ES2230337T3 - Derivados de oxindol. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I) o una sal, solvato o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: R1 es (CR4R5)nNR2R3; n es 1 ó 2; R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo C1- 6, alquenilo C2-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, cicloalquilo, heterociclilo, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo, heteroaril-alquilo C1-6, o R2 y R3 junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heteroarilo de 5 a 7 miembros o heterocíclico de 5 ó 6 miembros, conteniendo opcionalmente ambos anillos 1 ó 2 átomos adicionales de oxígeno, azufre, S(O)m, o nitrógeno, estando dicho átomo de nitrógeno adicional opcionalmente sustituido con un grupo alquilo o arilo C1-6; m es 0, 1 ó 2; R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo C1- 6; y en el que cualquiera de dichos grupos alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, cicloalquilo, heterociclilo, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo y heteroaril-alquilo C1-6 pueden estar opcionalmente sustituidos con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en

Description

Derivados de oxindol.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a derivados de oxindol, métodos para la preparación de tales oxindoles, y el uso de tales oxindoles en el tratamiento de ciertas enfermedades o padecimientos. En concreto, la presente invención se refiere a derivados de oxindol útiles como inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina y al uso de los oxindoles en el tratamiento de trastornos mediados por la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina.

Las proteinquinasas catalizan la fosforilación de diversos residuos de proteínas, incluyendo proteínas implicadas en la regulación del crecimiento y diferenciación celular. El crecimiento, la diferenciación, el metabolismo y la función celular están muy estrictamente controlados en eucariotas superiores. La capacidad de una célula de responder rápidamente y de manera adecuada a la serie de señales externas e internas que recibe continuamente es de vital importancia en el mantenimiento de un equilibrio entre estos procesos (Rozengurt, Current Opinion in Cell Biology 1992, 4, 161-5; Wilks, Progress in Growth Factor Research 1990, 2, 97-111). La pérdida de control sobre la regulación celular puede conducir con frecuencia a una función celular anormal o a la muerte, dando como resultado con frecuencia un estado de enfermedad en el organismo madre. Las proteinquinasas juegan un papel crítico en el control del crecimiento y la diferenciación celular y son mediadores llave de las señales celulares que conducen a la producción de factores de crecimiento y citoquinas. Véase, por ejemplo, Schlessinger y Ullrich, Neuron 1992, 9, 383. Ejemplos de tales quinasas incluyen: abl, ATK, bcr-abl, Blk, Brk, Btk, c-kit, c-met, c-src, CDK1, CDK2, CDK4, CDK6, cRaf1, CSF1R, CSK, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, ERK, Fak, fes, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FGFR5, Fgr, FLK-4, flt-1, Fps, Frk, Fyn, GSK, Hck, IGF-1R, INS-R, Jak, JNK, KDR, Lck, Lyn, MEK, p38, PDGFR, PIK, PKC, PYK2, tie1, tie2, TRK, UL97, VEGF-R 1, VEGF-R 2, Yes y Zap70.

La actividad inadecuada de la proteinquinasa se ha asociado con una amplia diversidad de estados de enfermedad y, por lo tanto, se han identificado tales quinasas como objetivos en el tratamiento de los mismos. Por ejemplo, las proteinquinasas han estado involucradas como objetivos en los trastornos del sistema nervioso central tales como Alzheimer (Mandelkow, E.M. et al. FEBS Lett. 1992, 314,315; Sengupta, A. et al. Mol. Cell. Biochem. 1997, 167,99), sensación de dolor (Yashpal, K.J. Neurosci. 1995, 15, 3.263-72), trastornos inflamatorios tales como artritis (Badger, J. Pharm. Exp. Ther. 1996, 279,1.453), psoriasis (Dvir, et al., Cell Biol. 1991, 113, 857), enfermedades de hueso tales como osteoporosis (Tanaka et al., Nature, 1996, 383, 528), cáncer (Hunter y Pines, Cell 1994, 79, 573) aterosclerosis (Hajjar y Pomerantz, FASEB J. 1992, 6, 2.933), trombosis (Salari, FEBS 1990, 263, 104), trastornos metabólicos tales como diabetes (Borthwick, A.C. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995, 210, 738), trastornos proliferantes de los vasos sanguíneos tales como angiogénesis (Strawn et al., Cancer Res. 1996, 56, 3.540; Jackson et al. J. Pharm. Exp. Ther. 1998, 284, 687), restenosis (Buchdunger et al., Proc. Nat. Acad. Sci USA 1991, 92, 2.258), enfermedades autoinmunes y rechazo de transplante (Bolen y Brugge, Ann. Rev. Immunol. 1997, 15, 317) y enfermedades infecciosas tales como infecciones víricas (Littler, E. Nature 1992, 358, 160) y fúngicas (Lum, R.T.PCT Int. Appl., documento WO 9805335 A1 980212).

También se ha demostrado que las señales mediadas por proteinquinasas controlan el crecimiento, la muerte y la diferenciación de la célula regulando los procesos del ciclo celular (Massague y Roberts, Current Opinion in Cell Biology 1995, 7, 769-72). El desarrollo del ciclo celular eucariótico se controla mediante una familia de proteinquinasas denominadas quinasas dependientes de ciclina (CDKs, del Inglés "Cyclin Dependent Kinases") y su interacción con una familia de proteínas llamadas ciclinas (Myerson, et al. EMBO Journal 1992, 11, 2.909-17). La activación e inactivación coordinada de diferentes complejos ciclina/CDK son necesarias para el desarrollo normal del ciclo celular (Pines, Trends in Biochemical Sciences 1993, 18, 195-7; Sherr, Cell 1993, 73, 1.059-65). Tanto las transiciones críticas G1-S como G2-M están controladas mediante la activación de diferentes actividades ciclina/CDK. En G1, se piensa que tanto la ciclina D/CDK4 como la ciclina E/CDK2 median el comienzo de la fase S. El desarrollo controlado de la fase G1 del ciclo celular es dependiente de la activación de CDK4 mediante ciclina D. Esta activación da como resultado la fosforilación de la proteína retinoblastoma (pRb) la cual, a continuación, se disocia de su pareja de unión, E2F. La liberación de E2F del complejo inactivo pRb-E2F permite a E2F regular la transcripción de los genes múltiples requeridos para la síntesis de ADN. Bajo condiciones fisiológicas normales la ruta de la pRb está estrictamente regulado por proteínas (p16^{INK4A}, p27, p21) que bloquean la actividad catalítica del complejo CDK4/ciclina D. La evidencia genética humana soporta esta señal p16^{INK4A}/CDK4/ciclina D/pRb como una ruta supresora de tumor que frecuentemente se desregula en muchos cánceres humanos.

Se han descrito muchos mecanismos de desregulación de la pRb. Estos incluyen la delección del locus p16^{INK4A} y echar abajo la regulación de la expresión del gen p16^{INK4A}. La proteína p16^{INK4A} es un inhibidor de CDK4 intracelular que se da de manera natural que funciona como un gen supresor de tumor. Un mecanismo adicional de desregulación de esta ruta es la sobreexpresión de la ciclina D1, la subunidad de activación de CDK4. El efecto neto propuesto es un incremento en la actividad de CDK4 y pRb hiperfosforilado.

Un método de inhibición de la actividad de CDK4 en un mamífero que sufre de un susceptible tumor restablecería la pRb a un estado activo supresor de tumor. La consecuencia de restablecer la función de pRb sería causar la detención del ciclo celular de células normales mientras que las células tumorales en el mamífero experimentarían apoptosis. La proteína pRb hipofosforilada regula positivamente la función apoptótica de p53 vía una interacción con mdm2 (J.K. Hsieh et al. Molecular Cell 3, 181, 1999). La pRb hipofosforilada previene la degradación mediada por mdm2 de la p53, dando como resultado la activación de la p53 y la apoptosis de las células tumorales.

Por tanto, es de suponer que un método de inhibición de la actividad de CDK4 serviría para matar de manera selectiva los tumores humanos, con estado de la Rb tipo natural, en los cuales la p16^{INK4A}/CDK4/ciclina D/pRb está desregulada. La administración de un agente capaz de inhibir de manera selectiva la actividad de CDK4 debería proporcionar un tratamiento de los cánceres humanos positivos en Rb con pérdida de expresión de la p16^{INK4A} y/o sobreexpresión de la proteína ciclina D1 y, por tanto, el bloqueo de la supervivencia de la célula tumoral.

Las construcciones antisentido para la ciclina D1 sensibilizan las células tumorales humanas para la quimioterapia, sugiriendo que la actividad de CDK4 es necesaria para la supervivencia de la célula tumoral en respuesta al daño al ADN. (Korman et al. Cancer Research, 59, 3.505, 1999). Además, la sobreexpresión de la proteína p16^{INK4A} sensibiliza las células tumorales a la radiación (X.Y. Fu et al. J. Cáncer Res. Clin. Oncol., 124, 621, 1998).

