ES2222160T3 - Procedimiento de produccion de arabitol por fermentacion continua. - Google Patents

Procedimiento de produccion de arabitol por fermentacion continua.

Info

Publication number
ES2222160T3
ES2222160T3 ES00401239T ES00401239T ES2222160T3 ES 2222160 T3 ES2222160 T3 ES 2222160T3 ES 00401239 T ES00401239 T ES 00401239T ES 00401239 T ES00401239 T ES 00401239T ES 2222160 T3 ES2222160 T3 ES 2222160T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
fermentation
arabitol
sugar
zone
microorganisms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00401239T
Other languages
English (en)
Inventor
Pierrick Duflot
Pierre Lanos
Fabrice Machu
Laurent Segueilha
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roquette Freres SA
Original Assignee
Roquette Freres SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roquette Freres SA filed Critical Roquette Freres SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2222160T3 publication Critical patent/ES2222160T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/18Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/813Continuous fermentation
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/911Microorganisms using fungi
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/911Microorganisms using fungi
    • Y10S435/921Candida
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/911Microorganisms using fungi
    • Y10S435/93Hansenula
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/911Microorganisms using fungi
    • Y10S435/94Saccharomyces

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Procedimiento de producción de arabitol por fermentación continua como mínimo de un azúcar por microorganismos productores de arabitol, caracterizado por el hecho de que se procede a las siguientes fases: a) conducción de la producción de arabitol en una primera zona de fermentación, que comprende como mínimo un fermentador, de manera que una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación se consume por dichos microorganismos, b) transferencia de una parte del medio de fermentación obtenido de este modo en una segunda zona de fermentación, comprendiendo por lo menos un fermentador, manteniendo simultáneamente el volumen constante en la primera zona de fermentación por añadidura de azúcar, c) continuación de la producción de arabitol en dicha segunda zona de fermentación de forma que se consume el azúcar residual del medio de fermentación, d) separación de forma continua del medio de fermentación de dicha segunda zona de fermentación obtenido de esta manera en una fracción concentrada de microorganismos y otra fracción soluble enriquecida en arabitol, e) recogida del arabitol obtenido.

Description

Procedimiento de producción de arabitol por fermentación continua.
La presente invención se refiere a un procedimiento de producción de arabitol por fermentación continua, como mínimo, de un azúcar mediante microorganismos productores de arabitol.
Tiene más específicamente por objeto un procedimiento de producción de arabitol por fermentación continua de, como mínimo, un azúcar mediante microorganismos productores de arabitol que utiliza, como mínimo, dos zonas de fermentación conectadas entre sí.
De manera más precisa, el procedimiento según la invención consiste en realizar la producción de arabitol en una primera zona de fermentación, favoreciendo el consumo de una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación que contiene, y a continuación transferir una parte de dicho medio de fermentación a una segunda zona de fermentación, todo ello manteniendo constante el volumen de dicha primera zona por añadidura de azúcar, y siguiendo la producción de arabitol en la segunda zona de fermentación de manera que se consume el azúcar residual.
Se procede a continuación, en la segunda zona de fermentación, a la separación de forma continua del medio de fermentación con un reducido contenido de azúcar residual obtenido de este modo en una fracción concentrada en microorganismos y otra fracción soluble enriquecida en arabitol, y eventualmente al reciclado de dichos microorganismos a la entrada de la primera zona de fermentación.
La preparación industrial del arabitol se basa principalmente en procedimientos de fermentación.
De modo general, los procedimientos biológicos de producción de arabitol pueden utilizar dos modos de fermentación distintos: discontinuo y continuo.
En el modo discontinuo, se utilizan de manera clásica dos técnicas: la técnica de fermentación discontinua propiamente dicha (o de lotes) y la técnica de fermentación discontinua alimentada (o de lote alimentado "fed batch").
En la técnica de fermentación discontinua propiamente dicha, todos los sustratos necesarios para la alimentación de los microorganismos son introducidos al principio de la fermentación, y el arabitol producido es extraído al fin de la fermentación.
