EP3291834A1 - Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b pour son utilisation dans le traitement des maladies autoimmunes ou des polyglobulies - Google Patents

Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b pour son utilisation dans le traitement des maladies autoimmunes ou des polyglobulies

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EP3291834A1
EP3291834A1 EP16725051.3A EP16725051A EP3291834A1 EP 3291834 A1 EP3291834 A1 EP 3291834A1 EP 16725051 A EP16725051 A EP 16725051A EP 3291834 A1 EP3291834 A1 EP 3291834A1
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EP
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immunoglobulins
polyclonal human
human immunoglobulins
composition
polyclonal
Prior art date
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Withdrawn
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EP16725051.3A
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German (de)
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Abdessatar Chtourou
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LFB SA
Original Assignee
LFB SA
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Publication date
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/34—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood group antigens
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    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Definitions

  • the present invention is in the field of therapeutic concentrates of polyclonal immunoglobulins. It relates to a composition highly enriched in anti-A and / or anti-B polyclonal immunoglobulins, for its use in the treatment of autoimmune diseases (in particular idiopathic thrombocytopenic purpura), and / or in the treatment of polyglobulia.
  • autoimmune diseases in particular idiopathic thrombocytopenic purpura
  • polyglobulia in particular idiopathic thrombocytopenic purpura
  • Normal human immunoglobulins are used in the treatment of more and more pathologies. They are used as substitution therapy in primary (congenital deficiency) or secondary (chronic lymphocytic leukemia, myeloma, infections after bone marrow transplant, recurrent bacterial infections in HIV-infected 'antibody.
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • NMM multifocal motor neuropathy
  • IPDC chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuritis
  • IVIG normal human immunoglobulin intravenously
  • plasma fractionators have developed methods to eliminate anti-A and anti-B immunoglobulins. of their normal human immunoglobulin concentrates.
  • WO01 / 27623 and WO2007 / 077365 describe the use of different affinity chromatography supports specifically binding to anti-A and anti-B immunoglobulins to eliminate anti-A and anti-B immunoglobulins from biological compositions, especially from normal human immunoglobulin concentrates.
  • the non-adsorbed fraction not comprising anti-A and anti-B immunoglobulins is recovered by percolation for further processing and conditioning.
  • the anti-A anti-A affinity chromatography column is then regenerated by a double wash: a first acid wash, followed by a second basic wash. To date, the two products from each of the two washes are eliminated.
  • the anti-A and anti-B immunoglobulin fraction adsorbed during the affinity chromatography step therefore corresponds to a lost fraction.
  • the inventors have discovered that the currently eliminated fraction, strongly enriched in anti-A and anti-B immunoglobulins, may be used in the treatment of autoimmune diseases (in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)). , and / or in the treatment of polyglobulia.
  • autoimmune diseases in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • compositions of anti-A and / or anti-B immunoglobulins in the treatment of autoimmune diseases and in particular of ITP is that these anti-A and / or anti-B immunoglobulins, administered to a blood group patient A, B or AB with an autoimmune disease, will compete with the endogenous phenomena.
  • the anti-A and / or anti-B immunoglobulins would make it possible to induce destruction of the patient's red blood cells by a phagocytosis phenomenon of a fraction of red blood cells and thus indirectly protect the platelets from their destruction via macrophages.
  • the Fc receptors of macrophages are saturated directly by red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulin, limiting and / or thus preventing the destruction of platelets.
  • a second possible mechanism is the consumption of complement proteins by anti-A and / or anti-B immunoglobulin-coated red cells, reducing the complement-dependent activity of pathogenic autoantibodies.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which the role of complement is deleterious for the patient, for example optical neuromyelitis (anti-AQP4) and multiple sclerosis (anti-myelin / axon).
  • a third possible mechanism is an anti-inflammatory action of erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, due to the inhibition induced by their phagocytosis of the pro-inflammatory cytokine secretion by the activated macrophages.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which the effector cells expressing Fc receptors, in particular CD16, are activated and maintain a pathogenic inflammatory state in the patient, which is observed in a large number of autoimmune pathologies. immune.
  • An immunomodulation phenomenon is also possible. Indeed, a fourth possible mechanism is based on the immunomodulatory action of red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, which by limiting the cell destruction, allow the induction of a negative signal and thus a decrease of cross-link secretion of autoantibodies between BCR and FcgRIIb of B cell via autoantibody and antigen expressed on the surface of the target cell.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which a pathogenic autoantibody is demonstrated such as ITP, insulin autoimmune syndrome (IAS) or Hirata disease (anti-insulin), optical neuromyelitis (anti-AQP4) , Grave's disease, pemphigus, multiple sclerosis (anti-myelin / axon), Sydenham chorea (anti-neuronal protein), Sjögren, Pemphigus vulgaris (anti-desmoglein 3).
  • a fifth mechanism is the induction of anti-inflammatory cytokines such as IL1-RA by immune system cells, epithelial cells and adipocytes induced by erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • This mechanism is particularly applicable in inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis or for example Muckle-Wells syndrome and Schnitzler syndrome.
  • the anti-A and / or anti-B immunoglobulins will directly bind to the red blood cells of patients with blood group A, B or AB and thus induce the lysis of supernumerary red blood cells.
  • the present invention thus relates to a composition
  • a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are polyclonal human anti-A and / or anti-human immunoglobulins.
  • B for its use as a medicine.
  • the invention also relates to a composition
  • a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulins for its use.
  • the polyclonal human immunoglobulins represent at least 85% by weight of the total proteins of the composition.
  • the invention also relates to the use of a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are polyclonal human anti-A and / or anti-human immunoglobulins.
  • B for the preparation of a medicament, in particular for the treatment of autoimmune diseases (especially idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)) and / or the treatment of polyglobulia.
  • the invention also relates to a method of treating autoimmune diseases (especially idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)) and / or polyglobuli in a subject in need, comprising administering to said subject an effective amount of a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • autoimmune diseases especially idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • compositions are intended for patients of blood group A, B or AB.
  • the composition comprises both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins, and the ratio by weight polyclonal human anti-A immunoglobulins on anti-B polyclonal human immunoglobulins ( anti-A / anti-B) is between 1/10 and 10/1.
  • the composition is advantageously intended for patients of blood group A, B or AB. DESCRIPTION OF THE FIGURES
  • FIG. 1 Schematic of the murine model used to test the therapeutic efficacy of anti-A and / or anti-B polyclonal immunoglobulins in the treatment of idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP).
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • the arrows above the timeline correspond to blood collections.
  • the small solid arrows below the time line correspond to the injections of anti-CD41 antibodies (1 g / 20 g of weight for each mouse, intraperitoneally).
  • the long dashed arrows below the time line correspond to the injection of human red blood cells AB + (400 ⁇ l, intravenous), or the injection of IVIG (2 g / kg, intraperitoneally) or anti-A / anti-B (7.5 mg / kg, intraperitoneally).
  • FIG. 1 Graphical presentation of the results obtained, reported as a percentage of day 1, on the murine model used to test the therapeutic efficacy of anti-A and / or anti-B polyclonal immunoglobulins in the treatment of idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP).
  • Gr1 group 1
  • Gr2 group 2
  • Gr3 group 3
  • Gr4 group 4
  • Gr5 group 5.
  • the inventors have discovered that the currently eliminated fraction, strongly enriched in anti-A and anti-B immunoglobulins, may be used in the treatment of autoimmune diseases (in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)), and / or in the treatment of polycythemia.
  • autoimmune diseases in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • compositions of anti-A and / or anti-B immunoglobulins in the treatment of autoimmune diseases and in particular of ITP is that these anti-A and / or anti-B immunoglobulins administered to the group patient blood A, B or AB presenting an autoimmune disease will compete with endogenous phenomena.
  • the anti-A and / or anti-B immunoglobulins would make it possible to induce destruction of the patient's red blood cells and thus indirectly protect the platelets from their destruction via the macrophages. Indeed, the Fc receptors of macrophages are saturated directly by red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulin, thus preventing the destruction of platelets.
  • a second possible mechanism is the consumption of complement proteins by anti-A and / or anti-B immunoglobulin-coated red cells, reducing the complement-dependent activity of pathogenic autoantibodies.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which the role of the complement is deleterious for the patient such as optical neuromyelitis (anti-AOJ) and multiple sclerosis (anti-myelin / axon).
  • a third possible mechanism is an anti-inflammatory action of red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, due to the inhibition induced during their phagocytosis of pro-inflammatory cytokine secretion by activated macrophages.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which the effector cells expressing Fc receptors, in particular CD16, are activated and maintain a pathogenic inflammatory state in the patient, which is observed in a large number of autoimmune pathologies. immune.
  • An immunomodulation phenomenon is also possible. Indeed, a fourth possible mechanism is based on the immunomodulatory action of red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, which by limiting the cell destruction, allow the induction of a negative signal and thus a decrease of cross-link secretion of autoantibodies between BCR and FcgRIIb of B-cell via autoantibody and antigen expressed on the surface of the target cell.
  • This mechanism applies to all autoimmune pathologies for which a pathogenic autoantibody is demonstrated such as ITP, insulin autoimmune syndrome (IAS) or Hirata disease (anti-insulin), optical neuromyelitis (anti-AQP4) , Grave's disease, pemphigus, multiple sclerosis (anti-myelin / axon), Sydenham chorea (anti-neuronal protein), Sjögren, Pemphigus vulgaris (anti-desmoglein 3).
  • a fifth mechanism is the induction of anti-inflammatory cytokines such as IL1-RA by immune system cells, epithelial cells and adipocytes induced by erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • This mechanism is particularly applicable in inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis or for example Muckle-Wells syndrome and Schnitzler syndrome.
  • the anti-A and / or anti-B immunoglobulins will directly bind to the red blood cells of patients with blood group A, B or AB and thus induce the lysis of supernumerary red blood cells.
  • antibody or “immunoglobulin” is meant a molecule comprising at least one binding domain to a given antigen and a constant domain comprising a Fc fragment capable of binding to FcR receptors.
  • polyclonal human immunoglobulin is meant a composition of human immunoglobulins directed against a number of distinct antigens, and comprising, for each recognized antigen, a plurality of distinct immunoglobulins capable of recognizing said antigen, generally at several distinct epitopes.
  • Such polyclonal human immunoglobulins are generally purified from the plasma of one or preferably more than one donor (this is referred to as a pool of donors). Therapeutic normal human immunoglobulins are thus purified from plasma pools of generally at least 1000 donors.
  • anti-A polyclonal human immunoglobulin or "anti-A immunoglobulin” is meant polyclonal human immunoglobulins recognizing blood group A antigens.
  • Bood group A antigens or “A antigens” are characterized by the presence of a trisaccharide comprising an N-acetylgalactosamine (abbreviated herein as “GalNAc”) linked to a galactose (abbreviated herein as “Gaal”), itself bound to a fucose (abbreviated herein as “ Fuc "), according to the following sequence: GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal.
  • GalNAc N-acetylgalactosamine
  • Fuc fucose
  • This trisaccharide may itself be attached by its central galactose to other sugars, the number and assembly of which varies according to the type of antigen A, as shown in Table 1 below for type A antigens. 1 to 4, and the presence or absence as well as the nature of a Lewis antigen.
  • Table 1 Structure of different types of antigen of blood group A.
  • GalNAc N-acetylgalactosamine
  • Fuc fucose
  • Gal galactose
  • GlcNAc N-acetylglucosamine
  • Glc glucose
  • R support (oligosaccharide, glycoprotein, glycolipid). The group A trisaccharide is indicated in bold.
  • anti-B polyclonal human immunoglobulin or "anti-B immunoglobulin” is meant polyclonal human immunoglobulins recognizing blood group B antigens.
  • Bood group B antigens or “B antigens” are characterized by the presence of a trisaccharide comprising a first galactose linked to a second galactose, itself linked to a fucose, according to the following sequence: Galal - 3 (Fuca1 -2) Gal.
  • This trisaccharide can itself be attached by its central galactose to other sugars, the number and the assembly of which varies according to the type of antigen B, as indicated in Table 2 below for type B antigens. 1 to 4, and the presence or absence as well as the nature of a Lewis antigen.
  • Table 2 Structure of different types of antigen of blood group B.
  • Fraction of human plasma enriched in polyclonal human immunoglobulins means any fraction of human plasma that can be obtained by fractionation of human plasma and the percentage by weight of polyclonal immunoglobulins relative to the total proteins of the fraction is greater than to that of human plasma. Such fractions are advantageously obtained by fractionation of plasma pools of at least 1000 donors.
  • They may in particular include any part or subpart of the plasma which has been the subject of one or more purification steps and in particular, the supernatant of cryoprecipitated plasma, plasma cryoprecipitate (delivered or not in suspension), the fractions I at V obtained by ethanolic fractionation (according to the method of Cohn or Kistler & Nitschmann), the supernatant and the precipitate obtained after precipitation with caprylic acid and / or caprylate, the filtrates, or any fraction enriched with immunoglobulins (eluates of chromatographies and / or non-adsorbed fractions) by chromatographic separation, as described in particular in WO99 / 64462 and WO02 / 092632, and more particularly in WO02 / 092632.
  • oligosaccharide representing blood group A antigens is meant any oligosaccharide comprising the trisaccharide characteristic of blood group A antigens as defined above.
  • GalNAcal -3 Fuca1 -2) Gal.
  • Such an oligosaccharide may further comprise other sugars present in the blood group A antigens defined above.
  • such an oligosaccharide may also be chosen from tetrasaccharides, pentasaccharides and hexasaccharides derived from the group A, type 1, 2, 3 or 4 antigens described above and comprising the characteristic trisaccharide GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal:
  • Type 1 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Galp1 -3GlcNAc,
  • Type 3 or 4 GalNAcal -3 (Fuca1-2) Gai i -3GalNAc
  • Type 1 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Galp1 -3GlcNAc p1 -3Gal,
  • Type 2 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal 1 -4GlcNAc p1 -3Gal,
  • Type 3 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal 1 -3GalNAc a1 -3Gal,
  • Type 4 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal 1 -3GalNAc p1 -3Gal,
  • Type 1 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal1 -3GlcNAc p1 -3GalB1 -4Glc
  • Type 2 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal1 -4GlcNAc p1 -3GalB1 -4Glc
  • o Type 3 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal 1 -3GalNAc has 1-3GalB1 -4GlcNAc
  • Type 4 GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Galp1 -3GalNAc i-3Gala1 -4Gal.
  • the oligosaccharide may also comprise repeats of the characteristic GalNAcal -3 (Fuca1 -2) Gal trisaccharide, or tetrasaccharides, pentasaccharides and hexasaccharides derived from the type 1, 2, 3 or 4 Group A antigens described above.
  • the specific ligand for immunoglobulins recognizing antigens of blood group A is the characteristic trisaccharide GalNAcal -3 (Fuca1-2) Gal.
  • oligosaccharide representing antigens of blood group B is meant any oligosaccharide comprising the trisaccharide characteristic of antigens of blood group B as defined above. : Galal -3 (Fuca1 -2) Gal. Such an oligosaccharide may further comprise other sugars present in the blood group B antigens defined above.
  • such an oligosaccharide may also be chosen from tetrasaccharides, pentasaccharides and hexasaccharides derived from group B, type 1, 2, 3 or 4 antigens described above and comprising the characteristic trisaccharide Galal -3 (Fuca1 -2) Gal:
  • Type 3 Galal-3 (Fuca1 -2) Gal 1 -3GalNAc has 1-3GalB1 -4GlcNAc
  • o Type 4 Galal-3 (Fuca1-2) Gal 1 -3GalNAc i-3Gala1 -4Gal.
