FR3035789A1 - Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b pour son utilisation dans le traitement des maladies autoimmunes ou des polyglobulies - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament, notamment dans le traitement des polyglobulies et/ou des maladies autoimmunes, et en particulier des thrombopénies périphériques autoimmunes.

Description

1 DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se situe dans le domaine des concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines polyclonales. Elle concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation dans le traitement des maladies autoinnnnunes, et en particulier du purpura thronnbopénique idiopathique et/ou dans les polyglobulies. ART ANTERIEUR Les immunoglobulines humaines normales (immunoglobulines humaines polyvalentes purifiées à partir de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs) sont utilisées dans le traitement de pathologies de plus en plus nombreuses. Elles sont notamment utilisées comme traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires (déficits congénitaux) ou secondaires (leucémie lymphoïde chronique, myélome, infections après greffe de moelle osseuse, infections bactériennes récidivantes chez l'enfant infecté par le VIN) avec défaut de production d'anticorps. Elles sont également utilisées en tant que traitement innnnunonnodulateur dans différentes pathologies autoinnnnunes, telles que le purpura thronnbopénique idiopathique (PTI), la rétinochoroïdite de Birdshot, le syndrome de Guillain-Barré, la neuropathie motrice nnultifocale (NMM), les polyradiculonévrites inflammatoires dénnyélinisantes chroniques (PIDC), ou dans la maladie de Kawasaki. Cette utilisation grandissante nécessite un approvisionnement toujours plus important en immunoglobulines humaines normales. Cela conduit à l'utilisation de pools toujours plus grands de donneurs. Une proportion non négligeable des donneurs est de groupe sanguin 0, et leur plasma contient par conséquent des immunoglobulines anti-A et antiB, dirigées contre les antigènes des groupes sanguins A et B. Par ailleurs, les donneurs de groupe sanguin A possèdent généralement des immunoglobulines anti-B et les donneurs de groupe sanguin B des immunoglobulines anti-A. Seuls les donneurs de groupe sanguin AB ne possèdent pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B, mais ceux-ci sont peu nombreux. Or, lorsque les immunoglobulines anti-A et anti-B sont présentes en proportions trop importantes dans les immunoglobulines humaines normales, celle-ci sont susceptibles de 3035789 2 provoquer des hémolyses accidentelles, potentiellement sévères, chez les patients traités porteurs des antigènes A et/ou B. Par conséquent, les autorités de santé requièrent que les immunoglobulines humaines normales soient testées vis-à-vis de l'activité d'agglutination des hématies des groupes 5 sanguins A et B, et imposent des limites quant à cette activité. Ainsi, selon la pharmacopée européenne, les immunoglobulines humaines normales par voie intraveineuse (IVIG) ne doivent pas présenter d'agglutination des hématies A et B à la dilution 1/64 d'une solution de concentration initiale de 50 g/l (5%), dans un test d'agglutination directe particulier correspondant à celui développé par Thorpe et 10 collaborateurs (Thorpe et al. Biologicals. 2005 Jun;33(2):111-6, Thorpe et al. Vox Sang. 2009 Aug;97(2):160-8 ; Thorpe et al. Pharnneur Bio Sci Notes. 2010 Apr;2010(1):39-50, Pharmacopée européenne, chapitre 2.6.20 tel que révisé par le supplément 7.2 de janvier 2011). Par conséquent, afin d'éviter les hémolyses accidentelles sans réduire les pools de 15 donneurs susceptibles d'être utilisés et de satisfaire les exigences des autorités de santé, les fractionneurs de plasma ont développé des procédés pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de leurs concentrés d'immunoglobulines humaines normales. Ainsi, W001/27623 et W02007/077365 décrivent l'utilisation de différents supports de 20 chromatographie d'affinité se liant spécifiquement aux immunoglobulines anti-A et anti- B pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de compositions biologiques, notamment de concentrés d'immunoglobulines humaines normales. La fraction non adsorbée ne comprenant pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B est récupérée par percolation, pour traitement et conditionnement ultérieur. La colonne de 25 chromatographie d'affinité anti-A anti-B est ensuite régénérée par un double lavage : un premier lavage acide, suivi d'un deuxième lavage basique. A ce jour, les deux produits issus de chacun des deux lavages sont éliminés. La fraction d'immunoglobulines anti-A et anti-B adsorbée lors de l'étape de chromatographie d'affinité correspond donc aujourd'hui à une fraction perdue. 30 RESUME DE L'INVENTION Or, dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont découvert que la fraction actuellement éliminée, fortement enrichie en immunoglobulines anti-A et anti-B pouvait être utilisée dans le traitement des maladies autoinnnnunes, et notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI) et/ou dans le traitement des polyglobulies.

Une hypothèse pour expliquer l'efficacité de compositions purifiées d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B dans le traitement des maladies autoinnnnunes et notamment du PTI est que ces immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, administrées à un patient de groupe sanguin A, B ou AB présentant une maladie autoinnnnune, vont entrer en compétition avec les phénomènes endogènes. Les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B 3035789 3 permettraient d'induire une destruction des hématies du patient et protègeraient ainsi, indirectement, les plaquettes de leur destruction via les macrophages. En effet, les récepteurs Fe des macrophages seraient saturés directement par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, empêchant ainsi la destruction des plaquettes.

5 Un phénomène d'innnnunonnodulation est également possible. Dans le cas de polyglobulies, les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B vont directement se fixer sur les hématies des patients de groupe sanguin A, B ou AB et induire ainsi la lyse des hématies surnuméraires.

10 Dans un premier aspect, la présente invention concerne donc une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament.

15 L'invention concerne également une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament dans le traitement des maladies autoinnnnunes (notamment du 20 purpura thronnbopénique idiopathique (PTI)) et/ou dans le traitement des polyglobulies. Avantageusement, les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids 25 des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour la préparation d'un médicament, en particulier destiné au traitement des maladies autoinnnnunes (notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI)) et/ou au traitement des polyglobulies.

30 L'invention concerne également une méthode de traitement des maladies autoinnnnunes (notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI)) et/ou des polyglobulies chez un sujet en ayant besoin, comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines 35 polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Avantageusement, ces compositions sont destinées à des patients de groupe sanguin A, B ou AB. Dans encore un autre mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et le rapport en poids immunoglobulines humaines 3035789 4 polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1/10 et 10/1. Dans ce cas, la composition est avantageusement destinée à des patients de groupe sanguin A, B ou AB. DESCRIPTION DES FIGURES 5 Figure 1. Schéma du modèle nnurin utilisé pour tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI). Les flèches au-dessus de la ligne de temps correspondent aux collectes de sang. Les petites flèches pleines en dessous de la ligne de temps correspondent aux injections d'anticorps anti-CD41 (1pg/20g de poids pour 10 chaque souris, en intrapéritonéal). Les flèches longues en pointillé sous la ligne de temps correspondent à l'injection de globules rouges humains AB+ (400 pl, intraveineuse), ou à l'injection d'IVIG (2g/kg, en intrapéritonéal) ou d'anti-A/anti-B (7,5 mg/kg, en intrapéritonéal).

15 Figure 2. Présentation graphique des résultats obtenus, rapportés en pourcentage du jour 1, sur le modèle nnurin utilisé pour tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI). Gr1 : groupe 1, Gr2 : groupe 2, Gr3 : groupe 3, GT4 : groupe 4, Gr5 : groupe 5.