Se entiende por "sustratos" el conjunto de elementos nutritivos que se introducen en el medio de fermentación. En el sentido de la invención, los sustratos son principalmente las fuentes de carbono (comprendiendo entre ellas el azúcar) y nitrogenadas directamente asimilables por los microorganismos productores de arabitol.
Esta técnica de fermentación discontinua presenta, no obstante, el inconveniente de requerir un tiempo prolongado de fermentación, para permitir el consumo total de azúcar introducido en el medio de fermentación, y requerir la utilización de grandes volúmenes del medio de fermentación, y por lo tanto de fermentadores, para obtener rendimientos de conversión satisfactorios. Todo ello se traduce en una productividad en volumen mediocre.
Además, ocurre que la variación de la concentración de uno de los constituyentes del medio de fermentación afecta al rendimiento o a la productividad en arabitol.
Una solución consiste en utilizar la segunda técnica de fermentación discontinua, llamada fermentación discontinua alimentada.
Esta técnica consiste en especial en introducir los sustratos progresivamente en el medio de fermentación.
La ventaja de esta técnica es, por lo tanto, no solamente poder controlar la concentración en sustratos del medio de fermentación, sino igualmente permitir el consumo total del azúcar introducido.
La técnica de fermentación discontinua alimentada permite, por lo tanto, resolver los problemas relacionados con los efectos inhibidores potenciales de algunos de los constituyentes de los sustratos de la fermentación con respecto al crecimiento de los microorganismos o de la producción de arabitol, o regular, por ejemplo, de manera más fina la aireación que condiciona la producción del arabitol.
No obstante, para obtener rendimientos y productividades satisfactorias, es necesario utilizar concentraciones elevadas de sustratos. Sobre todo, las duraciones de fermentación son largas y es preciso asegurar un control pesado y molesto de las diferentes etapas de la fermentación.
Así, por ejemplo, el procedimiento descrito por ESCALANTE y otros, (en Journal of Fermentation and Bioengineering, 70-4, 228-231, 1990) para la producción de arabitol mediante Hansenula en fermentación discontinua alimentada, no permite conseguir rendimientos y productividades industrialmente interesantes.
En efecto, incluso si el arabitol es producido de manera selectiva, y si el procedimiento de fermentación discontinua alimentada permite asegurar el consumo de toda la glucosa introducida en el medio de fermentación, el arabitol solo se obtiene con un rendimiento del orden del 14%.
El segundo modo de fermentación utilizado de manera clásica para la producción de arabitol por vía biológica es el modo continuo, como se describe, por ejemplo, por JAKOBUS van ZYL y PRIOR en Appl. Microbiol. Biotechnol. (1990), 33, 12-17.
En el modo continuo, todos los sustratos de fermentación son ajustados de manera continua en el fermentador, y se extraen fracciones del medio de fermentación con el mismo caudal que la aportación de sustratos, de forma que se trabaja a volumen constante.
Este modo de fermentación permite una ganancia apreciable de rendimiento y de productividad, pero no permite obtener un producto de elevada pureza, puesto que el arabitol retirado está forzosamente contaminado por los sustratos reintroducidos en el curso de la fermentación.
Por consiguiente, el inconveniente principal de los procedimientos de fermentación en modo continuo es la necesidad de purificar el arabitol. Además, las técnicas de purificación solo permiten separar de manera difícil el arabitol del azúcar residual no asimilado por los microorganismos.
Por esta razón, se encuentra clásicamente asociado a estos procedimientos de fermentación continuos, instalaciones de purificación complejas, pesadas y costosas.
Todos los esfuerzos de los especialistas en fermentación se dedican, por lo tanto, a la investigación de las condiciones operativas que conducen a conciliar los mejores factores de rendimiento y productividad en arabitol, con un reducido contenido de azúcar residual que permite una purificación poco costosa y fácil del arabitol producido.
La presente invención tiene, por lo tanto, el objetivo de resolver el problema de producción de arabitol con una pureza satisfactoria y con excelentes rendimientos y productividad por la utilización de una técnica de fermentación de forma continua específica.
