ES2210331T3 - Uso de 4-amino-6-hidroxipirazol (3,4-d) pirimidina en la preparacion de un agente antihipertensivo. - Google Patents

Abstract

AGENTE ANTIHIPERTENSIVO QUE CONTIENE COMO INGREDIENTE ACTIVO 4-AMINO-6-HIDROXIPIRAZOLO[3,4-D]PIRIMIDINA(AHPP) O SUS DERIVADOS REPRESENTADOS POR LA FORMULA GENERAL (I). DONDE R ES ATOMO DE HIDROGENO , GRUPO ALQUIL, GRUPO ALCOXI O GRUPO ARIL. LOS AGENTES ANTIHIPERTENSIVOS DE LA PRESENTE INVENCION MUESTRAN UNA ACTIVIDAD QUE REBAJA LA PRESION SANGUINEA DE FORMA SUAVE Y SEGURA Y TIENEN UNA FORMA DE ACTUAR DIFERENTE EN RELACION CON LOS AGENTES ANTIHIPERTENSIVOS ACTUALMENTE DISPONIBLES.

Description

Uso de 4-amino-6-hidroxipirazol[3,4-d]pirimidina en la preparación de un agente antihipertensivo.

La presente invención se refiere al uso de 4-amino-6-hidroxipirazol[3, 4-d]pirimidina en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipertensión.

La hipertensión es considerada generalmente como un factor de riesgo de enfermedades cardiacas y circulatorias cuando o bien la presión sanguínea diastólica es mayor de 90 mm Hg o bien la presión sanguínea sistólica es mayor de 140 mm Hg. Suele presentarse la intervención médica con fármacos antihipertensivos cuando el hábito modificado de la vida diaria no funciona o no consigue rebajar la presión sanguínea o cuando se diagnostica una hipertensión seria. El control de la presión sanguínea mediante tratamiento con un agente terapéutico es extremadamente importante para reducir la posible complicación de la hipertensión en el corazón, en el cerebro y en el riñón. Los agentes antihipertensivos usados para esta finalidad se clasifican principalmente en los siguientes cuatro grupos basados en su diferencia de acción en sus mecanismos de disminución de la presión sanguínea: uréticos, inhibidores neuronales simpatéticos, vasodilatadores tales como antagonistas de calcio, e inhibidores de la enzima de conversión de angiotensina, conocidos como inhibidores ACE.

La aplicación de fármacos antihipertensivos con una actividad moderada y fiable es recomendada generalmente para el tratamiento de los pacientes hipertensivos en la práctica clínica y deberán adoptarse precauciones especiales con el fin de evitar un rápido descenso de la presión sanguínea que causaría enfermedades en la actividad diaria del paciente. Por tanto, existe una gran demanda hacia agentes antihipertensivos moderadamente eficaces que sean capaces de disminuir lentamente la presión sanguínea.

Por otro lado, en el caso de que la eficacia de un determinado agente antihipertensivo sea insuficiente al incrementar la dosis de administración en cierto grado, normalmente no resulta ventajoso y de este modo no recomendable el aumentar aún más la dosis de dicho agente. Sin embargo, se prefiere la combinación de dicho agente con otro tipo de fármacos antihipertensivos con un modo de acción diferente, en lugar de aumentar simplemente la dosis de un solo agente debido a que normalmente cabe esperar, con la terapia combinada, una mejor eficacia y menos efectos secundarios. De este modo, el desarrollo de un agente antihipertensivo con un nuevo mecanismo de acción proporcionará una mejor alternativa terapéutica a dicha práctica clínica.

Por Israel J. Chem., Vol. 6(5), 1968, páginas 787-796, se sabe que las pirazol[3,4-d]pirimidinas, en particular la 4-amino-6-hidroxipirazol[3, 4-d]pirimidina, son compuestos inhibidores de xantina oxidasa. Sin embargo, en este documento no se alude para nada que este compuesto particular pueda ser útil en el tratamiento de la hipertensión.

En consecuencia, la presente invención está dirigida a proporcionar un agente antihipertensivo con un modo de acción diferente respecto a los agentes antihipertensivos actualmente disponibles, concretamente mediante el uso de un inhibidor de xantina oxidasa. Los resultados obtenidos demuestran una actividad suave y fiable en la disminución de la presión sanguínea.

Se ha informado que un factor de relajación derivado del endotelio (EDRF), una sustancia endógena que disminuye la presión sanguínea, dilata la pared vascular al activar la guanilato ciclasa presente en las células del músculo liso del vaso sanguíneo (Pharma. Rev., 43, 109-142, 1991). También se ha informado que el factor de relajación derivado del endotelio es identificado ahora como óxido nítrico (NO) y, de este modo, el NO es inactivado de un modo extremadamente rápido mediante la reacción con radicales superóxido generados in situ (Nature, 320, 454-456, 1986; PNAS, 93, 2248-2253, 1996; J. Biol. Chem., 266, 4244-4250, 1991).

Entre una clase de compuestos que son análogos a las bases purínicas, al igual que los derivados de pirazolpirimidina, el alopurinol es actualmente el agente elegido y normalmente utilizado para el tratamiento de gota e hiperuricemia. Se ha indicado que otro derivado de pirazolpirimidina, 4-amino-6-hidroxipirazol[3,4-d]pirimidina (AHPP), es un potente inhibidor de tres enzimas metabólicas purínicas principales, concretamente xantina oxidasa (J. Biol. Chem., 226, 993-1000, 1957), xantina dehidrogenasa (Yokohama Med. Bull., 29, 53-58, 1978) y triptofano pirolasa (Life Sci., 8, 843-851, 1969).

Los inventores de la presente invención han percibido el efecto inhibidor de AHPP contra xantina oxidasa y han descubierto una nueva actividad de AHPP para reducir la presión sanguínea al promover el EDRF debido a una menor generación de radicales superóxido, más concretamente mediante un nuevo modo de acción que inhibe la interacción de EDRF (identificado ahora como óxido nítrico) y superóxido (O_{2}^{-}). Este último consume NO mediante una reacción rápida. La medicación que contiene AHPP puede suprimir la xantina oxidasa, que, como resultado, deja el NO sin reaccionar y en un alto nivel dilata los vasos sanguíneos. De este modo, la AHPP funcionará como un componente eficaz en el tratamiento de la hipertensión y reducirá la presión sanguínea por medio de un nuevo mecanismo de acción, dando ello lugar a la oportunidad de desarrollar una selección alternativa de agentes terapéuticos para el tratamiento de la hipertensión.

La presente invención está dirigida al uso de 4-amino-6-idroxipirazol[3, 4-d]pirimidina de la siguiente fórmula

1

en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipertensión.

La AHPP puede ser sintetizada químicamente mediante reacción de 3-amino-4-cianopirazol y urea (J. Am. Chem. Soc., 78, 784-790, 1956).

De acuerdo con la presente invención, la AHPP puede ser administrada bien oralmente o bien parenteralmente en forma del compuesto puro o en forma de un material compuesto que contiene dicho compuesto en una dosis adecuada que es eficaz pero no tóxica. Para la administración oral de AHPP, la cantidad antihipertensiva eficaz es de 100-9.000 mg/día/paciente adulto y puede tomarse una o más veces en fracciones divididas, si bien la cantidad del compuesto variará en función de la edad, peso corporal y severidad de la hipertensión a tratar. Para la administración parenteral, se recomienda la inyección intravenosa pero también se puede realizar la infusión por goteo.

Para la administración oral, el compuesto puede ser formulado como preparados sólidos o líquidos tales como cápsulas, píldoras, comprimidos, polvos, soluciones, suspensiones, liposomas, emulsiones, etc, mediante el uso de procedimientos normalizados. Generalmente se emplean formas de unidades de dosificación sólidas tales como cápsulas o comprimidos. Para la administración parenteral, el compuesto puede ser formulado como una dosis inyectable de una solución o suspensión del compuesto en un diluyente fisiológicamente aceptable como vehículo farmacéutico bajo las condiciones empleadas en el procedimiento normalizado para preparados parenterales. Se puede emplear como una solución acuosa de 0,001-5% (p/p) para infusión.

Las formulaciones inyectables se pueden preparar también como unidades separadas en viales o ampollas sellados de forma estanca, conteniendo una de tales unidades el compuesto en forma de polvo y conteniendo la otra unidad los diluyentes para disolver el compuesto. Para su uso, dicho polvo se disuelve en los diluyentes.

El uso de acuerdo con la presente invención no solo consigue una actividad suave y fiable para disminuir la presión sanguínea, sino también un modo de acción diferente con respecto a los fármacos antihipertensivos actualmente disponibles. Por tanto, cabe esperar una mejora de la eficacia y una reducción de los efectos secundarios mediante la administración de AHPP combinada con otro tipo de agentes antihipertensivos con un modo de acción diferente.

Ejemplos

La presente invención será descrita ahora detalladamente con referencia a los siguientes ejemplos.

Procedimiento de síntesis Ejemplo 1 Preparación de 3-amino-4-cianopirazol

A una solución de hidrato de hidrazina al 85% (3,4 g, 57,8 mmoles) se añadieron lentamente 2,5 g (20,5 mmoles) de etoximetilen-malononitrilo y además se añadió la misma cantidad (2,5 g). Después de enfriar con agua fría y calentar a 90-100ºC durante 1 hora, la mezcla de reacción proporcionó un producto de reacción sólido. La mezcla de reacción se mezcló con 3,3 ml de agua y se dejó en reposo a 4ºC durante 12 horas, tras lo cual el producto de reacción sólido de color marrón amarillento resultante (3 g en peso en seco) se filtró y se lavó con 1,5 ml de agua y se recristalizó en 6 ml de agua, para obtener 2,5 g de 3-amino-4-cianopirazol.

Ejemplo 2 4-amino-6-hidroxipirazol[3,4-d]pirimidina

Se mezclaron 1,08 g de 3-amino-4-cianopirazol con 2,16 g de urea y se calentó a 200ºC durante 20 minutos. La sustancia sólida resultante se disolvió en 33 ml de 2 N NaOH y la solución se filtró después de calentar a 90-100ºC durante 10 minutos y de mezclarse con carbón vegetal activo en polvo. El filtrado se mezcló con 6 ml de ácido acético anhidro para obtener, después de la filtración, 1,3 g de cristales. Se obtuvieron 0,6 g de los cristales de 4-amino-6-
pirazol[3,4-d]pirimidina (AHPP) mediante lavado de los cristales con una solución mixta de formamida/dimetilforma-
mida (2/1, v/v), formamida y acetona, sucesivamente.

Propiedades fisicoquímicas de la AHPP así obtenida

Absorción UV: UV (\lambdamax)	a pH 11,0: 270 nm
	a pH 1,0: 250 nm

Punto de fusión: 320ºC

Análisis elemental:

\hskip1cm Valores teóricos:	C: 39,80,	H: 3,30,	N: 46,40
\hskip1cm Resultados experimentales:	C: 38,60,	H: 3,27,	N: 44,75

Espectrometría de masas por bombardeo atómico rápido

[FAB-MS (Neg)]: [M-H]-: 150,00

Formulaciones Ejemplo 3 Preparación de comprimidos de AHPP

Se mezclaron AHPP, lactosa y almidón y se prepararon gránulos humedecidos por adición de solución de polivinilpirrolidona y estearato de magnesio. Se obtuvo un preparado de 500 mg/comprimido mediante una extrusionadora de comprimidos a presión con estearato de magnesio, seguido por secado. A continuación se ofrece una relación en peso representativa de los componentes de los comprimidos:

AHPP	100
lactosa	235
almidón	50
solución de polivinilpirrolidona al 10%	50
estearato de magnesio	5

Ejemplo 4 Preparación de jarabe en suspensión de AHPP

Se disolvieron 1,5 g de sorbitol y 0,005 g de glicerol en 3 litros de agua y la solución se mezcló con una porción de una solución en agua de ácido benzoico preparada por separado. A continuación se ofrece una relación representativa de los componentes usados:

AHPP	25 g
sorbitol	1,5 g
glicerol	0,005 g
dispersante del tipo carboximetilcelulosa	0,005 g
agua	hasta 5 l

Ejemplo 5 Efecto inhibidor de AHPP contra la producción de ácido úrico mediante xantina oxidasa in vitro

Se determinó la tasa de producción de ácido úrico midiendo el incremento de la absorbancia óptica a 290 nm en 50 mM de solución tampón de fosfato (pH 7,5) conteniendo 2,19-21,9 \muM de xantina y 0-0,44 \muM de AHPP en presencia de xantina oxidasa de leche de vaca en una concentración final de 3,33 mU/ml. Los resultados obtenidos demostraron que la producción de ácido úrico por xantina oxidasa resultó inhibida por la AHPP de un modo dependiente de la dosis. El coeficiente de inhibición (Ki) de la AHPP respecto a la xantina oxidasa resultó ser de 0,2 \muM según se determinó por análisis de su cinética de velocidad de reacción, demostrándose también que la acción inhibidora de la AHPP era una inhibición competitiva.

Experimentos de efectos bioquímicos y biológicos Ejemplo 6 Efecto inhibidor de la AHPP contra la producción de superóxido por xantina oxidasa in vitro

Se determinó la producción de radicales superóxido midiendo la quimioluminiscencia observada en 100 mM de tampón fosfato (pH 7,4) conteniendo 10 \muM de lucigenina y 10 \muM de xantina en presencia de 20 U/ml de xantina oxidasa derivada de leche de vaca, y se evaluó la inhibición de la generación de superóxido por la AHPP mediante la adición de 0-100 \muM de AHPP a la mezcla de reacción. Se comprobó que la AHPP inhibía la producción de superóxido por xantina oxidasa de un modo dependiente de la dosis. Los resultados se muestran en la tabla 1.

TABLA 1 Efecto de la AHPP para inhibir la generación de superóxido por xantina oxidasa con hipoxantina

Concentración de AHPP (\muM)	Valor integral de la intensidad de quimioluminiscencia/10 min*
0	recuento 5,2 x 10^{5}
1	recuento 4,4 x 10^{5}
10	recuento 1,6 x 10^{5}
100	recuento 8,0 x 10^{5}
* Promedio de dos mediciones

Ejemplo 7 Efecto sinérgico de relajación vascular de la AHPP a la acetilcolina en el caso de un anillo aórtico de conejo

Se prepararon anillos aórticos con un diámetro de 5 mm a partir de las aortas del pecho de conejos hembras blancos de Nueva Zelanda con un peso corporal de 2,5-3 kg. Los anillos fueron preparados quirúrgicamente y suspendidos en un baño de órganos que contiene 20 ml de solución de Krebs, la cual se mantuvo a 37ºC y se suplementó con 95% O_{2} y 5% CO_{2}, para la determinación de la tensión. Se midió la relajación de los anillos aórticos por 0-1 \muM de acetilcolina en presencia de 0, 100 y 300 \muM de AHPP, una vez que se indujo la contracción de los anillos aórticos mediante 0,15 \muM de fenilefrina. Como se muestra en la tabla 2, la dosis de fenilefrina requerida para una relajación del 50% de la contracción de los anillos aórticos inducida por fenilefrina se redujo en función de la concentración de AHPP presente en la solución.

TABLA 2 Efecto de la AHPP sobre la inhibición de la relajación vascular por acetilcolina

Concentración de AHPP (\muM)	Cantidad de acetilcolina requerida para inhibir la relajación del
	anillo aórtico en un 50%*
0	0,11
100	0,075
300	0,055
* Promedio de cuatro mediciones

Ejemplo 8 Efecto de la inyección intravenosa de AHPP sobre la presión sanguínea de ratas hipertensivas de forma espontánea

Ratas machos hipertensivas de forma espontánea y de 18 semanas de edad, con un peso de 300-400 g, fueron infusionadas intravenosamente con 50 mg/kg de AHPP en solución en 1 ml de 0,1 M NaOH durante 5 minutos (8 ratas). Se midió, bajo anestesia, la presión sanguínea arterial media. Ocho ratas de control recibieron solo 0,1 M NaOH por infusión intravenosa. La presión sanguínea arterial media de los grupos tratados mostró un descenso gradual hasta el 72% del valor antes del tratamiento 70 minutos después del tratamiento con AHPP. En el grupo de control sin tratar no se evidenció dicho descenso de la presión sanguínea. Los resultados se muestran en la tabla 3.

TABLA 3 Efecto hipotensivo de la AHPP en ratas hipertensivas de forma espontánea (los valores son promedios de 8 ratas \pm SE)

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Ejemplo 9 Efecto de la administración oral de AHPP sobre la presión sanguínea de ratas hipertensivas de forma espontánea

Se trataron oralmente, con 100 mg/kg de AHPP, cuatro ratas machos hipertensivas de forma espontánea con un peso corporal de 300-400 g y cuatro ratas machos con un peso corporal de 200-300 g. Transcurridas 4 horas desde el tratamiento, se examinó la presión sanguínea sistólica en la arteria del rabo. La presión sanguínea sistólica del grupo tratado se redujo al 70% del valor existente antes del tratamiento.

Claims (1)

1. Uso de 4-amino-6-hidroxipirazol[3,4-d]pirimidina de acuerdo con la siguiente fórmula

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en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipertensión.