ES2239788T3 - Inhibidores de la enzima de conversion de la interleuquina-1-beta. - Google Patents
Inhibidores de la enzima de conversion de la interleuquina-1-beta.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A NUEVAS CLASES DE COMPUESTOS QUE SON INHIBIDORES DE LA ENZIMA DE CONVERSION DE LA INTERLEUQUINA - 1 BE (ECI). ESTA INVENCION SE REFIERE IGUALMENTE A COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE COMPRENDEN TALES COMPUESTOS. LOS COMPUESTOS Y COMPOSICIONES FARMACEUTICAS DE ESTA INVENCION ESTAN PARTICULARMENTE BIEN ADECUADOS PARA INHIBIR LA ACTIVIDAD DE LA ECI Y, EN CONSECUENCIA, PUEDEN UTILIZARSE CONVENIENTEMENTE COMO AGENTES CONTRA LAS ENFERMEDADES MEDIADAS POR LA INTERLEUQUINA - 1 - (IL - 1), LA APOPTOSIS, EL FACTOR DE INDUCCION DEL INTERFERON - GA - (IGIF), EL INTERFERON - GA (IFN - GA ), ENFERMEDADES POR EXCESO DE INGESTA DE ALCOHOL EN LA DIETA, O ENFERMEDADES VIRALES, INCLUIDAS ENFERMEDADES INFLAMATORIAS, ENFERMEDADES AUTOINMUNES, TRASTORNOS DESTRUCTIVOS DEL HUESO, TRASTORNOS PROLIFERATIVOS, ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y ENFERMEDADES DEGENERATIVAS. LA INVENCION SE REFIERE IGUALMENTE A PROCEDIMIENTOS PARA INHIBIR LA ACTIVIDAD DE LA ECI Y DISMINUIR LA PRODUCCION DE IGIF YLA PRODUCCION DE IFN - GA , Y PROCEDIMIENTO PARA TRATAR LAS ENFERMEDADES MEDIADAS POR LA INTERLEUQUINA 1, LA APOPTOSIS Y EL INTERFERON - GA , UTILIZANDOSE LOS COMPUESTOS Y COMPOSICIONES DE LA INVENCION. LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE IGUALMENTE A PROCEDIMIENTOS PARA PREPARAR LOS COMPUESTOS QUE SE EXPONEN EN LA MISMA.
Description
Inhibidores de la enzima de conversación de la
interleuquina-1-\beta.
La presente invención se refiere a una nueva
clase de compuestos que son inhibidores de la enzima de conversión
de la interleuquina-\beta ("ICE"). Esta
invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que
contienen estos compuestos. Los compuestos y las composiciones
farmacéuticas de esta invención son particularmente adecuados para
inhibir la actividad ICE y consecuentemente, pueden ser utilizados
ventajosamente como agentes contra las enfermedades mediadas por
interleuquina-1 ("IL-1"),
apoptosis, factor de inducción de
interferón-\gamma (IGIF),
interferón-\gamma
("IFN-\gamma"), enfermedades por exceso de
ingesta de alcohol en la dieta, o enfermedades virales, incluyendo
enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, enfermedades
destructivas del hueso, enfermedades proliferativas, enfermedades
infecciosas y enfermedades degenerativas. Esta invención también se
refiere a métodos para inhibir la actividad ICE y para disminuir la
producción de IGIF y la producción de IFN-\gamma,
y a métodos para tratar enfermedades mediadas por
interleuquina-1, apoptosis e
interferón-\gamma, utilizando los compuestos y las
composiciones de esta invención. La invención también se refiere a
métodos para preparar los compuestos de esta invención.
La interleuquina 1 ("IL-1")
es una proteína importante pro-inflamatoria e
inmunorreguladora, que estimula la diferenciación y la proliferación
de fibroblastos, la producción de prostaglandinas, colagenasa y
fosfolipasa por las células sinoviales y los condrocitos, la
degranulación de los basófilos y los eosinófilos y la activación de
los neutrófilos. Oppenheim, J.H. et al., Immunology
Today, 7, pag. 45-56 (1986). Como tal, está
implicada en la patogénesis de enfermedades inflamatorias agudas y
crónicas y de enfermedades autoinmunes. Por ejemplo, en la artritis
reumatoide, la IL-1 es tanto un mediador de los
síntomas inflamatorios como de la destrucción del proteoglicano del
cartílago de las articulaciones afectadas. Word, D.D. et al.
Arthritis Rheum., 26, pag. 975 (1983); Pettipher, E.J., et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 71, pag. 295 (1986);
Arend, W.P. y Dayer, J.M., Arthritis Rheum., 38, pag. 151
(1995). La IL-1 es también un potente agente de
resorción ósea. Jandiski, J.J., J. Oral Path., 17, pag. 145
(1988); Dewhirst, F.E. et al., J. Immunol., 8, pag.
2562 (1985). También se la denomina alternativamente como "factor
de activación de osteoclastos" en enfermedades destructivas del
hueso, tales como la artrosis y el mieloma múltiple. Bataille, R.
et al., Int. J. Clin. Lab. Res., 21(4), pag.
283 (1982). En ciertas enfermedades proliferativas, tales como la
leucemia mieloide aguda y el mieloma múltiple, la
IL-1 puede promover el crecimiento y la adhesión de
las células tumorales. Bani, M.R., J. Natl. Cancer Inst., 83,
pag. 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F., Cancer
Res., 54, pag. 2667 (1994). En estas enfermedades, la
IL-1 también estimula la producción de otras
citoquinas, tales como IL-6, que puede modular el
desarrollo tumoral (Tartour et al., Cancer Res., 54,
pag. 6243 (1994). La IL-1 es producida
principalmente por los monocitos de sangre periférica como parte de
la respuesta inflamatoria, y existe en dos formas agonistas
diferentes, la IL-1\alpha y la
IL-1\beta. Mosely, B.S. et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. U.S.A., 84, pag. 4572-4576
(1987); Lonnerman, G. et al., Eur. J. Immunol., 19,
pag. 1531-1536 (1989).
La IL-1\beta se sintetiza como
un precursor biológicamente inactivo, pIL-1\beta.
La pIL-1\beta carece de la secuencia líder
convencional y no es procesada por una peptidasa de señal. March,
C.J., Nature, 315, pag. 641-647 (1985). En su
lugar, la pIL-1\beta se escinde mediante la enzima
de conversión de la IL-1\beta ("ICE"), entre
los residuos de Asp-116 y Ala-117,
para producir el fragmento C-terminal biológicamente
activo, encontrado en suero y tejido sinovial. Sleath, P.R., et
al., J. Biol. Chem., 285, pag.
14526-14528 (1992); Howard, A.D. et al.,
J. Immunol., 147, pag. 2964-2969 (1991). La
ICE es una proteasa de cisteína localizada primariamente en
monocitos. Convierte al precursor de la IL-1\beta
en su forma madura. Black, R.A. et al., FEBS Lett.,
247, pag. 386-390 (1989); Kostura M.J. et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86, pag.
5227-5231 (1989). El procesamiento por la ICE
también es necesario para el trasporte de la
IL-1\beta madura a través de la membrana
celular.
La ICE, o sus homólogos, también parecen estar
implicados en la regulación de la muerte celular programada o
apoptosis. Yuan, J. et al., Cell, 75, pag.
641-652 (1993); Miura, M. et al.,
Cell, 75, pag. 653-660 (1993);
Nett-Fiordalisi, M.A. et al., J. Cell
Biochem., 178, pag. 117 (1993). En particular, se piensa que la
ICE o los homólogos de la ICE están asociados con la regulación de
la apoptosis en las enfermedades neurodegenerativas, tales como las
enfermedades de Alzheimer y Parkinson. Marx, J. y Baringa, M.,
Science, 259, pag. 760-762 (1993);
Gagliardini, V. et al., Science, 263, pag.
826-828 (1994). Las aplicaciones terapéuticas de la
inhibición de la apoptosis pueden incluir el tratamiento de la
enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, el accidente
cerebro-vascular, el infarto de miocardio, la
atrofia espinal, y el envejecimiento.
Se ha demostrado que la ICE media la apoptosis
(muerte celular programada) en ciertos tipos de tejidos. Séller, H.,
Science, 267, pag. 1445 (1995); Whyte, M. y Evan, G.,
Nature, 376, pag.17 (1995); Martin, S.J. y Green. D.R.,
Cell, 82, pag. 349 (1995); Ainemri, E.S., et al.,
J. Biol. Chem., 270, pag. 4312 (1995); Yuan, J. Curr.
Opin. Cell Biol.,7, pag. 211 (1995). Un ratón transgénico con
una interrupción del gen de la ICE, es deficiente en la apoptosis
mediada por Fas (Kuida, K. et al., Science, 267, pag.
2000 (1995)). Esta actividad de la ICE es diferente de su papel como
enzima de procesamiento de pro-IL1\beta. Es
posible que en determinados tipos de tejido, la inhibición de la ICE
pueda no afectar a la secreción de IL-1\beta
madura, pero pueda inhibir la apoptosis.
La ICE enzimáticamente activa se ha descrito
previamente como un heterodímero compuesto por dos subunidades, la
p20 y la p10 (peso molecular de 20 kDa y de 10 kDa,
respectivamente). Estas subunidades se derivan de una proenzima de
45 kDa (p45), a través de una forma p30, a través de un mecanismo de
activación que es autocatalítico. Thornberry, N.A. et al.,
Nature, 356, pag. 768-774 (1992). La
proenzima ICE se ha dividido en varios dominios funcionales: un
pro-dominio (p14), una subunidad p22/20, un
enlazador polipeptídico y una subunidad p10. Thornberry,
et al., arriba; Casano et al., Genomics,
20, pag. 474-481 (1994).
La p45 de longitud completa se ha caracterizado
por su secuencia de cDNA y de aminoácidos. Solicitudes de patentes
PCT WO 91/15577 y WO 94/00154. También se conocen las secuencias de
cDNA y de aminoácidos de la p20 y la p10. Thornberry et
al., arriba. También se han clonado y secuenciado las ICE
murina y de rata. Estas tienen elevada homología de secuencias de
aminoácidos y de ácidos nucleicos con la ICE humana. Millar, D.K.
et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, pag.
133-148 (1993); Molineaux, S.M. et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90, pag.
1809-1813 (1993). La estructura tridimensional de la
ICE se ha determinado mediante cristalografía de rayos X de
resolución atómica. Wilson, K.P. et al., Nature, 370,
pag. 270-275 (1994). La enzima activa existe como un
tetrámero de dos subunidades p20 y dos p10.
Adicionalmente, existen homólogos humanos de la
ICE, con similitudes de secuencia en la regiones del lugar activo de
las enzimas. Tales homólogos incluyen TX (o
ICE_{rel-II} o ICH-2) (Faucheu
et al., EMBO J., 14, pag. 1914 (1995); Kamans J. et
al., J. Biol. Chem., 270, pag. 15250 (1995); Nicholson
et al., J. Biol. Chem., 270, pag. 15870 (1995)), TY (o
ICE_{rel-III}) (Nicholson et al., J.
Biol. Chem., 270, pag. 15870 (1995); ICH-1 (o
Nedd-2) (Wang, L. et al., Cell, 78,
pag. 739 (1994)), MCH-2.
(Fernandes-Alnmerri, T. et al., Cancer
Res., 55, pag. 2737 (1995), CPP32 (o YAMA o apopaína)
(Fernandes-Alnmerri, T., et al., J. Biol.
Chem., 269, pag. 30761 (1994); Nicholson, D.W., et al.,
Nature, 375, pag. 37 (1995)), y CMH-1 (o
MCH-3) (Lippke, et al., J. Biol.
Chem., (1995); Fernández-Alnmerri, T., et
al., Cancer Res., (1995)). Cada uno de estos homólogos de
la ICE, así como la ICE por si misma, es capaz de inducir apoptosis
cuando se sobreexpresa en líneas celulares trasfectadas. La
inhibición de uno o más de estos homólogos con el inhibidor de la
ICE peptidilo
Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona,
da como resultado la inhibición de la apoptosis en células primarias
o en líneas celulares. Lazebnik et al., Nature, 371,
pag. 346 (1994). Los compuestos descritos aquí son también capaces
de inhibir uno o más homólogos de la ICE. De este modo, estos
compuestos pueden utilizarse para inhibir la apoptosis en tipos de
tejidos que contienen homólogos de la ICE.
El factor de inducción de interferón gamma (IGIF)
es un polipéptido de aproximadamente 18 kDa que estimula la
producción de interferón gamma (IFN-\gamma) por
las células T. El IGIF es producido por las células de Kupffer
activadas y por los macrófagos in vivo, y se exporta de
dichas células tras estimulación por endotoxina. Así, un compuesto
que disminuya la producción del IGIF podrá ser útil como inhibidor
de dicha estimulación de células T, que a su vez reducirá los
niveles de producción de IFN-\gamma por aquellas
células.
El IFN-\gamma es una citoquina
con efectos inmunomoduladores en una variedad de células inmunes. En
particular, el IFN-\gamma está implicado en la
activación de los macrófagos y en la selección de células Th1
(Belardelli, F. APMIS, 103, pag. 161 (1995)). El
IFN-\gamma ejerce sus efectos en parte modulando
la expresión de genes a través de las vías de STAT y de IRF
(Schindler, C y Damell, J.E., Ann. Rev. Biochem., 64, pag.
621 (1995); Taniguchi, T., J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121,
pag. 516 (1995)).
Los ratones que carecen de
IFN-\gamma o de su receptor tienen múltiples
defectos en la función de las células inmunes y son resistentes al
shock endotóxico (Huang, S et al., Science, 259, pag.
1742 (1993); Dalton, D. et al., Science, 259, pag.
1739 (1993); Car, B.D. et al., J. Exp. Med., 179, pag.
1437 (1994)). Junto con la IL-12, el IGIF parece ser
un potente inductor de la producción de IFN-\gamma
por las células T (Okamura, H. et al., Infection and
Immunity, 63, pag. 3966 (1995); Okamura, H. et al.,
Nature, 378, pag. 88 (1995); Ushio, S. et al., J.
Immunol., 156, pag. 4274 (1996)).
Se ha demostrado que el
IFN-\gamma contribuye a la patología asociada con
una variedad de enfermedades y alteraciones inflamatorias,
infecciosas y autoinmunes. Así, los compuestos capaces de disminuir
la producción de IFN-\gamma podrían ser útiles
para aminorar los efectos de las patologías relacionadas con
IFN-\gamma.
El IGIF se sintetiza como una proteína
precursora, denominada "pro-IGIF".
Recientemente, la ICE y otros miembros de la familia
ICE/CED-3 se han asociado con la conversión de
pro-IGIF a IGIF o a la producción de
IFN-\gamma in vivo (véase la solicitud de
patente PCT WO 97/22619, que se incorpora aquí mediante
referencia).
Según esto, las composiciones y métodos capaces
de regular la conversión de pro-IGIF en IGIF podrían
ser útiles para disminuir la producción de IGIF e
IFN-\gamma in vivo, y de esta manera
aminorar los efectos nocivos de estas proteínas que contribuyen a
enfermedades y alteraciones humanas.
Los inhibidores de la ICE representan una clase
de compuestos útiles para el control de la inflamación o la
apoptosis, o ambos. Se han descrito inhibidores péptido y peptidilo
de la ICE. Solicitudes de patente PCT NO 91/15577; WO 93/05071; WO
93/09135; WO 93/14777 y WO 93/16710; y solicitud de patente Europea
0 547 699. Se ha observado que tales inhibidores petidilo de la ICE
bloquean la producción de IL-1\beta en un modelo
murino de inflamación (vide infra), y suprimen el crecimiento de las
células de leucemia in vitro (Estrov et al.,
Blood, 84, pag. 38Qa (1994)). Sin embargo, debido a su
naturaleza peptídica, tales inhibidores se caracterizan típicamente
por propiedades farmacológicas no deseables, tales como una pobre
penetración y actividad celular, pobre absorción oral, pobre
estabilidad y rápido metabolismo. Plattner, J.J. y Norbeck, D.W., en
Drug Discovery Technologies, Clark, C.R. y Moos, W.H., Eds.
(Ellis Horwood, Chichester, England, 1990), pag.
92-126. Esto ha impedido su desarrollo como fármacos
efectivos.
También se ha descrito que compuestos no
peptidilos inhiben la ICE in vitro. Solicitud de patente PCT
WO 95/26958; Patente de EE.UU. 5.552.400; Dolle et al., J.
Med. Chem., 39, pag. 2438-2440 (1996). Sin
embargo, no está claro si estos compuestos tienen los perfiles
farmacológicos apropiados para ser útiles terapéuticamente.
Adicionalmente, los métodos actuales para la
preparación de tales compuestos no son ventajosos. Estos métodos
utilizan hidruro de tributiltina, un reactivo tóxico, sensible a la
humedad. Así, estos métodos son inconvenientes de llevar a cabo,
conllevan un riesgo para la salud, y crean problemas de eliminación
de residuos tóxicos. Además, es difícil purificar los compuestos
preparados por estos métodos. Un método preferido para preparar
compuestos, tales como los inhibidores de la ICE de esta invención,
se ha descrito en la solicitud de patente PCT WO 97/22619, que se
incorpora aquí mediante referencia.
Según esto, existe la necesidad de compuestos que
puedan eficazmente inhibir la acción de la ICE in vivo, para
utilizarlos como agentes para prevenir y tratar formas agudas y
crónicas de enfermedades mediadas por IL-1,
enfermedades mediadas por apoptosis, IGIF o
IFN-\gamma, así como enfermedades inflamatorias,
autoinmunes, de destrucción ósea, proliferativas, infecciosas o
degenerativas. También existe la necesidad de métodos para preparar
estos compuestos.
La presente invención proporciona nuevas clases
de compuestos, y sus derivados farmacéuticamente aceptables, que son
útiles como inhibidores de la ICE. Estos compuestos pueden
utilizarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos o
profilácticos, tales como antibióticos, inmunomoduladores u otros
agentes anti-inflamatorios, para el tratamiento o la
profilaxis de enfermedades mediadas por IL-1,
apoptosis, IGIF o IFN-\gamma. Según una
realización preferida, los compuestos de esta invención son capaces
de unirse a lugares activos de la ICE, e inhibir la actividad de tal
enzima. Adicionalmente, tienen una potencia celular mejorada, una
farmacocinética mejorada, y/o una biodisponibilidad oral mejorada
comparada con los inhibidores peptidilo de la ICE.
Es un objetivo principal de esta invención el
proporcionar una nueva clase de compuestos que son inhibidores de la
ICE, representados por la fórmula:
en la que se describen aquí varios
sustitutos.
Es un objetivo más de esta invención proporcionar
nuevos procesos para preparar los compuestos de esta invención y sus
compuestos relacionados.
Para que la invención aquí descrita sea más
completamente entendida, se incluye la siguiente descripción
detallada.
Las siguientes abreviaciones y definiciones se
utilizan a lo largo de toda la solicitud.
AC_{2}O anhídrido acético
n-Bu
normal-butilo
DMF dimetilformamida
DIEA N,N-disopropiletilamina
EDC Hidrocloruro de
1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
Et_{2}O dietil-éter
EtOAc etil-acetato
Fmoc
9-fluorenilmetioxicarbonilo
HBTU hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N,N'-tetrametiluronio
HOBT hidrato de
1-hidroxibenzotriazol
MeOH metanol
TFA ácido trifluoroacético
Los términos "HBV", "HCV" y "HGV"
se refieren al virus de la hepatitis B, al virus de la hepatitis C y
al virus de la hepatitis G respectivamente.
El termino "K_{1}" se refiere a una medida
numérica de la efectividad de un compuesto para inhibir la actividad
de una enzima diana tal como la ICE. Los valores menores de K_{1}
reflejan una mayor efectividad. El valor K_{1} se deriva de hacer
coincidir un dato de tasa determinado experimentalmente a una
ecuación de cinética enzimática (véase Segel, I.H. Enzyme
Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
La expresión "factor de inducción de interferón
gamma", o "IGIF", se refiere a un factor que es capaz de
estimular la producción endógena de
IFN-\gamma.
La expresión "inhibidor de la ICE" se
refiere a un compuesto que es capaz de inhibir uno o más enzimas
seleccionados de un grupo que consiste en ICE y homólogos de ICE. La
inhibición de la ICE puede determinarse utilizando los métodos
descritos e incorporados aquí mediante referencia. Los expertos en
la técnica se darán cuenta de que un inhibidor de la ICE in
vivo no es necesariamente un inhibidor de la ICE in
vitro. Por ejemplo, una forma de pro-fármaco de
un compuesto, típicamente demuestra poca o ninguna actividad en
ensayos in vitro. Tales formas de
pro-fármacos pueden alterarse mediante procesos
metabólicos u otros procesos bioquímicos en el paciente, para
proporcionar un inhibidor de la ICE in vivo.
El término "citoquina" se refiere a una
molécula que media la interacción entre células.
El término "condición" se refiere a
cualquier enfermedad, alteración o efecto que produce consecuencias
biológicas deletéreas en un sujeto.
El término "sujeto" se refiere a un animal,
o a una o más células derivadas de un animal. Preferiblemente, el
animal es un mamífero, más preferiblemente un ser humano. Las
células pueden estar en cualquier forma, incluyendo, pero no
limitándose a células retenidas en tejido, grupos celulares, células
inmortalizadas, células transfectadas y trasformadas, y células
derivadas de un animal que ha sido alterado física o
fenotípicamente.
El término "paciente" como se utiliza en
esta solicitud se refiere a cualquier mamífero, preferiblemente un
ser humano.
El término "alquilo" se refiere a una cadena
lineal o ramificada, de hidrocarburo alifático saturado, que
contiene de 1 a 6 átomos de carbono.
El término "alquenilo" se refiere a una
cadena lineal o ramificada de hidrocarburo no saturado, que contiene
de 2 a 6 átomos de carbono.
El término "cicloalquilo" se refiere a un
sistema en anillo mono o policíclico, que puede opcionalmente
contener puentes no saturados en el sistema de anillos. Los ejemplos
incluyen ciclohexilo, adamantilo y norbornilo.
El término "arilo" se refiere a un sistema
de anillo mono o policíclico, que contiene 6, 10, 12 ó 14 carbonos,
en los que al menos un anillo del sistema de anillos es aromático.
Los grupos arilo de esta invención están opcionalmente sustituidos
con R^{17} de forma única o múltiple. Ejemplos de sistemas de
anillos de arilo incluyen fenilo, naftilo, y tetrahidronaftilo,
El término "heteroarilo" se refiere a
sistemas de anillo mono o policíclico que contienen de 1 a 15 átomos
de carbono y de 1 a 4 heteroátomos, y en el que al menos un anillo
del sistema de anillos es aromático. Los heteroátomos son azufre,
nitrógeno u oxígeno. Los grupos heteroarilos de esta invención están
opcionalmente sustituidos con R^{17} de forma única o
múltiple.
El término "heterocíclico" se refiere a
sistemas de anillo mono o policíclicos, que contienen de 1 a 15
átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos, en los que el sistema de
anillo mono o policíclico puede contener opcionalmente puentes no
saturados pero que no es aromático. Los heteroátomos son
independientemente azufre, nitrógeno u oxíge-
no.
no.
El término "alquilarilo" se refiere a un
grupo alquilo, en el que un átomo de hidrógeno del grupo alquilo es
reemplazado por un radical arilo.
El término "alquilheteroarilo" se refiere a
un grupo alquilo, en el que un átomo de hidrógeno del grupo alquilo
es replicado por un radical heteroarilo.
El término "sustituto" se refiere al
reemplazo de un átomo de hidrógeno en un compuesto con un grupo
sustituto.
La expresión "cadena lineal" se refiere a
una cadena contigua sin brazos, de átomos unidos covalentemente. La
cadena lineal puede ser sustituida, pero estos sustitutos no forman
parte de la cadena lineal.
El término "paciente" como se utiliza en
esta solicitud se refiere a cualquier mamífero, preferiblemente un
ser humano.
En las fórmulas químicas, los paréntesis, como
aquí se utilizan, denotan conectividad en las moléculas o los
grupos. En particular, los paréntesis se utilizan para indicar: 1)
que más de un átomo o un grupo está unido a un átomo particular; ó
2) un punto de ramificación (es decir, un átomo inmediatamente antes
de un paréntesis abierto está unido tanto al átomo o grupo en el
paréntesis, como al átomo o grupo inmediatamente después del cierre
del paréntesis). Un ejemplo del primer uso es
"-N(alquilo)_{2}", que indica que dos grupos
alquilo se unen a un átomo N. Un ejemplo del segundo uso es
"-C(O)NH_{2}", que indica un grupo carbonilo y
un grupo amino ("NH_{2}"), ambos unidos al átomo de carbono
indicado. Un grupo "-C(O)NH_{2}" puede
representarse de otras maneras, incluyendo la siguiente
estructura:
Otras definiciones se establecen en la
especificación, cuando son necesarias.
Los compuestos de una realización (A) de esta
invención, son aquellos de la fórmula (I):
en la
que:
Y es
siempre que R^{5} sea -OH,
entonces Y también puede
ser:
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo del anillo es opcionalmente reemplazado por
-R^{4-},
R^{1} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo, o
-alquilheteroarilo;
R^{2} es un puente, -C(O)-,
-C(O)C(O)-, -S(O)_{2}-,
-OC(O)-, -N(H)C(O)-,
-N(H)S(O)_{2}-,
-N(H)C(O)C(O)-,
-CH=CHC(O)-, -OCH_{2}C(O)-,
-N(H)CH_{2}C(O)-,
-N(R^{19})C(O)-,
-N(R^{19})S(O)_{2},
-N(R^{19})C(O)C(O)-, o
-N(R^{19})CH_{2}C(O)-, siempre que R^{2}
no es un puente, entonces R^{2} está conectado al NH unido al
anillo de 7 miembros a través de un carbonilo o un sulfonilo;
R^{3} es -arilo, -heteroarilo, -cicloalquilo,
-alquilo, N-(alquilo)_{2},
R^{4} es -NH_{2}, o
-N(H)C(O)H,
R^{5} es -OH, OR^{8}, o
-N(H)OH;
R^{6} es -H, -CH_{2}OR^{9},
-CH_{2}SR^{10}, -CH_{2}N(H)R^{9},
-CH_{2}N(R^{9})R^{12},
-C(H)N_{2}, -CH_{2}F, -CH_{2}Cl,
-C(O)N(R^{11})R^{12}, -R^{13}, o
-R^{14-},
R^{8} es -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilhetrociclo;
R^{9} es -H, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-P(O)R^{15}R^{16};
R^{10} es -alquilarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-alquilheteroarilo;
cada uno de R^{11} y R^{12} son
independientemente -H, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{13} es -alquilarilo, -alquenilarilo,
-alquinilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{14} es
en la que cualquier hidrógeno unido
a (i) es opcionalmente reemplazado con R^{17} y cualquier
hidrógeno unido a (ii) es opcionalmente reemplazado con R^{17},
R^{18} o
R^{20};
cada uno de R^{15} y R^{16} es
independientemente -H, -OH, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, -Oalquilo, -Oarilo,
-Oheteroarilo, -Oalquilarilo, u -Oalquilheteroarilo;
R^{17} es -ON, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2},
-CN, NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2},
-N(H)C(O)H,
-N(H)C(O)NH_{2}, -SO_{2}NH_{2},
-C(O)H, -alquilo, -cicloalquilo, -perfluoroalquilo,
-O-alquilo, N(H)alquilo,
-N(alquilo)_{2}, -CO_{2}alquilo,
-C(O)N(H)alquilo,
-C(O)N(alquilo)_{2},
-N(H)C(O)alquilo,
-N(H)C(O)N(H)alquilo,
-N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S(O_{2})N(H)alquilo,
-S(O_{2})N(alqui-
lo)_{2}, -S-alquilo, -S(O_{2})alquilo, o -C(O)alquilo;
lo)_{2}, -S-alquilo, -S(O_{2})alquilo, o -C(O)alquilo;
R^{18} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, O-arilo,
-O-heteroarilo, -O-alquilarilo,
-O-alquilheteroarilo, -N(H)arilo,
-N(arilo)_{2}, -N(H)heteroarilo,
-N(heteroarilo)_{2}, -N(H)alquilarilo,
-N(alquilarilo)_{2},
-N(H)alquilheteroarilo,
-N(alquilheteroarilo)_{2}, -S-arilo,
-S-heteroarilo, -S-alquilarilo,
-S-alquilheteroarilo, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -CO_{2}arilo,
-CO_{2}heteroarilo, -CO_{2}alquilarilo,
-CO_{2}alquilheteroarilo,
-C(O)N(H)arilo, -C(O)N(arilo)_{2}, -C(O)N(H)heteroarilo, -C(O)N(heteroarilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilarilo, -C(O)N(alquilarilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}arilo, -S(O)_{2}heteroarilo, -S(O)_{2}alquilarilo,
-S(O)_{2}alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo,
-N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2},
-N(H)C(O)N(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}:
-C(O)N(H)arilo, -C(O)N(arilo)_{2}, -C(O)N(H)heteroarilo, -C(O)N(heteroarilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilarilo, -C(O)N(alquilarilo)_{2}, -C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}arilo, -S(O)_{2}heteroarilo, -S(O)_{2}alquilarilo,
-S(O)_{2}alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo,
-N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2},
-N(H)C(O)N(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}:
R^{18} es -H, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo;
R^{20} es -alquil-R^{18};
m es 0 ó 1; y
X es O o S.
Los compuestos de otra realización (B) de esta
invención son los de la fórmula (II):
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que Y
es:
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\vskip1.000000\baselineskip
R^{7} es -C(O)alquilo,
-C(O)cicloalquilo, -C(O)alquenilo,
-C(O)alquilarilo, C(O)alquilheteroarilo,
-C(O)heterociclo, o
-C(O)alquilheterociclo; y los otros sustitutos son
como los descritos previamente.
Los compuestos preferidos de las realizaciones
(A) y (B) son aquellos en los que:
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier anillo de átomos es reemplazado opcionalmente por
R^{4}.
Los compuestos más preferidos de las
realizaciones (A) y (B) son aquellos en los que:
\newpage
Y es:
C es benzo,
R^{1} es -fenilo, -naftilo, o -isoquinolinilo,
en el que R^{17} es -OH, -NH_{2}, -Cl, -F, -Oalquilo, o
-N(alquilo)_{2};
R^{2} es -C(O)-,
-S(O)_{2}-, -C(O)C(O)-, o
CH_{2}C(O)-:
R^{3} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -fenilo,
-2-piridinilo, -3-piridinilo,
-4-piridinilo, o -tiazolilo;
R^{5} es -OH;
R^{6} es:
- -H; o
- -R^{14}, en el que X es O, siempre que cuando -R^{14} es (i), R^{17} es -Oalquilo, -F o -Cl, y siempre que cuando -R^{14} es (ii), R^{18} es -arilo, en el que arilo es fenilo;
R^{7} es -C(O)alquilo;
R^{8} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -ciclopentilo, -fenetilo o
-bencilo;
X es O; o
m es 0.
