ES2240185T3 - Polimeros de imprenta molecular producidos por polimerizacion de matriz. - Google Patents
Polimeros de imprenta molecular producidos por polimerizacion de matriz.Info
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Abstract
Procedimiento que comprende los pasos de: a) proporcionar una mezcla de diferentes monómeros funcionales seleccionados de entre monómeros vinílicos, monómeros alílicos, acetilenos, acrilatos, metacrilatos, aminoácidos, nucleósidos, nucleótidos, carbohidratos, heterociclos y sus derivados; b) llevar a cabo la polimerización dirigida por plantilla de los monómeros funcionales de dicha mezcla en presencia de una plantilla molecular, produciendo gracias a ello un polímero lineal obtenido a partir de una secuencia de dichos monómeros, de donde al menos una parte es complementaria de al menos una parte de la plantilla, con la condición de que si la plantilla es un ácido nucleico, los monómeros comprenden especies distintas a nucleótidos; y c) preparar una solución de un polímero soluble que es o procede del citado polímero complementario y que comprende al menos una parte que es complementaria de al menos una parte de la plantilla.
Description
Polímeros de imprenta molecular producidos por
polimerización de matriz.
La presente invención está relacionada con
polímeros impresos molecularmente ("MIP"), con procedimientos
de polimerización sobre plantilla para su preparación y con usos de
los mismos. En realizaciones preferidas, los MIPs son biológicamente
activos, por ejemplo, como fármacos, efectores, moduladores o
inhibidores. Salvo que el contexto requiera lo contrario, el
término "polímero" incluye dímeros, oligómeros, polímeros más
elevados y mezclas.
En la polimerización sobre plantilla, la
formación de un receptor polimérico (réplica o MIP) tiene lugar en
la presencia de otro polímero o sustancia orgánica de pequeño peso
molecular (plantilla). Con anterioridad al inicio de la
polimerización y durante la misma, los componentes (generalmente
monómeros) se distribuyen espacialmente ellos mismos (proceso de
auto-ensamblaje) alrededor de las moléculas
plantilla, según el tamaño, polaridad y funcionalidad de la
plantilla. Los monómeros son polimerizados ya sea en forma de
cadenas lineales o de redes tridimensionales rígidas.
El primer ejemplo de policondensación de ácido
silícico en presencia de plantillas orgánicas fue presentado por
Polyakov y co-autores (ver ref.
10-12, 19). Los geles de sílice preparados en sus
experimentos conservaban las estructuras, específicas para las de
las moléculas plantilla.
Experimentos posteriores con plantillas o
polimerización mediante impresión molecular, en base a monómeros
acrílicos o vinílicos, han sido llevados a cabo en los grupos de
Wulff y Mosbach (ver ref. 2,5,13, 16-18). Varias
patentes que describen la preparación de sorbentes, catalizadores y
sensores, basadas en polímeros impresos, han sido publicadas
recientemente (ver las patentes USA 5.110.833, 5.630.978, 5.728.296,
5.756.717, WO 9641173).
Otro planteamiento incluye la modificación de
proteínas, tales como enzimas, en presencia de moléculas plantilla
para producir cambios en sus propiedades, por ejemplo, especificidad
y actividad (ver ref. 1 y patente DE 19627162).
El planteamiento tradicional conlleva la
producción de polímeros impresos altamente reticulados, los cuales
son insolubles en agua y en disolventes orgánicos. Como consecuencia
de su insolubilidad inherente, la posibilidad de utilizar estos
materiales en farmacología y medicina resulta restringida. En las
siguientes referencias puede encontrarse material de fondo.
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En un primer aspecto, la invención proporciona un
procedimiento que comprende los pasos de:
a) proporcionar una mezcla de diferentes
monómeros funcionales seleccionados de entre monómeros vinílicos,
monómeros alílicos, acetilenos, acrilatos, metacrilatos,
aminoácidos, nucleósidos, nucleótidos, carbohidratos, heterociclos y
sus derivados;
b) llevar a cabo la polimerización dirigida por
plantilla de monómeros funcionales en presencia de una plantilla
molecular, produciendo gracias a ello un polímero lineal obtenido a
partir de una secuencia de los citados monómeros en donde al menos
una parte es complementaria de al menos una parte de la plantilla,
con la condición de que si la plantilla es un ácido nucleico, los
monómeros comprenden especies distintas a nucleótidos; y
c) preparar una solución de un polímero soluble
que es o procede del citado polímero complementario y que comprende
al menos una parte que es complementaria de al menos una parte de
la plantilla.
La solución restante contiene una o más especies
seleccionadas de entre polímeros,oligómeros y dímeros, las cuales
pueden ser adaptadas para unirse a la molécula plantilla.
La plantilla puede ser una molécula o un sistema,
generalmente biológico, más grande. Preferiblemente es un receptor
biológico, un ácido nucleico, una célula, un virus, un
microorganismo, una muestra tisular, un carbohidrato, un
oligosacárido, un polisacárido, una nucleoproteína, una
mucoproteína, una lipoproteína, una proteína sintética, una
glicoproteína, un glicosaminoglicano, un enzima, un esteroide, un
inmunosupresor, una hormona, heparina, un antibiótico, una vitamina
o un fármaco. La misma presenta adecuadamente un peso molecular
absoluto comprendido entre doscientos y tres millones.
Preferiblemente, el polímero soluble del paso c)
presenta actividad biológica, por ejemplo, como fármaco, efector,
modulador o inhibidor. Preferiblemente, el polímero es soluble en
agua, por ejemplo, en la medida suficiente como para mostrar
actividad biológica en un medio acuoso.
La polimerización puede ser efectuada utilizando
condiciones adecuadas para los monómeros, por ejemplo, iniciadores
de radicales libres para monómeros insaturados etilénicamente;
agentes de condensación tales como carbodiimidas para aminoácidos;
enzimas polimerasas para nucleósidos y nucleótidos. Cuando resulte
adecuado, pueden utilizarse agentes de reticulación.
El paso c) puede comprender (i) separar del
sistema de polimerización un complejo que comprende la molécula
plantilla y el polímero complementario; y (ii) la extracción de la
molécula plantilla. La separación del complejo ser lograda a través
de modificación en el pH de la solución, modificación en la
concentración iónica de la solución, y/o de la adición de urea,
guanidina o de una sustancia que interaccione con la plantilla de
forma más enérgica que el polímero.
\newpage
La eliminación de la plantilla puede ser obtenida
a través de filtración, electroforesis, separación cromatográfica,
lavado o centrifugación.
La preparación de la solución puede conllevar la
solución y separación adecuadas de la solución de las partículas
insolubles. Seguidamente, las moléculas sintetizadas solubilizadas
pueden ser fraccionadas y/o purificadas, por ejemplo, a través de
centrifugación, cromatografía, electroforesis o diálisis.
El MIP es un polímero lineal obtenido a partir de
un conjunto de monómeros funcionales diferentes, por ejemplo,
aminoácidos o nucleósidos o nucleótidos. La naturaleza del MIP puede
ser determinada después a través de su secuencia. Los pasos a) a c)
pueden ir seguidos de d) determinación de la secuencia y,
opcionalmente, e) síntesis de MIPs que tengan toda o parte de la
secuencia determinada y/o de variaciones de los mismos.
Un MIP de la presente invención puede ser
utilizado como fármaco en farmacología y medicina, como un ligando
específico para receptor en química analítica o utilizado para
llevar a cabo separaciones en industrias de biotecnología,
farmacéuticas y de alimentación.
La presente invención permite disponer de un
procedimiento para la síntesis demoléculas biológicamente activas
(fármacos, efectores, moduladores, inhibidores) utilizando la
polimerización con plantilla y su aplicación en química analítica,
farmacología, medicina y en las industrias de alimentación,
biotecnología y farmacéutica. De forma específica, las moléculas
biológicamente activas pueden ser sintetizadas a través de a)
polimerización de monómeros funcionales alrededor de un receptor
biológico, un enzima, un ácido nucleico, una célula, un virus, un
microorganismo, una muestra tisular o un fármaco; b) separación del
complejo polímero-plantilla formado y extracción de
la molécula plantilla; c) si resulta necesaria, solubilización de la
réplica sintetizada. Este planteamiento difiere del procedimiento
descrito en WO-A-9640822 y
US-A-5630978, en donde se preparan
moléculas biológicamente activas en presencia de polímero impreso
mediante plantilla, el cual había sido preparado en presencia de
otra plantilla, normalmente un fármaco tal como heparina. La
replica resultante se parece a la estructura de la molécula fármaco
original. Puede difícilmente esperarse que la actividad de las
moléculas sintetizadas de este modo pueda ser más pronunciada que la
de la plantilla original.
En el procedimiento descrito en el presente
documento, las moléculas sintetizadas presentan una estructura
complementaria a la de la plantilla original y la capacidad de
unirse a la misma con razonablemente elevada afinidad. Estas
moléculas sintéticas, en particular polímeros, presentan afinidades
predeterminadas y especificidades superiores a las de los polímeros
sintetizados aleatoriamente y pueden ser preparadas más fácilmente
que las estructuras orgánicas discretas diseñadas específicamente
(ver refs. 6-8). Las moléculas sintetizadas tal y
como se describen en esta invención (dímeros, oligómeros, polímeros
o sus mezclas) pueden ser utilizadas como fármacos en farmacología y
medicina; como ligandos específicos de receptor en química
analítica (sensores, ensayos) y para separaciones en las industrias
de biotecnología, farmacéuticas y de alimentación. Los esfuerzos
previos en fármacos diseñados se han basado habitualmente en la
engorrosa investigación de relaciones
estructura-actividad de un elevado número de
estructuras químicas. La presente invención describe un
procedimiento más simple y directo para diseñar una sustancia
biológicamente activa, el cual debería resultar beneficiosa en gran
medida, en comparación con procedimientos de diseño y descubrimiento
tradicionales de fármacos.
La Figura 1 muestra un esquema de la
polimerización mediante plantilla en presencia de un receptor de
plantilla. Un polímero MIP específico para la plantilla se forma en
tres pasos 1) auto-ensamblaje de monómeros alrededor
de la superficie del receptor; 2) polimerización de monómeros
mediante polimerización por radical, polimerización mediante anión o
catión o policondensación; 3) separación del complejo
plantilla-polímero y solubilización de la réplica
(no mostrada).
Las Figuras 2 a), b) y c) son espectros de
resonancia plasmon superficial que muestran la unión de péptidos MIP
a hemoglobina glicosilada y no glicosilada y BSA,
respectivamente.
La Figura 3 es una gráfica que representa la
densidad óptica frente al tiempo, mostrando el crecimiento de una
levadura en presencia de un péptido vacío o de un péptido MIP
complementario a las membranas de levadura.
La Figura 4 es una gráfica que muestra la
actividad de la tripsina influenciada por péptidos MIP
fraccionados.
La polimerización mediante plantilla tradicional
incluye la formación de una red de polímero rígida alrededor de
sustancias orgánicas pequeñas, tales como fármacos. Los polímeros
impresos molecularmente (MIPs) preparados de este modo parecen
imitaciones sintéticas de receptores naturales, específicos para la
molécula fármaco utilizada como plantilla. Utilizando este
planteamiento, los polímeros que resultan de la utilización de
moléculas grandes, tales como proteínas y enzimas, proporcionan
también productos poliméricos insolubles desprovistos de actividad
biológica.
La presente invención describe la formación de
MIPs solubles, preparados en presencia de una plantilla, en
particular de moléculas grandes tales como receptores, enzimas o
ácidos nucleicos. En contraste con el planteamiento tradicional a la
preparación MIP, los polímeros preparados de esta forma parecen
efectores (activador, inhibidor o sustrato) de la plantilla y
pueden presentar actividad biológica. Los citados polímeros pueden
ser utilizados, por ejemplo, como fármacos en farmacología y
medicina. En el texto que describe la presente invención, los
términos "sustancias biológicamente activas", "moléculas
réplica" y "MIPs" tienen el mismo significado.
La presente invención describe la preparación de
las moléculas biológicamente activas (MIPs) en presencia de una
plantilla que es un receptor biológico, un ácido nucleico, una
célula, un virus, un microorganismo, una muestra tisular, un
carbohidrato, un oligosacárido, un polisacárido, una
nucleoproteína, una mucoproteina, una lipoproteína, una proteína
sintética, una glicoproteína, un glucosaminoglicano, un esteroide,
un inmunosupresor, una hormona, heparina, un antibiótico, una
vitamina o un fármaco.
