ES2240686T3 - Procedimiento para prevenir y tratar dolor visceral y trastornos gastrointestinales. - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere al uso del ácido (1 , 3 , 5 )-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar dolor visceral. La presente invención también concierne al uso de ácido (1 , 3 , 5 )-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar trastornos gastrointestinales. Más particularmente, la invención se refiere al uso de ácido (1 , 3 , 5 )-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3- acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar los siguientes trastornos: - trastorno funcional del intestino que incluye reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable o síndrome del dolor abdominal funcional - enfermedad inflamatoria del intestino incluyendo enfermedad de Crohn, ileítis o colitis ulcerosa - el dolor visceral asociado con dismenorrea, dolor pélvico, dolor de cistitis y pancreatitis. De acuerdo a una realización preferida de la invención, el medicamento es una formulación para administración oral.

Description

Procedimiento para prevenir y tratar dolor visceral y trastornos gastrointestinales.

Campo de la invención

Esta Invención se refiere al uso de un aminoácido bicíclico para la preparación de un medicamento para prevenir y tratar el dolor visceral y los trastornos gastrointestinales tales como trastornos funcionales del intestino y enfermedades inflamatorias del intestino.

Antecedentes de la invención

Las vísceras comprenden los órganos y la cavidad abdominal. Estos órganos incluyen los órganos sexuales, el bazo y parte del sistema digestivo. El dolor asociado a la víscera se puede dividir en dolor visceral digestivo y dolor visceral no digestivo.

Los trastornos gastrointestinales que encontramos comúnmente incluyen los trastornos funcionales del intestino (FBD) y las enfermedades infamatorias del intestino (IBD). Estos trastornos GI incluyen generalmente un amplio intervalo de estados morbosos que actualmente sólo son moderadamente controlados, incluyendo -para FBD, reflujo gastroesofágico, dispepsia, el síndrome del intestino irritable (IBS) y el síndrome del dolor abdominal funcional (FAPS), y -para IBD, enfermedad de Crohn, ileítis, y colitis ulcerosa, y todo produce regularmente dolor visceral. Se ha mostrado recientemente en estas patologías, en particular en el síndrome del intestino irritable y la dispepsia, que el umbral de dolor visceral está disminuido, indicando una hipersensibilidad visceral. Otros tipos de dolor visceral incluyen el dolor asociado con dismenorrea, el dolor pélvico, la cistitis y la pancreatitis.

Se conocen pocos fármacos para actuar selectivamente sobre hipersensibilidad asociada a un trastorno GI (Farthing M.J. (1998) Drugs 56: 11-21).

Los tratamientos disponibles del dolor caen dentro de dos categorías principales: 1) fármacos antiinflamatorios no esteroídicos, usados para tratar el dolor suave, pero cuyo uso terapéutico está limitado por efectos GI adversos (erosión gástrica, formación de úlceras peptídicas, inflamación del duodeno y colon); 2) morfina y opioides relacionados, usados para tratar dolor de moderado a severo pero cuyo uso terapéutico se limita por efectos secundarios gastrointestinales incluyendo estreñimiento, depresión respiratoria, tolerancia, y potencial de abuso.

La publicación de patente internacional WO 99/21824 describe el uso de aminoácidos cíclicos y derivados de los mismos para usar en tratar trastornos gastrointestinales tales como síndrome del intestino irritable.

La solicitud de patente europea EP-A-1031350 describe el uso de una análogo de gabapentina en la prevención y el tratamiento del dolor visceral.

La solicitud de patente internacional WO-A-99/08670 describe un procedimiento para prevenir y tratar daño gastrointestinal y trastornos usando un análogo de GABA.

La solicitud de patente internacional WO-A-01/28978 describe ciertos aminoácidos bicíclicos los cuales son útiles en el tratamiento de epilepsia y otras afecciones.

Hay una necesidad de fármacos que pueden aliviar el dolor visceral sin efectos secundarios indeseados.

Sumario de la invención

Se ha encontrado que el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético, de fórmula Ia:

1

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es útil para el tratamiento de trastornos tales como dolor visceral, FBD tal como reflujo gastroesofágico, dispepsia, IBS y FAPS, e IBD tal como enfermedad de Crohn, ileítis, y colitis ulcerosa, y otros tipos de dolor visceral asociados con dismenorrea, dolor pélvico, cistitis y pancreatitis. Los inventores han encontrado inesperadamente que el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético y sus sales farmacéuticamente aceptables tienen la capacidad de prevenir o tratar trastornos asociados con el dolor visceral tales como:

- FBD, incluyendo reflujo gastroesofágico, dispepsia, IBS y FAPS, y

- IBD incluyendo enfermedad de Crohn, ileítis, y colitis ulcerosa, y

- otros tipos de dolor visceral asociados con dismenorrea, dolor pélvico, cistitis y pancreatitis.

Esta invención por lo tanto se refiere al uso del ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar dolor visceral.

La presente invención también concierne al uso de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar trastornos gastrointestinales.

Más particularmente, la invención se refiere al uso de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar los siguientes trastornos:

-

trastorno funcional del intestino que incluye reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable o síndrome del dolor abdominal funcional

-

enfermedad inflamatoria del intestino incluyendo enfermedad de Crohn, ileítis o colitis ulcerosa

-

el dolor visceral asociado con dismenorrea, dolor pélvico, dolor de cistitis y pancreatitis.

De acuerdo a una realización preferida de la invención, el medicamento es una formulación para administración oral.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: curva de respuesta a dosis de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético en hiperalgesia rectal inducida por LPS. * = p < 0,05.

Descripción detallada de la invención

Los inventores han encontrado que el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, son efectivos para el tratamiento del dolor visceral, cuando se administran oralmente. Un modelo farmacológico usado es un modelo de dolor crónico visceral inducido por TNBS (ácido trinitrobenceno sulfónico) en ratas (Diop L y col., Gastroenterology 1999, 116, 4(2): A986). Más particularmente, los inventores han mostrado sorprendentemente que el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético es 20 veces más efectivo que la gabapentina para el tratamiento de dolor visceral en el modelo de dolor visceral crónico inducido por TNBS.

Además, en un modelo de hipersensibilidad rectal inducida por LPS (lipopolisacárido) de dolor visceral en ratas (Eutamene H, y col., J Pharmacol Exp Ther 2000 295(1): 162-7), el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético se mostró efectivo en el tratamiento de dolor visceral. En este modelo el compuesto mostró ser aproximadamente 50 veces más potente que gabapentina para el tratamiento del dolor visceral.

Se puede utilizar el ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético como un solvato, hidrato, sal farmacéuticamente aceptable, o un polimorfo (descriptores de retículo cristalino diferentes).

Dado que los aminoácidos son anfóteros, las sales farmacológicamente compatibles pueden ser sales de ácidos inorgánicos y orgánicos apropiados, por ejemplo, ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, oxálico, láctico, cítrico, málico, salicílico, malónico, maleico, succínico, y ascórbico. Comenzando a partir de los hidróxidos o carbonatos correspondientes, se forman las sales con metales alcalinos o metales alcalinotérreos, por ejemplo, sodio, potasio, magnesio, o calcio. Las sales con iones de amonio cuaternario se pueden preparar también, por ejemplo, con el ión tetrametilamonio. (Véase también "Pharmaceuticals salts" por Berge S.M. y col. (1997) J. Pharm. Sci. 66:
1-19).

El éster aminoacílico y el éster láctico se conocen como profármacos de aminoácidos (Wermuth C.G., Chemistry and Industry, 1980: 433-435). El grupo carbonilo de los aminoácidos se puede esterificar por medios conocidos. Los profármacos y las drogas blandas se conocen en la técnica (Palomino E, Drugs of the Future, 1990; 15(4): 361-368).

La efectividad de un fármaco administrado oralmente depende de la eficiencia del transporte del fármaco a través del epitelio mucoso y su estabilidad en circulación enterohepática. Los fármacos que son eficaces después de la administración parenteral pero menos eficaces oralmente, o cuya vida media en plasma se considera demasiado corta, se puede modificar químicamente en una forma de profármaco.

Un profármaco es un fármaco que se ha modificado químicamente en su sitio de acción, pero el cual se puede degradar o modificar por uno o más procedimientos enzimáticos u otros procedimientos hasta su forma bioactiva in vivo.

Este fármaco químicamente modificado, o profármaco, tendría un perfil farmacocinético diferente al fármaco parental, permitiendo absorción a través del epitelio mucoso más fácil, mejor formulación y/o solubilidad en forma de sal, estabilidad sistémica incrementada (para un incremento en vida media en plasma, por ejemplo). Estas modificaciones químicas pueden ser

1)

derivados éster o amida, los cuales se pueden escindir mediante, por ejemplo, esterasas o lipasas. Para los derivados éster, el éster se deriva del resto ácido carboxílico de la molécula del fármaco por medios conocidos. Para los derivados amida, la amida se puede derivar del resto ácido carboxílico o el resto amida de la molécula del fármaco por medios conocidos;

2)

péptidos, los cuales se pueden reconocer mediante proteasas específicas o no específicas. Un péptido se puede acoplar a la molécula del fármaco por medio de formación de puentes amida con el resto amina o de ácido carboxílico de la molécula del fármaco por medios conocidos;

3)

derivados que se acumulan en un sitio de acción a través de la selección de membrana de una forma profármaco o una forma profármaco modificada;

4)

cualquier combinación de 1) a 3).

La investigación actual en experimentos animales ha mostrado la absorción oral de ciertos fármacos por la preparación de sales cuaternarias "blandas". La sal cuaternaria se denomina sal cuaternaria "blanda" dado que, al contrario que las sales cuarternarias normales, por ejemplo, R-N^{+} (CH_{3})_{3}, puede liberar el fármaco activo en la hidrólisis.

Las sales cuaternarias "blandas" tienen propiedades físicas útiles comparadas con los fármacos básicos o sus sales. La solubilidad en agua se puede incrementar comparada con otras sales, tales como el clorhidrato, pero puede haber una más importante absorción incrementada del fármaco desde el intestino. La absorción incrementada se debe probablemente al hecho de que la sal cuaternaria tiene propiedades tensioactivas y es capaz de formar micelas y pares no ionizados de iones con ácidos biliares, etc., los cuales son capaces de penetrar el epitelio intestinal de forma más efectiva. El profármaco, después de la absorción, se hidroliza rápidamente con liberación del fármaco parental activo.

El compuesto de la presente invención puede existir en una forma no solvatada o en forma solvatada, incluyendo una forma hidratada. En general, las formas solvatadas, son equivalentes a la forma no solvatada y se desea que estén comprendidas en el alcance de esta invención.

Se desea que el término "paciente" incluya un mamífero, especialmente un humano. Todo lo que se requiere para practicar el procedimiento de prevenir y tratar el dolor visceral y los trastornos de GI tal como FBD o IBD de acuerdo con la presente invención es administrar ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético en una cantidad que es efectiva para prevenir o tratar el estado afectado, es decir para controlar el dolor visceral y/o FBD o IBD, La cantidad efectiva de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético a utilizarse será generalmente de 1 a 300 mg/kg del peso molecular del paciente. Las dosis típicas serán de 10 a 5000 mg por día para un paciente adulto de peso normal.

Las afecciones típicas de FBD incluyen enfermedad del reflujo gastroesofágico, dispepsia, e IBS y PAPS.

