ES2229746T3

ES2229746T3 - Producto y metodo para reducir la supresion inmune inducida por estres.

Info

Publication number: ES2229746T3
Application number: ES99936019T
Authority: ES
Inventors: Stephen J. Demichele; Steven M. Wood; John William Mcewen
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 1998-02-25
Filing date: 1999-02-24
Publication date: 2005-04-16
Anticipated expiration: 2019-02-24
Also published as: US6444700B1; JP4555471B2; JP2002504501A; DE69920180D1; US6130244A; CA2321909C; ATE275836T1; CA2321909A1; EP1056359A1; HK1034647A1; PT1056359E; NO317048B1; NO20004191D0; EP1056359B1; DK1056359T3; DE69920180T2; NO20004191L; WO1999043220A1; US6255341B1

Abstract

Una composición útil para tratar la supresión inmune inducida por estrés que comprende: a) los siguientes antioxidantes, presentes en una cantidad suficiente para aliviar la supresión inmune inducida por estrés: i) vitamina C; ii) vitamina E; iii)selenio; iv) -caroteno, y b) un componente de glicérido estructurado, presente en una cantidad suficiente para aliviar la supresión inmune inducida por estrés, caracterizado por contener algunas especies de triglicéridos y al menos un 40% de las especies de triglicéridos tienen: (i) aproximadamente del 33 al 70% en peso de restos acilo que tienen de 4 a 12 átomos de carbono; (ii)aproximadamente del 30 al 67% en peso de restos acilo que tienen más de 12 átomos de carbono, y; (iii) un número equivalente de carbono mayor de 30 a menor de 48.

Description

Producto y método para reducir la supresión inmune inducida por estrés.

Campo técnico

Esta invención se refiere a un método para reducir la supresión del sistema inmune de un animal inducida por estrés. El método comprende administrar a un animal, antes, durante y/o después de un acontecimiento de estrés, un producto nutricional que comprende un componente de glicérido estructurado y un sistema antioxidante. La invención también se refiere a un producto nutricional que comprende un sistema antioxidante y un componente de glicérido estructurado.

Antecedentes

El estrés es un factor físico, químico o emocional que provoca tensión mental y corporal y puede ser un factor causante de enfermedad. La idea de que el estrés excesivo puede alterar las defensas del hospedador así como aumentar la susceptibilidad a una enfermedad no es nueva. Una publicación de Pedersen, et al., proporciona un análisis del trabajo realizado en el área del estrés y la enfermedad. Véase Pedersen, et al., "The immune system during exposure to extreme physiobiological conditions", Inter J. Sports Med. 1994 15:51165121.

En los últimos años, los rápidos avances en el campo de la inmunología han generado un gran interés en la interacción entre el estrés inducido por factores fisiológicos, nutricionales y físicos y el sistema inmune. Una premisa importante de este trabajo es que el estrés puede aumentar la vulnerabilidad a enfermedad ejerciendo un efecto inmunosupresor. Esto puede ser particularmente cierto para enfermedades muy relacionados con mecanismos inmunológicos tales como infección, cáncer y enfermedad autoinmune.

Los estudios que demuestran alteraciones inmunes en el estrés humano engloban varios modelos donde la mayoría de los tipos de estrés natural y experimental se han asociado con la alteración de los componentes del sistema inmune. Algunos de los primeros trabajos los realizó la Administración Nacional de la Aeronáutica y el Espacio (NASA). Los estudios de la NASA demostraron que el nivel de glóbulos blancos y linfocitos T aumentaba durante la fase de amerizaje de un vuelo espacial. Sin embargo, había un deterioro en la respuesta linfoproliferativa a la estimulación mitogénica durante los tres (3) primeros días después del regreso a la tierra. También se observó una ligera disminución de la respuesta de estimulación de los linfocitos antes del lanzamiento, posiblemente a causa de la anticipación. Un buen análisis del estrés y la función inmune puede encontrarse en "Stress, Inmmunity and Illness- A Review", realizado por Dorian y Garfinkel, Physchological Medicine, 17:393-407 (1987).

También se sabe que la actividad y el ejercicio físico producen diversas alteraciones en el sistema inmune. Los efectos de un ejercicio enérgico parecen reducir la función inmune y pueden comprender defensas hospedadoras contra infecciones del tracto respiratorio superior. Los estudios epidemiológicos han mostrado, generalmente, un mayor riesgo de infección del tracto respiratorio superior con vigorosos niveles de ejercicio. Véase Health, et al., "Exercise and Upper Respiratory Tract Infections", Sports Medicine, 14(6) 353-365 (1992).

Cuando los seres humanos envejecen, experimentan una disminución de la mayoría de las respuestas inmunes humorales y mediadas por células. Las personas mayores suelen estresarse a raíz de diversas infecciones, estar luto, cáncer y deficiencias nutricionales. Las personas mayores también se suelen estresar a partir de factores medioambientales tales como vivienda inadecuada y deficiencias mentales. Se ha demostrado que la suplementación con pequeñas cantidades de micronutrientes disminuye las deficiencias nutricionales y mejora diversas medidas de inmunidad y disminuye la frecuencia de enfermedades relacionadas con infección en noventa y seis (96) sujetos mayores (75 años de media). Véase Chandra R. K., "Effect of Nutrients and Trace Element Supplementation on Immune Responses and Infection in Elderly Subjects", Lancet 1992, Vol. 340, págs. 1124-1127. Los factores de edad, ejercicio, malnutrición y estrés también los ha investigado Hoffman-Goetz, L., et al., "Exercise and Immune Function", CRC Press, Boca Raton (1996).

La infección se caracteriza por una pérdida de lípidos, proteínas y micronutrientes en los tejidos. Esto es en parte el resultado de la respuesta mediada por citoquinas diseñada para soportar las actividades del sistema inmune y para proteger al huésped. Grimble en "Malnutrition and the Immune Response", Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene (1994) 88, 615-619, informa de la influencia del consumo de proteínas y aminoácidos en la biología de citoquinas. El autor también analiza la modulación de la biología de citoquinas por el consumo de grasas y micronutrientes.

Los leucocitos en sangre sólo representan una pequeña porción del número total de leucocitos en el cuerpo, sin embargo proporcionan una importante representación del estado de activación del sistema inmune. Se sabe que el estrés agudo induce cambios grandes, rápidos y reversibles en la distribución de subpoblaciones de leucocitos en sangre periférica. Los leucocitos y otras subpoblaciones nutricionales podrían alterar la respuesta del sistema inmune a estrés. Los datos presentados anteriormente avalan la conclusión de que la composición de la invención es útil en la prevención y reducción de la supresión inducida por estrés del sistema inmune.

Se han acumulado pruebas convincentes que demuestran que ciertos nutrientes, particularmente vitaminas C y E, \beta-Caroteno y calcio, son útiles en la prevención y tratamiento de enfermedades cardíacas coronarias, hipertensión, ciertos cánceres y osteoporosis. Además, las vitaminas C, E y \beta-Caroteno (nutrientes antioxidantes) parecen ofrecer protección contra la lesión radical libre mediada por el ejercicio. De esta forma, se ha sugerido que un régimen de nutrientes antioxidantes debe estar hecho de una parte integral de cualquier programa de ejercicios dirigido hacia la prevención/tratamiento de enfermedades crónicas y fomento de la salud. Puede encontrarse un excelente análisis de antioxidantes y rendimiento físico en: (1) "Antioxidants in Infection" de Keuchs, J. Nutr. Sci. Vitaminol., S23-S33 (1993); (2) Aruoma, "Free Radicals and Antioxidant Strategies in Sports", J. Nutr. Biochem., 1994, Vol. 5, págs. 370-380; y (3) Clarkson, "Antioxidants and Physical Performance", Critical Reviews of Food Science and Nutrition, 35(12): 131-145 (1995).

Un buen ejemplo de estrés físico y mental puede encontrarse en los ejercicios de instrucción militar utilizados por los ejércitos modernos de todo el mundo. Los reclutas experimentan una mayor incidencia de enfermedades infecciosas que las poblaciones de seres humanos que se estresan por desastres naturales, estado de refugiado en período de guerra y similares. Un documento de Bemton, et al., "Adaptation to Chronic Stress in Military Trainees", Ann NY Acad. Sci., Vol. 774 (217-231), presenta los hallazgos de los estudios que investigan la adaptación metabólica, cognitiva, endocrinología e inmunológica en soldados alistados en la escuela militar U.S. Army Ranger School durante ocho (8) semanas de instrucción extremadamente estresante. El estrés fue tanto físico como emocional.

Durante las maniobras de entrenamiento, a los soldados sólo se les proporcionaron raciones para maniobra. Las raciones proporcionaban menos calorías que los consumidos durante el ejercicio de la instrucción. Como las raciones proporcionaban menos calorías que los consumidos durante el ejercicio/instrucción, el soldado tenía hambre constantemente y durante el ejercicio se produjo una pérdida progresiva de peso. La supresión del sistema inmune se evaluó mediante la hipersensibilidad de tipo tardío por ensayos de piel epicutáneos contra siete (7) antígenos. Se observó una supresión significativa tanto en el número medio de ensayos cutáneos positivos como en los milímetros totales en la induración del ensayo cutáneo. Además, se ha descubierto en pacientes hospitalizados que la anergía evaluada por la hipersensibildiad cutánea de tipo tardío indica un aumento del riesgo de infección y mortalidad. Véase, Christou NV, et al., "Two techniques of measurement of the delayed hypersensibility skin test response for the assessment of bacterial host resistance". World J. Surg., 1985; 5:798-806 y Christou NV, et al., "The delayed hyersensitivity response and host resistance in surgical patients 20 year later". Ann Surg. 1995; 222:534-461. Estos documentos no sugieren un producto nutricional que proteja satisfactoriamente un sistema inmune estresado de la
degradación.

La Patente de Estados Unidos Nº 4.981.844 de Alexander, et al., describe un método para mejorar la respuesta inmune en pacientes que comprende la ingestión de una dieta que proporciona 20-60 kilocalorías por Kg de peso corporal del paciente y donde el 20-80% de las calorías son derivados de ácido linoleico. La patente de Alexander, et al., también muestra el consumo de 100-1000 IU al día de vitamina E.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.556.644 de Chandra describe un suplemento nutricional de multi-nutrientes diseñada para ser eficaz aumentando la inmunidad y disminuyendo los casos y gravedad de infección entre las personas mayores. Esta patente muestra específicamente el consumo de un suplemento nutricional que tienen los niveles indicados de diversas vitaminas y minerales. La patente muestra más específicamente el consumo del suplemento nutricional por parte de las personas más mayores para mejorar su estado inmunológico.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.444.054 de Garleb, et al., describe un producto nutricional para pacientes que padecen colitis ulcerosa o inflamación del colon. El producto nutricional utiliza una mezcla de aceite que contiene ácidos grasos específicos y una fuente de carbohidratos no digeribles. El carbohidrato no digerible se describe como que se metaboliza a ácidos grasos de cadena corta por microorganismos presentes en el colon humano.

La Patente de Estados Unidos 5.223.285 de DeMichele, et al., describe un producto nutricional líquido que contiene una mezcla líquida específica para pacientes pulmonares. Esta patente describe que el lípido debería tener una relación particular entre n-6 y n-3 ácidos grasos. Además, esta referencia describe un producto nutricional que contiene cantidades de nutrientes que tienen propiedades antioxidantes in vivo. Los ejemplos de tales nutrientes antioxidantes incluyen \beta-Caroteno, vitamina E, vitamina C, selenio y taurina.

La Patente de Estados Unidos Nº 4.871.768 de Bistran, et al., describe un suplemento dietético que contiene un glicérido estructura que comprende n-3 ácidos grasos y ácidos grasos de cadena media. Esta patente también describe un método para minimizar los efectos de infección y minimizar los efectos de una infección posterior administrando una dieta que contiene el 10-80% en peso de una fracción oleosa que comprende glicero, ácidos grasos y combinaciones de los mismos donde el 50-90% de los ácidos grasos son ácido caprílico, ácido cáprico o mezclas de los mismos y el 10-50% en peso de n-3 ácidos grasos. Esta referencia demuestra que el suplemento dietético no evitará el comienzo de infecciones, sin embargo, aumentará la supervivencia de pacientes infectados. Esta patente no sugiere que el estrés inducido por regulación negativa del sistema inmune puede disminuirse por una composición nutricional que comprende (1) un glicérido estructurado; y (2) un sistema antioxidante que comprende al menos vitamina E, vitamina C, selenio y \beta-Caroteno.

El documento WO 96/31457 (PCT GB 96/00828) de Horrobin, et al., describe lípidos estructurados con dos (2) o tres (3) ácidos grasos diferentes elegidos entre los doce (12) ácidos grasos esenciales, ácidos oleico y otros ácidos grasos que contiene 8-26 átomos de carbono. Los lípidos estructurados de Horrobin se sugieren como agentes farmacéuticos para el tratamiento o prevención de enfermedades en las que se han identificado las anormalidades del metabolismo esencial de los ácidos grasos.

La Patente de Estados Unidos 4.617.052 de Mendy, et al., describe triglicéridos donde los fragmentos de acilo poliinsaturados específicos están presentes en la posición n-2 de la molécula de glicerol. Los lípidos estructurados de Mendy, et al., se describen como que son útiles para el tratamiento de problemas de digestión lipídica, enfermedades metabólicas, deficiencias nutricionales, hipertensión y en condiciones donde se desea modulación inmune. En la patente de Mendy, et al., no se muestra ni se sugiere que un glicérido estructurado, cuando se combina con un sistema antioxidante específico, sea eficaz en la reducción de la inmunosupresión que normalmente se observa en un animal sometido a estrés.

El documento WO 96/39869 de Schmitz, et al., describe un producto alimentario sano que tiene diversos ingredientes en pequeñas porciones de un producto alimentario sólido. Se enseña que una poción contiene antioxidantes mientras que la segunda porción contiene, grasas, proteínas y carbohidratos.

La técnica anterior no logra sugerir o describir una composición nutricional que comprende un componente de glicérido estructurado y un único sistema antioxidante que sea eficaz en la reducción o minimización de la desregulación o supresión del sistema inmune inducido por estrés. En algunas ocasiones, en lo sucesivo, la composición nutricional de la invención se denominará producto inmunonutricional. La técnica anterior tampoco logra sugerir o describir un método que reduzca o prevenga la supresión del sistema inmune inducida por estrés donde el método comprende la administración de un producto nutricional que comprende un componente de glicérido estructurado y un sistema antioxidante para un individuo.

Breve descripción de los dibujos

Para informar a los especialistas en la técnica de los principios de la invención, una realización preferida en este momento ilustrativa de la invención hace referencia a los dibujos adjuntos que forman parte de la memoria descriptiva y de los cuales:

La Fig. 1 es un gráfico de la proliferación de linfocitos resultantes de los datos recogidos en el Ejemplo 1.

La Fig. 2 es una representación gráfica de la infección del tracto respiratorio superior de soldados que consumen bebidas de control o productos de tratamiento a partir de los datos recogidos en el Ejemplo II.

La Fig. 3 es una representación gráfica de los cambios en la proliferación de linfocitos desde la medida inicial hasta el final de los estudios con los soldados que consumen la bebida de control o la bebida de acuerdo con la invención como se establece en el Ejemplo II.

La Fig. 4 es una representación gráfica de los cambios en el peso corporal de soldado que participan en la instrucción de los Ranger que consumen una barrita de control o una barrita de acuerdo con la invención como se describe en el Ejemplo 4.

La Fig. 5 es una representación gráfica del cambio en cuanto al número de linfocitos T de soldados que consumen la barrita de control o una barrita de acuerdo con la invención como se describe en el Ejemplo 4.

La Fig. 6 es una representación gráfica del cambio en el número de linfocitos T (CD4*) de soldados que consumen la barrita de control o una barrita de acuerdo con la invención como se describe en el Ejemplo 4.

La Fig. 7 es una representación gráfica del cambio en el número de linfocitos TH1 de soldados que consumen la barrita de control o una barrita de acuerdo con la invención como se describe en el Ejemplo 4.

Metodología de los estudios representados en los dibujos

En las figuras que forman una parte de esta memoria descriptiva, las Figs. 1 y 3 muestran la proliferación de linfocitos de soldados que consumen productos de control antioxidantes. Se extrajo sangre (heparina sódica vacutainer®-Becton Dickinson Co., Rutherfored, NJ) en la medición inicial y al final del estudio. Las muestras se sangre se obtuvieron al mismo tiempo el día (0500) después de que los sujetos hubieran ayunado excepto agua durante 8 horas. El recuento de células sanguíneas total se realizó usando un Analizador Sanguíneo Coulter JT para determinar el número de glóbulos blancos. Los cultivos de la sangre entera se incubaron por triplicado (CO_{2} al 5%, 95% de aire humidificado a 37ºC) con un mitógeno a una sensibilidad proliferativa mitogénica máxima óptima de linfocitos sanguíneos durante 72 horas (como se describe por Kramer, et al., 1990; Bocchieri, et al., 1989). Los mitógenos incluían fitohemaglutinina para la Figura 1 (8 mg/ml, PHA-Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) en los medios de cultivo celular-RPMI 1640 completo y concanavalina A para la fig. 3 (10 mg/ml de ConA-Pharmacia, Silver Spring, MD) en medios de cultivo celular-PMI 1640 completo.

Los cultivos se sometieron a pulsos con ^{3}H-timidina 1 mCi y se cultivaron durante 18 horas más. Las células se recogieron y la incorporación de timidina marcada se detectó en un contador de centelleo líquido beta (Beckman LS 3801). Después el dpm por cultivo se dividió en número de células de linfocitos de la sangre entera para obtener un dpm por célula. Cada medición inicial del individuo se comparó con la medición al final del estudio.

Referencias

Bocchieri MH, Talle MA, Maltease LM, Ragucci IR, Hwang CC, Goldstein GAD. Whole blood culture for measuring mitogen induced T cell proliferation provides superior correlations with disease state and T cell fenotype in asymptamatic HIV-infected subjects. J. Immunol Methods, 1995; 181:233-43.

Kramer TR Praputpittaya K, Yuttabootr, J. Singkamani R, y Trakultivakm M. Relationship between plasma zinc and cellular immunity to candida albicans in young females of Northerm Thailand, Ann NY Acad Sci, 587:300, 1990.

La Fig. 2 representa infecciones del tracto respiratorio superior de soldados que consumen los productos de control y experimentales que contienen una cantidad similar de productos de energéticos y macronutrientes, pero que se diferencia en cuanto a la composición lipídica (el tratamiento contenía el lípido estructural) y la concentración de micronutrientes (incluyendo el sistema antioxidante).

La resolución la diagnosticó el médico militar.

La Fig. 4 muestra cambios en el peso corporal que se midieron en cada muestra de sangre. A los soldados se les midió sin sus botas usando una escala con pilas electrónica digital calibrada, con un margen de error de 0,1 kg.

La Figs. 5-7 muestran cambios en cuanto al número de linfocitos de soldados que consumen productos de control o de tratamiento del Ejemplo 3. Se extrajo sangre como se ha descrito anteriormente en vacutainer® de heparina sódica (Becton Dickinson Co., Rutherford, NJ) cuatro veces. Las muestras de sangre venosas se obtuvieron en todos los sujetos el mismo día y la misma hora (entre 10 pm y 1 am). Además se procesaron exactamente las mismas muestras de sangre y al mismo tiempo. El recuento de células sanguíneas total y diferencial se realizó usando un aparato Abbott Laboratories Cell Dyn® (North Chicago, IL). Las Fig. 5 y 6 representan cambios (visita 2 en la medición inicial, visita 3 en la medición inicial y visita 4 en la medición inicial) en una subserie de linfocitos T analizados por métodos de citometría de flujo convencional o de microfluorometría de flujo. En resumen, las muestras de sangre entera se extrajeron y trataron con una solución de lisina de glóbulos rojos. Las células restantes se lavaron para retirar el desecho celular y se incubaron con anticuerpos monoclonales (es decir anticuerpos anti-CD3 y anti-CD4) marcados con fluorocromos. Una vez que los anticuerpos marcados con fluorocromo se unieron a poblaciones de células específicas, se lavaron y se fijaron. Después, las células marcadas y no marcadas se inyectaron en la citometría de flujo y se iluminaron individualmente mediante un láser. Se calculó el número de células usando el porcentaje de linfocitos y de sus series específicas de linfocitos así como el recuento de glóbulos blancos total. Esta tecnología permitió una evaluación exacta y rápida de múltiples propiedades de una sola célula o de poblaciones celulares. Los análisis se realizaron en un mínimo de 10.000 células en un software FACScan y Attractors (Becton Dickinson, San Jose, CA). En la Figura 7, los linfocitos se procesaron los linfocitos y después se estimularon durante cuatro horas con PMA e ionomicina. Las células se permeabolizaron y después se expusieron a anticuerpos dirigidos hacia citoquinas producidas por linfocitos Th1 o Th2. El cambio en el número de estos linfocitos CD4+ específicos se determinó por citometría de flujo como se ha descrito anteriormente. Se usó un Ensayo t de dos muestras para comparar los grupos. Los residuos obtenidos del ajuste del modelo se examinaron con un ensayo Shapiro-Wilk para evaluar si los residuos se distribuyeron de forma normal. Cualquiera de los parámetros para los que hubo evidencias de que los residuos no se distribuyeron de forma normal (P<0,5) en uno o más periodos de tiempo, fueron analizados con métodos no paramétricos. Esto consistió en clasificar los datos y después analizar las categorías con el Ensayo t de Dos Muestras, en concreto el ensayo Wilcoxon Rank Sum. Los cambios medios se presenta con SEM, *P<0,05 y \ddaggerP<0,10 con diferencia entre control y tratamiento.

Sumario de la invención

De acuerdo con la presente invención se ha descubierto que la supresión del sistema inmune, que normalmente se asocia con el estrés, puede prevenirse o disminuirse por la ingestión de antioxidantes junto con un componente de glicérido estructurado. Se ha descubierto que los individuos que experimentan estrés tienen menos respuesta a linfocitos que en comparación con un individuo que no padece estrés. Se ha demostrado que la combinación de un componente de glicérido estructurado y antioxidantes previene, o reduce significativamente, esta reducción en cuanto a la respuesta de linfocitos. Además, se ha demostrado en estudios clínicos que los individuos estresados que consumen un componente de glicérido estructurado junto con antioxidantes tuvieron un menor porcentaje de infección, en comparación con el grupo de control que no ingirió esta combinación.

Un aspecto adicional de esta invención se refiere a composiciones farmacéuticas y nutricionales que contienen un componente de glicérido estructurado en combinación con antioxidantes. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar el estrés inducido por la supresión del sistema inmune con una de las composiciones descritas anteriormente. Otros aspectos y realizaciones de la invención serán fácilmente evidentes para los especialistas en la técnica.

El primer componente de las composiciones o métodos de esta invención son los antioxidantes. Los antioxidantes específicos que producen este efecto beneficioso del sistema inmune son la vitamina E, selenio, vitamina C y \beta-Caroteno. La cantidad específica de cada antioxidante que el individuo debe ingerir para prevenir, o reducir, la supresión inmune relacionada con el estrés puede variar bastante dependiendo de la edad, peso, sexo del individuo de la presencia de otros estados de enfermedad subyacente. Sin embargo, a continuación en la Tabla I se indican las directrices para la cantidad de cada antioxidante que debe administrarse por dosis, al individuo estresado. Las cantidades indicadas a continuación sólo se presentan para ilustrar y ejemplificar de forma adicional la invención. No deben interpretarse como que limitan de forma alguna la invención. Además se presenta en forma tabular par ayudar al lector, y esta descripción debe interpretarse como que engloba una combinación en la que está presente un antioxidante como el nivel mínimo sugerido, aunque también está presente otro como el nivel más preferido, y cualquier combinación del mismo.

Directrices de dosificación para antioxidantes

1

El segundo componente de las composiciones y métodos de esta invención es el componente de glicérido estructurado. El componente de glicérido estructural utilizado en esta invención son típicamente glicéridos. Un componente triglicérido estructurado útil en esta invención comprende del 33 al 70% en peso de restos de acilo de longitud de cadena media (es decir de 4 a 12 átomos de carbono). Más preferiblemente, las cadenas de acilo media comprenden del 45 al 70% en peso, y más preferiblemente del 50 a 65% en peso En todos los porcentajes de peso, la longitud de las cadenas de acilo media es preferiblemente de 4 a 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 6 a 12, aún más preferiblemente de 8 a 10 átomos de carbono. El 30-67% en peso restante del triglicérido estructurado es típicamente un resto acilo de cadena larga (13-22 átomos de carbono). Más preferiblemente, las cadena acilo largas comprenden del 30 al 55% en peso, más preferiblemente del 35% al 50% en peso Preferiblemente, el dicho resto acilo de cadena larga en todos los porcentajes de peso comprende un resto de ácido graso poli-insaturado de cadena larga. El componente de glicérido estructurado se caracteriza preferiblemente porque comprende al menos el 40% (P/P) de una especie con un número de carbono equivalente (ECN) superior a 30 - inferior a 48, más preferiblemente un ECN de aproximadamente 32 a aproximadamente 42.

La cantidad del componente de glicérido estructurado que debería administrarse también puede variar bastante dependiendo de la edad, peso, sexo del individuo o de la presencia de otras afecciones subyacentes. Sin embargo, como directriz general, a un individuo se le administrará típicamente por dosis al menos un gramo de un componente de glicérido estructurado, más preferiblemente 1-100 g y aún más preferiblemente 10-50 g del componente de glicérido estructurado.

Para producir los efectos beneficiosos en el sistema inmune de un individuo estresado, la combinación de un componente de glicérido estructurado y los antioxidantes debería administrarse una vez al día y más preferiblemente dos veces al día. Se ha demostrado que esta combinación es muy eficaz en la reducción o prevención de la des-regulación del sistema inmune como resultado del estrés. El término "des-regulación" significa que el sistema inmune está funcionando de una forma que es menos eficaz que la que se encuentra en un estado típico o normal. Un animal que experimenta des-regulación de su sistema inmune es más susceptible a enfermedades y menos capaz de combatir infecciones.

Descripción detallada de la invención

De acuerdo con esta invención, se usan antioxidantes seleccionados junto con un componente de glicérido estructurado. Por "junto con" se entiende que los compuestos antioxidantes se administran a dicho individuo durante una hora de administración del componente de glicérido estructurado. Más preferiblemente, los antioxidantes se administran al mismo tiempo como el componente de glicérido estructurado, más preferiblemente se mezclan en la misma composición, tal como suplementos nutricionales entéricos, suplementos nutricionales, comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios, pulverizadores, grageas, gotas, lociones, pomadas, microcápsulas y liposomas.

La expresión "aceite comestible" se refiere a cualquier aceite derivado de plantas, animales, organismos celulares sencillos y similares que un mamífero puede comer y usar como fuente de nutrición. El término "lípido" indica un grupo heterogéneo de sustancias asociadas con sistema vivos que tienen la propiedad común de ser insolubles en agua y solubles en disolventes no polares tales como hidrocarburos y alcoholes.

La expresión "lípido estructurado" se refiere generalmente a un aceite o grasa que contiene restos acilo grasos específicos en una posición específica en el esqueleto en la estructural del glicerol. Como se usa en esta invención, un "componente de glicérido estructurado" se refiere a una mezcla de glicérido caracterizada en cuanto que puede contener mono-, di y triglicéridos, más típicamente di y triglicéridos, y de forma ideal un porcentaje superior de triglicéridos. Al menos el 40% de las especies de triglicéridos tienen aproximadamente el 33-70% en peso de restos acilo que tienen de 4 a 12 átomos de carbono, aproximadamente el 30-67% en peso de restos acilo que tienen más de 12 átomos de carbono y un número de átomos de carbono equivalente superior a 30 e inferior a 48.

Un glicérido es un éster de glicerol (1,2,3-propanotriol) con radicales acilo de ácidos grasos y también se denomina acilglicerol. Si sólo se esterifica con un ácido graso una posición de la molécula de glicerol, se produce un "monoglicérido"; si se esterifican dos posiciones, se producen un "diglicérido"; y si se esterifican las tres posiciones de glicerol con ácido graso se produce un "triglicérido" o "triacilglicerol". Un glicérido se denomina "sencillo" si todas las posiciones esterificadas contienen el mismo ácido graso; o "mixto" si están implicados diferentes ácidos grasos. Los carbonos de la estructura de glicerol se denominan sn-1, sn-2 y sn-3, estando sn-2 en la mitad y estando sn-1 y sn-3 en los extremos del glicerol.

Los aceites y grasas naturales están compuestos en gran medida de triglicéridos en los que los 3 restos acilo grasos pueden o no ser idénticos. La expresión "triglicéridos de cadena larga (LCT)" significa tanto un triglicérido sencillo como mixto que contiene ácidos grasos con más de 12 átomos de carbono (ácidos grasos de cadena larga - "LCFA"), mientras que la expresión "triglicéridos de cadena media (MCT)" significa tanto triglicéridos medios como mixtos que contienen ácidos grasos con 4-12 átomos de carbono.

El término "ECN" o "número de equivalente de carbono " significa la suma de los números de átomos de carbono en las cadenas de acilo de una molécula de glicérido. Por ejemplo, tripalmitina (glicerol tripalmítico), que un triglicérido sencillo que contiene 3 radicales acilo de 16 átomos de carbono, tiene un ECN de 3 x 16 = 48. Por el contrario, un triglicérido con un ECN = 40 puede tener longitudes de cadena acilo "mixtas" de 8, 16 y 16. 10, 14 y 16; 8, 14 y 18, etc. Los aceite naturales generalmente están "mezclados" con respecto a los ácidos grasos específicos, pero no suelen contener LCFA y MCFA en la misma estructura de glicerol. De esta forma, los triglicéridos con ECN de 24-30 suelen contener ácidos grasos de cadena media; mientras que los triacilgliceroles con ECN de más de 43 suelen contener predominantemente ácidos grasos de cadena larga. Los triglicéridos que tienen ECN de 32-42 suelen contener uno o dos MCFA en combinación con uno o dos LCFA para "cargar" el triglicérido. Los triacilgliceroles con ECN en el intervalo superior a 30 en inferior a 48 suelen representar especies de triacilglicerol mixta que son esencialmente únicas para el triglicérido estructurado y están ausente o están presentes en concentraciones significativamente más bajas en mezclas físicas.

Las expresiones "% en peso" o "porcentaje en peso" significa la relación entre la masa del componente citado y la masa del ingrediente especificado o composición entera multiplicada por 100. Por ejemplo, "un triglicérido que comprende el 40% en peso de restos acilo de 10 átomos de carbono" significa que 100 g del aceite de triglicérido consta de 40 g de radicales acilo de 10 átomos de carbono y 60 g de otros componentes, incluyendo otros radicales acilo y la estructura del glicerol.

Muchas de las propiedades de los lípidos alimentarios pueden contabilizarse directamente en cuanto a sus ácidos grasos que los componen. Los ácidos grasos que se dan en los productos alimentarios normalmente contienen un número constante de átomos de carbono en una cadena no ramificada, por ejemplo, ácido láurico o dodecanoico. Además de los ácidos grasos saturados, de los cuales un ejemplo es ácido láurico, los ácidos grasos pueden tener 1, 2 y a veces hasta 6 dobles enlaces y por tanto están insaturados. El número y la posición de dobles enlaces en ácidos grasos se designa mediante una convención de nomenclatura que normalmente entienden los químicos orgánicos. Por ejemplo, un ácido araquidónico ("AA" o "ARA") tiene una longitud de cadena de 20 carbonos y 4 dobles enlaces que comienza en el sexto carbono del extremo de metilo. Como resultado, a esto se le denomina "20:4 n-6". Asimismo, el ácido docosahexaenóico ("DHA") tiene una longitud de cadena de 22 carbonos con 6 dobles enlaces que comienzan en el tercer carbono del extremo de metilo y de esta forma se denominan "22:6 n-3".

El término "NAS-NRC RDA" se refiere a National Academy of Sciences-Nutrition Research Council Recommended Dietary Allowances.

Para los propósitos de la descripción contenida en este documento, el término "antioxidantes" se refiere a las siguiente cuatro sustancias: vitamina C, vitamina E, selenio y \beta-Caroteno.

El término "\beta-Caroteno" se refiere al precursor carotenoide de vitamina A que se encuentra en las plantas. Como hay diversos componentes que tienen actividad de vitamina A, las fuentes normalmente se expresan como equivalentes de retinol (RE). La conversión a \beta-Caroteno es 1 RE igual a 6 \mug de todos los \beta-Caroteno trans. Por lo tanto, los 15 mg de \beta-Carotenos es igual a 2500 RE. Los datos en cuanto al contenido carotenoide de las comidas están incompletos por lo que no es posible establecer con precisión el porcentaje de actividad de vitamina A en la dieta que aportan los carotenoides. Usando los datos de composición de alimentos disponibles, el Departamento de Estados Unidos de Agricultura descubrió que el consumo de vitamina A diario medio de un hombre adulto era de 1419 RE. El NAS-NRC RDA para hombres adultos se ha establecido en 1000 RE al día. Los signos de toxicidad de vitamina suelen aparecer sólo con ingesta diarias sostenidas, incluyendo tanto alimentos como suplementos, excediendo de 15.000 RE. En contraste con el retinol, los carotenoides, incluso cuando se ingieren en cantidades muy grandes durante semanas-años, se desconocen que sean tóxicos. Las principales razones de la falta de toxicidad son: eficacia muy reducida de actuación a altas dosis, y conversión relativamente limitada a vitamina A en el intestino, hígado y otros órganos. El \beta-Caroteno es una fuente de vitamina A; sin embargo, no es tóxico como la vitamina A cuando se administra a dosis muy altas. El \beta-Caroteno se encuentra en vegetales verdes de hojas amarillas, naranjas y oscuras y parece ser un antioxidante único.

El término "vitamina E" significa un grupo de tocoferoles que tienen las designaciones \alpha-, \beta-, \delta-, y \gamma-, que se diferencia sólo en cuanto al número y la posición de grupos metilo en el anillo. La forma más activa de vitamina E, \alpha-tocoferol, también es la más distribuida en la naturaleza. Cuando se sintetizó primero \alpha-tocoferol, se descubrió que el material sintético tenía una actividad biológica levemente más baja que el alfa-tocoferol de plantas. Debido a este fenómeno, la forma natural se ha denominado RRR-\alpha-tocoferol. Para los propósitos dietéticos, la actividad de la vitamina E se expresa como equivalente de RRR-\alpha-tocoferol (-TEs). Un \alpha-TE es la actividad de 1 mg de REACCIÓN-\alpha-tocoferol. Un mg de REACCIÓN-\alpha-tocoferol equivale a 1,49 IU de vitamina E. El NAS-NRC RDA ha establecido a 10 mg -TE al día para hombres adultos. Los análisis de dietas equilibradas indican que la media de consumo diario de \alpha-TE varía de 7 a 11 mg. Los adultos toleran dosis orales de 100 a 800 mg/día sin síntomas o evidencias bioquímicas de toxicidad.

El término "vitamina C" significa ácido ascórbico. El consumo de ácido ascórbico para hombres adultos entre 20 y 29 años de edad se descubrió que era una media de 121 mg al día (U.S. Dept. of Health and Human Services, 1994). El NAS-NRC RDA para ácido ascórbico se ha establecido el 60 mg para hombres adultos. Mucha gente suele ingerir de forma habitual 1000 mg al día de ácido ascórbico sin desarrollar manifestaciones tóxicas aparentes.

El término "selenio" significa cualquier compuesto químico que proporciona selenio biológicamente disponible. Los análisis de consumo de comida en Estados Unidos indican que el consumo de selenio dietético medio en adultos era de 108 \mug al día entre 1974 y 1982. El NAS-NRC RDA para selenio se ha establecido en 70 \mug al día para hombres adultos. El nivel de exposición de selenio dietético necesario para provocar envenenamiento crónico en seres humanos se desconoce a ciencia cierta. Sin embargo, aproximadamente 5 mg al día en comida dan lugar a cambios en la uña y a pérdida de cabello en la zona selenífera de China.

Cualquier referencia en esta solicitud a una cantidad de selenio, o a cualquier otro mineral, incluyendo cobre debe entenderse como que se refiere a la cantidad elemental de mineral y no a cualquier otro anión asociado. Un especialista en la técnica puede calcular fácilmente una cantidad de sal mineral, sal o complejo salino o mineral debe añadirse a un producto nutricional o farmacéutico para suministrar la cantidad deseada del mineral elemental.

"Oligosacáridos no digeribles" se refiere a un carbohidrato que es resistente a la digestión endógeno en el tracto digestivo superior humano. Los FOS son oligosacáridos no digeribles que son miembros de la subclase de inulina de fructosanos; polímero compuestos de restos de fructosa. Especialmente, las insulinas son glucofructosanos, polímeros de carbohidrato, compuestos de una cadena de restos de fructosa unida por enlaces (2\rightarrow1)-\beta-glicosídicos y que normalmente tienen un único resto D-glicosilo enlazado (1\rightarrow2)-\alpha a la primera molécula de fructosa. Los FOS pueden producirse enzimáticamente mediante técnicas químicas o por extracción de sustancias naturales. FOS se produce en la naturaleza en muchos tipos de plantas incluyendo cebollas, ajos, charotes, alcachofas, trigo, centeno, plátanos, espárragos y tomates que normalmente forman parte de la dieta del ser humano. Un método enzimático para producir FOS se forma industrial se muestra en la Patente de Estados Unidos Nº 4.681.771 de Adachi, et al., que comprende hacer reaccionar la sacarosa en presencia de una fructositransferasa para obtener GF2, GF3, GF4 y GF5. La fuente para la fructositransferasa enzimática podría ser un hongo tal como Aspergillus niger o un vegetal.

El término "FOS" significa fructooligosacáridos. FOS son sustancias naturales compuestas principalmente de moléculas de fructosa. Pertenecen a un grupo de carbohidratos que se encuentran en muchas plantas diferentes. Los FOS son oligosacáridos no digeribles que pasan a través del intestino delgado si digerirse, llegando al intestino grueso donde se fermentan de forma selectiva mediante ciertos micro-organismos. FOS puede utilizarse de forma eficaz por lactobacilus y bifidobacterias, especies de bacterias que son beneficiosas para la salud humana. La fermentación selectiva de FOS por bifidobacterias da lugar a un aumento en cuanto a la presencia de estas bacterias y a la producción de ácido acético y ácido láctico, dando lugar a un pH inferior en el tracto digestivo y proporcionando un medio para prevenir sobre crecimiento de bacterias perjudiciales como E. coli, Clostridium perfringes y Clostridium difficile. Los oligosacáridos no digeribles tales como FOS pueden añadirse a los inmunonutricionales de acuerdo con la invención para crear un medio en el tracto gastrointestinal que no promueva el crecimiento de patógenos microbianos y que mejore las propiedades y de inmuno-apoyo de los inmunonutricionales de la invención.

Los estudios de toxicidad en animales no han mostrado pruebas de toxicidad, mutageneicidad o efectos carcinogénicos debidos a FOS y a oligosacáridos no digeribles. Una cantidad terapéuticamente eficaz de FOS o de oligosacáridos no digeribles en la presente invención puede estar en intervalo de 1,0 a aproximadamente 10 g al día. Más preferiblemente, la cantidad de FOS consumida es de aproximadamente 5,0 a 10,0 g al día, con un nivel más preferido de aproximadamente 8,0 a 10 g al día. La presencia de oligosacáridos no digeribles o FOS es óptima en los inmunonutricionales de la presente invención.

Como se usa en esta solicitud, se entiende que la fibra dietética está en todos los componentes de los alimentos que no son descompuestos por las enzimas en el tracto digestivo humano para producir compuestos moléculas pequeños y que por lo tanto se absorben. Los ejemplos de fibras dietéticas que pueden utilizarse además de FOS incluyen polisacárido de soja, fibra de cáscara de avena, goma arábiga, carboximetilcelulosa sódica, goma de guar, pectina, salvado de maíz, etc. Más preferiblemente, cualquiera de las fibras dietéticas utilizadas en las composiciones se mezclará con fibras insolubles, fermentables solubles y no fermentables solubles descritas en la Patente de Estados Unidos Nº 5.104.677. La descripción de la Patente 677 se incorpora en este documento como referencia. Cualquiera de las composiciones nutricionales o farmacéuticas de la presente invención puede contener opcionalmente fibras dietéticas.

Los antioxidantes utilizados en las composiciones nutricionales y farmacéuticas de esta invención se conocen bien en la técnica. Están disponibles en el mercado numerosas fuentes bien conocidas en para los especialistas en la técnica.

Además de los antioxidantes, todas las composiciones nutricionales y farmacéuticas de esta invención contienen un componente de glicérido estructurado, de al menos un 33% en peso de MCFA esterificado de forma aleatoria. El resto de los restos de ácidos grasos son típicamente LCFA. La fuente del MCT y LCT usada para preparar el componente de glicérido estructurado no es vital. Los especialistas en la técnica conocen fuentes típicas de MCT tales como aceite de coco fraccionado y aceite de palma fraccionados. Las fuentes de LCFA incluyen los aceite derivados de borraja, semilla de grosella negra, maíz, coco, cánola, semilla de soja, aceites de pescados, aceites fúngicos, cartamo, cartamo oleico alto, girasol, girasol oleico alto, aceite de oliva, hierba de noche de Missouri (Oenothera macrocarpa), semilla de algodón, salvado de arroz, semilla de uva, linaza, grasa láctea, ajo, cacahuetes, almendras, nueces, germen de trigo, huevos, sésamo, manteca, sebo y cordero.

En una realización más preferida, el componente de glicérido estructurado de la invención también contiene un ácido graso poli-insaturado de cadena larga (en lo sucesivo "LCPUFA") tal como los ácidos grasos de cadena larga n-6, n-9 y/o n-3. Las fuentes conocidas de LCPUFA incluyen aceite de pesado, lípidos de yema de huevo, aceites de células sencillas (por ejemplo, aceites de algas y aceites fúngicos), y en la técnica se entiende que algunas fuentes son mejores que otras para conseguir cantidades superiores de LCPUFA específico. Otras fuentes comestibles, semipurificadas o purificadas de LCPUFA será evidentes para los especialistas en la técnica. Por ejemplo, pueden desarrollarse nuevas fuentes de LCPUFA mediante la manipulación genética de vegetales y de plantas que tienen aceite. El uso de tales aceites recombinantes también está contemplado en la presente invención.

Los glicéridos estructurados útiles en la presente invención contienen tanto MCFA como LCFA. Los glicéridos saturados útiles en esta invención son químicamente distintos y ofrecen ventajas únicas de los materiales de partida de los que se derivan. Un aspecto de la presente invención reside en el descubrimiento de que los triglicéridos estructurados que contienen una cierta mezcla de MCFA y LCFA están sujetos a una hidrólisis de absorción rápida en comparación con LCT. Además, los triglicéridos estructurados de esta invención se absorben y transportan principalmente a través del sistema linfático en contrario de la vía hepática.

En las grasas de aceite naturales, los diversos ácidos grasos se esterifican mediante uno de los tres grupos hidroxi de la molécula de glicerol en un patrón ordenado que es característico de la grasa o aceite particular. En general, los ácidos grasos saturados de cadena larga naturales (por ejemplo C_{16}-C_{18}) están principalmente en las posiciones sn-1 y sn-3, mientras los ácidos grasos mono- y poli-insaturados están en la posición sn-2 o la posición media de la molécula de triglicérido. Sólo hay un pequeño número de "triglicéridos sencillos" naturales, por ejemplo, tripalmitina (C_{16}), trioleina (C_{18}) y similares.

El componente del triglicérido saturado de esta invención contendrá predominantemente triglicéridos, 50% en peso o más, frecuentemente aproximadamente el 90% en peso. De estos triglicéridos (independientemente de su proporción) al menos el 40% en peso tiene un ECN superior a 30 y inferior a 48. Más preferiblemente, el componente de glicérido estructurado tendrá al menos el 60% en peso de especies con ECN superior a 30 e inferior a 48, más preferiblemente, al menos el 60% en peso con ECN de aproximadamente 32 a aproximadamente 42.

Los glicéridos estructurados de esta invención pueden prepararse mediante cualquier procedimiento comúnmente usado para fabricar lípidos estructurados. Por ejemplo podría usarse una reacción de inter-esterificación o trans-esterificación realizada mezclando aceites o fracciones selectivas de aceites, en proporciones estequiométricas y después provocando la reacción de trans-esterificación para continuar usando catalizadores o enzimas. Además, un especialista en la técnica podrá modificar por ingeniería genética las plantas que tienen aceite para producir los glicéridos estructurados específicos descritos en esta invención. Aunque puede producirse un procedimiento de trans-esterificación convencional en una mezcla del componente, que contiene los triglicéridos estructurados de la invención junto con otros aceites, tal mezcla del componente pretende incluirse en las reivindicaciones.

Es posible utilizar aceites MCT como materiales de partida para preparar los lípidos estructurados útiles en esta invención. Los aceites MCT, tales como aceite de coco fraccionado y aceites palma fraccionados, se obtienen mediante la hidrólisis de los aceites de coco y palma y la destilación de los ácidos grasos. Después, los ácidos grasos se re-esterifican en moléculas de glicerol para obtener el aceite MCT.

El proceso de inter-esterificación química usado para la preparación de los triglicéridos estructurados en los siguientes ejemplos se realiza de acuerdo con lo indicado en "Oils and Fats Manual, A. Comprehensive Treatise", Vol. 2, Capítulo 11, Transformation of Fat for Use in Food Products, págs. 923-925, cuyas contenidos se incorporan a este documento como referencia. La inter-esterificación química, también denominada co-aleatorización (ya que altera la distribución no aleatoria de la naturaleza) puede realizarse calentando una mezcla de aceites durante un periodo de tiempo corto (por ejemplo de 0,5 a 4 horas, preferiblemente de 0,5 a 2 horas a temperaturas de 100-140ºC, preferiblemente 110-130ºC) en presencia de un catalizador tal como metilato sódico o metóxido sódico (por ejemplo a un intervalo del 0,05-0,5% en peso, más preferiblemente del 0,1 al 0,3% en peso). Los ácidos grasos dejan su posición natural en el triglicérido y se re-organizan de una forma aleatoria (presumiblemente igual en cada una de las tres posiciones). De esta forma, aproximadamente un tercio de cada ácido graso individual se re-esterificará en la posición
sn-1, aproximadamente un tercio en la posición sn-2 y aproximadamente un tercio en la posición sn-3.

Como se ha observado anteriormente, es posible prevenir o reducir la supresión inducida por estrés del sistema inmune administrando por separado los antioxidantes y el componente del triglicérido estructurado. Cualquier administración separada debe considerarse como parte de la invención. Sin embargo, es mucho más conveniente para el individuo que los antioxidantes y los componentes del glicérido estructurado se administren conjuntamente en una composición única. Esta composición puede administrarse en forma de un producto nutricional tal como, por ejemplo, una fórmula o concentrado entérico. Otros productos nutricionales o productos alimentarios incluyen barritas, pudín, geles, dulces, tales como caramelo, chicles, grageas y similares. El antioxidantes y el componente del glicérido estructurado también pueden administrase en forma de una composición farmacéutica. Los ejemplos de composiciones farmacéuticas adecuadas incluyen comprimidos, cápsulas, suspensiones, emulsiones, soluciones, etc.

Una composición nutricional típica de la presente invención tendrá macronutrientes comestibles, vitaminas y minerales en cantidades deseadas para uso particular. Las cantidades de tales ingredientes variarán dependiendo de si la formulación pretende usarse con individuos normales, sanos expuestos temporalmente al estrés, o con sujetos que tienen necesidades concretas debido a ciertos estados de enfermedad crónica o aguda (por ejemplo, trastornos metabólicos). Se entenderá por parte de los especialistas en la técnica que los compuestos utilizados en una formulación nutricional de la presente invención son de origen semipurificado o purificado. Por semipurificado o purificado se entiende un material que se ha preparado mediante la purificación de un material natural o mediante síntesis. Estas técnicas se conocen bien en la técnica (Véase, por ejemplo, Code of Federal Regulations for Food Ingredients and Food Processing; Recommended Dietary Allowances, 10ª Ed., National Academy Press, Washington D.C., 1989).

En una realización preferida, una formulación nutricional de la presente invención es un producto nutricional entérico líquido para un mamífero, incluyendo seres humanos tales como adultos, niños, jóvenes. Por consiguiente, en un aspecto adicional de la invención se proporciona una formulación nutricional que es adecuada para la alimentación de adultos, que experimentan estrés. La fórmula comprende, además de los antioxidantes y del componente del glicérido estructurado; macronutrientes, vitaminas y minerales en cantidades designadas para proporcionar los requerimientos nutricionales diarios de adultos.

Los componentes macronutricionales incluyen grasas comestibles, carbohidratos y proteínas. Son grasas comestibles ilustrativas aceite de coco, aceite de soja, y mono- y diglicéridos. Son carbohidratos ilustrativos glucosa, lactosa comestible y almidón de maíz hidrolizado. Una fuente proteica típica es la proteína de soja, suero electrodializado o leche desnatada o suero de leche desnatada electrodializada, o los hidrolisatos de estas proteínas, aunque también pueden estar disponibles y pueden usarse otras fuentes proteicas. Estos macronutrientes se añadirán en forma de compuestos nutricionales comúnmente aceptados en cantidades equivalentes a las que están presentes en la leche humana en bases energéticas, es decir, en una base por cada caloría.

Aunque la invención no pretende limitar de forma alguna, sino servir únicamente como guía general, una fórmula nutricional líquida de esta invención proporcionará típicamente la siguiente distribución calórica. El sistema proteico proporcionará típicamente de aproximadamente 5% a aproximadamente el 25% de las calorías totales, más preferiblemente de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 20% de las calorías totales. El sistema lipídico proporcionará aproximadamente del 5 a aproximadamente el 50% de las calorías totales, y más preferiblemente de aproximadamente el 20% a aproximadamente el 40% de las calorías totales, incluyendo glicérido estructurado. Típicamente se proporcionará el 10-40% de las calorías totales mediante el lípido estructurado y más preferiblemente el 15-25%. El sistema de carbohidratos proporcionada típicamente aproximadamente del 20% a aproximadamente el 90% de las calorías totales, más preferiblemente de aproximadamente el 30% a aproximadamente el 60% de las calorías totales.

Los métodos para formular fórmulas nutricionales líquidas y entéricas son bien conocidos en la técnica y se describen con detalle en los ejemplos.

La fórmula entérica puede esterilizarse y utilizarse posteriormente en una base lista para tomar (RTF) o puede almacenarse en un líquido concentrado o en un polvo. El polvo puede prepararse secando por pulverización la fórmula entérica como se ha indicado anterior, y la fórmula puede reconstituirse rehidratando el concentrado. Las fórmulas nutricionales para adultos y niños son bien conocidas en la técnica y están disponibles en el mercado (por ejemplo., Similac®, Ensure®, Jevity® y Alimentum® de Ross Products Division, Abbott Laboratories).

La densidad energética de la composición nutricional cuando esta en forma líquida, puede variar típicamente de aproximadamente 0,3 a 2 calorías por ml. Cuando está en forma sólida o en polvo, el suplemento nutricional puede contener de aproximadamente 1,0 a más de 7 kcals por g. En general, la osmolalidad de un producto líquido debe ser inferior a 700 mOsm y más preferiblemente inferior a 660 mOsm.

Cuando el componente de glicérido estructurado se incorpora en una composición nutricional, suele estar presente en mezclas con lípidos, incluyendo glicéridos naturales, incluyendo triglicéridos (es decir, glicéridos no estructurados). La presencia de un glicérido no estructurado no tendrá ningún efecto perjudicial en la presente invención, con la condición de que el componente de glicérido estructurado esté presente en una cantidad suficiente para tener sus efectos beneficiosos en el sistema inmune estresado. Estas cantidades se han descrito anteriormente. En tal producto nutricional típico, el componente de glicérido estructurado tendrá al menos el 20% p/p de los lípidos totales contenidos en el producto, más preferiblemente al menos el 50% p/p, y más preferiblemente aproximadamente el 80% p/p.

La fórmula nutricional incluirá típicamente vitaminas y minerales, además de antioxidantes, para ayudar al individuo a ingerir los requerimientos diarios mínimos de estas sustancias. Además de los antioxidantes indicados anteriormente, también puede ser deseable suplementar la composición nutricional con cinc, cobre y ácido fólico. Se cree que estas sustancias también proporcionarán estimulo al sistema inmune estresado y de esta forma proporcionarán beneficios adicionales al individuo. Si se utiliza el cinc, la dosis típica será al menos de 12,5 mg, más preferiblemente 25-200 mg, y aún más preferiblemente 50-150 mg. Si utiliza el cobre, la dosis es típicamente de al menos 0,8 mg, más preferiblemente 1,6-5,0 mg y aún más preferiblemente 2,4 mg. Si se utiliza ácido fólico, la dosis es típicamente de al menos 100 \mug, más preferiblemente 200-600 \mug, y aún más preferiblemente 300-500 \mug. Estas dosis deberían proporcionarse al menos una vez al día y más preferiblemente dos veces al día. La presencia de cinc, cobre o ácido fólico es óptima y no se requiere para obtener efectos beneficiosos en la supresión inmune. Asimismo, una composición farmacéutica puede suplementarse con estas mismas sustancias.

En una realización más preferida, la composición inmunonutricional contiene, además del sistema antioxidante y del componente de glicérido estructurado, una fuente de carbohidrato donde al menos el 5% en peso de dicho carbohidrato es un oligosacárido no digerible. En otra realización más preferida, la composición nutricional contiene adicionalmente proteína, taurina y carnitina.

Además de las fórmulas entéricas, otra composición nutricional preferida es una en forma sólida. Tales formas sólidas incluyen barritas, galletas, galletas saladas, etc. Ciertos consumidores prefieren tales composiciones. Las composiciones sólidas pueden ser más fáciles de transportar debido a su poco peso. Algunos consumidores prefieren las sensaciones táctiles asociadas al mascar y de esta manera estas formas sólidas amplia el número de individuos que pueden recibir los efectos beneficiosos asociados con la presente invención.

Los intentos iniciales para preparar estas composiciones nutricionales sólidas se asociaron con dificultades. Como se ha indicado anteriormente, la invención es el descubrimiento de que un lípido estructurado, en combinación con ciertos antioxidantes, reduce la supresión del sistema inmune que se asocia con estrés. Debido a la necesidad de que las composiciones contengan cantidades sustanciales de lípidos estructurados, se encontraron ciertas complicaciones que afectaban negativamente a la estabilidad de las composiciones, su palatabilidad al consumidor y su eficacia en la reducción de la supresión del sistema inmune.

Los intentos iniciales se realizaron para preparar barritas que contenían cantidades eficaces del lípido estructurado y de los antioxidantes. Estos intentos iniciales tuvieron muchos fallos. A pocos minutos de estar preparando el núcleo de la barrita, el lípido comenzó a derramarse del núcleo. Tales núcleos de la barrita no se procesaron, ya que cualquiera de tales barritas se consideraría hipotéticamente como altamente no deseable por parte de sujetos de ensayo. Además, debido a la filtración del lípido, sería imposible determinar cuanto lípido estructurado consumía realmente el paciente y cuanto perdía. Un lípido filtrado también intentaría destruir la integridad física de la barrita. Se cree que esta disminución en cuanto a la integridad tendría un impacto negativo en la estabilidad de los ingredientes de la barrita. Los ingredientes se expusieron a oxígeno adicional y de esta forma a un mayor riesgo de degradación oxidativa. Se cree que tales barritas tendrían un periodo corto de vida no aceptable (es decir mucho menos de los 12 meses de vida deseados).

Mediante experimentación adicional, los inventores desarrollaron barrita que ya no eran susceptible a este problema de filtración. Estas nuevas barritas no mostraban ninguna filtración después de un periodo de ensayo de al menos 24 meses. La solución a este problema de filtración fue incorporar ciertas proteínas de la matriz de la barrita (o cualquier otra composición sólida). El problema de la filtración también puede mejorarse incorporando ciertos carbohidratos en la matriz sólida.

Por consiguiente, se ha descubierto que las composiciones nutricionales sólidas que incorporan lípidos estructurados pueden prepararse de forma que no filtren el líquido estructurado. La solución al problema es incorporar proteínas de soja en la composición. La cantidad de proteína de soja que producirá este efecto beneficioso puede variar bastante. Sin embargo, incorporando aproximadamente el 4 a aproximadamente el 20% p/p (en función del peso total del compuesto nutricional sólido), y más preferiblemente aproximadamente del 7 a aproximadamente el 9% p/p de la proteína de soja se minimizará el problema de la filtración. En la actualidad se utilizan proteínas de soja de Protein Technologies, Inc. Si se desea, pueden incorporarse otras fuentes proteicas en las barritas.

Otros efectos beneficiosos pueden producirse incorporando el emulsionante, lecitina, en la composición. La cantidad utilizada puede variar bastante, pero típicamente variará de aproximadamente el 0,4 a aproximadamente el 2% p/p y más preferiblemente del 0,8 a aproximadamente 0,9% p/p (en función del peso total de la composición). Pueden producirse beneficios adicionales incorporando miel en la composición en una cantidad que varía de aproximadamente el 16 a aproximadamente el 26% p/p y más preferiblemente aproximadamente del 20 a aproximadamente el 22% p/p. Como será fácilmente evidente para los especialistas en la técnica, cuando se incorpora la miel y la lecitina en la composición, se requerirá menos proteína de soja para mejorar el problema de la filtración. Todas las cantidades especificadas anteriormente se basan en el peso de la barrita total. Un especialista en la técnica podrá determinar fácilmente estas cantidades en función de las enseñanzas de esta memoria descriptiva.

La proteína de soja es bien conocida en la técnica y esta disponible en muchas fuentes, tales como la DuPont Chemical Company of Wilmington. La solicitud de la patente de Estados Unidos en tramite junto con la presente 09/107.886 presentada el 30 de junio de 1998 contiene una descripción detallada con referencia a la proteína de soja y los contenidos de esta solicitud de patente se incorporan en este documento como referencia.

Las composiciones nutricionales sólidas en concentraciones comparables pueden utilizarse cualquiera o todos los macronutrientes descritos para las composiciones líquidas. Además de los antioxidantes requeridos, las vitaminas y minerales también pueden incorporarse opcionalmente en estas composiciones en cantidades comparables a las descritas para las fórmulas líquidas. La distribución calórica relativa de estas composiciones sólidas puede variar bastante. El componente proteico proporcionara típicamente de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 50% de las calorías totales y más preferiblemente de aproximadamente el 12% a aproximadamente el 25%. El componente carbohidrato proporcionará típicamente de aproximadamente el 30% a aproximadamente el 90% de las calorías totales y más preferiblemente de aproximadamente el 50% a aproximadamente el 60%. El componente graso proporcionará típicamente de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 50% y más típicamente de aproximadamente el 25% a aproximadamente el 35%.

Las composiciones nutricionales sólidas pueden fabricarse usando tecnología de extrusión fría como se conoce en la técnica. Para preparar tales composiciones, típicamente todos los componentes en polvo se mezclarán conjuntamente en seco. Tales constituyentes incluirán típicamente las proteínas, premezclas de vitamina, ciertos carbohidratos, etc. Después, los componentes solubles grasos se mezclan conjuntamente y se preparan con la premezcla en polvo anterior. Tal sustancia soluble grasa incluirá el lípido estructurado y cualquier otra grasa incorporada en la mezcla. Finalmente, después se mezcla en la composición cualquier componente líquido, formando una composición o masa en forma de plástico.

El proceso anterior pretende proporcionar una masa de plástico a la que después se le puede dar forma, sin cambios físicos o químicos adicionales, mediante el procedimiento conocido como formación o extrusión en frío. En este proceso, la masa de plástico se somete a presión relativamente baja a través de un molde que confiere la forma deseada y después el exudado resultante se corta en una posición apropiada para dar productos de peso deseado.

La masa puede forzarse, por ejemplo, a través de una boquilla de pequeña sección transversal para formar una cinta, que se transporta en una cinta transportadora que se mueve a una velocidad predeterminada bajo una cuchilla de tipo guillotina que funciona a intervalos regulares. La cuchilla, en este caso, consiste generalmente en una hoja afilada ajustada de manera que corta a través de la cinta pero no la cinta transportadora subyacente, aunque puede consistir también en un cable. En ambos casos el principio es el mismo, el proceso de corte ocurre a intervalos que permiten cortar la cinta en movimiento en trozos de peso y dimensiones equivalentes. Generalmente, esto se consigue temporizando los impulsos de corte y manteniendo la velocidad de la cinta transportadora a un nivel apropiado, aunque existen también versiones controladas por ordenador de este mecanismo que ofrecen gran versatilidad. Como alternativa, la masa puede forzarse a través de una boquilla de gran sección transversal y después cortar a un nivel de boquilla en rodajas mediante un cuchillo o cable oscilante, que cae sobre una cinta transportadora en movimiento y por lo tanto se transporta. La masa puede extrudirse también como una hoja, que después se corta con una cuchilla de tipo sello en formas que son apropiadas tales como una cuchilla de tipo galletita. Finalmente, la masa puede forzarse también al interior de cámaras en una boquilla rotatoria equipada con una leva excéntrica que fuerza a salir el material formado de esta manera desde la cámara a un cierto punto en una rotación de la boquilla cilíndrica.

Después de darle forma, el producto formado se mueve mediante una cinta transportadora de transferencia u otro tipo de transportador de material a una zona en la que puede procesarse adicionalmente o simplemente envasarse. En general, una barrita nutricional del tipo descrito se reviste (recubre) con un material que puede ser chocolate, un compuesto de recubrimiento de chocolate, o algún otro tipo de material de recubrimiento. En todos los casos, el material de recubrimiento consiste en una grasa que es sólida a temperatura ambiente, pero que es líquida a una temperatura mayor de por ejemplo 88ºF, junto con otros materiales que confieren los atributos organolépticos. Por lo tanto, el recubrimiento se aplica a la barrita mientras está fundida, permitiendo que la barrita pase a través de una cortina que cae o un recubrimiento líquido, al mismo tiempo pasando sobre una placa o rodillos que permiten aplicar el recubrimiento por la superficie inferior de la barrita, el exceso de recubrimiento se retira por soplado mediante inyectores de aire. Finalmente, la barrita revestida se hace pasar otra vez de un túnel de enfriado donde las corrientes de aire refrigeradas retiran el calor y provocan que el recubrimiento solidifique.

Las composiciones farmacéuticas o suplementos dietarios pueden utilizarse para administrar los antioxidantes y el componente del glicérido estructurado al individuo estresado. Las composiciones farmacéuticas adecuadas pueden comprender soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles fisiológicamente afectables y polvos estériles para reconstituir en soluciones o dispersiones estériles para ingestión. Los ejemplos de portadores, diluyentes, disolventes o vehículos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y similares), mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, manteniendo el tamaño de partícula necesario en el caso de dispersiones y usando tensioactivos. Puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, cloruro sódico y similares. Aparte de dichos diluyentes inertes, la composición puede incluir adyuvantes, tales como agente humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, edulcorantes, agentes aromatizantes y perfumes.

Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión como por ejemplo alcoholes isostearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, o mezclas de esas sustancias, y similares.

Las formas de dosificación sólidas tales como comprimidos y cápsulas pueden prepararse usando técnicas bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, los antioxidantes y el componente de glicérido estructurado puede formar comprimidos con bases de comprimido convencionales tales como lactosa, sacarosa y almidón de maíz en combinación con aglutinantes tales como goma arábiga, almidón de maíz o gelatina, agentes disgregantes tales como almidón de patata o ácido algínico y un lubricante tal como ácido esteárico o estearato de magnesio. Las cápsulas pueden prepararse incorporando estos excipientes en una cápsula de gelatina junto con los antioxidantes y el componente de glicérido estructurado. La cantidad de antioxidantes y componente de glicérido estructurado que debería incorporarse a la formulación farmacéutica debería ajustarse con las directrices analizadas anteriormente en la sección de sumario. Como se usa en este documento, los términos composición farmacéutica y suplemento dietario debían considerarse intercambiables.

Como se ha descrito anteriormente, la invención se refiere a prevenir o reducir la suspensión de un sistema inmune que está asociado con el estrés. Como se usa en esta solicitud el estrés se refiere a estímulos adversos que pueden ser físicos, emocionales, mentales, externos o internos y que tienden a alterar la homeostasis de los individuos. Los ejemplos de estrés incluyen actividad física tal como trabajo o ejercicio, emocional tal como preocupaciones relacionadas con la privación o inseguridad en el trabajo, enfermedades crónicas mentales o físicas, dificultades de salud, etc. Cualquier estímulo externo o interno o combinación de los mismos, que causa la ansiedad de individuo y en consecuencia puede conducir a una supresión del sistema inmune debería considerarse que es estrés para el propósito de esta invención.

El estrés está relacionado con el efecto negativo sobre el sistema inmune. Hay una clara reducción en la respuesta de linfocitos durante los períodos de estrés. Además, también hay un aumento de la incidencia de infección durante el estrés. Las composiciones nutricionales y farmacéuticas de esta invención tendrán un efecto beneficioso sobre el sistema inmune del individuo estresado. Estas composiciones harán disminuir la tasa de infección así como prevenir o minimizar la disminución de la respuesta de linfocitos.

Cuando las composiciones nutricionales o farmacéuticas de acuerdo con esta invención se consumen en una cantidad terapéuticamente eficaz, el nivel de supresión o des-regulación inducida por estrés del sistema inmune se reduce. Los especialistas en la técnica entenderán que las cantidades eficaces del compuesto inmunonutricional dependerán de factores tales como la edad y el peso del individuo. Para el ser humano hombre de 70 kg típico, la dosis diaria terapéuticamente eficaz es de al menos 200 IU de vitamina E, 50 \mug de selenio, 250 mg de vitamina C, 7,5 mg de
\beta-Caroteno y 1,0 gm de glicérido estructurado.

Un aspecto adicional de la invención se refiere a reducir la incidencia de infección en un animal mediante la administración de la composición de la invención al animal. La infección es una invasión y multiplicación por microorganismos tales como virus y bacterias en tejidos del cuerpo, que pueden no ser clínicamente evidentes o pueden resultar en la lesión celular local debido a metabolismo competitivo, toxinas, replicación intracelular, o respuesta antígeno-anticuerpo. En el Ejemplo 2 a continuación, en la composición de esta invención se demuestra que es muy eficaz para reducir la incidencia de la enfermedad de las vías respiratorias superiores (tanto víricas como bacterianas) en un ser humano.

Como se usa en esta solicitud, el término "tratar" se refiere tanto a prevenir o reducir la incidencia del suceso no deseado. Por ejemplo, tratar la supresión inmune se refiere tanto a prevenir la aparición de esta supresión como a reducir cantidad de dicha supresión. Los términos "paciente" y "individuo" se usan de manera intercambiable y ambos se refieren a un animal. El término "animal" como se usa en esta solicitud se refiere a cualquier mamífero de sangre caliente incluyendo, aunque sin limitación, a perros, seres humanos, monos y simios. Como se usa en la solicitud, el término "aproximadamente" se refiere a una cantidad variable en un intervalo establecido o un número de una cantidad razonable dependiendo del contexto del uso. Cualquier número o intervalo numérico especificado en la memoria descriptiva debe considerarse modificado por el término aproximadamente.

"Dosis" y "servicio" se usan de manera intercambiable y se refieren a la cantidad de composición nutricional o farmacéutica ingerida por el paciente en una sola toma y diseñadas para suministrar cantidades eficaces de los antioxidantes y del triglicérido estructurado. Como los especialistas en la técnica entenderán fácilmente, una sola dosis o servicio del polvo nutricional líquido suministraría la cantidad de antioxidantes y glicérido estructurado analizado anteriormente en la sección de sumario de la invención. La cantidad de dosis o servicio debería ser un volumen que un adulto típico puede consumir en una toma. Esta cantidad puede variar ampliamente dependiendo de la edad, peso, sexo o estado médico del paciente. Sin embargo, como directriz general, un solo servicio o dosis de un producto nutricional líquido debería considerarse que incluye un volumen de 100 a 600 ml, más preferiblemente de 125 a 500 ml y más preferiblemente de 125 a 300 ml. Para una composición sólida, la cantidad que puede consumirse en una sola toma es típicamente una barrita, galleta, galleta salada, etc. El peso de dicha composición puede variar de 27 a aproximadamente 165 gramos, y más preferiblemente de aproximadamente 60 a aproximadamente 100 gramos.

Los siguientes ejemplos no limitantes ilustrarán adicionalmente la presente invención.

Ejemplo 1 Preparación del sistema antioxidante

En este experimento, se prepararon dos (2) productos líquidos para evaluar la supresión inmune inducida por
estrés en un ser humano. La Tabla 1 expone el conjunto de materiales para un lote de fórmulas de Control y
Experimentales.

TABLA 1

Conjunto de materiales Sistema antioxidante - Formulaciones

2

\begin{minipage}[t]{153mm}*El color antes se
añadió al producto de control para ajustar el color del producto
experimental que contenía  \beta -Caroteno. Esto era
necesario para  hacer que los sujetos de estudio desconocieran el
tratamiento.\end{minipage}

Las materias primas en las fórmulas de Control y Experimentales se obtuvieron de suministradores comerciales y fueron de calidad de uso alimentario. Las fórmulas se prepararon mezclando una suspensión de grasa y una suspensión de proteína. La suspensión de mezcla de grasas se preparó calentando aceite de maíz hasta una temperatura en el intervalo de 54-68ºC con agitación. Se añadió después un emulsionante (lecitina de soja) con agitación y se permitió disolver. Los productos se prepararon usando lecitina de soja distribuida por Central Soya, Incorporated, Fort Wayne, Indiana, U.S.A. con la denominación comercial "Centrol CA". Después se añadieron el \beta-Caroteno al 30% y la vitamina E (acetato de D-\alpha-tocoferol) a la suspensión con agitación. La suspensión completa se mantuvo en agitación moderada a una temperatura en el intervalo de 54-68ºC durante un período no mayor de doce (12) horas hasta que se mezcló con las otras suspensiones.

Se preparó una suspensión de proteína-en-agua (PIW) calentando aproximadamente la mitad del agua hasta una temperatura en el intervalo de 63-71ºC con agitación y después se añadió el caseinato sódico. Los productos se prepararon usando proteína de caseinato sódico distribuida por MÉTODO Foods Ingredients Incorporated, 2480 Morris Avenue, Union, Nueva Jersey U.S.A.

La suspensión de PIW completa se mantuvo en agitación moderada a una temperatura en el intervalo de 60-71ºC durante un período no mayor de cuatro horas hasta la mezcla final.

La suspensión de mezcla de aceite se añadió a la suspensión de PIW y el azúcar (sacarosa) se añadió con agitación. El citrato potásico se añadió después lentamente con agitación y la mezcla resultante se mantuvo durante no menos de cinco (5) minutos antes de tomar el pH de la mezcla preprocesada. La suspensión mezclada preprocesada se mantuvo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 60-71ºC.

Después de un período de no menos de un minuto no mayor de dos (2) horas, la suspensión mezclada se sometió a desaireación, tratamiento térmico a temperatura ultra alta (UHT) y homogeneización como se describe a continuación:

A.: Se calienta la suspensión mezclada hasta una temperatura en el intervalo de 65-71ºC;

B.: Desaireación de la mezcla a 25,4-38,1 cm Hg;

C.: Se emulsifiona la suspensión mezclada a 63-77 atmósferas; y

D.: Se hace pasar la mezcla a través de un calentador de placa/bobina y se calienta la mezcla a 120-122ºC con un tiempo de retención de aproximadamente diez (10) segundos.

Los productos de control y experimentales se envasaron en recipientes metálicos de 8 onzas (241 ml) y se esterilizaron terminalmente. La Tabla 2 muestra los valores diana por litro de los productos de control y experimentales y un intervalo aceptable para cada componente.

TABLA 2

Especificación del sistema antioxidante (Valores por litro)

4

Evaluación del sistema antioxidante

Se reclutaron soldados que participaban en las Fuerzas Especiales de Evaluación y Escuela de Selección (SFAS) en Fort Bragg, Carolina del Norte para evaluar la capacidad del producto experimental para reducir o aliviar la degradación del sistema inmune inducida por el estrés. El SFAS es un curso física y mentalmente exigente y tiene una duración de veintiuno (21) días. Los soldados típicamente hacen 150 millas (240 Km) llevando un mínimo de 45 libras (10,5 kg) de herramientas de campo en una bolsa estándar del Ejército. Las claves para el estrés durante el curso SFAS incluyen estrés fisiológico, insuficiencia calórica, restricción del periodo de sueño e intensos periodos de ejercicio físico. Es normal un cincuenta por ciento de desgaste en SFAS para este curso de entrenamiento. Se informó a ciento cincuenta (150) voluntarios sobre el propósito del estudio y los riesgos y beneficios implicados. Se reclutó un subconjunto de treinta y seis (36) voluntarios como grupo de referencia. Este grupo de referencia se usó para validar los diversos ensayos inmunológicos usados en este estudio. El grupo de referencia no se aleatorizó en grupos de estudio ni se les dieron las bebidas Experimentales o de Control. Se extrajeron muestras de sangre de todos los voluntarios y se realizaron ensayos cutáneos, como se describe a continuación antes de iniciar el entrenamiento. Los sujetos se clasificaron en base a fumadores y después se asignaron aleatoriamente en uno de los dos grupos de tratamiento. Un grupo recibió la bebida experimental y un grupo y a otro grupo se le dio un placebo que no contenía antioxidantes (Control). Las bebidas de Control Experimentales se consumieron en forma líquida y proporcionaron aproximadamente 200 calorías por día (0,4 kcals por ml). Las bebidas se proporcionaron en latas de 8 onzas (241 ml) y se pidió a los sujetos que bebieran dos latas por día.

Otras medidas tomadas incluyeron la altura, peso, medidas de pliegues cutáneos y de evaluación de grasa corporal usando casi medidas infrarrojas. Estas medidas y la extracción de sangre se tomaron también en el día 20. En el día anterior a la recogida de las muestras de sangre, se pidió a los soldados que no tomaran alimentos o fluidos excepto agua después de las 9:00 de la noche la tarde anterior a la extracción de sangre.

La ingesta de alimentos se midió y registró diariamente. Los sujetos se alimentaron con una mezcla de MREs (Comidas-Listas para Comer) y raciones A (comidas calientes) más 2 latas de las bebidas de Control Experimentales (excepto para el grupo de referencia). Los datos se recogieron usando registros de dietas de 24 horas sobre los que los sujetos se registraban su ingesta diaria de comida y fluidos. Durante el tiempo que los sujetos estuvieron consumiendo raciones A, la ingesta de alimentos se controló usando técnicas de estimación visual. La ingesta de nutrientes se calculó a partir de formas de ingesta de elementos de comida y estimación y registro alimentario por estimación visual. Los datos de reducción y cálculo de nutrientes se completaron usando un análisis computerizado del sistema de nutrientes.

Las muestras de sangre se recogieron en la medida inicial (Día 0) y en Día 20 en cuatro (4) tubo vacutainer diferente. La cantidad total de sangre extraída para el estudio fue de aproximadamente 68 ml. El tubo 1 (13 ml SST, tapón rojo) fue para medir los marcadores nutricionales clave incluyendo sustratos energéticos, vitamina C y marcadores bioquímicos del estatus del general de salud. El tubo 2 (7 ml Heparina, tapón azul real), se usó para análisis de selenio y análisis de leucocitos. Se retiró un (1) ml del análisis del selenio de sangre entera y cinco (5) ml de sangre entera se retiraron y se mezclaron con una solución al 2% de dextrina y se permitió sedimentar durante treinta (30) minutos. Se retiró sobrenadante rico en leucocitos y se lavó. La sangre restante se usó para prepara cultivos de sangre entera para blastogénesis de linfocitos. El tubo 3 (7 ml EDTA, tapón morado) se usó para un conteo de células totales en sangre determinado en un analizador de sangre Coulter JT. Este analizador se usó para determinar hemoglobina, hematocrito, volumen corpuscular medio, conteo de células blancas, conteo de células rojas, conteo de plaquetas, porcentaje de linfocitos, porcentaje de monocitos y porcentaje de granulocitos. Después de determinar el conteo de la sangre, el tubo se centrifugó y se retiró el plasma. El plasma se usó para determinar el contenido en vitamina A y E. El tubo 4 (7 ml, Heparina, tapón azul real) se usó para cuantificar los subconjuntos de linfocitos mediante citometría de flujo y fagocitosis de células polimorfonucleadas. La capacidad de los sujetos de ensayo para generar respuesta inmune in vivo se evaluó administrando un ensayo DTH (Multitest-CMI, Connaught Laboratories, Inc., Swiftwater, PA). El ensayo se dio al final del día 20. El kit ensayo contenía un control negativo de glicerina y siete (7) antígenos de filtrado de cultivo de los siguientes microorganismos: Clostridium tetani (toxoide del tétanos), Corynebacterium diphteria (toxoide de la difteria). Streptococcus Grupo C (estreptococo), Mycobacterium tuberculosis (tuberculina, old), Candida albicans (antígeno de candida), Trichonphyton mentogrophytes (antígeno de trichonphyton) y Proteus mirabilis (proteus).

El ensayo de punción múltiple se aplicó al antebrazo ventral de cada sujeto por la mañana, después de tomar las muestras de sangre. Después de 48 horas, se determinó la respuesta de cada antígeno midiendo los diámetros (paralelo y perpendicular al eje mayor del antebrazo) de la induración resultante en cada uno de los ocho sitios de administración de la punción múltiple. El sitio se registró como una reacción positiva cuando mostraba una induración de 2 mm de diámetro o más comparado con un control negativo.

Análisis estadísticos

La variable de respuesta primaria en este estudio fue la respuesta proliferativa de linfocitos in vitro. Se determinó basándose en la radioactividad de los linfocitos situados en cultivos y pulsados con timidina radioactiva. Los análisis estadísticos de los datos usados en el ensayo con cola con un coeficiente de confianza de 0,95.

Se evaluó la comparabilidad de los grupos en la medida inicial y todos los datos de nivel continuo se examinaron para ensayar la asunción de normalidad ajustando un modelo ANOVA en un sólo sentido y examinando los residuales con el ensayo Shapiro-Wilk. Los resultados se consideraron estadísticamente significativos si el valor de p del análisis fue menor de 0,05.

Resultados

Los resultados de la proliferación de linfocitos se exponen en la figura 1. Es bastante evidente que el producto de Control (proteína, lípido y carbohidrato sin sistema antioxidante) fue relativamente ineficaz para proteger el sistema inmune, como se evidencia mediante la proliferación de linfocitos a partir de la degradación causada por el estrés del SFAS. A diferencia de ello, el sistema antioxidante de acuerdo con esta invención hizo disminuir la degradación en un 15% (-21% vs. -6%). (Un valor de -21% representa una mayor reducción en la función inmune). Esta diferencia entre los productos inmunonutricionales de Control y Experimentales fue significativo a p<0,05. La induración total (suma media en mm) se obtuvo para cada sujeto. Los sujetos que recibían la bebida de Control tenían una induración media de 4,4 mm con una SEM de 0,8 mm. El grupo de tratamiento tenía una induración media de 4,4 mm con una SEM de 0,5 mm. Se usó un grupo de referencia que era un conjunto de militares de edades similares para validar los ensayos inmunológicos usados en este estudio. El grupo de referencia tenía una induración total media de 13,1 mm por sujeto con una SEM de 1,0 mm. El grupo de referencia no se aleatorizó en los grupos de estudio ni se les dio la bebida Experimental o de Control.

A partir de esta información, puede concluirse que basándose en la proliferación de linfocitos, la suplementación de antioxidantes atenuó la supresión inmune inducida por estrés. Es interesante observar que la suplementación de antioxidantes tuvo poco efecto sobre la función inmune mediada por células como se determina mediante el tipo retrasado de hipersensibilidad de la piel. El siguiente ejemplo 2 demuestra que la suplementación de antioxidantes combinada con la ingestión del componente de glicérido estructurado descrito da como resultado la atenuación de la supresión inmune inducida por estrés medida tanto por proliferación de linfocitos como por hipersensibilidad cutánea de tipo retrasado.

Ejemplo 2 Producto inmunonutricional con componente de glicérido estructurado

En este experimento, se estudió el estado nutricional y los cambios inmunes de soldados que acudían al SFAS en Fort Bragg, Carolina del Norte. Se formularon un producto de Control y Experimental para producir un producto listo para comer que contenía proteína, grasa, carbohidratos, vitaminas y minerales. El producto experimental utilizó: 1) un glicérido estructurado como parte del componente lipídico; 2) el sistema antioxidante de acuerdo con la invención, y 3) carbohidrato no digerible (es decir, FOS).

El producto nutricional líquido de la presente invención se preparó preparando tres (3) suspensiones que pueden mezclarse conjuntamente, tratarse térmicamente, estandarizarse, envasarse y esterilizarse; el proceso para prepara 4545 kg de producto nutricional líquido usando el conjunto de materiales de la Tabla 5 se describe detalladamente a continuación.

Se preparó una suspensión de carbohidrato/mineral calentando en primer lugar aproximadamente 1854 kg de agua a una temperatura que varía aproximadamente 66º-71ºC con agitación. Después se añadieron los siguientes minerales en el orden enumerado, con alta agitación: traza/ultratraza de premezcla de minerales, citrato potásico, cloruro de magnesio, cloruro potásico, citrato sódico, yoduro potásico, sulfato de zinc, sulfato cúprico, selenito sódico y fosfato cálcico tribásico. Se añadió maltodextrina a la suspensión con gran agitación y se permitió disolver mientras la temperatura se mantenía a aproximadamente 63ºC. El producto se preparó usando maltodextrina distribuida por Cerestar U.S.A. Incorporated (anteriormente American Maize), Hammond, Indiana, U.S.A., bajo la denominación comercial "Lodex-15". El azúcar restante (sacarosa) y los oligosacáridos no digeribles se añadieron después con gran agitación. El producto se preparó usando polvo de oligosacárido distribuido por Golden Technologies Company, Golden, Colorado, U.S.A con la denominación comercial "polvo de fructooligosacárido Nutrilora-P"(96%)''. La suspensión de carbohidrato/mineral completa se mantuvo con gran agitación a una temperatura en el intervalo de 60º-66ºC durante no más de doce (12) horas hasta que se mezcló con las otras suspensiones.

Se preparó una suspensión de proteína-en-grasa (PIF) combinando y calentando la cánula/glicérido estructurado MCT, aceite de soja y aceite de cartamo con alto contenido oleico a una temperatura en el intervalo de 32º-43ºC con agitación. El emulsionante (lecitina de soja) se añadió después con agitación y se permitió disolver. El producto se preparó usando lecitina de soja distribuido por Central Soya Incorporated, Fort Wayne, Indiana, U.S.A. con la denominación comercial "Centrol CA". Después se añadieron la premezcla de vitamina DEK, vitamina A, vitamina E (acetato D-a-tocoferol), \betaCaroteno al 30%, carragenano y caseinato sódico a la suspensión con agitación. La suspensión de PIF completa se mantuvo con agitación moderada a una temperatura en el intervalo de 32º-43ºC durante un periodo de no más de doce (12) horas hasta que se mezcló con las otras suspensiones.

Se preparó una suspensión de proteína-en-agua (PIW) añadiendo en primer lugar el caseinato de calcio a aproximadamente 1172 kg de agua y calentando hasta una temperatura en el intervalo de 66º-71ºC con agitación. Después se añadieron el caseinato sódico y el aislado de proteína de soja a la suspensión de caseinato cálcico con agitación. El producto se preparó usando proteínas de caseinato cálcico y sódico distribuido por New Zealand Milk Products, Incorporated, 3637 Westwind Boulevard, Santa Rosa, California, U.S.A, bajo las denominaciones comerciales "Alanate 380" y "Alanate 180" respectivamente y aislado de proteína de soja distribuido por Protein Technologies International, Checkerboard Square, 143T, St. Louis, Missouri, U.S.A. con la denominación comercial "Supro 1610".

La suspensión PIW completa se mantuvo con agitación moderada a una temperatura en el intervalo de 60º-66ºC durante un periodo de no más de cuatro (4) horas hasta la mezcla final.

Las suspensiones PIW y PIF se mezclaron conjuntamente con agitación y la suspensión mezclada resultante se mantuvo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 54º-63ºC. Después de esperar durante al menos un minuto, la suspensión de carbohidrato/mineral se añadió a la suspensión mezclada de la etapa anterior con agitación y la suspensión mezclada resultante se mantuvo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 54º-63ºC. El recipiente que contenía la suspensión de carbohidrato/mineral se enjuagó con aproximadamente 4,54 kg de agua y el agua de enjuagado se añadió a la suspensión mezclada. Después de esperar un periodo de no menos de un minuto y no más de dos horas, la suspensión mezclada se sometió a desaireación, tratamiento térmico a temperatura ultra alta (UHT) y homogenización usando equipo y técnicas conocidas en la industria.

Posteriormente a la homogeneización y enfriado del producto, se realizó un ensayo analítico predefinido para control de calidad. Basándose en los resultados analíticos, se añadió una cantidad apropiada de agua de dilución al lote con agitación. Se preparó una disolución de vitaminas y solución de aromatizante por separado y se añadieron a la suspensión mezclada procesada.

Se preparó una solución de vitaminas calentando aproximadamente 31 kg de agua a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 31º-43ºC con agitación, y añadiendo posteriormente los siguientes ingredientes en el orden enumerado, con agitación: ácido ascórbico, hidróxido potásico al 45%, taurina, premezcla de vitamina soluble en agua, cloruro de colina y L-carnitina. La suspensión de vitaminas se añadió después a la suspensión mezclada con agitación.

La solución del aromatizante se preparó añadiendo 2772 gramos de mantequilla artificial y 1386 gramos de aromatizante de pecana artificial a aproximadamente 32 kg de agua con agitación. El producto se preparó usando mantequilla artificial y aromatizantes de pecana distribuidos por Firmenich, Incorporated, Box 5880, Princeton, Nueva Jersey, U.S.A con las denominaciones comerciales "Aromatizante de mantequilla artificial 596.333/T" y "Aromatizante de pecana artificial 596.332/T". La suspensión de aromatizantes se añadió después a la suspensión mezclada con agitación.

El pH del producto se ajustó para conseguir una estabilidad óptima del producto. El producto completo se puso después en recipientes adecuados y se sometió a esterilización terminal.

El producto de Control se preparó usando un proceso similar, sin embargo, se usó un conjunto de materiales expuesto en la Tabla 3.

TABLA 3

Conjunto de materiales para control lote de 4545 kg

Ingrediente	Cantidad (kg)
Aislado de proteína de soja	42,278
Caseinato Ca	27,911
Caseinato Na	183,560
Aceite de maíz	217,796
Lecitina	6,735
Maltodextrina	669,438
Sacarosa	191,963
Citrato K	10,5
Citrato Na	4,5
Agua	3.181,153
Carragenano	0,163

1) El colorante se añadió para ayudar en el ensayo ciego

2) Se añadió aromatizante de mantequilla de pecana

3) Densidad calórica 1,5 cal/ml

La Tabla 4 enumera el desglose de nutrientes para el producto de control.

TABLA 4 Desglose de nutrientes-producto de control

6

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La Tabla 5 expone el conjunto de materiales para la bebida Experimental.

TABLA 5

Conjunto de materiales para el producto inmunonutricional Lote de 4545 kg

7

8

\newpage

La Tabla 6 expone la composición nutricional del producto inmunonutricional de acuerdo con la invención.

TABLA 6 Desglose de nutrientes - producto inmunutricional

9

1) Se añadió Aromatizante de Mantequilla de Pecan

2) No se necesitó colorante ya que el \beta-Caroteno proporcionó color.

Componente de glicérido estructurado

Un importante aspecto para la presente invención es el uso del componente de glicérido estructurado en el producto inmunonutricional. En este Ejemplo, el glicérido estructurado fue un aceite de cánola/aceite de MCT 50/50% en peso que se había aleatorizado con metóxido sódico y después de desodorizado a 180ºC con 8% de vapor. La mezcla 50/50 de cánola/glicérido estructurado MCT fue proporcionada por Stean Company of Maywood, Nueva Jersey. El perfil de ácido graso del glicérido estructurado usado en el producto experimental se expone en la Tabla 7.

TABLA 7 Perfil de ácido graso clave del glicérido estructurado

10

1) Contenido en ácido graso libre menor de 0,10% en peso.

2) Valor de peróxido de menos de 1,0 mEg/Kg

El número de carbono equivalente o ECN es la suma de átomos de carbono en las cadenas de acilo de una molécula de triglicérido. Por ejemplo, tripalmitina (glicerol tripalmítico), que contiene tres (3) restos acilo de 16 átomos de carbono tendría ECN de 48. Muchas de las propiedades de los lípidos alimentarios pueden explicarse directamente en término de sus componentes ácido graso. Sin enlazarse a ninguna teoría, se especula que los productos inmunonutricionales de esta invención que utilizan lípidos estructurados, pueden en parte reducir la supresión inmune inducida por estrés mediante la capacidad potenciada de los triglicéridos únicos y de los antioxidantes solubles en aceite tales como vitamina E.

Una diferencia significativa entre un glicérido estructurado y sus aceites constituyentes, yace en las especies moleculares del triglicérido. Las especies moleculares de un triglicérido pueden denominarse mediante ECN. La inter-esterificación o co-aleatorización de los aceites constituyentes crea nuevas especies de triglicérido que son únicas para el glicérido estructurado y que están ausentes en los aceites constituyentes. La Tabla 8 expone el perfil de triglicérido de dos lotes de glicérido estructurado que se prepararon co-aleatorizando una mezcla 50/50 de aceite MCT y aceite de cánola. La Tabla 8 presenta también el perfil de ECN para la mezcla física de aceite de MCT y aceite de
cánola.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 8 Perfil de triglicérido de una mezcla 50/50 de aceite MCT y aceite de cánola y el glicérido estructurado correspondiente

11

\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
  \begin{minipage}[t]{152mm}a - ECN es número equivalente de
carbono, la suma de átomos de carbono en las  cadenas de acilo en la
estructura principal de glicerol de un
triglicérido.\end{minipage} \cr 
 \begin{minipage}[t]{152mm}b - Los pares de especies de
triglicérido con el mismo número de carbono y  diferente grado de
insaturación se co-eluyeron y se integraron como un
sólo
pico.\end{minipage} \cr}

Los valores presentados en la Tabla 8 son a partir de un análisis real de la mezcla física y de lípidos estructurados. Es interesante observar que los dos (2) lotes de glicérido estructurado son casi idénticos en el perfil de ECN. Los triglicéridos con números de ECN de 32-45 representan especies que son únicas para el triglicérido estructurado y están ausentes de la mezcla física.

Los diversos ingredientes para el producto inmunonutricional de la invención y el control se combinaron usando técnicas y equipos convencionales como se ha descrito anteriormente. Los especialistas en la técnica de preparación de productos nutricionales líquidos entenderán fácilmente que las numerosas variables y procesos pueden usarse para preparar los productos. Por lo tanto, el Control y producto inmunonutricional se prepararon y envasaron en latas metálicas de 8 onzas (241 ml) y se esterilizaron terminalmente.

El producto inmunonutricional de acuerdo con la invención proporcionó 1060 mg de vitamina C por litro de producto, 847 IU de vitamina E por litro de producto, 32,4 mg de \beta-Caroteno por litro de producto y selenio a 211 \mug por litro de producto. Los minerales principales y otras trazas y ultra trazas minerales estaban a niveles que se encuentran típicamente en productos nutricionales médicos tales como Ensure Plus, producido y comercializado por Ross Products Division of Abbott Laboratories, Columbus, Ohio.

Ensayo

Se asignaron aleatoriamente 200 voluntarios que acudían a un curso de SFAS del Ejército de Estados Unidos para consumir dos (2) latas o aproximadamente 16 onzas (453 g) del producto inmunonutricional Experimental de acuerdo con esta invención (n = 100) o dos (2) latas de una bebida de placebo (Control) (n = 100) con sus raciones reguladoras disponibles (raciones MRE y A). Cada bebida suministraba aproximadamente 360 kcals/lata.

El producto de Control y Experimental contenía una cantidad similar de energía y macronutrientes, aunque una composición lipídica y concentraciones de micronutrientes (sistema antioxidante) diferentes. De una manera similar a la descrita en el ejemplo 1, la función inmune en este experimento se determinó por citometría de flujo que midió los cambios de población celular y activación de linfocitos así como fagocitosis de granulocitos. Los anticuerpos que son muy sensibles y específicos que detectan antígenos de la superficie celular se marcaron con compuestos fluorescentes y después se mezclaron con las células aisladas. Los anticuerpos se unen a antígenos específicos sobre las superficies celulares y, por lo tanto, identifican la función una célula específica (es decir, células T o células B) o hasta una extensión limitada (es decir, activación y fagocitosis). Un médico militar diagnosticó una determinación de la infección del tracto respiratorio superior basándose en la observación de la implicación de todas y cada una de las vías respiratorias, incluyendo la nariz, conductos paranasales, garganta, laringe, tráquea o bronquios. Una medida clínica adicional incluía hipersensibilidad de tipo retrasado (administrado a un subconjunto de soldados). Las observaciones clínicas también incluyen determinaciones febriles y no febriles. La Fig. 2 expone los resultados con respecto a la tasa de infección en las vías respiratorias superiores por grupo (es decir, control vs. tratamiento).

La Fig. 2 prueba que los sujetos que consumen el producto inmunonutricional de la invención tuvieron una incidencia muy reducida de la infección del tracto respiratorio superior comparado con los grupos de control y sin estudio. Este hallazgo es estadísticamente significativo y es un resultado sorprendente.

La tasa de desgaste de los sujetos de este estudio durante el SFAS fue típica. De los 100 sujetos de cada grupo, 57 controles terminaron y 49 del grupo experimental completaron el programa de un total de 106 sujetos. Ambos grupos experimentaron una modesta pérdida de peso de aproximadamente 6 libras (2,72 kg) por soldado. También se observaron diferencias modestas al final del entrenamiento entre los dos grupos en el nivel de células T, células B y células NK. A partir de los registros diarios de ingesta de alimentos se determinó que el grupo experimental consumió el 100% de todos los nutrientes establecidos en la RDA, mientras que el grupo de control consumió menos del 100% de la RDA para vitaminas A, E y ácido fólico.

El grupo alimentado con el producto inmunonutricional experimental tenía menos sujetos anérgicos con hipersensibilidad de tipo retrasado (DTH) comparado con el grupo de control. El ensayo DTH (Multi-Ensayo-CMI, Connaught, Laboratories, Inc., Swiftwater, PA) contenía un control negativo de glicerina y siete (7) antígenos como se ha expuesto en el Ejemplo 1. Los antígenos se administraron con un dispositivo similar para un ensayo cutáneo de punción múltiple, por presión firme contra la piel. La induración resultante se midió en mm y la no respuesta (anergía) se midió como una respuesta total de menos de o igual a 2,0 mm para todos los siete (7) antígenos de ensayo. La Tabla 9 expone los datos recogidos.

TABLA 9 Induración total (suma media en mm) por sujeto

	Media	SEM
Control	7,5	0,9
Tratamiento	9,8	0,8
*Referencia	13,1	1,0

\begin{minipage}[t]{128mm}* El grupo de referencia fue un grupo de militares de edades similares usado para validar los ensayos inmunológicos usados en este estudio. El grupo de referencia no se aleatorizó en los grupos de estudio ni se les dio la bebida Experimental o de Control.\end{minipage}

A partir de la Fig. 3 y de la Tabla 9, está bastante claro que, basándose en la proliferación de linfocitos, la suplementación de antioxidantes más el glicérido estructurado minimizaban la supresión del sistema inmune inducida por estrés. También hubo unos pocos sujetos que recibieron el producto Experimental que fueron anérgicos como se determinó mediante hipersensibilidad cutánea de tipo retrasado y la respuesta (suma total de la induración) en el grupo de tratamiento fue mayor.

Parece que la minimización de la influencia de la fórmula Experimental fue el resultado del efecto sobre el funcionamiento de linfocitos y células inmunes ya que no se observaron diferencias fundamentales en los números de linfocitos T y linfocitos B circulantes y las células asesinas naturales.

A partir de este experimento, se observó que la suma de respuestas DTH fue mayor en el grupo Experimental y este es un hallazgo muy interesante debido a la anergía y disminución de las respuestas DTH correlacionadas con el aumento del riesgo de infección. Los resultados de este experimento también indicaban que menos soldados que consumieron el producto inmunonutricional de la invención experimentaron infección en el tracto respiratorio superior comparados con el grupo de Control. En general, los soldados que consumieron el producto inmunonutricional de acuerdo con la invención experimentaron menos infecciones y signos de inmuno-supresión que los que consumieron el Control (que contenía cantidades similares de macronutrientes y energía).

Ejemplo 3

Se ha preparado una composición nutricional sólida de acuerdo con la presente invención preparando tres pre-mezclas que se combinan, se forman/extruyen, recubren, enfrían y envasan. A continuación se describe el proceso en cuatro etapas para preparar aproximadamente 234 kilogramos del producto de barrita nutricional, usando el Conjunto de Materiales (Anexo 10).

Etapa Uno

Se prepara una mezcla seca añadiendo los aislados de proteína de soja (Tipo Uno: nombre comercial Supro 661, suministrado por Protein Technologies Internacional, St. Louis, MO 63188 y Tipo Dos: nombre comercial Supro 1610, del mismo suministrador anterior), caseinato cálcico, premezcla vitamina/mineral, fructooligosacárido, salvado de avena, maltodextrina, sólidos de jarabe de maíz, arroz crujiente y polisacárido de soja a un mezclador de doble brazo a temperatura ambiente (24º \pm 10ºC) y se agitó durante aproximadamente 200 impulsos.

Etapa Dos

Se prepara una pre-mezcla de aceite combinando lípido estructurado de cánola/MCT y lecitina de soja en un mezclador diferente y mezclando durante dos minutos a temperatura ambiente (24º \pm 10ºC). La mezcla sólida se añade a la mezcla seca (descrita en la Etapa Uno) y se agita durante aproximadamente 200 impulsos.

Etapa Tres

Se prepara una pre-mezcla líquida añadiendo jarabe de maíz con alto contenido en fructosa, fructosa cristalina, glicerina, miel y aromatizante graham artificial a un mezclador diferente y agitando durante cinco minutos. La pre-mezcla líquida se añade a la mezcla seca (descrita en la Etapa Uno) y se agita durante aproximadamente 100 (o hasta que se forma una pasta uniforme).

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Etapa Cuatro

La pasta se transfiere a un formador donde se forman los "núcleos" de las barritas y se cortan a un peso de 57 gramos \pm 2 gramos. El núcleo se recubre con un recubrimiento dulce de chocolate fundido (46-48ºC) de manera que el núcleo + recubrimiento conseguirán un peso mínimo de 65,0 gramos y no sobrepasarán un peso máximo de 77,0 gramos (diana de 68,0 gramos). Después, las barritas se enfrían a una temperatura entre 0ºC y 15ºC. En ningún momento las barritas se someten a temperaturas elevadas para cocción. Las barritas se envasan después en un envoltorio de polietileno de baja densidad/papel metálico. En la Tabla 12 se muestra más información detallada con respecto a la composición.

TABLA 10

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TABLA 11

Componente	Diana por 100 gramos
Beta-caroteno, mg	275,80
Vitamina D, IU	2.847,00
Vitamina E (RRR), IU	7.096,00
Vitamina K1, mcg	422,60
Vitamina C, mg	11.968,00
Ácido fólico, mcg	11.345,00
Tiamina, mg	72,97
Riboflavina, mg	68,96
Vitamina B6, mg	72,97
Vitamina B12, mcg	242,40
Niacina, mg	553,90
Colina, mg	3.670,00
Biotina, mcg	9.743,00
Ácido pantoténico, mg	324,70
Sodio, mg	5.215,00
Potasio, mg	11.879,00
Cloruro, mg	11.323,00
Calcio, mg	2.514,00
Fósforo, mg	1.877,00
Magnesio, mg	1.633,00
Yodo, mg	1.014,00
Manganeso, mg	36,04
Cobre, mg	28,70
Zinc, mg	891,90
Hierro, mg	113,00
Selenio, mcg	1.849,00
Cromo, mcg	714.10
Molibdeno, mcg	1.143,00
L-Carnitina, mg	1.866,00
Taurina, mg	1.866,00

TABLA 12 Especificaciones de desarrollo (por 100 gramos)

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Ejemplo 4 Producto inmunonutricional con componente de glicérido en forma de una barrita alimentaria

Como se ha observado en los Ejemplos 1 y 2, el entrenamiento enérgico en el Ejército implica estrés físico y psicológico que provoca la des-regulación inmune y aumenta el riesgo de infección. En este Ejemplo, se estudió el estado nutricional y los cambios inmunes de los soldados que acuden al Entrenamiento de los Ranger (RT), Fort Benning, Georgia. El RT (como se ha descrito anteriormente en Bernton et al.) es un curso de entrenamiento más largo (62 días) comparado con el SFAS (21 días, como se ha estudiado en los ejemplos 1 y 2). Se formularon productos de Control y Experimental en forma de una barrita alimentaria que contenía proteína, grasa, carbohidratos, vitaminas y minerales. La barrita Experimental tenía un perfil de nutrientes similar al del producto experimental del ejemplo 2 y se utilizó: 1) un glicérido estructurado como parte del componente lipídico; 2) el sistema antioxidante de acuerdo con la invención; y 3) carbohidrato no digerible (es decir, FOS), y 4) otras vitaminas y minerales. Las tres barritas experimentales fueron idénticas en composición y se prepararon de acuerdo con el proceso perfilado en el Ejemplo 3. Las barritas de control fueron idénticas a las experimentales excepto que no se añadió premezcla de vitamina y mineral y que la grasa era aceite de maíz.

Ensayo

Ciento veintitrés soldados que participaban en el Entrenamiento de los Ranger del Ejército de Estados Unidos se prestaron voluntarios y se les asignó aleatoriamente consumir (2) barritas o aproximadamente 150 g/día de barrita inmunonutricional Experimental de acuerdo con esta invención (n = 63) o dos (2) barritas de la barrita de placebo (control) (n = 60). Se evaluó el estado nutricional (peso corporal) y la función inmune (citometría de flujo, respuesta a vacuna de hepatitis A, DTH) durante el Entrenamiento de los Ranger. Se evaluó el efecto del estrés así como el producto nutricional como un cambio de la medida inicial con cada punto temporal (visita 2-medida inicial; visita 3-medida inicial; visita 4-medida inicial) de células inmunes y linfocitos importantes. Se seleccionaron sujetos para exposición previa o vacunación a hepatitis A y después se vacunó a los sujetos restantes. Además, se administró un DTH a un grupo de soldados antes y después del entrenamiento estresante.

Un hallazgo muy inesperado fue que los sujetos de este estudio realmente ganaron peso (Figura 4) durante este entrenamiento físico intenso. La ganancia de peso se atribuyó parcialmente a la energía extra de las barritas de control y experimentales. En estudios anteriores, se descubrió que los soldados típicamente perdías de 20 a 30 libras (9,1 a 13,6 kg). Benton et al. encontraron una pérdida de peso similar de 20-30 libras (9,1-13,6 kg) durante el RT. Había una tendencia hacia una mayor ganancia de peso en el grupo de tratamiento (P = 0,067). Por lo tanto, parece que algunos de los nutrientes contenidos en la barrita Experimental ayudaron a los soldados a mantener el peso comparados con el grupo de Control.

En cada grupo ocurrieron cambios significativos en las células T, células B y células NK. Hubo evidencia de que los sujetos que consumían la barrita Experimental experimentaron una menos disminución en numerosas células inmunes importantes. Por ejemplo, hubo menos disminución en el número de monocitos en los soldados durante el tiempo más estresante del curso de Entrenamiento para Rangers (P < 0,013). Además, hubo evidencia de que la barrita experimental atenuaba la pérdida de linfocitos importantes inducida por estrés (linfocitos T, *P = 0,023) del grupo Experimental vs. el grupo de Control (figura 5). La disminución fue el resultado de la pérdida de linfocitos CD4+ (ayudadores) que juegan un papel pivotante en la respuesta del sistema inmune (figura 6, *P = 0,008). También hubo una menor disminución de linfocitos Th1 (linfocitos que producen estimulación de interferón-gamma) en los sujetos que consumieron el producto Experimental (figura 7, *P = 0,029). También se proporcionó una pequeña encuesta para entender la preferencia del sujeto respecto a la barrita y su aceptación durante el RT. El setenta y cinco por ciento de los sujetos indicaron que la barrita Experimental les ayudó a completar el RT, mientras que solo el 67% de los sujetos de Control indicaron que había sido útil. No hubo una diferencia estadística en DTH o respuesta a la vacuna entre los grupos, aunque se suprimieron ambas respuestas de vacuna y DTH. Por lo tanto, estos hallazgos respaldan que la invención juega un papel en la minimización de los cambios inmunes inducidos por estrés que sitúan a los soldados en un mayor riesgo de infección.

Aplicabildiad industrial

La comunidad médica continúa buscando métodos y composiciones útiles para superar los problemas relacionados con el estrés emocional y físico. Se sabe bien que el estrés compromete el sistema inmune en un animal y que por lo tanto hace que el animal sea más susceptible a las enfermedades. Por ejemplo, en un estudio de 586 pacientes hospitalarios, se descubrió que la anergía DTH está asociada con una tasa de sepsis del 45% y una tasa de mortalidad del 38% comparado con las tasas del 7% de sepsis y del 3% de muertes en pacientes reactivos. Por lo tanto, los métodos y productos que protegen el sistema inmune y/o disminuyen su degradación cumplirán una necesidad existente desde hace mucho tiempo. Está bien documentada la necesidad de proporcionar la protección adecuada a individuos estresados tales como soldados, atletas que se ejercitan excesivamente los enfermos crónicos. Los nuevos productos inmunonutricionales de esta invención se han mostrado muy eficaces para reducir la cantidad de inmunosupresión que ocurre en el individuo estresado. El método de la presente invención puede conseguirse convenientemente mediante la administración de píldoras, cápsulas, suplementos dietarios, productos nutricionales enterales y similares.

Claims

1. Una composición útil para tratar la supresión inmune inducida por estrés que comprende:

a): los siguientes antioxidantes, presentes en una cantidad suficiente para aliviar la supresión inmune inducida por estrés:

i): vitamina C;

ii): vitamina E;

iii): selenio;

iv): \beta-caroteno, y

b): un componente de glicérido estructurado, presente en una cantidad suficiente para aliviar la supresión inmune inducida por estrés, caracterizado por contener algunas especies de triglicéridos y al menos un 40% de las especies de triglicéridos tienen:

(i): aproximadamente del 33 al 70% en peso de restos acilo que tienen de 4 a 12 átomos de carbono;

(ii): aproximadamente del 30 al 67% en peso de restos acilo que tienen más de 12 átomos de carbono, y;

(iii): un número equivalente de carbono mayor de 30 a menor de 48

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dichos antioxidantes están presentes en al menos aproximadamente las siguientes cantidades por dosis:

a): 200 IU de vitamina E;

b): 50 \mug de selenio;

c): 250 mg de vitamina C;

d): 7,5 mg de \beta-caroteno.

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicho glicérido estructurado está presente en una cantidad de al menos 1 gramo por dosis.

4. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, que adicionalmente contiene zinc en una concentración de al menos aproximadamente 12,5 mg de zinc por dosis.

5. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, que adicionalmente contiene al menos aproximadamente 0,8 mg de cobre por dosis.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, que adicionalmente contiene al menos aproximadamente 100 ug de ácido fólico por dosis.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dicho componente de glicérido estructurado comprende predominantemente triglicéridos.

8. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dichos triglicéridos comprenden del 45 al 70% en peso de restos acilo que tienen de 4 a 12 átomos de carbono.

9. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dichos triglicéridos comprenden del 30 al 55% en peso de restos acilo que tienen más de 12 átomos de carbono.

10. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dichos triglicéridos comprenden del 50 al 65% de restos acilo que tienen de 4 a 12 átomos de carbono y del 35 al 50% en peso de restos acilo que tienen más de 12 átomos de carbono.

11. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dichos triglicéridos tienen un número equivalente de carbono de aproximadamente 32 a aproximadamente 42.

12. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, siendo dicha composición una preparación farmacéutica o un producto nutricional.

13. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, en la que dicha composición es un producto nutricional que adicionalmente contiene un ingrediente adicional seleccionado entre el grupo compuesto por aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos, minerales y FOS, fibras dietéticas y vitaminas.

14. La composición de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho producto nutricional es un producto líquido listo para tomar.

15. La composición de acuerdo con la reivindicación 14, en la que dichos antioxidantes y dicho componente de glicérido estructurado están presentes en las siguientes cantidades:

a): 200-1000 IU de vitamina E por dosis;

b): 50-400 \mug de selenio por dosis;

c): 500 mg-5 g de vitamina C por dosis;

d): 7,5-50 mg de \beta-caroteno por dosis, y;

h): 1-100 gm de dicho componente de glicérido estructurado por dosis.

16. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para reducir la supresión inmune en un animal provocada por el estrés.

17. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para reducir la incidencia de la infección en un animal.

18. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para preparar un medicamento para mantener el estado inmunológico de un animal.

19. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para preparar un medicamento para reducir la des-regulación inmunológica inducida por el estrés en un animal.

20. Uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 para preparar un medicamento para proporcionar apoyo nutricional a un individuo estresado.

21. Un producto nutricional sólido que comprende:

a): los siguientes antioxidantes, presentes en una cantidad suficiente para aliviar la supresión inmune inducida por el estrés:

i): vitamina C;

ii): vitamina E;

iii): selenio;

iv): \beta-caroteno, y

(iii): un número equivalente de carbono mayor de 30 a menor de 48 y;

c): un componente proteico que proporciona de aproximadamente el 10 a aproximadamente el 50% de las calorías totales de la composición.