzopiran-6-ol, 2-[[4-(2,6-di-1-
pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-, 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato
(1:2); 2H-1-benzopiran-6-ol, 2-[[4-[3-(etilamino)-2-piridinil]-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-, hidrocloruro; etanol, 2-[(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)metilamino]-; o (-)-2-[[4-(2,6-di-1-pirrolidinil-4-pirimidinil)-1-piperazinil]metil]-3,4-dihidro-2,5,7,8-tetrametil-2H-1-benzopiran-6-ol, dihidrocloruro.

8. Una composición o estuche según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende además un supresor de la producción de peroxinitrito.

9. Una composición o estuche según la reivindicación 8, en donde el supresor de la producción de peroxinitrito es un inhibidor de NADPH oxidasa, un agente reductor de radicales aniónicos de superóxido, un agente reductor de NO\bullet, un inhibidor de xantina oxidasa o una mezcla de dos o más de los mismos.

10. Una composición o estuche según la reivindicación 9, en donde el inhibidor de NADPH oxidasa consiste en nucleótidos antisentido RAC, difeniliodonio, bisulfato de difenileniodonio, 17-hidroxi-wortmanina (HWT), ácido ocadaico, alfa-1-antiquimiotripsina, estauroesporina, Ebselen-[2-fenil-1,2-b-en3isoselanazol-3[2H]ona], o apocinina (4-hidroxi-3-metoxiacetofenona).

11. Una composición o estuche según la reivindicación 9, en donde el agente reductor de radicales aniónicos de superóxido es (1) un mineral tal como cobre, zinc, hierro o selenio, (2) superóxido dismutasa (SOD), IgA SOD y SOD encapsulada en liposomas o (3) imitaciones de superóxido dismutasa.

12. Una composición o estuche según la reivindicación 9, en donde el agente reductor de NO\bullet es hemoglobina, azul de metileno o una mezcla de ambos.

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13. Una composición o estuche según la reivindicación 9, en donde el inhibidor de xantina oxidasa es alopurinol, oxipurinol o una mezcla de los mismos.

14. Una composición o estuche según cualquiera de las composiciones 1 a 13 para suprimir la reproducción de un virus latente en un animal.

15. Una composición o estuche que comprende los componentes indicados en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, como un preparado combinado para la administración concurrente, simultánea, por separado o para otro tipo de administración, para utilizarse en la supresión de la reproducción de un virus talmente en un animal.

16. Una composición o estuche según la reivindicación 1, en donde el inhibidor de la inducción de NFKB es un esteroide seleccionado entre predonsona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona dehidroepiandrosterona, 9a-fluorcortisol, prednisona, aetiocolanolona, 2-metilcortisol, pregnanodiol, dexicorticosterona, cortisona, hidrocortisona, 6a-metilprednisolona, triamcinolona, estrógeno y los antioxidantes adicionales comprenden vitamina A, vitamina E y vitamina C.

17. Una composición según la reivindicación 16, en donde el agente es N-acetilcisteína, L-cisteína, ácido 2-oxo-4-diazolidencarboxílico, ebselen, oltipraz, éster etílico de N-acetilcisteína, éster metílico de N-acetilcisteína, cistamina, cisteamina, penicilamina, 2,3-dimercapto-1-propanol, L-2-oxotiazolidon-4-carboxilato, maleato de dietilo, éster etílico de glutationa, éster metílico de glutationa, éster isopropílico de glutationa, oxazolidona o una combinación de dos o más de los anteriores.

18. Una composición según la reivindicación 16 o 17, para utilizarse en el tratamiento de humanos con HIV.

19. Una composición que comprende los componentes indicados en la reivindicación 16 o 17, para la administración concurrente, simultánea, por separado o para otro tipo de administración, para utilizarse en el tratamiento de humanos con HIV.