Las típicas condiciones IBD incluyen ileítis, colitis ulcerativa, y enfermedad de Crohn.

Otros trastornos de dolor visceral incluyen el dolor asociado con dismenorrea, cistitis, dolor pélvico y pancreatitis.

Las composiciones farmacéuticas del compuesto de la presente invención -incluyendo una de sus sales, se produce formulando este componente activo en forma farmacéutica unitaria con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Para preparar composiciones farmacéuticas a partir del compuesto usado en esta invención, los vehículos farmacéuticamente aceptables inertes pueden ser bien sólidos o bien líquidos.

Las formas farmacéuticas sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. Contienen preferiblemente de un 5% a un 70% de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético. En tales formas de dosificación sólidas, el componente activo se administra con al menos un excipiente (o vehículo) inerte habitual tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico o (a) agentes de carga o disolventes, como por ejemplo almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico, (b) ligantes, como por ejemplo carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa, y goma arábica, (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol, (d) agentes disgregantes, como por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos, y carbonato de sodio, (e) retardadores de disolución, como por ejemplo parafina, (f) aceleradores de absorción, como por ejemplo parafina, (f) aceleradores de absorción, como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humedecedores, como por ejemplo, alcohol cetílico, y monoestearato de glicerol, (h) adsorbentes, como por ejemplo, caolín y bentonita, y (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio, o mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos, y píldoras, las formas de dosificación pueden comprender también agentes tampón.

Las composiciones sólidas de un tipo similar se pueden emplear también como agentes de carga en cápsulas de gelatina blandas y duras usando excipientes tales como lactosa igual que polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares.

Formas de dosificación sólidas tales como comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras, y gránulos se pueden preparar con coberturas y vainas, tales como coberturas entéricas y otras bien conocidas en la técnica. Pueden ser de tal composición que liberen el componente activo en una cierta parte del tracto gastrointestinal en una forma demorada. Son ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar sustancias poliméricas y ceras. El componente activo puede también estar en una forma microencapsulada, si es apropiada, con uno o más de los excipientes anteriormente mencionados.

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral incluyen emulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético, las formas líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua u otros disolventes, agentes solubilizadores y emulsificadores, como por ejemplo, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, y similares.

Las suspensiones, además del componente activo, pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo alcoholes isoestearílicos etoxilados isoestearílicos, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, o mezclas de estas sustancias, y similares.

Las composiciones para administración rectal son preferiblemente supositorios los cuales se pueden preparar mezclando los compuestos de la presente invención con excipientes o vehículos no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio, los cuales son sólidos a temperaturas ordinarias pero líquidos a temperatura corporal, y por lo tanto se funden en el recto y liberan el componente activo.

Las composiciones adecuadas para inyección parenteral pueden comprender disoluciones estériles acuosas o no acuosas, dispersiones, suspensiones o emulsiones, y polvos estériles para reconstitución en disoluciones o dispersiones inyectables estériles. Ejemplos de excipientes, diluyentes, disolventes o vehículos líquidos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos.

Estas composiciones pueden contener también coadyuvantes tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes, y dispersantes. La prevención de la acción de microorganismos se puede asegurar mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, y similares. Puede ser también deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio, y similares.

Preferiblemente la preparación farmacéutica está en una forma farmacéutica unitaria. En tal forma, la preparación se divide en monodosis que contienen cantidades apropiadas de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético. La forma farmacéutica unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de la preparación, por ejemplo, comprimidos empaquetados, cápsulas, y polvos en viales o ampollas. La forma farmacéutica unitaria puede ser también una cápsula, sello, o comprimido por si misma, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estas formas envasadas. Algunos ejemplos de formas farmacéuticas unitarias son comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, supositorios, disoluciones y soluciones y suspensiones orales acuosas o no acuosas, y disoluciones parenterales envasadas en recipientes que contienen bien una o bien algún número mayor de unidades posológicas y capaces de subdividirse en monodosis.

El porcentaje del compuesto activo en las siguientes composiciones se puede variar dentro de límites amplios, pero para propósitos prácticos está presente preferiblemente en una concentración de al menos 10% en una composición sólida y al menos 2% en una composición líquida primaria. Las composiciones más satisfactorias son aquellas en las cuales está presente una proporción mucho mayor del componente activo, por ejemplo, del 10% al 90% en peso.

Las vías de administración de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético, o sus sales son parenteral, preferiblemente oral, o por enema. Por ejemplo, una dosificación oral útil está entre 1 mg y 1 g, preferiblemente entre 20 mg y 800 mg, y una dosis intravenosa útil está entre 0,1 mg y 1 g, más preferiblemente entre 5 mg y 50 mg. La dosificación está dentro del rango de dosificación usado en el tratamiento del dolor visceral y trastornos de GI tales como FBD o IBD, o como se dictaría por las necesidades de cada paciente según se describan por el médico.

Una forma farmacéutica unitaria de un compuesto de fórmula Ia para usarse en esta invención puede comprender también otros compuestos útiles en la terapia del dolor visceral y trastornos GI.

Las ventajas de usar ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético en la invención actual incluyen la actividad selectiva del compuesto en el dolor visceral, la naturaleza relativamente no tóxica del compuesto, la facilidad de preparación, el hecho de que el compuesto sea bien tolerado, y la facilidad de administración intravenosa y, en particular, administración oral del fármaco.

Ejemplos

Los procedimientos de síntesis de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético se describen más adelante por medio de los ejemplos de referencia 1-7 y los ejemplos 1-2. Los ejemplos biológicos se muestran por medio de los ejemplos 10 y 11.

Ejemplos de síntesis

Ejemplo de referencia 1

Clorhidrato de ácido (\pm)-(1\alpha,6\beta)(2-aminoetil-octahidro-inden-2-il)-acético

2

Etapa (i)

Se agitó hidruro de sodio (0,11 mg, 2,7 mmol) con THF (tetrahidrofurano, 5 ml) a 0º bajo argón. Se añadió fosfonoacetato de trietilo (0,5 ml) gota a gota y la disolución se agitó durante 10 minutos. La cetona (0,37 g, 7,7 mmol) en THF (5 ml) se añadió gota a gota con agitación y se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la mezcla de reacción se separó entre agua (80 ml) y éter dietílico (3 x 20 ml). El disolvente se eliminó al vacío dando un aceite amarillo, el cual se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (sílice, heptano/EtOAc 19:1) dando 0,34 g (62%) del éster como un aceite incoloro:

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): 1,05-1,29 (9H, m, protones de anillo + CH_{3}), 1,76-1,78 (2H, protones de anillo), 1,87-1,97 (2H, m, protones de anillo), 1,0-2,16 (2H, m, protones de anillo), 2,51-2,56 (1H, dd, J = 5,7, 27,5 Hz., protones de anillo), 3,12-3,18 (1H, dd, J = 5,4, 18,8, protones de anillo), 4,12-4,20 (2H, m, CH_{2}), 5,77 (1H, s, CH).

EM (ES^{+}) m/e 209 [M + H]^{+} 10%.

Etapa (ii)

El éster (0,34 g, 1,63 mmol) se disolvió en THF (5 ml), con agitación bajo argón. Se añadió nitrometano (0,25 ml) y la mezcla de reacción se calentó a 60ºC. Se añadió TBAF (fluoruro de tetrabutilamonio, 2,3 ml) gota a gota a la disolución caliente durante una hora y se agitó durante 4 horas. La mezcla de reacción se repartió entre HCl 2 N y éter dietílico, y el éter dietílico se lavó con salmuera. El disolvente se eliminó al vacío dando un aceite amarillo, el cual se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (sílice, heptano/EtOAC, 19:1), dando 0,264 g (60%) del producto como un aceite incoloro.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 0,97-1,30 (11H, m, protones de anillo + CH_{3}), 1,73-1,95 (6H, m, 2 x CH + 4 protones de anillo), 2,5 (1H, d, J = 16,6 Hz, CH_{2}CO_{2}Et), 2,7 (1H, d, J = 16,6, CH_{2}CO_{2}Et), 4,12-4,18 (2H, m CH_{2}), 4,49-4,51 (1H, d, J = 11,5 Hz, CH_{2}NO_{2}), 4,73-4,75 (1H, d, J = 11,5 Hz, CH_{2}NO_{2}).

\newpage

Etapa (iii)

Se disolvió nitroéster (0,24 g, 0,9 mmol) en metanol con esponja de níquel. Se hidrogenó la reacción a 344.738 pascales (50 psi), a 30ºC durante 15 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite, y el disolvente se eliminó al vacío dando el producto 0,18 (85%) como un sólido amarillo. Este producto era una mezcla de lactama y aminoéster.

Etapa (iv)

El aminoéster se suspendió en HCl 6 N (5 ml) y dioxano (2,5 ml), y se calentó a reflujo durante 4 horas. La disolución se lavó con diclorometano (3 x 5 ml), y la fracción acuosa se evaporó al vacío dando 0,196 g (99%) de producto como un sólido incoloro.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 0,86-1,04 (2H, m), 1,08-1,17 (6H, m), 1,60-1,78 (6H, m), 2,35-2,39 (1H, d, J = 16 Hz, CH_{2}CO_{2}H), 2,46 (1H, m, CH_{2}CO_{2}H), 2,83-2,87 (1H, d, J = 13 Hz, CH_{2}NH_{2}), 2,97-3,00 (1H, d, J = 13 Hz, CH_{2}NH_{2}), 791 (2H, sa, NH_{2}).

EM (ES^{+}) m/e 212 [M+H]^{+} 100%.

HPLC, columna C18 Prodigy, metanol al 5%/acetonitrilo. Tiempo de retención = 3,00 minutos, y una pureza del 99%.

Ejemplo de referencia 2

Clorhidrato de ácido (\pm)-(1\alpha,5\beta)(2-aminometil-octahidro-pentalen-2-il)-acético

3

Etapa (i)

Se agitó el hidruro de sodio (0,6 g, 14,5 mmol) con THF (50 ml) a 0ºC bajo argón. Se añadió trietilfosfonoacetato (2,9 ml) gota a gota y la disolución se agitó durante 10 minutos. Se añadió la cetona (1,8 g, 14,5 mmol) en THF (10 ml) gota agota con agitación y se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la mezcla de reacción se separó entre agua (250 ml) y éter dietílico (3 x 50 ml). Se eliminó el disolvente al vacío dando un aceite amarillo, el cual se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (sílice, heptano/EtOAC 19:1). Dando 1,95 g (69%) del éster como un aceite incoloro:

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 1,14-1,19 (2H, m, CH_{2}), 1,25-1,29 (3H, m, CH_{3}), 1,55-1,79 (4H, m, 2 x CH_{2}), 2,03-2,10 (4H, m, 2 x CH_{2}), 2,45-2,55 (1H, dd, CH), 3,05-3,15 (1H, dd, CH), 4,12-4,17 (2H, c, J = 7,3, 14,4 Hz, COCH_{2}), 5,76 (1H, m, CH).

Etapa (ii)

Se disolvió éster (1,9 g, 10 mmol) en THF (15 ml), con agitación bajo argón. Se añadió nitrometano (1,4 ml), y la mezcla de reacción se calentó a 60ºC. Se añadió TBAF (14 ml) gota a gota a la disolución caliente durante 1 hora, y se agitó durante 5 horas. La mezcla de reacción se separó entre HCl 2N y éter dietílico, y después la fase éter se lavó con salmuera. El éter dietílico se eliminó al vacío dando un aceite naranja, el cual se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (sílice, heptano/EtOAC, 19:1), dando 1,59 g (64%) del producto como un aceite incoloro.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 1,14-1,31 (7H, m, CH_{3} + protones de anillo), 1,64-1,72 (5H, m, protones de anillo), 1,03-1,09 (1H, m, protones de anillo), 2,00-2,05 (2H, m, protones de anillo), 2,57-2,61 (1H, d, J = 16,4 Hz, CH_{2}CO_{2}Et), 2,71-2,75 (1H, d, J = 16,4 Hz, CH_{2}CO_{2}Et), 4,12-4,18 (2H, c, J = 7,1, 14,2 Hz, OCH_{2}CH_{3}), 4,56-4,59 (1H, d, J = 11,5 Hz, CH_{2}NO_{2}), 4,77-4,80 (1H, d, J = 11,5 Hz, CH_{2}NO_{2}).

IR (solo) 2957, 2870, 1731, 1547, 1374, 1182, 1030 cm^{-1}.

Etapa (iii)

Se disolvió nitroéster (1,59 g, 5,9 mmol) en metanol (40 ml), con esponja de níquel. La reacción se hidrógeno a 344.738 pascales (50 psi), a 30ºC durante 5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite, y el disolvente se eliminó al vacío dando 1,08 g de la lactama (97%) como un sólido blanquecino.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 1,08-1,11 (2H, m, protones de anillo), 1,23-1,28 (2H, m, protones de anillo), 1,62-1,68 (4H, m), 1,82-1,89 (2H, m), 2,00-2,06 (2H, m), 2,30-2,40 (2H, m, CH_{2}CO), 3,29-3,30 (2H, M, CH_{2}NH), 5,45 (1H, sa, NH).

EM (ES^{+}) m/e 180 [M + H]^{+} 3%, 359 [2M + H]^{+} 21%, 381 [2M + Na]^{+} 100%.

Etapa (iv)

La lactama se suspendió en HCl 6 N (20 ml) y dioxano (8 ml), y se calentó a reflujo durante 4 horas. La disolución se lavó con diclorometano (3 x 10 ml), y la fracción acuosa se evaporó al vacío dando 0,65 g (84%) del producto como un sólido incoloro.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) (400 MHz): \delta 1,0-1,18 (4H, m, protones de anillo), 1,52-1,72 (6H, m, protones de anillo), 1,95-2.02 (2H, m, protones de anillo), 2,33-2,67 (2H, m, CH_{2}CO_{2}H), 2,90-2,94 (1H, d, J = 12,9 Hz, CH_{2}NH_{2}), 3,00-3,03 (1H, d, J = 12,7 Hz, CH_{2}NH_{2}), 7,94 (2H, sa, NH_{2}).

EM (ES^{+}) m/e 198 [M + H]^{+} 100%.

LCEM (ELSD) columna Prodigy ODS3 50 mm x 2 mm, 5%-50% MeCN/H_{2}O.

Tiempo de retención = 2,30 minutos, masa encontrada = 198. 100% de pureza.

Ejemplo de referencia

Clorhidrato del ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)(2-aminometil-octahidro-pentalen-2-il)-acético

4

40

Etapa (i)

A una suspensión de NaH (0,45 g, 11,3 mmol) en THF (25 ml), a 0ºC bajo argón, se añadió lentamente (durante \sim 10 minutos) fosfonoacetato de trietilo (2,3 ml, 11,6 mmol), seguido por 5 (1,29 g, 10,4 mmol en 2 x 3 ml THF). La reacción se dejó calentarse durante 4 horas, después de lo cual se diluyó con agua (100 ml), se extrajo con éter (2 x 200 ml), se lavó con salmuera saturada (50 ml), y se secó (MgSO_{4}). La cromatografía en columna (9:1 heptano/acetato de etilo) dio el producto como un aceite incoloro, 1,75 g, 86%.

IR (en película fina) (cm^{-1}) \nu = 2964, 1713, 1655, 1371, 1208, 1125, 1040.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 5,72 (1H, m), 4,14 (2H, c, J = 7,2), 3,02-2,92 (1H, m), 2,72-2,54 (3H, m), 2,52-2,42 (1H, m), 2,28-2,20 (1H, m), 1,85-1,31 (6H, m), 1,27 (3H, t, J = 7,2).

m/z AP^{+} 195 (MI + 1) a 100%.

Etapa (ii)

A una disolución de 6 (2,75 g, 22,2 mmol) en THF (22 ml), se añadió TBAF (24 ml, 24,0 mmol) seguido por nitrometano (4,4 ml, 8,14 mmol). La reacción se calentó (baño de aceite 60ºC) durante 4,75 horas, después de lo cual se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con HCl 2M (30 ml), seguido por salmuera saturada (40 ml), se secó (MgSO_{4}), y concentró bajo presión reducida. La cromatografía en columna (9:1 heptano/acetato de etilo) dio el producto como un aceite incoloro, 0,73 g, 20%. Se encontró mediante RMN ^{1}H que el producto en una mezcla 9:1 de diastereoisómeros.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 4,67 (1H, s), 4,60 (1H, s), 4,15 (2H, c, J = 7,2), 4,14 (2H, c, 7,2), 2,58 (2H, s), 2,49 (2H, s), 2,12-2,0 (2H + 2H, m), 1,63-1,49 (4H + 4H, m), 1,44-1,36 (2H + 2H, m).

Etapa (iii)

El compuesto 7 (0,88 g, 3,45 mmol) en metanol (100 ml) con catalizador de esponja de níquel se sometió a hidrogenación a 30ºC a una presión de 386.106,56 pascales (56 psi); esto se dejó durante 5 horas. Antes de usar, el catalizador de esponja de níquel se lavó varias veces, primero con agua y después con metanol. Después de que se completó la hidrogenación, la mezcla de reacción se filtró a través de celite y la disolución resultante se concentró al vacío dando un sólido amarillo, 0,62 g, 80%.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 5,43 (1H, sa), 3,15 (2H, s), 2,56-2,44 (3H, m), 1,99 (2H, dd, J = 12,6, 8,2), 1,64-1,50 (2H, m), 1,44-1,34 (2H, m), 1,22-1,14 (2H, m).

m/z ES^{+} 226 (MI + 1) al 100%.

Etapa (iv)

El compuesto 8 (0,61 g, 2,7 mmol) en dioxano (10 ml) y HCl 6 M (30 ml), se calentó a reflujo (baño de aceite a 100ºC) durante 4 horas. Después de enfriarse, la reacción se diluyó con agua (40 ml) y la mezcla de reacción se lavó con diclorometano (3 x 40 ml) y se concentró al vacío dando un producto cristalino blanco como una razón 6:1 de diastereoisómeros. El producto se recristalizó dos veces en acetato de etilo/metanol dando una mezcla 10:1 de estereoisómeros.

m/z ES^{+} 198 (MI + 1) a 100%.

RMN ^{1}H (D_{2}O): \delta 3,03 (2H, s), 2,50-2,36 (4H, m), 1,84 (2H, dd, J = 12, 8), 1,41 (4H, s), 1,26 (2H, s), 1,02 (2H, m).

Columna HPLC = Prodigy ODS 3, temperatura ambiente = 0,87, pureza = 100%.

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Ejemplo de referencia 4

Clorhidrato del ácido (1\alpha,6\alpha,8\alpha)(2-aminometil-octahidro-inden-2-il)-acético

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5

Síntesis del compuesto 1

Indan-2-ona (1,0 g, 7,6 mmol), etilenglicol (0,43 ml, 7,6 mmol), y ácido paratoluensulfónico se sometieron a reflujo en benceno (40 ml) usando una trampa Dean-Stark durante 6 horas. La mezcla se dejó enfriar y después se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con disolución saturada de hidrógenocarbonato de sodio (60 ml). Se extrajo la fase orgánica, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (2 x 50 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se separó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 97:3) dando el acetal 1 (1,14, 85%) como un aceite incoloro; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 8:2) 0,36; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 1483, 1291, 1105; \delta_{H} (400 MHZ; CDCl_{3}): 7,19-7,14 (4H, m, fenil), 4,02 (4H, s, 2 x CH_{2}CO_{2}), 3,18 (4H, s, 2 x CH_{2}CO_{2}).

Síntesis del compuesto 2

Se agitó acetal 1 (0,5, 2,84 mmol) en etanol (50 ml) sobre una cantidad catalítica de rodio al 5% en alúmina bajo atmósfera de hidrógeno (482.633,2 pascales (70 psi), 50ºC) durante 16 horas. El catalizador se filtró, y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el acetal 2 (0,51 g, 99%) como un aceite incoloro; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 2923, 1449, 1337, 1192, 1115, 1089; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,89-3,86 (4H, m, 2 x CH_{2}O), 2,10-2,00 (2H, m), 1,88 (2H, dd, J = 13,9, 7,6), 1,81 (2H, dd, J = 13,7, 7,0), 1,56-1,26 (6H, m).

Síntesis del compuesto 3

El acetal 2 (1,01 g, 5,54 mmol) se agitó en una mezcla de ácido clorhídrico 2 N (10 ml) y acetona (10 ml) durante 24 horas. Después de este tiempo, tlc mostró consumo completo de acetal inicial. Se añadió una disolución de carbonato sódico saturado (20 ml), y la mezcla se extrajo con éter (3 x 25 ml). Las fracciones de éter combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, pentano/éter, 95:5) dando la cetona 3 (0,75 g, 97%) como un aceite incoloro; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 8:2), 0.42; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 1743 (C=O); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 2,37-2,28 (2H, m), 2,20 (2H, ad, J = 18,5, 7,5), 2,12 (2H, ad, J = 18,7, 6,3), 1,65-1,24 (10H, m).

Síntesis del compuesto 4

Se añadió gota a gota fosfonoacetato de trietilo (1,13 ml, 5,70 mmol) a una suspensión en agitación de hidruro de sodio (0,22 g de una dispersión en aceite al 60%, 5,43 mmol) en THF (15 ml) a 0ºC bajo argón. Después de 20 minutos, se añadió gota a gota cetona 3 (0,75 g, 5,43 mmol) en THF (6 ml). La mezcla se permitió calentar a temperatura ambiente y se agitó a 16 horas. Se añadió agua (5 ml), y la mezcla se extrajo con éter (15 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron (MgSO_{4}). El disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 8:2), 0,66; \nu_{máx}(película)/cm^{-1}1715 (C=O), 1652 (C=C); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 5,80 (1H, quin, J = 2,2, CHCO_{2}Et), 4,15 (2H, c, J = 7,1, CHCO_{2}Me), 2,79 (1H, ad, J = 19,5, 8,1), 2,69 (1H, ddt, J = 19,8, 7,3, 2,3), 2,47 (1H, ad, J = 17,3, 7,2), 2,34 (1H, ddt, J = 17,3, 5,6, 1,8), 2,14 (1H, m), 2,02 (1H, m), 1,60-1,22 (8H, m); m/z (ES^{+}) 209 (M + H, 57%), 455 (2M + K, 67).