20 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont découvert que la fraction actuellement éliminée, fortement enrichie en immunoglobulines anti-A et anti-B pouvait être utilisée dans le traitement des maladies autoinnnnunes, et notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI) et/ou dans les polyglobulies.

25 Une hypothèse pour expliquer l'efficacité de compositions purifiées d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B dans le traitement des maladies autoinnnnunes et notamment du PTI est que ces immunoglobulines anti-A et/ou anti-B administrées au patient de groupe sanguin A, B ou AB présentant une maladie autoinnnnune vont entrer en compétition avec les phénomènes endogènes. Les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B 30 permettraient d'induire une destruction des hématies du patient et protègeraient ainsi, indirectement, les plaquettes de leur destruction via les macrophages. En effet, les récepteurs Fe des macrophages seraient saturés directement par les hématies revêtues d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B, empêchant ainsi la destruction des plaquettes. Un phénomène d'innnnunonnodulation est également possible.

35 Dans le cas de polyglobulies, les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B vont directement se fixer sur les hématies des patients de groupe sanguin A, B ou AB et induire ainsi la lyse des hématies surnuméraires.

3035789 5 Définitions Par - anticorps » ou - immunoglobuline », on entend une molécule comprenant au moins un domaine de liaison à un antigène donné et un domaine constant comprenant un fragment Fe capable de se lier aux récepteurs FeR.

5 Par - immunoglobulines humaines polyclonales », on entend une composition d'immunoglobulines humaines dirigées contre de nombreux antigènes distincts, et comprenant, pour chaque antigène reconnu, une pluralité d'immunoglobulines distinctes capables de reconnaitre ledit antigène, généralement au niveau de plusieurs épitopes distincts. De telles immunoglobulines humaines polyclonales sont 10 généralement purifiées à partir du plasma d'un ou de préférence de plusieurs donneurs (on parle alors d'un pool de donneurs). Les immunoglobulines humaines normales thérapeutiques sont ainsi purifiées à partir de pools de plasma de généralement au moins 1000 donneurs. Par - immunoglobulines humaines polyclonales anti-A » ou - immunoglobulines anti-A », 15 on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A. Les - antigènes du groupe sanguin A » ou - antigènes A » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant une N-acétylgalactosarnine (abrégé dans la présente description en - GalNAc ») liée à un galactose (abrégé dans la présente description en - Gal »), lui-même lié à un fucose (abrégé dans la présente 20 description en - Fuc »), selon la séquence suivante : GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal. Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène A, comme indiqué dans le Tableau 1 ci-dessous pour les antigènes A de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis.

25 Type 1 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Galf31-3GleNAcf31-3GalB1-4Gle-R Type 2 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Galf31-4GleNAcf31-3GalB1-4Gle-R Type 3 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Galf31-3GalNAca1 -3GalB1-4GleNAc-R Type 4 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Galf31-3GalNAcf31-3Gala1 -4Gal-R Tableau 1. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin A. GalNAc : N-acétylgalactosarnine, Fuc : fucose, Gal : galactose, GleNAc : Nacétylglucosarnine, Glc : glucose, R: support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe A est indiqué en gras.

30 Par - immunoglobulines humaines polyclonales anti-B » ou - immunoglobulines anti-B », on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B. Les - antigènes du groupe sanguin B » ou - antigènes B » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant un premier galactose lié à 35 un second galactose, lui-même lié à un fucose, selon la séquence suivante : Gala1 - 3(Fuca1-2)Gal.

3035789 6 Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène B, comme indiqué dans le Tableau 2 ci-dessous pour les antigènes B de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis. Type 1 Gala1-3(Fuca1-2)Galf31-3GlcNAcf31-3GalB1-4Glc-R Type 2 Gala1-3 (Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAcf31-3GalB1-4Glc-R Type 3 Gala1-3 (Fuca1-2)Ga1131-3GalNAca1 -3GalB1-4GlcNAc-R Type 4 Gala1-3(Fuca1-2)Galf31-3GalNAcf31-3Gala1 -4Gal-R 5 Tableau 2. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin B. GalNAc : N-acétylgalactosannine, Fuc : fucose, Gal : galactose, GlcNAc : Nacétylglucosannine, Glc : glucose, R: support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe B est indiqué en gras.

10 Par - fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales », on entend toute fraction du plasma humain susceptible d'être obtenue par fractionnement du plasma humain et dont le pourcentage en poids des immunoglobulines polyclonales par rapport aux protéines totales de la fraction, est supérieur à celui du plasma humain. De telles fractions sont avantageusement obtenues 15 par fractionnement de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs. Elles peuvent notamment inclure toute partie ou sous-partie du plasma, ayant fait l'objet d'une ou plusieurs étapes de purification et notamment, le surnageant de plasma cryoprécipité, le cryoprécipité de plasma (remis ou non en suspension), les fractions I à V obtenues par fractionnement éthanolique (selon la méthode de Cohn ou de Kistler Et Nitschnnann), le 20 surnageant et le précipité obtenus après précipitation à l'acide caprylique et/ou au caprylate, les filtrats, ou toute fraction enrichie en immunoglobulines (éluats de chromatographies et/ou fractions non adsorbées) par séparation chronnatographique, comme décrit notamment dans W099/64462 et W002/092632, et plus particulièrement dans W002/092632.

25 Par - ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes 30 du groupe sanguin A. Par - oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin A », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin A tel que défini ci-dessus : GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes du groupe sanguin A définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide GalNAca1 - 35 3(Fuca1 -2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe 3035789 7 A de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal : - Tétrasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GlcNAc, 5 o Type 2: GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01-4GlcNAc, o Type 3 ou 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc - Pentasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GlcNAc 01-3Gal, o Type 2: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-4GlcNAc 01-3Gal, 10 o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc a1-3Gal, o Type 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc 01-3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GlcNAc 01-3GalB1-4Glc, o Type 2: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-4GlcNAc 01-3GalB1-4Glc, 15 o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc a1-3GalB1-4GlcNAc, o Type 4: GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01-3GalNAc 01-3Gala1-4Gal. L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-20 dessus. Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A est le trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3(Fuca1- 2)Gal.

25 Par - ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes du groupe sanguin B. Par - oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin 30 B », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin B tel que défini ci-dessus : Gala1 -3(Fuca1-2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes du groupe sanguin B définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide Gala1 - 3(Fuca1-2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les 35 tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique Gala1 -3(Fuca1-2)Gal : - Tétrasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31-3GlcNAc, 40 o Type 2: Galal -3 (Fucal -2)Galf31 -4G1cNAc, o Type 3 ou 4: Gala1-3(Fucal-2)Ga1131 -3GalNAc 3035789 8 - Pentasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GlcNAc f31 -3Gal, o Type 2: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -4GlcNAc f31 -3Gal, o Type 3 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc al -3Gal, 5 o Type 4: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc f31 -3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GlcNAc f31 -3GalB1-4Glc, o Type 2: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -4GlcNAc f31 -3GalB1-4Glc, o Type 3 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc al -3GalB1-4GlcNAc, 10 o Type 4: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc f31 -3Gala1 -4Gal. L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique Gala1-3(Fucal -2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus.

15 Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B est le trisaccharide caractéristique Galal -3(Fucal -2)Gal. Dans toute la présente description, une référence à - un » ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B inclut la possibilité d'utiliser 20 soit un seul type de ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti- A ou anti-B (c'est-à-dire que tous les ligands greffés sur le support ont la même structure chimique), soit plusieurs types de ligands distincts (c'est-à-dire de structure chimique différente) spécifique(s) des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B. En revanche, il convient de comprendre que chaque ligand de structure 25 chimique donnée susceptible d'être utilisé est nécessairement greffé plusieurs fois sur le support, de façon à ce que les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B puissent être retenues par le support. L'homme du métier sait quelle densité de ligand doit être utilisée pour permettre une adsorption des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B sur le support.

30 Par - thrombopénie » ou - thronnbocytopénie », on entend une diminution du nombre de plaquettes sanguines en dessous du seuil de 150 000 plaquettes par nnnn3 ou une diminution de 50 % par rapport au niveau de référence d'un sujet. La thrombopénie est dite - sévère » si le nombre de plaquettes sanguines passe en dessous du seuil de 35 100 000 plaquettes par nnnn3. Par - thrombopénies périphériques autoinnnnunes » on entend une thrombopénie liée à une destruction immunologique des plaquettes. Cette destruction implique généralement la synthèse par les lymphocytes B du sujet d'immunoglobulines dirigées contre des antigènes exprimés par les plaquettes, qu'il s'agisse d'antigènes naturels des 40 plaquettes ou d'antigènes infectieux exprimés sur les plaquettes au cours d'une 3035789 9 infection. Les plaquettes, revêtues d'immunoglobulines, sont alors détruites par les cellules effectrices du système immunitaire, et notamment par les macrophages. Les thrombopénies périphériques autoinnnnunes incluent notamment : - le purpura thronnbopénique idiopathique (PTI).

5 Cette maladie autoinnnnune est caractérisée par la production d'immunoglobulines antiplaquettes (autoanticorps) chez des sujets normalement sains et ne prenant aucun médicament. L'origine immunologique est affirmée par la présence d'une quantité importante d'immunoglobulines (autoanticorps) à la surface des plaquettes (voir Cines et al. N Engl J Med.

2002 10 Mar 28;346(13):995-1008). - le purpura thronnbopénique infectieux. Le mécanisme est similaire à celui du PTI mais l'infection causale est parfaitement identifiée, les immunoglobulines se liant aux plaquettes du fait de leur expression d'un antigène infectieux (voir notamment Winiarski J et al. Arch 15 Dis Child.

1990 Jan;65(1):137-9 dans le cas de la varicelle ; et Kelton et al. J Clin Invest.

1983 Apr;71(4):832-6 dans le cas de la malaria). - le purpura thronnbopénique médicamenteux innnnunoallergique. L'origine de ce purpura thronnbopénique est liée à une réaction à un médicament. De nombreux médicaments sont susceptibles de causer ce type de 20 purpura thronnbopénique (voir notamment Aster et al. N Engl J Med.

2007 Aug 9;357(6):580-7). - le purpura thronnbopénique néonatal. Ce purpura thronnbopénique est lié soit à un passage transplacentaire d'anticorps de purpura thronnbopénique idiopathique chronique, soit à une 25 incompatibilité fceto-maternelle ayant conduit à la formation d'anticorps anti- HPA (Hunnan Platelet Antigen) (voir Peterson et al. Br J Haennatol.

2013 Apr;161(1):3-14). Par - polyglobulie », on entend une augmentation anormale du volume total pris par les 30 globules rouges dans le sang. La polyglobulie est donc un excès de globules rouges, qui rend le sang plus visqueux et peut provoquer des désordres vasculaires. Parmi les polyglobulies, on distingue : les polyglobulies primitives (également appelées polyglobulies primaires), dues à un fonctionnement exacerbé de la moelle osseuse qui produit les globules 35 rouges, causé généralement par une maladie de la moelle osseuse comme la maladie de Vaquez aussi appelée polyglobulie essentielle, et les polyglobulies secondaires à une hypoxie ou à une sécrétion et/ou injection inappropriée d'érythropoïétine.

40 Par - traitement », on entend une amélioration constatée au niveau clinique ou biochimique de la pathologie du patient. Dans le cadre d'une thrombopénie, cela peut 3035789 10 notamment être constaté par une augmentation du nombre de plaquettes sanguines après traitement par rapport au nombre de plaquettes avant traitement. Dans le cadre d'une polyglobulie, cela peut notamment être constaté par une diminution du nombre d'hématies après traitement par rapport au nombre d'hématies avant traitement.

5 Par - association avec un autre agent thérapeutique » on entend l'administration de la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici avec un ou plusieurs autre(s) agent(s) thérapeutique(s), en particulier avec un ou plusieurs médicaments utiles dans le traitement d'une maladie autoinnnnune et/ou 10 d'une polyglobulie, de façon simultanée ou séquentielle. Par - administration simultanée », on entend aussi bien l'administration sous forme d'une unique formulation pharmaceutique associant la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et un ou plusieurs autre(s) agent(s) thérapeutique(s), que l'administration séparée d'au moins deux formulations pharmaceutiques distinctes 15 contenant l'une la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et la ou les autre(s) formulation(s) contenant le ou les autre(s) agent(s) thérapeutique(s), en même temps ou à très faible intervalle (au maximum 1 heure). Par - administration séquentielle », on entend l'administration séparée d'au moins deux formulations pharmaceutiques distinctes contenant l'une la composition 20 d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B décrite ici et la ou les autre(s) formulation(s) contenant le ou les autre(s) agent(s) thérapeutique(s) à plus d'une heure d'intervalle. Compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour leur utilisation comme médicament 25 Contenu des compositions La présente invention concerne une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus 30 avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son utilisation en tant que médicament.

35 L'invention concerne également une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus 3035789 11 avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour son 5 utilisation en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoinnnnune et/ou dans le traitement des polyglobulies. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au 10 moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, pour 15 la préparation d'un médicament, en particulier destiné au traitement des maladies autoinnnnunes (notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI)) et/ou au traitement des polyglobulies. L'invention concerne également une méthode de traitement des maladies autoinnnnunes (notamment du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI)) et/ou des polyglobulies 20 chez un sujet en ayant besoin, comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 25 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des 30 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1/10 et 10/1. Dans un mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines 35 humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 2/1 et 10/1. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des 40 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et 3035789 12 possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 1/10 et 1/2. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des 5 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est équilibrée dans les deux types d'immunoglobulines, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 3/10 et 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10.