Los compuestos preferidos de la realización (A)
de esta invención incluyen, pero no se limitan a:
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Actualmente preferimos compuestos de las
realizaciones (C) y (D). Los compuestos de la realización (C) de
esta invención son aquellos de la fórmula (III):
en la
que
Y es
siempre que si R^{5} es -OH,
entonces Y puede ser
también:
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo de anillo es opcionalmente reemplazado por
-R^{4},
R^{1} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo, o
-alquilheteroarilo;
R^{2} es un puente, -C(O)-,
-C(O)C(O)-, -S(O)_{2}-,
-OC(O)-, -N(H)C(O)-,
-N(H)S(O)_{2}-,
-N(H)C(O)C(O)-,
-CH=CHC(O)-, -OCH_{2}C(O)-,
-N(H)CH_{2}C(O)-,
-N(R^{19})C(O)-,
-N(R^{19})S(O)_{2}-,
-N(R^{19})C(O)C(O)-,
-N(R^{19})CH_{2}C(O)-, o
-C(O)C(=NOR^{11})-, siempre que R^{2} no sea un
puente, R^{2} está unido al anillo de siete miembros del grupo NH,
a través de un carbonilo o un sulfonilo;
R^{3} es -arilo, -heteroarilo, -cicloalquilo,
-alquilo, -N(alquilo)_{2},
\vskip1.000000\baselineskip
R^{4} es -NH_{2} o
-N(H)C(O)H,
R^{5} es -OH, OR^{8}, o
-N(H)OH;
R^{6} es -H, -CH_{2}OR^{9},
-CH_{2}SR^{10}, -CH_{2}NHR^{9},
-CH_{2}N(R^{8})R^{12}, -CHN_{2}, -CH_{2}F,
-CH_{2}Cl, -C(O)N(R^{11})R^{12},
-R^{13}, o R^{14};
R^{8} es -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo;
R^{9} es -H, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-P(O)R^{15}R^{16};
R^{10} es -alquilarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-alquilheteroarilo;
cada uno de R^{11} y R^{12} es
independientemente -H, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{13} es -alquilarilo, -alquenilarilo,
-alquinilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{14} es
en las que cualquier hidrógeno
unido a (i) es opcionalmente reemplazado con R^{17} y cualquier
hidrógeno unido a (ii) es opcionalmente reemplazado con R^{17},
R^{18} o
R^{20};
cada uno de R^{15} y R^{16} es
independientemente -H, -OR, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, -Oalquilo, -Oarilo,
-Oheteroarilo, -Oalquilarilo, u -Oalquilheteroarilo;
R^{17} es -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2},
-CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2},
-N(H)C(O)H,
-N(H)C(O)NH_{2},
-S(O)_{2}NH_{2}, -C(O)H, -alquilo,
-cicloalquilo, -perfluoroalquilo, -O-alquilo,
-N(H)alquilo, -N(alquilo)_{2},
-CO_{2}alquilo, -C(O)N(H)alquilo,
-C(O)N(alquilo)_{2},
-N(H)C(O)alquilo,
-N(H)C(O)N(H)alquilo,
-N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-SO_{2}N(H)alquilo,
-S(O)_{2}N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S(O)_{2}alquilo, o
-C(O)alquilo;
R^{18} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -O-arilo,
-O-heteroarilo, -O-alquilarilo,
-O-alquilheteroarilo, -N(H)arilo,
-N(arilo)_{2}, -N(H)heteroarilo,
-N(heteroarilo)_{2}, -N(H)alquilarilo,
-N(alquilarilo)_{2},
-N(H)alquilheteroarilo,
-N(alquilheteroarilo)_{2}, -S-arilo,
-S-heteroarilo, -S-alquilarilo,
-S-alquilheteroarilo, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -CO_{2}arilo,
-CO_{2}heteroarilo, -CO_{2}alquilarilo,
-CO_{2}alquilheteroarilo,
-C(O)N(H)arilo,
-C(O)N(arilo)_{2},
-C(O)N(H)heteroarilo,
-C(O)N(heteroarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilarilo,
-C(O)N(alquilarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heteroarilo, -S(O)_{2}-alquilarilo, -S(O)_{2}-alquilheteroarilo, -S(O)_{2}NH-arilo, -S(O)_{2}NH-heteroarilo, -S(O)_{2}NH-alquilarilo, -S(O)_{2}NH-alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(H)(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
-C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heteroarilo, -S(O)_{2}-alquilarilo, -S(O)_{2}-alquilheteroarilo, -S(O)_{2}NH-arilo, -S(O)_{2}NH-heteroarilo, -S(O)_{2}NH-alquilarilo, -S(O)_{2}NH-alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(H)(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
R^{19} es -H, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo;
R^{20} es
-alquilo-R^{18};
m es 0 ó 1; y
X es O o S.
Los compuestos de la realización (D) de esta
invención son los de la fórmula (IV):
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en la que Y
es:
R^{7} es -C(O)alquilo,
-C(O)cicloalquilo, -C(O)alquenilo,
-C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo,
-C(O)heterociclo, o
-C(O)alquilheterociclo; y los otros sustitutos son
como los definidos previamente.
En las realizaciones anteriores, R^{8} y
R^{19} se seleccionan también independientemente de heterociclilo
o alquilcicloalquilo.
En las realizaciones (B) y (D) Y también se
selecciona de:
Los compuestos preferidos de las realizaciones
(C) y (D) son aquellos en los que:
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo de anillo es opcionalmente reemplazado por
R^{4}.
Los compuestos más preferidos de las
realizaciones (C) y (D) son aquellos en los que:
Y es
C es benzo;
R^{1} es -fenilo, -naftilo, o -isoquinolinilo,
en los que R^{17} es -OH, -NH_{2}, -Cl, -F, -Oalquilo, o
-N(alquilo)_{2};
R^{2} es -C(O)-,
-S(O)_{2}-, -C(O)C-(O)-, o
-CH_{2}C(O)-;
R^{3} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -fenilo,
-2-piridinilo, -3-piridinilo,
-4-piridinilo, o -tiazolilo;
R^{5} es -OH;
R^{6} es:
- -H; o
- -R^{14}, en el que X es O, siempre que cuando -R^{14} es (I), R^{17} es -Oalquilo, -F o -Cl, y siempre que cuando -R^{14} es (II), R^{18} es -arilo, en el que arilo es fenilo;
R^{7} es -C(O)alquilo;
R^{8} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -ciclopentilo, -fenetilo, o
-bencilo;
X es 0; o
m es 0.
Otros compuestos más preferidos de las
realizaciones (B) y (D) son aquellos en los que Y es
y los otros sustitutos son como los
definidos
previamente.
Los compuestos preferidos de esta invención
incluyen, pero no se limitan a:
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Otro compuesto preferido de esta invención
incluye, pero no se limita a:
Los inhibidores de la ICE de esta invención
pueden contener uno o más átomos de carbonos "asimétricos", y
así pueden ocurrir como racematos y mezclas racémicas, enantiómeros
únicos, mezclas diastereoméricas y diastereómeros individuales.
Todas esas formas isoméricas de estos compuestos se incluyen
expresamente en la presente invención. Cada carbono estereogénico
puede ser de configuración R o S. Aunque los compuestos y
construcciones específicos ejemplificados en esta solicitud pueden
representarse en una configuración estereoquímica particular,
también se incluyen los compuestos y construcciones que tienen la
estereoquímica opuesta en cualquier centro quiral dado, o sus
mezclas.
Los inhibidores de la ICE pueden opcionalmente
ser sustituidos en el carbono, el nitrógeno u otros átomos con
varios sustitutos. Cuando son sustituidos de forma múltiple, cada
sustituto puede seleccionarse independientemente de cualquier otro
sustituto, siempre que la combinación de sustitutos de cómo
resultado la formación de un compuesto estable.
Las combinaciones de sustitutos y las variaciones
incluidas en esta invención son solo aquellas que dan como resultado
la formación de compuestos estables. El término "estable", como
aquí se utiliza, se refiere a compuestos que poseen estabilidad
suficiente para permitir la fabricación y administración a un
mamífero, mediante métodos conocidos en la técnica. Típicamente,
tales compuestos son estables a temperatura de 40ºC o menos, en
ausencia de humedad u otras condiciones reactivas químicamente,
durante al menos una semana.
Los sustitutos pueden ser representados en
diversas formas. Estas diversas formas son conocidas por los
expertos, y pueden utilizarse indistintamente. Por ejemplo, un
sustituto metilo sobre un anillo fenilo puede ser representado
mediante cualquiera de las siguientes formas:
Diversas formas de sustitutos tales como metilo
se utilizan aquí indistintamente.
Los compuestos de esta invención tienen un peso
molecular menor o igual a alrededor de 700 Daltons, y más
preferiblemente alrededor de 400 y 600 Daltons. Estos compuestos
preferidos pueden ser absorbidos fácilmente en el torrente sanguíneo
de los pacientes después de la administración oral. La
disponibilidad oral hace de dichos compuestos agentes excelentes
para regímenes de tratamiento y prevención administrados por vía
oral, contra enfermedades mediadas por IL-1,
apoptosis, IGIF o IFN-\gamma.
Debe entenderse que los compuestos de esta
invención pueden existir en varias formas de equilibrio, dependiendo
de las condiciones, incluyendo selección de disolventes, pH, y otros
conocidos por los expertos en la técnica. Todas estas dichas formas
de estos compuestos están expresamente incluidas en la presente
invención. En particular, muchos de los compuestos de esta
invención, especialmente los que contienen grupos aldehído o cetona
en R_{3} y grupos de ácido carboxílico en Y, pueden tomar formas
hemicetales (o hemiacetales) o hidratadas. Por ejemplo, los
compuestos de la realización (A) toman una forma hemiacetal o
hemicetal cuando Y es:
Dependiendo de la selección de disolvente y de
otras condiciones conocidas por los expertos en la técnica, los
compuestos de esta invención pueden también tomar las formas
hidratada, aciloxi-cetal,
aceloxi-acetal, cetal, acetal o enol. Por ejemplo,
en la realización (B) los compuestos de esta invención toman formas
hidratadas cuando Y es:
y R^{8} es H; las formas
aciloxi-cetal o aciloxi-acetal
cuando Y
es:
las formas acetal cuando Y
es:
y las formas enol cuando Y
es:
Además, debe entenderse que las formas de
equilibrio de los compuestos de esta invención pueden incluir formas
tautoméricas. Todas estas dichas formas de estos compuestos están
expresamente incluidas en la presente invención.
Debe entenderse que los compuestos de esta
invención pueden ser modificados mediante funcionalidades
apropiadas, para aumentar sus propiedades biológicas selectivas.
Tales modificaciones son conocidas en la técnica e incluyen aquellas
que aumentan la penetración biológica en un sistema biológico dado
(por ejemplo, el sistema linfático, el sistema nervioso central),
aumentar su disponibilidad oral, aumentar su solubilidad y permitir
su administración mediante inyección, alterar su metabolismo y
alterar su tasa de excreción. Además, los compuestos pueden
alterarse a formas de pro-fármacos, de tal forma que
el compuesto deseado se crea en el organismo del paciente, como
resultado de la acción de procesos metabólicos u otros procesos
bioquímicos sobre el pro-fármaco. Tales formas de
pro-fármaco típicamente demuestran poca o ninguna
actividad en ensayos in vitro. Algunos ejemplos de formas de
pro-fármaco incluyen las formas cetal, acetal,
oximo, imino e hidrazona de los compuestos, que contienen grupos
cetona o aldehído, especialmente donde ocurren en el grupo R^{3}
de los compuestos de la invención. Otros ejemplos de formas de
pro-fármaco incluyen las formas
hemi-cetal, hemi-acetal,
aciloxi-cetal, aciloxi-acetal,
cetal, acetal y enol, que se describen aquí.
Los compuestos de esta invención son ligandos
excelentes para la ICE. Según esto, estos compuestos son capaces de
inhibir eventos en la enfermedades mediadas por
IL-1, apoptosis, IGIF e
IFN-\gamma, y, de esta forma, la actividad última
de esa proteína en enfermedades inflamatorias, enfermedades
autoinmunes, destrucción ósea, enfermedades proliferativas,
enfermedades infecciosas y enfermedades degenerativas. Por ejemplo,
los compuestos de esta invención inhiben la conversión del precursor
de la IL-1\beta a IL-1\beta
madura, mediante la inhibición de la ICE. Como la ICE es esencial
para la producción de IL-1 madura, la inhibición de
esta enzima bloquea efectivamente la iniciación de los efectos y
síntomas fisiológicos mediados por la IL-1, tales
como inflamación, mediante la inhibición de la producción de
IL-1 madura. Así, mediante la inhibición de la
actividad del precursor de la IL-1\beta, los
compuestos de esta invención funcionan efectivamente como
inhibidores de la IL-1.
Los compuestos de esta invención también inhiben
la conversión de pro-IGIF en IGIF activa, madura,
mediante la inhibición de la ICE. Como la ICE es esencial para la
producción de IGIF madura, la inhibición de la ICE bloquea
efectivamente la iniciación de los efectos y síntomas fisiológicos
mediados por IGIF, mediante la inhibición de la producción de IGIF
madura. La IGIF por su parte es esencial para la producción de
IFN-\gamma. La ICE de este modo bloquea
efectivamente la iniciación de los efectos y síntomas fisiológicos
mediados por IFN-\gamma, mediante la inhibición de
la producción de IGIF madura, y de esta forma, de la producción de
IFN-\gamma.
Las composiciones farmacéuticas y los métodos de
esta invención, de este modo, serán útiles para controlar la
actividad de la ICE in vivo. Las composiciones y métodos de
esta invención serán de esta forma útiles para controlar los niveles
de IL-1, IGIF o IFN-\gamma in
vivo, y para tratar o reducir el avance, la gravedad o los
efectos de las condiciones mediadas por IL-1,
apoptosis, IGIF o IFN-\gamma, incluyendo
enfermedades, alteraciones o efectos.
Según esto, una realización de esta invención
proporciona un método para disminuir la producción de la IGIF en un
sujeto, que comprende la etapa de administrar a un sujeto una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
efectiva de un inhibidor de la ICE y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
Otra realización de esta invención proporciona un
método para disminuir la producción de IFN-\gamma
en un sujeto, que comprende la etapa de administrar a un sujeto una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
efectiva de un inhibidor de la ICE y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
En otra realización, los métodos de esta
invención comprenden la etapa de administrar a un sujeto una
composición farmacéutica, que comprende un inhibidor de una proteasa
relacionada con la ICE, que es capaz de escindir la
pro-IGIF a IGIF activa, y un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Una de tales proteasas relacionadas con
la ICE es la TX, como se describió previamente. Esta invención
proporciona así métodos y composiciones farmacéuticas para controlar
los niveles de IGIF e IFN-\gamma, mediante la
administración de un inhibidor de TX.
También pueden encontrarse otras proteasas
relacionadas con la ICE capaces de procesar la
pro-IGIF en la forma activa de IGIF. De esta forma,
queda claro que los inhibidores de esas enzimas pueden ser
identificados por los expertos en la técnica, y que también se
incluyen dentro del alcance de esta invención.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención
comprenden un inhibidor de la ICE o una de sus sales
farmacéuticamente aceptables, y un vehículo, excipiente o adyuvante
farmacéuticamente aceptable. Tales composiciones pueden comprender
opcionalmente un agente terapéutico adicional. Tales agentes
incluyen, pero no se limitan a, un agente
anti-inflamatorio, un inhibidor de las
metaloproteasas de matriz, un inhibidor de la lipooxigenasa, un
antagonista de las citoquinas, un inmunosupresor, un agente
anti-cáncer, un agente anti-viral,
una citoquina, un factor de crecimiento, un inmunomodulador, una
prostaglandina o un compuesto anti hiperproliferación vascular.
Si la composición farmacéutica comprende
solamente el inhibidor de la ICE como componente activo, tales
métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administración
al sujeto de un agente adicional. Tales agentes incluyen, pero no se
limitan a, un agente anti-inflamatorio, un inhibidor
de las metaloproteasas de matriz, un inhibidor de la lipooxigenasa,
un antagonista de las citoquinas, un inmunosupresor, un agente
anti-cáncer, un agente anti-viral,
una citoquina, un factor de crecimiento, un inmunomodulador, una
prostaglandina o un compuesto anti hiperproliferación vascular.
La expresión "cantidad farmacéuticamente
efectiva" se refiere a una cantidad efectiva para tratar o
mejorar las enfermedades mediadas por IL-1,
apoptosis, IGIF o IFN-\gamma en un paciente. La
expresión "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a
una cantidad efectiva para la prevención o disminución substancial
de las enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis,
IGIF o IFN-\gamma en un paciente.
La expresión "excipiente o vehículo
farmacéuticamente aceptable" se refiere a un excipiente o
vehículo no tóxico que puede ser administrado a un paciente, junto
con un compuesto de esta invención, y que no destruye su actividad
farmacológica.
La expresión "derivado farmacéuticamente
aceptable" significa cualquier sal, éster, o sal de dicho éster
aceptables, de un compuesto de esta invención o de cualquier otro
compuesto que, tras la administración a un recipiente, es capaz de
proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de esta
invención o un metabolito activo anti-ICE o uno de
sus residuos.
Sales farmacéuticamente aceptables del compuesto
de esta invención incluyen, por ejemplo, los derivados de ácidos y
bases orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos
de ácidos adecuados incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico,
sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico,
glicólico, láctico, salicílico, succínico,
tolueno-p-sulfónico, tartárico,
acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, masónico,
naftaleno-2-sulfónico y
bencenosulfónico. Otros ácidos, tales como el oxálico, aunque no son
en si mismos farmacéuticamente aceptables, pueden utilizarse en la
preparación de sales útiles como intermediarios, para obtener los
compuestos de la invención y sus sales de adición farmacéuticamente
aceptables. Sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de
metales alcalinos (por ejemplo, sodio), de metales de tierra
alcalinos (por ejemplo magnesio), de amonio y de
N-(C_{1-4}alquilo)_{4}^{+}.
Esta invención también incluye la
"cuatemización" de grupos que contengan cualquier nitrógeno
básico de los compuestos aquí descritos. Los nitrógenos básicos
pueden ser cuatemizados con cualquiera de los agentes conocidos por
los expertos en la técnica, incluyendo, por ejemplo, haluros
alcalinos inferiores, tales como cloruros, bromuros y yoduros de
metilo, etilo, propilo y butilo; dialquil-sulfatos
incluyendo sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo;
haluros de cadena larga, tales como cloruros, bromuros y yoduros de
decilo, laurilo, miristilo y estearilo; y haluros de aralquilo
incluyendo bromuros de bencilo y fenetilo. Pueden obtenerse
productos solubles en agua o aceite o dispersables mediante dicha
cuatemización.
