ES2210832T3 - Secuencias de aminoacidos para uso terapeutico y profilactico contra enfermedades debidas a las toxinas de clostridium difficile. - Google Patents
Secuencias de aminoacidos para uso terapeutico y profilactico contra enfermedades debidas a las toxinas de clostridium difficile.Info
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Abstract
La invención se refiere a anticuerpos monoclonales capaces de reconocer y neutralizar epítopos del dominio de ligando, el dominio de translocación o el dominio catalítico de la enterotoxina (toxina A) y la citotoxina (toxina B) de Clostridium difficile, así como a su producción y aplicaciones terapéuticas y profilácticas en enfermedades debidas a las citadas toxinas.
Description
Secuencias de aminoácidos para uso terapéutico y
profiláctico contra enfermedades debidas a las toxinas de
Clostridium difficile.
El objeto de la invención son las secuencias de
aminoácidos (péptidos) que neutralizan el efecto de la enterotoxina
de Clostridium difficile. Además, hay una descripción de las
regiones variables e hipervariables de estos anticuerpos.
Se sabe que la introducción de antibióticos
macrólidos tales como clindamicina conduce a la enfermedad
intestinal severa, la cual se manifiesta como diarrea, que se
desarrolla más hasta la ocasionalmente fatal colitis
pseudomenbranosa (PMC). Esta conexión proporcionó a la enfermedad el
nombre "diarrea asociada a clindamicina". Ahora conocemos que
casi todos los antibióticos y agentes citostáticos usados en
medicina pueden provocar los síntomas clínicos de la PMC.
La PMC se caracteriza clínicamente por diarrea
severa que puede conducir a la muerte debido a cuantiosas pérdidas
de electrolitos y líquido. Tiene lugar, dependiendo de la severidad
de los síntomas, dolor abdominal, diarrea sangrante, fiebre, y
leucocitosis. El tratamiento ha consistido hasta ahora en cesar la
administración del antibiótico que causa la enfermedad, mediante la
administración de vancomicina, de la misma manera que compensando
las pérdidas de líquido y electrolito.
El agente etiológico de la colitis
pseudomembranosa fue durante largo tiempo desconocido. Sólo en 1977
se pudo demostrar la hasta entonces desconocida actividad tóxica en
un espécimen de deposición, que indujo un efecto citotóxico en las
células CHO (células de carcinoma de ovario de hámster chino). A
través de investigaciones adicionales se pudo probar finalmente que
la colitis pseudomembranosa era causada por Clostridium
difficile y sus toxinas.
Clostridium difficile es una bacteria
anaerobia obligada gram-positiva con forma de
varilla que construye esporas ovales subterminales. Se caracteriza
bioquímicamente por ser capaz de fermentar monosacáridos tales como
glucosa, N-acetilglucosamina y ácido
N-acetilneuramínico, pero no manosa, xilosa o
arabinosa. Clostridium difficile también es incapaz de
separar estos monosacáridos de las cadenas laterales de la mucina
gastrointestinal, ya que enzimas tales como neuraminidasa,
beta-galactosidasa o sialidasa faltan. Debido a
estos defectos bioquímicos, Clostridium difficile no puede
prosperar en el estómago de individuos sanos. Si se desequilibra la
flora intestinal por la administración de antibióticos o agentes
citostáticos, Clostridium difficile deja atrás la flora
intestinal, lo que conduce a la PMC.
Clostridium difficile produce dos factores
principales de patogenicidad, la enterotoxina (toxina A) y la
citotoxina (toxina B). Su producción, purificación y propiedades,
conjuntamente con su uso para producir anticuerpos monoclonales se
describen en detalle en las patentes europeas153, 519 y 209.273, en
las patentes de los Estados Unidos 4.879.218 y 5.098.826 igual que
la solicitud de patente internacional WO 91/18.293.
Los anticuerpos juegan claramente una parte
importante en proteger contra las consecuencias de la infección por
Clostridium difficile. Las titulaciones de anticuerpos contra
la toxina A y la toxina B se pueden establecer en pacientes que
sufren de PMC. Después del tratamiento con antibióticos y la
infección con las cepas generadoras de toxinas de Clostridium
difficile, los hámsters desarrollan los síntomas de la PMC y
mueren de ellos. La inmunización anterior de los animales con las
enzimas mencionadas anteriormente en este documento protege después
contra la enfermedad. Las toxinas se pueden neutralizar mediante
anticuerpos, los cuales se dirigen contra los dominios ligandos
C-terminales repetitivos, el dominio central de
translocación o el dominio N-terminal catalítico
(véase la referencia [1] de la bibliografía relativa a la estructura
de los dominios). Los anticuerpos dirigidos dirigen contra los
dominios ligandos C-terminales repetitivos impiden
la unión de las toxinas a sus receptores celulares, los anticuerpos
dirigidos contra el dominio N-terminal catalítico
bloquean la reacción de glucoxilación transmitida por las toxinas,
mientras que los anticuerpos dirigidos contra el dominio central de
translocación del dominio catalítico N-terminal
reprimen la translocación de las toxinas al interior de la
célula.
Los anticuerpos que neutralizan la toxina A y/o
la toxina B ofrecen así una posible terapia y/o profilaxis para las
enfermedades causadas por Clostridium difficile en las
cuales no eliminan a la bacteria pero bloquean la acción de las
toxinas producidas. De esta manera el desarrollo de los síntomas de
la enfermedad puede impedirse mediante la acción sobre las toxinas
responsables.
Tomando como ejemplo la toxina A, la línea
celular DSM ACC 2322 produce un anticuerpo TTC8, el cual no sólo se
une a la toxina A, sino que es también capaz de neutralizar su
acción biológica. El sitio de unión del TTC8 en la toxina A se
identificó dentro del dominio ligando repetitivo. Mediante la unión
de los anticuerpos a las toxinas, se impide su interacción con los
receptores celulares. El sitio de unión de mAb TTC8 está entre los
aminoácidos 2480-2539 de la toxina A con la
(probable) secuencia de antígenos TINGKKYYF. Un mAb
PCG-4 conocido a partir de la patente de los Estados
Unidos 487918 se une a un fragmento de proteína de la toxina A, el
cual está definido por los aminoácidos 2098 a 2141.
Tanto el anticuerpo monoclonal
PCG-4 como el anticuerpo monoclonal TCC8 son
anticuerpos de ratón, los cuales no se usan en terapia sobre los
humanos pero podrían ser adecuados como una ayuda para el
diagnóstico.
\newpage
Los anticuerpos monoclonales generados en el
laboratorio del inventor y sus reactividades se indican a
continuación:
| Dirigido contra | Toxina^{a)} | Toxina^{a)} |
| Dominio catalítico^{b)} | 1212 | 2612, 2688, 3110, 1502, 1115 |
| Dominio de translocación^{b)} | 2825, 2836, 5288 | 2703, 2740, 2747, 2754, 5288, 2784, 2788 |
| Dominio ligando^{b)} | 2620, TTC8 | 2912, 2914, 2916, 2926, 2562, 2CV |
Notas
- a)
- Los anticuerpos reconocen proteínas recombinantes de las regiones enumeradas, en la prueba de bandas de Western.
- b)
- La posición de los aminoácidos de los dominios en las toxinas (A) y (B) son: dominio catalítico: 1-879 (1-877); dominio de translocación: 880-1848 (878-1850); dominio ligando: 1849-2681 (1851-2360).
Todos los anticuerpos monoclonales específicos de
enzima generados y descritos hasta ahora se han obtenido de ratones.
El uso terapéutico o profiláctico de esos anticuerpos en especies
diferentes de ratones (humanos u otros animales) no es posible dado
que los anticuerpos se reconocen como que son de otras especies, e
inducen una respuesta inmune por la cual se inactivan. Su adaptación
a otras especies, particularmente a humanos, no ha sido posible
hasta ahora dado que sus regiones variables e hipervariables no se
secuenciaron, es decir, que no fueron definidas.
El objetivo de la invención fue proporcionar
péptidos los cuales poseen propiedades neutralizantes de toxinas
pero no contienen más una parte fuertemente inmunogénica, de tal
forma que los péptidos son adecuados para su uso en medicina humana
y veterinaria. La neutralización del efecto de las toxinas se basa
en la unión de los anticuerpos a través del anclaje de las regiones
variables del anticuerpo a la toxina respectiva. Esta unión se
determina principalmente a través de las regiones hipervariables
(CDR: abreviatura en inglés de regiones determinantes
complementarias). Él fue por tanto el problema para identificar las
regiones (variables e hipervariables (CDR)) responsables de unir y
neutralizar a las toxinas y de adaptarlas de tal forma que no
induzcan más una reacción inmune. Tales péptidos se pueden usar
tanto para la terapia de las enfermedades provocadas por
Clostridium difficile ya existentes como para la protección
contra tales enfermedades en medicina humana y veterinaria.
Los resultados científicos existentes hasta ahora
se pueden resumir en que, por un lado, la toxina A de Clostridium
difficile es capaz de inducir todos los síntomas de la colitis
pseudomembranosa (PMC), y que, por otro lado, el anticuerpo
monoclonal TTC8 dirigido contra esta toxina puede neutralizar el
efecto de esta toxina durante los experimentos in vivo (en
ratones). El mAb TTC8 es un anticuerpo de la clase IgG2b. El
reconocimiento específico entre el mAb TTC8 y la toxina A de
Clostridium difficile está mediado por las regiones
hipervariables de las cadenas pesada y ligera. Esto significa que
las secciones del anticuerpo definidas exactamente (en otras
palabras, los péptidos) son responsables del reconocimiento de
antígeno. El reconocimiento de las regiones hipervariables hace
posible transferir estos péptidos (estructuras) a las secuencias de
anticuerpos de otras especies las cuales son después adecuadas para
la terapia y profilaxis de las enfermedades provocadas por
Clostridium difficile, por ejemplo en la forma de anticuerpos
monoclonales humanizados en humanos, sin tener los indeseables
efectos colaterales de los anticuerpos de especies extrañas
obtenidos usualmente de ratones.
Por tanto, el problema fue determinar las
secuencias de nucleótidos y las secuencias de aminoácidos deducidas
hipervariables neutralizadoras de toxinas de los anticuerpos
monoclonales, de tal modo que se pueden usar en forma de secciones
peptídicas o anticuerpos humanizados (incorporados dentro del gen de
los anticuerpos humanos) para terapia y profilaxis en humanos. Una
tosca determinación de secuencia de este tipo fue llevada a cabo por
ejemplo en la célula DSM 2322, la cual produce el anticuerpo
monoclonal TTC8. Este anticuerpo neutraliza la acción biológica de
la enterotoxina A mediante el bloqueo de sus dominios ligando.
Este problema se resolvió por el hecho de que las
secuencias peptídicas variables e hipervariables las cuales ejercen
el efecto neutralizante de mAb TTC8, se determinaron para la línea
celular DSM ACC 2322 con secuencias SEQ ID Nº 1-12
y/o SEQ ID Nº 13-16. El conocimiento de las
regiones variables de los anticuerpos neutralizantes permite que se
produzcan péptidos los cuales bloquean la acción biológica de
Clostridium difficile mediante unión a su enterotoxina y/o
citotoxina. Estas secuencias peptídicas, tales como SEQ ID Nº 14 y
SEQ ID Nº 16 del protocolo de secuencias, pueden usarse como tales o
pueden incorporarse dentro de la inmunoglobulina para una terapia de
las enfermedades causadas por Clostridium difficile. Para su
uso terapéutico en humanos, se usa la inmunoglobulina humana; para
su uso en medicina veterinaria, la incorporación de las secuencias
debe de llevarse a cabo dentro del gen de inmunoglobulina de las
especies que se trate.
Se pueden producir derivados de tales péptidos,
los cuales aún preservan su actividad biológica, mediante deleción,
inserción, adición o reemplazamiento de aminoácidos, es decir, por
variación alélica. Estos derivados, de la misma manera que los
péptidos originales, pueden inhibir la actividad biológica de
Clostridium difficile a través de la unión a su enterotoxina
y/o citotoxina, y pueden usarse así para la terapia y profilaxis de
las enfermedades causadas por Clostridium difficile.
Las siguientes regiones llamadas hipervariables
(CDR = regiones de complementariedad determinada) se determinaron en
mAb TTC8 aislados de la línea celular de hibridoma DSM ACC 2322,
depositada en la colección alemana de microorganismos y cultivos
celulares (DSMZ). Muestran las siguientes secuencias de
aminoácidos:
CDR de la cadena pesada:
CDR-1:
-Asn-Tyr-Trp-Met-Asn-
- (SEQ ID Nº 2)
CDR-2:
-Arg-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asp-Gly-Asp-Ala-His-Tyr-Asn-Gly-Lys-Phe-Lys-Gly-
- (SEQ ID Nº 4)
CDR-3:
-Gly-Gly-Asn-Tyr-Asp-Asp-Arg-Val-Phe-Asp-Tyr-
- (SEQ ID Nº 6)
CDR de la cadena ligera:
CDR-4:
-Lys-Ala-Ser-Gln-Asn-Val-Gly-Thr-Asn-Thr-Asn-Val-Ala-
- (SEQ ID Nº 8)
CDR-5:
-Ser-Pro-Ser-Tyr-Arg-Tyr-Ser-
- (SEQ ID Nº 10)
CDR-6:
-Gln-Gln-Tyr-Asn-Ser-Tyr-Pro-Leu-Thr-
- (SEQ ID Nº 12)
El siguiente procedimiento se adoptó para la
determinación de estas secuencias: primero, el RNA total de las
células de hibridoma, el cual produce el mAbC8, se preparó de
acuerdo con un procedimiento conocido. En una segunda etapa el mRNA
se separó después del RNA total. Esto se llevó a cabo con la ayuda
de perlas magnéticas de poliestireno a las cuales se unieron
covalentemente las cadenas del oligo(dT)_{25}.
A partir del mRNA purificado, el cDNA se
sintetizó después y con la ayuda de la reacción en cadena de la
polimerasa (abreviadamente en inglés PCR), se amplificaron los genes
VH y VL del mAB TTC8, los cuales codifican para la cadena ligera
(VL) o pesada (VH) del anticuerpo TTC8. Aquí fue de importancia
decisiva que se seleccionaran los cebadores que mostraron un
adecuado sitio de restricción de tal forma que facilitara el
subsiguiente clonaje.
Los genes VH y VL del mAB TTC8 así producidos
fueron subsiguientemente clonados y después secuenciados en el
vector pUC 19. De este modo se detectaron las secuencias de
nucleótidos (SEQ ID Nº^{s} 13 y 15) y las secuencias de
aminoácidos derivadas correspondientes a SEQ ID Nº 14 y SEQ ID Nº
16.
Las regiones hipervariables pueden identificarse
por medio de una comparación con el gen de la línea germinal V 102.
A partir del gen de la cadena pesada (SEQ ID Nº 13) puede verse que
el CDR-1 de la cadena pesada contiene 5 aminoácidos
y comienza en la posición 30 de la secuencia. El
CDR-2 de la cadena pesada comienza en la posición 49
y contiene 17 aminoácidos. La región hipervariable
CD-3 comienza en la posición 98 y contiene 11
aminoácidos.
En total el gen VH del mAb TTC8 muestra 36
mutaciones puntuales en comparación con la línea germinal V 102.
Tres de las mutaciones se encuentran en la región de unión del
cebador de PCR y pueden, por lo tanto, causarse mediante la
secuencia del cebador. Casi todas las mutaciones en las regiones
hipervariables conducen a un cambio en la secuencia de aminoácidos,
mientras que casi la mitad de todas las mutaciones en la región
estructural son inactivas.
En el gen para la cadena ligera (SEQ ID Nº 15),
las regiones hipervariables se pudieron establecer como sigue: la
CDR-4 comienza en la posición 22 y contiene 11
aminoácidos. La CDR-5 contiene 7 aminoácidos y
comienza en la posición 48. La CDR-6 empieza en la
posición 87 y contiene 9 aminoácidos. El gen VL de mAb TTC8
comparado con el mAb A23 muestra sólo 9 mutaciones. De estas, 4 se
encuentran en la región de unión del cebador de PCR. De las cinco
diferencias restantes en la secuencia de nucleótidos, dos mutaciones
están inactivas a nivel de proteína. De las mutaciones que conducen
a un cambio en la secuencia de aminoácidos, una se encuentra en la
CDR-4, las otras dos están ambas en las regiones
estructurales 2 y 3.
El uso terapéutico de un anticuerpo monoclonal
derivado de ratones causa una reacción inmune en humanos. Con el fin
de superar este problema, un anticuerpo se puede adaptar a la
especie a tratar (aquí humanos), es decir, se puede humanizar. Hay
varios procedimientos para esto, los cuales equivalen a reemplazar
la parte inmunogénica del anticuerpo monoclonal murino con una parte
correspondiente de un anticuerpo humano. Se conocen a partir de, por
ejemplo, las solicitudes de patentes europeas 184.187, 171.496 y
173.494.
Los anticuerpos monoclonales humanizados
producidos por un procedimiento de este tipo son considerablemente
más adecuados para uso terapéutico en humanos que los anticuerpos
producidos por ratones.
Estos procedimientos para humanizar los
anticuerpos pueden usarse también para el mAb TTC8 y otros
anticuerpos monoclonales neutralizadores de la toxina A. Producen un
anticuerpo monoclonal humanizado el cual forma una quimera de las
regiones hipervariables (por ejemplo para TTC8: SEQ ID Nº
1-12) del mAb TTC8 neutralizante insertado en la
región estructural de una inmunoglobulina humana. La última puede
ser de subtipo IgG (preferida para la aplicación parenteral) o de
subtipo IgA (preferida para aplicación peroral). Como describimos
para los anticuerpos TTC8 (de la línea celular DSM ACC 2322), las
regiones hipervariables de otros anticuerpos monoclonales dirigidas
contra Clostridium difficile pueden clonarse de una forma
correspondiente, secuenciarse y usarse para la producción de
anticuerpos humanizados.
Un objeto adicional de la invención es humanizar
los anticuerpos monoclonales en los cuales la secuencia de
aminoácidos se modifica a través de variaciones alélicas dentro de
las regiones variables o constantes de las cadenas ligeras o pesadas
de la inmunoglobulina humana, tanto como se mantenga la capacidad de
unión a la toxina A y/o toxina B de Clostridium
difficile.
Todos los "bloques de construcción"
biológicos necesarios para la producción de anticuerpos monoclonales
de acuerdo con la invención, tales como líneas celulares, plásmidos,
promotores, marcadores de resistencia, orígenes de replicación, y
otros fragmentos de vectores, en la medida en que no se depositan
como se describe en el presente documento, son obtenibles en el
mercado o están generalmente disponibles. Si no se indica lo
contrario, sólo se usan como ejemplos y no son cruciales para
llevara cabo la invención, pero pueden reemplazarse mediante otros
"bloques de construcción" biológicos disponibles. Las células
bacterianas se usan preferiblemente como hospedadores para la
amplificación de las secuencias de DNA mencionadas de acuerdo con la
invención. Ejemplos de esto son E. coli o especies del género
Bacillus.
La producción de anticuerpos humanizados puede
llevarse a cabo en células eucariotas tales como células de
levaduras, hongos o, por ejemplo, CHO (células de ovario de hámster
chino). La producción en plantas puede llevarse a cabo en
monocotiledóneas o dicotiledóneas.
Como un ejemplo, la producción de anticuerpos en
las plantas se describe más adelante en este documento. La
producción en otros organismos se lleva a cabo de forma análoga.
La producción de anticuerpos específicos en
plantas ya se conoce de [2] y de la solicitud de patente
internacional WO 91/06320. Para la producción de los anticuerpos
monoclonales en las plantas transgénicas, los genes para el
anticuerpo monoclonal completo o para sus derivados recombinantes se
clona, o el gen para una única cadena de anticuerpo bajo el control
de uno o dos promotores vegetales activos se clona en un vector de
transformación de plantas.
El vector de transformación final contiene todas
las secuencias de DNA a transferirse en la planta. Éstas se
transfieren del vector en las células de la planta.
Alternativamente, los genes para las cadenas pesada y ligera pueden
incorporarse separadamente también en dos vectores de transformación
de plantas, de tal forma que sólo más tarde se unen juntos en la
construcción final de anticuerpo. La transformación de las plantas
se puede llevar a cabo con cualquier procedimiento adecuado, por
ejemplo con la ayuda de Agrobacterium tumefasciens o
directamente a través de transferencia génica directa o con la ayuda
de un cañón de partículas.
La producción de anticuerpos puede dirigirse
dentro de compartimentos predeterminados de la célula. Mediante la
eliminación de la secuencia codificante para el péptido señal, los
anticuerpos se expresan citoplásmicamente. Para la alta expresión de
los anticuerpos, una secuencia de DNA se conecta al extremo 5' del
gen o se retiene el que se da en la naturaleza, el cual codifica
para un péptido señal para transporte dentro del retículo
endoplásmico. Con el fin de obtener una localización específica en
compartimentos celulares definidos, es posible fusionar, sobre o
dentro del gen, las secuencias de DNA que codifican para las
secuencias peptídicas responsables de ello. A través de la
integración de una secuencia KDEL es posible, por ejemplo, conseguir
la retención en el retículo endoplásmico.
La incorporación del gen del anticuerpo en el gen
transgénico se analiza y confirma a través de la adecuada
restricción de la digestión del DNA vegetal genómico aislado y la
subsiguiente hibridación por Southern. La transcripción del gen se
puede demostrar usando el procedimiento de la prueba de bandas de
Northern. El anticuerpo biosintetizado se detecta en extractos
vegetales usando, por ejemplo un anticuerpo secundario específico
policlonal o monoclonal o un anticuerpo monoclonal o policlonal
dirigido contra la región constante o contra una secuencia señal
introducida especialmente para ese propósito.
Tanto las monocotiledóneas, tales como cebada y
trigo, como las dicotiledóneas, tales como patatas, colza,
zanahorias o guisantes, son adecuadas para plantas de producción. La
expresión del anticuerpo puede ocurrir en varios órganos de la
planta, por ejemplo en hojas, semillas, tubérculos u otro
tejido.
La purificación del anticuerpo expresado en la
planta se lleva a cabo usando, por ejemplo, procedimientos
cromatográficos que normalmente también se usan para purificar
anticuerpos a partir de líneas celulares de hibridoma. Además, los
anticuerpos recombinantes que contienen una secuencia señal se
pueden purificar también por medio de procedimientos cromatográficos
de afinidad establecidos especialmente tales como cromatografía de
quelación de metales.
Los anticuerpos monoclonales humanizados se
pueden administrar a los pacientes humanos para la terapia y
profilaxis de las enfermedades causadas por Clostridium
difficile siguiendo estos procedimientos. En general, los
anticuerpos o fragmentos de anticuerpos se administran
parenteralmente, o, preferiblemente peroralmente. La directa toma
peroral de las plantas que contienen los anticuerpos como una comida
cruda puede ser considerada una "preparación galénica"
especial. La dosis apropiada de los anticuerpos se ajusta a al
paciente pertinente y depende, por ejemplo del peso corporal, la
edad, y el estado morboso del paciente. La dosis está establecida
mediante un doctor en medicina experto y usualmente está entre 0,1
mg/kg y 70 mg/kg, administrada una vez o varias veces por día
durante un periodo de varios días.
Para la producción de RNA mediante gradientes de
CsCl, las células inicialmente se descompone mediante tampón
guanidina tiocianato y después se alteran totalmente mecánicamente,
con la ayuda de un Ultrathorax. Los restos celulares se centrifugan
y la disolución se añade en la parte superior de un amortiguados de
CsCl (5,7 M) ya preparado. Durante la siguiente centrifugación el
RNA forma un sedimento en el fondo del tubo prueba. Esta capa del
fondo se separa usando un escalpelo caliente y el sedimento se
disuelve por adición de H_{2}O. El RNA se purifica más después
mediante precipitación a partir de la disolución. Se disuelve
finalmente en 100 \mul de agua. La concentración de RNA así
preparado usualmente se encuentra en el intervalo
1,5-3 \mug/\mul.
Para la purificación del mRNA de las otras
especies de RNA, se hibridó a las perlas de
oligo(dT)_{25} de acuerdo con el procedimiento
descrito por Dynal. La capacidad de unión de las perlas es 2 \mug
de RNA por mg de perlas. La proporción de mRNA frente al RNA total
es aproximadamente 1-5%, de forma que 1 mg de perlas
se añadió a 80 \mug de mRNA. La purificación se desarrolló de
acuerdo con el procedimiento de Dynal Company con la siguiente
alteración. El RNA unido se lavó dos veces con un tampón que
contiene 10 mM de Tris/HCl (pH 7,5), 0,15 mM de LiCl, 1 mM de EDTA,
1% SDS y entonces se lavó dos veces con un tampón alterado que tiene
una concentración de sal más baja [5 mM de Tris/HCl (pH 7,5), 75 mM
de LiCl, 0,5 mM de EDTA]. Todos los pasos adicionales se ajusta a
las especificaciones de Dynal. La adición de SDS y la etapa
adicional de lavado a concentración de sal más baja (más
restrictiva) incrementa considerablemente la pureza del mRNA.
A partir de la purificación del mRNA, el cDNA se
sintetizó usando transcriptasa inversa de MMLV (abreviatura en
inglés de virus de la leucemia murina de Moloney). En el experimento
el cebador oligo(dT)_{12-18} se usó
2 veces en exceso para mantener alta la proporción de moléculas de
mRNA-oligo(dT) hibridadas. La concentración
de nucleótido trifosfatos fue más alta que 1 mM durante la reacción.
El incremento prematuro de la rotura del RNA en la disolución se
contrarrestó por la adición del inhibidos de ribonucleasa humano y
de placenta. El ssDNA así producido se usó en las reacciones de PCR
para la amplificación de las regiones variables en el mAb TTC8.
La amplificación del cDNA se llevó a cabo de
acuerdo al procedimiento conocido de la patente europea 0 338
914.
Por medio de un intervalo de publicaciones, los
cebadores particulares para la amplificación por PCR de las regiones
variables de los anticuerpos monoclonales de ratones se dedujeron.
Éstos son:
Cadena pesada: (un sitio de restricción
Sal1 introducido está subrayado)
VH5Prim:
5'-AGGTCGACCTGCAG(C/G)AGTC(A/T)GG-3'
VH3Prim:
5'-ACGGTGACAGTCGACCCTTGGCCCC-3'
Cadena ligera: (un sitio de restricción
SacI está subrayado)
VL5Prim:
5'-GACATTGAGCTCACCCAGTCTCCA-3'
VL3Prim:
5'-GTTTGAGCTCCAGCTTGGTCCC-3'
La concentración óptima de cebador para la
producción de las regiones variables fue de 0,5 \muM, los dNTP se
usaron a una concentración final de 400 \muM.
Las temperaturas de PCR se establecieron como un
segundo parámetro significativo. Para la amplificación de la región
VH la secuencia de reacción fue como sigue: desnaturalización 1 min.
a 92º; atemperamiento 1,5 minutos a 50ºC, elongación 2 minutos a 72º
durante 30 ciclos. Para la amplificación de VL la secuencia de
reacción fue como sigue: desnaturalización 1 min. a 92º;
atemperamiento 1,5 minutos a 60ºC, elongación 3 minutos a 72º
durante 30 ciclos.
Para su clonación, los productos de PCR se
cortaron con Sal1 (VH) o Sac1 (VL) y se purificaron en
geles de agarosa. La clonación dentro de pUC19 se llevó a cabo
dentro de los sitios de restricción homólogos.
Como los clones deseados, las construcciones
pVHT8 y pVHT9 se identificaron por control de digestión. Contienen
los segmentos VH o VL con orientación positiva relativa la promotor
pLac de pUC19.
El inserto de pVHT8 tiene un tamaño de 341 pares
de bases, el inserto del clon pVLT8.10 es de 312 pares de bases.
Ambos clones poseen un marco abierto de lectura el cual se extiende
sobre todo el inserto. La secuencias de los cebadores de PCR y los
sitios de corte pueden identificarse bien.
Mediante comparación de secuencias, se puede
hallar la relación de los segmentos VH con la familia multigénica
1558. El grado más alto de homología fue con la secuencia de la
línea germinal V102.
El gen para la región VL de mAb TTC8 tiene una
homología del 94% con una secuencia de un anticuerpo el cual se
atribuye al gen de la línea germinal Vk19d. Por lo tanto, la región
VL de TTC8 también está relacionada con esta familia génica.
Con el fin de prevenir una reacción del sistema
inmune humano cuando se le aplican anticuerpos de otras especies (en
lo sucesivo citados como no humanos), las regiones inmunogénicas del
mAB deben reemplazarse mediante secuencias humanas homólogas. Hay
básicamente dos posibilidades para esto:
- a)
- la creación de anticuerpos quiméricos ratón/humano, en los cuales la región variable determinante de antígeno del anticuerpo quimérico se origina a partir del anticuerpo no humano y la región constante se origina a partir de un anticuerpo humano.
- b)
- La humanización completa del mAb. De acuerdo con esta aproximación, también las regiones estructurales en la región variable del mAb se reemplazan por las secuencias humanas correspondientes y sólo las regiones de CDR se mantienen en la forma original o sus variantes alélicas.
Para llevar a cabo el trabajo en la práctica se
puede adoptar un rango de procedimientos, los cuales están bien
documentados y son bien conocidos por expertos en el campo:
para a) los anticuerpos quiméricos se producen
mediante acoplamiento de las secuencias de las regiones constantes
de un anticuerpo humano con las secuencias de la región variable del
mAb no humano, en un sistema vector adecuado. Se puede producir un
anticuerpo quimérico completo, o sólo una parte del anticuerpo
quimérico, una que se llama fragmento Fab [3]. La producción de
anticuerpos quiméricos tiene la ventaja de que el procedimiento está
relativamente libre de problemas. Los anticuerpos producidos
muestran una inmunogenicidad ligeramente incrementada debido a las
partes de ratón que permanecen en la proteína, pero estas son de
menor importancia si se sigue una administración oral.
para b) para la completa humanización del mAb no
humano, un anticuerpo humano cuya estructura corresponde
aproximadamente a aquella del anticuerpo original se identifica
primero a través de comparación de secuencias y modelado 3D.
Entonces, mediante rondas subsiguientes de amplificaciones por PCR,
se genera un gen completamente humanizado para la parte variable del
anticuerpo [4], usando cinco cebadores de oligonucleótido que se
unen a la secuencia de la región variable en el anticuerpo humano
(VL o VH) y tres oligonucleótidos que comprenden las secuencias de
las regiones CDR del anticuerpo de ratón. Una segunda aproximación
modificada es ensamblar el gen a partir de varios oligonucleótidos
sintéticos solapantes que codifican para la secuencia diana (para la
estrategia y el procedimiento cf. [41]). Alternativamente, es
posible, después de la identificación de un anticuerpo homólogo
humano, ajustar justamente los aminoácidos en las regiones de la
estructura en las cuales ambos anticuerpos difieren, mediante
mutagénesis dirigida a sitio [5]. Los anticuerpos modificados de
este modo pueden sucumbir a una alteración en su especificidad a
ajustarse mediante mutación inversa [5]. La humanización completa de
los anticuerpos mediante los procedimientos citados en último lugar
requieren esfuerzos metódicos relativamente altos, pero estos
anticuerpos no producen prácticamente ninguna respuesta inmune en
humanos [6].
[1] Eichel-Streiber, C.V.,
P. Boquet, M. Sauerborn y M. Thalestam.
1996. Citotoxinas grandes de Clostridium - una familia
de glicosiltransferasas que modifican pequeñas proteínas de unión a
GTP' (Large clostridial cytotoxins - a family of
glycosyltransferases modifying small GTP' binding proteins). Trends
in Microbiology, 14: 375-382.
[2] During, K. (1988) "Expresión
inducida y secreción de lisozima T4 y anticuerpo monoclonal rpern en
Nicotiana tabacum" ("Wundinduzierte Expression und
Sekretion von T4 Lysozym und Monoklonalen ntik rpern in Nicotiana
tabacum"). Tesis Postdoctoral, Universitdt Kbln.
[3] Skerra, A. (1994). Un vector
general, pASK 84 para clonación, producción bacteriana y
purificación de una sola etapa de fragmentos Fab de anticuerpos (A
general vector, pASK 84 for cloning, bacterial production y single
step purification of antibody Fab fragments). Gene 141:
79-84.
[4] Sato, K., M. Tsuchiya, J.
Saldanha, Y. Koishihara, Y. Ohsugi, T.
Kishimoto y M.M. Bending (1994). Humanización
de un anticuerpo de ratón anti receptor de
interleucina-6 comparando dos procedimientos para
seleccionar las regiones estructurales de humanos (Humanization of a
mouse anti-human Interleukin-6
receptor antibody comparing two methods for selecting humanframework
regions). Mol. Immun. 31: 371-381.
[5] Benhar, I., E.A., Padlan, S.H.,
Lee, B., Lee e I., Pastan (1994).
Humanización rápida del Fv del anticuerpo monoclonal B3 usando
intercambio de estructuras de la inmunotoxina recombinante
B3(Fv)-PE38 (Rapid humanization of the Fv of
monoclonal antibody B3 by using framework exchange of the
recombinant inmunotoxin B3(Fv)-PE38).
Proc. Natl. Sci. USA 91:12051-12055.
[6] Stephens, S., S., Emtage, O.,
Vetterlein, L., Chaplin, C., Bebbington, A,
Nesbitt, M., Sopwith, D., Athwal, C.,
Nowak y M., Bodmer (1995). Farmacocinéticas
comprensivas de un anticuerpo humanizado y análisis de respuestas
residuales anti-idiotípicas. Inmunología 85:
668-674, reacción para generar anticuerpos
monoclonales humanizados (Comprehensive pharmacokinetics of a
humanized antibody and analisis of residual
anti-idiotipic responses. Immunology 85:
668-674, reaction to generate humanised monoclonal
antibodies). GENE, vol. 101, Nº,1.Enero 1991,
pp.297-302.
[8] Lilerly et al. "Vacunación
contra la enterocolitis letal provocada por Clostridium
difficile con un péptido recombinante no tóxico de toxina A"
("Vaccination against letal Clostridium difficile
enterocolitis with a non-toxic recombinant peptide
of toxin A"). CURRENT MICROBIOLOGY, vol. 21, Julio
1990, pp. 29-32.
[9] Corthier, G. et al.
"Protección contra colitis pseudomembranosa experimental en
ratones gnotobióticos mediante el uso de anticuerpos monoclonales
contra la toxina A de Clostridium difficile"
("Protection against experimental pseudomembranous colitis in
gnotobiotic mice by use of monoclonal antibodies against
Clostridium difficile toxin A"). INFECTION AND
INMUNITY, vol. 59, Nº. 3, March 1991, pp.
1192-1195.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Dr. Christoph von Eichel-Streiber
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Bingerweg 15
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- POBLACIÓN: Schweppenhausen
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- REGIÓN: Rheinland-Pfalz
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 55444
\vskip0.333000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 06724/3398
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- FAX:
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN: Secuencias de aminoácidos para uso terapéutico y profilácticocontra enfermedades debidas a toxinas de Clostridium difficile
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 16
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- VERSIÓN LEGIBLE POR ORDENADOR
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- VEHÍCULO DE DATOS: Disquete
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: PC compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC DOS/MS DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, versión #1.30 (EPA)
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FECHA DE LA SOLICITUD ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: DE 19739685.2
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE SOLICITUD: 10-SEPTIEMBRE-1997
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 1
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 15 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: CDR1 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..15
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACC TAC TGG ATG AAC
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asn Tyr Trp Met Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR1 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asn Tyr Trp Met Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 51 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: CDR2 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..51
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGG ATT TAT CCT GGA GAT GGA GAT GCT CAC TAC AAT GGG AAG TTC AAG GGC
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ala His Tyr
Asn Gly Lys Phe Lys Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR2 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ala His Tyr
Asn Gly Lys Phe Lys Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 5
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: CDR3 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..33
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGG GGG AAT TAC GAC GAC AGG GTC TTT GAC TCA
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Gly Asn Tyr Asp Arg Val Phe Phe Asp
Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 6:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR3 de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Gly Asn Tyr Asp Arg Val Phe Phe Asp
Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 7
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: región hipervariable (CDR) de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..33
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAG GCC AGT CAG AAT GTG GGT ACT AAT GTA GCC
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val
Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR1 de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val
Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 9
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: CDR2 de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..21
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCG CCA TCC TAC CGG TAC AGT
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Pro Ser Tyr Arg Tyr Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 10:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR1 de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Pro Ser Tyr Arg Tyr Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 11
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: CDR3 de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..27
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.333000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAG CAA TAT AAT AGC TAT CCT CTT ACG
\hfill
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 12:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica CDR3 de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 13:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 341 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: región variable VH de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..341
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: cebador unido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..21
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- OTRA INFORMACIÓN: /etiqueta=VHSPRIM
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: cebador unido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 325..341
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /etiqueta=VH3PRIM
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 13:
2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 113 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica de la región variable de la cadena pesada
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 14:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 15:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 312 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: cadena simple
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: desconocida
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: región variable de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- FUENTE ORIGINAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CEPA: Anticuerpo monoclonal TTC8
\vskip0.333000\baselineskip
- (H)
- LÍNEA CELULAR: Hibridoma
\vskip0.666000\baselineskip
- (vii)
- FUENTE INMEDIATA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- BIBLIOTECA: DSM ACC 2322
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: cebador unido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..18
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /etiqueta=VL5Prim
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: cebador unido
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 289..312
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /etiqueta=VH3PRIM
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARATERÍSTICAS:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- POSICIÓN: 1..312
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 15:
2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID Nº: 16:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 104 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: secuencia proteica de la región variable VL de la cadena ligera
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID Nº: 16:
Claims (8)
1. Secuencia de aminoácidos, caracterizada
porque contiene completamente o parcialmente secuencias de
aminoácidos, seleccionadas a partir de SEQ ID Nº 2, SEQ ID Nº 4, SEQ
ID Nº 6, SEQ ID Nº 8, SEQ ID Nº 10 o SEQ ID Nº 12 del protocolo de
secuencia, y que une la Toxina A de Clostridium
difficile.
2. Secuencia de DNA, caracterizada porque
codifica una o más de las secuencias de aminoácidos de la
reivindicación 1.
3. Secuencia de DNA, de acuerdo con la
reivindicación 2, caracterizada porque contiene una o más
secuencias de nucleótidos seleccionadas de SEQ ID Nº 1, SEQ ID Nº 3,
SEQ ID Nº 5, SEQ ID Nº 7, SEQ ID Nº 9 o SEQ ID Nº 11 del protocolo
de secuencia.
4. Secuencia de aminoácidos, caracterizada
porque contiene o porque está constituida por una secuencia
seleccionada a partir de SEQ ID Nº 14 o SEQ ID Nº 16 del protocolo
de secuencia.
5. Secuencia de DNA, caracterizada porque
contiene o porque está constituida por una secuencia seleccionada de
SEQ ID Nº 13 o SEQ ID Nº 15 del protocolo de secuencia.
6. Secuencia de aminoácidos de acuerdo con las
reivindicaciones 1 ó 4, caracterizada porque contiene uno o
más derivados modificados de los aminoácidos que se han obtenido
mediante variación alélica, dichos derivados tienen un efecto
biológico comparable al de las secuencias de aminoácidos de la
reivindicación 1.
7. Secuencia de DNA, caracterizada porque
codifica una o más de las secuencias de aminoácidos de la
reivindicación 6.
8. Línea celular hibridoma DSM ACC 2322.
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| US20090087478A1 (en) * | 2004-12-27 | 2009-04-02 | Progenics Pharmaceuticals (Nevada), Inc. | Orally Deliverable and Anti-Toxin Antibodies and Methods for Making and Using Them |
| NZ566245A (en) * | 2005-08-11 | 2012-04-27 | Matossian Rogers Arpi | Tcr-v-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease |
| AU2012244244B2 (en) * | 2005-08-11 | 2015-08-27 | Arpi Matossian-Rogers | TCR-V-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease |
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|---|---|---|---|---|
| US4879218A (en) * | 1982-09-13 | 1989-11-07 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Antibody for C.difficile |
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| JPS61134325A (ja) | 1984-12-04 | 1986-06-21 | Teijin Ltd | ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法 |
| US4863852A (en) | 1985-07-03 | 1989-09-05 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Method of detecting, isolating and purifying clostridium difficile toxin A and its receptors |
| US5071759A (en) | 1986-05-30 | 1991-12-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Hybridoma cell lines and monoclonal antibodies to clostridum difficile toxins A and B |
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| US5231003A (en) | 1990-05-11 | 1993-07-27 | Cambridge Bioscience Corporation | Monoclonal antibodies specific for toxin b of clostridium difficile |
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| GB9109645D0 (en) * | 1991-05-03 | 1991-06-26 | Celltech Ltd | Recombinant antibodies |
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