10 Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A selon l'invention peut posséder une activité anti-A enrichie d'un facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 15 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au 20 moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 7000, au moins 8000, au moins 9000, voire au moins 10000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM. Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines 25 polyclonales anti-B selon l'invention peut posséder une activité anti-B enrichie d'un facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 30 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 7000, au moins 8000, au moins 9000, au moins 10000, au moins 11000, au moins 12000, 35 au moins 13000, au moins 14000, au moins 15000, au moins 16000, au moins 17000, au moins 18000, voire au moins 19000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM. Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition peut comprendre à la fois des immunoglobulines 40 humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et possède un rapport (activité anti-A/ activité anti-B) compris entre 1/10 et 10/1, 3035789 13 notamment entre 1/9 et 9/1, entre 1/8 et 8/1, entre 1/7 et 7/1, entre 1/6 et 6/1, entre 1/5 et 5/1, entre 1/4 et 4/1, entre 1/3 et 3/1, voire entre 1/2 et 2/1 ou entre 0,6 et 1,5. Le rapport (activité anti-A/ activité anti-B) et le rapport (activité anti-B/ activité anti- 5 A) sont calculés sur la base de résultats d'activité anti-A et anti-B obtenus dans des tests réalisés en parallèle, avec la même méthode de dosage d'activité (notamment l'une de celles décrites ci-dessous, et en particulier la méthode de cytonnétrie en flux décrite ici) et exprimés en unités arbitraires vis-à-vis du même standard de référence (standard EDQM ref Y0001688 ou médicament immunoglobuline humaine normale 10 lyophilisée). Le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales purifiées peut être mesuré en 15 purifiant la composition par chromatographie d'affinité sur une colonne greffée par des ligands spécifiques des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, et en faisant le rapport entre le poids d'immunoglobulines adsorbées sur la colonne et le poids des immunoglobulines totales. Si la composition n'est pas purifiée en immunoglobulines, une étape préalable de purification des immunoglobulines totales 20 permet ensuite de mesurer le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales. Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont de préférence purifiées, 25 et les immunoglobulines humaines polyclonales représentent avantageusement au moins 85%, avantageusement au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des protéines totales de la composition.

30 Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent comprendre des immunoglobulines humaines polyclonales d'un seul isotype (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, avantageusement IgG ou IgM, de préférence IgG) ou de plusieurs isotypes. Cependant, dans un mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales 35 présentes dans les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont nnajoritairennent (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgG. Dans ce cas, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont avantageusement 40 enrichies en immunoglobulines de sous-classe IgG2 par rapport aux concentrés d'immunoglobulines humaines normales. En particulier, les compositions d'IgG à usage 3035789 14 thérapeutique selon l'invention sont avantageusement caractérisées en ce qu'au moins 40%, au moins 45%, au moins 50%, au moins 55%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins 75%, voire au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d'isotype IgG présentes dans la composition sont des immunoglobulines de 5 sous-classe IgG2, avantageusement mesuré par néphélénnétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélénnétrie, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélénnétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes). Alternativement ou en outre, les compositions d'IgG selon l'invention 10 ont avantageusement un ratio en poids IgG2/IgG1 d'au moins 0,8, au moins 0,9, avantageusement au moins 1, au moins 1,1, au moins 1,2, au moins 1,3, au moins 1,4, au moins 1,5, au moins 1,6, au moins 1,7, au moins 1,8, au moins 1, 9, voire au moins 2, au moins 2,5, au moins 3, au moins 3,1, au moins 3,2, au moins 3,3, au moins 3,4, au moins 3,5, au moins 3,6, au moins 3,7, au moins 3,8, au moins 3,9, voire au moins 4, 15 avantageusement mesuré par néphélénnétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélémétne, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélémétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes). Dans un autre mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales 20 présentes dans les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont majoritairennent (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgM.

25 Les compositions selon l'invention sont purifiées et sont avantageusement concentrées. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont concentrées selon toute technique connue de l'homme du métier, par exemple en utilisant une membrane d'ultrafiltration, une centrifugation, une dialyse, ou plusieurs de ces étapes. De manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un 30 résultat au test de Coombs indirect (décrit ci-dessous) supérieur à 1/64, avantageusement supérieur à 1/128, supérieur à 1/256, supérieur à 1/512, supérieur à 1/1024, supérieur à 1/2048, voire supérieur à 1/4096. Par résultat au test de Coonnbs indirect supérieur à 1/N, on entend que le résultat du test de Coombs indirect est négatif à une dilution de l'échantillon à 1/N.

35 De manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un résultat avec la méthode d'agglutination directe (décrit ci-dessous) supérieur à 1/64, avantageusement supérieur à 1/128, supérieur à 1/256, supérieur à 1/512, supérieur à 1/1024, supérieur à 1/2048, voire supérieur à 1/4096. Par résultat au test d'agglutination direct supérieur à 1/N, on entend que le résultat avec la méthode 40 d'agglutination directe est négatif à une dilution de l'échantillon à 1/N.

3035789 15 Notamment, dans un mode de réalisation avantageux, les compositions selon l'invention concentrées présentent une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L, supérieure à 1,5 g/L, supérieure à 2 g/L, supérieure à 5 g/L, supérieure à 10 g/L, supérieur à 15 g/L, supérieur à 20 g/L, voire 5 supérieur à 50 g/L. Patients visés Comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique des compositions à usage thérapeutique selon l'invention pour le traitement des maladies autoinnnnunes repose notamment sur le fait de saturer les macrophages par des hématies revêtues par 10 les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées, empêchant ainsi la destruction des plaquettes par ces mêmes macrophages. En effet, les récepteurs Fe des macrophages sont alors saturés par les hématies revêtues par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, empêchant la liaison des plaquettes revêtues d'autres anticorps. Sans liaison aux macrophages, les plaquettes ne 15 sont pas détruites. Pour le traitement des polyglobulies, le rationnel de l'efficacité thérapeutique repose sur la fixation des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées directement aux hématies, entrainant ainsi leur lyse. Par conséquent, il est avantageux d'administrer les compositions à usage thérapeutique selon l'invention à des patients dont les hématies sont porteuses des antigènes reconnus 20 par les immunoglobulines de la composition. Ainsi, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont avantageusement destinées à des patients de groupe sanguin A (hématies porteuses d'antigènes A reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A), B (hématies porteuses d'antigènes B reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B) ou AB (hématies porteuses d'antigènes 25 A et B reconnus par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B). En particulier, lorsque les compositions à usage thérapeutique selon l'invention comprennent à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, elles sont avantageusement destinées à des patients de groupe sanguin A, B ou AB, et 30 notamment de groupe sanguin AB. Maladies autoimmunes visées Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des maladies autoinnnnunes. En particulier, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être 35 utilisées dans le traitement des thrombopénies périphériques autoinnnnunes, impliquant une destruction immunologique des plaquettes.

3035789 16 En effet, comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique des compositions à usage thérapeutique selon l'invention repose notamment sur le fait de saturer les macrophages par des hématies revêtues par les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées, empêchant ainsi la destruction des 5 plaquettes par ces mêmes macrophages. Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont notamment avantageusement utilisées dans le traitement du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI), du purpura thronnbopénique infectieux, du purpura thronnbopénique médicamenteux innnnunoallergique, ou du purpura thronnbopénique néonatal, et en 10 particulier dans le traitement du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI). Maladies de type polyglobulies visées Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être utilisées dans le traitement des polyglobulies. En particulier, les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être 15 utilisées dans le traitement des polyglobulies, impliquant une augmentation de la quantité des hématies. En effet, comme expliqué ci-dessus, le rationnel de l'efficacité thérapeutique repose sur la fixation des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B administrées directement aux hématies, entrainant ainsi leur lyse.

20 Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention sont notamment avantageusement utilisées dans le traitement des polyglobulies primitives, notamment dans la maladie de Vaquez aussi appelée polyglobulie essentielle, et/ou dans le traitement des polyglobulies secondaires dues à une hypoxie ou à une sécrétion et/ou injection inappropriée d'érythropoïétine.

25 Dosage et administration thérapeutique Il est important d'utiliser les compositions à usage thérapeutique selon l'invention à un dosage approprié. En effet, si l'effet attendu implique nécessairement la destruction d'un certain nombre d'hématies (hémolyse), il convient de ne pas surdoser les compositions à usage 30 thérapeutique selon l'invention, de façon à éviter une hémolyse trop importante, qui est également néfaste pour le sujet traité. C'est d'ailleurs la raison pour laquelle les quantités d'immunoglobulines anti-A et anti-B présentes dans les concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines humaines polyclonales sont limitées à des valeurs maximales par les autorités de santé. En particulier, lorsque les concentrés 35 thérapeutiques d'immunoglobulines humaines polyclonales sont utilisés en traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires ou secondaires avec défaut de production d'anticorps, il convient d'éviter au maximum tout risque d'hémolyse.

3035789 17 Cependant, dans le cas des thrombopénies périphériques autoinnnnunes et/ou des polyglobulies, une hémolyse modérée et contrôlée peut être acceptable et bénéfique pour le patient. Afin d'obtenir une hémolyse modérée, la dose d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B 5 administrée à un patient souffrant d'une polyglobulie et/ou d'une maladie autoinnnnune, et notamment d'une thrombopénie périphérique autoinnnnune (en particulier de PTI), devrait de préférence être comprise entre 20 et 100 pg/kg de poids corporel, avantageusement entre 25 et 90 pg/kg de poids corporel, entre 30 et 80 pg/kg de poids corporel, entre 35 et 70 pg/kg de poids corporel, entre 40 et 60 pg/kg de poids 10 corporel, entre 45 et 55 pg/kg de poids corporel, et notamment d'environ 50 pg/kg de poids corporel. Les doses sont avantageusement adaptées afin d'éviter une hémolyse sévère chez le patient qui pourrait entrainer des effets secondaires graves et/ou délétères.

15 La composition à usage thérapeutique selon l'invention étant destinée à se fixer sur les hématies, elle est avantageusement administrée par voie intraveineuse. Dans un autre mode de réalisation, la composition à usage thérapeutique selon l'invention est administrée par voie entérale, parentérale, locale et cutanéo-muqueuse. La vitesse d'administration peut être d'environ 1 à 5 nnL (notamment 1 à 4 ml, 1 à 3 nnL, 20 ou environ 2 nnL) d'une composition comprenant 150 nng/L d'immunoglobulines anti-A et/ou anti-B toutes les 15 à 60 secondes. La composition à usage thérapeutique selon l'invention peut également être administrée en association avec un autre agent thérapeutique choisi parmi les 25 médicaments utiles dans le traitement d'une maladie autoinnnnune et/ou d'une polyglobulie. Dans un mode de réalisation avantageux, la fréquence d'administration de la composition à usage thérapeutique selon l'invention, est adaptée en fonction du taux 30 plaquettaire à atteindre et/ou maintenir chez le patient. Préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention Les compositions à usage thérapeutique selon l'invention peuvent être obtenues à partir de fractions plus ou moins purifiées du plasma humain comprenant des immunoglobulines polyclonales par différents procédés de purification, et notamment 35 par un procédé comprenant les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, 3035789 18 b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, et c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée.

5 La préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention repose sur une étape d'adsorption spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B sur un support greffé par un ligand spécifique de ces immunoglobulines, qui sont ensuite éluées. Avantageusement, il est possible de partir directement du plasma ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales, 10 plus ou moins purifiée en immunoglobulines humaines polyclonales. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation des compositions à usage thérapeutique selon l'invention peut s'intégrer dans un procédé plus général de purification d'immunoglobulines humaines normales thérapeutiques (récupération de fraction jusqu'ici éliminées) et peut donc être mis en oeuvre sur une fraction 15 d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée. Cette fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée contient avantageusement une teneur en immunoglobulines humaines polyclonales d'au moins 80%, avantageusement au moins 81%, au moins 82%, plus avantageusement au moins 83%, au moins 84%, encore plus avantageusement au moins 85%, au moins 86%, au moins 87% au moins 88%, au 20 moins 89%, voire au moins 90%, au moins 91%, ou au moins 92% en poids des protéines totales de la fraction. Comme indiqué ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée peut notamment avoir été obtenue par séparation chronnatographique, notamment selon les procédés de purification d'immunoglobulines humaines 25 polyclonales décrits dans W099/64462 et W002/092632, et plus particulièrement dans W002/092632. Dans ce cas, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est obtenue par prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques à partir d'un plasma sanguin ou d'une fraction de plasma sanguin enrichie en IgG, et une étape de chromatographie unique sur un support de résine 30 échangeuse d'anions effectuée à pH alcalin, avec une élution sélective des IgG en une étape par un tampon approprié à pH compris entre 4 et 7. Avantageusement, la prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques consiste en une étape de précipitation à l'acide caprylique. Lorsqu'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est utilisée à 35 l'étape a) du procédé décrit ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée peut en outre avoir subi une étape de sécurisation biologique (élimination virale et/ou inactivation virale, notamment par un traitement solvant-détergent), une étape de concentration (notamment par ultrafiltration), et/ou une étape de filtration stérilisante.

40 3035789 19 Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le support peut être tout support approprié susceptible d'être choisi par l'homme du métier pour adsorber des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et /ou anti-B.

5 Un tel support utilisé à l'étape a) se présente avantageusement sous la forme : a) de particules (notamment de particules de polymère) greffées par le ou les ligands d'intérêt, ou b) d'une membrane polynnérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt.

10 Le support peut ainsi notamment se présenter sous la forme de particules greffées par le ou les ligands d'intérêt. Les particules sont avantageusement de forme sphérique ou oblongue, il peut s'agir notamment de billes. Ces particules ont généralement une taille moyenne d'environ 0,1 [Inn à environ 1000 [Inn, de préférence d'environ 20 à environ 50 15 0 [Inn, de préférence encore d'environ 50 à environ 200 [Inn, de préférence encore d'environ 70 [Inn à environ 120 [Inn de diamètre. Elles peuvent être constituées de polymère ou de matières inorganiques (comme la silice ou le verre par exemple). Avantageusement, les particules sont poreuses. Dans un mode de réalisation avantageux, il s'agit de particules de polymère. Le 20 polymère peut être naturel ou non-naturel (synthétique ou hénnisynthétique), organique ou inorganique (de préférence le polymère sera organique), réticulé ou non réticulé (de préférence le polymère sera réticulé). Avantageusement, le polymère est un polymère organique réticulé. Le polymère peut notamment être choisi parmi la cellulose et ses dérivés, l'agarose, le 25 dextran, les polyacrylates, le polystyrène, le polyacrylannide, le polynnéthacrylannide, les copolymères de styrène et divinylbenzène, ou les mélanges de ces polymères. Dans un mode de réalisation préféré, le polymère est de la cellulose, et les particules sont de préférence des billes de cellulose poreuses. De préférence encore, il s'agit de cellulose réticulée.