Los compuestos de esta invención pueden ser
empleados de una forma convencional para controlar los niveles de
IGIF e IFN-\gamma in vivo, y para tratar
enfermedades o reducir el avance o la gravedad o los efectos que son
mediados por IL-1, apoptosis, IGIF o
IFN-\gamma. Tales métodos de tratamiento, sus
niveles de dosificación y requerimientos puede seleccionarse, por
los expertos en la técnica, mediante métodos y técnicas
disponibles.
Por ejemplo, un compuesto de esta invención puede
combinarse con un adyuvante farmacéuticamente aceptable para
administración a un paciente que padece una enfermedad mediada por
IL-1, apoptosis, IGIF o
IFN-\gamma, de una forma farmacéuticamente
aceptable, y en una cantidad efectiva para aliviar la gravedad de
esa enfermedad.
Alternativamente, los compuestos de esta
invención pueden utilizarse en composiciones y métodos para tratar o
proteger a individuos contra enfermedades mediadas por
IL-1, apoptosis, IGIF o
IFN-\gamma, durante largos periodos de tiempo. Los
compuestos pueden emplearse en dichas composiciones solos o junto
con otros compuestos de esta invención de una forma consistente con
la utilización convencional de los inhibidores de la ICE en
composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, un compuesto de esta
invención puede combinarse con adyuvantes farmacéuticamente
aceptables, empleados convencionalmente en vacunas, y administrarse
en cantidades profilácticamente efectivas, para proteger a
individuos durante largos periodos de tiempo, contra enfermedades
mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF e
IFN-\gamma.
Los compuestos de esta invención pueden también
ser co-administrados con otros inhibidores de la
ICE, para aumentar el efecto de la terapia o profilaxis contra
diversas enfermedades mediadas por IL-1, apoptosis,
IGIF o
IFN-\gamma.
IFN-\gamma.
Además, los compuestos de esta invención pueden
utilizarse en combinación con agentes antiinflamatorios
convencionales o inhibidores de las metaloproteasas de matriz,
inhibidores de la lipooxigenasa y antagonistas de citoquinas
diferentes a la IL-1\beta.
Los compuestos de esta invención pueden también
administrarse en combinación con inmunomoduladores (por ejemplo
bropirimina, anticuerpos
anti-interferón-alfa
anti-humanos, IL-2,
GM-CSF, metionina encefalina,
interferón-alfa, dietilditiocarbamato, factor de
necrosis tumoral, naltrexona y EPO), con prostaglandinas, o con
agentes antivirales (por ejemplo, 3TC, polisacáridos polisulfatados,
ganciclovir, ribavirina, aciclovir, interferón alfa, trimetotrexate
y fanciclovir) o pro-fármacos de estos compuestos y
compuestos relacionados, para prevenir o combatir los síntomas de
las enfermedades mediadas por IL-1, tales como
inflamación.
Cuando los compuestos de esta invención se
administran en terapias de combinación con otros agentes, pueden
administrarse al paciente secuencialmente o concurrentemente.
Alternativamente, composiciones farmacéuticas o profilácticas según
esta invención comprenden una combinación de un inhibidor de la ICE
de esta invención y otro agente terapéutico o profiláctico.
Excipientes, adyuvantes o vehículos
farmacéuticamente aceptables, que pueden utilizarse en las
composiciones farmacéuticas de esta invención, comprenden, pero no
se limitan a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de
aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina sérica
humana, sustancias de tampón, tales como fosfatos, glicina, ácido
sórbico, sorbato potásico, mezclas de glicéridos parciales de ácidos
grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como
sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, fosfato de
hidrógeno potásico, cloruro sódico, sales de zinc, sílice coloidal,
trisilicato de magnesio, polivinil-pirrolidona,
sustancias basadas en celulosa, polietilén-glicol,
carboximetilcelulosa sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros de
bloque de polietileno o polipropileno, grasa de lana y sistemas de
liberación de fármacos auto-emulsionantes (SEDDS),
tales como \alpha-tocoferol,
polietilén-glicol 1000 sucinato, u otras matrices de
liberación poliméricas similares.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención
pueden administrarse oralmente, parenteralmente, mediante inhalación
de pulverización, tópicamente, rectalmente, bucalmente, vaginalmente
o a través de un reservorio implantado. Preferimos la administración
oral. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden
contener cualquier vehículo, excipiente o adyuvante no tóxico,
farmacéuticamente aceptable. En algunos casos, el pH de la
formulación puede ajustarse con ácidos, bases o soluciones de tampón
farmacéuticamente aceptables, para aumentar la solubilidad del
compuesto formulado o de su forma de liberación. El término
parenteral como aquí se utiliza incluye las técnicas de inyección
subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular,
intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal,
intralesional o intracraneal.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en
forma de preparación inyectable estéril, por ejemplo, como una
suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión
puede formularse según técnicas conocidas en la técnica, utilizando
agentes dispersantes o humidificantes (tales como, por ejemplo,
Tween 80), y agentes de suspensión. La preparación inyectable
estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable
estéril, en un diluyente o disolvente no tóxico, parenteralmente
aceptable, por ejemplo, como una solución en
1,3-butanedíol. Entre los vehículos y disolventes
aceptables que pueden emplearse están manitol, agua, solución de
Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. Además, se utilizan
convencionalmente aceites fijos estériles, como medio de suspensión
o disolvente. Para este propósito, puede utilizarse cualquier aceite
fijo suave, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos
grasos, tales como el ácido oleico y sus derivados glicéridos son
útiles en la preparación de inyectables, como lo son los aceites
naturales farmacéuticamente aceptables, tales como el aceite de
oliva o de castor, especialmente en sus versiones polioxietiladas.
Estas soluciones o suspensiones de aceite pueden también contener un
diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tales como los
descritos en Pharmacopeia Helvetica, Ph. Hely, o un alcohol
similar.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención
pueden administrarse oralmente, en cualquier forma de dosificación
oral aceptable, incluyendo, pero no limitándose a cápsulas, tabletas
y suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de tabletas para
administración oral, los vehículos que se utilizan comúnmente
incluyen lactosa y almidón de maíz. También son típicamente añadidos
agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para la
administración oral en forma de cápsula, diluyentes útiles incluyen
lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran oralmente
soluciones acuosas, el ingrediente activo se combina con agentes
emulsionantes o suspensotes. Si se desea, pueden añadirse ciertos
agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención
pueden también administrarse en forma de supositorios para
administración rectal. Estas composiciones pueden prepararse
mezclando un compuesto de esta invención con un excipiente adecuado
no irritante, que sea sólido a temperatura ambiente pero líquido a
la temperatura rectal, de tal forma que pueda disolverse en el recto
para liberar los componentes activos. Tales materiales incluyen,
pero no se limitan a, mantequilla de cacao, cera de abeja y
polietilén-glicoles.
La administración tópica de las composiciones
farmacéuticas de esta invención es especialmente útil cuando el
tratamiento deseado incluye áreas u órganos fácilmente accesibles
mediante aplicación tópica. Para aplicación tópica en la piel, la
composición farmacéutica debería formularse con un ungüento adecuado
que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en un
excipiente. Los excipientes para administración tópica de los
compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, aceite
mineral, petróleo líquido, petróleo blanco,
propilén-glicol, compuestos de polietileno y
polipropileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, la
composición farmacéutica puede formularse con una loción o crema
adecuada, que contiene el compuesto activo suspendido o disuelto en
un excipiente. Los excipientes adecuados incluyen, pero no se
limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato
60, cera de cetil-ésteres, alcohol cetearílico,
2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua. Las
composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser también
aplicadas tópicamente en el tracto intestinal bajo, mediante
formulaciones en supositorios rectales o en una formulación adecuada
en enema. La administración tópica con parches transdérmicos también
se incluye en esta invención.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención
pueden administrarse mediante aerosol nasal o inhalación. Tales
composiciones se preparan según técnicas bien conocidas en la
técnica de la formulación farmacéutica y pueden prepararse como
soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros
conservantes adecuados, promotores de absorción para aumentar la
biodisponibilidad, fluorocarbonos, y/o otros agentes disolventes o
dispersantes conocidos en la técnica.
Los niveles de dosis entre alrededor de 0,01 y
alrededor de 100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente
entre 0,5 y alrededor de 75 mg/kg de peso corporal por día, y más
preferiblemente entre alrededor de 1 y 50 mg/kg de peso corporal por
día del ingrediente activo del compuesto, son útiles en monoterapia,
para la prevención y el tratamiento de las enfermedades mediadas por
IL-1, apoptosis, IGIF e
IFN-\gamma, incluyendo enfermedades inflamatorias,
enfermedades autoinmunes, alteraciones de destrucción ósea,
enfermedades proliferativas, enfermedades infecciosas, enfermedades
degenerativas, enfermedades necróticas, artrosis, pancreatitis
aguda, pancreatitis crónica, asma, síndrome de distrés respiratorio
del adulto, glomerulonefritis, artritis reumatoide, lupus
eritematoso sistémico, esclerodermia, tiroiditis crónica, enfermedad
de Graves, gastritis autoinmune, diabetes mellitas
insulín-dependiente (tipo I), anemia hemolítica
autoinmune, neutropenia autoinmune, trombocitopenia autoinmune,
hepatitis crónica activa, miastenia gravis, enfermedad inflamatoria
intestinal, enfermedad de Crohn, psoriasis, enfermedad injerto
contra huésped, osteoporosis, enfermedad ósea relacionada con el
mieloma múltiple, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide
crónica, melanoma metastático, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple,
sepsis, shock séptico, Shigellosis, enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia miocárdica,
atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis
relacionada con SIDA, encefalitis relacionada con HIV,
envejecimiento, alopecia, daño neurológico debido a accidente
cerebro-vascular, colitis ulcerosa, hepatitis
infecciosa, diabetes juvenil, liquen plano, dermatomiositis aguda,
eczema, cirrosis primaria, uveítis, enfermedad de Behcet,
enfermedades atópicas de la piel, aplasia pura de células rojas,
anemia aplásica, esclerosis lateral amiotrófica, síndrome nefrótico
y enfermedades sistémicas o enfermedades con efectos localizados en
el hígado u otros órganos, que tienen un componente inflamatorio o
apoptótico, ocasionado por excesiva ingesta de alcohol en la dieta o
por virus, tales como HBV, HCV, HGV, virus de la fiebre amarilla,
virus de la fiebre de dengue, y virus de la encefalitis
Japonesa.
Típicamente, las composiciones farmacéuticas de
esta invención pueden administrarse desde alrededor de 1 a 5 veces
al día, o alternativamente, como una infusión continua. Dicha
administración puede utilizarse como una terapia crónica o aguda. La
cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los
materiales de excipiente para producir una forma de dosis única,
variarán dependiendo del huésped tratado y del modo de
administración particular. Una preparación típica contiene desde
alrededor de 5% hasta alrededor de 95% de componente activo
(peso/peso). Preferiblemente, tales preparaciones contienen desde
alrededor de 20% hasta alrededor de 80% de componente activo.
Cuando las composiciones de esta invención
comprenden una combinación de un inhibidor de la ICE y uno o más
agentes terapéuticos o profilácticos, tanto el inhibidor de la ICE
como el agente adicional deberán estar presentes en niveles de dosis
de entre alrededor del 10% al 80% de la dosis administrada
normalmente en un régimen de monoterapia.
Cuando se alcance la mejoría en la situación del
paciente, puede administrarse una dosis de mantenimiento de un
compuesto, composición o combinación de esta invención, si fuera
necesario. Subsecuentemente, la dosis o la frecuencia de
administración, o ambas, pueden reducirse, en función de los
síntomas, hasta un nivel en el que la enfermedad mejorada se
mantiene, y cuando los síntomas se han aliviado hasta el nivel
deseado, el tratamiento podría interrumpirse. Los pacientes pueden,
sin embargo, requerir tratamiento intermitente a largo plazo, si
existe recurrencia o empeoran los síntomas.
Como el técnico experto podrá apreciar, pueden
requerirse dosis menores o mayores de las descritas aquí. Las dosis
y los regímenes de tratamiento específicos para cualquier paciente
particular, dependerán de una variedad de factores, incluyendo la
actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso
corporal, es estado general de salud, el sexo, la dieta, el tiempo
de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos,
la gravedad y curso de la enfermedad, y la disposición del paciente
frente a la enfermedad y el criterio del médico.
Las enfermedades mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas mediante
los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a,
enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, enfermedades
proliferativas, enfermedades infecciosas, y enfermedades
degenerativas. Las enfermedades mediadas por apoptosis que pueden
ser tratadas o prevenidas mediante los compuestos de esta invención
incluyen enfermedades degenerativas.
Las enfermedades inflamatorias mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas incluyen,
pero no se limitan a artrosis, pancreatitis aguda, pancreatitis
crónica, asma y síndrome de distrés respiratorio del adulto.
Preferiblemente las enfermedades inflamatorias son artrosis y
pancreatitis aguda.
Las enfermedades autoinmunes mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas incluyen,
pero no se limitan a glomerulonefritis, artritis reumatoide, lupus
eritematoso sistémico, esclerodermia, tiroiditis crónica, enfermedad
de Graves, gastritis autoinmune, diabetes mellitas
insulín-dependiente (Tipo I), anemia hemolítica
autoinmune, neutropenia autoinmune, trombocitopenia, hepatitis
crónica activa, miastenia gravis, esclerosis múltiple, enfermedad
inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, psoriasis y enfermedad
injerto contra huésped. Preferiblemente las enfermedades autoinmunes
son la artritis reumatoide, la enfermedad inflamatoria intestinal,
la enfermedad de Crohn o la psoriasis.
Las alteraciones de destrucción ósea mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas incluyen,
pero no se limitan a osteoporosis y alteraciones óseas relacionadas
con el mieloma múltiple.
Las enfermedades proliferativas mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas incluyen,
pero no se limitan a leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide
crónica, melanoma mestastático, sarcoma de Kaposi y mieloma
múltiple.
Las enfermedades infecciosas mediadas por
IL-1 que pueden ser tratadas o prevenidas incluyen,
pero no se limitan a sepsis, shock séptico y Shigellosis.
Las enfermedades degenerativas o necróticas
mediadas por IL-1 que pueden ser tratadas o
prevenidas por los compuestos de esta invención incluyen, pero no se
limitan a enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia
cerebral e isquemia miocárdica. Preferiblemente, la enfermedad
degenerativa es la enfermedad de Alzheimer.
Las enfermedades degenerativas mediadas por
apoptosis que pueden ser tratadas o prevenidas por los compuestos de
esta invención incluyen, pero no se limitan a enfermedad de
Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia
miocárdica, distrofia muscular espinal, esclerosis múltiple,
encefalitis relacionada con SIDA, encefalitis relacionada con HIV,
envejecimiento, alopecia y daño neurológico debido a accidente
cerebro-vascular.
Otras enfermedades que tienen un componente
inflamatorio o apoptótico, pueden ser tratadas o prevenidas con los
compuestos de esta invención. Dichas enfermedades pueden ser
enfermedades sistémicas o enfermedades con efectos localizados en el
hígado u otros órganos, y pueden ser ocasionados, por ejemplo, por
ingesta excesiva de alcohol en la dieta o por virus, tales como HBV,
HCV, HGV, virus de la fiebre amarilla, virus de la fiebre de dengue,
y virus de la encefalitis Japonesa.
Las enfermedades mediadas por IGIF o
IFN-\gamma que pueden ser tratadas o prevenidas
con los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a
enfermedades inflamatorias, infecciosas, autoinmunes,
proliferativas, neurodegenerativas y necróticas.
Las enfermedades inflamatorias mediadas por IGIF
o IFN-\gamma que pueden ser tratadas o prevenidas
incluyen, pero no se limitan a artrosis, pancreatitis aguda, asma,
artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad
de Crohn, colitis ulcerosa, isquemia cerebral, y síndrome de distrés
respiratorio del adulto. Preferiblemente, la enfermedad inflamatoria
es artritis reumatoide, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn,
hepatitis o síndrome de distrés respiratorio del adulto.
Las enfermedades infecciosas mediadas por IGIF o
IFN-\gamma que pueden ser tratadas o prevenidas
incluyen, pero no se limitan a hepatitis infecciosa, sepsis, shock
séptico y Shigellosis.
Las enfermedades autoinmunes mediadas por IGIF o
IFN-\gamma que pueden ser tratadas o prevenidas
incluyen, pero no se limitan a glomerulonefritis, lupus eritematoso
sistémico, esclerodermia, tiroiditis crónica, enfermedad de Graves,
gastritis autoinmune, diabetes mellitas
insulín-dependiente (tipo I), diabetes juvenil,
anemia hemolítica autoinmune, neutropenia autoinmune,
trombocitopenia, miastenia gravis, esclerosis múltiple, psoriasis,
liquen plano, enfermedad injerto contra huésped, dermatomiositis
aguda, eczema, cirrosis primaria, hepatitis, uveitis, enfermedad de
Behcet, enfermedades dérmicas atópicas, aplasia pura de células
rojas, anemia aplásica, esclerosis lateral amiotrófica y síndrome
nefrótico. Preferiblemente, la enfermedad autoinmune es
glomerulonefritis, diabetes mellitas
insulín-dependiente (tipo I), diabetes juvenil,
psoriasis, enfermedad injerto contra huésped o hepatitis.
Aunque esta invención está enfocada al uso de los
compuestos de esta invención para prevenir o tratar las enfermedades
mediadas por IL-1, apoptosis, IGIF e
IFN-\gamma, los compuestos de esta invención
también pueden utilizarse como agentes inhibidores de otras
proteasas de cisteína.
Los compuestos de esta invención son también
útiles como reactivos comerciales que se unen eficazmente a la ICE o
a otras proteasas de cisteína. Como reactivos comerciales, los
compuestos de esta invención, y sus derivados, pueden también
utilizarse para bloquear la proteolisis de un péptido diana en
ensayos bioquímicos o celulares para la ICE u homólogos de la ICE, o
pueden derivarse para unirse a una resina estable como sustrato base
para aplicaciones de cromatografía de afinidad. Estos y otros usos
que caracterizan a los inhibidores de proteasas de cisteína
comerciales, serán evidentes para los habitualmente expertos en la
técnica.
Los inhibidores de la ICE de esta invención
pueden sintetizarse utilizando técnicas convencionales. De forma
ventajosa, estos compuestos se sintetizan convenientemente a partir
de materiales fácilmente disponibles.
Los compuestos de esta invención están entre los
inhibidores de la ICE conocidos más fácilmente sintetizados. Muchos
de los inhibidores de la ICE descritos previamente contienen cuatro
o más centros quirales y numerosas uniones de péptidos. La facilidad
relativa con la que los compuestos de esta invención pueden
sintetizarse, representa una ventaja para la producción de estos
compuestos a gran escala.
Por ejemplo, los compuestos de esta invención
pueden prepararse utilizando los procedimientos aquí descritos. Como
pueden apreciar los expertos, estos procedimientos no son los únicos
medios mediante los que los compuestos descritos y reivindicados en
esta solicitud pueden sintetizarse. Otros métodos serán evidentes
para los habitualmente expertos en la técnica.
Adicionalmente, las diferentes etapas sintéticas
descritas aquí, pueden llevarse a cabo en un orden de secuencia
alternativo, para proporcionar los compuestos deseados.
Un método preferido para preparar los compuestos
N-acilamino de esta invención, comprende las etapas
de:
- a)
- mezclar un ácido carboxílico con una amina N-alloc-protegida, en presencia de un disolvente inerte, trifenilfosfina, un limpiador nucleofílico, y tetraquis-trifenil-fosfino de paladio (0) a temperatura ambiente, bajo una atmósfera inerte; y
- b)
- añadir a la mezcla de la etapa a), HOBT y EDC; y que comprende opcionalmente la etapa posterior de:
- c)
- hidrolizar la mezcla de la etapa b) en presencia de una solución que contenga un ácido y H_{2}O, mientras que la mezcla de la etapa b) es opcionalmente concentrada, antes de la hidrólisis.
Preferiblemente, el disolvente inerte es
CH_{2}Cl_{2}, DMF o una mezcla de CH_{2}Cl_{2} y DMF.
Preferiblemente, el limpiador nucleofílico es
dimedona, morfolina, trimetilsilil-dimetilamina, o
ácido dimetil-barbitúrico. Más preferiblemente, el
limpiador nucelofílico es trimetilsilil-dimetilamina
o ácido dimetil-barbitúrico.
Preferiblemente, la solución contiene ácido
trifluoroacético en alrededor de 1-90% por peso. Más
preferiblemente, la solución contiene ácido trifluoroacético en
alrededor de 20-50% por peso.
Alternativamente, la solución contiene ácido
clorhídrico en alrededor de 0,1-30% por peso. Más
preferiblemente, la solución contiene ácido clorhídrico en alrededor
de 5-15% por peso.
Más preferiblemente, en el procedimiento
anterior, el disolvente inerte es CH_{2}Cl_{2}, DMF, o una
mezcla de CH_{2}Cl_{2} y DMF, y el limpiador nucleofílico es
dimedona, morfolina, trimetilsilil-dimetilamina o
ácido dimetil-barbitúrico.
Más preferiblemente, en el procedimiento
anterior, el disolvente inerte es CH_{2}Cl_{2}, DMF, o una
mezcla de CH_{2}Cl_{2} y DMF, y el limpiador nucleofílico es
trimetilsilil-dimetilamina o ácido
dimetil-barbitúrico.
En un ejemplo de un procedimiento preferido, el
compuesto N-acilamino se representa mediante la
fórmula (V):
(V)R^{21} ---
\delm{N}{\delm{\para}{H}} ---
R^{22}
en la
que:
R^{21} es:
\vskip1.000000\baselineskip
R^{22} es
\vskip1.000000\baselineskip
m es 1;
y
R^{23} es -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o alquilheterociclo,
y los otros sustitutos son como los descritos previamente.
Preferiblemente, el ácido carboxílico es
R^{22}-OH y la amina
N-alloc-protegida es:
en la que R^{23} y m son como los
definidos
previamente.
Para que esta invención se entienda más
completamente, se describen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos
tienen el propósito solamente de ilustración, y no se han construido
para limitar el alcance de esta invención de ninguna forma.
Ácido
(3S)-3-(3(R,S)-1,3-dihidro-2-oxo-5-fenil((benciloxicarbonil)amino)-2H-1,4-benzodiazepin-1-acetilamino)-4-oxibutírico.
Etapa
1
Una solución THF (30 ml) a 0ºC, de 1 (2,4 g 6,22
mmol; preparada como se describe en Sherrill y Sugg, J. Org.
Chem., 60, pag. 730-4 (1995)), se trató con NaH
(240 mg, 6,00 mmol de una dispersión en aceite al 50%). Después la
reacción se agitó durante 1 hora a 0ºC, se añadió a la reacción
metil-bromoacetato (0,6 ml, 6,32 mmol) y se la
permitió templarse a temperatura ambiente. La reacción se paró con
agua (10 ml) y NaHSO_{4} al 10% acuoso (1 ml), y se extrajo con
etil-acetato (2x). Las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentraron in
vacuo. La cromatografía (SiO_{2}, eluyente de cloruro de
metileno/etil-acetato del 10 al 3%) proporcionó 2,15
g (76%) de 2.
Etapa
2
Se añadión NaOH acuoso 1 N (3,5 ml, 3,5 mmol) a
una solución de 2 (340 mg, 0,74 mmol) en metanol y THE (6 ml de
1:1). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas.
La reacción se evaporó, se disolvió en agua y se
acidificó con NaHSO_{4} acuoso al 10% hasta pH 3. La capa acuosa se extrajo con etil-acetato (3x) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, y se concentraron in vacuo para proporcionar 210 mg (64%) de 3.
acidificó con NaHSO_{4} acuoso al 10% hasta pH 3. La capa acuosa se extrajo con etil-acetato (3x) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, y se concentraron in vacuo para proporcionar 210 mg (64%) de 3.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Semicarabzona de tert-butil-éster
de ácido
(3S)-3-(1-fluorenilmetoxicarbonilamino)-4-oxobutírico
(4; 226 mg, 0,5 mmol; preparado de forma similar al análogo de
benciloxicarbonilo descrito en Graybill et al. Int. J.
Protein Res., 44, pag 173-82 (1994)), se
disolvió en 10 ml de acetonitrilo (20 ml) y se añadió dietilamina (2
ml) a la solución. La reacción se agitó durante 2 horas, se
concentró in vacuo, el producto resultante se disolvió en
acetonitrilo y se concentró de nuevo in vacuo, para
proporcionar semicarbazona de tert-butil-éster de
ácido
(3S)-3-amino-4-oxobutírico.
Una solución a 5ºC de la semicarbazona y 3 (188 mg, 0,424 mmol) en
cloruro de metileno/DMF (6 ml de 1:1), se trató con
1-hidroxibenzotriazol (HOBt; 57mg, 0.424 mmol) e
hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida
(EDC; 115 mg, 0,6 mmol), y la reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 16 horas. La reacción se diluyó con
etil-acetato (100 ml) y se lavó con agua,
NaHCO_{3} acuoso saturado y NaCl acuoso saturado, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro, y se concentró in vacuo. La
cromatografía (SiO_{2}. eluyente de hidróxido de amonio al 5% /
metanol/cloruro de metileno al 5%), proporcionó 250 mg de 5.
Etapa
4
La semicarbazona 5 (250 mg) se disolvió en
TFA/cloruro de metileno al 25% (10 ml), y se agitó a temperatura
ambiente durante 5 horas, para proporcionar una espuma amarilla, que
se disolvió en 5 ml de MeOH, 1 ml de ácido acético, y 1 ml de
formaldehído acuoso al 37%, que se agitó a temperatura ambiente
durante 18 horas. La reacción se concentró in vacuo y la goma
resultante se purificó mediante cromatografía (SiO_{2}. eluyente
de ácido fórmico al 1% / metanol/cloruro de metileno al 2%), para
obtener 69 mg (30%) del compuesto 3 del Ejemplo 1.
^{1}H-NMR(CD_{3}OD) \delta
2,42-2,54(m, 1H);
2,60-2,76(m, 1H);
4,22-4,38(m, 1H);
4,39-4,48(m, 0,5H);
4,5-4,75(m, 2,5H); 5,15(s, 2H);5,32
(br, s, 1H); 7,2-7,86(m, 14H).
Más datos para el Ejemplo 2 se encuentran en la
Tabla 1.
Ácido
(3S)-3-[3(R,S)-1,3-dihidro-2-oxo-5-fenil-((3,5-dicloro-4-metoacibenzoil)amino)-2H-1,4-benzodiazepin-1-acetilamino]-4-oxobutírico.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
La resina MBHA (0,63 mmol/g, 4,14 g, 2,61 mmol)
se suspendió en dimetilacetamida (20 ml), seguido de la adición de 6
(2,37 g, 4,0 mmol, preparado a partir de
t-butil-éster de ácido
(3S)-3-(fluorenilmetiloxicarbonil)-4-oxobutírico,
según A.M: Murphy et al., J. Am. Chem. Soc., 114,
3156-3157 (1992)), hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU; 1,53 g, 4,04 mmol), y DIEA (1,75 ml, 10,0 mmol). La mezcla de
reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente utilizando
un agitador de brazo. La resina se aisló en un embudo de cristal
incrustado mediante succión-filtración, y se lavó
con dimetilacetamida (6 X 20 ml). Los grupos amina que no
reaccionaron se cubrieron después haciendo reaccionar la resina con
anhídrido acético/dimetilformamida al 20% (v/v) (2 X 25 ml),
directamente en el embudo (10 minutos de lavado). La resina se lavó
con dimetilformamida (3 X 50 ml), diclorometano (3 X 50 ml) y
metanol (3 X 20 ml), antes de secarlo durante la noche in
vacuo para proporcionar 7 (5,33 g, 0,35 mmol/g, 1,86 mmol,
71%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
La resina 7 (4,0 g, 0,35 mmol/g, 1,4 mmol) se
hinchó en un embudo de cristal incrustado mediante lavado con
dimetilformamida (3 X 25 ml). Los grupos protectores Frnoc se
escindieron entonces con piperidina/dimetilformamida al 25% (v/v)
(25 ml), durante 10 minutos (agitación intermitente), y después
durante 20 minutos con reactivo de piperidina fresco (25 ml). La
resina se lavó entonces con dimetilformamida (3 X 25 ml), seguido de
N-metipirrolidona (2 X 25 ml). Después de transferir
la resina a un recipiente de 100 ml, se añadió
N-metilpirrolidona para obtener una pasta, seguida
por 8 (0,958 g, 2,1 mmol), HOBT-H_{2}O (0,321 g,
2,1 mmol), HBTU (0,796 g, 2,1 mmol) y DIEA (0,732 ml, 4,2 mmol). La
mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente
utilizando un agitador de brazo. La preparación de la resina se
llevó a cabo como se describió para 7, para proporcionar 9 (4,17 g,
0,27 mmol/g, 1,12 mmol, 80%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Este compuesto se preparó a partir de resina 9
(0,17 g, 0,047 mmol), utilizando un sintetizador Advanced ChemTech
396 Multiple Peptide. Los ciclos automáticos consistían en un lavado
de la resina con dimetilformamida (3 X 1 ml), desprotección con
piperidina al 25% (v/v) en dimetilformamida (1 ml) durante 3
minutos, seguido de reactivo fresco (1 ml) durante 10 minutos. La
resina 10 se lavó con dimetilformamida (3 X 1 ml) y
N-metilpirrolidona (3 X 1 ml).
Etapa
4
La resina 10 se acilató con una solución de ácido
3,5-dicloro-4-metoxibenzoico
0,4 M y HOBT 0,4 M en N-metilpirrolidona (0,5 ml),
una solución de HBTU 0,4 M en N-metilpirrolidona
(0,5 ml), y una solución de DIEA 1,6 M en
N-metilpirrolidona (0,25 ml), y la reacción se agitó
durante 2 horas a temperatura ambiente. La etapa de acilatión se
repitió. Finalmente, la resina se lavó con dimetilformamida (3 x 1
ml), diclorometano (3 x 1 ml) y se secó in vacuo para
proporcionar la resina 11.
\newpage
Etapa
5
El aldehído se escindió de la resina 11 y se
desprotegió globalmente mediante tratamiento con TFA al 95%/H_{2}O
al 5% (v/v, 1,5 ml), durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Después de lavar la resina con el reactivo de escisión (1 ml), los
filtrados combinados se concentraron hasta secarse en un aparato
Savant AES2000 Speed/Vac. Los concentrados obtenidos se disolvieron
en acetonitrilo al 50%/H_{2}O al 50%/TFA al 0,1% (5 ml), y se
liofilizaron para obtener el producto crudo como un sólido
blanquecino. El compuesto se purificó mediante
semi-prep RP-HPLC con una columna
Waters DeltaPak C8 300ª (15 \mu, 30 X 300 mm), fluyendo con un
gradiente lineal de acetonitrilo (20%-70%), que contiene TFA al 0,1%
(v/v), durante 45 minutos a 22 ml/minuto. Las fracciones que
contenían el producto deseado se combinaron y se liofilizaron para
proporcionar el Ejemplo 2 (14,1 mg, 23,1 \mumol, 49%).
Más datos del Ejemplo 3 se encuentran en la Tabla
1.
Ácido
(3S)-3-[3(R,S)-1,3-dihidro-2-oxo-5-fenil(benzoilamino)-2H-1,4-benzodiacepin-1-acetilamino]-4-oxobutírico.
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
4
Siguiendo un procedimiento similar al del método
1, la resina 5 se acilató con cloruro de benzoilo 0,5 M en
N-metilpirrolidona (1 ml) y DIEA 1,6 M en
N-metilpirrolidona (0,35 ml) durante 3 horas a
temperatura ambiente. La etapa de acilatión se repitió para
proporcionar la resina 12. Esta misma metodología se aplicó también
a la preparación de compuestos de urea, reemplazando el cloruro de
benzoilo con el isocianato apropiado.
Etapa
5
La escisión del aldehído de la resina 12 y la
preparación proporciona el Ejemplo 3 (31,6 mg).
Ejemplos
4-27
Los Ejemplos 4-27 se prepararon
con los métodos utilizados para preparar los Ejemplos 2 o 3 (véase
la Tabla 1).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Obtuvimos las constantes de inhibición (K_{i})
y los valores de IC_{50} para los compuestos de la invención,
utilizando los tres métodos descritos más adelante (Ejemplos 28 y
31). La tabla 2 expone un listado de estos datos para los Ejemplos
1-20 y 21-27.
Este ensayo se realizó utilizando un sustrato
Succinil-Tyr-Val-Ala-Asp-p-Nitroanilida.
La síntesis de sustratos análogos está descrita por Reiter, L.A,
Int. J. Peptide Protein Res., 43, pag. 87-96
(1994). La mezcla del ensayo contiene:
65 \mul de solución de tampón (Tris 10 mM, DTT
1 mM, 0,1% CHAPS©, pH 8,1)
10 \mul de ICE (concentración final de 50 nM,
para proporcionar una tasa de -1mOD/min)
5 \mul de DMSO/mezcla de inhibición
\underline{20 \ \mu l} de Sustrato 400 \muM
(concentración final 80 \muM)
100 \mul de volumen total de reacción
El ensayo de ICE visible se realiza en una placa
de microtitulación de 96 pocillos. La solución de tampón, la ICE y
el DMSO (si el inhibidor está presente), se añaden a los pocillos en
el orden indicado. Los componentes se dejan en incubación a
temperatura ambiente durante 15 minutos, comenzando en el momento en
el que todos los componentes están presentes en los pocillos. El
lector de placas de microtitulación se prepara para incubación a
37ºC. Después de una incubación de 15 minutos, se añade el sustrato
directamente a los pocillos y se monitoriza la reacción mediante el
seguimiento de la liberación del cromóforo (pNA) a
405-503 nm a 37ºC durante 20 minutos. Se realiza un
encaje lineal de los datos y se calcula la tasa en mOD/min. El DMSO
solo está presente durante los experimentos que incluyen
inhibidores, y la solución de tampón se utiliza para llevar el
volumen hasta 100 \mul en los otros experimentos.
Este ensayo se realizó esencialmente según
Thomberry et al. Nature 356, pag.
768-774 (1992), utilizando el sustrato 17
referenciado en ese artículo. El sustrato es:
Acetil-Tyr-Val-Ala-Asp-amino-4-metilcoumarina
(AMC). Se mezclan los siguientes componentes:
| 65 \mul | Solución de tampón (Tris 10 mM, DTT 1 mM, 0,1% CHAPS©, pH 8,1) |
| 10 \mul | ICE (concentración final 2-10 nM) |
| 5 \mul | DMSO/solución de inhibidor |
| 20 \mul | Sustrato 150 \muM (final 30 \muM) |
| \overline{100 \ \mu l} | Volumen total de reacción |
El ensayo se realiza en placas de microtitulación
de 96 pocillos. La solución de tampón y la ICE se añaden a los
pocillos. Los componentes se dejan en incubación a 37ºC durante 15
minutos en un soporte de placa de temperatura controlada. Después de
una incubación de 15 minutos, la reacción se inicia añadiendo
sustrato directamente a los pocillos, y la reacción se monitoriza a
37ºC durante 30 minutos, mediante el seguimiento de la liberación
del fluoróforo AMC utilizando una longitud de onda de excitación de
380 nm, y una longitud de onda de emisión de 460 nm. Se realiza un
encaje lineal de los datos para cada pocillo, y la tasa se determina
en unidades de fluorescencia por segundo.
Para la determinación de las constantes de
inhibición de la enzima (K_{i}) o el modo de inhibición
(competitivo, incompetitivo o no competitivo), los datos de tasa
determinados en los ensayos enzimáticos a diversas concentraciones
del inhibidor, se procesan con ordenador en ecuaciones de cinética
enzimática estándar (véase I.H. Segel, Enzyme Kinetics,
Wiley-Interscience, 1975).
La determinación de las constantes de tasa de
segundo orden para inhibidores irreversibles se realizó encajando
los datos de fluorescencia contra los de tiempo en las ecuaciones de
progresión de Morrison, Morrison, J.F., Mol. Cell. Biophys.,
2, pag. 347-368 (1985). Thomberry et al.
Publicaron una descripción de estos métodos para medir las
constantes de tasa de los inhibidores de ICE irreversibles.
Thomberry, N.A., et al. Biochemistry, 33,
pag.3923-3940 (1994). Para los compuestos en los que
no puede observarse cinéticamente formación de complejos previa, las
constantes de tasa de segundo orden (K_{inact}), se derivan
directamente de la inclinación de la línea obtenida de K_{obs}
contra la concentración del inhibidor [I]. Para los compuestos en
los que puede detectarse formación de complejos previa a la enzima,
la hipérbole obtenida de K_{obs} contra [I] se encaja en la
ecuación para cinética de saturación, para generar primero K_{i} y
k^{a}. La constante de tasa de segundo orden k_{inact} es
obtenida después con k^{a}/K_{i}.
Ensayo de IL-1\beta con una
Población Mixta de Células Mononucleares de Sangre Periférica
Humana (PBMC) o Enriquecida en Células Mononucleares Adherentes.
El procesamiento de
pre-IL-1\beta por la ICE puede
medirse en cultivo celular utilizando una variedad de tipos
celulares. Las PBMC humanas obtenidas de testigos sanos proporcionan
una población mixta de subtipos de linfocitos y células
mononucleares que producen un espectro de interleuquinas y
citoquinas en respuesta a muchas clases de estimuladores
fisiológicos. Las células adherentes de PBMC proporcionan una fuente
enriquecida de monolitos normales para estudios selectivos de
producción de citoquinas por las células activadas.
Se prepara una serie inicial de diluciones del
compuesto a ensayar en DMSO o etanol, con una dilución posterior en
medio RPMI- FBS al 10% (contiene L-glutamina 2 mM,
HEPES 10 mM, pen/estrepto 50 U y 50 \mug/ml) respectivamente, para
proporcionar los fármacos a 4 x la concentración final del ensayo,
que contiene DMSO al 0,4% o etanol al 0,4%. La concentración final
de DMSO es 0,1% para todas las diluciones de fármaco. Se utiliza
generalmente una titulación de concentración con corchetes, de la
K_{i} aparente para un compuesto a ensayar, determinado en el
ensayo de inhibición de la ICE, para un cribado primario del
compuesto.
Generalmente se ensayan 5-6
diluciones del compuesto y el componente celular del ensayo se
realiza por duplicado, con determinaciones de ELISA duplicadas en
cada uno de los sobrenadantes de cultivo.
Las células de la "buffy coat" aisladas de
una pinta de sangre humana (que proporciona un volumen final de
plasma de 40-45 ml además de las células), se
diluyen con medio hasta 80 ml, y se rellenan tubos de separación
LeukoPREP (Becton Dickinson) cada uno con 10 ml de la suspensión
celular. Después de centrifugación a 1500-1800 x g
durante 15 minutos, se aspira la capa de plasma/medio y después se
recolecta la capa de células mononucleares con una pipeta de
Pasteur, y se trasfiere a un tubo de centrífuga cónico de 15 ml
(Corning). Se añade medio hasta conseguir un volumen de 15 ml, se
mezclan suavemente las células mediante inversión, y se centrifugan
a 300 x g durante 15 minutos. El centrifugado de PBMC se resuspende
en una pequeña cantidad de volumen de medio, las células se cuentan
y se ajustan a 6 x 10^{6} células/ml.
Para el ensayo celular, se añade a cada uno de
los pocillos de una placa de cultivo celular de fondo plano de 24
pocillos (Corning), 1,0 ml de la suspensión de células, 0,5 ml de la
dilución del compuesto a ensayar y 0,5 ml de solución LPS (Sigma nº
L-3012; 20 ng/ml de solución preparada en medio RPMI
completo; concentración final de LPS 5 ng/ml). Las adiciones de 0,5
ml del compuesto a ensayar y el LPS son generalmente suficientes
para mezclar el contenido de los pocillos. Se realizan tres mezclas
de control por experimento, con LPS solo, vehículo disolvente de
control, y/o medio adicional, para ajustar el volumen de cultivo
final a 2,0 ml. Los cultivos celulares se incuban durante
16-18 horas a 37ºC en presencia de CO_{2} al
5%.
Al final del periodo de incubación, las células
se recolectan y se transfieren a tubos de centrífuga cónicos de 15
ml. Después de una centrifugación a 200 x g durante 10 minutos, se
recolectaron los sobrenadantes y se transfirieron a tubos Eppendorf
de 1,5 ml. Debe tenerse en cuenta que el centrifugado de células
puede utilizarse para una evaluación bioquímica de contenido en
pre-IL-1\beta y/o
IL-1\beta madura en los extractos de citosol,
mediante Western blotting o ELISA con antisuero específico anti
pre-IL-1\beta.
Las PBMC se aíslan y se preparan como se
describió anteriormente. Se añade en primer lugar medio (1,0 ml) a
los pocillos, seguido de 0,5 ml de la suspensión de PBMC. Después de
una hora de incubación, las placas se agitan suavemente y las
células no adherentes se aspiran de cada pocillo. Las células son
después lavadas suavemente tres veces con 1,0 ml de medio, y
finalmente se resuspenden en 1,0 ml de medio. El enriquecimiento en
células adherentes generalmente proporciona 2,5-3,0
x 10^{5} células por pocillo. La adición de los compuestos de
ensayo y de LPS, y las condiciones de incubación celular y el
procesamiento de los sobrenadantes son iguales a los descritos
previamente.
Hemos utilizado kits Quantikine (R&D
Systems), para medir la IL-1\beta madura. Los
ensayos se realizan según las indicaciones del fabricante. Se
observan niveles de IL-1\beta madura de
1-3 ng/ml tanto en PBMC como en testigos positivos
de células mononucleares adherentes. Los ensayos de ELISA se
realizan con diluciones 1:5, 1:10 y 1:20, de sobrenadantes de
testigos LPS positivos, para seleccionar la dilución óptima para los
sobrenadantes en el panel de ensayo.
La potencia inhibidora de los compuestos puede
representarse mediante un valor IC_{50}, que es la concentración
de inhibidor a la que se detecta el 50% de
IL-1\beta madura en el sobrenadante, comparado con
los testigos positivos.
Los expertos en la técnica se darán cuenta de que
los valores obtenidos en los ensayos celulares, tales como los
descritos aquí, pueden depender de múltiples factores. Los valores
pueden no representar necesariamente resultados cuantitativos
finos.
Los inhibidores peptidilo de la ICE se aclaran
rápidamente, con tasas de aclaramiento mayores de 100 ml/min/kg. Los
compuestos con tasas de aclaramiento menores han mejorado sus
propiedades farmacocinéticas en relación con los inhibidores
peptidilo de la ICE.
Las tasas de aclaramiento para los compuestos de
esta invención (ml/min/kg) pueden obtenerse utilizando el método
descrito más adelante;
Los compuestos se disuelven en solución TRIS
estéril (0,02 M ó 0,05 M), a una concentración de 2,5 mg/ml. Cuando
es necesario, para asegurar una disolución completa, la muestra se
disuelve primero en un volumen mínimo de dimetilacetamida (máximo de
5% del volumen total de la solución), y después se disuelven en la
solución TRIS.
La solución del fármaco se administra a ratones
CD-1 (Charles River Laboratorios -
26-31 g), a través de la vena de la cola en un
volumen de dosis de 10 ml/kg, administrando una dosis de fármaco de
25 mg/kg, por ejemplo.
Los ratones pueden dosificarse en grupos (de 5,
por ejemplo), para cada punto de tiempo (generalmente de 2 minutos a
2 horas), y después en el tiempo apropiado, los animales se
anestesian con halotano y se recolecta la sangre en tubos
heparinizados individuales de la vena yugular. Las muestras de
sangre se enfrían a 0ºC y después el plasma se separa y se guarda a
-20ºC hasta que se analiza.
La concentración de fármaco en las muestras de
plasma se determina mediante análisis HPLC con detección UV o
MS-(ESP). Se emplea cromatografía de fase inversa utilizando una
variedad de fases unidas desde C1 hasta C18 con eluyentes compuestos
de mezclas de solución de tampón acuosa/acetonitrilo, bajo
condiciones isocráticas.
La cuantificación se hace mediante métodos
estándar externos, con curvas de calibración construidas mezclando
plasma con soluciones del fármaco, para proporcionar concentraciones
en el intervalo de 0,5 a 50 \mug/ml.
Antes de analizarlas, a las muestras de plasma se
les retiran las proteínas mediante la adición de acetonitrilo,
metanol, ácido tricloroacético o ácido perclórico, seguido por
centrifugación a 10.000 g durante 10 minutos. Para el análisis, se
inyectaron volúmenes de muestra de 20 \mul a 50 \mul.
El fármaco se disuelve en Tris estéril 0,02 M,
para proporcionar una solución de 2,5 mg/ml, que se administra a 11
grupos de 5 ratones macho CD-1, a través de la vena
de la cola, a una dosis de 25 mg/kg. En cada uno de los siguientes
puntos de tiempo: 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 y 120 minutos, un
grupo de animales se anestesia y se recolecta la sangre en tubos
heparinizados. Después de la separación, el plasma se guarda a -20ºC
hasta que se analiza.
Partes alícuotas de plasma (150 \mul) se tratan
con ácido perclórico al 5% (5 \mul), y después se mezclan con un
vórtex y se dejan durante 90 minutos antes de la centrifugación. Los
sobrenadantes resultantes se separan, y 20 \mul se inyectan para
análisis HPLC.
| Columna | 100 x 4,6 mm | Kromasil KR 100 5C4 |
| Fase Móvil | Tris pH 7,5, 0,1 m | 86% |
| Acetonitrilo | 14% | |
| Tasa de Flujo | 1 ml/min | |
| Detección | UV a 210 nm | |
| Tiempo de Retención | 3,4 minutos |
Los inhibidores peptidilo de la ICE se aclaran
rápidamente, con tasas de aclaramiento mayores de 80 ml/min/kg. Los
compuestos con tasas de aclaramiento menores han mejorado las
propiedades farmacocinéticas en relación a los inhibidores peptidilo
de la ICE.
La tasa de aclaramiento en la rata (ml/min/kg)
para compuestos de esta invención puede obtenerse utilizando el
método descrito más adelante.
Se realizan canulaciones de los vasos yugular y
carótida en ratas bajo anestesia, un día antes del estudio de
farmacocinética. Free, M.J. y Jaffe, R.A.; "Cannulation techniques
for the collection of blood and other bodily fluids", en: Animal
Models; pag. 480-495; Alexander, N.J., Ed.; Academic
Press; (1978). Se administra fármaco (10 mg/ml) a través de la vena
yugular en un vehículo que generalmente consiste en:
propilén-glicol/solución salina, que contiene
bicarbonato sódico 100 mM, en una relación 1:1. Los animales se
dosifican con 10-20 mg de fármaco/kg, y se extraen
muestras de sangre a los 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30. 60 y 90
minutos, de un catéter colocado en la carótida. La sangre se
centrifuga a plasma, y se guarda a -20ºC hasta que se analiza. El
análisis farmacocinético de los datos se realiza mediante regresión
no lineal, utilizando un programa estándar, tal como RStrip
(MicroMath Software, UT), y/o Pcnonlin (SCI Software, NC), para
obtener los valores de aclaramiento.
El plasma de rata se extrae con un volumen igual
de acetonitrilo (que contiene TFA al 0,1%). Las muestras se
centrifugan a aproximadamente 1.000 x g, y el sobrenadante se
analiza mediante gradiente HPLC. Un procedimiento de ensayo típico
se describe más adelante.
Se precipitan 200 \mul de plasma con 200 \mul
de ácido trifluoroacético (TFA) al 0,1% en acetonitrilo, y 10 \mul
de solución acuosa de cloruro de zinc al 50%, se mezclan con
agitador vórtex y se centrifugan a - 1000 x g y el sobrenadante se
recolecta y se analiza mediante HPLC.
| Procedimiento HPLC | |
| Columna | Zorbax SB-CN (4,6 x 150 mm) (tamaño de partícula de 5 \mum) |
| Temperatura de la Columna | 50ºC |
| Tasa de Flujo | 1,0 ml/min |
| Volumen de Inyección | 75 \mul |
| Acetonitrilo de Fase Móvil | A= TFA al 0,1% en agua y B=100% |
| Gradiente empleado | 100% A a 30% en 15,5 minutos |
| 0% A a 15 minutos | |
| 100% A a 19,2 minutos | |
| Longitud de onda | 214 nm |
Se realiza una curva estándar a concentraciones
de 20, 10, 5, 2 y 1 \mug/ml.
Los valores de IC_{50} para compuestos de la
invención en el ensayo de sangre completa, se obtienen utilizando el
método descrito más adelante.
El ensayo de sangre completa es un método
sencillo para medir la producción de IL-1\beta (u
otras citoquinas), y la actividad de posibles inhibidores. La
complejidad de este sistema de ensayo, con su complemento completo
de células linfoides y de tipos celulares inflamatorios, el espectro
de proteínas de plasma, y las células rojas de la sangre, es una
representación ideal in vitro de las condiciones fisiológicas
in vivo.
- Jeringas libres de pirógenos (- 30 cc)
- Tubos de vacío libres de pirógeno, que contienen Na_{2}EDTA liofilizado (4,5 mg/tubo de 10 ml)
- Muestra de sangre humana completa (- 30-50 cc)
- Tubos Eppendorf de 1,5 ml
- Soluciones maestras de compuestos de ensayo (- 25 mM en DMSO u otro disolvente)
- Solución de cloruro sódico libre de endotoxina (0,9%), y Lipopolisacárido HBSS (Sigma; Cat. Nº L-3012), solución maestra a 1 mg/ml en HBSS
- Kit de ELISA para IL-1\beta (R & D Systems; Cat. Nº DLB50)
- Kit de ELISA para TNF\alpha (R & D Systems; Cat. Nº DTA50)
- Baño de agua o incubador
Se prepara el baño de agua o el incubador a 30ºC.
Se preparan partes alícuotas de 0,25 ml de sangre en tupos
Eppendorf, estando seguros de invertir los tubos de sangre completa
cada dos partes alícuotas. Pueden aparecer diferencias en las
replicaciones, como resultado de las células se sedimenten y no
estén suspendidas uniformemente. La utilización de una pipeta de
desplazamiento positivo también minimizará las diferencias entre
partes alícuotas repetidas.
Se preparan diluciones de fármaco en solución
salina libre de pirógenos mediante dilución seriada. Se utiliza
generalmente una serie de dilución que incluye la K_{i} aparente
para un compuesto de ensayo determinado en un ensayo de inhibición
de la ICE, para el cribado primario del compuesto; Para compuestos
extremadamente hidrofóbicos, se preparan diluciones del compuesto en
plasma fresco obtenido del mismo donante de sangre, o en PBS que
contiene DMSO al 5%, para aumentar la solubilidad.
Se añaden 25 \mul de la dilución del compuesto
a ensayar o del vehículo testigo, y se mezcla suavemente la muestra.
Después se añaden 5,0 \mul de solución LPS (preparada fresca de
una solución maestra de 250 ng/ml: concentración final de LPS 5,0
ng/ml), y se mezcla de nuevo, se incuban los tubos a 30ºC en un baño
de agua durante 16-18 horas mezclando la muestra
ocasionalmente. Alternativamente, los tubos pueden colocarse en un
aparato rotador a 4 rpm durante el mismo periodo de incubación. Este
ensayo puede hacerse por duplicado, o por triplicado con los
siguientes testigos: testigo negativo - no LPS; testigo positivo -
no inhibidor de ensayo; testigo de vehículo - la mayor concentración
de DMSO o disolvente de compuesto utilizado en el experimento. Se
añade solución salina adicional a todos los tubos testigo, para
normalizar los volúmenes tanto para las muestras testigo como para
las muestras de ensayo de sangre completa experimentales.
Después del periodo de incubación, las muestras
de sangre completa se centrifugan a - 2000 rpm durante 10 minutos en
una microcentrífuga, el plasma se transfiere a un nuevo tubo de
microcentrífuga, y se centrifuga a 1000 x g, para depositar
plaquetas residuales si fuera necesario. Las muestras de plasma
pueden guardarse congeladas a -70ºC, antes del análisis para los
niveles de citoquinas mediante ELISA.
Los kits Quantikine de R & D Systems (614
McKinley Place N.E. Minneapolis, MN 55413), pueden utilizarse para
medir IL-1\beta y TNF-\alpha.
Los análisis se realizaron según las indicaciones del fabricante.
Pueden observarse niveles de IL-1\beta de -
1-5 ng/ml en testigos positivos entre un intervalo
de individuos. Una dilución 1:200 de plasma para todas las muestras
es generalmente suficiente para los experimentos para que los
resultados del ELISA caigan en un intervalo lineal de la curva
estándar del ELISA. Puede ser necesario optimizar las diluciones
estándar si se observan diferencias en el ensayo de sangre completa.
Narad, J.L. et al; J. Leukocyte Biol., 52, pag.
687-692 (1992).
Se subclona TX cDNA (C. Faucheu et al.,
EMBO, 14, pag.1914 (1995)) en un vector de transferencia pVL
1393 modificado, y se co-transfecta el plásmido
resultante (pVL 1393/TX) en células de insecto, con DNA viral, y se
identifica el baculovirus recombinante. Después de la generación de
un título elevado de virus recombinantes almacenados, el medio se
examina para actividad TX utilizando el ensayo de la ICE visible.
Típicamente, la infección de las células de insecto Spodoptera
frugiperda (S19) a un MQI de 5 con virus recombinantes, da como
resultado una expresión máxima después de 48 horas de 4,7 \mug/ml.
La ICE se utiliza como estándar en el experimento.
También se expresan versiones de ICE o TX
marcadas en el T7 amino-terminal. Diseñados
originalmente para ayudar a la identificación y la purificación de
las proteínas recombinantes, las diversas construcciones también
permiten el examen de diferentes niveles de expresión y de los
niveles relativos de apoptosis experimentados por los diferentes
homólogos. La apoptosis en las células S19 infectadas (examinada
utilizando el ensayo de exclusión de Azul de Trypán), está aumentada
en las líneas que expresan ICE o TX en relación con las células
infectadas con el DNA viral solamente.
Un cDNA que codifica un CPP32
(Fernández-Ainemri et al., arriba,
1994), polipéptido que comienza en Ser (29) se amplifica mediante
PCR con cebadores que añaden en marco lugares XhoI en ambos extremos
5' y 3' del cDNA, y el fragmento XhoI resultante se liga en un
vector de expresión pET-15b cortado con XhoI, para
crear una fusión en marco con la etiqueta (his)_{6} en el
extremo N de la proteína de fusión. La proteína recombinante
predicha se inicia con la secuencia de aminoácidos
MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, en la que LVPRGS representa
un lugar de escisión de trombina, seguido de CPP32, que comienza en
Ser (29). Las E. coli BL21 (DE3), que portan el plásmido, se
cultivan hasta fase logarítmica a 30ºC, y después se inducen con
IPTG 0,8 mM. Las células se recolectan dos horas después de la
adición de IPTG. Se preparan lisados y las proteínas solubles se
purifican mediante cromatografía en Ni-agarosa.
Toda la proteína CPP32 expresada estaría en forma procesada. El
análisis de secuencia N-terminal indicaría que el
procesamiento ha ocurrido en el lugar auténtico entre Asp (175) y
Ser (176). Se pueden obtener aproximadamente 50 \mug de proteína
CPP32 a partir de 200 ml de cultivo. Como se determina mediante
titulación de lugar activo, las proteínas purificadas son
completamente activas. Las preparaciones de proteasas también son
muy activas in vitro, para escindir el PARP así como el
sustrato sintético DEVD-AMC (Nicholson et
al., 1995)
Puede obtenerse la selectividad de un panel de
inhibidores reversibles para homólogos de la ICE. Los ensayos
enzimáticos de la ICE se realizan según Wilson et al. (1994),
utilizando un sustrato YVAD-AMC (Thomberry et
al., 1992). El ensayo de la actividad TX se realiza utilizando
el sustrato de ICE, bajo las mismas condiciones que la ICE. El
ensayo de CPP32 se realiza utilizando un sustrato
DEVD-AMC (Nicholson et al., 1995).
Se obtienen las constantes de tasa de segundo
orden para la inactivación de la ICE y de los homólogos de la ICE
con inhibidores reversibles.
Los compuestos pueden ser evaluados para su
capacidad de bloquear la apoptosis inducida por Fas. Utilizando
RT-PCR, puede detectarse el mRNA que codifica ICE,
TX, ICH-1, CPP32 y CMH-1 en células
U937 no estimuladas. Esta línea celular puede utilizarse para
estudios de apoptosis. Por ejemplo, las células U937 se siembran en
cultivo a 1 x 10^{5} células/ml, y se cultivan a hasta -5 x
10^{6} células/ml. Para los experimentos de apoptosis, se ponen 2
x 10^{6} células en placas de cultivo tisular de 24 pocillos en 1
ml de RPMI-1640 con FBS al 10%, y se estimulan con
100 ng/ml de anticuerpo anti-antígeno Fas (Medical
and Biological Laboratorios, Ltd.). Después de incubarlas durante 24
horas a 37ºC, se determina el porcentaje de células apoptóticas
mediante análisis FACS utilizando reactivos ApoTag.
Todos los compuestos se analizan inicialmente a
20 \muM, y se realizan titulaciones con los compuestos activos,
para determinar los valores de IC_{50}.
La eficacia se evalúa en ratones CD1 (n=6 por
cada condición, por ejemplo), estimulados con LPS (20 mg/kg IP). Los
compuestos a ensayar se preparan en aceite de oliva:DMSO:etanol
(90:5:5), y se administran mediante inyección intraperitoneal una
hora después del LPS. Se recolecta la sangre siete horas después del
estímulo con LPS. Se miden los niveles de
IL-1\beta mediante ELISA.
Los compuestos también pueden administrarse
mediante sonda oral para determinar la absorción. Los compuestos
administrados por vía oral que inhiben la secreción de
IL-1\beta, son sugestivos de eficacia oral
potencial de estos compuestos como inhibidores de la ICE, y de esta
forma de ser agentes anti-inflamatorios.
A los ratones se les administra una dosis oral
(p.o.) de compuestos (50 mg/kg, por ejemplo), preparados en
carboximetilcelulosa al 0,5%. Se recolectan muestras de sangre entre
1 y 7 horas después de la dosis. Se extrae suero mediante
precipitación con un volumen igual de acetonitrilo que contiene
ácido fórmico al 2%, seguido por centrifugación. El sobrenadante se
analiza mediante cromatografía
líquida-espectrometría de masa
(ESI-MS), con un dintel de detección de 0,003 a 3
\mug/ml. Se determinan así los niveles detectables en sangre.
La IGIF puede ser sustituida por
IL-1 en los ensayos de inhibición de la ICE
descritos en el Ejemplo 28. Así, puede determinarse la capacidad de
los inhibidores de la ICE para disminuir la producción de IGIF.
Por ejemplo, para realizar el ensayo en PBMC
humanas, pueden obtenerse células humanas de la "buffy coat" de
donantes de sangre, y aislar las células mononucleares de sangre
periférica mediante centrifugación en tubos LeukoPrep
(Becton-Dickinson, Lincoln Park, NJ). Las PBMC se
añaden (3 x 10^{6} células/pocillo), a placas de cultivo tisular
Corning de 24 pocillos, y después de 1 hora de incubación a 37ºC,
las células no adherentes se eliminan mediante lavado suave. Las
células mononucleares adherentes se estimulan con LPS (1 \mug/ml),
con o sin inhibidor de la ICE, en 2 ml de RPMI-1640
con FBS al 10%. Después de 16-18 horas de incubación
a 37ºC, se cuantifican la IGIF y el IFN- en los sobrenadantes de
cultivo mediante ELISA.
La eficacia antiviral de los compuestos puede
evaluarse en diversos ensayos in vitro e in vivo. Por
ejemplo, los compuestos pueden analizarse en ensayos de replicación
viral in vitro. Los ensayos in vitro pueden emplear
células completas o componentes celulares aislados. Los ensayos
in vivo incluyen modelos animales para enfermedades virales.
Ejemplos de dichos modelos animales incluyen, pero no se limitan a,
modelos murinos de infección por HBV o HCV, el modelo de marmota de
infección por HBV, y el modelo de chimpancé de infección por
HCV.
Los inhibidores de la ICE también pueden
evaluarse en modelos animales de enfermedades inducidas por
alcohol.
Ejemplos
38-59
Los Ejemplos 38-56 (Tabla 3) se
prepararon con métodos similares a los métodos utilizados para
preparar el Ejemplo 2 o 3. Los Ejemplos 57-59 (Tabla
3), se prepararon con métodos similares a los métodos utilizados
para preparar el Ejemplo 1.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
Obtuvimos las constantes de inhibición (K_{i})
y los valores de IC_{50} para los compuestos de esta invención,
utilizando los métodos aquí descritos (véanse los Ejemplos 26 y 31).
La Tabla 4 presenta una lista de estos datos para los Ejemplos 11,
38-56 y 58-59.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Se induce inflamación peritoneal en ratones con
una inyección intraperitoneal (IP) de 10 mg de carragenina en 0,5 ml
de solución salina (Griswold et al., Inflammation, 13,
pag. 727-739 (1989)). Los fármacos se administran
por sonda oral en vehículo de etanol/PEG/agua,
\beta-ciclodextrina, labrosol/agua o
cremofor/agua. Los ratones se sacrifican 4 horas después de la
administración de carragenina, y después se les inyecta IP con 2 ml
de solución salina que contiene 5 U/ml de heparina. Después de un
masaje suave en el peritoneo, se hace una pequeña incisión, se
recolectan los contenidos y se registra el volumen. Las muestras se
guardan en hielo hasta que se centrifugan (130 x g, 8 minutos a 4ºC)
para eliminar el material celular, y los sobrenadantes resultantes
se almacenan a -20ºC. Se determinan los niveles de
IL-1\beta en el líquido peritoneal mediante
ELISA.
Se establece artritis inducida por colágeno Tipo
II, en ratones macho DBA/1J, como describieron Wooley y Geiger
(Wooley, P.H., Methods in Enzymology, 162, pag.
361-373 (1988) y Geiger, T., Clinical and
Experimental Rheumatology, 11, pag. 515-522
(1993)). Colágeno Tipo II de esternón de pollo (4 mg/kg en ácido
acético 10 mM), se emulsiona con un volumen igual de adyuvante
completo de Freund (FCA), mediante pases repetidos (400) entre dos
jeringas de cristal de 10 ml, con una aguja de calibre 16 de doble
canal. Los ratones se inmunizan mediante inyección intradérmica (50
I; 100 I CII por ratón) de emulsión de colágeno 21 días más tarde,
en el lado contralateral de la base de la cola. Los fármacos se
administran dos veces al día (10, 25 y 50 mg/kg), mediante sonda
oral, aproximadamente 7 horas aparte. Los vehículos que pueden
utilizarse incluyen etanol/PEG/agua,
\beta-ciclodextrina, labrosol/agua o
cromofor/agua. Los fármacos de tratamiento se inician dentro de las
dos horas siguientes a la inmunización de recuerdo de CII. La
inflamación se evalúa en una escala de 1 a 4 de aumento de la
gravedad, en las dos patas delanteras, y los valores evaluados se
suman para proporcionar el valor final.
Los fármacos (10-100 mg/kg) se
administran por vía oral a ratas (10 ml/kg) en etanol/PEG/agua,
\beta-ciclodextrina, labrosol/agua o
cromofor/agua. Se extraen muestras de sangre de la arteria carótida
a las 0,25, 0,50, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 y 8 horas después de la
administración, se centrifuga el plasma y las muestras se guardan a
-70ºC hasta que se analizan. Las concentraciones de aldehído se
determinan utilizando un ensayo enzimático. El análisis
farmacocinético de los datos se realiza mediante regresión no
lineal, utilizando RStrip (MicroMath Software, UT). Los valores de
disponibilidad del fármaco se determinan como sigue: (AUC de fármaco
después de la administración del pro-fármaco/AUC del
fármaco después de la administración i.v. del fármaco) x (dosis
i.v./dosis p.o.) x 100%.
Los datos de los ejemplos anteriores demuestran
que los compuestos según esta invención exhiben actividad inhibidora
contra la Enzima de Conversión de IL-1\beta, y que
la ICE controla los niveles de IGIF y de
IFN-\gamma.
Como los compuestos de esta invención son capaces
de inhibir a la ICE in vitro y además, pueden administrarse
por vía oral a mamíferos, son de evidente utilidad clínica para el
tratamiento de las enfermedades mediadas por IL-1,
apoptosis, IGIF e IFN-\gamma. Estos ensayos son
predictivos de la capacidad de los compuestos de inhibir a la ICE
in vivo.
Aunque hemos descrito un número de realizaciones
de esta invención, es aparente que nuestras construcciones básicas
pueden alterarse para proporcionar otras realizaciones que utilicen
los productos y los procedimientos de esta invención.
Claims (20)
1. Un compuesto representado por la fórmula
(III):
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en la
que:
Y es
siempre que si R^{5} es -OH, Y
puede también
ser:
\vskip1.000000\baselineskip
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo del anillo es opcionalmente reemplazado por
-R^{4};
R^{1} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo, o
alquilheteroarilo, en el que cada arilo o heteroarilo es
opcionalmente sustituido por R^{17}, de forma única o
múltiple;
R^{2} es un puente, -C(O)-,
-C(O)C(O)-, -S(O)_{2}-, -OC
(O)-, -N(H)C(O)-,
-N(H)S(O)_{2}-,
-N(H)C(O)C(O)-,
-CH=CHC(O)-, -OCH_{2}C(O)-,
-N(H)CH_{2}C(O)-,
-N(R^{19})C(O)-,
-N(R^{19})S(O)_{2}-,
-N(R^{19})C(O)C(O)-,
-N(R^{19})CH_{2}C(O)-, o
-C(O)C(=NOR^{11})-, siempre que cuando R^{2} no es
un puente, R^{2} está unido al NH ligado al anillo de siete
miembros a través de carbonilo o sulfonilo;
R^{3} es -arilo, -heteroarilo, -cicloalquilo,
-alquilo, -N(alquilo)_{2},
R^{4} es NH_{2} o
-N(H)C(O)H;
R^{5} es -OH, -OR^{8}, o
-N(H)OH;
R^{6} es -H, CH_{2}OR^{9},
-CH_{2}SR^{10}, -CH_{2}NHR^{9},
-CH_{2}N(R^{9})R^{12}, -CHN_{2}, -CH_{2}F,
-CH_{2}Cl, -C(O)N(R^{11})R^{12},
-R^{13}, o R^{14};
R^{8} es -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
alquilheterociclo;
R^{9} es -H, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-P(O)R^{15}R^{16};
R^{10} es -alquilarilo, -arilo, -heteroarilo, o
-alquilheteroarilo;
cada uno de R^{11} y R^{12} es
independientemente -H, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, o
-alquilheteroarilo;
-alquilheteroarilo;
R^{13} es -alquilarilo, -alquenilarilo,
-alquinilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{14} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que cualquier hidrógeno unido
a (i) es opcionalmente reemplazado por R^{17} y cualquier
hidrógeno unido a (ii) es opcionalmente reemplazado por R^{17},
R^{18} o
R^{20};
cada uno de R^{15} y R^{16} es
independientemente -H, -OH, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, -Oalquilo, -Oarilo,
-Oheteroarilo, -Oalquilarilo, o -Oalquilheteroarilo;
R^{17} es -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2},
-CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2},
-N(H)C(O)H,
-N(H)C(O)NH_{2},
-S(O)_{2}NH_{2}, -C(O)H, -alquilo,
-cicloalquilo, -perfluoroalquilo, -O-alquilo,
-N(H)alquilo, -N(alquilo)_{2},
-CO_{2}alquilo, -C(O)N(H)alquilo,
-C(O)N(alquilo)_{2},
-N(H)C(O)alquilo,
-N(H)C(O)alquilo,
-N(H)C(O)N(H)alquilo,
-N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S(O)_{2}N(H)alquilo,
-S(O)_{2}N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S(O)_{2}alquilo o
-C(O)alquilo;
R^{18} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -O-arilo,
-O-heteroarilo, -O-alquilarilo,
-O-alquilheteroarilo, -N(H)arilo,
-N(arilo)_{2}, -N(H)heteroarilo,
-N(heteroarilo)_{2}, -N(H)alquilarilo,
-N(alquilarilo)_{2},
-N(H)alquilheteroarilo,
-N(alquilheteroarilo)_{2}, -S-arilo,
-S-heteroarilo, -S-alquilarilo,
-S-alquilheteroarilo, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -CO_{2}arilo,
-CO_{2}heteroarilo, -CO_{2}alquilarilo,
-CO_{2}alquilheteroarilo,
-C(O)N(H)arilo,
-C(O)N(arilo)_{2},
-C(O)N(H)heteroarilo,
-C(O)N(heteroarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilarilo,
-C(O)N(alquilarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heteroarilo, -S(O)_{2}-alquilarilo, -S(O)_{2}
alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo,
-S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(H)(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(heteroari-
lo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
-C(O)N(H)alquilheteroarilo, -C(O)N(alquilheteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}-arilo, -S(O)_{2}-heteroarilo, -S(O)_{2}-alquilarilo, -S(O)_{2}
alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo,
-S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(H)(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(heteroari-
lo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
R^{19} es -H, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo;
R^{20} es
-alquilo-R^{18};
m es 0 ó 1; y
X es O o S.
2. Un compuesto representado por la fórmula
(IV):
en la que Y
es:
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo del anillo es opcionalmente reemplazado por
-R^{4};
R^{1} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo, o
-alquilheteroarilo, en el que cada arilo o heteroarilo es
opcionalmente sustituido por R^{17} de forma única o múltiple.
R^{2} es un puente, -C(O)-,
-C(O)C(O)-, -S(O)_{2}-,
-OC(O)-, -N(H)C(O)-,
-N(H)S(O)_{2}-,
-N(H)C(O)C(O)-,
-CH=CHC(O)-, -OCH_{2}C(O)-,
-N(H)CH_{2}C(O)-,
-N(R^{19})C(O)-,
-N(R^{19})S(O)_{2}-,
-N(R^{19})C(O)C(O)-,
-N(R^{19})CH_{2}C(O)-, o
-C(O)C(=NOR^{11})-, siempre que R^{2} no es un
puente, R^{2} está unido al NH ligado al anillo de siete miembros
a través de carbonilo o sulfonilo;
R^{3} es -arilo, -heteroarilo, -cicloalquilo,
-alquilo, -N(alquilo)_{2};
R^{4} es NH_{2} o
-N(H)C(O)H;
R^{6} es -H, -CH_{2}OR^{9},
-CH_{2}SR^{10}, -CH_{2}N(H)R^{8},
-CH_{2}N(R^{9})R^{12}, -CHN_{2}, -CH_{2}F,
CH_{2}Cl, -C(O)N(R^{11})R^{12},
-R^{13}, o -R^{14};
R^{7} es -C(O)alquilo,
-C(O)cicloalquilo, -C(O)alquenilo,
-C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo,
-C(O)heterociclo, o
-C(O)alquilheterociclo;
R^{8} es -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
alquilheterociclo;
R^{9} es -H, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, o -P(O)R^{15}R^{16};
R^{10} es -alquilarilo o
-alquilheteroarilo;
cada uno de R^{11} y R^{12} es
independientemente -H, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{13} es -alquilarilo, -alquenilarilo,
-alquinilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{14} es
en el que cualquier hidrógeno unido
a (i) es opcionalmente reemplazado por R^{17} y cualquier
hidrógeno unido a (ii) es opcionalmente reemplazado por R^{17},
R^{18} o
R^{20};
cada uno de R^{15} y R^{16} es
independientemente -H, -OH, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, -alquilarilo -alquilheteroarilo, -Oalquilo, -Oarilo,
-Oheteroarilo, -Oalquilarilo, u -Oalquilheteroarilo;
R^{17} es -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NO_{2},
-CN, -NH_{2}, -CO_{2}H, -C(O)NH_{2},
-N(H)C(O)H,
-N(H)-C(O)NH_{2},
-S(O)_{2}NH_{2}, -C(O)H, -alquilo,
-cicloalquilo, -perfluoroalquilo, -O-alquilo,
-N(H)alquilo, -N(alquilo)_{2},
-CO_{2}alquilo, -C(O)N(H)alquilo,
-C(O)N(alquilo)_{2},
-N(H)C(O)alquilo,
-N(H)C(O)N(H)alquilo,
-N(H)C(O)N(alquilo)_{2},
-S(O)_{2}N(H)alquilo,
-S(O)_{2}N(alquilo)_{2},
-S-alquilo, -S(O)_{2}alquilo, o
-C(O)alquilo;
R^{18} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, -O-arilo,
-O-heteroarilo, -O-alquilarilo,
-O-alquilheteroarilo, -N(H)arilo,
-N(arilo)_{2}, -N(H)heteroarilo,
-N(heteroarilo)_{2}, N(H)alquilarilo,
N(alquilarilo)_{2},
-N(H)alquilheteroarilo,
N(alquilheteroarilo)_{2}, -S-arilo,
-S-heteroarilo, -S-alquilarilo,
-S-alquilheteroarilo, -C(O)arilo,
-C(O)heteroarilo, -C(O)alquilarilo,
-C(O)alquilheteroarilo, CO_{2}arilo,
-CO_{2}heteroarilo, -CO_{2}alquilarilo,
-CO_{2}alquilheteroarilo,
-C(O)N(H)arilo,
-C(O)N(arilo)_{2},
-C(O)N(H)heteroarilo,
-C(O)N(heteroarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilarilo,
-C(O)N(alquilarilo)_{2},
-C(O)N(H)alquilheteroarilo,
-C(O)N(alquilheteroarilo)_{2},
-S(O)_{2}arilo,
-S(O)_{2}heteroarilo,
-S(O)_{2}alquilarilo,
-S(O)_{2}
alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo,
-S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
alquilheteroarilo, -S(O)_{2}N(H)arilo, -S(O)_{2}N(H)heteroarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilarilo, -S(O)_{2}N(H)alquilheteroarilo,
-S(O)_{2}N(arilo)_{2}, -S(O)_{2}N(heteroarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilarilo)_{2}, -S(O)_{2}N(alquilheteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(H)arilo, -N(H)C(O)N(H)heteroarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilarilo, -N(H)C(O)N(H)alquilheteroarilo, -N(H)C(O)N(arilo)_{2}, -N(H)C(O)N(heteroarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilarilo)_{2}, -N(H)C(O)N(alquilheteroarilo)_{2};
R^{19} es -H, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo;
R^{20} es
-alquilo-R^{18};
m es 0 ó 1; y
X es O o S.
3. El compuesto según las reivindicaciones 1 ó 2,
en el que:
C es benzo
4. El compuesto según las reivindicaciones 1 ó 2,
en el que:
Y es
C es benzo
R^{1} es -fenilo, -naftilo, o -isoquinolilo,
cada uno opcionalmente sustituido por R^{17} de forma única o
múltiple, en el que R^{17} es -OH, -NH_{2}, -Cl, -F, -Oalquilo,
o -N(alquilo)_{2};
R^{2} es -C(O)-,
-S(O)_{2}-, -C(O)C(O)-, o
-CH_{2}C(O)-;
R^{3} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -fenilo,
-2-piridinilo, -3-piridinilo,
-4-piridinilo, o -tiazolilo;
R^{5} es -OH; y
R^{6} es -H o -R^{14}, en el que X es O;
siempre que cuando -R^{14} es (i), R^{17} es
-Oalquilo, -F o -Cl, y
siempre que cuando -R^{14} es (ii), R^{18} es
-arilo, en el que arilo es fenilo;
R^{7} es -C(O)alquilo;
R^{8} es -metilo, -etilo,
-n-propilo, -isopropilo, -ciclopentilo, -fenetilo, o
-bencilo; y
m es 0
5. El compuesto según la reivindicación 4
seleccionado de:
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6. Un compuesto representado por la estructura
del compuesto 14:
7. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones
1-6.
8. La utilización de un compuesto según una
cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para la
fabricación de una composición farmacéutica para tratar o prevenir
una enfermedad mediada por IL-1.
9. Un proceso para preparar un compuesto
representado por la fórmula (V):
(V)R^{21} ---
\delm{N}{\delm{\para}{H}} ---
R^{22}en la
que:
R^{21} es
C es benzo, en el que cualquier hidrógeno unido a
cualquier átomo del anillo es opcionalmente reemplazado por
R^{4};
R^{22} es:
cada R^{23} es independientemente
-alquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo,
-alquilheteroarilo, o
-alquilhe-
terociclo;
terociclo;
R^{1} es -arilo, -heteroarilo, -alquilarilo, o
-alquilheteroarilo, en el que cada arilo o heteroarilo es
opcionalmente sustituido por R^{17};
R^{2} es un puente, -C(O)-,
-C(O)C(O)-, -S(O)_{2}-,
-OC(O)-, -N(H)C(O)-,
-N(H)S(O)_{2}-,
-N(H)C(O)C(O)-,
-CH=CHC(O)-, -OCH_{2}C(O)-,
-N(H)CH_{2}C(O)-,
-N(R^{19})C(O)-,
-N(R^{19})S(O)_{2}-,
-N(R^{19})C(O)C(O)-, o
-N(R^{19})CH_{2}C(O), o
-C(O)C(=NOR^{11})-, siempre que cuando R^{2} no es
un puente, R^{2} está unido al NH ligado al anillo de 7 miembros a
través de carbonilo o sulfonilo;
R^{3} es -arilo, -heteroarilo, -cicloalquilo,
-alquilo, -N(alquilo)_{2},
R^{4} es NH_{2} o
-N(H)C(O)H;
R^{11} es -H, -alquilo, -arilo, -heteroarilo,
-cicloalquilo, alquilarilo, o -alquilheteroarilo;
R^{19} es -H, -alquilo, -cicloalquilo, -arilo,
-heteroarilo, -alquilarilo, -alquilheteroarilo, o
-alquilheterociclo; y
m es 1 ó 2;
comprendiendo las etapas de:
a) hacer reaccionar un compuesto representado
mediante la fórmula (VI): R^{21}-OH, en la que
R^{21} es como se definió anteriormente, con un compuesto
representado mediante la fórmula (VII):
en la que R^{23} es como se
definió anteriormente, en presencia de un disolvente inerte,
trifenilfosfina, un limpiador nucleofílico, y
tetraquis-trifenil-fosfina
paladio(0), a temperatura ambiente bajo una atmósfera inerte;
y
b) añadir a la mezcla formada en la etapa a),
HOBT y EDC.
10. El proceso según la reivindicación 9, en la
que:
C es benzo.
11. El proceso según la reivindicación 9, en la
que:
C es benzo
R^{1} es fenilo, naftilo, o isoquinolinilo,
cada uno opcionalmente sustituido por R^{17} de forma única o
múltiple, en el que R^{17} es -OH, -NH_{2}, -Cl, -F, -Oalquilo,
o -N(alquilo)_{2};
R^{2} es -C(O)-,
-S(O)_{2}-, -C(O)C(O)-, o
-CH_{2}C(O)-;
R^{3} es metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, fenilo, o tiazolilo; y
m es 1.
12. El proceso según una cualquiera de las
reivindicaciones 9-11, en el que el disolvente
inerte es CH_{2}Cl_{2}, DMF, o una mezcla de CH_{2}Cl_{2} y
DMF.
13. El proceso según una cualquiera de las
reivindicaciones 9-11, en el que el limpiador
nucleofílico es dimedona, morfolina o ácido
dimetil-barbitúrico.
14. El proceso según la reivindicación 13, en el
que el limpiador nucleofílico es ácido
dimetil-barbitúrico.
15. El proceso según la reivindicación 13, en el
que el disolvente inerte es CH_{2}Cl_{2}, DMF o una mezcla de
CH_{2}Cl_{2} y DMF.
16. El proceso según la reivindicación 15, en el
que el limpiador nucleofílico es ácido
dimetil-barbitúrico.
17. La utilización de un compuesto según una
cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para la
fabricación de un medicamento para utilizar como tratamiento o
prevención de una enfermedad seleccionada de una enfermedad mediada
por IL-1, una enfermedad mediada por apoptosis, una
enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad
destructiva del hueso, una alteración proliferativa, una enfermedad
infecciosa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad necrótica,
una enfermedad por exceso de ingesta de alcohol, una enfermedad
mediada por virus, artrosis, pancreatitis, asma, síndrome de distrés
respiratorio del adulto, glomerulonefritis, artritis reumatoide,
lupus eritematoso sistémico, esclerodermia, tiroiditis crónica,
enfermedad de Graves, gastritis autoinmune, diabetes mellitas
insulín-dependiente (Tipo I), anemia hemolítica
autoinmune, neutropenia autoinmune, trombocitopenia, hepatitis
crónica activa, miastenia gravis, enfermedad inflamatoria
intestinal, enfermedad de Crohn, psoriasis, enfermedad injerto
contra huésped, osteoporosis, alteración ósea relacionada con
mieloma múltiple, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide
crónica, melanoma metastático, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple,
sepsis, shock séptico, Shigellosis, enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson, isquemia cerebral, isquemia miocárdica,
atrofia muscular espinal, esclerosis múltiple, encefalitis
relacionada con SIDA, encefalitis relacionada con HIV,
envejecimiento, alopecia, daño neurológico debido a accidente
cerebro-vascular, hepatitis B, hepatitis C,
hepatitis G, fiebre amarilla, fiebre del dengue o encefalitis
Japonesa.
18. La utilización según la reivindicación 17, en
la que la enfermedad es artrosis, pancreatitis aguda, artritis
reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn,
psoriasis o enfermedad de Alzheimer.
19. La utilización de un compuesto según una
cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para la
fabricación de un medicamento para inhibir una función mediada por
la ICE en un paciente.
20. La utilización de un compuesto según una
cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la
fabricación de un medicamento para disminuir la producción de IGIF o
IFN-\gamma en un paciente.
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