Síntesis de compuestos 5 y 6

Se calentaron a 65ºC en THF durante 4 horas éster 4 (0,45 g, 2,16 mmol), nitrometano (0,24 ml, 4,31 mmol), y fluoruro de tetrabutilamonio (3,10 mmol de una disolución 1 M en THF, 3,10 mmol). La mezcla se dejó enfriar, se diluyó con acetato de etilo (20 ml), y se acidificó con ácido clorhídrico (15 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (2 x 15 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 98:2) dando una razón 9:1 de nitroésteres 5 y 6 (0,35 g, 60%) como un aceite amarillo; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 9:1) 0,28; \nu_{máx}(película)/cm^{-1}1732 (C=O), 1547 (NO_{2}), 1375 (NO_{2}); isómero principal 5: \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,61 (2H, s, CH_{2}NO_{2}), 4,15 (2H, c, J = 7,2, OCH_{2}Me), 2,70 (2H, s, CH_{2}CO_{2}Et), 2,06 (2H, m), 1,81 (2H, dd, J = 13,9, 7,1), 1,56 (2H, dd, J = 13,1, 6,8), 1,51-1,22 (8H, m), 1,28 (3H, t, J = 7,2).

Síntesis de compuestos 7 y 8

La mezcla de 5 y 6 (0,81 g, 3,01 mmol) en metanol (30 ml) se agitó sobre una cantidad catalítica de catalizador de esponja de níquel bajo una atmósfera de hidrógeno (344.738 pascales (50 psi), 30ºC) durante 12 horas. La mezcla se filtró, y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando una mezcla 9:1 de los ésteres de amino 7 y 8 (0,42 g, 72%) como un sólido blanco; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 3214 (NH), 1706 (C=O); isómero principal 7: \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 5,57 (1H, sa, s, NH), 3,20 (2H, s, CH_{2}NH), 2,36 (2H, s, CH_{2}CO), 2,04-1,94 (2H, m), 1,77 (2H, dd, J = 13,2, 7,0), 1,62 (2H, dd, J = 13,4, 6,7), 1,60-1,20 (H, m); m/z (ES^{+}) 387 (2M + H, 97%).

Síntesis de los compuestos 9 y 10 y resolución del compuesto 9

Clorhidrato del ácido (1\alpha,6\alpha,8\alpha)(2-aminometil-octahidro-inden-2-il)-acético

La mezcla de 7 y 8 (0,42 g, 2,17 mmol) se disolvió en 1,4-dioxano (8 ml) y ácido clorhídrico (20 ml e una disolución 6N), y la mezcla se sometió a reflujo durante 6 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con agua (20 ml) y se lavó con diclorometano (2 x 15 ml). La fase acuosa se evaporó bajo presión reducida dando una mezcla 9:1 de los ácidos 9 y 10 (0,43 g, 79%) como un sólido blanco. La cristalización que usa acetato de etilo/metanol proporcionó exclusivamente ácido 9 (0,27 g); \delta_{H} (400 MHz; d_{6}-DMSO): 12,3 (1H, sa, CO_{2}H), 7,94 (2H, sa, NH_{2}), 2,90 (2H, s, CH_{2}NH_{2}), 2,52 (2H, s, CH_{2}CO_{2}H), 1,97 (2H, sa), 1,65 (2H, dd, J = 13,5, 6,7), 1,54-1,20 (10H, m; m/z (ES^{+}) 212 (M + H, 100%); (se encontró: C, 56,4; H, 8,74; N, 5,43 C_{12}H_{21}NO_{2}\cdot1HCl\cdot0,5H_{2}O requiere C, 56,1; H, 9,03; N, 5,45%); LCEM (columna Prodigy C18,50 mm x 4,6 mmid acetonitrilo/agua); tiempo de retención = 1,53 minutos, 98% de pureza.

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Ejemplo de referencia 5

Clorhidrato del ácido (1\alpha,6\alpha,8\beta)(2-aminometil-octahidro-inden-2-il)-acético

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6

Síntesis del compuesto 1

Se añadió n-butil-litio (5,1 ml de una disolución 2,5 M en hexanos, 12,75 mmol) gota a gota a una mezcla en agitación de nitrometano (0,34 ml, 6,3 mmol) en THF (20 ml) y HMPA (hexametilfosforamida, 2 ml) a -78ºC bajo argón. La mezcla se dejó calentar a -60ºC y se agitó durante 1 hora. La mezcla se enfrió a -78ºC y se añadió 3 (0,79 g, 5,73 mmol). La mezcla se dejó calentar a -60ºC y se agitó durante 2 horas adicionales. La mezcla se desactivó por adición de disolución de cloruro de amonio saturada (5 ml). Después de calentar a temperatura ambiente, se añadieron ácido clorhídrico diluido (10 ml) y éter (30 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con éter (2 x 25 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 95:5) dando el nitroalcohol 1 (0,50 g, 4%) como un sólido blanco; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 9:1) 0,14; \nu_{máx} (CH_{2}Cl_{2})/cm^{-1} 3424 (OH), 1548 (NO_{2}), 1379 (NO_{2}); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,45 (2H, s, CH_{2}NO_{2}), 3,26 (1H, s, OH), 2,04-1,95 (2H, m), 1,85-1,80 (4H, m), 1,64-1,24 (8H, m).

Síntesis del compuesto 2

Una mezcla de 1 (0,50 g, 2,49 mmol) y ácido sulfúrico concentrado /1 gota) se calentó a 50ºC en anhídrido acético (1 ml) durante 5 minutos. La mezcla se dejó enfriar y después se repartió entre éter (100 ml) y agua (50 ml). La fase éter se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el nitroacetato 2 (0,49 g, 82%) como un aceite incoloro; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 9:1) 0,44; \nu_{máx}(película)/cm^{-1}1739 (C=O), 1551 (NO_{2}), 1375 (NO_{2}); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,88 (2H, s, CH_{2}NO_{2}), 2,38-2,00 (8H, m), 2,07 (3H, s, MeCO), 1,62-1,32 (6H, m).

Síntesis del compuesto 3

Se añadió el metóxido de potasio (0,15 g, 2,04 mmol) en metanol (3 ml) gota a gota a una disolución en agitación de 2 (0,49, 2,04 mmol) en metanol (5 ml) a 0ºC. Después de 10 minutos, la mezcla se repartió entre éter (100 ml) y agua (50 ml). La fase éter se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, pentano/éter, 98:2) dando el nitro-alqueno 3 (0,21 g, 57%) como un aceite amarillo pálido; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 8:2) 0,54; \nu_{máx}(película)/cm^{-1}1643 (C=C), 1509 (NO_{2}), 1342 (NO_{2}); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 7,12 (1H, quin, J = 2,0, CHNO_{2}), 3,01 (1 H, ddt, J = 20,5, 8,0, 2,1), 2,90 (1H, dt, J = 20,5, 7,3, 2,1), 2,54 (1H, ddt, J = 17,8, 7,1, 2,0), 2,43 (1H, ddt, J 17,7, 5,6, 1,9), 2,21 (1H, m), 2,12 (1H, m), 1,60-1,24 (8H, m).

Síntesis del compuesto 4

Se añadió gota a gota acetato de etilo (0,12 ml, 1,22 mmol) en THF (2 ml) a una disolución en agitación de bis(trimetilsili)amida de litio (1,22 ml de una disolución 1 M en THF, 1,22 mmol) a -78ºC bajo argón. Después de 20 minutos, se añadió 3 (0,21 g, 1,16 mmol) en THF (1 ml), y la mezcla se agitó durante 2 horas. La mezcla se desactivó mediante adición de una disolución saturada de cloruro de amonio (3 ml) y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con éter (20 ml) y se añadió ácido clorhídrico diluido (15 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con éter (2 x 10 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 99:1) dando el nitro-éster 4 (0,13 g, 41%) como un líquido incoloro; R_{f} (heptano/acetato de etilo, 9:1) 0,32; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,73 /2H, s, CH_{2}NO_{2}), 4,14 (2H, c, J = 7,1, CO_{2}CH_{2}Me), 2,58 (2H, s, CH_{2}CO_{2}Et), 2,07 (2H, m, 1,71-1,66 (4H, m), 1,60-1,24 (8H, m), 1,26 (3H, t, J = 7,2, CO_{2}CH_{2}Me); m/z (ES^{+}) 270 (M + H, 100%).

Síntesis del compuesto 5

Se agitó 4 (0,122 g, 0,45 mmol) en metanol (40 ml) sobre una cantidad catalítica de catalizador de esponja de níquel bajo una atmósfera de hidrógeno (413.685,6 pascales (60 psi), 30ºC) durante 6 horas. La mezcla se filtró y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el amino-éster 5 (0,084 g, 96%) como un sólido blanco; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 3228 (NH), 1665 (C=O); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 5,49 (1H, sa, NH), 3,34 (2H, s, CH_{2}NH), 2,25 (2H, s, CH_{2}CO), 2,10-1,98 (2H, m), 1,77 (2H, dd, J = 13,2, 7,1), 1,65 (2H, dd, J = 13,2, 6,8), 1,62-1,20 (8H, m).

Síntesis del compuesto 6

Se disolvió ácido (2-aminometil-octahidro-inden-2-il)-acético 5 (0,083 g, 0,43 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml) y ácido clorhídrico (8 ml de una disolución 6 N), y la mezcla se sometió a reflujo durante 5 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con agua (20 ml) y se lavó con diclorometano (2 x 15 ml). La fase acuosa se evaporó bajo presión reducida dando el ácido 6 (0,097 g, 91%) como un sólido blanco. Este se recristalizó usando acetato de etilo/metanol dando 10 puro (0,057 g); \delta_{H} (400 MHz; d_{6}-DMSO): 7,90 (2H, sa, NH_{2}), 3,03 (2H, s, CH_{2}NH_{2}), 2,43 (2H, s, CH_{2}CO_{2}H), 2,00 (2H, sa), 1,54-1,24 (12H, m); m/z (ES^{+}) 121 (M + H, 100%); LCEM (columna Prodigy C18 50 mm x 4,6 mmil, 5%-50% acetonitrilo/agua). Tiempo de retención = 1,12 minutos, 100% de pureza.

Ejemplo 1 Ácido (1\alpha,3\alpha, 5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético

7

Síntesis de compuesto 1

Se añadió hidruro de litio y aluminio (69,4 ml de una disolución 1 M en éter, 69,4 mmol) se añadió gota a gota a una disolución en agitación de ácido cis-ciclobutano-1,2-dicarboxílico (5 g, 34,7 mmol) en THF (60 ml), a 0ºC bajo argón. La mezcla se dejó calentar a temperatura a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla se enfrió a 0ºC y se desactivó mediante adición cuidadosa de agua (2,7 ml), disolución de hidróxido de sodio (2,7 m de una disolución al 15% v/v), y agua (8,1 ml). La mezcla se agitó durante 5 minutos, y el precipitado se eliminó mediante filtración. El disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el alcohol 1 como un aceite incoloro (4,0, 98%); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,85 (2H, m), 3,6 (2H, m), 3,2 (2H, s), 2,7 (2H, m), 2(2H, m); 1,55 (2H, m); \delta_{C} (400 MHz; d_{6}-DMSO): 63,15, 37,83, 20,40.

Síntesis del compuesto 2

Se añadió gota a gota cloruro de mesilo (6,2 ml, 79,1 mmol) a una disolución en agitación de 1 (4,0 g, 34,4 mmol) en diclorometano (150 ml) a -40ºC bajo argón. Se añadió después gota a gota trietilamina (12,0 ml, 86,0 mmol), y la mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Después de agitar durante 16 horas, la mezcla se desactivó por adición del ácido clorhídrico diluido (50 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano (2 x 50 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 6:4) dando el mesilato 2 (6,1 g, 73%) como un sólido blanco; R_{f} (heptilo/acetato de etilo, 1:1) 0,18. \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,3 (4H, m), 3,05 (6H, s), 2,9 (2H, m), 2,2 (2H, m), 1,8 (2H, m); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 69,51, 37,45, 35,28, 21,09.

Síntesis del compuesto 3

Se añadió bromuro de litio anhidro (10,6, 121,8 mmol) a una mezcla en agitación de 2 (5,95 g, 24,4 mmol) en acetona (50 ml) bajo argón y la mezcla de sometió a reflujo durante 2 horas. Después de enfriar, la acetona se evaporó bajo presión reducida y el residuo se llevó en éter (50 ml), se lavó con agua (50 ml), salmuera, se secó (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 95:5) dando el dibromuro 3 (5,36 g, 86%) como un líquido naranja: R_{f} (heptano-acetato de etilo, 8:2), 0,82. \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,6 (2H, m), 3,45 (2H, m), 2,85 (2H, m), 2,1 (2H, m), 1,7 (2H, m); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 39,70, 33,79, 23,95.

Síntesis del compuesto 4

A una suspensión enfriada (0ºC) de hidruro de potasio (1,58 g, 39,5 mmol) (lavada previamente 3 veces con pentano) en tetrahidrofurano (22 ml) se añadió, bajo una atmósfera de argón, una disolución de metil metiltiometil sulfóxido (1,36 ml, 13,04 mmol, secada previamente sobre tamices moleculares durante 3 horas) en tetrahidrofurano (3 ml) durante 1 hora. Después de agitar durante 30 minutos adicionales, se añadió una disolución de 3 (3,17 g, 13,1 mmol) en THF (2 ml), a 0ºC, durante 1 hora. La mezcla de reacción se dejó entonces calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda una noche. La mezcla se desactivó mediante adición de cloruro de amonio acuoso (6 ml, 25%). después de 10 minutos, el sólido se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se suspendió en éter (20 ml) y se añadió ácido sulfúrico 9 N (0,05 ml). Después de agitar durante 30 horas, se añadió hidrogenocarbonato de sodio saturado. La fase éter se separó y concentró a 5 ml. Se añadió disolución de hidrogenosulfito de sodio saturada (1,5 g) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Las fases se separaron. La fase etérea se agitó durante 30 minutos adicionales con una disolución de hidrogenosulfito de sodio saturada (0,5 g). Las fases se separaron y las fases acuosas recogidas se trataron con hidróxido de sodio acuoso (5 ml, 20%) y se extrajeron con éter. La fase éter se secó (MgSO_{4}) y se evaporó bajo presión reducida dando 4 como un líquido amarillo (0,16 g, 11%). \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,0 (2H, m), 2,15-2,45 (6H, m), 1,65 (2H, m).

Síntesis del compuesto 5

Se añadió gota a gota fosfonoacetato de trietilo (0,32 ml, 161 mmol) a una suspensión en agitación de hidruro de sodio (0,059 g de una dispersión al 60% en aceite, 1,47 mmol) en THF (2 ml) a 0ºC bajo argón. Después de 20 minutos, se añadió gota a gota cetona 4 (,16 g, 1,45 mmol) en THF (1 ml). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Se añadió agua (5 ml) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron (MgSO_{4}). El disolvente se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 95:5) dando el éster 5 (0,166 g, 0,92 mmol, 64%) como un aceite incoloro; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 5,9 (1H, s), 4,2 (2H, c), 3,15 (1H, d), 2,9 (1H, m), 2,8 (1H, m), 2,65 (2H, m), 2,3 (1H, d), 2,15 (2H, m), 1,5 (2H, m), 1,3 (3H, t); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 169,51, 166,98, 113,37, 59,62, 43,23, 38,79, 38,45, 36,20, 25,62, 24,95, 14,44.

Síntesis del compuesto 6

Se calentaron éster 5 (0,152 g, 0,84 mmol), nitrometano (0,092 ml, 1,7 mmol) y fluoruro de tetrabutilamonio (1,03 ml de una disolución 1 M en THF, 1,03 mmol) a 65ºC en THF (1 ml) durante 4 horas. La mezcla se dejó enfriar, se diluyó con éter (30 ml), y se acidificó con ácido clorhídrico 2 N (5 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 95:5) dando nitro-éster 6 (0,085 g, 0,35 mmol, 41%) como un líquido incoloro; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,4 (2H, s), 4,15 (2H, c), 2,75 (2H, sa), 2,7 (2H, s), 2,3 (2H, m), 2,1 (2H, m), 1,65 (4H, m), 1,15 (3H, t); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 171,48, 79,68, 60,52, 50,10, 44,17, 41,06, 37,36, 25,76, 14,28.

Síntesis de los compuestos 7A y 7B

Se agitó nitro-éster 6 (0,076 g, 0,31 mmol) en metanol (10 ml) sobre una cantidad catalítica de catalizador de esponja de níquel bajo una atmósfera de hidrógeno (344.738 pascales (50 psi), 30ºC) durante 12 horas. La mezcla se filtró, y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando una mezcla de lactama 7A y aminoéster 7B (0,05 g) como un sólido blanco. Esto se usó sin purificación y caracterización adicionales.

Síntesis del compuesto 8

Se disolvieron en ácido clorhídrico (2 ml de una disolución 6 N) 7A y 7B (0.05 g) y la mezcla se sometió a reflujo durante 4 horas. Después de enfriar, el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el ácido como un sólido blanco. Esto se recristalizó usando acetato de etilo/metanol dando 8 puro (0,045 g, 0,2 mmol, 64%); \delta_{H} (400 MHz; D_{2}O): 3 (2H, s), 2,85 (4H, m + s), 2,35 (2H, m), 2,1 (2H, m), 1,75 (4H, m). \delta_{C} (400 MHz; D_{2}O): 167,5, 46,64, 43,89, 42,03, 40,89, 36,08, 23,91. m/z (ES^{+}) 184 (M + H, 100%).

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Ejemplo de referencia 6

Clorhidrato de ácido (\pm)-(1\alpha,5\beta)-(3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptil-3-il)-acético

8

Síntesis del compuesto 1

Se añadió gota a gota hidruro de litio y aluminio (134,8 ml de una disolución 1 M en éter, 134,8 mmol) a una disolución en agitación de ácido cis-ciclobutano-1,2-dicarboxílico (9,71 g, 67,39 mmol) en THF (120 ml) a 0ºC bajo argón. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla se enfrió a 0ºC y se desactivó mediante adición cuidadosa de agua (5,2 ml), disolución de hidróxido sódico (5,2 ml de una disolución al 15% p/v), y agua (15,7 ml). La mezcla se agitó durante 15 minutos, y el precipitado se eliminó mediante filtración. El disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el alcohol 1 como un aceite amarillo pálido (6,73 g, 57,64 mmol, 85%); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,85 (2H, m), 3,6 (2H, m), 2,9 (2H, s), 2,7 (2H, m), 2 (2H, m); 1,55 (2H, m).

Síntesis del compuesto 2

Se añadió gota a gota cloruro de mesilo (29,3 ml, 373,8 mmol) a una disolución con agitación de 1 (8,85 g, 75,8 mmol) en diclorometano (500 ml) a -40ºC bajo argón. Se añadió después gota a gota trietilamina (63,4 ml, 454,4 mmol) y la mezcla se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Después de agitar durante 16 horas, la mezcla se desactivó mediante adición ácido clorhídrico diluido (100 ml). La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano (2 x 100 ml). Las fracciones inorgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/acetato de etilo, 6:54) dando el mesilato 2 (15,89 g, 58,3 mmol, 77%) como un sólido blanco; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,0 (6H, m), 2,6 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,8 (2H, m).

Síntesis del compuesto 3

Se añadió bromuro de litio anhidro (25 g, 287,3 mmol) a una mezcla con agitación de 2 (15,84 g, 57,4 mmol) en acetona (150 ml) bajo argón, y la mezcla se sometió reflujo durante 2 horas. Después de enfriar, la acetona se evaporó bajo presión reducida, y el residuo se suspendió en éter (100 ml), se lavó con agua (100 ml), salmuera, se secó (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el dibromuro 3 (13,5 g, 55,8 mmol, 97%) como un líquido naranja; \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 3,5 (4H, m), 2,45 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,6 (2H, m).

Síntesis del compuesto 4

A una suspensión enfriada (0ºC) de hidruro de potasio (1,08 g, 27 mmol) (lavada previamente 3 veces con pentano) en THF (15 ml), se añadió, bajo atmósfera de argón, una disolución de metil metiltiometil sulfoxido (0,93 ml, 8,92 mmol, secado previamente sobre tamices moleculares durante 3 horas) en THF (2 ml) durante un periodo de 1 hora. Después de agitar durante 30 minutos adicionales, se añadió una disolución de 3 (2,16, 8,93 mmol) en THF (1 ml) a 0ºC, durante un periodo de 1 hora. La mezcla de reacción se dejó entonces calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó agitar durante toda una noche. La mezcla se desactivó mediante adición de cloruro de sodio amonio (6 ml, 25%). Después de 10 minutos, el sólido se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se suspendió en éter (20 ml), y se añadió ácido sulfúrico 9N (0,03 ml). Después de agitar durante 30 horas, se añadió hidrógenocarbonato de sodio saturado. Las fases se separaron. La fase etérea se agitó durante 30 minutos adicionales con una disolución de hidrogenosulfito de sodio saturada (0,5 g). Las fases se separaron y las fases acuosas recogidas se trataron con hidróxido sódico acuoso (5 ml, 20%) y se extrajeron con éter. La fase éter se secó (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando 4 como un líquido amarillo (0,141 g, 15%); \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 2,25 (4H, m), 2,0 (4H, m), 1,7 (2H, m).

Síntesis de compuesto 5

Se añadió gota a gota fosfonoacetato de trietilo (0,28 ml, 1,41 mmol) a una suspensión en agitación de hidruro de sodio (0,052 g de una dispersión en aceite al 60%, 1,29 mmol) en THF (2 ml) a 0ºC bajo argón. Después de 20 minutos, la cetona 4 (0,141 g, 1,28 mmol) en THF (1 ml) se añadió gota a gota. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Se añadió agua (5 ml), y la mezcla se extrajo. Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron (MgSO_{4}). El disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 5,85 (1H, s), 4,1 (2H, c), 3,1 (1H, d.d), 2,45 (1H, d.d), 2,2 (2H, m), 1,75 (2H, m), 1,4 (2H, m), 1,25 (3H, t); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 170,53, 166,57, 115,13, 59,62, 47,06, 45,69, 39,89, 37,24, 28,52, 28,17, 14,44.

Síntesis de compuesto 6

Se calentaron éster 5 (0,09 g, 0,5 mmol), nitrometano (0,055 ml, 1,02 mmol) y fluoruro de tetrabutilamonio (0,61 ml de una disolución 1 M en THF, 0,61 mmol) a 65ºC en THF (1 ml) durante 4 horas. Las mezcla se dejó enfriar, se diluyó con éter (30 ml), y se acidificó con ácido clorhídrico 2 N (5 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, heptano/éter, 95:5) dando el nitro-éster 6 (0,063 g, 0,26 mmol, 52%) como un líquido incoloro. \delta_{H} (400 MHz; CDCl_{3}): 4,65 (2H, [AB]q), 4,15 (2H, c), 2,65 (2H, [AB]q), 1,2-1,95 (3H, t y m, 13 H); \delta_{C} (400 MHz; CDCl_{3}): 171,28, 82,42, 60,56, 49,97, 45,80, 45,32, 42,88, 40,19, 40,09, 27,64, 14,26.

Síntesis de compuestos 7A y 7B

Se agitó nitro-éster 6 (0,063 g, 0,26 mmol) en metanol (10 ml) sobre una cantidad catalítica de catalizador de esponja de níquel bajo una atmósfera de hidrógeno (344.738 pascales (50 psi), 30ºC) durante 12 horas. La mezcla se filtró, y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando una mezcla de lactama 7A y aminoéster 7B (0,05 g) como un sólido blanco. Esto se usó sin purificación y caracterización adicionales.

Síntesis del compuesto 8

Se disolvieron en ácido clorhídrico (2 ml de una disolución 6 N) 7A y 7B (0.051 g) y la mezcla se sometió a reflujo durante 4 horas. Después de enfriar, el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando el ácido como un sólido blanco. Esto se recristalizó usando acetato de etilo/metanol dando 8 puro (0,046 g, 0,21 mmol, 81%); \delta_{H} (400 MHz; D_{2}O): 3,3 (2H, [AB]q), 2,7 (2H, [AB]q), 2 (2H, m), 1,35-1,85 (8H, m); \delta_{C} (400 MHz; D_{2}O): 174,8, 47,50, 46,59, 44,28, 43,61, 41,64, 38,37, 38,09, 25,88. m/z (ES^{+}) 184 (M + H, 100%).

Ejemplo de referencia 7

Clorhidrato de ácido (1\alpha,3\beta,5\alpha)-(3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptil-3-il)-acético

9

Síntesis de compuesto (2)

Se agitaron juntos en DMF (100 ml) durante 48 horas dibromuro 1 (5,7 g, 22,3 mmol), cianoacetato de etilo (4,8 ml, 44,5 mmol) y carbonato de potasio (6,15 g, 44,5 mmol). Se añadió ácido clorhídrico diluido (100 ml), y la mezcla se extrajo con éter (3 x 100 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, acetato de etilo-heptano, 98:2) dando el cianoéster 2 (4,3 g, 100%) como una mezcla 68:32 de diastereómeros; R_{f} (heptano-acetato de etilo, 9:1) 0,28; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 2241 (CN), 1741 (C=O); diastereómero principal: \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 4,30 (2H, c, J 7,1, CO_{2}CH_{2}Me), 2,98 (2H, m), 2,56-2,22 (6H, m), 1,70 (2H, m), 1,35 (3H, t, J 7,1, Me); diastereómero minoritario: \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 4,26 (2H, c, J 7,1, CO_{2}CH_{2}Me), 3,05 (2H, m), 2,56-2,22 (6H, m), 1,99 (2H, m), 1,33 (3H, t, J 7,1, Me).

Síntesis de compuesto (3)

Cianoéster 2 (0,76 g, 3,91 mmol), agua (0,14 ml, 7,82 mmol) y cloruro de litio (0,66 g, 15,6 mmol) se calentaron a 150ºC en DMSO (40 ml) durante 22 horas. La mezcla se dejó enfriar, se diluyó con agua (150 ml) y se extrajo con éter (3 x 50 ml). Las fracciones de éter combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, acetato de etilo-heptano, 95:5) dando el cianuro 3 (0,21 g, 44%) como una mezcla 60:40 de diastereómeros; R_{f} (heptano-acetato de etilo, 9:1) 0,44; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 2238 (CN); diasterómero mayor: \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 2,97 (1H, m, 2,87 (2H, m), 2,32-2,18 (2H, m), 2,10-1,96 (3H, m), 1,92-1,78 (2H, m), 1,48-1,38 (1H, m); diastereómero minoritario: \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 3,13 (1H, m), 2,87 (2H, m), 2,32-2,18 (2H, m), 2,10-1,96 (3H, m), 1,92-1,78 (2H, m), 1,48-1,38 (1H, m).

Síntesis del compuesto (4)

Se añadió cianuro 3 (0,86 g, 7,1 mmol) en THF (30 ml) gota a gota durante una hora a una mezcla en agitación de hexametildisilazida de litio (7,8 ml de una disolución 1 M en THF, 7,8 mmol) en THF (40 ml) a -78ºC bajo argón. La mezcla se agitó durante unas dos horas adicionales a -78ºC y después se dejó calentar a temperatura ambiente durante toda una noche. Se añadió una disolución de cloruro de amino saturada (20 ml), y la mezcla se diluyó con éter (50 ml) y ácido clorhídrico diluido (30 ml). La fase acuosa se extrajo adicionalmente con éter (2 x 50 ml), y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, acetato de etilo-heptano, 98:2) dando el cicloalqueno 4 (0,96 g, 0,72%) como un aceite incoloro; R_{f} (heptano-acetato de etilo, 95:5) 0,38; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 2230 (CN), 1673 (C=C); \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 5,27 (1H, tt, J 7,6, 1,3, CHCMe_{2}), 2,89 (2H, m), 2,30-2,22 (4H, m), 2,10 (2H, d, J 14,2), 1,94 (2H, m), 1,84-1,62 (2H, m), 1,65 (3H, s, Me), 1,55 (3H, s, Me); m/z (AP^{+}) 190 (M + H, 100%).

Síntesis de compuesto (5)

Se agitaron juntos cicloalqueno 4 (0,96 g, 5,1 mmol) e hidróxido de sodio (10,2 de una disolución 2,5 M en metanol, 25,5 mmol) se agitaron juntos en diclorometano (80 ml) a -78ºC. Se hizo pasar ozono a través de la mezcla la cual inmediatamente se volvió naranja. Después de dos horas, la mezcla se volvió de color verde, y la disolución se purgó con oxígeno durante 5 minutos y después con nitrógeno. La mezcla en agitación se diluyó con éter (100 ml) y agua (100 ml) y se dejó calentar a temperatura ambiente durante toda una noche. La fase acuosa se extrajo adicionalmente con éter (2 x 50 ml), y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}), y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cromatografió (SiO_{2}, acetato de etilo-heptano, 95:5) dando el cianoéster 5 (0,70 g, 71%) como un aceite amarillo; R_{f} (heptano-acetato de etilo, 8:2) 0,36; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 2233 (CN), 1740 (C=O), \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 3,75 (3H, s, Ome), 2,94 (2H, m), 2,63 (2H, s, CH_{2}CO_{2}Me), 2,35-2,51 (4H, m), 2,00 (2H, m), 1,86 (2H, m); m/z (AP^{+}) 194 (M + H, 95%).

Síntesis de compuesto (6)

Se agitó cianoéster 5 (0,81 g, 4,2 mmol) en metanol (100 ml) sobre una cantidad catalítica de catalizador de esponja de níquel bajo un atmósfera de nitrógeno (413685,6 pascales (60 psi), 30ºC) durante 6 horas. La mezcla se filtró, y el disolvente se evaporó bajo presión reducida dando lactama 6 (0,64 g, 92%) como un sólido blanco; \nu_{máx}(película)/cm^{-1} 1692 (C=O); \delta_{H} (400 MHz, CDCl_{3}) 5,52 (1H, sa, NH), 3,54 (2H, s, CH_{2}NH), 2,80 (2H, m), 2,26 (2H, m), 2,16 (2H, s, CH_{2}CO), 1,93 (2H, ddd, J 13,4, 8,1, 2,4), 1,74 (2H, dd, J 13,0, 3,2), 1,64 (2H, m).

Síntesis de clorhidrato del ácido (1\alpha,3\beta, 5\alpha)-(3-aminometil-biciclo[3.2.0]hept-3-il)-acético

Se disolvió lactama 6 (0,64 g, 3,87 mmol) en 1,4-dioxano (4 ml) y ácido clorhídrico (16 ml de una disolución 6N), y la mezcla se sometió a reflujo durante 6 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con agua (20 ml) y se lavó con diclorometano (2 x 15 ml). La fase acuosa se evaporó bajo presión reducida dando ácido 7 (0,67 g, 79%) como un sólido blanco. La recristalización usando acetato de etilo/metanol dio ácido 7 exclusivamente (0,26 g); \delta_{H} (400 MHz; d_{6}-DMSO): 7,98 (2H, sa, NH_{2}), 3,13 (2H, s, CH_{2}NH_{2}), 2,70 (2H, s), 2,17-2,14 (4H, m), 1,85 (2H, dd, J 13,3, 8,0), 1,63 (2H, m), 1,55 (2H, ad, J 12,9, 5,1); m/z (ES^{+}) 184 (M + H, 100%); LCEM (Prodigy C16, columna 50 mm x 4,6 mmid, acetonitrilo/agua al 5-50%). Tiempo de retención = 2,40 minutos, 98% de pureza.

Los siguientes procedimientos se refieren específicamente a la preparación del compuesto de fórmula Ia.

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Ejemplo 2

Procedimiento 1

10

Se añade nitrometano al éster insaturado en un disolvente tal como dimetilsulfóxido o N,N-dimetilformamida con una base tal como carbonato de potasio, carbonato de sodio o carbonato de cesio, a una temperatura de 0ºC a 120ºC. Este procedimiento logra mayores rendimientos del nitroéster y reducen el rendimiento del éster desconjugado comparado con las rutas previas.

Procedimiento 2A

11

a)

Se añade un cianoacetato de alquilo, por ejemplo cianoacetato de etilo, a una mezcla de ciclopentanona de fórmula (I) en un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, o n-heptano al cual se añadieron ácido acético y \beta-alanina o acetato de amonio, o piperidina. La mezcla se agita a temperatura de 0ºC a 150ºC con eliminación de agua mediante, por ejemplo, uso de una trampa Dean-Stark o tamices moleculares activados, para producir el alqueno de fórmula (2);

b)

Añadir el producto de la etapa a) sobre una mezcla de cloruro de bencilmagnesio o bromuro de bencilmagnesio, en un disolvente puro seleccionado de tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, n-heptano, tolueno, éter dietílico, o éter terc-butilmetílico a una temperatura de -100ºC a 110ºC para producir el producto de adición de fórmula (3);

c)

Añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de una base seleccionada de hidróxido de potasio, hidróxido de sodio, hidróxido de litio, o hidróxido de cesio en un disolvente seleccionado de etilenglicol, 2-metoxietiléter, 1,4-dioxano, o dietilenglicol y agitando la mezcla a una temperatura de 25ºC a 250ºC para producir el ácido carboxílico de fórmula (4);

d)

Añadir el producto de la etapa c) anterior a la mezcla de yodometano en un disolvente seleccionado de diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, tolueno, o 1,4-dioxano al cual se añadió una base tal como 1,8-diazabiciclo[4.3.0]undec-7-eno (DBU), trietilamina, o 1,5-diazabiciclo[4.3.0]no-5-eno (DBN) y se agitó a una temperatura de -40ºC a 110ºC para producir el éster de fórmula (5); o añadir el producto de la etapa c) anterior a una mezcla de metanol y ácido concentrado tal como ácido sulfúrico o ácido clorhídrico a una temperatura que varía de 0ºC a 100ºC; o añadir el producto de la etapa c) anterior a trimetilsilildiazometano y metanol en benceno o tolueno a una temperatura de -40ºC a 100ºC; o añadir el producto de la etapa c) anterior a diazometano en un disolvente tal como benceno, tolueno, diclorometano, o éter dietílico a una temperatura de -40ºC a 40ºC;

e)

Añadir el producto de la etapa d) anterior a una mezcla de tetracloruro de carbono, acetato de etilo y acetonitrilo a la cual se añadieron agua, peryodato de sodio, y cloruro de rutenio (III), y agitar a una temperatura de -40ºC a 80ºC para producir ácido carboxílico de formula (6);

f)

Añadir el producto de la etapa e) anterior a una mezcla de una base seleccionada de trietilamina o diisopropilmetlamina y un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, tetrahidrofurano, éter dietílico, o n-heptano al cual se añadió difenilfosforilazida (DPPA) y agitar a una temperatura de 0ºC a 150ºC para producir el isocianato de fórmula (7); o añadir el producto de la etapa e) anterior a cloroformiato de etilo o cloroformiato de isobutilo y una base tal como trietilamina o diisopropilmetilamina en tetrahidrofurano o acetona o éter dietílico a una temperatura de -40ºC a 78ºC seguidos por adición de azida sódica en agua y tetrahidrofurano o acetona seguida por la adición de tolueno o benceno y reflujo; y

g)

Añadir el producto de la etapa f) anterior a un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, o n-heptano al cual se añadió metanol o terc-butanol para dar (8) y después añadir (8) a ácido clorhídrico acuoso a una concentración desde 0,01 M hasta 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-disoxano, ácido acético o agua para producir el aminoácido (9); o añadir el producto de la etapa f) anterior un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, o n-heptano al cual se añadió alcohol bencílico dando (8) y después hidrogenar (8) sobre níquel o paladio o platino dando lactama la cual se hidrolizó entonces usando ácido clorhídrico acuoso a una concentración de aproximadamente 0,01 a 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (9).

Procedimiento 2B

12

a)

Se añade cianoéster (2) a cloruro o bromuro de 2-butenilmagnesio en un disolvente seco seleccionado de tetrahidrofurano, 1,4-dioxano, n-heptano, tolueno, éter dietílico, o éter terc-butilmetílico a una temperatura de -100ºC a 110ºC para producir el producto de adición de fórmula (10);

b)

Añadir el producto de la etapa a) anterior a una mezcla de una base seleccionada de hidróxido de potasio, hidróxido de sodio, hidróxido de litio, o hidróxido de cesio en un disolvente seleccionado de etilenglicol, éter 2-metoxietílico, 1,4-dioxano, o dietilenglicol y agitar la mezcla a una temperatura de 25ºC a 250ºC para producir el ácido carboxílico de fórmula (11);

c)

Añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, tolueno, o 1,4-dioxano a la cual se añadió una base tal como 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), trietilamina, o 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) y agitar a una temperatura de -40ºC a 110ºC para producir el éster de fórmula (11); o añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de metanol y un ácido concentrado tal como ácido sulfúrico o ácido clorhídrico a una temperatura que varía de 0ºC a 100ºC; o añadir el producto de la etapa b) anterior a trimetilsilildiazometano y metanol en benceno o tolueno a una temperatura de -40ºC a 100ºC, o añadir el producto de la etapa b) anterior a diazometano en un disolvente tal como benceno, tolueno, diclorometano, o éter dietílico a una temperatura de -40ºC a 40ºC; y

d)

Añadir el producto de la etapa c) anterior a una mezcla de tetracloruro de carbono o acetato de etilo y acetonitrilo a la cual se añadieron agua, peryodato de sodio, y cloruro de rutenio(II), y agitar a una temperatura de -40ºC a 80ºC para producir ácido carboxílico de fórmula (6).

Procedimiento 2C

13

a)

Se añade un agente organometálico tal como cloruro de vinil-litio o vinilmagnesio o bromuro de vinil-litio o vinilmagnesio en un disolvente tal como tetrahidrofurano o éter dietílico a una temperatura de -100ºC a 0ºC al cianoéster (2) dando (13);

b)

Añadir el producto de la etapa a) anterior a una mezcla de una base seleccionada de hidróxido de potasio, hidróxido de sodio, hidróxido de litio, o hidróxido de cesio en un disolvente seleccionado de etilenglicol, 2-metoxietiléter, 1,4-dioxano, o dietilenglicol y agitar la mezcla a una temperatura de 25ºC a 250ºC para producir el ácido carboxílico de fórmula (14);

c)

Añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de yodometano en un disolvente seleccionado de diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, tolueno, o 1,4-dioxano a la cual se añadió una base tal como 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), trietilamina, o 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) y agitar a una temperatura de -40ºC a 110ºC para producir el éster de fórmula (15); o añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de metanol y un ácido concentrado tal como ácido sulfúrico o ácido clorhídrico a una temperatura que oscila de -40ºC a 100ºC; o añadir el producto de la etapa b) anterior a diazometano en un disolvente tal como benceno, tolueno, diclorometano, o dietiléter a una temperatura de -40ºC - 40ºC;

d)

El producto de la etapa c) anterior se ozonolizó en un disolvente tal como cloroformo o diclorometano o metanol seguido por adición de un desactivador tal como trifenilfosfina o dimetilsulfóxido a una temperatura de -100ºC a 0ºC dando (16);

e)

El producto de la etapa d) anterior en un disolvente tal como metanol octanol se hizo reaccionar con una disolución de amoniaco o gas amonio seguido por reducción usando borohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio o triacetoxiborohidruro de sodio, o mediante reducción mediante hidrogenación en presencia de un catalizador tal como níquel, paladio, o platino dando (17); y

f)

El producto de la etapa c) anterior se hidroliza usando ácido clorhídrico a una concentración de 0,01 M a 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (9).

Procedimiento 3

\vskip1.000000\baselineskip

14

El éster insaturado y el tioisocianato de bencilo se agitó en una mezcla disolvente compuesta de tetrahidrofurano, éter dietílico, o 1,4-dioxano, un disolvente coordinador tal como HMPA o DMPU y un alcohol tal como terc-butanol con diyoduro de samario a una temperatura de -100ºC a 0ºC; el éster resultante se hidrogena en un disolvente tal como metanol, etanol, acetato de etilo usando un catalizador tal como níquel, paladio, platino, o rodio a una temperatura de 20ºC a 100ºC dando el aminoácido.

Procedimiento 4A

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15

a)

Un reactivo organometálico tal como cloruro o bromuro de vinil-litio o vinilmagnesio se mezcla con dimetilcinc, cloruro de cinc, yoduro de cobre (I), complejo dimetilsulfuro bromuro de cobre (I), o cianuro de cobre (I) en presencia de una ácido de Lewis tal como eterato de trifluoruro de boro o cloruro de aluminio en un disolvente tal como tetrahidrofurano o éter dietílico a una temperatura de -100ºC a 0ºC, y el éster insaturado (1) se añade dando producto de adición (2);

b)

El producto de la etapa a) anterior se ozonoliza en un disolvente tal como cloroformo o diclorometano o metanol seguido de un desactivador tal como trifenilfosfina o dimetilsulfuro a una temperatura de -100ºC a 0ºC dando (3):

c)

El producto de la etapa b) anterior en un disolvente tal como metanol o etanol se hace reaccionar con disolución de amoniaco o gas amoniaco seguido por reducción usando borohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio o triacetoxiborohidruro de sodio, o por reducción por hidrogenación en presencia de un catalizador tal como níquel, paladio, o platino dando (4); y

d)

El producto de la etapa c) anterior se hidroliza usando ácido clorhídrico acuoso a una concentración de aproximadamente 0,01 M a aproximadamente 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (5).

Procedimiento 4B

\vskip1.000000\baselineskip

16

a)

Un reactivo organometálico tal como cloruro o bromuro de alilmagnesio se mezcla con dimetilcinc, cloruro de cinc, yoduro de cobre (I), complejo dimetilsulfuro bromuro de cobre (I), o cianuro de cobre (I) en la presencia de un ácido de Lewis tal como eterato de trifluoruro de boro o cloruro de aluminio en un disolvente tal como tetrahidrofurano o éter dietílico a una temperatura de -100ºC a 0ºC, y el éster insaturado (1) se añade dando producto de adición (6); o un reactivo organometálico tal como cloruro o bromuro de bencilmagnesio se mezcla con dimetilcinc, cloruro de cinc, yoduro de cobre (I), complejo dimetilsulfuro bromuro de cobre (I), o cianuro de cobre (I) en presencia de un ácido de Lewis tal como eterato de trifluoruro de boro o cloruro de aluminio en un disolvente tal como tetrahidrofurano o éter dietílico a una temperatura de -100ºC a 0ºC, y se añade el éster insaturado (1) dando producto de adición (7);

b)

Añadir el producto de la etapa a) anterior a una mezcla de tetracloruro de carbono o acetato de etilo y acetonitrilo al cual se añade agua, peróxido de sodio, y cloruro de rutenio (III), y agitar a una temperatura de -40ºC a 80ºC para producir ácido carboxílico de fórmula (8);

c)

Añadir el producto de la etapa b) anterior a una mezcla de una base seleccionada de trietilamina o diisopropiletilamina como un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, tetrahidrofurano, éter dietílico o n-heptano al cual se añadieron difenilfosforilazida (DPPA) y se agita a una temperatura de 0ºC a 150ºC para producir el isocianato de fórmula (9); o añadir el producto de la etapa b) anterior a cloroformiato de etilo o cloroformiato de isobutilo y una base tal como trietilamina o diisopropiletilamina en tetrahidrofurano o acetona seguido por adición de tolueno o benceno y reflujo;

d)

Añadir el producto de la etapa c) anterior a un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, o n-heptano a los cuales se añadió metanol o terc-butanol dando (10) y después añadir (10) a ácido clorhídrico acuoso a una concentración de 0,01 M a 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (5); o añadir el producto de la etapa c) anterior a un disolvente seleccionado de tolueno, benceno, xilenos, o n-heptanos a los cuales se añadió alcohol bencílico dando (10) y después hidrogenar (10) sobre níquel o paladio o platino dando lactama la cual se hidroliza después usando ácido clorhídrico acuoso a una concentración de 0,01 M a 12 M en presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (5).

Procedimiento 5

\vskip1.000000\baselineskip

17

a)

Compuesto (1) y cianuro de potasio o cianuro de sodio y agua y etanol o metanol se someten a reflujo juntos con eliminación de agua mediante, por ejemplo, el uso de una trampa Dean-Stark par dar (2):

b)

El producto de la etapa a) se agita con etanol y tolueno o benceno, y la disolución se satura con ácido clorhídrico gaseoso a una temperatura de -30ºC a 40ºC dando (3);

c)

El producto de la etapa b) anterior se hidrogena en metanol, etanol, o acetato de etilo usando níquel, paladio, platino, o rodio a una temperatura de 15ºC a 60ºC dando (4);

d)

El producto de la etapa c) anterior se hidroliza usando ácido clorhídrico acuoso a una concentración de 0,01 M a 12 M en la presencia o ausencia de un disolvente tal como 1,4-dioxano, ácido acético, o agua para producir el aminoácido (5).

Ejemplos biológicos

Están disponibles varios modelos para determinar si el compuesto de fórmula Ia es efectivo en tratar trastornos de las vísceras. Estos modelos incluyen un modelo LPS (Eutamene H. y col, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000 295 (1): 162-7), un modelo TNBS (Diop L. y col, Gastroenterology 1999, 116, 4(2): A986), un modelo IBD (Clemett D, Markham A, Drugs 2000 abril; 59 (4): 929-56), un modelo de dolor pancreático (Isla AM, Hosp. Med. 2000 junio; 61 (6): 386-9) y un modelo de dolor no digestivo visceral (Boucher y col., J. Urol. 2000 julio; 164(1): 203-8).

La gabepentina, la cual es ácido 1-(aminometil)ciclohexanoacético, se comercializa como un fármaco antipirético, y es efectiva en disminuir la frecuencia de los ataques en los enfermos.

Se ha encontrado que las inyecciones de ácido trinitrobencenosulfónico (TNBS) en el cólon de la rata inducen colitis crónica. Se ha encontrado que la gabapentina y compuestos químicamente relacionados suprimen la hipersensibilidad colónica inducida por TNBS en un modelo de alodinia crónica (Diop L. y col. (1988) Soc. Neurosci. Abstr.: 24: 639).

La capacidad de un compuesto de fórmula Ia para tratar los trastornos viscerales se ha establecido en modelos animales de dolor visceral para trastornos GI.

En humanos, los trastornos GI están a menudo asociados con dolor visceral. En estas patologías, el dolor visceral umbral se disminuye indicando una hipersensibilidad visceral.

Ejemplo 10 Efecto de gabapentina y el compuesto de fórmula Ia en alodinia visceral crónica inducida por TNBS en ratas

En este modelo experimental de distensión colónica en ratas conscientes, la inyección previa de TNBS en el cólon proximal tiene disminuido el umbral de dolor visceral.

Materiales y procedimientos

Se usan ratas macho Sprage-Dawley pesando 340-400 g. Los animales se alojan 3 por jaula en un ambiente regulado (20 \pm 1ºC, humedad al 50 \pm 5%, con luz de 8:00 am a 8:00 pm). En el día 0, bajo anestesia (ketamina 80 mg/kg i.p.; acepromazina 12 mg/kg i.p.), la inyección de TNBS (50 mg/kg en etanol al 30%), o solución salina (1,5 ml/kg) para ratas control, se lleva a cabo en la pared del cólon proximal (1 cm desde el ciego). Después de la cirugía, los animales se alojan individualmente en jaulas de polipropileno y se guardan en un ambiente regulado (20 \pm 1ºC, humedad al 50 \pm 5%, con luz de 8:00 am a 8:00 pm) durante 7 días. En el día 7 después de la administración de TNBS, un globo (5-6 cm de longitud) se inserta por el ano, y se mantiene en posición (la punta del globo a 5 cm del ano) pegando el catéter con cinta adhesiva a la base de la cola. La administración oral de gabapentina al compuesto de fórmula Ia se lleva a cabo 1 hora antes del ciclo de distensión colónica: el globo se infla progresivamente mediante las etapas de 5 mm de mercurio (0,667 kPa), de 0 a 75 mm de mercurio, durando cada etapa de inflado 30 segundos. Cada ciclo de distensión colónica se controla mediante un barostat estándar. El umbral (mm de Hg) corresponde a la presión que produce la primera contracción abdominal, y el ciclo de distensión se hace después discontínuo. El umbral colónico se determinó después de la realización de cuatro ciclos de distensión en el mismo animal.

Los datos se analizan comparando los grupos tratados con el compuesto prueba con un grupo tratado sólo con TNBS y el grupo control. La media y el SEM se calculan para cada grupo. La actividad antialodínica de cada dosis oral del compuesto prueba se calcula como sigue:

% de actividad = \frac{A - T}{C - T} x 100

donde

A = significa umbral del grupo tratado con compuesto de prueba,

T = significa umbral del grupo tratado sólo con TNBS,

C = significa umbral del grupo de control.

Los resultados medidos en los grupos tratados con compuesto prueba se expresan en % de inhibición del decrecimiento inducido por TNBS en el umbral del dolor.

La significación estadística entre cada grupo se determinó usando un ANOVA de sentido único seguido por la prueba t de Student desapareada: las diferencias se consideraron estadísticamente significativas a p < 0,05.

Resultados

Efecto de gabapentina

Dosis por vía oral (mg/kg)	Inhibición a 1 hora (%)	Número de ratas
100	14,7 \pm 5,1%*	7
300	48,6 \pm 13,3%**	8
500	64,9 \pm 10,5%***	8
1000	75,2 \pm 6,1%***	8
\hskip0,3cm *: p < 0,05
\hskip0,1cm **: p < 0,01
***: p < 0,001

La dosis efectiva mediana (DE_{50}) de gabapentina es 321 mg/ml por vía oral.

Efecto del compuesto de fórmula Ia

Dosis por vía oral (mg/kg)	Inhibición a 1 hora (%)	Número de ratas
3	21,7 \pm 3,0***	7
10	34,2 \pm 5,7***	7
30	58,8 \pm 6,2***	7
60	90,4 \pm 9,8%***	7

La DE_{50} del compuesto de fórmula Ia es 14,4 mg/kg por vía oral.

Por vía subcutánea (s.c.), se sabe que la gabapentina no modifica el umbral colónico en condiciones control; por contraste, en las mismas condiciones la morfina (s.c) incrementó el umbral colónico tanto en animales tratados con TNBS como en controles, sugiriendo un mecanismo de acción diferente. (Diop L. y col. (1988) Soc. Neurosci. Abstr.: 24: 639).

El compuesto de fórmula Ia produce una potente actividad antialodínica en un modelo de dolor visceral en ratas, siendo el compuesto más de 20 veces más activo que gabapentina en las mismas condiciones. Los valores de DE_{50} son 321 mg/kg por vía oral para gabapentina y 14,4 mg/kg por vía oral para el compuesto de fórmula Ia.

Ejemplo 11 Efecto de gabapentina del compuesto de fórmula Ia en hipersensibilidad rectal inducida por LPS en ratas

Se ha mostrado la inyección intraperitoneal de lipopolisacárido (LPS) bacteriano para inducir hiperalgesia rectal en ratas conscientes.

Materiales y procedimientos

Los animales se preparan quirúrgicamente para la electromiografía: las ratas se anestesiaron mediante inyección intraperitoneal de acepromacina (0,6 mg/kg) y ketamina (120 mg/kg). Tres grupos de tres electrodos se implantaron en la musculatura oblicua externa abdominal, inmediatamente superior al ligamento inguinal. Los electrodos se exteriorizaron en la parte trasera del cuello y se protegieron al ligamento inguinal. Los animales se alojaron individualmente en jaulas de polipropileno y mantuvieron en una habitación de temperatura controlada (21ºC). La comida (pellas UAR, Epinay, Francia) y el agua se proporcionan a voluntad.

Los registros electromiográficos comienzan cinco días después de la cirugía. La actividad eléctrica de los músculos abdominales estriados se graba con una máquina electroencefalógrafa (Mini VIII Alvar, París, Francia) usando una constante temporal corta (0,03 segundos) para eliminar señales de baja frecuencia (< 3 Hz) y una velocidad del papel de 3,6 cm/min. Las apariciones bruscas de picos se graban como un índice de contracciones abdominales.

Procedimiento de distensión: las ratas se situaron en túneles de plástico (6 cm de diámetro x 25 cm de longitud) donde no se pueden mover, escapar, o darse la vuelta, con el fin de prevenir dañar el globo. Los animales se acostumbraron a este procedimiento durante cuatro días antes de la distensión rectal con el fin de minimizar las reacciones de estrés durante los experimentos. El globo usado para distensión es un catéter de embolectomía arterial Fogarty, Edwards Laboratories Inc.). La distensión rectal se lleva a cabo mediante inserción del globo (2 mm de diámetro x 2 cm de longitud) en el recto, a 1 cm del ano, y el catéter se fija en la base de la cola. Se infla progresivamente con agua tibia por etapas de 0,4 ml, de 0 a 1,2 ml, durando cada etapa de inflado 5 minutos. Para detectar posible escape, el volumen de agua introducido en el globo se prueba mediante eliminación completa con una jeringuilla al final del periodo de distensión.

Protocolo experimental: las ratas se inyectaron intraperitonealmente con LPS (1 mg/kg (Escherichia coli, serotipo O111:B4) Sigma-Aldrich Chemical Co., San Luís, MO.) o su vehículo, y se lleva a cabo distensión rectal con registro electromiográfico concomitante de contracciones abdominales de 9 a 12 horas después de esta administración. Para determinar las propiedades anticonceptivas de la gabapentina y los compuestos de la fórmula Ia en condiciones de hiperalgesia, la gabapentina (10 y 30 mg/kg) y el compuesto de fórmula Ia (0,01, 0,03 y 0,1 mg/kg) o el vehículo (0,3 ml de NaCl al 0,9%/rata) se administran por vía oral 1 hora antes de la distensión rectal pero precedidos (12 horas) por inyección de LPS (1 mg/kg intraperitonealmente).

Fármacos: todos los compuestos se disolvieron en NaCl estéril (al 0,9%, disolución salina isotónica) inmediatamente antes de usar.

Estadísticas: el análisis estadístico del número de contracciones abdominales que ocurren durante cada periodo de distensión rectal se lleva a cabo mediante ANOVA de una dirección seguido por prueba de Student desapareada paramétrica.

Resultados

Efectos de gabapentina: la gabapentina administrada a 30 mg/kg por vía oral inhibe significativamente (85,3%, p < 0,001) el número de contracciones abdominales inducidas mediante distensión rectal a 0,4 ml en ratas tratadas con LPS. A 10 mg/kg por vía oral, la gabapentina no produce una actividad antihiperalgésica significativa (24,9%).

Efecto de los compuestos de fórmula Ia: después de la administración oral, el compuesto de fórmula Ia (0,01, 0,03 y 0,1 mg/kg por vía oral) inhibe en una forma dependiente de dosis el número de contracciones abdominales inducidas por distensión rectal a 0,4 ml después de tratamiento con LPS (Figura 1). La DE_{50} es 0,037 mg/kg por vía oral.

En conclusión, estos resultados muestran que la gabapentina y el compuesto de fórmula Ia producen una actividad hiperalgésica en hipersensibilidad rectal inducida por LPS, un modelo de dolor visceral en ratas. El compuesto de fórmula Ia presenta una actividad hiperalgésica más potente que la gabapentina. La comparación de gabapentina con el compuesto de fórmula I muestra que el compuesto de fórmula I es aproximadamente 500 veces más potente que la gabapentina en este modelo de dolor visceral.

Los datos precedentes establecen que el compuesto de fórmula Ia es efectivo en prevenir y tratar dolor visceral, en particular en trastornos GI tales como trastornos del intestino funcionales (FBD) y enfermedades intestinales inflamatorias (IBD). Además, tal eficacia del compuesto de fórmula Ia se observa siguiendo la administración oral del compuesto.

Claims (7)

1. El uso de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar dolor visceral.

2. El uso de ácido (1\alpha,3\alpha,5\alpha)-3-aminometil-biciclo[3.2.0]heptano-3-acético, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar trastornos gastrointestinales.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 en el que el trastorno es trastorno intestinal funcional o enfermedad intestinal inflamatoria.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3 en el que el trastorno intestinal funcional es reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable o síndrome del dolor abdominal funcional.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 3 en el que la enfermedad intestinal inflamatoria es enfermedad de Crohn, ileítis o colitis ulcerosa.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el dolor está asociado con dolor de dismenorrea, dolor pélvico, dolor de cistitis y pancreatitis.

7. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el que el medicamento es una formulación para administración oral.