30 Le support peut également se présenter sous la forme d'une membrane polynnérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt. Le polymère de la membrane peut être choisi parmi les polymères mentionnés ci-dessus pour les particules de polymère. Les particules sont avantageusement incorporées dans un gel ou une résine, qui est 35 utilisé comme matrice d'une colonne de chromatographie d'affinité. De même, la membrane polynnérique peut être incluse dans une colonne de chromatographie d'affinité. Le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sont alors adsorbés sur la colonne de chromatographie d'affinité, et la fraction adsorbée est éluée et récupérée. Cependant, 40 bien que préférée, l'utilisation d'une colonne de chromatographie d'affinité n'est pas 3035789 20 essentielle, et d'autres modes d'adsorption, de dissociation et de récolte peuvent être utilisés. Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon 5 l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des 10 antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides suivants : - Trisaccharide : GalNAca1-3(Fuca1-2)Gal ; - Tétrasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc, 15 o Type 2: GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal(31-4GlcNAc, o Type 3 ou 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc - Pentasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc (31-3Gal, o Type 2: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc (31-3Gal, 20 o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc a1-3Gal, o Type 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc (31-3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc (31-3GalB1-4Glc, o Type 2: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc (31-3GalB1-4Glc, 25 o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc a1-3GalB1-4GlcNAc, o Type 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)GalB1-3GalNAc B1-3Gala1-4Gal. Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B 30 peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides 35 suivants : - Trisaccharide : Gala1-3(Fuca1-2)Gal ; - Tétrasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc, o Type 2: Gala1-3 (Fuca1-2)Gal(31-4GlcNAc, 40 o Type 3 ou 4: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc 3035789 21 - Pentasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc f31-3Gal, o Type 2: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc f31-3Gal, o Type 3 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc a1-3Gal, 5 o Type 4: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc f31-3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc f31-3GalB1-4Glc, o Type 2: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc f31-3GalB1-4Glc, o Type 3 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc a1-3GalB1-4GlcNAc, 10 o Type 4: Gala1-3(Fuca1-2)GalB1-3GalNAc B1-3Gala1-4Gal. A l'étape a) du procédé tel que décrit ci-dessus, le support peut être greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.

15 Dans un mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Dans un autre mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans encore un autre mode de réalisation, le support est greffé à la fois par un ligand 20 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans ce cas, on utilisera avantageusement un mélange de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, dans des proportions 25 respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et 30 remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Dans ce cas, les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont mélangées dans des proportions respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Dans un 35 autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un support comprenant des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans un autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un mélange : 3035789 22 - de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et - de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines 5 polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans un procédé de préparation d'une composition à usage thérapeutique selon l'invention, le ligand d'intérêt est avantageusement greffé sur les particules de 10 polymères ou sur la membrane polynnérique par l'intermédiaire d'un espaceur, ce qui permet de réduire l'encombrement stérique et de rendre le trisaccharide caractéristique des antigènes A ou B plus accessible aux immunoglobulines susceptibles de s'adsorber sur le support. Un tel espaceur peut être tout groupement approprié connu de l'homme du métier pour 15 permettre le greffage du ligand d'intérêt et donc notamment d'oligosaccharides sur un support d'intérêt, notamment les polymères décrits ci-dessus. L'espaceur comprend typiquement au moins un atome de C, 0, N, ou S, et comprendra le plus souvent au moins une des fonctions chimiques suivantes : éther (-0-), thioéther (-S-), annino (-NH-), carboxy -(-000- ou -000-), amide (-CONH- ou -HNOC-).

20 Il peut notamment être choisi parmi : - -(CH2)nnX(CH2)n- ou -(CH2)nnX1(CH2)nX2(CH2)p-, où X, X1, et X2 sont chacun indépendamment l'un de l'autre choisi parmi 0, S, NH, et une liaison covalente; m, n, et p sont chacun indépendamment 0, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; et 1, 2, ou 3 des atomes d'hydrogène peuvent être remplacés par un nombre équivalent de 25 groupes OH et/ou méthyle. L'espaceur peut notamment avoir une structure choisie parmi : et où chacun de X1 et X2 est choisie indépendamment parmi 0, S, et NH; et chacun de Ra, Rb, Re, and Rd est choisie indépendamment parmi H, OH, et méthyle. 30 - L'une des structures suivantes : OH OH OH 3035789 23 - Les espaceurs de formule -NH-R1-CONH-R2-, dans laquelle R1 est un groupe alkyle en C4-C6, R2 est un groupe alkyle en C3-C8, et ledit espaceur est lié par sa fonction amine (en gras ci-dessus) au support. Dans ce cas, R1 est un groupe alkyle en C4-C6, linéaire ou ramifié, de préférence 5 linéaire. De préférence, R1 est un groupe alkyle en C5. R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. De préférence, R2 est un groupe alkyle en C3. Dans un mode de réalisation préféré, les ligands (qui sont de préférence des trisaccharides tels que décrits plus haut) sont greffés aux particules ou à la 10 membrane par un espaceur selon la formule : (particule/nnennbrane)-NH-05H10- CO-NH-C3H6-(ligand). Le couplage entre la particule ou la membrane et l'espaceur, d'une part, et le couplage entre l'espaceur et le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales 15 anti-A ou le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peut être réalisé par tout protocole de synthèse chimique approprié connu de l'homme du métier. Dans un mode de réalisation particulier, la particule ou la membrane peut porter un bras -NH-R1-COOH. De préférence il s'agit d'acide E-anninocaproïque (où R1 est un 20 groupe pentyle). De manière classique, la particule peut alors être activée en utilisant des réactifs bifonctionnels tels que l'épichlorhydrine, l'épibronnhydrine, le dibronno- et le dichloropropanol, le dibronnobutane, l'éthylène glycol diglycidyléther, le butanediol diglycidylether, la divinylsulfone, l'allylglycidyléther, et le bromure d'allyle. Le réactif bifonctionnel est capable de réagir à la fois avec les particules/la membrane et le bras - 25 NH-R1-COOH. Les composés hétérofonctionnels allyle, tels que le bromure d'allyle, sont des réactifs bifonctionnels préférés et permettent d'obtenir une matrice activée. Pour certains supports solides, tels que la cellulose, les composites contenant un hydrogel ou d'autres matériaux présentant des groupes hydroxyles, il est avantageux de déprotoner les groupes hydroxyles avec une source d'hydroxyde, par exemple, avant la 30 réaction avec un réactif bifonctionnel. Les ligands représentant les antigènes des groupes sanguins A et/ou B sont ensuite immobilisés sur la particule/la membrane activée portant le bras -NH-R1-COOH via un groupe lieur -NH-R2-, où R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. Pour cela, la fonction COOH du bras -NH-R1-COOH portée par la 35 particule/la membrane est mis à réagir avec la fonction NH2 du ligand NH2-R2- oligosacccharide, par la mise en oeuvre d'un agent de condensation de type Néthoxycarbonyl-2-éthoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ). Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines 40 humaines polyclonales anti-A qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO A (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le 3035789 24 trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran A (trisaccharide caractéristique de l'antigène A greffé à une matrice Sepharose FF par du polyacrylarnide, Lectinity Corp), HyperCel IsoA (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Pall).