  • the oligosaccharide may also comprise repeats of the characteristic Galal-3 (Fuca1-2) Gal trisaccharide, or tetrasaccharides, pentasaccharides, and hexasaccharides derived from the type 1, 2, 3, or 4 B-group antigens described above.
  • the specific ligand of immunoglobulins recognizing antigens of blood group B is the characteristic trisaccharide Galal -3 (Fuca1 -2) Gal.
  • a reference to "a" specific ligand of anti-A or anti-B polyclonal human immunoglobulins includes the possibility of using either a single type of ligand specific for anti-A or anti-B polyclonal human immunoglobulins (that is to say that all the ligands grafted on the support have the same chemical structure), or several different types of ligands (that is to say of different chemical structure) specific (s) polyclonal human immunoglobulins anti -A or anti-B.
  • each ligand of given chemical structure that can be used is necessarily grafted several times on the support, so that the polyclonal human anti-A or anti-B immunoglobulins can be retained by the support.
  • One skilled in the art knows which ligand density should be used to allow adsorption of anti-A or anti-B polyclonal human immunoglobulins onto the support.
  • autoimmune disease is meant any disease resulting from a dysfunction of the immune system that attacks the normal constituents of the body, or “auto-antigens”.
  • Autoimmune diseases may be organ or system specific and include, in particular, autoimmune peripheral thrombocytopenia (and in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)), Birdshot retinochoroiditis, Guillain-Barré syndrome, multifocal motor neuropathy (NMM).
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • NMM multifocal motor neuropathy
  • PIDC Chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathies
  • Kawasaki disease Graves' disease (hyperthyroidism), Hashimoto chronic thyroiditis (hypothyroidism), systemic lupus erythematosus (SLE), Goodpasture's syndrome, pemphigus (especially Pemphigus vulgaris (anti-desmoglein 3)), myasthenia gravis, diabetes insulin resistance, autoimmune haemolytic anemia, rheumatoid arthritis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, Biermer's anemia, Sjsgren, glomerulonephritis, Wegener's disease, Horton's disease, polyarteritis nodosa, Churg and Strauss, Still's disease, atrophic polychondritis, Behçet's disease, multiple sclerosis (MS, anti-myelin / axon), s
  • Thrombocytopenia or "thrombocytopenia” means a decrease in the number of blood platelets below the threshold of 150,000 platelets per mm 3 or a 50% decrease from the reference level of a subject. Thrombocytopenia is called “severe” if the number of platelets falls below the threshold of 100,000 platelets per mm 3 .
  • autoimmune peripheral thrombocytopenia thrombocytopenia related to immunological destruction of platelets. This destruction implies generally B-cell synthesis of the subject of immunoglobulins directed against platelet-expressed antigens, whether natural platelet antigens or infectious antigens expressed on platelets during infection. The platelets, coated with immunoglobulins, are then destroyed by the effector cells of the immune system, and in particular by the macrophages.
  • Autoimmune peripheral thrombocytopenia includes:
  • IDP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • This autoimmune disease is characterized by the production of antiplatelet immunoglobulins (autoantibodies) in normally healthy subjects who do not take any medication.
  • the immunological origin is asserted by the presence of a large amount of immunoglobulins (autoantibodies) on the platelet surface (see Cines et al., N Engl J Med 2002 Mar 28, 346 (13): 995-1008).
  • the mechanism is similar to that of the ITP, but the causal infection is perfectly identified, the immunoglobulins binding to platelets due to their expression of an infectious antigen (see in particular Winiarski J et al., Arch Dis Child 1990 Jan; 1): 137-9 in the case of chickenpox, and Kelton et al J Clin Invest, 1983 Apr, 71 (4): 832-6 in the case of malaria).
  • thrombocytopenic purpura The origin of this thrombocytopenic purpura is related to a reaction to a drug. Many drugs are capable of causing this type of thrombocytopenic purpura (see, in particular, Aster et al., N Engl J Med 2007 Aug 9; 357 (6): 580-7).
  • Neonatal thrombocytopenic purpura ⁇ Neonatal thrombocytopenic purpura.
  • This thrombocytopenic purpura is related either to a transplacental passage of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura antibodies or to fetal-maternal incompatibility leading to the formation of anti-HPA (Human Platelet Antigen) antibodies (see Peterson et al., Br. Haematol 2013 Apr; 161 (1): 3-14).
  • Polycythemia refers to an abnormal increase in the total volume of red blood cells in the blood. Polycythemia is therefore an excess of red blood cells, which makes the blood more viscous and can cause vascular disorders.
  • polyglobulias there are:
  • primary polycythemia due to an exacerbated functioning of the bone marrow that produces red blood cells, usually caused by bone marrow disease such as polycythemia vera, also called polycythemia essential, and
  • polycythemia secondary to hypoxia or inappropriate secretion and / or injection of erythropoietin.
  • treatment is meant a clinical or biochemical improvement of the patient's pathology.
  • thrombocytopenia this can be seen in particular by an increase in the number of platelets after treatment compared to the number of platelets before treatment.
  • polycythemia this can be seen in particular by a decrease in the number of red blood cells after treatment compared to the number of red blood cells before treatment.
  • ком ⁇ онент with another therapeutic agent is meant the administration of the anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulin composition described herein with one or more other therapeutic agent (s), in particular with one or more drugs useful in the treatment of autoimmune disease and / or polycythemia, simultaneously or sequentially.
  • “simultaneous administration” is meant both the administration in the form of a single pharmaceutical formulation associating the anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulin composition described herein and one or more other agent (s) ( s) Therapeutic (s), that separate administration of at least two separate pharmaceutical formulations containing one of the polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulin composition described herein and the other (s) formulation (s) containing the other therapeutic agent (s), at the same time or at a very short interval (maximum 1 hour).
  • sequential administration is meant the separate administration of at least two separate pharmaceutical formulations containing one of the anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulin compositions described herein and the one or more formulation (s) containing the other therapeutic agent (s) more than one hour apart.
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, advantageously at least 85% at least 86%. %, at least 87%, more preferably at least 88%, at least 89%, still more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94%, or at least 95% %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulins, for its use as a medicine.
  • the invention also relates to a composition
  • a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, advantageously at least 85% at least 86%, at least 87%, more preferably at least 88%, at least 89%, still more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94% or at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins for use as a medicament in the treatment of autoimmune disease and / or in the treatment of polyglobulia.
  • the invention also relates to the use of a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, advantageously at least less 85% at least 86%, at least 87%, more preferably at least 88%, at least 89%, even more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94% %, or even at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are anti-A and / or anti-polyclonal human immunoglobulins -B for the preparation of a medicament, in particular for the treatment of autoimmune diseases (in particular idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)) and / or the treatment of polyglobulia.
  • autoimmune diseases in particular idiopathic thrombocytopenic purpur
  • the invention also relates to a method of treating autoimmune diseases (especially idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)) and / or polyglobuli in a subject in need, comprising administering to said subject an effective amount of a composition comprising polyclonal human immunoglobulins, characterized in that at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, preferably at least 85% at least 86%, at least 87% more preferably at least 88%, at least 89%, still more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94%, or at least 95%, at least 96% at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition are polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • the composition comprises both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins, and the ratio by weight anti-A polyclonal human immunoglobulins on anti-B polyclonal human immunoglobulins (anti- A / anti-B) is between 1/10 and 10/1.
  • the composition comprising both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins is enriched in anti-A polyclonal human immunoglobulins, and therefore has a weight ratio of anti-A polyclonal human immunoglobulins.
  • anti-B (anti-A / anti-B) polyclonal human immunoglobulins ranging from 2/1 to 10/1.
  • the composition comprising both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins is enriched in anti-B polyclonal human immunoglobulins, and therefore has a weight ratio of polyclonal anti-human immunoglobulins to A on anti-B (anti-A / anti-B) polyclonal human immunoglobulins comprised between 1/10 and 1/2.
  • the composition comprising both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins is balanced in both types of immunoglobulins, and thus has a weight ratio of polyclonal anti-human immunoglobulins to A on anti-B (anti-A / anti-B) polyclonal human immunoglobulins of between 3/10 and 7/10, advantageously between 4/10 and 6/10.
  • the composition enriched in anti-A polyclonal human immunoglobulins according to the invention may have an anti-A activity enriched by a factor of at least 4, advantageously at least 5. at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least minus 50, at least 55, at least 60, at least 65, at least 70, at least 75, at least 80, at least 85, at least 90, at least 95, at least 100, at least 125, at least 150 at least 175, at least 200, at least 400, at least 400, at least 500, at least 500, at least 400, at least 400, at least minus 1000, at least 1500, at least 2000, at least 2500, at least 3000, at least 4000, at least 5000, at least 6000, at least 7000, at least 8000, at least 9000, or at least 10000 in relation to a reference Im lyophil
  • the composition enriched in anti-B polyclonal human immunoglobulins according to the invention may have an anti-B activity enriched by a factor of at least 4, advantageously at least 5. at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least minus 50, at least 55, at least 60, at least 65, at least 70, at least 75, at least 80, at least 85, at least 90, at least 95, at least 100, at least 125, at least 150 at least 175, at least 200, at least 400, at least 400, at least 500, at least 500, at least 400, at least 400, at least minus 1000, at least 1500, at least 2000, at least 2500, at least 3000, at least 4000, at least 5000, at least 6000, at least 7000, at least 8000, at least 9000, at least 10000, at least 11000 , at least 12000
  • the composition may comprise both anti-A polyclonal human immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins and has a ratio (anti-A activity / anti-activity).
  • -B between 1/10 and 10/1, in particular between 1/9 and 9/1, between 1/8 and 8/1, between 1/7 and 7/1, between 1/6 and 6/1, between 1/5 and 5/1, between 1/4 and 4/1, between 1/3 and 3/1, even between 1/2 and 2/1 or between 0.6 and 1, 5.
  • the ratio (anti-A activity / anti-B activity) and the ratio (anti-B activity / anti-A activity) are calculated on the basis of anti-A and anti-B activity results obtained in tests performed in accordance with parallel, with the same method of activity assay (in particular one of those described below, and in particular the method of flow cytometry described here) and expressed in arbitrary units with respect to the same reference standard (standard EDQM ref Y0001688 or freeze-dried human normal immunoglobulin drug).
  • the weight percentage of the anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins among total polyclonal human immunoglobulins of a composition comprising purified polyclonal human immunoglobulins can be measured by purifying the composition by affinity chromatography on a graft-donated column. ligands specific for anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins, and relating the weight of immunoglobulins adsorbed on the column and the weight of total immunoglobulins.
  • composition is not purified in immunoglobulins, a preliminary step of purification of total immunoglobulins then makes it possible to measure the percentage by weight of anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins among the total polyclonal human immunoglobulins.
  • compositions for therapeutic use according to the invention are preferably purified, and the polyclonal human immunoglobulins advantageously represent at least 85%, advantageously at least 86%, at least 87%, more advantageously at least 88%, at least 89%, still more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the total proteins of the composition.
  • compositions for therapeutic use according to the invention may comprise polyclonal human immunoglobulins of a single isotype (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, advantageously IgG or IgM, preferably IgG) or several isotypes.
  • the polyclonal human immunoglobulins present in the compositions for therapeutic use according to the invention are predominantly (at least 90%, advantageously at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least least 94%, more preferably at least 95%, at least 96%, at least 97%, still more preferably at least 98%, at least 99% by weight) IgG.
  • compositions for therapeutic use according to the invention are advantageously enriched in IgG2 subclass immunoglobulins compared to normal human immunoglobulin concentrates.
  • the IgG compositions for therapeutic use according to the invention are advantageously characterized in that at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%.
  • immunoglobulins of subclass IgG2 advantageously measured by nephelemetry and / or by spectrography and or by subclass ELISA kit (ie by nephelemetry, by spectrography, by subclass ELISA kit, or by several of these methods, for example by nephelemetry and by spectrography, or by each of these three methods) .
  • the IgG compositions according to the invention advantageously have a weight ratio of IgG 2 / IgG 1 of at least 0.8, at least 0.9, advantageously at least 1, at least 1.1, at least 1, 2, at least 1, 3, at least 1, 4, at least 1, 5, at least 1, 6, at least 1, 7, at least 1, 8, at least 1, 9 or at least 2 at least 2.5, at least 3, at least 3.1, at least 3.2, at least 3.3, at least 3.4, at least 3.5, at least 3.6, at least 3 , 7, at least 3.8, at least 3.9, or even at least 4, advantageously measured by nephelemetry and / or by spectrography and / or by subclass ELISA assay kit (ie by nephelometry, by spectrography, by kit Subclass ELISA, or by several of these methods, for example by nephelemetry and spectrography, or by each of these three methods).
  • the polyclonal human immunoglobulins present in the compositions for therapeutic use according to the invention are predominantly (at least 90%, advantageously at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, more preferably at least 95%, at least 96%, at least 97%, still more preferably at least 98%, at least 99% by weight) IgM.
  • compositions according to the invention are purified and are advantageously concentrated.
  • the compositions according to the invention are concentrated according to any technique known to those skilled in the art, for example by using an ultrafiltration membrane, a centrifugation, a dialysis, or several of these steps.
  • the concentrated compositions according to the invention exhibit an indirect Coombs test result (described below) greater than 1/64, advantageously greater than 1/128, greater than 1/256, greater than 1/512, greater than 1/1024, greater than 1/2048, even greater than 1/4096.
  • An indirect Coombs test result greater than 1 / N means that the result of the indirect Coombs test is negative at a dilution of the sample at 1 / N.
  • compositions according to the invention which are concentrated exhibit a result with the direct agglutination method (described below) greater than 1/64, advantageously greater than 1/128, greater than 1/256, greater than 1 / 512, greater than 1/1024, greater than 1/2048, even greater than 1/4096.
  • Direct agglutination test result greater than 1 / N means that the result with the direct agglutination method is negative at a dilution of the sample at 1 / N.
  • compositions according to the invention concentrate have a concentration of anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins greater than 1 g / L, greater than 1.5 g / L, greater than 2 g / L, greater than 5 g / L, greater than 10 g / L, greater than 1 5 g / L, greater than 20 g / L, or even greater than 50 g / L.
  • the rationale for the therapeutic effectiveness of the compositions for therapeutic use according to the invention for the treatment of autoimmune diseases relies in particular on saturating the macrophages with red blood cells coated with anti-human polyclonal immunoglobulins. A and / or anti-B administered, thus preventing the destruction of platelets by these same macrophages.
  • the Fc receptors of the macrophages are then saturated with red blood cells coated with anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins, preventing the binding of platelets coated with other antibodies. Without binding to macrophages, platelets are not destroyed.
  • the rational of the therapeutic effectiveness is based on the fixation of anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins administered directly to the red blood cells, thus causing their lysis.
  • compositions for therapeutic use according to the invention are advantageously intended for blood group A patients (erythrocytes carrying A antigens recognized by the anti-A), B polyclonal human immunoglobulins (B-labeled antigen-recognized red blood cells). polyclonal human immunoglobulins anti-B) or AB (red blood cells carrying antigens A and B recognized by anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins).
  • compositions for therapeutic use according to the invention for the treatment of autoimmune diseases is also based on:
  • complement proteins by erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, reducing the complement-dependent activity of pathogenic autoantibodies to treat autoimmune pathologies for which the role of the complement is deleterious for the patient such as optical neuromyelitis (anti-AQP4) and multiple sclerosis (anti-myelin / axon).
  • anti-AQP4 optical neuromyelitis
  • anti-myelin / axon multiple sclerosis
  • red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins due to the inhibition induced during their phagocytosis of the secretion of pro-inflammatory cytokines by activated macrophages for treating autoimmune pathologies for which the effector cells expressing Fc receptors, in particular CD16, are activated and maintain a pathogenic inflammatory state in the patient.
  • cytokines such as IL1 -RA
  • immune system cells epithelial cells and adipocytes induced by erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins for treating inflammatory pathologies.
  • compositions for therapeutic use according to the invention comprise both anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins, they are advantageously intended for patients of blood group A, B or AB, and in particular of blood group AB.
  • compositions for therapeutic use according to the invention can be used in the treatment of autoimmune diseases.
  • compositions for therapeutic use according to the invention can in particular be used in the treatment of peripheral autoimmune thrombocytopenia (involving immunological destruction of platelets, in particular PTI), Birdshot retinochoroiditis, Guillain-Barré syndrome, multifocal motor neuropathy.
  • peripheral autoimmune thrombocytopenia involving immunological destruction of platelets, in particular PTI
  • Birdshot retinochoroiditis involving immunological destruction of platelets, in particular PTI
  • Guillain-Barré syndrome multifocal motor neuropathy.
  • NMM chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathies
  • PIDC chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathies
  • Kawasaki disease Graves' disease (hyperthyroidism), chronic thyroiditis of Hashimoto (hypothyroidism), systemic lupus erythematosus (SLE), Goodpasture's syndrome , pemphigus (including Pemphigus vulgaris (anti-desmoglein 3)), myasthenia gravis, diabetes insulin resistance, autoimmune haemolytic anemia, rheumatoid arthritis, scleroderma, polymyositis, dermatomyositis , Biermer's anemia, Sjsgren's disease, Glomerulonephritis, Wegener's disease, Horton's disease, periarteritis nodosa, Churg and Strauss syndrome, Still's disease, atrophic polychondritis, Behçet
  • composition according to the invention for treating autoimmune diseases.
  • autoimmune diseases for which the role of complement is deleterious for the patient for example optical neuromyelitis (anti-AQP4) and multiple sclerosis (anti-myelin / axon) can be treated by the composition according to the invention by the mechanism of consumption of complement proteins by erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • optical neuromyelitis anti-AQP4
  • multiple sclerosis anti-myelin / axon
  • the autoimmune diseases for which the effector cells expressing Fc receptors, in particular CD16, are activated and maintain a pathogenic inflammatory state in the patient can be treated with the composition according to the invention by virtue of the anti-inflammatory action of red blood cells. coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • autoimmune diseases for which a pathogenic autoantibody is demonstrated such as ITP, insulin autoimmune syndrome (IAS) or Hirata disease (anti-insulin), optic neuromyelitis (anti-AQP4), Grave's disease, pemphigus, multiple sclerosis (anti-myelin / axon), Sydenham chorea (neuronal antiprotein), Sjögren, Pemphigus vulgaris (anti-desmoglein 3) can be treated with the composition according to the invention by virtue of the immunomodulatory action of red blood cells. coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins.
  • inflammatory type autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis or for example Muckle-Wells syndrome and Schnitzler syndrome can be treated by the composition according to the invention by virtue of the mechanism for inducing anti-inflammatory cytokines as IL1 -RA by the cells of the immune system.
  • compositions for therapeutic use according to the invention can be used in the treatment of autoimmune peripheral thrombocytopenia, involving an immunological destruction of platelets.
  • the rational of the therapeutic efficacy of the compositions for therapeutic use according to the invention is based in particular on the fact of saturating the macrophages by red blood cells coated with anti-A and / or anti-polyclonal human immunoglobulins. -B administered, thus preventing the destruction of platelets by these same macrophages.
  • the mechanisms of consumption of complement proteins by red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, anti-inflammatory action of erythrocytes coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, immunomodulatory action of red blood cells coated with anti-A and / or anti-B immunoglobulins, and induction of anti-inflammatory cytokines such as IL1 -RA by the cells of the immune system, also make it possible to prevent the destruction of platelets.
  • compositions for therapeutic use according to the invention are especially advantageously used in the treatment of idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), infectious thrombocytopenic purpura, immunoallergic drug thrombocytopenic purpura, or neonatal thrombocytopenic purpura, and in particular in the treatment of thrombocytopenic purpura.
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • infectious thrombocytopenic purpura infectious thrombocytopenic purpura
  • immunoallergic drug thrombocytopenic purpura or neonatal thrombocytopenic purpura
  • neonatal thrombocytopenic purpura idiopathic iopathic (PTI).
  • compositions for therapeutic use according to the invention can be used in the treatment of polyglobulia.
  • compositions for therapeutic use according to the invention can be used in the treatment of polyglobulia, involving an increase in the amount of red blood cells.
  • the rational of the therapeutic efficacy is based on the fixation of polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulins administered directly to red blood cells, thus causing their lysis.
  • compositions for therapeutic use according to the invention are especially advantageously used in the treatment of primary polycythemia, in particular in polycythemia vera, also called essential polycythemia, and / or in the treatment of secondary polycythemia due to hypoxia or secretion and / or or inappropriate injection of erythropoietin. Dosage and therapeutic administration
  • compositions for therapeutic use according to the invention at an appropriate dosage.
  • compositions according to the invention necessarily involves the destruction of a number of red blood cells (hemolysis), and it is therefore appropriate not to overdose the compositions for therapeutic use according to the invention, so as to avoid too much haemolysis, which is also harmful for the subject treated.
  • hemolysis red blood cells
  • the quantities of anti-A and anti-B immunoglobulins present in therapeutic polyclonal human immunoglobulin concentrates are limited to maximum values by the health authorities.
  • polyclonal human immunoglobulin therapeutic concentrates are used as substitution treatment in primary or secondary immunodeficiencies with defective antibody production, maximum risk of hemolysis should be avoided.
  • the dose of anti-A and / or anti-B immunoglobulins administered to a patient suffering from polycythemia and / or autoimmune disease, and in particular autoimmune peripheral thrombocytopenia (in particular particular of ITP), should preferably be between 20 and 100 ⁇ g / kg of body weight, advantageously between 25 and 90 ⁇ g / kg of body weight, between 30 and 80 ⁇ g / kg of body weight, between 35 and 70 ⁇ g / kg of body weight, kg of body weight, between 40 and 60 ⁇ g / kg of body weight, between 45 and 55 ⁇ g / kg of body weight, and in particular of approximately 50 ⁇ g / kg of body weight.
  • the doses are advantageously adapted to avoid severe hemolysis in the patient that could lead to serious and / or deleterious side effects.
  • composition for therapeutic use according to the invention is intended to bind to red blood cells, it is advantageously administered intravenously.
  • the composition for therapeutic use according to the invention is administered enterally, parenterally, locally and cutaneo-mucosa.
  • the rate of administration may be from about 1 to 5 ml (in particular 1 to 4 ml, 1 to 3 ml, or about 2 ml) of a composition comprising 150 mg / l of anti-A and / or anti-immunoglobulin. -B every 15 to 60 seconds.
  • the composition for therapeutic use according to the invention may also be administered in combination with another therapeutic agent chosen from the medicaments useful in the treatment of an autoimmune disease and / or a polycythemia.
  • the frequency of administration of the composition for therapeutic use according to the invention is adapted according to the platelet rate to be reached and / or or maintain in the patient.
  • compositions for therapeutic use according to the invention can be obtained from more or less purified fractions of human plasma comprising polyclonal immunoglobulins by various purification methods, and in particular by a process comprising the following methods: following steps: a) adsorption of a batch of human plasma or a fraction of human plasma enriched in polyclonal human immunoglobulins on a support grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and / or a ligand specific for human immunoglobulins polyclonal anti-B, b) setting aside the unadsorbed fraction for possible future use, and
  • compositions for therapeutic use according to the invention is based on a specific adsorption step of anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins on a substrate grafted with a specific ligand of these immunoglobulins, which are then eluted.
  • a specific adsorption step of anti-A and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins on a substrate grafted with a specific ligand of these immunoglobulins which are then eluted.
  • the process for the preparation of the compositions for therapeutic use according to the invention can be integrated into a more general method for the purification of therapeutic normal human immunoglobulins (recovery of fractions which have been eliminated up to now) and can therefore be implemented on a fraction of pre-purified polyclonal human immunoglobulins.
  • This prepurified polyclonal human immunoglobulin fraction advantageously contains a polyclonal human immunoglobulin content of at least 80%, advantageously at least 81%, at least 82%, more preferably at least 83%, at least 84%, even more preferably at at least 85%, at least 86%, at least 87% at least 88%, at least 89% or at least 90%, at least 91%, or at least 92% by weight of the total protein of the fraction.
  • the fraction of prepurified polyclonal human immunoglobulins may in particular have been obtained by chromatographic separation, in particular according to the purification methods of polyclonal human immunoglobulins described in WO99 / 64462 and WO02 / 092632, and more particularly in WO02 / 092,632.
  • the prepurified polyclonal human immunoglobulin fraction is obtained by pre-purification by a step of precipitation of lipid contaminants from a blood plasma or an IgG-enriched blood plasma fraction, and a single chromatography step on an anion exchange resin carrier carried out at alkaline pH, with a selective elution of IgG in one step by an appropriate buffer at a pH of between 4 and 7.
  • the prepurification by a step of precipitation of lipid contaminants consists of a step precipitation with caprylic acid.
  • the prepurified polyclonal human immunoglobulin fraction may also have undergone a biological safety step (viral elimination and / or inactivation). viral, in particular by a solvent-detergent treatment), a concentration step (in particular by ultrafiltration), and / or a sterilizing filtration step.
  • the support may be any suitable support capable of being chosen by those skilled in the art for adsorbing polyclonal human anti-A and / or anti-B immunoglobulins. .
  • Such a support used in step a) is advantageously in the form:
  • a polymeric membrane grafted with the ligand or ligands of interest.
  • the support may thus in particular be in the form of particles grafted by the ligand or ligands of interest.
  • the particles are advantageously of spherical or oblong shape, they may especially be balls. These particles generally have an average size of about 0.1 ⁇ to about 1000 ⁇ , preferably about 20 to about 50 ⁇ , more preferably about 50 to about 200 ⁇ , more preferably about 70 ⁇ . ⁇ at about 120 ⁇ in diameter. They may consist of polymer or inorganic materials (such as silica or glass for example).
  • the particles are porous.
  • the polymer may be natural or non-natural (synthetic or semisynthetic), organic or inorganic (preferably the polymer will be organic), crosslinked or uncrosslinked (preferably the polymer will be crosslinked).
  • the polymer is a crosslinked organic polymer.
  • the polymer may especially be chosen from cellulose and its derivatives, agarose, dextran, polyacrylates, polystyrene, polyacrylamide, polymethacrylamide, copolymers of styrene and divinylbenzene, or mixtures of these polymers.
  • the polymer is cellulose, and the particles are preferably porous cellulose beads. More preferably, it is crosslinked cellulose.
  • the support may also be in the form of a polymeric membrane, the membrane being grafted with the ligand or ligands of interest.
  • the polymer of the membrane may be selected from the polymers mentioned above for the polymer particles.
  • the particles are advantageously incorporated in a gel or a resin, which is used as a matrix of an affinity chromatography column.
  • the polymeric membrane can be included in an affinity chromatography column.
  • the human plasma batch or the human plasma fraction enriched in polyclonal human immunoglobulins are then adsorbed on the affinity chromatography column, and the adsorbed fraction is eluted and recovered.
  • an affinity chromatography column is not essential, and other modes of adsorption, dissociation and harvesting may be used.
  • the specific ligand for anti-A polyclonal human immunoglobulins may be any appropriate molecule known to those skilled in the art and binding to anti-A polyclonal human immunoglobulins such as as defined above and not binding to other immunoglobulins.
  • Such a ligand is advantageously chosen from oligosaccharides representative of group A, type 1, 2, 3 and 4 antigens, and in particular from the following oligosaccharides:
  • Trisaccharide GalNAca1-3 (Fuca1-2) Gal;
  • Type 1 GalNAca1-3 (Fuca1-2) Galp1 -3GlcNAc p1-3Gal,
  • Type 4 GalNAca1-3 (Fuca1-2) Gal 1 -3GalNAc p1-3Gal,
  • Type 1 GalNAca1-3 (Fuca1-2) Gal 1 -3GlcNAc 1 ⁇ 3Gal61 -4Glc
  • Type 2 GalNAca1-3 (Fuca1-2) Gal 1 -4GlcNAc p1-3GalB1 -4Glc
  • Type 3 GalNAca1- 3 (Fuca1-2) Gal 1 -3GalNAc has 1-3GalB1 -4GlcNAc
  • Type 4 GalNAca1-3 (Fuca1-2) Gal61 -3GalNAc 61-3Gala1-4Gal.
  • the specific ligand for anti-B polyclonal human immunoglobulins may be any appropriate molecule known to those skilled in the art and binding to anti-B polyclonal human immunoglobulins such as as defined above and not binding to other immunoglobulins.
  • Such a ligand is advantageously chosen from oligosaccharides representative of group B antigens of type 1, 2, 3 and 4, and in particular from the following oligosaccharides:
  • Trisaccharide Gala1-3 (Fuca1-2) Gal;
  • Pentasaccharides o Type 1: Gala1 -3 (Fuca1 -2) Galp1 -3GlcNAc p1 -3Gal,
  • Type 3 Gala1 -3 (Fuca1 -2) G1 -3GalNAc a1 -3GalB1 -4GlcNAc
  • o Type 4 Gala1 -3 (Fuca1-2) Gal61 -3GalNAc 61 -3Gala1 -4Gal.
  • the support may be grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and / or with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • the support is grafted only by a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins.
  • the support is grafted only by a specific ligand of anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • the support is grafted with a specific ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • a mixture of supports grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and supports grafted with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins in respective proportions generally between 25/75 ( v / v) and 75/25 (v / v), and in particular 50/50 (v / v).
  • particles grafted with the ligand (s) of interest when particles grafted with the ligand (s) of interest are used, it is possible to use a mixture of particles grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and particles grafted with a ligand specific for anti-human polyclonal immunoglobulins. -B to prepare a gel and fill an affinity chromatography column.
  • the particles grafted with a specific ligand of the anti-A polyclonal human immunoglobulins and the particles grafted with a specific ligand of anti-B polyclonal human immunoglobulins are mixed in respective proportions generally between 25/75 (v / v).
  • v / v 75/25 (v / v), and especially 50/50 (v / v).
  • a support comprising particles grafted with both a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • a mixture it is also possible to use a mixture:
  • Particles grafted at the same time by a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and by a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins and Particles grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and / or particles grafted with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • the ligand of interest is advantageously grafted on the polymer particles or on the polymeric membrane by means of a spacer, which makes it possible to reduce the steric hindrance and make the trisaccharide characteristic of antigens A or B more accessible to immunoglobulins likely to adsorb on the support.
  • Such a spacer may be any appropriate group known to those skilled in the art to allow the grafting of the ligand of interest and therefore in particular of oligosaccharides on a support of interest, in particular the polymers described above.
  • the spacer typically comprises at least one atom of C, O, N, or S, and will most often comprise at least one of the following chemical functions: ether (-), thioether (-S-), amino (-NH-) , carboxy - (- COO- or -OCO-), amide (-CONH- or -HNOC-).
  • the spacer may in particular have a structure chosen from:
  • each of X1 and X2 is independently selected from 0, S, and NH; and each of Ra, Rb, Rc, and Rd is independently selected from H, OH, and methyl.
  • R1 is a C4-C6 alkyl group
  • R2 is a C3-C8 alkyl group
  • said spacer is bonded by its amine function (in bold) above) to the support.
  • R1 is a linear or branched, preferably linear, C4-C6 alkyl group.
  • R 1 is a C 5 alkyl group.
  • R2 is a linear or branched, preferably linear, C3-C8 alkyl group.
  • R2 is a C3 alkyl group.
  • the ligands (which are preferably trisaccharides as described above) are grafted to the particles or to the membrane by a spacer according to the formula: (particle / membrane) -NH-C5Hio-CO-NH -C3H6- (ligand).
  • the coupling between the particle or the membrane and the spacer, on the one hand, and the coupling between the spacer and the specific ligand of the anti-A polyclonal human immunoglobulins or the specific ligand of the anti-B polyclonal human immunoglobulins can be realized. by any appropriate chemical synthesis protocol known to those skilled in the art.
  • the particle or membrane may carry an -NH-R1 -COOH arm.
  • it is ⁇ -aminocaproic acid (where R 1 is a pentyl group).
  • the particle can then be activated using bifunctional reagents such as epichlorohydrin, epibromohydrin, dibromo- and dichloropropanol, dibromobutane, ethylene glycol diglycidylether, butanediol diglycidylether, divinylsulfone, and the like. allyl glycidyl ether, and allyl bromide.
  • the bifunctional reagent is capable of reacting with both the particles / membrane and the NH-R1 -COOH arm.
  • the heterofunctional allyl compounds such as allyl bromide, are preferred bifunctional reagents and make it possible to obtain an activated matrix.
  • the ligands representing the blood group A and / or B antigens are then immobilized on the activated particle / membrane carrying the -NH-R1 -COOH arm via a linker group -NH-R2-, where R2 is a C3 alkyl group. -C8, linear or branched, preferably linear.
  • the COOH function of the -NH-R1 -COOH arm carried by the particle / membrane is reacted with the NH 2 function of the NH 2 -R 2 -ligosaccharide ligand, by the use of a type of condensation agent.
  • substrates grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins which may be used in the context of the invention are the following: Glycosorb ABO A (Sepharose matrix on which is grafted the trisaccharide characteristic of the antigen A, Glycorex Transplantation AB, Lund, Sweden), Allotran A (trisaccharide characteristic of matrix A antigen) FF Sepharose by polyacrylamide, Lectinity Corp), HyperCel IsoA (crosslinked cellulose particles grafted with the trisaccharide characteristic of antigen A, Pall).
  • Glycosorb ABO A Sepharose matrix on which is grafted the trisaccharide characteristic of the antigen A, Glycorex Transplantation AB, Lund, Sweden
  • Allotran A trisaccharide characteristic of matrix A antigen
  • FF Sepharose by polyacrylamide Lectinity Corp
  • HyperCel IsoA crosslinked cellulose particles grafted with the
  • substrates grafted with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins which may be used in the context of the invention are the following: Glycosorb ABO B (Sepharose matrix on which is grafted the trisaccharide characteristic of antigen B, Glycorex Transplantation AB, Lund, Sweden), Allotran B (trisaccharide characteristic of poly-Fr-substituted Sepharose FF matrix-bound antigen, Lectinity Corp), HyperCel IsoB (trisaccharide-grafted crosslinked cellulose particles characteristic of B-antigen) , Pall).
  • Glycosorb ABO B Sepharose matrix on which is grafted the trisaccharide characteristic of antigen B, Glycorex Transplantation AB, Lund, Sweden
  • Allotran B trisaccharide characteristic of poly-Fr-substituted Sepharose FF matrix-bound antigen, Lectinity Corp
  • a substrate ligated with a specific ligand of anti-A polyclonal human immunoglobulins and with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins a mixture of a polyclonal human immunoglobulin-specific ligand-specific support will generally be used.
  • anti-A as described above and a specific ligand-grafted anti-B polyclonal human immunoglobulin support as described above.
  • particles grafted with the ligand (s) of interest when particles grafted with the ligand (s) of interest are used, it is possible to use a mixture of particles grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and particles grafted with a ligand specific for anti-human polyclonal immunoglobulins. -B to prepare a gel and fill an affinity chromatography column. It is also possible to use particles grafted with both a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins to prepare a gel and fill an affinity chromatography column. It is also possible to use a mixture:
  • Particles grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and / or particles grafted with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins Particles grafted with a ligand specific for anti-A polyclonal human immunoglobulins and / or particles grafted with a ligand specific for anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • the batch of human plasma or the fraction of human plasma enriched in polyclonal human immunoglobulins is adsorbed in step a) on the chromatography column.
  • the batch of human plasma or the fraction of human plasma enriched in polyclonal human immunoglobulins on the column may in particular be implemented.
  • the unadsorbed fraction is advantageously recovered for other subsequent uses.
  • the adsorbed fraction is then dissociated and recovered using one or more washes of the column by one or more appropriate elution buffers.
  • An acidic elution buffer for example a glycine-HCl buffer, pH between 2 and 4
  • a basic elution buffer for example a glycine-NaOH solution, pH between 10 and 12
  • composition thus obtained may also be subjected to one or more subsequent optional steps, such as: a step of neutralization of the composition (pH adjustment between 3 and 9, preferably between 4 and 5), one or more additional purification steps a concentration step (for example by ultrafiltration), at least one inactivation step (solvent-detergent treatment for example) or viral elimination (nanofiltration for example), or a combination of several of these steps.
  • a step of neutralization of the composition pH adjustment between 3 and 9, preferably between 4 and 5
  • additional purification steps a concentration step (for example by ultrafiltration), at least one inactivation step (solvent-detergent treatment for example) or viral elimination (nanofiltration for example), or a combination of several of these steps.
  • the method as described above makes it possible to obtain a polyclonal human immunoglobulin composition which recognizes at least 80%, at least 81%, at least 82%, at least 83%, at least 84%, advantageously at least 85%. % at least 86%, at least 87%, more preferably at least 88%, at least 89%, still more preferably at least 90%, at least 91%, at least 92% at least 93%, at least 94%, or at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% by weight of the polyclonal human immunoglobulins present in the composition of the blood group A and B antigens.
  • the purified composition then comprises a mixture of human immunoglobulins.
  • polyclonal anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins are polyclonal anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • the proportion of polyclonal human anti-A immunoglobulins and anti-B polyclonal human immunoglobulins depends on the initial donor population. In fact, differences in the percentage of distribution of the different blood groups exist according to the donor populations. These variations can therefore be found in the anti-A polyclonal human immunoglobulin compositions and / or anti-B polyclonal human immunoglobulins according to the invention.
  • step a) When the support used in step a) is grafted solely by a specific ligand of anti-A polyclonal human immunoglobulins, anti-A polyclonal human immunoglobulins are retained, and the composition obtained then comprises anti-A polyclonal human immunoglobulins.
  • the support used in step a) is grafted solely by a specific ligand of anti-B polyclonal human immunoglobulins, anti-B polyclonal human immunoglobulins are retained, and the composition obtained then comprises polyclonal human immunoglobulins anti-B B.
  • the invention furthermore relates to a composition obtainable by one of the preparation methods described above, for its use as a medicament, in particular in the treatment of autoimmune diseases (in particular autoimmune peripheral thrombocytopenia) and / or polycythemia (primitive or secondary).
  • a first composition of polyclonal human immunoglobulins according to the invention, enriched with anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins was prepared.
  • a purified polyclonal human immunoglobulin composition was prepared from a plasma pool according to the method described in WO02 / 092632.
  • This purified polyclonal human immunoglobulin composition was then adsorbed onto a gel-filled 1 mL affinity chromatography column comprising a mixture of porous crosslinked cellulose beads grafted with the trisaccharide characteristic of group A antigens (column A). and porous crosslinked cellulose beads grafted with the trisaccharide characteristic of Group B antigens (column B), in respective proportions of 50/50.
  • the charge was 1.8 kg of purified polyclonal human immunoglobulin composition per liter of gel.
  • the contact time was set at 2 minutes.
  • the unadsorbed fraction is recovered for further processing to prepare a polyclonal human immunoglobulin therapeutic concentrate free of anti-A and anti-B polyclonal human immunoglobulins.
  • fraction of interest in the context of the present invention is then obtained by assembling two elution fractions:
  • composition was then analyzed by the usual technologies to determine the concentration of IgG, IgA and IgM, the levels of polymers, dimers, monomers and immunoglobulin fragments.
  • the anti-A and anti-B activity of the composition was also analyzed by the method described in WO2007 / 077365 and compared to that of a freeze-dried normal human immunoglobulin.
  • IgG 9.20 g / L (Subclasses: IgG1: 65%, IgG2: 30%, IgG3: 3%, IgG4: 2%)
  • the assembly fraction of the two successive elutions with an acid buffer and then with a basic buffer has the following characteristics:
  • the anti-A activity and the anti-B activity are expressed in arbitrary units relative to a freeze-dried normal human immunoglobulin, a product considered as a reference level set to 1.
  • the freeze-dried normal human immunoglobulin therefore exhibits for the A and anti-B a negative result in the Coombs direct dilution test 1/64 as required by the Regulatory authorities.
  • the composition obtained by the method according to the invention has an anti-A activity and an anti-B activity approximately 600 times greater than the polyvalent normal human immunoglobulins of freeze-dried normal human immunoglobulin (therapeutic concentrate of polyclonal human immunoglobulins).
  • mice are further injected with AB group human red blood cells and anti-polyclonal immunoglobulins.
  • -A and anti-B see Figure 1.
  • the C57BL / 6J test mice (groups 2-5) were injected with ⁇ g / 20g body weight of anti-CD41 antibody which depletes the platelets (MW Reg 30 clone, # 3214555, BD Biosciences, San Jose, CA, USA), diluted in 100 ⁇ l / 20 g body weight of PBS (# 14190-094 Invitrogen, France) (the amount and volume of injection were adapted according to the weight of the mice) intraperitoneally (ip) days 1 to 5.
  • mice (group 1) were injected with saline (0.09% NaCl). Preparation and administration of IVIG
  • IVIG (LFB) was diluted in PBS1X at the working concentration of 100 mg / mL (1 g / kg).
  • Group AB + human red blood cells in isotonic glucose NaCl solution were diluted 1: 4 in 0.09% NaCl (300 ⁇ l + 100 ⁇ l) and administered to 3-5 groups intravenously at day 2; 3h after the blood collection for hematological analysis (corresponding to 8 hours after the injection of anti-CD41 at day 2).
  • the human anti-A / anti-B antibodies were prepared at the required dose (injection of 100 ⁇ l of anti-A anti-B at 7.5 mg / kg in 0.1 M glycine at pH 6) and administered in group 4 by intraperitoneal route at day 2, 30 minutes after injection of human red blood cells (corresponding to 8:30 after the injection of anti-CD41 at day 2).
  • Blood 50 ⁇ was collected daily by retroperitoneal puncture under anesthesia with 3% isoflurane (DDG9623, # 11 K10A33, Baxter, France), in tubes (containing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), vacutainer, Becton Dickinson ) for all animals included in the study, 1 h before (only at day 1) and 5 h after the injection of anti-CD41.
  • DDG9623 ethylenediaminetetraacetic acid
  • vacutainer containing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), vacutainer, Becton Dickinson ) for all animals included in the study, 1 h before (only at day 1) and 5 h after the injection of anti-CD41.
  • Blood was homogenized and blood cell composition determined using a 5-part differential hematological analyzer (MS9-5 Melet Schloesing Laboratories).
  • Platelet depletion which reflects the extent of thrombocytopenic purpura, was analyzed with a hematological analyzer.
  • Winiarski J Platelet antigens in varicella associated thrombocytopenia. Arch Dis Child. 1990 Jan; 65 (1): 137-9.

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Abstract

La présente invention concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament, notamment dans le traitement des polyglobulies et/ou des maladies autoimmunes, et en particulier des thrombopénies périphériques autoimmunes.

Description

COMPOSITION ENRICHIE EN IMMUNOGLOBULINES POLYCLONALES ANTI-A ET/OU ANTI-B POUR SON UTILISATION DANS LE TRAITEMENT DES MALADIES
AUTOIMMUNES OU DES POLYGLOBULIES
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention se situe dans le domaine des concentrés thérapeutiques d 'immunoglobulines polyclonales. Elle concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation dans le traitement des maladies autoimmunes (en particulier du purpura thrombopénique idiopathique), et/ou dans le traitement des polyglobulies.
ART ANTERIEUR
Les immunoglobulines humaines normales (immunoglobulines humaines polyvalentes purifiées à partir de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs) sont utilisées dans le traitement de pathologies de plus en plus nombreuses. Elles sont notamment utilisées comme traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires (déficits congénitaux) ou secondaires (leucémie lymphoïde chronique, myélome, infections après greffe de moelle osseuse, infections bactériennes récidivantes chez l'enfant infecté par le VIH) avec défaut de production d'anticorps. Elles sont également utilisées en tant que traitement immunomodulateur dans différentes pathologies autoimmunes, telles que le purpura thrombopénique idiopathique (PTI), la rétinochoroïdite de Birdshot, le syndrome de Guillain-Barré, la neuropathie motrice multifocale (NMM), les polyradiculonévrites inflammatoires démyélinisantes chroniques (PIDC), ou dans la maladie de Kawasaki.
Cette utilisation grandissante nécessite un approvisionnement toujours plus important en immunoglobulines humaines normales. Cela conduit à l'utilisation de pools toujours plus grands de donneurs. Une proportion non négligeable des donneurs est de groupe sanguin O, et leur plasma contient par conséquent des immunoglobulines anti-A et anti- B, dirigées contre les antigènes des groupes sanguins A et B. Par ailleurs, les donneurs de groupe sanguin A possèdent généralement des immunoglobulines anti-B et les donneurs de groupe sanguin B des immunoglobulines anti-A. Seuls les donneurs de groupe sanguin AB ne possèdent pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B, mais ceux-ci sont peu nombreux. Or, lorsque les immunoglobulines anti-A et anti-B sont présentes en proportions trop importantes dans les immunoglobulines humaines normales, celle-ci sont susceptibles de provoquer des hémolyses accidentelles, potentiellement sévères, chez les patients traités porteurs des antigènes A et/ou B.
Par conséquent, les autorités de santé requièrent que les immunoglobulines humaines normales soient testées vis-à-vis de l'activité d'agglutination des hématies des groupes sanguins A et B, et imposent des limites quant à cette activité. Ainsi, selon la pharmacopée européenne, les immunoglobulines humaines normales par voie intraveineuse (IVIG) ne doivent pas présenter d'agglutination des hématies A et B à la dilution 1 /64 d'une solution de concentration initiale de 50 g/l (5%), dans un test d'agglutination directe particulier correspondant à celui développé par Thorpe et collaborateurs (Thorpe et al. Biologicals. 2005 Jun;33(2):111 -6, Thorpe et al. Vox Sang. 2009 Aug;97(2): 160-8 ; Thorpe et al. Pharmeur Bio Sci Notes. 2010 Apr;2010(1 ): 39-50, Pharmacopée européenne, chapitre 2.6.20 tel que révisé par le supplément 7.2 de janvier 2011 ).
Par conséquent, afin d'éviter les hémolyses accidentelles sans réduire les pools de donneurs susceptibles d'être utilisés et de satisfaire les exigences des autorités de santé, les fractionneurs de plasma ont développé des procédés pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de leurs concentrés d'immunoglobulines humaines normales.
Ainsi, WO01 /27623 et WO2007/077365 décrivent l'utilisation de différents supports de chromatographie d'affinité se liant spécifiquement aux immunoglobulines anti-A et anti- B pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de compositions biologiques, notamment de concentrés d'immunoglobulines humaines normales. La fraction non adsorbée ne comprenant pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B est récupérée par percolation, pour traitement et conditionnement ultérieur. La colonne de chromatographie d'affinité anti-A anti-B est ensuite régénérée par un double lavage : un premier lavage acide, suivi d'un deuxième lavage basique. A ce jour, les deux produits issus de chacun des deux lavages sont éliminés. La fraction d'immunoglobulines anti-A et anti-B adsorbée lors de l'étape de chromatographie d'affinité correspond donc aujourd'hui à une fraction perdue.
RESUME DE L'INVENTION
Or, dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont découvert que la fraction actuellement éliminée, fortement enrichie en immunoglobulines anti-A et anti-B pouvait être utilisée dans le traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)), et/ou dans le traitement des polyglobulies.
Une hypothèse pour expliquer l'efficacité de compositions purifiées d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B dans le traitement des maladies autoimmunes et notamment du PTI est que ces immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, administrées à un patient de groupe sanguin A, B ou AB présentant une maladie autoimmune, vont entrer en compétition avec les phénomènes endogènes. Les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B permettraient d'induire une destruction des hématies du patient par un phénomène de phagocytose d'une fraction des hématies et protégeraient ainsi, indirectement, les plaquettes de leur destruction via les macrophages. En effet, les récepteurs Fc des macrophages seraient saturés directement par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, limitant et/ou empêchant ainsi la destruction des plaquettes.
Un deuxième mécanisme possible repose sur une consommation des protéines du complément par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, réduisant l'activité dépendante du complément des auto-anticorps pathogènes. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles le rôle du complément est délétère pour le patient comme par exemple la neuromyélite optique (anti-AQP4) et la sclérose en plaque (anti-myéline/axone).
Un troisième mécanisme possible est une action anti-inflammatoire des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, due à l'inhibition induite lors de leur phagocytose de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoire par les macrophages activés. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles les cellules effectrices exprimant des récepteurs Fc, en particulier le CD16 sont activées et entretiennent un état inflammatoire pathogène chez le patient, ce qui est observé dans un grand nombre de pathologies auto-immunes.
Un phénomène d'immunomodulation est également possible. En effet, un quatrième mécanisme possible repose sur l'action immunomodulatrice des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, qui en limitant la destruction cellulaire, permettent l'induction d'un signal négatif et donc une diminution de la sécrétion d 'autoanticorps par cross-Link entre BCR et FcgRIIb de la cellule B via l'auto-anticorps et l'antigène exprimé à la surface de la cellule cible. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles un autoanticorps pathogène est démontré comme le PTI, l'insulin autoimmune syndrome (IAS) ou maladie d'Hirata (anti-insuline), la neuromyélite optique (anti-AQP4), la maladie de Grave, le pemphigus, la sclérose en plaque (anti-myéline/axone), la chorée Sydenham (anti-protéine neuronale), Sjôgren, Pemphigus vulgaris (anti-desmogléine 3).
Un cinquième mécanisme est l'induction de cytokines anti-inflammatoire comme l'IL1 - RA par les cellules du système immunitaire, les cellules épithéliales et les adipocytes induite par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B. Ce mécanisme s'applique en particulier dans les pathologies inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïde ou par exemple le syndrome de Muckle-Wells et le syndrome de Schnitzler. Dans le cas de polyglobulies, les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B vont directement se fixer sur les hématies des patients de groupe sanguin A, B ou AB et induire ainsi la lyse des hématies surnuméraires. Dans un premier aspect, la présente invention concerne donc une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament.
L'invention concerne également une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament dans le traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)) et/ou dans le traitement des polyglobulies. Avantageusement, les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition.
L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour la préparation d'un médicament, en particulier destiné au traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)) et/ou au traitement des polyglobulies.
L'invention concerne également une méthode de traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)) et/ou des polyglobulies chez un sujet en ayant besoin, comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B.
Avantageusement, ces compositions sont destinées à des patients de groupe sanguin A, B ou AB.
Dans encore un autre mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1 /10 et 10/1. Dans ce cas, la composition est avantageusement destinée à des patients de groupe sanguin A, B ou AB. DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1. Schéma du modèle murin utilisé pour tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI). Les flèches au-dessus de la ligne de temps correspondent aux collectes de sang. Les petites flèches pleines en dessous de la ligne de temps correspondent aux injections d'anticorps anti-CD41 (^g/20g de poids pour chaque souris, en intrapéritonéal). Les flèches longues en pointillé sous la ligne de temps correspondent à l'injection de globules rouges humains AB+ (400 μΐ, intraveineuse), ou à l'injection d'IVIG (2g/kg, en intrapéritonéal) ou d'anti-A/anti-B (7,5 mg/kg, en intrapéritonéal).
Figure 2. Présentation graphique des résultats obtenus, rapportés en pourcentage du jour 1 , sur le modèle murin utilisé pour tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI). Gr1 : groupe 1 , Gr2 : groupe 2, Gr3 : groupe 3, Gr4 : groupe 4, Gr5 : groupe 5.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont découvert que la fraction actuellement éliminée, fortement enrichie en immunoglobulines anti-A et anti-B pouvait être utilisée dans le traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)), et/ou dans le traitement des polyglobulies.
Une hypothèse pour expliquer l'efficacité de compositions purifiées d 'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B dans le traitement des maladies autoimmunes et notamment du PTI est que ces immunoglobulines anti-A et/ou anti-B administrées au patient de groupe sanguin A, B ou AB présentant une maladie autoimmune vont entrer en compétition avec les phénomènes endogènes. Les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B permettraient d'induire une destruction des hématies du patient et protégeraient ainsi, indirectement, les plaquettes de leur destruction via les macrophages. En effet, les récepteurs Fc des macrophages seraient saturés directement par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, empêchant ainsi la destruction des plaquettes. Un deuxième mécanisme possible repose sur une consommation des protéines du complément par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, réduisant l'activité dépendante du complément des auto-anticorps pathogènes. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles le rôle du complément est délétère pour le patient comme par exemple la neuromyélite optique (anti-AOJ ) et la sclérose en plaque (anti-myéline/axone).
Un troisième mécanisme possible est une action anti-inflammatoire des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, due à l'inhibition induite lors de leur phagocytose de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoire par les macrophages activés. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles les cellules effectrices exprimant des récepteurs Fc, en particulier le CD16 sont activées et entretiennent un état inflammatoire pathogène chez le patient, ce qui est observé dans un grand nombre de pathologies auto-immunes.
Un phénomène d'immunomodulation est également possible. En effet, un quatrième mécanisme possible repose sur l'action immunomodulatrice des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, qui en limitant la destruction cellulaire, permettent l'induction d'un signal négatif et donc une diminution de la sécrétion d 'autoanticorps par cross-link entre BCR et FcgRIIb de la cellule B via l'auto-anticorps et l'antigène exprimé à la surface de la cellule cible. Ce mécanisme s'applique à toutes les pathologies auto-immunes pour lesquelles un autoanticorps pathogène est démontré comme le PTI, l'insulin autoimmune syndrome (IAS) ou maladie d'Hirata (anti-insuline), la neuromyélite optique (anti-AQP4), la maladie de Grave, le pemphigus, la sclérose en plaque (anti-myéline/axone), la chorée Sydenham (anti-protéine neuronale), Sjôgren, Pemphigus vulgaris (anti-desmogléine 3).
Un cinquième mécanisme est l'induction de cytokines anti-inflammatoire comme l'IL1 - RA par les cellules du système immunitaire, les cellules épithéliales et les adipocytes induite par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B. Ce mécanisme s'applique en particulier dans les pathologies inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïde ou par exemple le syndrome de Muckle-Wells et le syndrome de Schnitzler.
Dans le cas de polyglobulies, les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B vont directement se fixer sur les hématies des patients de groupe sanguin A, B ou AB et induire ainsi la lyse des hématies surnuméraires.
Définitions
Par « anticorps » ou « immunoglobuline », on entend une molécule comprenant au moins un domaine de liaison à un antigène donné et un domaine constant comprenant un fragment Fc capable de se lier aux récepteurs FcR.
Par « immunoglobulines humaines polyclonales », on entend une composition d'immunoglobulines humaines dirigées contre de nombreux antigènes distincts, et comprenant, pour chaque antigène reconnu, une pluralité d'immunoglobulines distinctes capables de reconnaître ledit antigène, généralement au niveau de plusieurs épitopes distincts. De telles immunoglobulines humaines polyclonales sont généralement purifiées à partir du plasma d'un ou de préférence de plusieurs donneurs (on parle alors d'un pool de donneurs). Les immunoglobulines humaines normales thérapeutiques sont ainsi purifiées à partir de pools de plasma de généralement au moins 1000 donneurs. Par « immunoglobulines humaines polyclonales anti-A » ou « immunoglobulines anti-A », on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A. Les « antigènes du groupe sanguin A » ou « antigènes A » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant une N-acétylgalactosamine (abrégé dans la présente description en « GalNAc ») liée à un galactose (abrégé dans la présente description en « Gai »), lui-même lié à un fucose (abrégé dans la présente description en « Fuc »), selon la séquence suivante : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal.
Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène A, comme indiqué dans le Tableau 1 ci-dessous pour les antigènes A de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis.
Tableau 1. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin A.
GalNAc : N-acétylgalactosamine, Fuc : fucose, Gai : galactose, GlcNAc : N- acétylglucosamine, Glc : glucose, R : support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe A est indiqué en gras.
Par « immunoglobulines humaines polyclonales anti-B » ou « immunoglobulines anti-B », on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B. Les « antigènes du groupe sanguin B » ou « antigènes B » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant un premier galactose lié à un second galactose, lui-même lié à un fucose, selon la séquence suivante : Galal - 3(Fuca1 -2)Gal.
Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène B, comme indiqué dans le Tableau 2 ci-dessous pour les antigènes B de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis.
Tableau 2. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin B.
GalNAc : N-acétylgalactosamine, Fuc : fucose, Gai : galactose, GlcNAc : N- acétylglucosamine, Glc : glucose, R : support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe B est indiqué en gras. Par « fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales », on entend toute fraction du plasma humain susceptible d'être obtenue par fractionnement du plasma humain et dont le pourcentage en poids des immunoglobulines polyclonales par rapport aux protéines totales de la fraction, est supérieur à celui du plasma humain. De telles fractions sont avantageusement obtenues par fractionnement de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs. Elles peuvent notamment inclure toute partie ou sous-partie du plasma, ayant fait l'objet d'une ou plusieurs étapes de purification et notamment, le surnageant de plasma cryoprécipité, le cryoprécipité de plasma (remis ou non en suspension), les fractions I à V obtenues par fractionnement éthanolique (selon la méthode de Cohn ou de Kistler & Nitschmann), le surnageant et le précipité obtenus après précipitation à l'acide caprylique et/ou au caprylate, les filtrats, ou toute fraction enrichie en immunoglobulines (éluats de chromatographies et/ou fractions non adsorbées) par séparation chromatographique, comme décrit notamment dans W099/64462 et WO02/092632, et plus particulièrement dans WO02/092632.
Par « ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes du groupe sanguin A. Par « oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin A », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin A tel que défini ci-dessus : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes du groupe sanguin A définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide GalNAcal - 3(Fuca1 -2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe A de type 1 , 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal :
• Tétrasaccharides :
o Type 1 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Galp1 -3GlcNAc,
o Type 2 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Galp1 -4GlcNAc,
o Type 3 ou 4 : GalNAcal -3(Fuca1-2)Gai i -3GalNAc
• Pentasaccharides :
o Type 1 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Galp1 -3GlcNAc p1 -3Gal,
o Type 2 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -4GlcNAc p1 -3Gal,
o Type 3 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc a1 -3Gal,
o Type 4 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc p1 -3Gal,
• Hexasaccharides :
o Type 1 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GlcNAc p1 -3GalB1 -4Glc, o Type 2 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -4GlcNAc p1 -3GalB1 -4Glc, o Type 3 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc a1-3GalB1 -4GlcNAc, o Type 4 : GalNAcal -3(Fuca1 -2)Galp1 -3GalNAc i-3Gala1 -4Gal. L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique GalNAcal -3(Fuca1 -2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe A de type 1 , 2, 3 ou 4 décrits ci- dessus.
Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A est le trisaccharide caractéristique GalNAcal -3(Fuca1 - 2)Gal.
Par « ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes du groupe sanguin B. Par « oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin B », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin B tel que défini ci-dessus : Galal -3(Fuca1 -2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes du groupe sanguin B définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide Galal - 3(Fuca1 -2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1 , 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique Galal -3(Fuca1 -2)Gal :
• Tétrasaccharides :
o Type 1 : Galal -3(Fuca1-2)Gal 1 -3GlcNAc,
o Type 2 : Galal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -4GlcNAc,
o Type 3 ou 4 : Gala1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc
• Pentasaccharides :
o Type 1 : Galal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GlcNAc p1-3Gal,
o Type 2 : Galal -3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc 1~3Gal,
o Type 3 : Galal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc a1-3Gal,
o Type 4 : Gala1-3(Fuca1-2)Gai i -3GalNAc i-3Gal,
• Hexasaccharides :
o Type 1 : Galal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GlcNAc 1^3Gal61 -4Glc,
o Type 2 : Galal -3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc 1^3Gal61 -4Glc,
o Type 3 : Galal -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc a1-3GalB1 -4GlcNAc, o Type 4 : Galal -3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc i-3Gala1 -4Gal.
L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique Galal -3(Fuca1 -2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1 , 2, 3 ou 4 décrits ci- dessus. Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B est le trisaccharide caractéristique Galal -3(Fuca1 -2)Gal.
Dans toute la présente description, une référence à « un » ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B inclut la possibilité d'utiliser soit un seul type de ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti- A ou anti-B (c'est-à-dire que tous les ligands greffés sur le support ont la même structure chimique), soit plusieurs types de ligands distincts (c'est-à-dire de structure chimique différente) spécifique(s) des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B. En revanche, il convient de comprendre que chaque ligand de structure chimique donnée susceptible d'être utilisé est nécessairement greffé plusieurs fois sur le support, de façon à ce que les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B puissent être retenues par le support. L'homme du métier sait quelle densité de ligand doit être utilisée pour permettre une adsorption des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B sur le support.
Par « maladie autoimmune » on entend toute maladie résultant d'un dysfonctionnement du système immunitaire qui s'attaque aux constituants normaux de l'organisme, ou « auto-antigènes ». Les maladies autoimmunes peuvent être spécifiques d'organes ou systémiques et regroupent notamment les thrombopénies périphériques autoimmunes (et en particulier le purpura thrombopénique idiopathique (PTI)), la rétinochoroïdite de Birdshot, le syndrome de Guillain-Barré, la neuropathie motrice multifocale (NMM), les polyradiculonévrites inflammatoires démyélinisantes chroniques (PIDC), la maladie de Kawasaki, la Maladie de Basedow (hyperthyroïdie), la thyroïdite chronique de Hashimoto (hypothyroïdie), le lupus érythémateux disséminé (LED), le syndrome de Goodpasture, le pemphigus (notamment le Pemphigus vulgaris (anti-desmogléine 3)), la myasthénie, le diabète par insulinorésistance, l'anémie hémolytique auto-immune, la polyarthrite rhumatoïde, la sclérodermie, la polymyosite, la dermatomyosite, l'anémie de Biermer, la maladie de Gougerot-Sjsgren, la glomérulonéphrite, la maladie de Wegener, la maladie de Horton, la périartérite noueuse, le syndrome de Churg et Strauss, la maladie de Still, la polychondrite atrophiante, la maladie de Behçet, la sclérose en plaques (SEP, anti-myeline/axone), la spondylarthrite, la maladie de Crohn, la neuromyélite optique (anti-AQP4), l'insulin autoimmune syndrome (IAS), la maladie d'Hirata (antiinsuline), la maladie de Grave, la chorée Sydenham (anti-protéine neuronale), Sjôgren, le syndrome de Muckle-Wells ou le syndrome de Schnitzler.
Par « thrombopénie » ou « thrombocytopénie », on entend une diminution du nombre de plaquettes sanguines en dessous du seuil de 150 000 plaquettes par mm3 ou une diminution de 50 % par rapport au niveau de référence d'un sujet. La thrombopénie est dite « sévère » si le nombre de plaquettes sanguines passe en dessous du seuil de 100 000 plaquettes par mm3.
Par « thrombopénies périphériques autoimmunes » on entend une thrombopénie liée à une destruction immunologique des plaquettes. Cette destruction implique généralement la synthèse par les lymphocytes B du sujet d 'immunoglobulines dirigées contre des antigènes exprimés par les plaquettes, qu'il s'agisse d'antigènes naturels des plaquettes ou d'antigènes infectieux exprimés sur les plaquettes au cours d'une infection. Les plaquettes, revêtues d 'immunoglobulines, sont alors détruites par les cellules effectrices du système immunitaire, et notamment par les macrophages.
Les thrombopénies périphériques autoimmunes incluent notamment :
• le purpura thrombopénique idiopathique (PTI).
Cette maladie autoimmune est caractérisée par la production d 'immunoglobulines antiplaquettes (autoanticorps) chez des sujets normalement sains et ne prenant aucun médicament. L'origine immunologique est affirmée par la présence d'une quantité importante d'immunoglobulines (autoanticorps) à la surface des plaquettes (voir Cines et al. N Engl J Med. 2002 Mar 28;346(13):995-1008).
• le purpura thrombopénique infectieux.
Le mécanisme est similaire à celui du PTI mais l'infection causale est parfaitement identifiée, les immunoglobulines se liant aux plaquettes du fait de leur expression d'un antigène infectieux (voir notamment Winiarski J et al. Arch Dis Child. 1990 Jan;65(1 ): 137-9 dans le cas de la varicelle ; et Kelton et al. J Clin Invest. 1983 Apr;71 (4):832-6 dans le cas de la malaria).
· le purpura thrombopénique médicamenteux immunoallergique.
L'origine de ce purpura thrombopénique est liée à une réaction à un médicament. De nombreux médicaments sont susceptibles de causer ce type de purpura thrombopénique (voir notamment Aster et al. N Engl J Med. 2007 Aug 9;357(6):580-7).
· le purpura thrombopénique néonatal.
Ce purpura thrombopénique est lié soit à un passage transplacentaire d'anticorps de purpura thrombopénique idiopathique chronique, soit à une incompatibilité fœto-maternelle ayant conduit à la formation d'anticorps anti- HPA (Human Platelet Antigen) (voir Peterson et al. Br J Haematol. 2013 Apr;161 (1 ):3-14).
Par « polyglobulie », on entend une augmentation anormale du volume total pris par les globules rouges dans le sang. La polyglobulie est donc un excès de globules rouges, qui rend le sang plus visqueux et peut provoquer des désordres vasculaires. Parmi les polyglobulies, on distingue :
- les polyglobulies primitives (également appelées polyglobulies primaires), dues à un fonctionnement exacerbé de la moelle osseuse qui produit les globules rouges, causé généralement par une maladie de la moelle osseuse comme la maladie de Vaquez aussi appelée polyglobulie essentielle, et
les polyglobulies secondaires à une hypoxie ou à une sécrétion et/ou injection inappropriée d'érythropoïétine. Par « traitement », on entend une amélioration constatée au niveau clinique ou biochimique de la pathologie du patient. Dans le cadre d'une thrombopénie, cela peut notamment être constaté par une augmentation du nombre de plaquettes sanguines après traitement par rapport au nombre de plaquettes avant traitement. Dans le cadre d'une polyglobulie, cela peut notamment être constaté par une diminution du nombre d'hématies après traitement par rapport au nombre d'hématies avant traitement.
Par « association avec un autre agent thérapeutique » on entend l'administration de la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici avec un ou plusieurs autre(s) agent(s) thérapeutique(s), en particulier avec un ou plusieurs médicaments utiles dans le traitement d'une maladie autoimmune et/ou d'une polyglobulie, de façon simultanée ou séquentielle. Par « administration simultanée », on entend aussi bien l'administration sous forme d'une unique formulation pharmaceutique associant la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et un ou plusieurs autre(s) agent(s) thérapeutique(s), que l'administration séparée d'au moins deux formulations pharmaceutiques distinctes contenant l'une la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et la ou les autre(s) formulation(s) contenant le ou les autre(s) agent(s) thérapeutique(s), en même temps ou à très faible intervalle (au maximum 1 heure). Par « administration séquentielle », on entend l'administration séparée d'au moins deux formulations pharmaceutiques distinctes contenant l'une la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et la ou les autre(s) formulation(s) contenant le ou les autre(s) agent(s) thérapeutique(s) à plus d'une heure d'intervalle. Compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour leur utilisation comme médicament
Contenu des compositions
La présente invention concerne une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament.
L'invention concerne également une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoimmune et/ou dans le traitement des polyglobulies.
L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour la préparation d'un médicament, en particulier destiné au traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)) et/ou au traitement des polyglobulies.
L'invention concerne également une méthode de traitement des maladies autoimmunes (notamment du purpura thrombopénique idiopathique (PTI)) et/ou des polyglobulies chez un sujet en ayant besoin, comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B.
Dans un mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1 /10 et 10/1.
Dans un mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 2/1 et 10/1. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 1 /10 et 1 /2.
Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est équilibrée dans les deux types d'immunoglobulines, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 3/10 et 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10.
Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A selon l'invention peut posséder une activité anti-A enrichie d'un facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 7000, au moins 8000, au moins 9000, voire au moins 10000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM (European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare).
Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B selon l'invention peut posséder une activité anti-B enrichie d'un facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 7000, au moins 8000, au moins 9000, au moins 10000, au moins 11000, au moins 12000, au moins 13000, au moins 14000, au moins 15000, au moins 16000, au moins 17000, au moins 18000, voire au moins 19000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM. Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition peut comprendre à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et possède un rapport (activité anti-A/ activité anti-B) compris entre 1 /10 et 10/1 , notamment entre 1 /9 et 9/1 , entre 1 /8 et 8/1 , entre 1 /7 et 7/1 , entre 1 /6 et 6/1 , entre 1 /5 et 5/1 , entre 1 /4 et 4/1 , entre 1 /3 et 3/1 , voire entre 1 /2 et 2/1 ou entre 0,6 et 1 ,5.
Le rapport (activité anti-A/ activité anti-B) et le rapport (activité anti-B/ activité anti- A) sont calculés sur la base de résultats d'activité anti-A et anti-B obtenus dans des tests réalisés en parallèle, avec la même méthode de dosage d'activité (notamment l'une de celles décrites ci-dessous, et en particulier la méthode de cytométrie en flux décrite ici) et exprimés en unités arbitraires vis-à-vis du même standard de référence (standard EDQM ref Y0001688 ou médicament immunoglobuline humaine normale lyophilisée).
Le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti- B parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales purifiées peut être mesuré en purifiant la composition par chromatographie d'affinité sur une colonne greffée par des ligands spécifiques des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, et en faisant le rapport entre le poids d'immunoglobulines adsorbées sur la colonne et le poids des immunoglobulines totales. Si la composition n'est pas purifiée en immunoglobulines, une étape préalable de purification des immunoglobulines totales permet ensuite de mesurer le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales.
Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont de préférence purifiées, et les immunoglobulines humaines polyclonales représentent avantageusement au moins 85%, avantageusement au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des protéines totales de la composition. Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent comprendre des immunoglobulines humaines polyclonales d'un seul isotype (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, avantageusement IgG ou IgM, de préférence IgG) ou de plusieurs isotypes. Cependant, dans un mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont majoritairement (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgG. Dans ce cas, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont avantageusement enrichies en immunoglobulines de sous-classe lgG2 par rapport aux concentrés d'immunoglobulines humaines normales. En particulier, les compositions d'IgG à usage thérapeutique selon l'invention sont avantageusement caractérisées en ce qu'au moins 40%, au moins 45%, au moins 50%, au moins 55%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins 75%, voire au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d 'isotype IgG présentes dans la composition sont des immunoglobulines de sous-classe lgG2, avantageusement mesuré par néphélémétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélémétrie, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélémétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes). Alternativement ou en outre, les compositions d'IgG selon l'invention ont avantageusement un ratio en poids lgG2/lgG1 d'au moins 0,8, au moins 0,9, avantageusement au moins 1 , au moins 1 ,1 , au moins 1 ,2, au moins 1 ,3, au moins 1 ,4, au moins 1 ,5, au moins 1 ,6, au moins 1 ,7, au moins 1 ,8, au moins 1 , 9, voire au moins 2, au moins 2,5, au moins 3, au moins 3,1 , au moins 3,2, au moins 3,3, au moins 3,4, au moins 3,5, au moins 3,6, au moins 3,7, au moins 3,8, au moins 3,9, voire au moins 4, avantageusement mesuré par néphélémétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélémétrie, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélémétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes).
Dans un autre mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont majoritairement (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgM.
Les compositions selon l'invention sont purifiées et sont avantageusement concentrées. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont concentrées selon toute technique connue de l'homme du métier, par exemple en utilisant une membrane d'ultrafiltration, une centrifugation, une dialyse, ou plusieurs de ces étapes.
De manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un résultat au test de Coombs indirect (décrit ci-dessous) supérieur à 1 /64, avantageusement supérieur à 1 /128, supérieur à 1 /256, supérieur à 1 /512, supérieur à 1 /1024, supérieur à 1 /2048, voire supérieur à 1 /4096. Par résultat au test de Coombs indirect supérieur à 1 /N, on entend que le résultat du test de Coombs indirect est négatif à une dilution de l'échantillon à 1 /N.
De manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un résultat avec la méthode d'agglutination directe (décrit ci-dessous) supérieur à 1 /64, avantageusement supérieur à 1 /128, supérieur à 1 /256, supérieur à 1 /512, supérieur à 1 /1024, supérieur à 1 /2048, voire supérieur à 1 /4096. Par résultat au test d 'agglutination direct supérieur à 1 /N, on entend que le résultat avec la méthode d 'agglutination directe est négatif à une dilution de l'échantillon à 1 /N.
Notamment, dans un mode de réalisation avantageux, les compositions selon l'invention concentrées présentent une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L, supérieure à 1 ,5 g/L, supérieure à 2 g/L, supérieure à 5 g/L, supérieure à 10 g/L, supérieur à 1 5 g/L, supérieur à 20 g/L, voire supérieur à 50 g/L.
Patients visés Comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique des compositions à usage thérapeutique selon l'invention pour le traitement des maladies autoimmunes repose notamment sur le fait de saturer les macrophages par des hématies revêtues par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées, empêchant ainsi la destruction des plaquettes par ces mêmes macrophages. En effet, les récepteurs Fc des macrophages sont alors saturés par les hématies revêtues par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, empêchant la liaison des plaquettes revêtues d'autres anticorps. Sans liaison aux macrophages, les plaquettes ne sont pas détruites. Pour le traitement des polyglobulies, le rationnel de l'efficacité thérapeutique repose sur la fixation des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées directement aux hématies, entraînant ainsi leur lyse.
Par conséquent, il est avantageux d 'administrer les compositions à usage thérapeutique selon l'invention à des patients dont les hématies sont porteuses des antigènes reconnus par les immunoglobulines de la composition. Ainsi, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont avantageusement destinées à des patients de groupe sanguin A (hématies porteuses d 'antigènes A reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A), B (hématies porteuses d 'antigènes B reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B) ou AB (hématies porteuses d 'antigènes A et B reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B).
En outre, le rationnel de l'efficacité thérapeutique des compositions à usage thérapeutique selon l'invention pour le traitement des maladies autoimmunes repose également sur :
une consommation des protéines du complément par les hématies revêtues d 'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, réduisant l'activité dépendante du complément des auto-anticorps pathogènes permettant de traiter les pathologies auto-immunes pour lesquelles le rôle du complément est délétère pour le patient comme par exemple la neuromyélite optique (anti-AQP4) et la sclérose en plaque (anti-myéline/axone).
une action anti-inflammatoire des hématies revêtues d 'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, due à l'inhibition induite lors de leur phagocytose de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoire par les macrophages activés permettant de traiter les pathologies auto-immunes pour lesquelles les cellules effectrices exprimant des récepteurs Fc, en particulier le CD16 sont activées et entretiennent un état inflammatoire pathogène chez le patient.
- une action immunomodulatrice des hématies revêtues d'immunoglobulines anti- A et/ou anti-B, qui en limitant la destruction cellulaire, permettent l'induction d'un signal négatif et donc une diminution de la sécrétion d 'autoanticorps par cross-link entre BCR et FcgRIIb de la cellule B via l'auto-anticorps et l'antigène exprimé à la surface de la cellule cible permettant de traiter les pathologies auto-immunes pour lesquelles un autoanticorps pathogène est démontré.
une induction de cytokines anti-inflammatoire comme l'IL1 -RA par les cellules du système immunitaire, les cellules épithéliales et les adipocytes induite par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B permettant de traiter les pathologies inflammatoires.
En particulier, lorsque les compositions à usage thérapeutique selon l'invention comprennent à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, elles sont avantageusement destinées à des patients de groupe sanguin A, B ou AB, et notamment de groupe sanguin AB.
Maladies autoimmunes visées
Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des maladies autoimmunes.
Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent notamment être utilisées dans le traitement des thrombopénies périphériques autoimmunes (impliquant une destruction immunologique des plaquettes, PTI notamment), de la rétinochoroïdite de Birdshot, du syndrome de Guillain-Barré, de la neuropathie motrice multifocale (NMM), des polyradiculonévrites inflammatoires démyélinisantes chroniques (PIDC), de la maladie de Kawasaki, de la Maladie de Basedow (hyperthyroïdie), de la thyroïdite chronique de Hashimoto (hypothyroïdie), du lupus érythémateux disséminé (LED), du syndrome de Goodpasture, du pemphigus (notamment le Pemphigus vulgaris (anti- desmogléine 3)), de la myasthénie, du diabète par insulinorésistance, de l'anémie hémolytique auto-immune, de la polyarthrite rhumatoïde, de la sclérodermie, de la polymyosite, de la dermatomyosite, de l'anémie de Biermer, de la maladie de Gougerot-Sjsgren, de la glomérulonéphrite, de la maladie de Wegener, de la maladie de Horton, de la périartérite noueuse, du syndrome de Churg et Strauss, de la maladie de Still, de la polychondrite atrophiante, de la maladie de Behçet, de la sclérose en plaques (SEP, anti-myeline/axone), de la spondylarthrite, de la maladie de Crohn, de la neuromyélite optique (anti-AQP4), de l'insulin autoimmune syndrome (IAS), de la maladie d'Hirata (anti-insuline), de la maladie de Grave, de la chorée Sydenham (anti- protéine neuronale), de Sjôgren, du syndrome de Muckle-Wells ou du syndrome de Schnitzler.
En effet, plusieurs mécanismes permettent d'utiliser la composition selon l'invention pour traiter les maladies autoimmunes.
Avantageusement, les maladies autoimmunes pour lesquelles le rôle du complément est délétère pour le patient comme par exemple la neuromyélite optique (anti-AQP4) et la sclérose en plaque (anti-myéline/axone) peuvent être traitées par la composition selon l'invention grâce au mécanisme de consommation des protéines du complément par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B.
Avantageusement, les maladies autoimmunes pour lesquelles les cellules effectrices exprimant des récepteurs Fc, en particulier le CD16 sont activées et entretiennent un état inflammatoire pathogène chez le patient peuvent être traitées par la composition selon l'invention grâce à l'action anti-inflammatoire des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B.
Avantageusement, les maladies autoimmunes pour lesquelles un autoanticorps pathogène est démontré comme le PTI, l'insulin autoimmune syndrome (IAS) ou maladie d'Hirata (anti-insuline), la neuromyélite optique (anti-AQP4), la maladie de Grave, le pemphigus, la sclérose en plaque (anti-myéline/axone), la chorée Sydenham (antiprotéine neuronale), Sjôgren, Pemphigus vulgaris (anti-desmogléine 3) peuvent être traitées par la composition selon l'invention grâce à l'action immunomodulatrice des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B.
Avantageusement, les maladies autoimmunes de type inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïde ou par exemple le syndrome de Muckle-Wells et le syndrome de Schnitzler peuvent être traitées par la composition selon l'invention grâce au mécanisme d'induction de cytokines anti-inflammatoire comme l'IL1 -RA par les cellules du système immunitaire.
En particulier, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des thrombopénies périphériques autoimmunes, impliquant une destruction immunologique des plaquettes.
En effet, comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique des compositions à usage thérapeutique selon l'invention repose notamment sur le fait de saturer les macrophages par des hématies revêtues par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées, empêchant ainsi la destruction des plaquettes par ces mêmes macrophages. En outre, les mécanismes de consommation des protéines du complément par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, d'action anti-inflammatoire des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, d'action immunomodulatrice des hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, et d'induction de cytokines anti-inflammatoire comme l'IL1 -RA par les cellules du système immunitaire, permettent également d'empêcher la destruction des plaquettes. Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont notamment avantageusement utilisées dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI), du purpura thrombopénique infectieux, du purpura thrombopénique médicamenteux immunoallergique, ou du purpura thrombopénique néonatal, et en particulier dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI).
Maladies de type polyglobulies visées
Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des polyglobulies.
En particulier, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des polyglobulies, impliquant une augmentation de la quantité des hématies.
En effet, comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique repose sur la fixation des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées directement aux hématies, entraînant ainsi leur lyse.
Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont notamment avantageusement utilisées dans le traitement des polyglobulies primitives, notamment dans la maladie de Vaquez aussi appelée polyglobulie essentielle, et/ou dans le traitement des polyglobulies secondaires dues à une hypoxie ou à une sécrétion et/ou injection inappropriée d'érythropoïétine. Dosage et administration thérapeutique
Il est important d'utiliser les compositions à usage thérapeutique selon l'invention à un dosage approprié.
En effet, l'administration des compositions selon l'invention implique nécessairement la destruction d'un certain nombre d'hématies (hémolyse), et il convient donc de ne pas surdoser les compositions à usage thérapeutique selon l'invention, de façon à éviter une hémolyse trop importante, qui est également néfaste pour le sujet traité. C'est d'ailleurs la raison pour laquelle les quantités d'immunoglobulines anti-A et anti-B présentes dans les concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines humaines polyclonales sont limitées à des valeurs maximales par les autorités de santé. En particulier, lorsque les concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines humaines polyclonales sont utilisés en traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires ou secondaires avec défaut de production d'anticorps, il convient d'éviter au maximum tout risque d'hémolyse.
Cependant, dans le cas des maladies autoimmunes et notamment des thrombopénies périphériques autoimmunes et/ou des polyglobulies, une hémolyse modérée et contrôlée peut être acceptable et bénéfique pour le patient. Afin d'obtenir une hémolyse modérée, la dose d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B administrée à un patient souffrant d'une polyglobulie et/ou d'une maladie autoimmune, et notamment d'une thrombopénie périphérique autoimmune (en particulier de PTI), devrait de préférence être comprise entre 20 et 100 μg/kg de poids corporel, avantageusement entre 25 et 90 μg/kg de poids corporel, entre 30 et 80 μg/kg de poids corporel, entre 35 et 70 μg/kg de poids corporel, entre 40 et 60 μg/kg de poids corporel, entre 45 et 55 μg/kg de poids corporel, et notamment d'environ 50 μg/kg de poids corporel.
Les doses sont avantageusement adaptées afin d'éviter une hémolyse sévère chez le patient qui pourrait entraîner des effets secondaires graves et/ou délétères.
La composition à usage thérapeutique selon l'invention étant destinée à se fixer sur les hématies, elle est avantageusement administrée par voie intraveineuse. Dans un autre mode de réalisation, la composition à usage thérapeutique selon l'invention est administrée par voie entérale, parentérale, locale et cutanéo-muqueuse.
La vitesse d'administration peut être d'environ 1 à 5 mL (notamment 1 à 4 ml, 1 à 3 mL, ou environ 2 mL) d'une composition comprenant 150 mg/L d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B toutes les 15 à 60 secondes. La composition à usage thérapeutique selon l'invention peut également être administrée en association avec un autre agent thérapeutique choisi parmi les médicaments utiles dans le traitement d'une maladie autoimmune et/ou d'une polyglobulie. Dans un mode de réalisation avantageux, lorsque la maladie autoimmune est une thrombopénie périphérique autoimmune (et en particulier un PTI) la fréquence d'administration de la composition à usage thérapeutique selon l'invention, est adaptée en fonction du taux plaquettaire à atteindre et/ou maintenir chez le patient.
Préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être obtenues à partir de fractions plus ou moins purifiées du plasma humain comprenant des immunoglobulines polyclonales par différents procédés de purification, et notamment par un procédé comprenant les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, et
c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée. La préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention repose sur une étape d'adsorption spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B sur un support greffé par un ligand spécifique de ces immunoglobulines, qui sont ensuite éluées. Avantageusement, il est possible de partir directement du plasma ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales, plus ou moins purifiée en immunoglobulines humaines polyclonales.
Dans un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention peut s'intégrer dans un procédé plus général de purification d 'immunoglobulines humaines normales thérapeutiques (récupération de fraction jusqu'ici éliminées) et peut donc être mis en œuvre sur une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée. Cette fraction d 'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée contient avantageusement une teneur en immunoglobulines humaines polyclonales d'au moins 80%, avantageusement au moins 81%, au moins 82%, plus avantageusement au moins 83%, au moins 84%, encore plus avantageusement au moins 85%, au moins 86%, au moins 87% au moins 88%, au moins 89%, voire au moins 90%, au moins 91%, ou au moins 92% en poids des protéines totales de la fraction.
Comme indiqué ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée peut notamment avoir été obtenue par séparation chromatographique, notamment selon les procédés de purification d'immunoglobulines humaines polyclonales décrits dans W099/64462 et WO02/092632, et plus particulièrement dans WO02/092632. Dans ce cas, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est obtenue par prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques à partir d'un plasma sanguin ou d'une fraction de plasma sanguin enrichie en IgG, et une étape de chromatographie unique sur un support de résine échangeuse d'anions effectuée à pH alcalin, avec une élution sélective des IgG en une étape par un tampon approprié à pH compris entre 4 et 7. Avantageusement, la prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques consiste en une étape de précipitation à l'acide caprylique.
Lorsqu'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est utilisée à l'étape a) du procédé décrit ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée peut en outre avoir subi une étape de sécurisation biologique (élimination virale et/ou inactivation virale, notamment par un traitement solvant- détergent), une étape de concentration (notamment par ultrafiltration), et/ou une étape de filtration stérilisante. Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le support peut être tout support approprié susceptible d'être choisi par l'homme du métier pour adsorber des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et /ou anti-B.
Un tel support utilisé à l'étape a) se présente avantageusement sous la forme :
a) de particules (notamment de particules de polymère) greffées par le ou les ligands d'intérêt, ou
b) d'une membrane polymérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt.
Le support peut ainsi notamment se présenter sous la forme de particules greffées par le ou les ligands d'intérêt. Les particules sont avantageusement de forme sphérique ou oblongue, il peut s'agir notamment de billes. Ces particules ont généralement une taille moyenne d'environ 0,1 μιη à environ 1000 μιη, de préférence d'environ 20 à environ 50 0 μιη, de préférence encore d'environ 50 à environ 200 μιη, de préférence encore d'environ 70 μιη à environ 120 μιη de diamètre. Elles peuvent être constituées de polymère ou de matières inorganiques (comme la silice ou le verre par exemple). Avantageusement, les particules sont poreuses.
Dans un mode de réalisation avantageux, il s'agit de particules de polymère. Le polymère peut être naturel ou non-naturel (synthétique ou hémisynthétique), organique ou inorganique (de préférence le polymère sera organique), réticulé ou non réticulé (de préférence le polymère sera réticulé). Avantageusement, le polymère est un polymère organique réticulé.
Le polymère peut notamment être choisi parmi la cellulose et ses dérivés, l'agarose, le dextran, les polyacrylates, le polystyrène, le polyacrylamide, le polyméthacrylamide, les copolymères de styrène et divinylbenzène, ou les mélanges de ces polymères.
Dans un mode de réalisation préféré, le polymère est de la cellulose, et les particules sont de préférence des billes de cellulose poreuses. De préférence encore, il s'agit de cellulose réticulée.
Le support peut également se présenter sous la forme d'une membrane polymérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt. Le polymère de la membrane peut être choisi parmi les polymères mentionnés ci-dessus pour les particules de polymère.
Les particules sont avantageusement incorporées dans un gel ou une résine, qui est utilisé comme matrice d'une colonne de chromatographie d'affinité. De même, la membrane polymérique peut être incluse dans une colonne de chromatographie d'affinité. Le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sont alors adsorbés sur la colonne de chromatographie d'affinité, et la fraction adsorbée est éluée et récupérée. Cependant, bien que préférée, l'utilisation d'une colonne de chromatographie d'affinité n'est pas essentielle, et d'autres modes d'adsorption, de dissociation et de récolte peuvent être utilisés.
Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines.
Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides suivants :
• Trisaccharide : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal ;
• Tétrasaccharides :
o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Galp1 -3GlcNAc,
o Type 2 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc,
o Type 3 ou 4 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc
• Pentasaccharides :
o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Galp1 -3GlcNAc p1-3Gal,
o Type 2 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc p1-3Gal,
o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc a1-3Gal,
o Type 4 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc p1-3Gal,
• Hexasaccharides :
o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GlcNAc 1^3Gal61 -4Glc, o Type 2 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc p1-3GalB1 -4Glc, o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc a1-3GalB1 -4GlcNAc, o Type 4 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal61 -3GalNAc 61-3Gala1-4Gal.
Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines.
Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides suivants :
• Trisaccharide : Gala1-3(Fuca1-2)Gal ;
• Tétrasaccharides :
o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Galp1 -3GlcNAc,
o Type 2 : Gala1-3(Fuca1-2)Gal 1 -4GlcNAc,
o Type 3 ou 4 : Gala1-3(Fuca1-2)Gal 1 -3GalNAc
• Pentasaccharides : o Type 1 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Galp1 -3GlcNAc p1 -3Gal,
o Type 2 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Gal 1 -4GlcNAc p1 -3Gal,
o Type 3 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Gal 1 -3GalNAc a1 -3Gal,
o Type 4 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Gai i -3GalNAc β1 -3Gal,
· Hexasaccharides :
o Type 1 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Galp1 -3GlcNAc p1 -3GalB1 -4Glc,
o Type 2 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Galp1 -4GlcNAc p1 3Gal61 -4Glc,
o Type 3 : Gala1 -3(Fuca1 -2)Gai i -3GalNAc a1 -3GalB1 -4GlcNAc, o Type 4 : Gala1 -3(Fuca1-2)Gal61 -3GalNAc 61 -3Gala1 -4Gal.
A l'étape a) du procédé tel que décrit ci-dessus, le support peut être greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
Dans un mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A.
Dans un autre mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
Dans encore un autre mode de réalisation, le support est greffé à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans ce cas, on utilisera avantageusement un mélange de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, dans des proportions respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Dans ce cas, les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont mélangées dans des proportions respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Dans un autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un support comprenant des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans un autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un mélange :
• de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et • de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le ligand d'intérêt est avantageusement greffé sur les particules de polymères ou sur la membrane polymérique par l'intermédiaire d'un espaceur, ce qui permet de réduire l'encombrement stérique et de rendre le trisaccharide caractéristique des antigènes A ou B plus accessible aux immunoglobulines susceptibles de s'adsorber sur le support.
Un tel espaceur peut être tout groupement approprié connu de l'homme du métier pour permettre le greffage du ligand d'intérêt et donc notamment d'oligosaccharides sur un support d'intérêt, notamment les polymères décrits ci-dessus.
L'espaceur comprend typiquement au moins un atome de C, 0, N, ou S, et comprendra le plus souvent au moins une des fonctions chimiques suivantes : éther ( -), thioéther (-S-), amino (-NH-), carboxy -(-COO- ou -OCO-), amide (-CONH- ou -HNOC-).
Il peut notamment être choisi parmi :
• -(CH2)mX(CH2)n- ou -(CH2)mX1 (CH2)nX2(CH2)p-, où X, X1 , et X2 sont chacun indépendamment l'un de l'autre choisi parmi 0, S, NH, et une liaison covalente; m, n, et p sont chacun indépendamment 0, 1 , 2, 3, 4, 5, ou 6 ; et 1 , 2, ou 3 des atomes d'hydrogène peuvent être remplacés par un nombre équivalent de groupes OH et/ou méthyle.
L'espaceur peut notamment avoir une structure choisie parmi :
où chacun de X1 et X2 est choisie indépendamment parmi 0, S, et NH; et chacun de Ra, Rb, Rc, and Rd est choisie indépendamment parmi H, OH, et méthyle.
L'une des structures suivantes :
· Les espaceurs de formule -NH-R1 -CONH-R2-, dans laquelle R1 est un groupe alkyle en C4-C6, R2 est un groupe alkyle en C3-C8, et ledit espaceur est lié par sa fonction aminé (en gras ci-dessus) au support. Dans ce cas, R1 est un groupe alkyle en C4-C6, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. De préférence, R1 est un groupe alkyle en C5.
R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. De préférence, R2 est un groupe alkyle en C3.
Dans un mode de réalisation préféré, les ligands (qui sont de préférence des trisaccharides tels que décrits plus haut) sont greffés aux particules ou à la membrane par un espaceur selon la formule : (particule/membrane)-NH-C5Hio- CO-NH-C3H6-(ligand). Le couplage entre la particule ou la membrane et l'espaceur, d'une part, et le couplage entre l'espaceur et le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peut être réalisé par tout protocole de synthèse chimique approprié connu de l'homme du métier.
Dans un mode de réalisation particulier, la particule ou la membrane peut porter un bras -NH-R1 -COOH. De préférence il s'agit d'acide ε-aminocaproïque (où R1 est un groupe pentyle). De manière classique, la particule peut alors être activée en utilisant des réactifs bifonctionnels tels que l'épichlorhydrine, l'épibromhydrine, le dibromo- et le dichloropropanol, le dibromobutane, l'éthylène glycol diglycidyléther, le butanediol diglycidylether, la divinylsulfone, l'allylglycidyléther, et le bromure d'allyle. Le réactif bifonctionnel est capable de réagir à la fois avec les particules/la membrane et le bras - NH-R1 -COOH. Les composés hétérofonctionnels allyle, tels que le bromure d'allyle, sont des réactifs bifonctionnels préférés et permettent d'obtenir une matrice activée.
Pour certains supports solides, tels que la cellulose, les composites contenant un hydrogel ou d'autres matériaux présentant des groupes hydroxyles, il est avantageux de déprotoner les groupes hydroxyles avec une source d'hydroxyde, par exemple, avant la réaction avec un réactif bifonctionnel.
Les ligands représentant les antigènes des groupes sanguins A et/ou B sont ensuite immobilisés sur la particule/la membrane activée portant le bras -NH-R1 -COOH via un groupe lieur -NH-R2-, où R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. Pour cela, la fonction COOH du bras -NH-R1 -COOH portée par la particule/la membrane est mis à réagir avec la fonction NH2 du ligand NH2-R2- oligosacccharide, par la mise en œuvre d'un agent de condensation de type N- éthoxycarbonyl-2-éthoxy-1 ,2-dihydroquinoline (EEDQ).
Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO A (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran A (trisaccharide caractéristique de l'antigène A greffé à une matrice Sepharose FF par du polyacrylamide, Lectinity Corp), HyperCel IsoA (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Pall). Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO B (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran B (trisaccharide caractéristique de l'antigène B greffé à une matrice Sepharose FF par du polyacrylamide, Lectinity Corp), HyperCel IsoB (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Pall). Lorsqu'on souhaite utiliser un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, on utilisera généralement un mélange d'un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A tel que décrit ci-dessus et d'un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B tel que décrit ci-dessus. Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. On peut également utiliser des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Il est également possible d'utiliser un mélange :
· de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et
• de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
Lorsque la purification de la composition à usage thérapeutique selon l'invention est réalisée par chromatographie d'affinité, le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales est adsorbé à l'étape a) sur la colonne de chromatographie dans toute condition appropriée connue de l'homme du métier, notamment toute condition recommandée par le fabricant du support de chromatographie, en fonction du support choisi. Une percolation du lot de plasma humain ou de la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur la colonne peut notamment être mise en œuvre. La fraction non adsorbée est avantageusement récupérée pour d'autres usages ultérieurs. La fraction adsorbée est ensuite dissociée et récupérée à l'aide d'un ou plusieurs lavages de la colonne par un ou plusieurs tampons d'élution appropriés. Un tampon d'élution acide (par exemple un tampon glycine-HCl, pH entre 2 et 4) et/ou un tampon d'élution basique (par exemple une solution de glycine- NaOH, pH entre 10 et 12) peuvent notamment être utilisés.
La composition ainsi obtenue peut en outre être soumises à une ou plusieurs étapes optionnelles ultérieures, telles que : une étape de neutralisation de la composition (ajustement du pH entre 3 et 9, préférentiellement entre 4 et 5), une ou plusieurs étapes de purification additionnelles, une étape de concentration (par exemple par ultrafiltration), au moins une étape d'inactivation (traitement solvant-détergent par exemple) ou d'élimination virale (nanofiltration par exemple), ou une combinaison de plusieurs de ces étapes.
Le procédé tel que décrit ci-dessus permet d'obtenir une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant pour au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition les antigènes des groupes sanguins A et B.
Lorsque le support utilisé à l'étape a) est greffé à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, la composition purifiée comprend alors un mélange d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans les immunoglobulines humaines polyclonales purifiées à partir de pools de plasma, la proportion d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B dépend de la population initiale de donneurs. En effet, des différences de pourcentage de répartition des différents groupes sanguins existent en fonction des populations de donneurs. Ces variations peuvent donc se retrouver dans les compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B selon l'invention.
Lors que le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sont retenues, et la composition obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A.
Alternativement, lorsque que le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont retenues, et la composition obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. L'invention concerne en outre une composition susceptible d'être obtenue par l'un des procédés de préparation décrits ci-dessus, pour son utilisation comme médicament, notamment dans le traitement des maladies autoimmunes (en particulier des thrombopénies périphériques autoimmunes) et/ou des polyglobulies (primitives ou secondaires).
Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention.
EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales, enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B
Une première composition d'immunoglobulines humaines polyclonales selon l'invention, enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B a été préparée.
Matériels et méthodes Une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a été préparée à partir d'un pool de plasma selon le procédé décrit dans la demande WO02/092632.
Cette composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a ensuite été adsorbée sur une colonne de chromatographie d'affinité de 1 mL remplie par un gel comprenant un mélange de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe A (colonne A) et de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe B (colonne B), dans des proportions respectives de 50/50. La charge était de 1 ,8 kg de composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée par litre de gel. Le temps de contact a été fixé à 2 minutes.
La fraction non adsorbée est récupérée pour traitement ultérieur afin de préparer un concentré thérapeutique d'immunoglobulines humaines polyclonales dépourvu d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B.
La fraction d'intérêt dans le cadre de la présente invention est alors obtenue par assemblage de deux fractions d'élution :
• Une 1ere élution de la colonne de chromatographie par un tampon acide (glycine 0.1M pH3),
• Une 2eme élution de la colonne de chromatographie par un tampon basique (glycine 0.1 M pH 11 ),
suivi d'une neutralisation de la fraction d'assemblage (ajustement du pH à 7). Cette composition a ensuite été analysée par les technologies usuelles pour déterminer la concentration en IgG, IgA et IgM, les taux de polymères, dimères, monomères et fragments d'immunoglobulines. L'activité anti-A et anti-B de la composition a également été analysée par la méthode décrite dans WO2007/077365 et comparée à celle d'une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée.
Résultats
La composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales de départ, qui a été adsorbée sur la colonne de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B possède les caractéristiques suivantes :
• Protéines totales : 10,0 g/L
• IgG : 9,20 g/L (Sous classes : lgG1 : 65% ; lgG2 : 30% ; lgG3 : 3% ; lgG4 : 2%)
• IgA : < 0,013 g/L
• IgM : < 0,009 g/L
• DTM (distribution de taille moléculaire) :
o Polymères : < 0,4%
o Dimères : 5,4%
o Monomères : 93,5%
o Fragments : < 1 ,0%
Suite à l'étape de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B, la fraction d'assemblage des deux élutions successives par un tampon acide puis par un tampon basique possède les caractéristiques suivantes :
· IgG : 0,34 g/L
• IgA : 0,015 g/L
• IgM : < 6,3 mg/L
• Anti-A : 622,3 UA*
• Anti-B : 638,7 UA*
· DTM (distribution de taille moléculaire) :
o Polymères : 0,1 %
o Dimères : 2,9 %
o Monomères : 95,6 %
o Fragments : 1 ,3 %
A ce stade, l'activité anti-A et l'activité anti-B sont exprimées en unités arbitraires rapportées à une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, produit considéré comme référentiel mis à 1. L'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée présente donc pour les anti-A et anti-B un résultat négatif au test de Coombs direct à la dilution 1 /64 comme requis par les Autorités Réglementaires. Ainsi, la composition obtenue par le procédé selon l'invention possède une activité anti-A et une activité anti-B environ 600 fois plus importante que les immunoglobulines humaines normales polyvalentes de rimmunoglobuline humaine normale lyophilisée (concentré thérapeutique d 'immunoglobulines humaines polyclonales).
Conclusions
Les résultats présentés ci-dessus montrent qu'il est possible d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B par récolte de la fraction d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales sur une colonne de chromatographie d'affinité porteuse de ligands reconnaissant spécifiquement les anticorps anti-A et anti-B.
Exemple 2 : Efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI) dans un modèle murin L'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI) a été testée dans un modèle murin. Dans ce modèle, les souris sont injectées avec des anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes pour induire le PTI. Afin de tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B chez des patients de groupe A, B ou AB, les souris sont en outre injectées avec des globules rouges humains de groupe AB et avec des immunoglobulines polyclonales anti-A et anti-B (voir Figure 1 ).
Matériels et méthodes
Le schéma général de l'étude est présenté sur la Figure 1. Souris Des femelles C57BL/6j de 8 semaines (Janvier, France) ont été utilisées. Induction du PTI
Les souris C57BL/6j tests (groupes 2-5) ont été injectées avec ^g/20g de poids corporel d'anticorps anti-CD41 qui déplète les plaquettes (clone MW Reg 30, # 3214555, BD Biosciences, San José, CA, USA), dilué dans 100 μl/20g de poids corporel de PBS (# 14190-094 Invitrogen, France) (la quantité et le volume d'injection ont été adaptés en fonction du poids des souris) par voie intrapéritonéale (ip) des jours 1 à 5.
Les souris contrôles (groupe 1 ) ont été injectées avec une solution saline (NaCl 0,09%). Préparation et administration des IVIG
Les IVIG (LFB) ont été diluées dans du PBS1X à la concentration de travail de 100 mg/mL (1 g/kg). Les souris C57BL/6j (groupe 5) ont été injectées avec 2g/kg d 'IVIG (avec globules rouges), par voie intrapéritonéale au jour 2 après l'injection d'anti-CD41. Le volume d'injection a été adapté en fonction du poids des souris.
Administration des globules rouges humains
Les globules rouges humains de groupe AB+ en solution isotonique glucose NaCl ont été dilués au 1 /4 dans du NaCl 0,09% (300 [il + 100 [il) et administrés aux groupes 3-5 par voie intraveineuse au jour 2 ; 3h après la collecte de sang pour l'analyse hématologique (correspondant à 8 heures après l'injection d'anti-CD41 à jours 2).
Administration des anticorps anti-A/anti-B
Les anticorps humains anti-A/anti-B ont été préparés à la dose requise (injection de 100μ1 d'anti-A anti-B à 7,5mg/kg en glycine 0,1M à pH 6) et administrés au groupe 4 par voie intrapéritonéale à jour 2, 30 minutes après l'injection des globules rouges humains (correspondant à 8h30 après l'injection d'anti-CD41 au jour 2).
Groupes expérimentaux
Les groupes expérimentaux sont résumés dans le Tableau 3 ci-dessous :
Anti-CD41
Groupe # Traitement
Induction (iv)
Véhicule (NaCl
1 - 0.09%) 200 [il
Véhicule (NaCl
2 (1 μ§/20§)
0.09%) 200 [il
tampon
Globules rouges
glycine
3 (1 μ§/20§) humains AB+
0,1M pH 6
(iv)
200μΙ (IP)
+ anti-
Globules rouges
A/anti-B
4 (1 μ§/20§) humains AB+
7,5mg/kg
(iv)
100μΙ (IP)
Globules rouges + IVIG
5 (1 μ§/20§) humains AB+ 2g/kg
(iv) 200μί (IP)
Tableau 3. Résumé d es groupes expérimentaux. IP : intrapéritonéal, IV : intraveineuse. Collecte du sang
Le sang (50μΙ) a été collecté quotidiennement par ponction rétroorbitale sous anesthésie par 3% d'isoflurane (DDG9623, # 11 K10A33, Baxter, France), dans des tubes (contenant de l'acide éthylenediaminetétraacétique (EDTA), vacutainer, Becton Dickinson) pour tous les animaux inclus dans l'étude, 1 h avant (seulement à jour 1 ) et 5h après l'injection d'anti-CD41.
Hématologie
Le sang a été homogénéisé et la composition cellulaire du sang déterminée en utilisant un analyseur hématologique différentiel à 5 parties (MS9-5 Melet Schloesing Laboratoires).
Analyse des données
L'évaluation statistique des différences entre les groupes expérimentaux a été déterminée en utilisant un test ANOVA simple suivi d'un post-test de Bonferroni (qui permet de comparer toutes les paires du groupe). Tous les tests ont été effectués avec Graphpad Prism, version 4.03 pour Windows (GraphPad Software Inc., San Diego Californie, www.graphpad.com).
Résultats
La déplétion des plaquettes qui reflète l'étendue du purpura thrombopénique, a été analysée avec un analyseur hématologique.
Les données sont présentées dans le Tableau 4 ci-dessous, où les valeurs correspondent à la teneur en plaquettes exprimé en 103 plaquettes par μΐ de sang.
Numéro
Groupes de la Jour 1 Jour 2 Jour 3 Jour 4 Jour 5
souris
1 621 638 618 696 71 1
2 616 549 648 676 713
1 3 601 654 760 685 656
4 629 650 609 718 701
5 645 665 652 684 749
6 614 437 248 200 190
7 640 51 1 142 1 1 1 49
2 8 668 548 392 185 109
9 615 612 310 253 1 19
10 612 585 190 178 162
16 644 487 357 217 126
17 621 506 277 81 157
3 18 623 528 340 105 73
19 643 435 353 71 89
20 690 509 331 350 87
21 686 500 455 391 382
22 694 604 531 368 368
4 23 599 514 432 139 198
24 661 455 466 86 59
25 659 509 255 54 46
26 683 471 391 338 454
27 646 537 368 383 432
5 28 670 488 420 331 400
29 652 693 394 228 190
30 625 527 521 476 404
Les mêmes données, rapportées en pourcentage du jour 1 , sont représentées graphiquement dans la Figure 2.
Les données obtenues pour le groupe 1 (administration uniquement d'une solution saline, pas d'administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes) et le groupe 2 (administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes et traitement uniquement par une solution saline) confirment que le modèle choisi est pertinent, puisque :
• l'administration d'une simple solution saline n'a pas d'effet significatif sur la numération plaquettaire, et • l'administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes en absence de traitement efficace (solution saline) conduit à une déplétion plaquettaire.
Dans le groupe témoin négatif (groupe 3) injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité uniquement avec des globules rouges, les résultats montrent bien une absence d'effet des globules rouges seuls sur la numération plaquettaire.
Dans le groupe témoin positif (groupe 5) injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité avec des globules rouges et des IVIG, les résultats montrent, comme attendu, une amélioration significative de la numération plaquettaire.
Dans le groupe 4 injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité par globules rouges et des Anti-A/Anti-B, les résultats montrent une augmentation significative de la numération plaquettaire au jour 3, comparé au groupe témoin 3. Au jour 3, les résultats obtenus dans le groupe 4 ayant subi le traitement par globules rouges et Anti-A/Anti-B sont comparables aux résultats obtenus dans le groupe 5 ayant subi le traitement par IVIG.
Les résultats montrent que les immunoglobulines polyclonales anti-A et anti-B sont efficaces, en présence de globules rouges AB+, pour diminuer la déplétion des plaquettes induite par les anticorps anti-CD41 chez les souris C57BL/6j.
Conclusions
Les données présentées ci-dessus confirment l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI), dans un modèle murin.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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WO02/092632
WO2007/077365

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti- B, pour son utilisation en tant que médicament.
2. Composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti- B pour son utilisation en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoimmune et/ou d'une polyglobulie.
3. Composition selon la revendication 2, pour son utilisation selon la revendication 2, en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoimmune.
4. Composition selon la revendication 3, pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que la maladie autoimmune est le purpura thrombopénique idiopathique (PTI).
5. Composition selon la revendication 2, pour son utilisation selon la revendication 2, en tant que médicament dans le traitement d'une polyglobulie.
6. Composition selon la revendication 5, pour son utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que la polyglobulie est une polyglobulie primitive ou secondaire.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le médicament est destiné aux patients de groupe sanguin A, B, ou AB.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition.
9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1 /10 et 10/1.
10. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 2/1 et 10/1.
11. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1 /10 et 1 /2.
12. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 3/10 et 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10.
13. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'au moins 90% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des IgG.
14. Composition selon la revendication 13, pour son utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'au moins 40% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d'isotype IgG présentes dans la composition sont de sous-classe lgG2.
15. Composition selon la revendication 13, pour son utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle possède un ratio en poids lgG2/lgG1 d'au moins 0,8.
16. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisée en ce qu'elle présente une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L.
17. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 est administrée en association avec un autre agent thérapeutique choisi parmi les médicaments utiles dans le traitement d'une maladie autoimmune et/ou d'une polyglobulie.
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