El procedimiento de producción de arabitol utilizado por la sociedad solicitante consiste en realizar la fermentación por lo menos de un azúcar por los microorganismos productores de arabitol en dos zonas de fermentación.
La invención se refiere más particularmente a un procedimiento de arabitol por fermentación continua como mínimo de un azúcar por microorganismos productores de arabitol, que se caracteriza por las fases siguientes:
a) conducir la producción de arabitol en una primera zona de fermentación, que comprende como mínimo un fermentador, de manera que una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación es consumido por dichos microorganismos,
b) transferir una parte del medio de fermentación obtenido de este modo en una segunda zona de fermentación, que comprende por lo menos un fermentador, manteniendo el volumen constante en la primera zona de fermentación por añadidura de azúcar,
c) continuación de la producción de arabitol en dicha segunda zona de fermentación de forma que consuma el azúcar residual del medio de fermentación,
d) separación de forma continua del medio de fermentación de dicha segunda zona de fermentación obtenida de este modo en una fracción concentrada en microorganismos y otra fracción soluble enriquecida en arabitol,
e) recogida del arabitol producido de esta forma.
La primera etapa del procedimiento según la invención consiste en conducir la producción de arabitol en una primera zona de fermentación, que comprende como mínimo un fermentador, de manera que una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación sea consumida por dichos microorganismos.
Se escoge ventajosamente los microorganismos entre las levaduras osmotolerantes, naturales o modificadas, productoras de arabitol a partir de azúcar como fuente de carbono directamente asimilable.
Por "levaduras osmotolerantes", se comprenden levaduras capaces de soportar presiones osmóticas importantes y que corresponden a los géneros Yamadazyma, Debaromyces, Hansenula, Candida, Zygosaccharomyces y Saccharomyces...sin que esta lista sea limitativa.
Por "levaduras osmotolerantes naturales", se comprenden levaduras osmotolerantes que son aisladas de su entorno por sus capacidades naturales para producir un metabolito determinado, en este caso, el arabitol.
Por "levaduras osmotolerantes modificadas", se comprenden levaduras osmotolerantes cuyas capacidades naturales para producir un metabolito determinado, en este caso el arabitol, han sido optimizadas por la puesta en práctica de técnicas de mutagénesis (aleatorias o dirigidas) o técnicas de biología molecular.
Por "azúcar" se comprenden en la presente invención todos los azúcares carbonados directamente asimilables por los microorganismos productores de arabitol.
Es un azúcar de este tipo, por ejemplo, el que se puede escoger en el grupo constituido por la glucosa, galactosa, sacarosa, arabinosa, glicerol, fructosa, maltosa, silulosa, ribulosa, manitol, mio-inositol, etanol, almidón y maltosa, solos o en mezcla entre sí.
La primera zona de fermentación es utilizada de manera que asegura una producción elevada de arabitol, favoreciendo el consumo de una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación.
Se entiende por "una parte de azúcar", de acuerdo con la invención, una cantidad de azúcar mínima de 50% en peso, preferentemente como mínimo 80% en peso, y de manera más preferentemente todavía un mínimo de 90% en peso.
En un primer modo preferente de realización del procedimiento según la invención, la producción de arabitol se inicia en la primera zona de fermentación de forma discontinua, introduciéndose simultáneamente todos los sustratos de fermentación, estando comprendido en ellos el azúcar y los microorganismos.
En un segundo modo preferente de realización del procedimiento según la invención, la producción de arabitol se inicia en la primera zona de fermentación de manera discontinua alimentada, llevándose a cabo de manera progresiva la alimentación en azúcar de los microorganismos productores del arabitol.
Se escoge ventajosamente una forma de alimentación discontinua de tipo alimentado para empezar la fermentación en el procedimiento según la invención.
Esta forma de alimentación discontinua permite asegurar el llenado progresivo de la primera zona de fermentación en sustratos de manera que se mantiene una relación elevada de crecimiento de microorganismos, una buena conversión del azúcar en arabitol y una concentración en azúcar del medio de fermentación a un valor tolerado por el microorganismo productor de arabitol considerado.
Se comprende por "concentración en azúcar tolerada por el microorganismo", una concentración de azúcar mínima que no inhibe ni el crecimiento de dicho microorganismo ni su producción de arabitol.
De manera general, para todos los microorganismos productores de arabitol, las condiciones utilizadas son reguladas de manera que eviten un consumo total del azúcar.
La producción elevada de arabitol en la primera zona de fermentación conduce en general al mantenimiento de cantidades igualmente elevadas de azúcar residual no consumido, cuya importancia es función de los microorganismos considerados. De manera general, esta relación de azúcar residual es por lo menos igual a 2,5% en peso.
La segunda etapa del procedimiento según la invención consiste entonces en transferir una parte del medio de fermentación obtenido de esta manera en una segunda zona de fermentación, que comprende como mínimo un fermentador, manteniendo simultáneamente el volumen constante en la primera zona de fermentación por adición de azúcar.
Se efectúa de este modo la transferencia de una parte del medio de fermentación de la primera zona de fermentación a la segunda, cuando dicho medio de fermentación es enriquecido en arabitol, pero contiene, no obstante, todavía azúcar residual no consumido, en cantidad tal que hace pesada y compleja la purificación del arabitol producido.
Esta transferencia está acompañada de una alimentación continua de azúcar en la primera zona de fermentación, con la finalidad no solamente de mantener el volumen constante, sino sobre todo de continuar la producción de arabitol con una productividad y un rendimiento de conversión por lo menos iguales a los valores obtenidos en la fase de iniciación de la producción de arabitol que se ha descrito anteriormente.
Se escoge ventajosamente alimentar de forma continua la primera zona de fermentación con los sustratos, en vez de hacerlo únicamente con azúcar, tal como se indica en un ejemplo posterior.
La tercera etapa del procedimiento según la invención consiste en continuar la producción de arabitol en la segunda zona de fermentación de manera que se consume el azúcar residual de la parte del medio de fermentación procedente de la primera zona de fermentación.
La segunda zona de fermentación es utilizada por lo tanto simultáneamente para continuar la producción de arabitol, pero sobre todo para terminar el consumo de azúcar que contamina la parte del medio de fermentación transferida de la primera zona de fermentación a la segunda, de manera que solo deja una débil proporción de azúcar residual.
Un reducido contenido de azúcar residual se entiende ventajosamente de una concentración de azúcar en el medio de fermentación como máximo igual a 2% en peso, y preferentemente como máximo igual a 1% en peso.
En un modo preferente del procedimiento según la invención, se conduce por tanto a esta etapa utilizando fermentadores de dimensiones distintas, presentando los fermentadores de la segunda zona de fermentación un volumen inferior a los de la primera zona de fermentación.
En una forma de realización todavía más preferente del procedimiento según la invención, se escoge no utilizar más que un fermentador por zona de fermentación.
La cuarta etapa del procedimiento según la invención consiste en separar de manera continua el medio de fermentación con reducido contenido de azúcar residual obtenido de este modo, en una fracción concentrada en microorganismos y otra fracción soluble enriquecida en arabitol.
Se realiza la separación continua entre los microorganismos y la fracción enriquecida en arabitol por cualquier medio conocido por los técnicos en la materia, por ejemplo, microfiltrado, utilizando membranas cuyo diámetro de poros se adapta a las dimensiones del microorganismo considerado o por centrifugación en un intervalo de 1.000 a 10.000 G, y de manera preferente por microfiltrado, tal como se indica más adelante con un ejemplo.
La solución clarificada, enriquecida en arabitol, obtenida al final de esta etapa de separación, constituye el arabitol producto.
Se ha descubierto igualmente por la sociedad solicitante que puede ser ventajoso reciclar la fracción enriquecida en microorganismos a la entrada de la primera zona de fermentación.
La ventaja de esta etapa de reciclado de los microorganismos es la de reintroducir una biomasa cuyas capacidades de fermentación son completas, y evitar por la misma un retraso en la puesta en práctica que ocasionaría la preparación de un nuevo cultivo de microorganismos productores de arabitol.
La recuperación del arabitol producido se efectúa, por ejemplo, por concentración hasta un valor del orden de 20% y superior, y puede ser continuada por una etapa de cristalización por cualquier método conocido por los técnicos en la materia.
Otras características y ventajas de la invención aparecerán de la lectura de los ejemplos no limitativos que se describen a continuación.
Ejemplo 1
Las dos zonas de fermentación utilizadas comportan cada una de ellas un fermentador, pero de dimensión distinta. El primer fermentador de marca CHEMAP® tiene un volumen de 20 l (17 l útiles), y el segundo, de la misma marca, un volumen de 5 l (4 l útiles).
Un precultivo del microorganismo Yamadazyma ohmeri, cepa ATCC 20209, es realizado en principio en otro fermentador de 20 l.
El medio de precultivo está constituido por glucosa con una concentración de 50 gr/l, licor de "corn steep" con una concentración de 8 gr/l, KH_{2}PO_{4} a una concentración de 2 gr/l y MgSO_{4} con una concentración de 1 gr/l. El precultivo se realiza a 30ºC, con una agitación a 600 rpm, una aireación de 1 vvm, durante 12 horas, y una regulación del pH a 4,5 con NH_{4}OH al 20%.
El fermentador de la primera zona de fermentación es inseminado con 1 l de este precultivo. Se completa a 6 l con un medio que comprende glucosa con una concentración de 50 gr/l, licor de "corn steep" con una concentración de 8 gr/l, KH_{2}PO_{4} con una concentración de 2,5 gr/l, MgSO_{4} con una concentración de 1 gr/l y FeSO_{4} con una concentración de 0,05 gr/l.
La temperatura se fija a 30ºC. El pH se regula al valor 4,5 hasta 35 horas con ayuda de NH_{4}OH 20%, y a continuación la regulación es fijada a valor 3 con ayuda de KOH 5 N.
La añadidura de glucosa se asegura tal como se indica en la siguiente tabla I. La biomasa se estima por la medición de la absorbancia (densidad óptica o DO) del medio a 620 nm.
Para la Yamadazyma ohmeri, una unidad de absorbancia a 600 nm equivale a una biomasa del orden de 0,2 gr/l.
TABLA I
1
Después de 40 horas de fermentación, se alcanza el volumen útil del fermentador de la primera zona de fermentación, y la concentración en glucosa residual es de 29 gr/l.
Entonces se transfieren 4 l del medio de fermentación de este primer fermentador en el fermentador de la segunda zona de fermentación, y se añaden entonces 800 gr de glucosa en un volumen de 2 l en el primer fermentador. La temperatura de la segunda zona de fermentación se fija a 38ºC, y el pH se regula a 3,5 con ayuda de KOH 5 N.
Los fermentadores evolucionan a continuación separadamente hasta 46 horas, a partir de la cual se efectúa la primera extracción de arabitol en el segundo fermentador.
A partir de las 46 horas, el fermentador de la primera zona de fermentación es alimentado en glucosa con una concentración de 250 gr/l con un caudal del orden de 0,4 l/h y en licor de "corn steep" con un caudal de 50 gr/l con un caudal del orden de 10 ml/h.
El medio círculo de la primera zona de fermentación a la segunda mediante una bomba PCM®, y a continuación de la segunda zona de fermentación a un módulo de filtrado tangencial MEMBRALOX®, que permite recuperar un permeado rico en arabitol y un retenido rico en microorganismos.
El retenido es reintroducido entonces a la entrada de la primera zona de fermentación.
Para mantener los niveles en los dos fermentadores, el volumen del líquido resultado del filtrado saliente es igual al caudal de alimentación en glucosa.
Este caudal evoluciona en el curso del tiempo en función de la velocidad de consumo de glucosa por los microorganismos en los fermentadores. Al cabo de 200 horas, la alimentación se detiene, y el fermentador de la segunda zona de fermentación es vaciado.
Se deja terminar la fermentación en el fermentador de la primera zona de fermentación durante 10 horas suplementarias, antes de trazar el medio en el módulo de filtración tangencial.
La tabla II que se adjunta a continuación presenta las mediciones efectuadas después de la transferencia del medio de fermentación de la primera zona de fermentación a la segunda.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA II
2
Globalmente, se han recuperado 8,8 kg de arabitol para 18,7 kg de glucosa utilizados, es decir, un rendimiento de 47% y una productividad de 2,2, gr/l/h.
En fermentación discontinua realizada en las mismas condiciones de medio de producción, con la misma aportación de glucosa, el rendimiento es de 40% y la productividad es solamente de 1,5 gr/l/h.
El procedimiento según la invención permite por lo tanto asegurar rendimientos de productividad más elevados.
Además, la reducida proporción de glucosa residual permite recuperar un arabitol que presenta una pureza muy satisfactoria.
Ejemplo 2
Se lleva a cabo la preparación de arabitol en condiciones de fermentación idénticas a las del ejemplo 1, pero utilizando el microorganismo Yamadazyma ohmen, cepa ATCC 20209 modificado por la técnica de mutagénesis aleatoria clásica mediante rayos ultravioleta (utilizando como mínimo un ciclo de mutagénesis con rayos ultravioleta con enriquecimiento con la niastina), habiéndose seleccionado la cepa según su aptitud para producir arabitol con el rendimiento de 8 a 10 puntos superior a la cepa matriz.
Después de la obtención de un precultivo de dicha cepa modificada, y transferencia a la primera zona de fermentación tal como se ha indicado en el ejemplo 1, la añadidura de glucosa está asegurada como presenta la siguiente tabla III.
TABLA III
3
Después de 40 horas de fermentación, se alcanza el volumen útil del fermentador de la primera zona de fermentación, y la concentración en glucosa residual es de 28 gr/l.
A continuación se transfieren 4 l de medio de fermentación de este primer fermentador al fermentador de la segunda zona de fermentación, y se añaden entonces 800 gr de glucosa en un volumen de 2 l en el primer fermentador.
La temperatura de la segunda zona de fermentación se fija en 38ºC, y el pH se regula en 3,5 con ayuda de KOH 5N.
Los fermentadores evolucionan a continuación separadamente hasta 46 horas, hora a partir de cuyo momento se efectúa la primera extracción de arabitol en el segundo fermentador.
A partir de 46 horas, el fermentador de la primera zona de fermentación es alimentado en glucosa a una concentración de 250 gr/l con un caudal del orden de 0,4 l/h, y en licor de "corn steep" a 50 gr/l con un caudal del orden de 10 ml/h.
La tabla IV que se adjunta a continuación presenta las mediciones efectuadas después de transferencia del medio de fermentación de la primera zona de fermentación a la segunda.
TABLA IV
4
Globalmente, se recuperan 12 kg de arabitol para 19 kg de glucosa utilizada, es decir, un rendimiento de 63% y una productividad de 4 gr/l/h.
En fermentación discontinua realizada en las mismas condiciones de medio de producción, con la misma aportación de glucosa, el rendimiento es de 55% y la productividad es solamente de 2,5 gr/l/h.
El procedimiento según la invención permite, por lo tanto, asegurar rendimientos mejores y mejor productividad.
Además, la reducida proporción de glucosa residual permite siempre recuperar un arabitol que presenta una pureza completamente satisfactoria.
Ejemplo 3
Las dos zonas de fermentación se utilizan como en el ejemplo 1.
Se realiza inicialmente un precultivo de microorganismo Candida polymorpha, cepa ATCC 20213 natural, en un fermentador CHEMAP® de 20 l, en las mismas condiciones que para la cepa Y. ohmeri del ejemplo 1.
El fermentador de la primera zona de fermentación es inseminado con 1 l de este precultivo.
Se completa hasta 6 l con un medio que contiene glucosa con una concentración de 50 gr/l, de extracto de levadura a una concentración de 3 gr/l, KH_{2}PO_{4} a una concentración de 2 gr/l y MgSO_{4} a una concentración de 1 gr/l.
La temperatura se fija a 30ºC. El pH se regula a 4,5 hasta 30 horas con ayuda de NH_{4}OH 20%, y a continuación con ayuda de KOH 5 N.
La añadidura de glucosa es controlada tal como se ha indicado en la siguiente tabla III.
La biomasa se calcula por la medición de la absorbancia (densidad óptica) del medio a 620 nm.
Para Candida polymorpha, una unidad de absorbancia a 600 nm equivale a una biomasa del orden de 0,22 gr/l.
TABLA V
5
A las 40 horas de fermentación, se alcanza el volumen útil del fermentador de la primera zona, y la concentración de glucosa residual es de 30 gr/l.
4 l de medio de fermentación de este primer fermentador son transferidos a continuación al fermentador de la segunda zona de fermentación, y se añaden 800 gr de glucosa en un volumen de 2 l en el primer fermentador.
La temperatura de la segunda zona de fermentación se fija en 37ºC, y el pH se regula a 4,5 por KOH 5 N.
Los fermentadores evolucionan a continuación separadamente hasta 46 h, a partir de la cual se efectúa la primera extracción de arabitol en el segundo fermentador.
A partir de 46 horas, el fermentador de la primera zona de fermentación es alimentado en glucosa a 250 gr/l con un caudal del orden de 0,4 l/h, y el licor de "corn steep" a 50 gr/l con un caudal del orden de 10 ml/h.
La siguiente tabla IV presenta las mediciones efectuadas después de transferencia del medio de fermentación de la primera zona de fermentación a la segunda.
TABLA VI
6
Globalmente, se recuperaron 4,1 kg de arabitol por 17,4 kg de glucosa utilizados, es decir, un rendimiento de 23,6% y una productividad de 1 gr/l/h.
En fermentación discontinua realizada en las mismas condiciones de medio de producción, con la misma aportación de glucosa, el rendimiento es de 16,5% y la productividad es solamente de 0,6 gr/l/h.
El procedimiento según la invención permite de esta manera, por una cepa considerada, asegurar mejores rendimientos y productividad que los procesos clásicamente utilizados.
Por otra parte, la reducida producción de glucosa residual permite recuperar un arabitol que presenta de esta manera una pureza muy satisfactoria.

Claims (8)

1. Procedimiento de producción de arabitol por fermentación continua como mínimo de un azúcar por microorganismos productores de arabitol, caracterizado por el hecho de que se procede a las siguientes fases:
a) conducción de la producción de arabitol en una primera zona de fermentación, que comprende como mínimo un fermentador, de manera que una parte del azúcar introducido en el medio de fermentación se consume por dichos microorganismos,
b) transferencia de una parte del medio de fermentación obtenido de este modo en una segunda zona de fermentación, comprendiendo por lo menos un fermentador, manteniendo simultáneamente el volumen constante en la primera zona de fermentación por añadidura de azúcar,
c) continuación de la producción de arabitol en dicha segunda zona de fermentación de forma que se consume el azúcar residual del medio de fermentación,
d) separación de forma continua del medio de fermentación de dicha segunda zona de fermentación obtenido de esta manera en una fracción concentrada de microorganismos y otra fracción soluble enriquecida en arabitol,
e) recogida del arabitol obtenido.
2. Procedimiento, según la reivindicación 1, caracterizado porque se recicla a la entrada de la primera zona de fermentación dicha fracción concentrada en microorganismos.
3. Procedimiento, según una u otra de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque la parte de azúcar consumido por los microorganismos productores de arabitol en la primera zona de fermentación es como mínimo de 50% en peso, preferentemente un mínimo de 80% en peso, y más preferentemente todavía un mínimo de 90% en peso del azúcar introducido en el medio de fermentación.
4. Procedimiento, según una u otra de las reivindicaciones 1 y 3, caracterizado porque el contenido de azúcar residual en la segunda zona de fermentación es como máximo de 2% en peso, preferentemente como máximo 1% en peso.
5. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque los fermentadores de la segunda zona de fermentación presentan un volumen inferior a los de los fermentadores de la primera zona.
6. Procedimiento, según la reivindicación 5, caracterizado por el hecho de que la primera y segunda zonas de fermentación comprenden cada una de ellas un solo fermentador.
7. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque los microorganismos productores de arabitol se escogen dentro del grupo constituido por levaduras osmotolerantes naturales o modificadas del género Yamadazyma, Debaromyces, Hansenula, Candida, Zygosaccharomyces y Saccharomyces.
8. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el azúcar se escoge entre las fuentes de carbono directamente asimilables por los microorganismos productores de arabitol, y es preferentemente glucosa.
ES00401239T 1999-05-11 2000-05-05 Procedimiento de produccion de arabitol por fermentacion continua. Expired - Lifetime ES2222160T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9905995A FR2793498B1 (fr) 1999-05-11 1999-05-11 Procede de production d'arabitol par fermentation continue
FR9905995 1999-05-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2222160T3 true ES2222160T3 (es) 2005-02-01

Family

ID=9545461

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00401239T Expired - Lifetime ES2222160T3 (es) 1999-05-11 2000-05-05 Procedimiento de produccion de arabitol por fermentacion continua.

Country Status (7)

Country Link
US (1) US6268190B1 (es)
EP (1) EP1052289B1 (es)
AT (1) ATE271133T1 (es)
DE (1) DE60012079T2 (es)
DK (1) DK1052289T3 (es)
ES (1) ES2222160T3 (es)
FR (1) FR2793498B1 (es)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2596111A4 (en) * 2010-07-23 2015-09-23 Univ Akron PREPARATION OF ARABITOL
CN113444750B (zh) * 2021-08-19 2022-07-26 河北工程大学 一种恒流弱电场胁迫下海水非灭菌高渗发酵甘油生产d-阿拉伯糖醇的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2986495A (en) * 1959-02-20 1961-05-30 Noda Ind And Scient Res Lab Process for the simultaneous production of d-arabitol, erythritol and glycerol
JPH0734749B2 (ja) * 1988-02-03 1995-04-19 日本碍子株式会社 エリスリトールの製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE60012079T2 (de) 2005-09-01
DK1052289T3 (da) 2004-11-22
FR2793498A1 (fr) 2000-11-17
US6268190B1 (en) 2001-07-31
ATE271133T1 (de) 2004-07-15
EP1052289B1 (fr) 2004-07-14
EP1052289A1 (fr) 2000-11-15
DE60012079D1 (de) 2004-08-19
FR2793498B1 (fr) 2001-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102459138A (zh) 分离发酵液成分的方法
CN101952451A (zh) 乙醇回收方法和用于将合成气组分生物转化为液体产物的设备
HU203786B (en) Process and apparatus for continuous fermenting carbohydrate-containing media with bacteria
CN102482689A (zh) 从稀水溶液回收高级醇
CN111019986B (zh) 一种制备腺苷的工艺
JP4695752B2 (ja) エリスリトール含有培地からのエリスリトールの産生及び回収方法
CN101921810B (zh) 一种从木糖母液制备木糖醇与l-阿拉伯糖混合晶体的方法
HU201971B (en) Process for producing ethanol by fermenting molasses
ES2222160T3 (es) Procedimiento de produccion de arabitol por fermentacion continua.
US5093244A (en) Production of a deoxyribonucleoside
US5626847A (en) Method of purifying cyclitols
JP2007512851A (ja) 菌体再使用による高収率のキシリトールの製造方法
FI85501C (fi) Foerfarande foer framstaellning av polyoler genom pao industriell skala baserad fermentation av socker.
US4400466A (en) Process for the preparation of viscous water by action of micro-organisms
JPS5937076B2 (ja) 醗酵法ビタミンb↓1↓2の製法
JP2000032993A (ja) 繰り返しフェッドバッチ発酵によるエリトリト―ルの生産法
JPH0339678B2 (es)
CN1955306B (zh) 酵母菌生物合成、生产旋光纯腺苷甲硫氨酸的方法及其培养液
WO2024135187A1 (ja) 適合溶質の製造方法及び製造装置
US5120645A (en) Production of 2-deoxyuridine
JPS60241895A (ja) リボフラビンの製造法
JPH07147991A (ja) β−ヒドロキシ酸の製造方法
RU2053291C1 (ru) Способ получения биомассы
JPH09238698A (ja) ビタミンb▲12▼の製造方法
Tomas Kinetic study of riboflavin production by fermentation