5 Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO B (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran B (trisaccharide caractéristique de l'antigène B greffé à une matrice 10 Sepharose FF par du polyacrylarnide, Lectinity Corp), HyperCel IsoB (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Pall). Lorsqu'on souhaite utiliser un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, on utilisera généralement un mélange 15 d'un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A tel que décrit ci-dessus et d'un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B tel que décrit ci-dessus. Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des 20 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. On peut également utiliser des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines 25 polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Il est également possible d'utiliser un mélange : - de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et 30 - de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Lorsque la purification de la composition à usage thérapeutique selon l'invention est 35 réalisée par chromatographie d'affinité, le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales est adsorbé à l'étape a) sur la colonne de chromatographie dans toute condition appropriée connue de l'homme du métier, notamment toute condition recommandée par le fabricant du support de chromatographie, en fonction du support choisi. Une percolation du lot de 40 plasma humain ou de la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur la colonne peut notamment être mise en oeuvre. La fraction 3035789 25 non adsorbée est avantageusement récupérée pour d'autres usages ultérieurs. La fraction adsorbée est ensuite dissociée et récupérée à l'aide d'un ou plusieurs lavages de la colonne par un ou plusieurs tampons d'élution appropriés. Un tampon d'élution acide (par exemple un tampon glycine-HCl, pH entre 2 et 4) et/ou un tampon d'élution 5 basique (par exemple une solution de glycine-NaOH, pH entre 10 et 12) peuvent notamment être utilisés. La composition ainsi obtenue peut en outre être soumises à une ou plusieurs étapes optionnelles ultérieures, telles que : une étape de neutralisation de la composition 10 (ajustement du pH entre 3 et 9, préférentiellement entre 4 et 5), une ou plusieurs étapes de purification additionnelles, une étape de concentration (par exemple par ultrafiltration), au moins une étape d'inactivation (traitement solvant-détergent par exemple) ou d'élimination virale (nanofiltration par exemple), ou une combinaison de plusieurs de ces étapes.

15 Le procédé tel que décrit ci-dessus permet d'obtenir une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant pour au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore 20 plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition les antigènes des groupes sanguins A et B. Lorsque le support utilisé à l'étape a) est greffé à la fois par un ligand spécifique des 25 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, la composition purifiée comprend alors un mélange d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans les immunoglobulines humaines polyclonales purifiées à partir de pools de plasma, la proportion d'immunoglobulines humaines 30 polyclonales anti-A et d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B dépend de la population initiale de donneurs. En effet, des différences de pourcentage de répartition des différents groupes sanguins existent en fonction des populations de donneurs. Ces variations peuvent donc se retrouver dans les compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B 35 selon l'invention. Lors que le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sont retenues, et la composition obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A.

40 Alternativement, lorsque que le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, les 3035789 26 immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont retenues, et la composition obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. L'invention concerne en outre une composition susceptible d'être obtenue par l'un des 5 procédés de préparation décrits ci-dessus, pour son utilisation comme médicament, notamment dans le traitement des maladies autoinnnnunes (en particulier des thrombopénies périphériques autoinnnnunes) et/ou des polyglobulies (primitives ou secondaires).

10 Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention. EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales, enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B Une première composition d'immunoglobulines humaines polyclonales selon l'invention, 15 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B a été préparée. Matériels et méthodes Une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a été préparée à partir d'un pool de plasma selon le procédé décrit dans la demande W002/092632.

20 Cette composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a ensuite été adsorbée sur une colonne de chromatographie d'affinité de 1 nnL remplie par un gel comprenant un mélange de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe A (colonne A) et de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes 25 de groupe B (colonne B), dans des proportions respectives de 50/50. La charge était de 1,8 kg de composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée par litre de gel. Le temps de contact a été fixé à 2 minutes. La fraction non adsorbée est récupérée pour traitement ultérieur afin de préparer un concentré thérapeutique d'immunoglobulines humaines polyclonales 30 dépourvu d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B. La fraction d'intérêt dans le cadre de la présente invention est alors obtenue par assemblage de deux fractions d'élution : - Une 1è' élution de la colonne de chromatographie par un tampon acide (glycine 0.1M pH3), 35 - Une 2è" élution de la colonne de chromatographie par un tampon basique (glycine 0.1M pH 11), 3035789 27 suivi d'une neutralisation de la fraction d'assemblage (ajustement du pH à 7). Cette composition a ensuite été analysée par les technologies usuelles pour déterminer la concentration en IgG, IgA et IgM, les taux de polymères, dimères, monomères et 5 fragments d'immunoglobulines. L'activité anti-A et anti-B de la composition a également été analysée par la méthode décrite dans W02007/077365 et comparée à celle d'une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée.

10 Résultats La composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales de départ, qui a été adsorbée sur la colonne de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B possède les caractéristiques suivantes : - Protéines totales : 10,0 g/L - IgG : 9,20 g/L (Sous classes : IgG1 : 65% ; IgG2 : 30%; IgG3 : 3%; IgG4 : 2%) - IgA : < 0,013 g/L - IgM : < 0,009 g/L - DTM (distribution de taille moléculaire) o Polymères : <0,4% o Dimères : 5,4% o Monomères : 93,5% o Fragments : < 1,0% Suite à l'étape de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B, la fraction d'assemblage 25 des deux élutions successives par un tampon acide puis par un tampon basique possède les caractéristiques suivantes : - IgG : 0,34 g/L - IgA :0,015 g/L - IgM : < 6,3 nrig/L 30 - Anti-A : 622,3 UA* - Anti-B : 638,7 UA* - DTM (distribution de taille moléculaire) 35 A ce stade, l'activité anti-A et l'activité anti-B sont exprimées en unités arbitraires rapportées à une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, produit considéré 15 20 o Polymères : 0,1 % o Dimères : 2,9 % o Monomères : 95,6 % o Fragments : 1,3% 3035789 28 comme référentiel mis à 1. L'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée présente donc pour les anti-A et anti-B un résultat négatif au test de Coonnbs direct à la dilution 1/64 comme requis par les Autorités Règlennentaires. Ainsi, la composition obtenue par le procédé selon l'invention possède une activité anti-A et une activité anti-B environ 5 600 fois plus importante que les immunoglobulines humaines normales polyvalentes de l'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée (concentré thérapeutique d'immunoglobulines humaines polyclonales). Conclusions Les résultats présentés ci-dessus montrent qu'il est possible d'obtenir une composition 10 purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B par récolte de la fraction d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales sur une colonne de chromatographie d'affinité porteuse de ligands reconnaissant spécifiquement les anticorps anti-A et anti-B. Exemple 2: Efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A 15 et/ou anti-B dans le traitement du purpura thrombopénique idiopathique (PTI) dans un modèle murin L'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura thronnbopénique idiopathique (PTI) a été testée dans un modèle nnurin. Dans ce modèle, les souris sont injectées avec des anticorps anti-CD41 20 ciblant les plaquettes pour induire le PTI. Afin de tester l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B chez des patients de groupe A, B ou AB, les souris sont en outre injectées avec des globules rouges humains de groupe AB et avec des immunoglobulines polyclonales anti-A et anti-B (voir Figure 1). Matériels et méthodes 25 Le schéma général de l'étude est présenté sur la Figure 1. Souris Des femelles C57BL/6j de 8 semaines (Janvier, France) ont été utilisées. Induction du PTI Les souris C57BL/6j tests (groupes 2-5) ont été injectées avec 1pg/20g de poids corporel 30 d'anticorps anti-CD41 qui déplète les plaquettes (clone MW Reg 30, # 3214555, BD Biosciences, San Jose, CA, USA), dilué dans 100 pl/20g de poids corporel de PBS (# 14190-094 Invitrogen, France) (la quantité et le volume d'injection ont été adaptés en fonction du poids des souris) par voie intrapéritonéale (ip) des jours 1 à 5.

3035789 29 Les souris contrôles (groupe 1) ont été injectées avec une solution saline (NaCl 0,09%). Préparation et administration des IVIG Les IVIG (LFB) ont été diluées dans du PBS1X à la concentration de travail de 100 nrig/nriL (1 g/kg). Les souris C57BL/6j (groupe 5) ont été injectées avec 2g/kg d'IVIG (avec 5 globules rouges), par voie intrapéritonéale au jour 2 après l'injection d'anti-CD41. Le volume d'injection a été adapté en fonction du poids des souris. Administration des globules rouges humains Les globules rouges humains de groupe AB+ en solution isotonique glucose NaCl ont été dilués au 1/4 dans du NaCl 0,09% (300 pL + 100 pL) et administrés aux groupes 3-5 par 10 voie intraveineuse au jour 2; 3h après la collecte de sang pour l'analyse hématologique (correspondant à 8 heures après l'injection d'anti-CD41 à jours 2). Administration des anticorps anti-A/anti-B Les anticorps humains anti-A/anti-B ont été préparés à la dose requise (injection de 100pl d'anti-A anti-B à 7,5rng/kg en glycine 0,1M à pH 6) et administrés au groupe 4 par 15 voie intrapéritonéale à jour 2, 30 minutes après l'injection des globules rouges humains (correspondant à 8h30 après l'injection d'anti-CD41 au jour 2). Groupes expérimentaux Les groupes expérimentaux sont résumés dans le Tableau 4 ci-dessous : Groupe # Anti-CD41 Traitement Induction (iv) 1 - Véhicule (NaCl 0.09%) 200 pL 2 (1 pg/20g) Véhicule (NaCl 0.09%) 200 pL 3 (1 pg/20g) Globules rouges tampon humains AB+ glycine 0,1M pH 6 200pl (IP) (iv) 4 (1 pg/20g) Globules rouges + antiA/anti-B 7,5rng/kg 100pl (IP) humains AB+ (iv) 3035789 30 Globules rouges + IVIG 5 (1 pg/20g) humains AB+ 2g/kg (iv) 2001iL (IP) Tableau 4. Résumé des groupes expérimentaux. IP : intrapéritonéal, IV: intraveineuse. Collecte du sang Le sang (501.il) a été collecté quotidiennement par ponction rétroorbitale sous anesthésie par 3% d'isoflurane (DDG9623, # 11K10A33, Baxter, France), dans des tubes 5 (contenant de l'acide éthylenedianninetétraacétique (EDTA), vacutainer, Becton Dickinson) pour tous les animaux inclus dans l'étude, 1h avant (seulement à jour 1) et 5h après l'injection d'anti-CD41. Hématologie Le sang a été homogénéisé et la composition cellulaire du sang déterminée en utilisant 10 un analyseur hématologique différentiel à 5 parties (MS9-5 Melet Schloesing Laboratoires). Analyse des données L'évaluation statistique des différences entre les groupes expérimentaux a été déterminée en utilisant un test ANOVA simple suivi d'un post-test de Bonferroni (qui 15 permet de comparer toutes les paires du groupe). Tous les tests ont été effectués avec Graphpad Prisnn, version 4.03 pour Windows (GraphPad Software Inc., San Diego Californie, www.graphpad.conn). Résultats La déplétion des plaquettes qui reflète l'étendue du purpura thronnbopénique, a été 20 analysée avec un analyseur hématologique. Les données sont présentées dans le Tableau 5 ci-dessous, où les valeurs correspondent à la teneur en plaquettes exprimé en 103 plaquettes par pl de sang.

3035789 31 Groupes Numéro Jour 1 Jour 2 Jour 3 Jour 4 Jour 5 de ta souris 1 1 621 638 618 696 711 2 616 549 648 676 713 3 601 654 760 685 656 4 629 650 609 718 701 5 645 665 652 684 749 2 6 614 437 248 200 190 7 640 511 142 111 49 8 668 548 392 185 109 9 615 612 310 253 119 10 612 585 190 178 162 3 16 644 487 357 217 126 17 621 506 277 81 157 18 623 528 340 105 73 19 643 435 353 71 89 20 690 509 331 350 87 4 21 686 500 455 391 382 22 694 604 531 368 368 23 599 514 432 139 198 24 661 455 466 86 59 25 659 509 255 54 46 5 26 683 471 391 338 454 27 646 537 368 383 432 28 670 488 420 331 400 29 652 693 394 228 190 30 625 527 521 476 404 Les mêmes données, rapportées en pourcentage du jour 1, sont représentées graphiquement dans la Figure 2.

5 Les données obtenues pour le groupe 1 (administration uniquement d'une solution saline, pas d'administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes) et le groupe 2 (administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes et traitement uniquement par une solution saline) confirment que le modèle choisi est pertinent, puisque : - l'administration d'une simple solution saline n'a pas d'effet significatif sur la 10 numération plaquettaire, et 3035789 32 - l'administration d'anticorps anti-CD41 ciblant les plaquettes en absence de traitement efficace (solution saline) conduit à une déplétion plaquettaire. Dans le groupe témoin négatif (groupe 3) injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité 5 uniquement avec des globules rouges, les résultats montrent bien une absence d'effet des globules rouges seuls sur la numération plaquettaire. Dans le groupe témoin positif (groupe 5) injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité avec des globules rouges et des IVIG, les résultats montrent, comme attendu, une 10 amélioration significative de la numération plaquettaire. Dans le groupe 4 injecté avec des anticorps anti-CD41 et traité par globules rouges et des Anti-A/Anti-B, les résultats montrent une augmentation significative de la numération plaquettaire au jour 3, comparé au groupe témoin 3. Au jour 3, les résultats 15 obtenus dans le groupe 4 ayant subi le traitement par globules rouges et Anti-A/Anti-B sont comparables aux résultats obtenus dans le groupe 5 ayant subi le traitement par IVIG. Les résultats montrent que les immunoglobulines polyclonales anti-A et anti-B sont 20 efficaces, en présence de globules rouges AB+, pour diminuer la déplétion des plaquettes induite par les anticorps anti-CD41 chez les souris C57BL/6j. Conclusions Les données présentées ci-dessus confirment l'efficacité thérapeutique des immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B dans le traitement du purpura 25 thronnbopénique idiopathique (PTI), dans un modèle nnurin.

3035789 33 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Aster RH, Bougie DW. Drug-induced immune thronnbocytopenia. N Engl J Med.

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Claims (17)

1. REVENDICATIONS1. Composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB, pour son utilisation en tant que médicament.
2. 2. Composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB pour son utilisation en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoinnnnune et/ou d'une polyglobulie.
3. 3. Composition selon la revendication 2, pour son utilisation selon la revendication 2, en tant que médicament dans le traitement d'une maladie autoinnnnune.
4. 4. