ES2227671T3

ES2227671T3 - Uso de una texafirina en la preparacion de un medicamento para usar con un agente quimioterapeutico en la quimiosensibilizacion del cancer.

Info

Publication number: ES2227671T3
Application number: ES97903873T
Authority: ES
Inventors: Richard A. Miller; Stuart W. Young
Original assignee: Pharmacyclics LLC
Current assignee: Pharmacyclics LLC
Priority date: 1996-01-25
Filing date: 1997-01-23
Publication date: 2005-04-01
Anticipated expiration: 2017-01-23
Also published as: NO983429D0; NO983429L; EP0912196B1; WO1997026915A1; HK1018588A1; DE69730961D1; NZ331513A; EP0912196B9; CN1093766C; AU1833397A; JP2000503989A; AU715025B2; KR19990082024A; CN1213313A; IL125459A0; DE69730961T2; ATE277637T1; EP0912196A1; US5776925A

Abstract

SE PRESENTAN METODOS DE QUIMIOSENSIBILIZACION DEL CANCER. LAS TEXAFIRINAS SON NUEVOS QUIMIOSENSIBILIZADORES PARA AUMENTAR LA CITOTOXICIDAD DE LOS AGENTES QUIMIOTERAPEUTICOS. LA MEJORA PARECE SER INDEPENDIENTE DE LAS P - GLUCOPROTEINAS YA QUE LAS TEXAFIRINAS SON EFECTIVAS TANTO EN UNA LINEA CELULAR QUE EXPRESA P - GLUCOPROTEINAS COMO EN UNA QUE NO EXPRESA P - GLUCOPROTEINAS. SE PRESENTAN METODOS PARA EL TRATAMIENTO DE CANCERES TALES COMO LA LEUCEMIA, LINFOMAS, CARCINOMAS Y SARCOMAS MEDIANTE LA UTILIZACION DE UNA TEXAFIRINA COMO QUIMIOSENSIBILIZADOR.

Description

Uso de una texafirina en la preparación de un medicamento para usar con un agente quimioterapéutico en la quimiosensibilización del cáncer.

Antecedentes de la invención

Muchas de las formas más comunes de cáncer en seres humanos son resistentes al tratamiento de quimioterapia. Algunas poblaciones de células tumorales, especialmente carcinomas de células adrenales, colon, yeyuno, riñón e hígado, parecen tener células resistentes al fármaco al comienzo del tratamiento (Barrows, L.R., 1995). En otros casos, la resistencia parece ser adquirida en forma muy semejante a la de la resistencia microbiana, una resistencia que confiere un cambio genético que ocurre durante el tratamiento; las células hijas resistentes proliferan después en presencia del fármaco. Cualquiera que sea la causa, la resistencia termina a menudo con la utilidad de un fármaco antineoplásico.

Los estudios clínicos sugieren que una forma común de resistencia multifármaco en cánceres humanos resulta de la expresión del gen MDR1 que codifica la glicoproteína P. Esta glicoproteína funciona como una membrana del plasma, dependiente de energía, una bomba de flujo de multifármaco que reduce la concentración intracelular de los fármacos citotóxicos. Este mecanismo de resistencia puede ser responsable de la resistencia de novo en los cánceres comunes, tales como el cáncer de colon y cáncer renal, y de la resistencia adquirida, como se observa en los tumores hematológicos comunes tales como la leucemia no linfocítica aguda y los linfomas malignos. Aunque este tipo de resistencia a fármacos puede ser común, no es en modo alguno el único mecanismo por el que las células se hacen resistentes a los fármacos.

La modificación química del tratamiento del cáncer envuelve el empleo de agentes o tratamientos que no son citotóxicos en si mismos, sino que modifican al hospedante o al tumor para así aumentar la sensibilidad a la terapia anticancerosa. Tales agentes se denominan quimiosensibilizadores. Los estudios piloto que usan quimiosensibilizadores indican que estos agentes pueden revertir la resistencia en un subgrupo de pacientes. Estos mismos estudios preliminares también indican que la resistencia al fármaco es multifactorial, ya que no todos los pacientes resistentes al fármaco tienen células tumorales glicoproteína-P positivas y solamente unos pocos pacientes parecen beneficiarse del empleo de los quimiosensibilizadores actuales. La investigación de la quimiosensibilización se ha centrado en agentes que revierten o modulan la resistencia multifármaco en tumores sólidos (MDR1, glicoproteina-P). Los quimiosensibilizadores conocidos que modulan la función de la glicoproteína-P incluyen: los bloqueantes del canal del calcio (verapamilo), los inhibidores de la calmodulina (trifluoperazina), los alcaloides de indol (reserpina), las quinolinas (quinina), agentes lisosomatrópicos (cloroquina), esteroides (progesterona), análogos de triparanol (tamoxifeno), detergentes (cremoforEL), y antibióticos peptídicos cíclicos (ciclosporinas) (De Vita, 1993).

Una revisión de los estudios en donde se emplearon agentes quimiosensibilizadores concluyó lo siguiente: i) los efectos secundarios cardiovasculares asociados con la terapia de administración continua intravenosa de dosis altas de verapamilo son significativos y limitativos de la dosis, ii) las toxicidades limitativas de la dosis de los quimiosensibilizadores, trifluoperazina y tamoxifeno, se atribuyeron a la toxicidad inherente de los quimiosensibilizadores y no fueron debidas al aumento de la toxicidad de la quimioterapia, iii) los estudios que utilizaron dosis altas de ciclosporina A como quimiosensibilizador encontraron hiperbilirubinemia como efecto secundario, y iv) se necesita claramente más investigación para desarrollar quimiosensibilizadores más eficaces y menos tóxicos para uso clínico (De Vita et al, 1993).

Los tumores que se consideran sensibles a fármacos en el diagnóstico pero que adquieren un fenotipo MDR en la recaída presentan un problema clínico especialmente difícil. En el diagnóstico, solo una minoría de células tumorales pueden expresar la glicoproteína-P y el tratamiento con quimioterapia proporciona una ventaja para la selección de las pocas células que son positivas a la glicoproteína-P al comienzo del curso de la enfermedad. Otra posibilidad es que la quimioterapia derivada de productos naturales induce actualmente la expresión de MDR1, originando los tumores glicoproteína-P positivos en la recaída. Utilizando quimiosensibilizadores al inicio del curso de la enfermedad se puede prevenir la emergencia de MDR eliminando las pocas células que son glicoproteína-P positivas al comienzo. Estudios in vitro han mostrado que la selección de células resistentes al fármaco combinando verapamilo y doxorrubicina previene la emergencia de glicoproteina-P, pero que se desarrolla un mecanismo de resistencia a fármacos alternativo, secundario a la función alterada de la topoisomerasa II (Danton, W.S., 1990).

Varias razones pueden explicar el fallo de los quimiosensibilizadores actuales para revertir la resistencia clínica multifármaco: i) las concentraciones del agente quimiosensibilizador pueden ser inadecuadas en el tumor, ii) las concentraciones de glicoproteína-P pueden aumentar según progresa el tumor, iii) el gen MDR1 puede mutar, resultando en una unión debilitada del agente quimiosensibilizador a la glicoproteína-P, iv) pueden emerger mecanismos de resistencia alternativos no glicoproteína-P durante el tratamiento que no estén afectados por los quimiosensibilizandores, y v) los quimiosensibilizadores carecen de selectividad tumoral y sensibilizan tejidos normales a los efectos tóxicos de la quimioterapia. Un mecanismo no-glicoproteína-P se debe a la función alterada de la topoisomerasa II que puede conferir resistencia a la antraciclina y a las epipodofilotoxinas (De Vita et al., 1993).

El documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.258.453 especifica composiciones para el tratamiento de los tejidos cancerosos en animales de sangre caliente que contienen ambos, un fármaco anticanceroso y un fármaco fotoactivable unido a un transportador de tipo copolímero que está constituido por un miembro seleccionado del grupo que consiste de (a) un transportador copolimérico que tiene unido ambos, un fármaco anticanceroso y un fármaco fotoactivable, (b) una mezcla de trasportadores copoliméricos en donde un transportador copolimérico tiene unido un fármaco anticanceroso y otro transportador copolimérico tiene unido un fármaco fotoactivable y (c) una combinación de (a) y (b). El documento de patente internacional WO9.640.253 especifica métodos para la rotura por la luz de un polímero de ácido ribonucleico utilizando una texafirina fotosensible. Un método preferido de utilización es la rotura por la luz del lugar específico de un polímero de ácido ribonucleico y una texafirina fotosensible, es preferida una texafirina derivatizada que tiene especificidad de unión, en particular, una texafirina unida covalentemente a una molécula directora de sitio, preferiblemente un oligonucleótido.

Nahabedian et al. (J. Natl. Cancer Inst. 80:10, 739-743, 1988) describe el uso de cisplatino o doxorrubicina con derivados de hematoporfirina como un fotosensibilizador en tumores murinos. Mientras que el cisplatino no demostró toxicidad adicional en combinación con PDT, un efecto adicional de la doxorrubicina en combinación con PDT fue sustancialmente atribuido a potenciación de la doxorrubicina sólo por la luz sin relación con la presencia del fotosensibilizador. Diddens et al. (SPIE Optical Methods for Tumor Treatment and Detection 1645:115-123, 1992) describió que verapamilo, un compuesto activo de membrana conocido que aumenta la sensibilidad al fármaco en células resistentes a multifármacos por inhibición del flujo de la bomba, glicoproteína-P, aumenta la fototoxicidad en células resistentes a multifármacos.

Las texafirinas son porfirinas expandidas pentadentadas aromáticas útiles como agentes de contraste MRI (imagen por resonancia magnética), como radiosensibilizadores y en la terapia fotodinámica. Las texafirinas y las texafirinas solubles en agua han sido descritas en los documentos de patente de Estados Unidos Nos. 4.935.498, 5.162.509, 5.252.720 y 5.457.183.

Se necesitan urgentemente quimiosensibilizadores más eficaces y menos tóxicos para mejorar las perspectivas de la quimioterapia. La utilidad clínica de un quimiosensibilizador depende de su habilidad para aumentar la citotoxicidad de un fármaco de quimioterapia y también de su baja toxicidad in vivo. Los presentes inventores han abordado estos problemas y proporcionan aquí una nueva clase de quimiosensibilizadores que permiten nuevas aproximaciones en el tratamiento del cáncer.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a métodos para aumentar la actividad de un agente quimioterapéutico. Más particularmente, se refiere al empleo de texafirina en la preparación de una composición farmacéutica para el empleo en la quimiosensibilización de un agente quimioterapéutico por ejemplo para emplear en el tratamiento de cánceres tales como leucemia, linfoma, carcinoma, y sarcoma empleando una texafirina como un quimiosensibilizador.

"Quimiosensibilización", tal como se usa aquí, significa que una texafirina aumenta o mejora la citotoxicidad de un agente quimioterapéutico comparado con el nivel de citotoxicidad manifestado por este agente en ausencia de la texafirina. Esto es, la texafirina "sensibiliza" a la célula cancerosa para los efectos del agente quimioterapéutico, permitiendo al agente ser más efectivo. No se conoce que la texafirina tenga actividad quimioterapéutica anticancerosa por si misma.

En una realización preferida, a un paciente que tenga una forma de cáncer para el que la quimioterapia está indicada se le administra una dosis de texafirina a intervalos con cada dosis del agente quimioterapéutico.

La quimiosensibilización puede combinarse con las aplicaciones de la terapia fotodinámica ya que ciertas texafirinas son moléculas fotosensibles y tienen absorción en el importante intervalo fisiológico de 700-900 nm (véase los documentos de patentes de los Estados Unidos para texafirinas citados en este documento). El paciente puede ser tratado mediante la administración de un agente quimioterapéutico y una texafirina fotosensible al paciente, y fotoirradiando al paciente en los alrededores del cáncer. En este tratamiento combinado, la texafirina puede estar libre de metal o en un complejo con un metal. En este último caso, el metal es un catión de metal diamagnético y el catión diamagnético puede ser Lu(III), La(III), In(III), Y(III), Zn(II) o Cd(II). Preferiblemente, el catión de metal es Lu(III).

La obtención de la imagen puede combinarse con la quimiosensibilización ya que la texafirina de gadolinio es un agente de contraste para la imagen de resonancia magnética (véase los documentos de patente de los Estados Unidos para texafirinas citados en este documento). El paciente puede ser tratado mediante la administración de un agente quimioterapéutico y un complejo metálico paramagnético de texafirina, y obteniendo la imagen del paciente. Esta técnica trata el cáncer con el agente quimioterapéutico que tiene aumentada su actividad en presencia de la texafirina, y permite la monitorización del sitio y tamaño del tumor, por ejemplo. El catión de metal paramagnético puede ser Mn(II), Mn(III), Fe(III), o cationes de metal de lantánido trivalente diferentes a La(III), Lu(III), y Pm(III). Más preferiblemente, el metal paramagnético es Mn(II), Mn(III), Dy(III), o Gd(III); y más preferiblemente, Dy(III) o Gd(III).

En otro aspecto de la invención, el paciente puede ser tratado mediante la administración al sujeto de un agente quimioterapéutico y una texafirina que tenga propiedades de radiosensibilización y administrando radiación ionizante al sujeto en los alrededores del cáncer. Se ha demostrado que las texafirinas tienen propiedades de sensibilización de la radiación; mejoran la citotoxicidad de la radiación ionizante en los alrededores de la texafirina comparada con los experimentos de control (véase la publicación de PCT del documento de patente internacional WO 95/10307, que se incorpora aquí como referencia). La radiación ionizante incluye, pero no esta limitada a, rayos X, radioisótopos emisores gamma interno y externo, y partículas ionizantes. En este tratamiento combinado, la texafirina se puede complejar con un metal, aunque el metal no es principal en las propiedades de radiosensibilización de las texafirinas.

En otro aspecto de la invención, las texafirinas pueden utilizarse como quimiosensibilizador tópico. La Tabla 2 indica que el 5-fluorouracilo, por ejemplo, se usa tópicamente para las lesiones de piel premalignas. Los inventores visualizan el uso de las texafirinas para aumentar la citotoxicidad de los agentes quimioterapéuticos tópicos.

Un método para seleccionar un agente quimioterapéutico para el que la texafirina es un quimiosensibilizador es una realización adicional de la presente invención. El método comprende las etapas de i) ensayar la citotoxicidad de un agente quimioterapéutico candidato en presencia y en ausencia de texafirina, y ii) seleccionar un agente quimioterapéutico candidato como un agente quimioterapéutico para el que la texafirina es un quimiosensibilizador cuando la citotoxicidad del agente candidato es mayor en presencia de texafirina que en ausencia de texafirina. Actualmente un ensayo preferido in vitro es el ensayo de toxicidad MTT citado en el Ejemplo 1; un ensayo in vivo como ejemplo se describe en el Ejemplo 2.

Siguiendo las convenciones establecidas hace mucho tiempo en la ley de patentes, los términos "uno" y "una" significan "una o más" cuando se emplean en esta solicitud, incluyendo las reivindicaciones.

Breve descripción de los dibujos

Los siguientes dibujos forman parte de la presente solicitud y están incluidos para demostrar mejor ciertos aspectos de la presente invención. La invención puede entenderse mejor por referencia a uno o más de estos dibujos en combinación con la descripción detallada de las realizaciones específicas presentadas aquí.

La Fig. 1 proporciona el análisis del error estándar de los datos obtenidos de la administración de doxorrubicina (adriamicina) sola (O), y doxorrubicina seguida de texafirina 5 minutos y 5 horas más tarde (\blacksquare) a ratones Balb/c que tienen implantado tumores EMT6 subcutáneos. Las barras de error representan el error estándar, n = 14.

La Fig. 2 muestra la diferencia relativa de IC_{50} con el control con tres concentraciones diferentes de texafirina (\\\, 50 \muM; \boxempty, 100 \muM; ///, 150 \muM) y un agente quimioterapéutico en células MES-SA. Los agentes ensayados con texafirina fueron placlitaxel, etopósido, 4-OH ciclofosfamida, cisplatino y bleomicina.

La Fig. 3 demuestra la supervivencia de los ratones negros C57 con melanoma B-16 implantado (\bullet, supervivencia media de 21 días), doxorrubicina solamente (\blacktriangle, supervivencia medía de 29 días), o tratamiento con doxorrubicina seguido de texafirina (\Delta, supervivencia medía de 40 días).

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

La presente invención resulta del descubrimiento de que las texafirinas son quimiosensibilizadores. La quimiosensibilización utilizando una texafirina se refiere al aumento de citotoxicidad de un agente quimioterapéutico cuando el agente se administra en conjunción con la administración de una texafirina.

El agente quimioterapéutico puede ser uno de los siguientes: un agente alquilante tal como una mostaza nitrogenada, una etilenimina o una metilmelamina, un alquilsulfonato, una nitrosourea, o un triazeno; un antimetabolito tal como un análogo del ácido fólico, un análogo de pirimidina, o un análogo de purina; un producto natural tal como un alcaloide de la vinca, una epipodofilotoxina, un antibiótico, una enzima, un taxano, o modificador de la respuesta biológica; agentes misceláneos tales como un complejo de coordinación de platino, una antracenodiona, una antraciclina, una urea sustituida, un derivado de metilhidrazina, o un supresor adrenocortical; o una hormona o un antagonista tal como un adrenocorticosteroide, una progestina, un estrógeno, un antiestrógeno, un andrógeno, un antiandrógeno, o un análogo de la hormona de liberación de la gonadotropina. Ejemplos específicos de agentes alquilantes, antimetabolitos, productos naturales, agentes misceláneos, hormonas y antagonistas, y los tipos de cánceres para los que estas clases de agentes quimioterapéuticos están indicados se proporcionan en la Tabla 2. Preferiblemente, el agente quimioterapéutico es una mostaza nitrogenada, una epipodofilotoxina, un antibiótico, o un complejo de coordinación de platino. Un agente quimioterapéutico más preferido es la bleomicina, doxorrubicina, paclitaxel, etopósido, 4-OH ciclofosfamida, o cisplatino. Un agente quimioterapéutico preferido actualmente es la doxorrubicina o la
bleomicina.

Los compuestos de texafirina, los métodos de fabricación y los métodos de uso de los mismos se describen en los documentos de patente de los Estados Unidos 4.935.498, 5.162.509, 5.252.720, 5.272.142, 5.256.399, 5.292.414, 5.432.171, 5.439.570, 5.475.104, 5.451.576, 5.457.183, 5.369.101, 5.569.759, 5.559.207, y 5.587.463; en las solicitudes pendientes USSN 08/196,964, 08/433.573 y 08/484.551; y en las publicaciones PCT de los documentos de patentes internacionales WO 90/10.633, WO 93/14.093, WO 94/29.316, y WO 96/38.461; cada patente, solicitud, y publicación se incorporan aquí como referencia.

El uso de la texafirina como un quimiosensibilizador tiene una ventaja añadida importante debido a la biolocalización inherente de la texafirina. "La biolocalización inherente" significa que tiene selectivamente una afinidad mayor por ciertos tejidos con relación a los tejidos vecinos. Como se describe en la patente 720, las texafirinas se localizan en las regiones ricas en lípidos tales como, por ejemplo, el hígado, riñón, el tumor y el ateroma. Esta biolocalización aumentaría la citotoxicidad en aquellas áreas en comparación con los tejidos normales. Puede así ser posible administrar menos agente quimioterapéutico en presencia de la texafirina para obtener el efecto deseado. Como resultado de la exposición a menor quimioterapia, el paciente puede experimentar una toxicidad general menor, mientras que las regiones ricas en lípidos como los tumores experimentan una mayor citotoxicidad.

Además, una texafirina puede acoplarse a una molécula directora de sitio para formar un conjugado para dirigirla in vivo al sitio diana. "Directora de sitio" significa que tiene especificidad por los sitios diana. "Especificidad por los sitios diana" significa que cuando ocurre el contacto del conjugado de la texafirina con la molécula directora de sitio diana con el sitio diana, por ejemplo, en condiciones fisiológicas de fuerza iónica, temperatura, pH y semejantes, ocurrirá una unión específica. La interacción puede ocurrir debido a especificidad electrostática, hidrofóbica, entrópica u otra interacción de ciertos residuos del conjugado con residuos específicos de la diana para formar un complejo estable en condiciones eficaces para promover la interacción. Moléculas directoras de sitio ejemplarizantes contempladas en la presente invención incluyen pero no están limitadas a: oligonucleótidos, poliamidas que incluyen péptidos que tienen afinidad por un receptor biológico y proteínas tales como anticuerpos; esteroides y derivados de esteroides; hormonas tales como estradiol, o histamina; miméticos de hormona tales como morfina; y otros macrociclos tales como safirinas y rubirinas.

El mecanismo de acción de la texafirina como quimiosensibilizador no es conocido. Aunque no queriendo estar limitados por la teoría, es posible que las texafirinas puedan inhibir la reparación del daño celular causado por el agente quimioterapéutico, las texafirinas pueden comprometer los depósitos de energía de las células, o pueden aumentar la vida de los radicales libres. Como la acción como quimiosensibilizador parece ser independiente de la glicoproteína P (véase el Ejemplo 9), parece que ocurre un mecanismo único independiente de la glicoproteina P. Un "quimiosensibilizador independiente de proteína P" como se utiliza aquí significa que las texafirinas son eficaces como quimiosensibilizador independiente del mecanismo de MDR1 de resistencia que pueda ser inducido en una célula cancerosa. El hecho de que las texafirinas son efectivas como quimiosensibilizadores en ambas líneas celulares las que expresan MDR y las que no expresan MDR coloca a las texafirinas aparte de los quimiosensibilizadores actuales que están diseñados para actuar sobre el mecanismo de MDR de la resistencia.

Las texafirinas utilizadas como quimiosensibilizadores pueden administrarse antes, al mismo tiempo, o después de la administración del agente quimioterapéutico. Se prefiere actualmente, la administración de la texafirina después del agente quimioterapéutico. La texafirina puede administrarse como dosis única, o puede administrarse como dos o más dosis separadas por un intervalo de tiempo. La texafirina puede administrarse desde alrededor de un minuto hasta alrededor de 12 horas después de la administración del agente quimioterapéutico, preferiblemente desde alrededor de 5 minutos a alrededor de 5 horas. Cuando la texafirina se administra en dos o más dosis, el intervalo de tiempo entre las administraciones de texafirina puede ser de alrededor de un minuto a alrededor de 12 horas, preferiblemente de alrededor de 5 minutos a alrededor de 5 horas, más preferiblemente de alrededor de 4 a 5 horas. El protocolo de dosificación puede repetirse, de una a tres veces, por ejemplo. Un marco de actuación de los tiempos que ha sido exitoso in vivo es la administración de texafirina de 5 minutos a alrededor de 5 horas después de la administración del agente quimioterapéutico, con el protocolo llevándose a cabo una vez por semana durante tres semanas. Se utilizó una dosis de alrededor de 40 \mumoles/kg de texafirina. La administración puede ser intravenosa, intraperitoneal, parenteral, intramuscular, subcutánea, oral o tópica, prefiriéndose la tópica o intravenosa y la intravenosa más
preferiblemente.

La texafirina utilizada según el método de la invención será administrada en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Por "farmacéuticamente eficaz" se entiende que la dosis proporcionará un aumento de toxicidad al agente quimioterapéutico. La dosis específica variará dependiendo de la texafirina elegida en particular, el régimen de dosificación que se seguirá y el agente quimioterapéutico específico con el que se administra. Dichas dosis pueden determinarse sin experimentación indebida por métodos conocidos en la técnica o como aquí se describe.

Alguien experimentado en la técnica a la luz de la presente solicitud podría llevar a cabo con flexibilidad el régimen anterior y podría comprobar, sin experimentación indebida, los periodos de tiempo óptimos y la dosis para la administración de una texafirina en una circunstancia particular.

Una texafirina o complejo de metal de texafirina para uso como quimiosensibilizador puede tener la estructura I o II:

1

2

M es H, un catión de metal divalente, o un catión de metal trivalente. Preferiblemente, M es un catión de metal divalente, o un catión de metal trivalente. Un catión de metal divalente preferido es Ca(II), Mn(II), Co(II), Ni(II), Zn(II), Cd(II), Hg(II), Fe(II), Sm(II), o UO_{2}(II). Un catión de metal trivalente preferido es Mn(III), Co(III), Ni(III), Fe(III), Ho(III), Ce(III), Y(III), In(III), Pr(III), Nd(III), Sm(III), Eu(III), Gd(III), Tb(III), Dy(III), Er(III), TM(III), Yb(III), Lu(III), La(III), o U(III).

R_{1}-R_{4}, R_{7} y R_{8} son independientemente hidrógeno, haluro, hidroxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, haloalquilo, nitro, formilo, acilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo, sacárido, carboxilo, carboxialquilo, carboxiamida, carboxiamidoalquilo, amino, aminoalquilo, una molécula directora de sitio, o una pareja que está acoplada a una molécula directora de sitio.

R_{6} y R_{9} se seleccionan independientemente de los grupos de R_{1}-R_{4}, R_{7} y R_{8}, con la condición de que el haluro es distinto de yoduro y el haloalquilo es distinto de yodoalquilo.

R_{5} y R_{10}-R_{12} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo carboxialquilo, carboxiamida, carboxiamidoalquilo, amino, aminoalquilo, o una pareja que está acoplada a un sacárido, o una molécula directora de sitio; y n es un valor entero menor o igual a 5.

R_{13} es alquilo, alquenilo, oxialquilo, o hidroxialquilo que tiene hasta alrededor de 3 átomos de carbono y tiene flexibilidad de rotación alrededor del enlace del primer átomo de carbono. La flexibilidad de rotación permite al resto del grupo posicionarse fuera del plano de la texafirina. Así, por ejemplo, un alquenilo preferido es CH_{2}-CH=CH_{2}. El sustituyente del nitrógeno pirrólico es más preferiblemente un grupo metilo. Una texafirina que tiene un grupo metilo unido al nitrógeno del anillo se describe en el documento de patente de los Estados Unidos 5.457.183, incorporado aquí como referencia.

En la estructura I descrita anteriormente, "n" será típicamente un valor entero menor o igual a 5. En el contexto del macrociclo básico con un catión de metal divalente o trivalente, n es 1 ó 2; sin embargo, alguien versado en la técnica a la luz de la presente solicitud se daría cuenta de que el valor de n estaría cambiado debido a las cargas presentes sobre los sustituyentes R_{1}-R_{12} y las cargas presentes sobre el enlace covalentemente unido a la molécula directora de sitio. Se comprende para aquellos versados en la técnica que los complejos descritos en la presente invención tienen uno o más ligandos adicionales proporcionando la neutralización de la carga y/o la saturación por coordinación del ión metálico. Dichos ligandos, incluyen el cloruro, nitrato, acetato, e hidroxilo, entre otros.

Los ejemplos representativos de los alcanos útiles como sustituyentes de grupo alquilo de la presente invención incluyen metano, etano, cadena lineal, ramificada o isómeros cíclicos de propano, butano, pentano, hexano, heptano, octano, nonato y decano, prefiriendose el metano, etano y propano. Los grupos alquilo que tienen hasta alrededor de treinta, o hasta alrededor de cincuenta átomos de carbono se contemplan en la presente invención. Ejemplos representativos de alquilos sustituidos incluyen alquilos sustituidos con dos o más grupos funcionales como se describió aquí.

Ejemplos representativos de alquenos útiles como sustituyentes de grupos alquenilos incluyen eteno, de cadena lineal o ramificada, o isómeros ciclicos de propeno, buteno, penteno, hexeno, hepteno, octeno, noneno y deceno, siendo el eteno y propeno preferidos. Grupos alquenilo que tienen hasta alrededor de treinta, o hasta alrededor de cincuenta átomos de carbono y que tienen hasta alrededor de cinco enlaces dobles, o más preferiblemente, hasta alrededor de tres enlaces dobles se contemplan en la presente invención.

Ejemplos representativos de alquinos útiles como sustituyentes de grupos alquinilos incluyen etino, de cadena lineal o ramificada o isómeros ciclicos de propino, butino, pentino, hexino, heptino, octino, nonino y decino, siendo el etino y propino preferidos. Grupos alquinilo que tienen hasta alrededor de treinta, o hasta alrededor de cincuenta átomos de carbono y que tienen hasta alrededor de cinco o hasta alrededor de tres enlaces triples se contemplan en la presente invención.

El arilo puede ser un compuesto cuyas moléculas tienen la estructura caracteristica del benceno, naftaleno, fenantreno, antraceno, y semejantes, por ejemplo, o el anillo de 6 carbonos del benceno o anillos de 6 carbonos condensados de otros derivados aromáticos. Por ejemplo, un grupo arilo puede ser el fenilo o naftilo no sustituido o sustituido con un nitro, carboxilo, ácido sulfónico, hidroxilo, oxialquilo o sustituyente halogenado. En este caso, el sustituyente en el fenilo o naftilo puede añadirse en una etapa sintética posterior a la etapa de condensación que forma el
macrociclo.

Entre los sustituyentes halogenados, el cloruro, bromuro, fluoruro y yoduro son contemplados en la práctica de esta invención con la excepción del yoduro para R_{6} y R_{9}. R_{6} y R_{9} pueden tener como sustituyentes cloruro, bromuro o fluoruro. Ejemplos representativos de haloalquilos usados en esta invención incluye haluros de metano, etano, propano, butano, pentano, hexano, heptano, octano, nonato y decano, con haluros, preferiblemente cloruros o bromuros, de metano, etano y propano como preferidos.

"Hidroxialquilo" significa alcoholes de grupos alquilo. Los grupos hidroxialquilo preferidos son los que tienen de uno a veinte, más preferiblemente de uno a diez hidroxilos. "Hidroxialquilo" significa que incluye glicoles y poliglicoles: dioles de alquilo, siendo preferidos los dioles de alquilo C_{1-10} y los dioles de alquilos C_{1-3}; y el polietilenglicol, polipropilenglicol y polibutilenglicol así como los polialquilenglicoles que contienen combinaciones de etileno, propileno y butileno.

Ejemplos representativos de oxialquilos incluyen los grupos alquilo aquí descritos que tienen uniones éter. "Oxialquilo" significa que se incluye los poliéteres con uno o más grupos funcionales. El número de oxialquilos repitiéndose con un sustituyente puede ser de hasta 200, preferiblemente es de 1-20, y más preferiblemente, es 1-10, y lo más preferido es 1-5. Un oxialquilo preferido es O(CH_{2}CH_{2}O)_{x}CH_{3} en donde x = 1-100, preferiblemente 1-10, y más preferiblemente, 1-5.

Oxihidroxialquilo significa los grupos alquilo que tienen uniones éter o éster, grupos hidroxilo, grupos hidroxilo sustituidos, grupos carboxilo, grupos carboxilo sustituidos o semejantes.

Los ejemplos representativos de los tioalquilos incluyen los tioles del etano, tioles de cadena lineal, ramificada o isómeros cíclicos del propano, butano, pentano, hexano, heptano, octano, nonano y decano, prefiriéndose tioles del etano (etanotiol, C_{2}H_{5}SH) o propano (propanotiol, C_{3}H_{7}SH). Los alquilos sustituidos con sulfato incluyen los alquilos como se describieron anteriormente sustituidos por uno o más grupos sulfato, un ejemplo representativo del mismo es el sulfato de dietilo ((C_{2}H_{5})_{2}SO_{4}).

Ejemplos representativos de fosfatos incluyen fosfato o grupos fosfato. Ejemplos representativos de alquilos sustituidos de fosfato incluye alquilos como se describieron anteriormente sustituidos por uno o más fosfatos o grupos polifosfato. Ejemplos representativos de alquilos sustituidos de fosfonato incluye alquilos como se describieron anteriormente sustituidos por uno o más grupos fosfonato.

Ejemplos representativos de grupos carboxilo incluyen los ácidos carboxílicos de los alquilos descritos anteriormente así como ácidos carboxílicos arílicos tal como el ácido benzoico. Ejemplos representativos de carboxiamidas incluyen carboxiamidas primarias (CONH_{2}), secundarias (CONHR') y terciarias (CONR'R'') en donde cada R'y R'' es un grupo funcional como se ha descrito aquí.

Ejemplos representativos de aminas útiles incluyen una amina primaria, secundaria o terciaria de un alquilo como se ha descrito aquí anteriormente.

"Carboxiamidoalquilo" significa grupos alquilo con uniones de amida secundaria o terciaria o semejantes. "Carboxialquilo" significa grupos alquilo que tienen grupos hidroxilo, carboxilo o éteres sustituidos de amida, uniones de éster, uniones de amida terciaria eliminados del éter o semejantes.

El término "sacárido" incluye sacáridos oxidados, sustituidos o reducidos; hexosas tales como D-glucosa, D-manosa o D-galactosa; pentosas tales como D-ribosa o D-arabinosa; cetosas tales como D-ribulosa o D-fructosa; disacáridos tales como sucrosa, lactosa, o maltosa; derivados tales como acetales, aminas, y azúcares fosforilados; oligosacáridos, así como formas de cadena abierta de varios azúcares, y semejantes. Ejemplos de azúcares derivatizados en el amino son la galactosamina, glucosamina, ácido siálico y derivados de D-glucamina tales como 1-amino-1-
deoxisorbitol.

Como se usa aquí, "una molécula directora de sitio" puede ser un oligonucleótido, un anticuerpo, una hormona, un péptido que tiene afinidad por un receptor biológico, una molécula de safirina, y semejantes. Una molécula directora de sitio preferida es una hormona, tal como el estradiol, estrógeno, progesterona, y semejantes. Una molécula directora de sitio puede tener especificidad de unión para la localización a un lugar de tratamiento y un receptor biológico puede localizarse en un lugar de tratamiento. Un conjugado oligonucleótido-texafirina, donde el oligonucleótido es complementario de un RNA mensajero oncogénico, por ejemplo, localizaría adicionalmente la actividad quimioterapéutica en un lugar particularmente deseado. La tecnología antisentido se discute en los documentos de patente de los Estados Unidos U.S. 5.194.428, 5.110.802 y 5.216.141, todos los cuales se incorporan aquí como
referencia.

Ejemplos representativos de esteroides útiles incluyen hormonas esteróidicas de las siguientes cinco categorías: progestinas (por ejemplo progesterona), glucocorticoides (por ejemplo cortisol), mineralocorticoides (por ejemplo aldosterona), andrógenos (por ejemplo testosterona), y estrógenos (por ejemplo estradiol).

Ejemplos representativos de aminoácidos, de péptidos o polipéptidos útiles incluyen aminoácidos con cadenas laterales alifáticas simples (por ejemplo, glicina, alanina, valina, leucina, e isoleucina), aminoácidos con cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, fenilalanina, triptófano, tirosina, e histidina), aminoácidos con cadenas laterales que contienen oxígeno y azufre (por ejemplo, serina, treonina, metionina, y cisterina), aminoácidos con cadenas laterales que contienen ácidos carboxílicos o grupos amido (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico, asparagina, y glutamina), y aminoácidos con cadenas laterales que contienen grupos fuertemente básicos (por ejemplo, lisina y arguinina), y prolina. Ejemplos representativos de péptidos útiles incluye uno cualquiera de los di-, tri-, tetra-, pentapéptidos o péptidos más largos naturales y sintéticos derivados de uno cualquiera de los aminoácidos anteriormente descritos (por ejemplo, endorfina, encefalina, factor de crecimiento epidérmico, poli-L-lisina, o una hormona). Ejemplos representativos de polipéptidos útiles incluye polipéptidos sintéticos y naturales (por ejemplo, insulina, ribonucleasa, y endorfinas) derivados de los aminoácidos y péptidos anteriormente descritos.

El término "un péptido que tiene afinidad por un receptor biológico" significa que poniendo en contacto el péptido con el receptor biológico, por ejemplo, en condiciones apropiadas de fuerza iónica, temperatura, pH y semejantes, ocurrirá la unión específica. La interacción puede ocurrir debido a la interacción electrostática específica, hidrofóbica, entrópica u otra interacción de ciertos aminoácidos o residuos glicolíticos de los péptidos con los aminoácidos específicos o residuos glicolíticos del receptor para formar un complejo estable en las condiciones eficaces para promover la interacción. La interacción puede alterar la conformación tridimensional y la función o actividad de uno o ambos, el péptido y el receptor involucrados en la interacción. Un péptido que tiene afinidad por un receptor biológico puede incluir una endorfina, encefalina, factor de crecimiento, por ejemplo el factor de crecimiento de la epidermis, poli-L-lisina, hormona, región peptídica de una proteína o semejantes. Una hormona puede ser estradiol, por
ejemplo.

Una pareja puede describirse como un enlazador, o sea el producto covalente formado por reacción de un grupo reactivo diseñado para unirse covalentemente con otra molécula a una distancia del macrociclo de la texafirina. Enlazadores ejemplarizantes o parejas son los enlaces covalentes de las amidas, aminas, disulfuros, tioéteres, éteres, ésteres o fosfatos.

En las realizaciones más preferidas, los grupos conjugados y colgados están unidos por enlace covalente a la texafirina vía enlace carbono-carbono, carbono-nitrógeno, carbono-azufre, o un enlace carbono-oxígeno, más preferiblemente un enlace carbono-oxígeno o carbono-nitrógeno.

Generalmente, se prefieren las texafirinas solubles en agua que retienen la lipofilicidad para las aplicaciones que aquí se describen. "Solubles en agua" significa soluble en fluidos acuosos a alrededor de 1 mM o más. "Reteniendo la lipofilicidad" significa que tienen mayor afinidad por tejidos ricos en lípidos o materiales que rodean los tejidos no ricos en lipidos. "Ricos en lípidos" significa que tienen una mayor cantidad de triglicéridos, colesterol, ácidos grasos o semejantes.

Las funcionalizaciones preferidas son: cuando R_{6} y R_{9} son diferentes a hidrógeno, entonces R_{5} y R_{10} son hidrógeno o metilo; y cuando R_{5} y R_{10} son diferentes a hidrógeno, entonces R_{6} y R_{9} son hidrógeno, hidroxilo, o haluro diferente de yoduro. Otras funcionalizaciones preferidas son cuando R_{6} y R_{9} son hidrógeno, entonces R_{5}, R_{10}, R_{11} y R_{12} son independientemente hidrógeno, fenilo, alquilo de cadena corta o hidroxialquilo de cadena corta. La cadena corta de alquilo es preferiblemente metilo o etilo, más preferiblemente metilo. La cadena corta de hidroxialquilo es preferiblemente de 1 a 6 carbonos y de 1 a 4 grupos hidroxilo, más preferiblemente 3-hidroxipropilo. El fenilo puede estar sustituido o no sustituido.

En otros compuestos de texafirina preferidos actualmente I o II, R_{1}-R_{12} son como en las Tablas A y B para las texafirinas A1-A88, y M es como se definió aquí anteriormente. "SDM" en la tabla significa "molécula directora de sitio". Más preferidos son los compuestos GdT2BET (compuesto III en donde M = Gd(III) y LuT2BET (compuesto III en donde M = Lu(III)). Mientras las citadas texafirinas son preferidas actualmente para el uso en la presente invención, la invención no está limitada por las mismas.

\vskip1.000000\baselineskip

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

Es importante que las texafirinas puedan sintetizarse usando ciertos sustituyentes que permiten un coeficiente de distribución líquido-agua que es óptimo para su uso con un agente quimioterapéutico. Documentos de patente de Estados Unidos, publicaciones, y solicitudes pendientes sobre las texafirinas, métodos para su fabricación y sus usos se han listado aquí y se incorporan como referencias. Los documentos sobre la safirina se describen en los documentos de patente de Estados Unidos 5.041.078; 5.159.065; 5.120.411; 5.302.714; y 5.457.195; cada patente se incorpora aquí como referencia.

La persona versada en las técnicas de síntesis orgánica a la vista de la presente descripción y de las descripciones de los documentos de patente, solicitudes y publicaciones incorporadas aquí como referencia podría ampliar y refinar la química sintética básica dada aquí como referencia para producir texafirinas con varios sustituyentes. Por ejemplo, se puede de una forma similar unir a una texafirina grupos polihidroxilados que tienen enlaces poliéter, sustituciones con sacáridos en los que el sacárido está unido con un enlace glicosídico tipo acetal, oligosacáridos o polisacáridos. Una texafirina doblemente carboxilada en la que los grupos carboxilo están unidos al núcleo de la texafirina por medio de éteres arílicos o sustituyentes alquilos funcionalizados podría convertirse en varios productos esterificados en los que los enlaces éster sirven para añadir sustituyentes que contienen grupos hidroxilo adicionales. Derivados polihidroxilados de la texafirina pueden sintetizarse por medio de enlaces de amida secundaria. Restos de sacáridos pueden unirse por medio de enlaces de amida. Derivados polihidroxilados de la texafirina que contienen subunidades ramificadas polihidroxiladas (poliol) pueden unirse al núcleo de la texafirina por medio de éteres arílicos o enlaces éster.

El tratamiento de las texafirinas carboxiladas con cloruro de tionilo o acetato de p-nitrofenol generaría especies acil-activadas apropiadas para su unión a anticuerpos monoclonales u otras biomoléculas de interés. Métodos estándares de acoplamiento in situ (por ejemplo, 1,1'-carbonildiimidazol) podrían usarse para realizar la conjugación.

Se incorporan sustituyentes al macrociclo en las posiciones R_{6} y R_{7} de la porción B (anillo bencénico) del macrociclo por medio de su unión con la orto-fenilendiamina en las posiciones 3 y 6 de la molécula. Sustituyentes en las posiciones R_{5} y R_{10} de la porción T (tripirrol) del macrociclo se incorporan por funcionalización apropiada de los grupos carboxílicos en las posiciones 5 del tripirrol en una etapa sintética anterior a la condensación con la orto-fenilendiamina sustituida.

La texafirina no aromática se produce convenientemente por condensación de un aldehído o cetona de tripirrol que tiene la estructura A; y una orto-fenilendiamina sustituida que tiene la estructura B:

17

Los sustituyentes R_{1}-R_{13} son como se ha descrito aquí anteriormente. En un método de síntesis preferido, la base de Br\varnothingnsted es trietilamina o N,N,N'N'-tetrametil-1,8-diaminonaftaleno (esponja protónica) y el oxidante es el aire que satura el disolvente orgánico, oxígeno, óxido de platino, o-cloranil o 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona. La etapa de calefacción o reflujo puede comprender agitar o calentar la mezcla a reflujo durante alrededor de 24 horas y el disolvente orgánico puede comprender metanol, o metanol y cloroformo, o metanol y benceno, o metanol y dimetilformamida.

Las texafirinas se proporcionan como preparaciones farmacéuticas para su uso como quimiosensibilizadores. Puede administrarse una preparación farmacéutica de texafirina sola o en combinación con vehículos farmacéuticamente aceptables, en dosis únicas o múltiples. Vehículos farmacéuticamente aceptables apropiados incluyen diluyentes sólidos inertes o rellenos, soluciones acuosas estériles y varios disolventes orgánicos. Las composiciones farmacéuticas formadas por la combinación de la texafirina de la presente invención y los vehículos farmacéuticamente aceptables son entonces fácilmente administradas en una variedad de formas de dosificación tales como soluciones inyectables.

Para la administración parenteral, pueden emplearse soluciones de texafirina en aceite de sésamo o cacahuete, propilenglicol acuoso, o solución acuosa estéril. Dichas soluciones acuosas deben ser apropiadamente tamponadas si es necesario y el diluyente líquido se hace anteriormente isotónico con suficiente solución salina o glucosa. Estas soluciones acuosas específicas son especialmente apropiadas para administración intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Con relación a ésto, los medios acuosos estériles que pueden emplearse serán conocidos por aquellos versados en la técnica en vista de la descripción presente.

Las formas farmacéuticas apropiadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones, polvos estériles para preparación extemporánea de soluciones estériles inyectables o dispersiones. En cualquier caso la forma debe ser estéril y debe ser fluida hasta el punto de ser fácil de usar con una jeringa. Debe ser estable en condiciones de fabricación y almacenaje y debe estar protegida de la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), sus mezclas apropiadas, y aceites vegetales. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, por medio de un revestimiento, tal como lecitina, por medio del mantenimiento del tamaño de partícula deseado en el caso de una dispersión y con el uso de tensioactivos. Puede conseguirse la prevención de la acción de los microorganismos por medio de varios agentes antifúngicos y antibacterianos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares tales como manitol o dextrosa o cloruro sódico. Un agente isotónico más preferido es una solución de manitol de concentración alrededor del 2-8%, y más preferiblemente, de concentración alrededor del 5%. Una absorción prolongada de las composiciones inyectables puede conseguirse con el uso en las composiciones de agentes que retardan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones inyectables estériles se preparan incorporando los compuestos activos en las cantidades requeridas en el disolvente apropiado con otros varios ingredientes enumerados anteriormente, como se requiera, seguido de esterilización por filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando los varios ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio básico dispersante y los otros ingredientes requeridos entre los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son las técnicas de secado al vacío y de liofilización que proporcionan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de su solución previamente filtrada para su esterilización.

Como se usa aquí, el término "vehículos farmacéuticamente aceptables" incluye cualquier y todos los disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción y similares. El uso de dichos medios y agentes con sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Excepto cuando un medio convencional o agente es incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas. Ingredientes activos suplementarios pueden también incorporarse a las composiciones.

Los presentes inventores visualizan que las texafirinas pueden usarse como quimiosensibilizadores para aumentar la citotoxicidad de una variedad de agentes quimioterapéuticos que tienen mecanismos de acción diferentes. En la Tabla 2 se presenta un listado de agentes quimioterapéuticos comercializados actualmente según su clase, incluyendo las enfermedades para las que están indicados.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

18

19

20

21

22

23

Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar realizaciones preferidas de la invención. Debería apreciarse por aquellos versados en la técnica que las técnicas descritas en los ejemplos a continuación representan técnicas descubiertas por el inventor que funcionan bien en la práctica de la invención, y puede así considerarse que constituyen formas preferidas para su práctica.

Ejemplo 1 Citotoxicidad de bleomicina con texafirina

El presente ejemplo presenta investigaciones sobre la citotoxicidad de la bleomicina con la texafirina de gadolinio como quimiosensibilizador. La bleomicina es un antibiótico básico glicopéptido que causa la fragmentación del ADN e inhibe la incorporación de timidina al ADN (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1243-1244, 1995). La texafirina de gadolinio es el compuesto II, donde M = Gd(III).

Se realizaron los estudios in vitro usando un ensayo de MTT modificado (Mosmann, 1983). Células MES-SA (una línea celular híbrida mixta mulleuriana de sarcoma uterino humano, de Stanford School of Medicine, Stanford, CA) en medio completo de McCoy 5A (0,2 ml que contienen 3.000-5.000 células), se pipetearon dentro de cada pocillo de una placa de microtítulo de 96 pocillos. Se dejó que las células se unieran durante la noche. Se añadió a cada uno de los pocillos GdT2BT(100 \mul; 2mM en manitol al 5%) a una concentración de 50 \muM, 100 \muM o 150 \muM. Se añadió una solución de bleomicina (100 \mul, 100 \muM) a cada pocillo de la primera fila de pocillos en la placa para dar una dilución 1:3 del fármaco. Se mezcló muy bien el medio y se transfirió 100 \mul a cada uno de una nueva serie de pocillos para diluciones sucesivas. Se repitió esta dilución serial sucesivamente, dejando la última serie de pocillos como controles, eliminando los últimos 100 \mul de la preparación fármaco+texafirina/medio. Estas diluciones seriadas dieron como resultado diluciones sucesivas de 1:3, 1:9, 1:27, 1:81, y 1:243 de la concentración original patrón de bleomicina.

Se dejaron crecer las células durante 48 horas en presencia del fármaco y GdT2BET. Se añadió a cada pocillo MTT [bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio)] (Sigma, St. Louis, MO) (20 \mul de una solución de 5 mg/ml) en una solución tamponada salina de fosfato (PBS), y se mantuvo la placa en un incubador de cultivo de tejidos a 37ºC en una atmósfera de 5% CO_{2}. Después de una incubación de 2-3 horas, se separó el medio cuidadosamente por agitación y se reemplazó con 0,1-0,15 ml de isopropanol (JT Baker Chemical Co., Phillipsburg, NJ), acidulado con 0,1 N HCl para disolver los cristales de formazan formados por las células. Se leyó la placa a una longitud de onda de ensayo de 570 nm y una longitud de onda de referencia de 630 nm en un espectrofotómetro de multipocillo (Modelo MR580, Dynatech Laboratories, Alexandria, VA). Se analizó cada concentración del fármaco en cuadriplicado. Se define la supervivencia por ciento como el porcentaje de la densidad óptica (OD) de las células tratadas con el fármaco con relación al control.

Los datos de citotoxicidad de la bleomicina a varias concentraciones en presencia de 50 \muM, 100 \muM, y 150 \muM de GdT2BET en células MES-SA mostraron que el porcentaje de supervivencia de las células es sustancialmente menor en presencia de la texafirina. Este aumento de la toxicidad de la bleomicina se observa a todas las concentraciones de bleomicina estudiadas y a las tres concentraciones de texafirina probadas.

Ejemplo 2 Citotoxicidad de la doxorrubicina con la texafirina

El presente ejemplo presenta investigaciones sobre la citotoxicidad de la doxorrubicina (adriamicina) con la texafirina GdT2BET como quimiosensibilizador. La doxorrubicina es un antibiótico del grupo de la antraciclina que se une al ADN e inhibe la síntesis del ácido nucleico, inhibiendo la topoisomerasa II y produciendo radicales de oxígeno; tiene el espectro antineoplásico más amplio y es el más útil de los fármacos antineoplásicos (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1249, 1995).

Se realizaron los estudios in vitro como se describe en el Ejemplo 1 usando doxorrubicina (100 \mul, 100 nM) y GdT2BET (2 mM en 5% de manitol; a 50 \muM, 100 \muM, o 150 \muM). Los resultados de estos estudios parecen mostrar un efecto protector de la texafirina. Los resultados in vivo con la doxorrubicina, mostrados a continuación, sugieren que este resultado in vitro puede ser una anomalía debido a la administración simultánea de doxorrubicina y texafirina.

Para probar esta hipótesis se realizó un segundo estudio in vitro como sigue: se siguieron los procedimientos del Ejemplo 1 con la excepción de que se añadió sólo doxorrubicina a cada pocillo de la primera fila de pocillos de la placa de microtítulo y seguidamente se diluyó serialmente. Se dejó que el fármaco se incubara con las células durante 24 horas, después de lo cual se lavaron los pocillos con medio que se eliminó por aspiración. Se añadió GdT2BET (a una concentración 150 \muM) a medio fresco, y se añadió el medio a cada uno de los pocillos de la placa. Se dejó que la texafirina se incubase con las células durante 24 horas, después de lo que se añadió MTT y se continuó el estudio como se describe en el Ejemplo 1. Los resultados de este segundo estudio in vitro muestran claramente un aumento de la citotoxicidad de la doxorrubicina en presencia de la texafirina.

Los estudios in vivo se realizaron usando ratones Balb/c con tumores EMT6 implantados subcutáneamente. El tumor EMT6 es una sarcoma mamario murino, y la actividad antitumoral in vivo de la doxorrubicina ha sido previamente demostrada por Grandi et al., (1988) y Di Marco et al, (1972) en carcinoma mamario MTV. En los presentes estudios, se disolvió la adriamicina a una concentración de 2 mg/ml en solución láctica de Ringer. Se disolvió la GdT2BET a una concentración de 2 mM en manitol al 5%. Se implantaron subcutáneamente los tumores EMT6 (obtenidos de Dr. J. Martin Brown, Stanford School of Medicine, Stanford, CA) en el lomo derecho de ratones Balb/c (Simonsen Laboratories, Gilroy, CA); con 14 ratones en cada grupo. El protocolo para el estudio se presenta en la Tabla 3. Se repitió el protocolo una vez a la semana durante tres semanas: se midieron los tumores con un calibrador vernier 2-3 veces a la semana, y se pesaron los ratones antes de la inyección.

Los resultados mostraron un claro aumento de la citotoxicidad de la adriamicina en todos los grupos en el caso de la inyección de texafirina seguida de la inyección de adriamicina. Se observaron dos curaciones en el grupo del protocolo ADR+GdT2BET. El término "curación" como se usa aquí significa que no se encontró evidencia de la enfermedad al final del estudio, o sea que el animal parecía estar libre del tumor.

TABLA 3

Protocolo para la quimiosensibilización in vivo Estudios que usan las texafirinas para aumentar el efecto de doxorrubicina (adriamicina, ADR)

24

Se realizó un estudio adicional usando el control de ADR previamente descrito; el protocolo ADR+2 GdT2BET; y un protocolo de inyección de tres etapas consistente en GdT2BET (40 \mumol/kg), seguido de ADR (7,5 mg/kg) 5 horas más tarde seguido de GdT2BET (40 \mumol/kg) 5 minutos después de la inyección de ADR. Se repitió este protocolo una vez a la semana durante tres semanas, y se midieron los tumores con un calibrador vernier 2-3 veces a la semana. Los resultados muestran un aumento de la toxicidad en presencia de la texafirina de gadolinio, incluyendo la observación de dos curaciones en el grupo ADR+2GdT2BET. Los datos sugieren adicionalmente que el régimen de tres etapas de texafirina/ADR/texafirina podría ser demasiado citotóxico puesto que se observaron tres muertes en un grupo de seis animales en este grupo, dos después de la primera inyección de texafirina y una después de la última inyección de texafirina.

Un análisis del error estándar de los datos obtenidos después de la inyección de adriamicina solamente (ADR) y de la inyección de adriamicina seguida por la de texafirina 5 minutos y 5 horas más tarde (ADR+2GdT2BET) se presenta en la Fig. 1. Se observaron cuatro curaciones en el grupo ADR+2GdT2BET, con un p<0,05 después del día 9.

Se realizó un estudio adicional in vivo con cuarenta y cinco ratones C57 BL/6N que tenían melanomas B-16F10 implantados en sus lomos. Los animales se dividieron en tres grupos de quince animales cada uno y se trataron los grupos como sigue: i) controles (sin tratamiento); ii) sólo doxorrubicina a 7,5 mg/kg; o iii) doxorrubicina a 7,5 mg/kg seguida a las 5 horas por 20 \mumoles de GdT2BET por kg de peso corporal. Los grupos de tratamiento recibieron la terapia en los días 0, 7, y 14. El tiempo medio de supervivencia fue de 21 días para el grupo de control, 29 días para el grupo que recibió sólo la doxorrubicina, y 40 días para el grupo que recibió doxorrubicina y texafirina (Fig. 3). El análisis de las curvas de supervivencia por la prueba de log rank, (rango de logaritmo), demostró una mejora significativa (P=0,0047) en el grupo doxorrubicina+GdT2BET comparado con los animales que recibieron sólo doxorrubicina. La supervivencia de los animales tratados sólo con GdT2BET fue la misma que la de los controles.

Los datos presentados en este ejemplo proporcionan una clara muestra de quimiosensibilización por la texafirina debido al aumento de la citotoxicidad de la doxorrubicina cuando se administra en un régimen apropiado con la texafirina.

Ejemplo 3 Citotoxicidad del paclitaxel con la texafirina

El Presente ejemplo proporciona estudios sobre la citotoxicidad del paclitaxel con la texafirina de gadolinio como quimiosensibilizador. El paclitaxel (el nombre es de Bristol Myers Oncology para el taxol) inhibe la mitosis estabilizando los husos mitóticos y promoviendo inapropiadamente su formación (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1249, 1995).

Se realizaron los estudios in vitro como se describe en el Ejemplo 1 con paclitaxel (100 \mul, 1000 nM) y GdT2BET (50 \muM, 100 \muM, o 150 \muM) añadido a cada dilución del fármaco. Los resultados de estos estudios muestran un aumento de la citotoxicidad, especialmente a las concentraciones más bajas de paclitaxel.

Los estudios in vitro con células tumorales humanas de fibrosarcoma HT1080 indicaron que no hubo ningún efecto sobre la citotoxicidad de taxol con LuT2BET o GdT2BET, ambos a una concentración de 30 \muM.

Ejemplo 4 Citotoxicidad de la 4-OH-ciclofosfamida con texafirina

El presente ejemplo presenta estudios sobre la citotoxicidad de la 4-OH-ciclofosfamida con la texafirina de gadolinio como quimiosensibilizador. La ciclofosfamida es un agente alquilante (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1238 y 1246, 1995).

Se realizaron estudios in vitro como se describe en el Ejemplo 1 con 4-OH-ciclofosfamida (100 \mul, 100 \muM) y GdT2BET (50 \muM, 100 \muM, y 150 \muM) añadido a cada dilución del fármaco. Los resultados de estos estudios parecen mostrar un efecto protector a bajas concentraciones de 4-OH-ciclofosfamida. Este resultado in vitro puede ser una anomalía, similar al resultado anómalo visto en el Ejemplo 2 con doxorrubicina debido a la administración simultánea del fármaco y de la texafirina.

Se realizaron estudios in vivo usando ratones Balb/c con tumores EMT6 implantados subcutáneamente como se describe en el Ejemplo 2. Se disolvió la 4-OH-ciclofosfamida a una concentración de 5 mg/ml en NaCl al 0,9%. Se disolvió la GdT2BET a una concentración de 2 mM en manitol al 5%. Los tumores EMT6 se implantaron subcutáneamente en los lomos laterales de los ratones Balb/c; había 9 ratones en cada grupo. El grupo nº 1 recibió ciclofosfamida (CY) a 40 mg/kg; el grupo nº 2 recibió ciclofosfamida (CY) a 40 mg/kg seguida de GdT2BET a 40 \mumoles/kg 5 minutos más tarde; y el grupo nº 3 recibió ciclofosfamida (CY) a 40 mg/kg seguida de GdT2BET a 40 \mumoles/kg 5 minutos y 5 horas más tarde. Este protocolo se repitió una vez a la semana durante tres semanas.

Los resultados parecen sugerir que hubo muy poca quimiosensibilización usando texafirina y ciclofosfamida con este particular régimen de tratamiento. Los resultados mostrados en el Ejemplo 2 con doxorrubicina sugieren que el efecto de quimiosensibilización de texafirina puede ser en cierto modo dependiente del régimen, y estudios adicionales deberían clarificar si puede aumentarse la citotoxicidad de la ciclofosfamida con texafirina usando otros régimenes.

Ejemplo 5 Citotoxicidad del etopósido con la texafirina

El presente ejemplo presenta estudios sobre la citotoxicidad del etopósido con la texafirina de gadolinio como quimiosensibilizador. El etopósido daña el ADN, probablemente vía la ruptura de la topopisomerasa II, y detiene a la célula principalmente en la fase G2 (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1249, 1995).

Se realizaron estudios in vitro como se describe en el Ejemplo 1 con etopósido (100 \mul, 100 \muM) y GdT2BET (50 \muM, 100 \muM, o 150 \muM) añadido a cada dilución del fármaco. Los resultados de estos estudios muestran un aumento de la citotoxicidad, especialmente a concentraciones bajas de etopósido.

Estudios adicionales in vitro con células tumorales humanas de fibrosarcoma HT1080 indicaron quimiosensibilización con GdT2BET 30 \muM pero no con LuT2BET 30 \muM en presencia de etopósido.

Ejemplo 6 Citotoxicidad de cisplatino con texafirina

El presente ejemplo presenta estudios sobre la citotoxicidad del cisplatino con la texafirina de gadolinio como quimiosensibilizador. El cisplatino intercala el ADN y por lo tanto actúa como un agente antineoplásico alquilante (Barrows, L.R., en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pub. Co., Easton, PA, 1249, 1995).

Se realizaron estudios in vitro como se describe en el Ejemplo 1 con cisplatino (100 \mul, 100 \muM) y GdT2BET (50 \muM, 100 \muM, y 150 \muM) añadido a cada dilución del fármaco. Los resultados de estos estudios muestran un aumento de la citotoxicidad, especialmente a concentraciones bajas de cisplatino.

Estudios adicionales in vitro con células tumorales humanas de fibrosarcoma HT1080 indicaron quimiosensibilización con GdT2BET 100 \muM pero no con LuT2BET, ambos a una concentración 10 \muM de cisplatino.

Ejemplo 7 Resumen de los resultados de la quimiosensibilización con texafirina in vitro

El presente ejemplo presenta un resumen de los resultados obtenidos en las pruebas MTT de citotoxicidad in vitro proporcionados en los Ejemplos 1 y 3-6. La Fig. 2 demuestra la diferencia de IC_{50} con relación al control de las tres concentraciones diferentes de GdT2BET y un agente quimioterapéutico en células MES-A. Los agentes investigados con texafirina fueron paclitaxel, etopósido, 4-OH-ciclofosfamida, cisplatino y bleomicina. Los datos de los estudios con doxorrubicina no se incluyen en este resumen puesto que este régimen in vitro fue en cierto modo diferente al descrito en el Ejemplo 2. Todos los agentes demostraron un aumento de toxicidad en presencia de texafirina, y bleomicina demostró un aumento de actividad particularmente dramático (Fig. 2).

Ejemplo 8 Estudio hematológico de la texafirina y la doxorrubicina

El presente ejemplo presenta un resumen de los resultados obtenidos por el estudio hematológico realizado en ratones normales para probar cualquier toxicidad combinada de la texafirina de gadolinio y la doxorrubicina.

El grupo control de ocho ratones Balb/c no recibió ningún tratamiento. Un segundo grupo de ocho ratones recibió inyecciones de doxorrubicina a 7,5 mg/kg/semana durante tres semanas. Un tercer grupo recibió inyecciones de doxorrubicina como el grupo nº 2, seguido 5 minutos más tarde por GdT2BET a 40 \mumoles/kg/semana durante tres semanas. Los valores normales se obtuvieron de la compañía California Veterinary Diagnostics, Inc, (West Sacramento, CA). Se obtuvieron recuentos de glóbulos blancos, glóbulos rojos, valores de la hemoglobina en g/dl y recuentos de plaquetas dos semanas después de la primera inyección y dos semanas después de la última inyección.

Los resultados muestran claramente que no hay ningún aumento de la toxicidad en la médula ósea inducida por la doxorrubicina cuando se usó texafirina con doxorrubicina, medida por recuentos de glóbulos blancos periféricos, recuentos de plaquetas y hemoglobina. En los cuatro parámetros estudiados, y en los dos tiempos distintos estudiados, los valores del grupo de ratones que recibieron doxorrubicina y texafirina estuvieron muy cerca, y dentro de los valores de error, del grupo de ratones que recibió sólo doxorrubicina. Estos resultados ponen énfasis en la falta de toxicidad de texafirina in vivo, especialmente la falta de toxicidad en la médula ósea.

Ejemplo 9 Incorporación de la texafirina y efecto quimiosensibilizador en líneas celulares MDR y no MDR

El presente ejemplo presenta datos que indican que la incorporación de la texafirina de lutetio y el efecto quimiosensibilizador de la texafirina de gadolinio son independientes del fenotipo de resistencia multifármaco del hospedante.

Se investigó en cuanto a la incorporación de la texafirina de lutetio una línea celular de leucemia murina con la proteína de resistencia a multifármaco P388/ADR expresada (Gottesman y Pastan, 1993), y una línea celular que carecía de esta proteína P388 (Johnson et al., 1982). Se suspendieron las células P388 y P388/ADR en medio de FHS a una densidad celular de 7 mg/ml en peso húmedo (medio de Fisher con HEPES 20 mM, pH 7,2, reemplazando el NaHCO_{3}), y se incubaron con texafirina de lutetio (compuesto III en donde M = Lu(III); "LuT2BET") durante 30 minutos a 37ºC. Las medidas de fluorescencia no demostraron ninguna diferencia en la incorporación de texafirina entre las dos líneas celulares.

Se probaron una línea celular de sarcoma humano tipo silvestre, MES-SA y una variante de mdr1 seleccionada con la doxorrubicina, MES-SA/Dx5 (Stanford School of Medicine, Stanford, CA) con los agentes 4-OH-ciclofosfamida, etopósido, doxorrubicina, cisplatino y bleomicina en presencia de GdT2BET. Todos los agentes quimioterapéuticos fueron eficaces en ambas líneas celulares en presencia de texafirina, sugiriendo que el mecanismo de acción es independiente de la glicoproteína-P.

Ejemplo 10 Método para la selección de agentes quimioterapéuticos para los que la texafirina es un quimiosensibilizador

El presente ejemplo presenta métodos para la selección de agentes quimioterapéuticos para los que la texafirina es un quimiosensibilizador. Los agentes quimioterapéuticos candidatos se investigan en cuanto a un aumento de su actividad en presencia de texafirina usando un ensayo de citotoxicidad in vitro tal como el ensayo de citotoxicidad MTT descrito en el Ejemplo 1. Adicionalmente, o alternativamente, los agentes quimioterapéuticos candidatos se evalúan en modelos in vivo en cuanto a un aumento de la actividad en presencia de texafirina. Un ejemplo es el estudio en ratones descrito en el Ejemplo 2. Un agente quimioterapéutico que muestra un aumento de citotoxicidad en presencia de texafirina comparada con el nivel de citotoxicidad en ausencia de texafirina se le considera un agente quimioterapéutico para el que la texafirina es un quimiosensibilizador.

Adicionalmente, se desarrolló un modelo de ratón transgénico para probar agentes como quimiosensibilizadores potenciales para revertir la resistencia a los fármacos (Mickish, et al., 1991). Los ratones expresan el gen MDR en las células de la médula ósea y son resistentes a la leucopenia inducida por productos naturales como las antraciclinas. Esta resistencia a los fármacos puede ser evitada en una forma dependiente de la dosis con la administración simultánea de agentes tales como el verapamilo y la quinina. Este modelo de ratón transgénico MDR1 puede también usarse para investigar los agentes quimioterapéuticos para los que la texafirina es un quimiosensibilizador.

Se variaron las dosis, régimenes y métodos de administración del agente quimioterapéutico y de la texafirina para optimizar el efecto quimiosensibilizador. El tiempo y método de administración de cada agente, la dosis de cada agente, la respuesta del ritmo circadiano del animal a cada agente, son factores que se varían de uno en uno para optimizar la quimiosensibilización por las texafirinas.

Ejemplo 11 Terapia fotodinámica y quimiosensibilización usando texafirina

La terapia fotodinámica y quimiosensibilización (quimiosensibilización-PDT) por la texafirina envuelve la administración de la texafirina junto con un agente quimioterapéutico a un paciente con cáncer de forma que el efecto terapéutico del fármaco quimioterapéutico se ve aumentado cuando se administra radiación en forma de luz. El presente método proporciona incluso especificidad adicional y localización del tratamiento comparado con la quimiosensibilización convencional.

Las texafirinas son fotosensibilizadores efectivos para uso en PDT. Absorben fuertemente en el intervalo 720-770 nm que es transparente a los tejidos, y producen ^{1}O_{2} con un rendimiento cuántico adecuado. Además, la eficacia de la terapia fotodinámica con las texafirinas persiste incluso en presencia de tejido pigmentado, tal como tejido que contiene melanina.

En los métodos actuales de quimiosensibilización-PDT, se administraría a un paciente o sujeto que tiene un cáncer para el que la quimioterapia es una forma de tratamiento, un agente quimioterapéutico y una texafirina fotosensible, seguido de irradiación luminosa en la zona del cáncer. El fármaco quimioterapéutico puede seleccionarse entre los tipos de agentes listados en la Tabla 2. La texafirina fotosensible se administra en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Por "farmacéuticamente eficaz" se quiere decir que la dosis, después de la exposición a la luz, y junto con un agente quimioterapéutico, proporcionará un aumento de muerte celular en la zona de la irradiación. La dosis específica variará dependiendo de la texafirina específica escogida, el régimen de dosificación a seguir, la exposición a la fotoirradiación, y el tiempo de la administración. Dicha dosis puede ser determinada sin demasiada experimentación por métodos conocidos en la técnica o descritos aquí. Por ejemplo, puede administrarse intravenosamente LuT2BET a alrededor de 5-40 \mumol/kg a un paciente que está recibiendo un agente quimioterapéutico (tal como un taxoide o taxano para cáncer de mama, por ejemplo). Se administra entonces la luz durante varios minutos a unas pocas horas después de la administración de la texafirina fotosensible. La fuente de luz puede ser un láser o un diodo que emite luz, por ejemplo; la luz puede tener un intervalo de longitud de onda de alrededor de 450-900 nm, preferiblemente alrededor de 700-800 nm, más preferiblemente alrededor de 730-770 nm; y la luz puede administrarse por vía tópica, endoscópica, o intersticial (vía, por ejemplo, una sonda de fibra óptica).

Bibliografia

Barrows, L.R., "Antineoplastic and Inmunoactive Drugs", Capítulo 75, páginas 1236-1262 en: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing. Co., Easton, PA, 1995).

Dalton, W.S., Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 31:520, 1990.

De Vita, V.T., et al, en Cancer, Principles & Practice of Oncology, 4ª edición, J.B.Lippincott Co., Philadelphia, PA, páginas 2661-2664, 1993.

Di Marco, A., et al., Cancer Chemotherapy Reports, 56:153-161, 1972.

Calabresi, P., y B.A. Chabner, "Chemotherapy of Neoplastic Diseases" Sección XII, páginas 1202-1263 en: Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, octava edición, 1990 Pergamon Press, Inc.

Gottesman, M.M., e I. Pastan, Ann. Rev. Biochem., 62:385-427, 1993.

Grandi, M., et al., "Screening of antracycline analogs". En Anthracycline and Anthracenedione-based anticancer agents. Bioactive molecules. Vol. 6, capítulo XV. Editor JW Lown, Elsevier, 1988.

Johnson, R.K., et al., Cancer Treat. Rep. 62:1535-1547, 1982.

Mickish, G.H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:547-551, 1991.

Mossmann, J. Immunological Methods, 65:55-63, 1983.

Raderer, M., y Scheithauer, W., Cancer, 72(12):3553-3563, 1993.

Claims

1. El uso de texafirina en la preparación de una composición farmacéutica para su empleo en la quimiosensibilización con un agente quimioterapéutico.

2. El uso según la reivindicación 1, donde el agente quimioterapéutico es para el tratamiento del cáncer.

3. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina tiene la estructura I:

26

donde

M es H, un catión de metal divalente, o un catión de metal trivalente:

R_{1}-R_{4}, R_{7} y R_{8} son independientemente hidrógeno, haluro, hidroxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, haloalquilo, nitro, formilo, acilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo, sacárido, carboxilo, carboxialquilo, carboxamida, carboxiamidoalquilo, amino, aminoalquilo, una molécula directora de sitio, o una pareja que esta acoplado a una molécula directora de sitio.

R_{5} y R_{10}-R_{12} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo carboxialquilo, carboxamida, carboxiamidoalquilo, amino, aminoalquilo, o una pareja que esta acoplada a un sacárido, o una molécula directora de sitio; y n es un número entero menor o igual a 5.

4. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la molécula de texafirina tiene la estructura II:

27

donde:

R_{1}-R_{4}, R_{7} y R_{8} son independientemente hidrógeno, haluro, hidroxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, haloalquilo, nitro, formilo, acilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo, sacárido, carboxilo, carboxialquilo, carboxamida, carboxiamidoalquilo, amino, aminoalquilo, una molécula directora de sitio, o una pareja que esta acoplada a una molécula directora de sitio.

R_{5} y R_{10}-R_{12} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxilo, hidroxialcoxilo, hidroxialquenilo, hidroxialquinilo carboxialquilo, carboxiamida, carboxamidoalquilo, amino, aminoalquilo, o una pareja que esta acoplada a un sacárido, o una molécula directora de sitio;

R_{13} es alquilo, alquenilo, oxialquilo, o hidroxialquilo que tiene hasta alrededor de 3 átomos de carbono y tienen flexibilidad de rotación alrededor del enlace del primer átomo de carbono.

5. El uso según la reivindicación 3, donde R_{1} es CH_{2}(CH_{2})_{2}OH, R_{2} y R_{3} son CH_{2}CH_{3}, R_{4} es CH_{3}, R_{7} y R_{8} son O(CH_{2}CH_{2}O)_{3}CH_{3}, y R_{5},R_{6} y R_{9}-R_{12} son H.

6. El uso según la reivindicación 5, donde M es un catión metálico trivalente, y el catión metálico trivalente es Lu(III).

7. El uso según la reivindicación 5, donde M es un catión metálico trivalente, y el catión metálico trivalente es Gd(III).

8. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina es una texafirina fotosensible.

9. El uso según la reivindicación 8, donde la texafirina fotosensible está formando un complejo con un catión metálico diamagnético y el catión metálico diamagnético es Lu(III), La(III), In(III), Y(III), Zn(II) o Cd(II).

10. El uso según la reivindicación 9, donde el catión metálico diamagnético es Lu(III).

11. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina está formando un complejo con un catión metálico paramagnético.

12. El uso según la reivindicación 11, donde el catión metálico paramagnético es Mn(II), Mn(III), Fe(III), o un catión metálico lantánido trivalente diferente de La(III), Lu(III), y Pm(III).

13. El uso según la reivindicación 11, donde el catión metálico paramagnético es Mn(II), Mn(III), Dy(III), o Gd(III).

14. El uso según la reivindicación 11, donde el catión metálico paramagnético es Gd(III).

15. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde el agente quimioterapéutico es un agente alquilante, un antimetabolito, un producto natural, una hormona o un antagonista.

16. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde el agente quimioterapéutico es un complejo de coordinación del platino, una antracenodiona, una antraciclina, una urea sustituida, un derivado de la metil-hidrazina, o un supresor adrenocortical.

17. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde el agente quimioterapéutico es paclitaxel, etopósido, 4-OH-ciclofosfamida, cisplatino, doxorrubicina, o bleomicina.

18. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde el agente quimioterapéutico es doxorrubicina o bleomicina.

19. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina se administra después de la administración de un agente quimioterapéutico.

20. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina se administra por vía tópica.

21. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina se administra por vía intravenosa.

22. El uso según la reivindicación 1 ó 2, donde la texafirina actúa como un quimiosensibilizador con un mecanismo independiente de la glicoproteína-P.

23. El uso según la reivindicación 2, donde el cáncer es leucemia, linfoma, carcinoma o sarcoma.