Hay una continua necesidad en el campo de la oncología de tratamientos nuevos y más eficaces para el cáncer. Debido a que la CDK4 puede servir como activador general de la división celular y suprimir la apoptosis de las células tumorales, inhibidores específicos de CDK4 pueden proporcionar un tratamiento eficaz para el cáncer y otros trastornos hiperproliferantes. Actualmente, hay una necesidad insatisfecha de compuestos moleculares pequeños que se puedan sintetizar fácilmente y que sean fuertes inhibidores de los complejos CDK4/ciclina. Los presentes inventores ya han descubierto nuevos compuestos derivados de oxindol que inhiben de manera selectiva la actividad catalítica de CDK4/ciclina D y/o CDK2/ciclina E proporcionando de ese modo nuevas estrategias de tratamiento para los aquejados de cáncer y otros trastornos mediados por la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina.

El documento WO 99/15500 describe compuestos de fórmula (A):

1

en los que X es N, CH, CCF_{3} o C(alifático C_{1-12}); R^{4} es ácido sulfónico, alifático C_{1-12}-sulfonilo, sulfonil-alifático C_{1-12}, alifático C_{1-12}-sulfonil-alifático C_{1-6}, alifático C_{1-6}-amino, R^{7}-sulfonilo, R^{7}-sulfonil-alifático C_{1-12}, R^{7}-aminosulfonilo, R^{7}-aminosulfonil-alifático C_{1-12}, R^{7}-sulfonilamino, R^{7}-sulfonilamino-alifático C_{1-12}, aminosulfonilamino, di-alifático C_{1-12} amino, di-alifático C_{1-12} aminocarbonilo, di-alifático C_{1-12} aminosulfonilo, di-alifático C_{1-12} aminosulfonil-alifático C_{1-12}, (R^{8})_{1-3}-arilamino, (R^{8})_{1-3}-arilsulfonilo, (R^{8})_{1-3}-aril-aminosulfonilo, (R^{8})_{1-3}-aril-sulfonilamino, Het-amino, Het-sulfonilo, Het-aminosulfonilo, aminoiminoamino o aminoiminoaminosulfonilo; R^{5} es hidrógeno; y además en los que R^{4} y R^{5} opcionalmente están unidos para formar un anillo fusionado; y R^{1} a R^{3} son tal como se describen en la presente memoria; formulaciones farmacéuticas que los comprenden y su uso en terapia, especialmente en el tratamiento de enfermedades mediadas por la actividad de CDK2, tales como la alopecia inducida por la quimioterapia o radioterapia de cáncer.

El documento WO 99/10325 describe compuestos de fórmula general (B):

2

en los que R^{1} es H o está opcionalmente unido con R^{2} para formar un anillo fusionado seleccionado entre el grupo que consiste en anillos de arilo, heteroarilo o heterociclilo de cinco a diez miembros; R^{2} y R^{3} son independientemente H, HET, arilo, alifático C_{1-12}, CN, NO_{2}, halógeno, R^{10}, -OR^{10}, -SR^{10}, -S(O)R^{10}, -SO_{2}R^{10}, -NR^{10}R^{11}, -NR^{11}R^{12}, -NR^{12}COR^{11}, -NR^{12}CO_{2}R^{11}, -NR^{12}CONR^{11}R^{12}, -NR^{12}SO_{2}R^{11}, -NR^{12}C(NR^{12})NHR^{11}, -COR^{11}, -CO_{2}R^{11}, -CONR^{12}R^{11}, -SO_{2}NR^{12}R^{11}, -OCONR^{12}R^{11}, C(NR^{12})NR^{12}R^{11}; R^{6} y R^{7} son independientemente halógeno, CN, NO_{2}, -CONR^{10}R^{11}, -SO_{2}NR^{10}R^{11}, -NR^{10}R^{11}, o OR^{11}; R^{8} es OH, NHSO_{2}R^{12} o NHCOCF_{3}; y HET, R^{4}, R^{5}, R^{8}, R^{10}, R^{11} y R^{12} son tal como se definen en la presente memoria; y su uso en terapia, especialmente en el tratamiento de trastornos mediados por la quinasa cRaf1.

El documento WO 00/56710 describe compuestos de fórmula (C):

3

en los que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8}, A, D, X, Y y Z son tal como se definen en la presente memoria, los cuales muestran actividad inhibidora de la proteína tirosina quinasa y de la proteína serina/treonina quinasa.

Compendio de la invención

En un aspecto de la presente invención, se ha proporcionado un compuesto de fórmula (I)

4

o una sal, solvato o una amida o éster farmacéuticamente aceptable del mismo; en el que:

R^{1} es -(CR^{4}R^{5})_{n}NR^{2}R^{3};

n es 1 ó 2;

R^{2} y R^{3} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6}, cicloalquilo, heterociclilo, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo, heteroaril-alquilo C_{1-6}, o R^{2} y R^{3} junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heteroarilo de 5 a 7 miembros o heterocíclico de 5 ó 6 miembros, conteniendo opcionalmente ambos anillos 1 ó 2 átomos adicionales de oxígeno, azufre, S(O)_{m}, o nitrógeno, estando dichos 1 ó 2 átomos de nitrógeno adicionales opcionalmente sustituidos con un grupo alquilo o un grupo arilo C_{1-6};

m es 0, 1 ó 2;

R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1-6}; y

en el que cualquiera de dichos grupos alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6}, cicloalquilo, heterociclilo o heterocíclico, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo y heteroaril-alquilo C_{1-6} pueden estar opcionalmente sustituidos con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, CF_{3} y
N(CH_{3})_{2}.

En un segundo aspecto de la presente invención, se ha proporcionado una composición farmacéutica que incluye una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal, solvato o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más vehículos, diluyentes y excipientes farmacéuticamente aceptables.

En un cuarto aspecto de la presente invención, se ha proporcionado un compuesto de fórmula (I), una sal, solvato o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo para usarse en terapia.

En un quinto aspecto de la presente invención, se ha proporcionado el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal, solvato o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para usarse en el tratamiento de un trastorno mediado por la actividad inadecuada de CDK4.

Descripción detallada de la invención

Tal como se usa en la presente memoria, el término "cantidad eficaz" quiere decir la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que suscitará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que está siendo buscada, por ejemplo, por un investigador o médico. Además, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" quiere decir cualquier cantidad que, en comparación con un correspondiente sujeto que ha recibido dicha cantidad, da como resultado la mejora del tratamiento, curación, prevención o el mejoramiento de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en el índice de progreso de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para aumentar la función fisiológica normal.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "alquilo" se refiere a un hidrocarbono de cadena lineal o ramificada opcionalmente sustituido con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2} y contiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, alquilo C_{1-6} quiere decir un alquilo lineal o ramificado que contiene al menos 1, y como mucho 6, átomos de carbono. Ejemplos de grupos "alquilo" tal como se usa en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a: metilo, etilo, 2-hidroxietilo, 2-metoxietilo, n-butilo, n-pentilo, isobutilo o isopropilo.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "alquenilo" se refiere a un radical de hidrocarbono de cadena lineal o ramificada que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono, opcionalmente sustituido con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2} y contiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, alquenilo C_{1-6} quiere decir un alquenilo lineal o ramificado que contiene al menos 1, y como mucho 6, átomos de carbono. Ejemplos de grupos "alquenilo" incluyen, pero no se limitan a: etenilo, propenilo y butenilo.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "cicloalquilo" se refiere a un anillo de hidrocarbono cíclico no aromático que tiene de tres a 12 átomos de carbono opcionalmente sustituidos con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2}. "Cicloalquilo" incluye, pero no se limita a: ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo o ciclooctilo.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "heterocíclico" o el término "heterociclilo" se refiere a un sistema de anillo de hidrocarbono cíclico no aromático saturado o parcialmente saturado que tiene de tres a 12 carbonos los cuales también contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre O, S ó N. Dicho sistema de anillo opcionalmente puede estar sustituido con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2}. Ejemplos de "heterociclos" incluyen, pero no se limitan a: tetrahidrofurano, dihidropirano, tetrahidropirano, pirano, oxetano, tietano, 1,4-dioxano, 1,3-dioxano, 1,3-dioxalano, piperidina, 4-hidroxi-1-piperidina, piperazina, tetrahidropirimidina, pirrolidina, morfolina, tiomorfolina, tiazolidina, oxazolidina, tetrahidrotiopirano o tetrahidrotiofeno.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "heteroarilo" se refiere a un anillo aromático de cinco a siete miembros monocíclico, o a un sistema de anillo aromático bicíclico fusionado que comprende dos de los anillos aromáticos de cinco a siete miembros monocíclicos. Estos anillos de heteroarilo contienen uno o más heteroátomos de nitrógeno, azufre u oxígeno, en los que los N-óxidos y los óxidos y dióxidos de azufre son sustituciones permisibles de heteroátomo y opcionalmente pueden estar sustituidos con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2}. Ejemplos de grupos "heteroarilo" usados en la presente memoria incluyen: furano, tiofeno, pirrol, imidazol, pirazol, triazol, tetrazol, tiazol, oxazol, isoxazol, oxadiazol, tiadiazol, isotiazol, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, benzofurano, benzotiofeno, indol e indazol.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "heteroarilalquilo" se refiere a un grupo heteroarilo tal como el descrito anteriormente sustituido con un grupo alquilo que contiene el número especificado de átomos de carbono. El grupo "heteroarilalquilo" opcionalmente puede estar sustituido con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2}. Un ejemplo de un "heteroarilalquilo" tal como se usa en la presente memoria incluye, pero no se limita a, 4-piridinilmetilo.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "alcoxi" se refiere al grupo R_{a}O-, en el que R_{a} es un alquilo sustituido opcionalmente con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2} y contiene el número especificado de átomos de carbono.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "alcoxialquilo" se refiere al grupo R_{a}OR_{b} -, en el que R_{a} es un alquilo y R_{a}O es un alcoxi tal como el descrito anteriormente sustituido opcionalmente con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, -CF_{3} y -N(CH_{3})_{2} y ambos de los cuales contienen el número especificado de átomos de carbono.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "opcionalmente" quiere decir que el(los) acontecimiento(s) posteriormente descrito(s) puede(n) o no puede(n) darse, e incluye(n) tanto acontecimiento(s), que se da(n), como acontecimiento(s) que no se da(n).

Los compuestos de la invención incluyen ciertos derivados farmacéuticamente aceptables, los cuales son un éster o una amida de un compuesto de fórmula (I). Tales derivados están claros para los expertos en la técnica, sin excesiva experimentación, y con referencia a la enseñanza de Burger's Medicinal Chemistry And Drug Discovery, 5º Edición, Vol. 1: Principles and Practice.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "solvato" se refiere a un complejo de estoiquiometría variable formado por un soluto (en esta invención, un compuesto de fórmula (I) o una sal o derivado fisiológicamente funcional del mismo) y un disolvente. Tales disolventes, para los propósitos de esta invención, no pueden interferir con la actividad biológica del soluto. Ejemplos de disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, agua, metanol, etanol y ácido acético. Preferiblemente el disolvente usado es un disolvente farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen agua, etanol y ácido acético. Más preferiblemente el disolvente usado es agua.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "sustituido" se refiere a la sustitución con el mencionado sustituyente o sustituyentes, permitiéndose grados múltiples de sustitución si no se indica lo contrario.

Ciertos compuestos descritos en la presente memoria contienen uno o más átomos quirales, o pueden de lo contrario ser capaces de existir como dos enantiómeros. Los compuestos de esta invención incluyen mezclas de enantiómeros así como enantiómeros purificados o mezclas enantioméricamente enriquecidas. También se incluyen en el alcance de la invención los isómeros individuales de los compuestos representados por la anterior fórmula (I) así como por cualquier mezcla completamente o parcialmente equilibrada de los mismos. La presente invención también cubre los isómeros individuales de los compuestos representados por las anteriores fórmulas como mezclas con isómeros de los mismos en los que uno o más centros quirales están invertidos.

En una realización, R^{2} y R^{3} son cada uno alquilo C_{1-6}. En una realización preferida, R^{2} es metilo y R^{3} es metilo, etilo, propilo, isopropilo, isobutilo, hidroxietilo, metoxietilo, bencilo o metilpiperidinilo.

En otra realización, R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, conteniendo opcionalmente dicho anillo 1 ó 2 átomos adicionales de nitrógeno, nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno o S(O)_{m}. En una realización preferida, dicho anillo es un anillo de piperidina, morfolina o piperazina. En una realización preferida alternativa, R^{2} y R^{3} junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de piperazina en el que el nitrógeno adicional está sustituido con un grupo metilo.

En otra realización, R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de heteroarilo de 5 a 7 miembros, conteniendo opcionalmente dicho anillo 1 ó 2 átomos adicionales de nitrógeno, nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno o S(O)_{m}. En una realización preferida, el anillo es un anillo de imidazol.

En una realización, R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo. En una realización preferida, R^{4} y R^{5} son cada uno hidrógeno.

En otra realización, R^{2} y R^{3} son cada uno alquilo C_{1-6} y R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo. En una realización preferida R^{2} es metilo; R^{3} es etilo, propilo, isopropilo, isobutilo, hidroxietilo, metoxietilo, bencilo o metilpiperidinilo y R^{4} y R^{5} son cada uno hidrógeno.

En otra realización, R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros o un anillo de heteroarilo de 5 a 7 miembros, conteniendo opcionalmente un nitrógeno adicional o nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno o S(O)_{m} y R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo. En una realización preferida dicho anillo es un anillo de piperidina, morfolina o piperazina y R^{4} y R^{5} son hidrógeno. En una realización preferida alternativa, R^{2} y R^{3} junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de piperazina en el que el nitrógeno adicional está sustituido con un grupo metilo y R^{4} y R^{5} son independientemente cada uno hidrógeno.

En otra realización, R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de heteroarilo de 5 a 7 miembros, conteniendo opcionalmente dicho anillo 1 ó 2 átomos adicionales de nitrógeno, nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno o S(O)_{m} y R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo. En una realización preferida, el anillo es un anillo de imidazol y R^{4} y R^{5} son independientemente cada uno hidrógeno.

Las sales de los compuestos de la presente invención pueden comprender sales de adición ácida derivadas de un nitrógeno o un sustituyente del compuesto de fórmula (I). Las sales abarcadas dentro del término "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a las sales no tóxicas de los compuestos de esta invención. Las sales representativas incluyen las siguientes sales: acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, maleato de monopotasio, mucato, napsilato, nitrato, N-metilglucamina, oxalato, pamoato(embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato de potasio, estearato de sodio, subacetato, succinato, tannato, tartrato, teoclato, tosilato, trietiyoduro, trimetilamonio y valerato. Otras sales, las cuales no son farmacéuticamente aceptables, pueden ser útiles en la preparación de los compuestos de esta invención y estas forman un aspecto adicional de la invención.

Ejemplos específicos de los compuestos de la presente invención incluyen los siguientes:

1-[(Z)-(4-Dimetilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-Dietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)etilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metilpropilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)bencilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-hidroxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metoxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Morfolinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(1-Piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Hidroxi-1-piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Metil-1-piperazinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(1-Imidazoil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-(1-metil-4-piperidinil)aminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-
ona; y

sales, particularmente sales farmacéuticamente aceptables, solvatos y ésteres o amidas farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Los compuestos de esta invención se pueden producir mediante una diversidad de métodos, incluyendo la química estándar. Cualquier variable previamente definida continuará teniendo el significado previamente definido si no se indica lo contrario. A continuación, se exponen métodos sintéticos generales ilustrativos y entonces se preparan compuestos específicos de la invención en los Ejemplos de trabajo.

Por ejemplo, un método general (A) para preparar compuestos de fórmula general (I) implica la reacción de un compuesto de fórmula general (II)

5

en el que L es un grupo saliente tal como el dimetilamino o etoxi, con compuestos de fórmula general (III)

6

en los que R^{1} es tal como se ha definido anteriormente.

El método general (A) se puede llevar a cabo fácilmente mezclando un compuesto de fórmula general (II) con un compuesto de fórmula general (III) en un disolvente adecuado, adicionando un ácido y calentando opcionalmente la muestra. Generalmente, el disolvente es un alcohol inferior tal como metanol, etanol, 2-propanol y similares, y el ácido puede ser, por ejemplo, ácido hidroclórico o ácido metanosulfónico.

7

Los compuestos de fórmula general (II) se pueden obtener haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (IV) con un dimetilformamida dialquilacetal, para dar compuestos de fórmula (II) en los que L es Me_{2}N, o con un ortoformato de trialquilo o un dialcoximetilacetato, para dar compuestos de fórmula (II) en los que L es un grupo alcoxi. Convenientemente, un dimetilformamida dialquilacetal es el dimetilformamida dimetil acetal o el dimetilformamida di-ter-butil acetal y la reacción se lleva a cabo mezclando el compuesto de fórmula general (IV) con el dimetilformamida dialquilacetal y calentando opcionalmente la reacción. Los ortoformatos de trialquilo preferidos incluyen el ortoformato de trimetilo y el ortoformato de trietilo. De una manera similar, se puede emplear el acetato de dietoximetilo para preparar compuestos de fórmula general (II) en los que L es EtO-.

8

Los compuestos tales como los de fórmula (IV) se pueden preparar usando procedimientos descritos en la bibliografía. Se han obtenido lactamas similares a los compuestos de fórmula (IV) mediante la reducción Wolff-Kischner de derivados carbonilo tales como los de fórmula (V). Si no, se pueden obtener los compuestos de fórmula (IV) mediante un procedimiento que implica el tratamiento de una amina tal como la de fórmula (VI) con un agente clorante seguido de metiltioacetato de etilo y una base para dar un derivado de metiltio. La desulfuración usando, por ejemplo, cinc activado da compuestos tales como los de fórmula (IV).

9

Un método preferido implica tratar un derivado de centona tal como el de fórmula (V) con hidrazina en un disolvente alcohólico tal como etanol y calentar la mezcla para dar una hidrazona tal como la de fórmula (VII). El tratamiento de una hidrazona tal como la de fórmula (VII) con una base en disolución alcohólica y el calentamiento de la mezcla proporciona la lactama tal como la de fórmula (IV). Generalmente, la base es un alcoxido tal como el etoxido de sodio y el disolvente es etanol.

10

Las cetonas tal como las de fórmula (V) se pueden obtener a partir de aminas tales como las de fórmula (VI) mediante un procedimiento que implica el tratamiento de la amina con cloral seguido de hidrocloruro de hidroxilamina. A continuación, se calienta la hidroxiiminoacetamida resultante de fórmula (VIII) en ácido sulfúrico para dar la cetona de fórmula (V).

Se cree que los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y ésteres y amidas farmacéuticamente aceptables, tienen actividad anticancerígena como resultado de la inhibición de la proteinquinasa CDK4 y su efecto sobre las líneas celulares seleccionadas cuyo crecimiento es independiente de la actividad de la proteinquinasa CDK4.

Así, la presente invención también proporciona compuestos de fórmula (I) y sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables o sus ésteres y amidas farmacéuticamente aceptables, para usarse en terapia médica, y concretamente en el tratamiento de trastornos mediados por la actividad inadecuada de CDK4.

La actividad inadecuada de CDK4 referida en la presente memoria es cualquier actividad de CDK4 que se desvía de la actividad normal de CDK4 esperada en un sujeto mamífero concreto. La actividad inadecuada de CDK4 puede tomar la forma de, por ejemplo, un incremento anormal en la actividad, o una aberración en el ritmo y/o control de la actividad de CDK4. Entonces, dicha actividad inadecuada puede resultar de, por ejemplo, la sobreexpresión o mutación de la proteinquinasa conduciendo a una activación inadecuada o descontrolada. Además, también se entiende que la actividad de CDK4 no deseada puede residir en una fuente anormal, tal como una malignidad. Es decir, el nivel de actividad de CDK4 no tiene que ser anormal para considerarse inadecuada, es suficiente con que derive de una fuente anormal.

La presente invención se dirige a métodos de regulación, modulación o inhibición de CDK4 para la prevención y/o tratamiento de trastornos relacionados con la actividad no regulada de CDK4, que incluyen trastornos proliferantes celulares, trastornos metabólicos y trastornos de excesiva producción de citoquina. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en el tratamiento de ciertas formas de cáncer, se pueden usar para proporcionar efectos aditivos o sinérgicos con ciertas quimioterapias de cáncer existentes y/o se usan para restaurar la eficacia de ciertas radiaciones y quimioterapias de cáncer existentes.

Los compuestos de la presente invención son además útiles en el tratamiento de una o más enfermedades que aquejan a mamíferos, las cuales se caracterizan por la proliferación celular en las áreas de trastornos proliferantes de vasos sanguíneos, trastornos fibróticos, trastornos proliferantes de célula mesangial y enfermedades metabólicas. Los trastornos proliferantes de vasos sanguíneos incluyen artritis y restenosis. Los trastornos fibróticos incluyen cirrosis hepática y aterosclerosis. Los trastornos proliferantes de célula mesangial incluyen glomerulonefritis, nefropatía diabética, nefroesclerosis maligna, síndromes de microangiopatía trombótica, el rechazo de transplante de órganos y glomerulopatías. Los trastornos metabólicos incluyen psoriasis, diabetes mellitus, la curación de heridas crónicas, enfermedades de inflamación y neurodegenerativas.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno caracterizado por la actividad inadecuada de CDK4. En una realización preferida, el trastorno es cáncer.

Un aspecto adicional de la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de cáncer y tumores malignos.

El mamífero que requiere tratamiento con un compuesto de la presente invención es generalmente un ser humano.

Si es posible que, para usarse en terapia, se puedan administrar cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de fórmula (I), así como sus sales, solvatos y derivados fisiológicos funcionales como producto químico puro, es posible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. Por lo tanto, la invención proporciona además composiciones farmacéuticas que incluyen cantidades terapéuticamente eficaces de compuestos de la fórmula (I) y sus sales, solvatos y ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de la fórmula (I) y sus sales, solvatos y ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables, son tal como se han descrito anteriormente. El(Los) vehículo(s), diluyente(s) o excipiente(s) debe(n) ser aceptable(s) en el sentido de ser compatible(s) con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial(es) para su destinatario. De acuerdo con otro aspecto de la invención se ha proporcionado también un proceso para la preparación de una formulación farmacéutica que incluye mezclar un compuesto de la fórmula (I), o sales, solvatos y derivados funcionales fisiológicos del mismo, con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Las formulaciones farmacéuticas se pueden presentar en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosis. Tal unidad puede contener, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, preferiblemente de 70 mg a 700 mg, más preferiblemente de 5 mg a 100 mg de un compuesto de la fórmula (I) dependiendo del padecimiento a tratar, la vía de administración y la edad, peso y estado del paciente. Las formulaciones de dosificación unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis o subdosis diaria, tal como se enumeró anteriormente en la presente memoria, o una fracción adecuada de la misma, de un ingrediente activo. Además, se pueden preparar tales formulaciones farmacéuticas mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica.

Se pueden adaptar las formulaciones farmacéuticas para la administración mediante cualquier vía adecuada, por ejemplo, mediante la vía oral (incluyendo bucal o sublingual), rectal, nasal, local (incluyendo bucal, sublingual o transdérmica), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica). Tales formulaciones se pueden preparar mediante cualquier método conocido en la técnica farmacéutica, por ejemplo, asociando el ingrediente activo con el(los) vehículo(s) o excipiente(s).

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral se pueden presentar como unidades discretas tales como cápsulas o comprimidos: polvos o gránulos; disoluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones líquidas de agua en aceite.

Por ejemplo, para la administración oral en la forma de comprimido o cápsula, se puede combinar el componente de fármaco activo con un vehículo inerte farmacéuticamente aceptable no tóxico y oral tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan triturando el compuesto a un tamaño fino apropiado y mezclando con un vehículo farmacéutico similarmente triturado tal como un carbohidrato comestible como, por ejemplo, almidón o manitol. También pueden estar presente agentes aromatizantes, conservantes, dispersantes y colorantes.

Las cápsulas se realizan preparando una mezcla en polvo tal como se ha descrito anteriormente, y rellenando fundas de gelatina formadas. Se pueden añadir deslizantes y lubricantes tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilénglicol sólido a la mezcla en polvo antes de la operación de relleno. También se puede añadir un agente desintegrante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiera la cápsula.

Además, si se desea o es necesario, también se pueden incorporar a la mezcla ligantes apropiados, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes. Los ligantes apropiados incluyen: almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta lactosa, edulcorantes de maíz, gomas sintéticas y naturales tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilénglicol, ceras y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen: oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegradores incluyen, sin limitación: almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantato y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o troceando, añadiendo un lubricante y desintegrante y presionándolo en los comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo mezclando el compuesto, apropiadamente triturado, con un diluyente o base tal como los descritos anteriormente, y opcionalmente, con un ligante tal como la carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona, una disolución retardadora tal como la parafina, un acelerador de la resorción tal como una sal cuaternaria y/o una agente de absorción tal como bentonita, caolín o fosfato de dicalcio. Se puede granular la mezcla en polvo mojándola con un ligante tal como jarabe, pasta de almidón, mucílago de acacia o disoluciones de materiales celulósicos o poliméricos y haciéndola pasar a través de un filtro. Como alternativa a la granulación, se puede pasar la mezcla en polvo a través de la máquina de comprimido y el resultado son trozos imperfectamente formados rotos en gránulos. Se pueden lubricar los gránulos para prevenir que se peguen al comprimido formando dados por medio de la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. A continuación, se comprime la mezcla lubricada en comprimidos. Los compuestos de la presente invención también se pueden combinar con un vehículo inerte de libre fluidez y se comprimen en comprimidos directamente sin pasar por las etapas de granular o trocear. Se puede proporcionar un revestimiento protector claro u opaco que consiste en una cubierta sellante de laca, un revestimiento de azúcar o material polimérico y un revestimiento de cera de brillo. Se pueden añadir colorantes a estos revestimientos para distinguir diferentes dosificaciones unitarias.

Se pueden preparar fluidos orales tales como disolución, jarabes y elixires en forma de dosificación unitaria para que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el compuesto en una disolución acuosa apropiadamente aromatizada, mientras que los elixires se preparan por el uso de un vehiculizante alcohólico no tóxico. Las suspensiones se pueden formular dispersando el compuesto en un vehiculizante no tóxico. También se pueden añadir solubilizadores y emulsionantes tales como alcoholes isostearílico etoxilados y éteres de polioxi etilensorbitol, conservantes, aditivos de aroma tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.

Si es adecuado, se pueden microencapsular las formulaciones de dosificación unitaria para la administración oral. También se puede preparar la formulación para prolongar o mantener la liberación, por ejemplo, revistiendo o incrustando material en partículas en polímeros, ceras o similares.

Los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables, también se pueden administrar en forma de sistemas de reparto de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas se pueden formar a partir de una diversidad de fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables, también se pueden repartir mediante el uso de anticuerpos monoclonales como vehículos individuales a los cuales se asocian las moléculas del compuesto. Los compuestos también se pueden asociar a polímeros solubles como vehículos de fármaco dirigibles. Tales polímeros pueden incluir: polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol o polietilenoxidopolilisina sustituida con residuos de palmitoil. Además, los compuestos se pueden asociar a una clase de polímeros biodegradables útiles para conseguir la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, caprolactona polepsilon, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros en bloque amfipáticos o reticulados de hidrogeles.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica se pueden presentar como parches discretos destinados a mantener en intimo contacto con la epidermis del destinatario durante un periodo de tiempo prolongado. Por ejemplo, se puede liberar el ingrediente activo del parche mediante iontoforesis tal como generalmente se describe en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración local se pueden formular como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, disoluciones, pastas, geles, pulverizadores, aerosoles o aceites.

Para los tratamientos de ojos u otros tejidos externos, por ejemplo, boca y piel, las formulaciones preferiblemente se aplican como una crema o pomada local. Si se formula en una pomada, se puede emplear el ingrediente activo o con una base de parafina o de pomada miscible en agua. Si no, el ingrediente activo se puede formular en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para las administraciones locales a los ojos incluyen gotas de ojos en las que el ingrediente activo está disuelto o suspendido en un vehículo apropiado, especialmente un disolvente acuoso.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración local en la boca incluyen pastillas para chupar, pastillas y enjuagues de boca.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal se pueden presentar como supositorios o como enemas.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal en las que el vehículo es un sólido incluyen un polvo tosco que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo entre 20 y 500 micras, el cual se administra de la manera en la que se toma el tabaco rapé, es decir, mediante inhalación rápida a través de la fosa nasal desde un recipiente del polvo mantenido cerca de la nariz. Las formulaciones apropiadas en las que el vehículo es un líquido, para la administración como pulverizador nasal o como gotas nasales, incluyen disoluciones acuosas o de aceite del ingrediente activo.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración mediante inhalación incluyen vahos o polvos de partículas finas, los cuales se pueden generar por medio de diversos tipos de nebulizadores, insufladores o aerosoles presurizados de dosis medida.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones pulverizadas.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen disoluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostatos y solutos, que vuelven la formulación isotónica con la sangre del destinatario deseado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas, las cuales pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Se pueden presentar las formulaciones en recipientes de dosis única o multidosis, por ejemplo, viales y ampollas selladas, y se pueden almacenar en un estado de secado por congelación (liofilizado) que requiere solamente la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de usar. Se pueden preparar suspensiones y disoluciones de inyección improvisadas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

Se entenderá que además de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica, teniendo en cuenta el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, los apropiados para la administración oral pueden incluir agentes aromatizantes.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención dependerá de un número de factores que incluyen, por ejemplo, la edad y el peso del animal, el estado preciso que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y la vía de administración y, al final estará en el criterio del médico o veterinario asistente. Sin embargo, una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) para el tratamiento del crecimiento neoplásico, por ejemplo, carcinoma de colón o de mama, estará generalmente en el intervalo entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal del destinatario (mamífero) por día y más normalmente en el intervalo entre 1 y 10 mg/kg de peso corporal por día. Así, para un mamífero adulto de 70 kg, la cantidad actual por día estaría normalmente entre 70 y 700 mg y esta cantidad se puede administrar en una dosis única por día o más normalmente en un número (tal como dos, tres, cuatro, cinco o seis) de subdosis por día de tal manera que la dosis diaria total sea la misma. Se puede determinar una cantidad eficaz de una sal o solvato, o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables del mismo como una proporción de la cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I) per se. Se prevé que dosificaciones similares serían adecuadas para el tratamiento de los otros padecimientos referidos anteriormente.

Los compuestos de la presente invención y sus sales y solvatos, y sus ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables, se pueden emplear solos o en combinación con otros agentes terapéuticos para el tratamiento de los padecimientos anteriormente mencionados. En concreto, en la terapia anticancerígena, se prevé la combinación con otros agentes quimioterapéuticos, hormonales o de anticuerpos, así como la combinación con radioterapia y terapia quirúrgica. Así, las terapias de combinación de acuerdo con la presente invención comprenden la administración de al menos un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, y el uso de al menos otro método de tratamiento de cáncer. Preferiblemente, las terapias de combinación de acuerdo con la presente invención comprenden la administración de al menos un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo y al menos otro agente farmacéuticamente activo, preferiblemente un agente antineoplásico. El(Los) compuesto(s) de fórmula (I) y el(los) otro(s) agente(s) farmacéuticamente activo(s) se puede(n) administrar junto o por separado y, si se administra(n) separadamente esto puede darse simultáneamente o de manera secuencial en cualquier orden. Las cantidades del(de los) compuesto(s) de fórmula (I) y el(los) otro(s) agente(s) farmacéuticamente activo(s) y los ritmos relativos de administración se seleccionarán para alcanzar el efecto terapéutico combinado deseado.

Se pueden emplear los compuestos de fórmula I o sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables y al menos una terapia de tratamiento de cáncer adicional en combinación concomitantemente o de manera secuencial en cualquier combinación terapéuticamente adecuada con otras terapias anticancerígenas. En una realización, la otra terapia anticancerígena es al menos una terapia quimioterapéutica adicional que incluye la administración de al menos un agente antineoplásico. La administración en combinación con un compuesto de fórmula (I) o sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables del mismo con otros agentes antineoplásicos puede ser en combinación de acuerdo con la invención mediante la administración concomitantemente en (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos compuestos o (2) composiciones farmacéuticas separadas que incluyen cada una uno de los compuestos. Si no, se puede administrar la combinación separadamente de una manera secuencial en la que se administra primero el agente antineoplásico y el otro segundo o viceversa. Dicha administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o remota en el tiempo.

Los agentes antineoplásicos pueden inducir efectos antineoplásicos de una manera específica al ciclo celular, es decir, son específicos a una fase y actúan en una fase específica del ciclo celular, o se unen al ADN y actúan de una manera no específica al ciclo celular, es decir, no son específicas al ciclo celular y funcionan mediante otros mecanismos.

Los agentes antineoplásicos útiles en combinación con los compuestos y sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables de fórmula (I) incluyen los siguientes:

(1)

los agentes antineoplásicos específicos al ciclo celular incluyen, pero no se limitan a: diterpenoides tales como paclitaxol y su análogo docetaxol; alcaloides vinca tales como vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina; epipodofilotoxinas tales como etoposida y teniposida; fluoropirimidinas tales como 5-fluorouracilo y fluorodeoxiuridina; antimetabolitos tales como alopurinol, fludurabina, metotrexato, cladrabina, citarabina, mercaptopurina y tioguanina; y camptotecinas tales como 9-aminocamptotecina, irinotecano, CPT-11 y las diversas formas ópticas del 7-(4-metilpiperazin-metilen)-10,11-etilendioxi-20-camptote- cina;

(2)

agentes quimioterapéuticos citotóxicos que incluyen, pero no se limitan a: agentes de alquilación tales como melfalano, clorambucilo, ciclofosfamida, mecloretamina, hexametilmelamina, busulfano, carmustina, lomustina y dacarbazina; antibióticos antitumorales tales como doxorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina; y complejos de coordinación de platino tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; y

(3)

otros agentes quimioterapéuticos incluyen, pero no se limitan a: antiestrógenos tales como tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno y yodoxifeno; progestrógenos tales como acetato de megestrol; inhibidores de aromatasa tales como anastrozol, letrazol, vorazol y exemestano; antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida y acetato de ciproterona; agonistas y antagonistas de LHRH tales como acetato de goserelina y luprolida, inhibidores de la 5\alpha-dihidroreductasa de testosterona tales como finasterida; inhibidores de metaloproteinasa tales como marimastato; antiprogestrógenos; inhibidores de la función del receptor del activador del plasminógeno de uriquinasa; inhibidores de la función del factor de crecimiento tales como los inhibidores de las funciones del factor de crecimiento de hepatocito; erb-B2, erb-B4, receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFr, del Inglés "Epidermal Growth Factor receptor"), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFr, del Inglés "platelet Derived Growth Factor receptor"), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFr, del Inglés "Vascular Endotelial Growth Factor receptor") y TIE-2; y otros inhibidores de la tirosina quinasa tales como los inhibidores de CDK2 e inhibidores de CDK4 a parte de los descritos en la presente invención.

En otra realización, se pueden administrar en combinación las cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos de fórmula (I) o sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables y agentes que inhiben la función del receptor del factor de crecimiento a un mamífero para el tratamiento de un trastorno mediado por la actividad inadecuada de CDK4, por ejemplo, en el tratamiento de cáncer. Tales receptores del factor de crecimiento incluyen, por ejemplo, EGFr, PDGFr, erb-B2, VEGFr o TIE-2. Los receptores del factor de crecimiento y los agentes que inhiben la función del receptor del factor de crecimiento se describen, por ejemplo, en Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818 y en Shawver et al. DDT Vol 2, Nº 2 Febrero de 1997.

Se pueden emplear los compuestos de fórmula (I) o sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables y el agente para inhibir la función del receptor del factor de crecimiento en combinación concomitantemente o de manera secuencial en cualquier combinación terapéuticamente adecuada. La combinación se puede emplear en combinación de acuerdo con la invención mediante la administración concomitantemente en (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos compuestos o (2) composiciones farmacéuticas separadas que incluyen cada una uno de los compuestos. Si no, se puede administrar la combinación separadamente o de una manera secuencial en la que primero se administra uno y segundo el otro o viceversa. Tal administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o remota en el tiempo.

En otro aspecto de la presente invención, se ha proporcionado el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal, solvato o éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para usarse en el tratamiento de un trastorno en un mamífero, estando dicho trastorno mediado por la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina. En una realización, la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina es debida a al menos una la actividad inadecuada de CDK2 o CDK4. En otra realización, la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina es debida a la actividad inadecuada de CDK2 y CDK4. En una realización adicional, el uso incluye además el uso de un inhibidor de CDK2 para preparar dicho medicamento.

Se puede emplear la combinación de un compuesto de fórmula (I) o sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables con un inhibidor de CDK2 en combinación de acuerdo con la invención mediante la administración concomitantemente en (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos compuestos o (2) composiciones farmacéuticas separadas que incluyen cada una uno de los compuestos. Si no, se puede administrar la combinación separadamente o de una manera secuencial en la que primero se administra uno y segundo el otro o viceversa. Tal administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o remota en el tiempo.

Ahora se ilustrarán ciertas realizaciones de la presente invención solamente a modo de ejemplo. Los datos fisiológicos dados para los compuestos ilustrados son coherentes con la estructura asignada de esos compuestos.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos son realizaciones ilustrativas de la invención, de ningún modo son limitantes del alcance de la invención. Los reactivos están comercialmente disponibles o se preparan de acuerdo con los procedimientos de la bibliografía. Los números del Ejemplo se refieren a los compuestos enumerados en las anteriores tablas. Los espectros ^{1}H NMR se obtuvieron en espectrofotómetros NMR Varian Unity Plus a 300 ó 400 MHz. Los espectros de masa se obtuvieron en espectrómetros de masa Micromass Platform II de Micromass Ltd. Altrincham, RU, usando o Ionización Química Atmosférica (APCI, del Inglés "Atmospheric Chemical Ionization") o Ionización por electropulverizador (ESI, del Inglés "Electrospray Ionization"). Se usó una cromatografía en capa fina (TLC, del Inglés "Thin Layer Chromatography") analítica para verificar la pureza de algunos productos intermediarios que no se podrían aislar o que serían demasiado inestables para la caracterización completa, y para seguir el progreso de las reacciones. Sí no se indica lo contrario, esto se hizo usando gel de sílice (Gel de Sílice Merck 60 F254). Si no se indica lo contrario, la cromatografía en columna para la purificación de algunos compuestos, usó gel de sílice Merck 60 (230-400 mallas), y el sistema de disolvente especifico bajo presión.

Ejemplo 1 1-[(Z)-(4-Dimetilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

\vskip1.000000\baselineskip

11

a) Se calentó una mezcla de dimetilaminometiliden-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona (0,1 mmol), 4-dimetilaminometilanilino (0,1 mmol) y ácido hidroclórico reducido (0,02 ml) en etanol (1 ml) a reflujo hasta que se completó la reacción tal como se determinó mediante el análisis TLC. Se dejó enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente y se purificó el residuo usando una cromatografía en gel de sílice para dar el compuesto del título como un sólido marrón anaranjado, 15 mg (42%).

^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,17 (s, 6H), 3,17 (s, 2H), 7,31-7,51 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,3 Hz, 1H), 8,83 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,86 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 345
(M+1)^{+}.

b) Dimetilaminometiliden-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

Se agitó una mezcla de 3-H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona (13 mmol) y dimetilformamida di-t-butil acetal (15 mmol) en DMF a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió acetato de etilo (25 ml) y se recogió el sólido resultante mediante filtración y se dejó secar al aire. Se obtuvo el compuesto deseado (70%) y se usó directamente en la próxima etapa.

c) 3-H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

Se agitó una disolución de 2,3 g (12 mmol) de 3-H-pirrol[3,2-f]quinolin-1,2-diona y 2,0 ml (0,06 mol) de hidrazina en 50 ml de DMF y 50 ml de etanol a reflujo durante 2 horas. Se dejó enfriar la suspensión resultante a temperatura ambiente y, a continuación, se refrigeró en un baño helado y se filtró. Se lavó el sólido con un volumen pequeño de etanol y se dejó secar al aire para dar 1-hidrazon-1,3-dihidropirrol[3,2-f]quinolin-2-ona como un sólido naranja (1,8 g, 73%): ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 7,37 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,47 (dd, J=8,4, 4,2 Hz, 1H), 7,81 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,71 (dd, J=4,2, 1,6 Hz, 1H), 8,80 (d, J=8,4 Hz, 1H), 9,90 (br d, J=14,7 Hz, 1H), 10,89 (br d, J=14,7 Hz, 1H), 10,95 (br s, 1H); ESI-MS m/z 213 (M+H)^{+}. Se agitó una disolución de 1,8 g (8,5 mmol) de 1-hidrazon-1,3-dihidropirrol[3, 2-f]quinolin-2-ona en 50 ml de disolución de etoxido de sodio 0,5 M recién preparada a reflujo durante 3 horas. Se diluyó la disolución con 50 ml de agua, se neutralizó con ácido acético y se concentró en un evaporador rotatorio hasta turbio. Se almacenó la disolución en un refrigerador durante toda la noche. Se filtró el sólido y el filtrado se sometió a extracción con tres porciones de 80 ml de EtOAc. Se combinó una disolución del sólido en MeOH/EtOAc con los extractos y se pasó a través de una almohadilla corta de gel de sílice, eluyendo con EtOAc. A continuación, se concentró la disolución a un pequeño volumen en un evaporador rotatorio, y la suspensión resultante se diluyó con un volumen igual de etanol, se sometió a tratamiento con ultrasonidos, y se filtró para dar 3-H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona como un sólido verde claro (0,52 g, 33%): ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 3,80 (s, 2H), 7,35 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,44 (dd, J=8,4, 4,2 Hz, 1H), 7,88 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,70 (dd, J=4,2, 1,6 Hz, 1H), 10,57 (br s, 1H); APCI-MS m/z 183 (M-H)^{-}.

d) 3-H-Pirrol[3,2-f]quinolin-1,2-diona

Se añadió sulfato de sodio (0,6 mol) y agua (100 ml) a un matraz de 1 L y se agitó la mezcla hasta que se disolvieron los sólidos. Se añadió a esta disolución una disolución de 6-aminoquinolina (0,033 mol) en ácido hidroclórico acuoso 1N (50 ml) y etanol (10 ml). Se agitó la mezcla y se añadió cloral (0,036 mol). Se añadió a la disolución resultante una disolución de hidrocloruro de hidroxilamina (0,108 mol) en agua (30 ml). A continuación, se calentó esta muestra a reflujo suave hasta que se disolvieron todos los sólidos y, a continuación, se calentó durante 15 minutos más. Se retiró el matraz del calor y se introdujo la disolución en hielo (500 g) con agitación. Se recogió el sólido resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó al aire para dar N-quinolin-6-il-2-hidroxiiminoacatamida (94%). Se añadió ácido sulfúrico concentrado (100 ml) a un matraz de 3 bocas de 1L. Se agitó el ácido y se calentó a 100ºC. Se añadió lentamente N-quinolin-6-il-2-hidroxiiminoacatamida (45 mmol) y se calentó la mezcla resultante durante 1 hora. Se introdujo la mezcla de reacción con cuidado en agua helada (750 ml) y se agitó durante aproximadamente 1 hora. Se recogieron los sólidos mediante filtración, se lavaron con agua y se secaron al aire para dar el compuesto deseado (46%).

Ejemplo 2 1-[(Z)-(4-Dietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-dietilaminometilanilina como un sólido amarillo anaranjado, 8,6 mg (22%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 0,93-0,96 (m, 6H), 3,12-3,14 (m, 4H), 4,04-4,08 (m, 2H), 7,29-7,46 (m, 6H), 7,69 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,70 (d, J=2,9 Hz, 1H), 8,79 (d, J=7,9 Hz, 1H), 8,82 (d, J=12 Hz, 1H), 10,92 (s, 1H), 11,76 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 373 (M+1)^{+}.

Ejemplo 3 1-[(Z)-(4-(N-Metil)etilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)etilaminometil]anilina como un sólido amarillo, 13 mg (35%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 1,04 (t, 3H), 1,48 (m, 2H), 2,13 (bs, 3H), 2,40 (bs, 2H), 3,46 (bs, 2H), 7,33-7,51 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,74 (s, J=3,3 Hz, 1H), 8,82 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,85 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 359 (M+1)^{+}.

Ejemplo 4 1-[(Z)-(4-(N-Metil)propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)propilaminometil]anilina como un sólido marrón amarillento, 7,2 mg (19%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 0,86 (t, 3H), 1,48 (m, 2H), 2,13 (bs, 3H), 2,29 (bs, 2H), 3,45 (bs, 2H), 7,35-7,51 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,83 (d, J=7,2 Hz, 1H), 8,86 (d, J=9,6 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 373 (M+1)^{+}.

Ejemplo 5 1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)isopropilaminometil]anilina como un sólido amarillo, 16 mg (41%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 1,02 (d, J=5,2 Hz, 6H), 2,07 (bs, 3H), 2,85 (m, 1H), 3,48 (bs, 2H), 7,36-7,49 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,4 Hz, 1H), 8,82 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,86 (d, J=9,4 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 373 (M+1)^{+}.

Ejemplo 6 1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metilpropilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)-2-metilpropilaminometil]anilina como un sólido marrón amarillento, 11 mg (27%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 0,87 (d, J=6,5 Hz, 6H), 1,81 (m, 1H), 2,07 (d, J=7,1 Hz, 1H), 2,11 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 7,32-7,50 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,1 Hz, 1H), 8,82 (d, J=5,7 Hz, 1H), 8,85 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 387 (M+1)^{+}.

Ejemplo 7 1-[(Z)-(4-(N-Metil)bencilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)bencilaminometil]anilina como un sólido amarillo, 18 mg (41%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,10 (s, 3H), 3,51 (s, 2H), 7,27-7,52 (m, 11H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (s, J=4,0 Hz, 1H), 8,83 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,86 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 421 (M+1)^{+}.

Ejemplo 8 1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-hidroxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)-2-hidroxietilaminometil]anilina como un sólido amarillo, 10 mg (26%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,17 (s, 3H), 2,44 (t, 2H), 3,49 (m, 2H), 4,40 (t, 1H), 7,33-7,50 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,83 (d, J=7,7 Hz, 1H), 8,86 (d, J=9,6 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 375 (M+1)^{+}.

Ejemplo 9 1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metoxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-[N-(metil)-2-metoxietilaminometil]anilina como un sólido amarillo, 18 mg (41%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,18 (bs, 3H), 2,54 (t, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,46 (t, 2H), 3,50 (s, 2H), 7,32-7,51 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,73 (s, J=3,2 Hz, 1H), 8,82 (d, J=5,4 Hz, 1H), 8,85 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 389 (M+1)^{+}.

Ejemplo 10 1-[(Z)-(4-(4-Morfolinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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20

Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(4-morfolinil)metilanilina como un sólido marrón amarillento, 19 mg (47%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,36 (bs, 4H), 3,46 (s, 2H), 3,58 (bs, 4H), 7,33-7,51 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,0 Hz, 1H), 8,82 (d, J=4,3 Hz, 1H), 8,85 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 387 (M+1)^{+}.

Ejemplo 11 1-[(Z)-(4-(1-Piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

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Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(1-piperidinil)metilanilina como un sólido caqui, 24 mg (60%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 1,40 (bs, 2H), 1,51 (bs, 4H), 2,33 (bs, 4H), 3,42 (bs, 2H), 7,32-7,49 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,73 (d, J=3,2 Hz, 1H), 8,82 (d, J=4,8 Hz, 1H), 8,86 (d, J=8,5 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 385 (M+1)^{+}.

Ejemplo 12 1-[[(Z)-(4-(4-Hidroxi-1-piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

22

Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(4-hidroxi-1-piperidinil)metilanilina como un sólido naranja amarillento, 2,6 mg (6%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 1,40 (bs, 2H), 1,69 (bs, 2H), 2,02 (bs, 2H), 2,65 (bs, 2H), 3,43 (bs, 2H), 4,08 (m, 1H), 4,53 (bs, 1H), 7,34-7,49 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,82 (d, J=4,9 Hz, 1H), 8,85 (d, J=12 Hz, 1H), 10,95 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 401 (M+1)^{+}.

Ejemplo 13 1-[(Z)-(4-(4-Metil-1-piperazinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

23

Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(4-metil-1-piperazinil)metilanilina como un sólido marrón oscuro, 77 mg (78%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 2,79 (s, 4H), 3,3-3,5 (bs, 4H), 4,18 (bs, 2H), 7,6-7,7 (m, 3H), 7,70 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,83 (dd, J=4,8 \varepsilont 8,6 Hz, 1H), 8,00 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,63 (bs, 1H), 8,98 (d, J=3,4 Hz, 1H), 9,03 (s, 1H), 9,40 (d, 6,5 Hz, 1H), 9,75 (bs, 2H), 11,34 (s, 1H), 11,96 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 400 (M+1)^{+}.

Ejemplo 14 1-[(Z)-(4-(1-Imidazoil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

24

Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(1-imidazoil)metilanilina como un sólido de color de orín, 28 mg (73%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 5,18 (s, 2H), 6,91 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,32-7,54 (m, 6H), 7,73 (s, 1H), 7,76 (d, J=4,1 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,6 Hz, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,84 (d, J=4,5 Hz, 1H), 10,96 (s, 1H), 11,80 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 368 (M+1)^{+}.

Ejemplo 15 1-[(Z)-(4-(N-Metil)-(1-metil-4-piperidinil)aminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona

25

Se obtuvo el compuesto del título de una manera similar a la descrita para el Ejemplo 1(a), a partir de 4-(N-metil)-(1-metil-4-piperidinil)aminometilanilina como un sólido de color de orín, 7,7 mg (17%). ^{1}H NMR (DMSO-d6): \delta 1,55-1,85 (m, 4H), 2,11 (m, 4H), 2,54 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,54 (s, 3H), 4,40 (t, 1H), 7,32-7,49 (m, 6H), 7,74 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,84-8,87 (m, 2H), 10,95 (s, 1H), 11,81 (d, J=12 Hz, 1H); APESI+MS m/z 428 (M+1)^{+}.

Datos biológicos

Los compuestos de la presente invención tienen valiosas propiedades farmacológicas. Los diferentes compuestos de esta clase son particularmente eficaces en la inhibición de las enzimas CDK2 y/o CDK4 a concentraciones que oscilan entre 0,0001 y 1 \muM y además muestran relativa especificidad a otras quinasas. Los datos representativos se muestran en la siguiente Tabla 1. Los ensayos de fosforilación del sustrato se llevan a cabo tal como sigue:

CDK4

Se expresaron la quinasa 4 dependiente de ciclina y la ciclina D1 utilizando un sistema de expresión de baculovirus. Se ensayó la actividad catalítica de la proteína CDK4 midiendo la fosforilación de la proteína Rb. Se usó una proteína Rb truncada (residuos 773-928 de la proteína retinoblastoma nativa, fusionada a glutationa S-transferasa para facilitar la purificación) como aceptor fosforilo. Las condiciones de ensayo fueron: HEPES (N-[2-hidroxietil]piperzin-N'-[2-ácido etanosulfónico]) 100 mM, pH 7,5, proteína GST-Rb 0,5 \muM, [^{33}P]-ATP (1 nM-20 \muM) 1 \muCi/ml, MgCl_{2} 5-20 mM, EDTA 2,5 mM, ditiotreitol 1 mM, albúmina de suero bovina 0,2 mg/ml, sulfuro de dimetilo (DMSO) al 2% (v/v), enzima CDK4 (5-50 nM) en un volumen final de 50 \mul. Se incubaron las reacciones durante periodos de tiempo de 10-60 minutos a 30ºC y se interrumpieron mediante la adición de 50 \mul de agente de enfriamiento("quench") (ATP 1 mM/EDTA 100 mM, pH 7,0). La detección de la fosforilación de proteína se llevó a cabo mediante el recuento del centelleo que sigue a la recogida de la proteína en placas de 96 pocillos revestidas de Glutationa o reteniendo la proteína sobre filtros de fosfocelulosa. Se asumió que los recuentos detectados mediante estas metodologías sin el ambiente adecuado son proporcionales a los índices iniciales de reacción. Se determinaron los valores IC_{50} midiendo la actividad enzimática en presencia de diferentes concentraciones del inhibidor (0,1 nM a 50 \muM). Se determinaron los IC_{50} mediante un ajuste de cuadrados menores a la ecuación CPM=Vmax^{#}(1-([I]/(K+[I])))+nsb, o se determinaron los pIC_{50} mediante un ajuste a la ecuación CPM=nsb+(Vmax-nsb)/(1+(x/10^{x}-pIC_{50})), en la que nsb son los recuentos del ambiente.

CDK2

Los ensayos de la proteinquinasa 2 dependiente de ciclina utilizaron el péptido Biotina-aminohexil-ARRPMSPKKKA-NH_{2} como aceptor del grupo fosforilo. La CDK2 se expresó utilizando un sistema de expresión de baculovirus y se purificó parcialmente para comprender 20-80% de proteína total, con presencia de reacciones de competencia no detectables. Generalmente, se realizaron los ensayos incubando enzimas (0,2-10 nM), con y sin inhibidor, sustrato peptídico (1-10 nM), [g-^{32}P]ATP (1-20 nM) y Mg^{2+} 10 a 20 mM durante periodos de tiempo generalmente dentro del intervalo de 10-120 minutos. Se interrumpieron las reacciones con 0,2-2 volúmenes de o ácido acético al 20% o tampón EDTA 50-100 mM a pH 7 (consumo del sustrato<20%). El tampón empleado en el ensayo de la enzima era HEPES 100 mM, pH 7,5, que contenía BSA 0,1 mg/ml y DMSO al 5%. Se diluyeron los inhibidores en DMSO al 100% antes de añadir en el ensayo. La detección de la fosforilación peptídica se llevó a cabo mediante el recuento del centelleo que sigue o a la recogida del péptido sobre filtros de fosfocelulosa (para reacciones paradas con ácido acético), recogida de péptidos en pocillos de placas de 96 pocillos con Estreptavidina (Pierce)(se pararon las reacciones con EDTA), o a la adición de perlas impregnadas con Centellante revestidas con Avidina (Scintillation Proximity Assays de Amersham, las reacciones se pararon con EDTA). Se asumió que los recuentos detectados mediante cualquiera de estas metodologías sin el ambiente adecuado (ensayos con EDTA 40 mM adicional o faltando sustrato peptídico) que son proporcionales a los índices iniciales de reacción, y se determinaron los IC_{50} mediante un ajuste de cuadrados menores a la ecuación CPM=Vmax^{#}(1-([I]/(K+[I])))+nsb, o se determinaron los -pIC_{50} mediante un ajuste a la ecuación CPM=nsb+(V_{max}-nsb)/(1+(x/10^{x}-pIC_{50})), en la que nsb son los recuentos del ambiente. Se filtraron y se lavaron cuatro veces con ácido fosfórico 75 mM. Se determinó la radioactividad mediante el recuento del centelleo del líquido.

Ensayo de base celular de la antiprolilferación

Se determinó la actividad antiproliferante de los compuestos midiendo el índice de síntesis de ADN mediante la incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU) en ADN celular. Se detectó la cantidad de BrdU en ADN celular usando un anticuerpo anti-BrdU en un formato ELISA para permitir una rápida producción. Se sembraron células tumorales humanas de crecimiento en fase logarítmica o que contenían Rb funcional (U2OS, MDA-MB-231) o que carecían de proteína Rb funcional (SaOs-2, MDA-MB-468) en un medio en placas de 96 pocillos (1-6x10^{3} células/100 \mul de medio/pocillo) y se dejaron incubar durante toda la noche \sim30 horas. Se diluyeron los compuestos (intervalo de concentración de 0,046-100 \muM) en un medio (DMSO final (v/v) 0,8%), se añadió a los pocillos que contenían células, y se incubaron durante 18 horas a 37ºC. Se añadió BrdU (100 \muM) y se incubaron durante 4 horas. Se aclararon las células con PBS y el ADN se desnaturalizó mediante la adición de una disolución de fijación/desnaturalización. Se añadió el anticuerpo Anti-BrdU conjugado a peroxidasa de rábano en BSA al 1% durante 2 horas a temperatura ambiente. Se lavaron las células, se añadió el reactivo quimioluminiscente y se leyeron las placas en un luminómetro. Los valores IC_{50} típicos para los compuestos de la presente invención cuando se ensayaron en el ensayo de la antiproliferación estaban en el intervalo de 0,05-10 \muM.

TABLA 1

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Claims (11)

1. Un compuesto de Fórmula (I)

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o una sal, solvato o un éster o amida farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

R^{1} es (CR^{4}R^{5})_{n}NR^{2}R^{3};

n es 1 ó 2;

R^{2} y R^{3} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6}, cicloalquilo, heterociclilo, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo, heteroaril-alquilo C_{1-6}, o R^{2} y R^{3} junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heteroarilo de 5 a 7 miembros o heterocíclico de 5 ó 6 miembros, conteniendo opcionalmente ambos anillos 1 ó 2 átomos adicionales de oxígeno, azufre, S(O)_{m}, o nitrógeno, estando dicho átomo de nitrógeno adicional opcionalmente sustituido con un grupo alquilo o arilo C_{1-6};

m es 0, 1 ó 2;

R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1-6}; y

en el que cualquiera de dichos grupos alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alcoxi C_{1-6}-alquilo C_{1-6}, cicloalquilo, heterociclilo, bencilo, fenilo, naftilo, heteroarilo y heteroaril-alquilo C_{1-6} pueden estar opcionalmente sustituidos con hasta tres miembros seleccionados entre un grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, CF_{3} y N(CH_{3})_{2}.

2. Un compuesto de Fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R^{2} es metilo; R^{3} es etilo, propilo, isopropilo, isobutilo, hidroxietilo, metoxietilo, bencilo o metilpiperidinilo; y R^{4} y R^{5} son cada uno hidrógeno.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heterocíclico que contiene opcionalmente un nitrógeno adicional o un nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno, o S(O)_{m} y R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de piperazina, en el que el nitrógeno adicional está sustituido con un grupo metilo, y R^{4} y R^{5} son hidrógeno.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R^{2} y R^{3}, junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heteroarilo que contiene opcionalmente un nitrógeno adicional o un nitrógeno sustituido con alquilo C_{1-6}, oxígeno o S(O)_{m} y R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o metilo.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consiste en:

1-[(Z)-(4-Dimetilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-Dietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)etilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-propilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metilpropilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)bencilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-hidroxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-2-metoxietilaminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Morfolinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(1-Piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Hidroxi-1-piperidinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(4-Metil-1-piperazinil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(1-Imidazoil)metilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-ona;

1-[(Z)-(4-(N-Metil)-(1-metil-4-piperidinil)aminometilanilino)metiliden]-1,3-dihidro-2H-pirrol[3,2-f]quinolin-2-
ona; y

sus sales, solvatos o ésteres o amidas farmacéuticamente aceptables.

8. Una composición farmacéutica, que comprende: una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y uno o más vehículos, diluyentes y excipientes farmacéuticamente aceptables.

9. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para usar en terapia.

10. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la preparación de un medicamento para usarse en el tratamiento de un trastorno mediado por la actividad inadecuada de CDK4.

11. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la preparación de un medicamento para usarse en el tratamiento de un trastorno mediado por la actividad inadecuada de la quinasa dependiente de ciclina.