Normalmente, una plantilla soluble en un
disolvente adecuado, preferiblemente agua, es mezclada conjuntamente
con una mezcla de diferentes monómeros funcionales y un iniciador.
La polimerización puede iniciarse a través de calentamiento o
radiación UV y normalmente tarda entre 1 y 24 horas.
Entre los monómeros que pueden ser utilizados
para la preparación de MIP se incluyen monómeros vinílicos,
monómeros alílicos, acetilenos, acrilatos, metacrilatos,
aminoácidos, nucleósidos, nucleótidos, carbohidratos, heterociclos y
sus derivados.
La separación del complejo formado entre la
plantilla y las moléculas replica y la solubilización de las
moléculas poliméricas biológicamente activas sintetizadas puede ser
lograda mediante la trituración polimérica, mediante modificación en
el pH de la solución, en la concentración iónica, o a través de la
adición de urea, guanidina, o sustancias que pueden interaccionar
con la plantilla de forma más enérgica que la réplica, filtración,
electrofóresis, separación cromatográfica, lavado, centrifugación o
diálisis. Este paso resulta necesario con vistas a preparar una
fracción de MIP soluble en agua o en un disolvente orgánico, que
tenga una elevada afinidad por la plantilla y que pueda
interaccionar con la plantilla con vistas a activar o inhibir su
interacción con otras moléculas, in vitro o in
vivo.
La presente invención describe también la
aplicación de las moléculas biológicamente activas sintetizadas como
fármacos en farmacología y medicina, como ligandos específicos para
receptor en química analítica (para utilización como componentes de
reconocimiento en sensores, o en ensayos), o para separaciones en
las industrias de biotecnología, farmacéuticas y de alimentación.
La presente invención será seguidamente particularmente descrita
adicionalmente en referencia a los siguientes ejemplos, no
limitativos.
Se mezcló hemoglobina glicosilada (HbA_{1c}, 4
mg) en 2 ml de tampón fosfato sódico 50 mM, pH 7,5, con 2,5 ml de
una solución de 20 aminoácidos naturales (2 mM cada uno de ellos).
Al recipiente de reacción se le añadieron 0,5 ml de una solución 220
mM de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropilcarbodiimida
(EDC). La polimerización de aminoácidos en presencia de plantilla
se llevó a cabo por espacio de 4 horas. Para preparar el polímero
vacío, se llevó a cabo la misma reacción en ausencia de hemoglobina.
Para extraer la EDC los aminoácidos no reaccionados y los péptidos
de baja afinidad, la mezcla de reacción fue filtrada a través de
membranas permeables Amicon de 50 kDa (Centriplus
YM-50, Millipore). La hemoglobina, concentrada sobre
el filtro, fue lavada dos veces con tampón fosfato sódico 50
mM.
mM.
Para extraer las partículas de hemoglobina
impresas se utilizó ácido clorhídrico. 10 \mul de HCl 5M fueron
añadidos a 2 ml de solución de hemoglobina, desplazando el pH hasta
3,0. Se aplicaron ultrasonidos a la mezcla durante un período de 10
min y se filtró de nuevo a través de una membrana Amicon de 50 kDa.
Los péptidos que pasaron esta vez por la membrana fueron recogidos
Se ajustó el pH de la solución hasta alcanzar el valor de 7,5 con 5
\mul de hidróxido sódico 4M.
Se determinó la afinidad de los péptidos
sintetizados utilizando la técnica de Resonancia de Plasmon
Superficial (SPR). Las HbA_{1c} y HbA_{0} estaban unidas a
través de una condensación peptídico, utilizando química EDC/NHS con
chip CM5 Biacore (Biacore, Uppsala, Sweden). El correspondiente
nivel de inmovilización de hemoglobina era de 1000 RU y 7000 RU. A
pesar de la diferencia significativa en el nivel de inmovilización
se demostró que las MIPs presentan una afinidad ligeramente más
destacada para la superficie HbA_{1c} (datos no mostrados).
Con vistas a mejorar la especificidad de las MIPs
hacia la hemoglobina glicosilada, 3 mg de la HbA_{0} fueron
añadidos a 2 ml de la solución peptídica en tampón fosfato sódico
50 mM, pH 7,5, y se sometieron a incubación durante un intervalo de
1 hora a temperatura ambiente. La HbA_{0} con péptidos unidos fue
extraída mediante filtración utilizando una membrana Amicon de 50
kDa para eliminar los péptidos que no resultaban específicos para
HbA_{1c}. La fracción que contenía los péptidos que poseen
afinidad hacia HbA_{1c} fue únicamente analizada utilizando el
Biacore. Las HbA_{1c}, HbA_{0} y BSA se inmovilizaron sobre un
chip CM5 Biacore con nivel de inmovilización posiblemente igual
(1100 RU, 1050 RU y 1020 RU, respectivamente) para estimar la
selectividad de los péptidos MIP extraídos. El análisis de unión
indica claramente que la afinidad hacia HbA_{1c} de la fracción
post-cribada se incrementaba en comparación con la
pre-cribada (ver la Figura 2). La unión con la
superficie HbA_{1c} se estimó en 12,5 RU, con HbA_{0} -5,9 RU y
0 para BSA.
Los resultados indican que los aminoácidos pueden
ser utilizados como monómeros en polimerización por impresión. Los
MIPs sintetizados presentan una especificidad y afinidad reforzada
hacia la plantilla en comparación con los polímeros sintetizados
aleatoriamente (vacíos).
4 mg de membranas de levadura (Sporobolomyces
roseus) purificadas en 2 ml de tampón fosfato sódico 50 mM, pH
7,5, fueron mezclados con 2,5 ml de solución de 20 aminoácidos
naturales (2M cada uno de ellos). Al recipiente de reacción se le
añadieron 0,5 ml de solución 220 mM de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
(EDC). La polimerización de aminoácidos en presencia de plantilla
fue llevada a cabo durante un período de 4 horas. Para preparar el
polímero vacío, se llevó a cabo la misma reacción en ausencia de
plantilla. Para extraer la EDC, los aminoácidos no reaccionados y
los péptidos de baja afinidad, la mezcla de reacción fue filtrada a
través de membranas Amicon permeables de 50 kDa (Centriplus
YM-50, Millipore). Las membranas celulares
concentradas sobre el filtro fueron lavadas dos veces con tampón
fosfato sódico 50 mM.
Para extraer los péptidos adsorbidos sobre la
membrana de levadura se utilizó ácido clorhídrico. 10 \mul de HCl
5M fueron añadidos a 2 ml de membranas de levadura desplazando el pH
hasta pH 3,0. A la mezcla se le aplicó ultrasonidos durante un
período de 10 min y se filtró de nuevo a través de una membrana
Amicon de 50 kDa. Se recogieron los péptidos que esta vez habían
pasado a través de la membrana. La solución fue ajustada a pH 7,5
con 5 \mul de hidróxido sódico 4M.
Al medio con lavadura se le añadieron péptidos
sintetizados, en concentraciones de 0,6, 6, 25, 50, 100 \mug/ml.
Se monitorizó el crecimiento de la levadura a través de la medición
de la densidad óptica de cultivo a 405 nm. La influencia de los
péptidos sintetizados sobre el proceso de crecimiento es presentada
en la Figura 3. La inhibición, observada para péptidos MIP
constituye una clara indicación de sus actividades biológicas. La
naturaleza de este fenómeno, podía ser explicada a través de la
inhibición específica de los receptores expuestos sobre la
superficie de la membrana a través de péptidos MIP. Es importante
el que este efecto resultaba mucho más pronunciado en el caso de las
membranas de levadura en comparación con el caso de las especies de
E. Coli o bacillus, lo cual indica su especificidad.
No se observó cambio alguno en el crecimiento de la levadura en
presencia de péptidos vacíos.
4 mg de tripsina en 2 ml de tampón fosfato sódico
50 mM, pH 7,5, se mezclaron con 2,5 ml de solución de 20
aminoácidos naturales (2 mM cada uno de ellos). Al recipiente de
reacción se le añadieron 0,5 ml de solución 220 mM de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
(EDC). La polimerización de aminoácidos en presencia de la
plantilla fue llevada a cabo por espacio de 4 horas. Para preparar
el polímero vacío, se llevó a cabo la misma reacción en presencia
de plantilla. Para extraer la EDC, los aminoácidos no reaccionados
y los péptidos de baja afinidad, el pH de la mezcla de reacción fue
ajustado a 3,0 mediante la adición alícuota de ácido clorhídrico.
La mezcla fue inyectada inmediatamente en HPLC y separada utilizando
una columna Superdex Peptide en tampón salino de fosfato sódico, pH
7,4. Se analizo la influencia de las fracciones peptídicas sobre la
actividad de la tripsina (Figura 4). Es importante indicar que tan
solo las primeras tres fracciones presentaban actividad enzimática,
la cual procedía de las cantidades residuales de tripsina presentes
en la solución. El resto de las fracciones no mostraba actividad
enzimática tripsina de por sí, pero eran capaces de activar, de
forma sustancial, la tripsina añadida a las mismas. El efecto podía
ser explicado a través de la estabilización parcial de la
estructura de la tripsina en presencia de péptidos impresos.
Claims (12)
1. Procedimiento que comprende los pasos de:
a) proporcionar una mezcla de diferentes
monómeros funcionales seleccionados de entre monómeros vinílicos,
monómeros alílicos, acetilenos, acrilatos, metacrilatos,
aminoácidos, nucleósidos, nucleótidos, carbohidratos, heterociclos y
sus derivados;
b) llevar a cabo la polimerización dirigida por
plantilla de los monómeros funcionales de dicha mezcla en presencia
de una plantilla molecular, produciendo gracias a ello un polímero
lineal obtenido a partir de una secuencia de dichos monómeros, de
donde al menos una parte es complementaria de al menos una parte de
la plantilla, con la condición de que si la plantilla es un ácido
nucleico, los monómeros comprenden especies distintas a
nucleótidos; y
c) preparar una solución de un polímero soluble
que es o procede del citado polímero complementario y que comprende
al menos una parte que es complementaria de al menos una parte de
la plantilla.
2. Procedimiento según la reivindicación 1 en el
que la plantilla es un receptor biológico, un ácido nucleico, una
célula, un virus, un microorganismo, una muestra tisular, un
carbohidrato, un oligosacárido, un polisacárido, una nucleoproteína,
una mucoproteína, una lipoproteína, una proteína sintética, una
glicoproteína, un glicosaminoglicano, un enzima, un esteroide, un
inmunosupresor, una hormona, heparina, un antibiótico, una vitamina
o un fármaco.
3. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes en el que la plantilla es una especie
molecular que tiene un peso molecular de entre 200 y 3.000.000.
4. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1-3, en el que los citados
monómeros se seleccionan de entre aminoácidos, nucleósidos y
nucleótidos.
5. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en el que los monómeros funcionales
comprenden aminoácidos y la polimerización es efectuada por medio de
un agente de condensación generador de amida.
6. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el paso c) comprende i)
separar del sistema de polimerización un complejo que comprende la
molécula plantilla y el polímero complementario; y ii) la
eliminación de la molécula plantilla.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el
que la eliminación de la plantilla conlleva la separación de la
plantilla del polímero por medio de uno o más cambios en el pH de
la solución, cambio en la concentración iónica de la solución, y/o
adición de urea, guanidina, o de una sustancia que interaccione con
la plantilla de manera más enérgica que la que interacciona el
polímero.
8. Procedimiento según las reivindicaciones 6 ó
7, en el que la eliminación de la plantilla utiliza una o más de
filtración, electroforesis, separación cromatográfica, lavado o
centrifugación.
9. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el paso c) es seguido por
d) determinación de secuencia.
10. Procedimiento según la reivindicación 9, en
el que el paso d) es seguido del paso e) síntesis de polímeros que
tienen todo o parte de la secuencia determinada y/o de las
variaciones de la misma.
11. Polímero producido a través del procedimiento
de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde al menos
una parte es complementaria de al menos una parte de la
plantilla.
12. Utilización de un polímero producido a través
del procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10,
como fármaco, como ligando específico de receptor en química
analítica o para su utilización en el desarrollo de separaciones en
industrias de biotecnología, farmacéuticas o de alimentación.
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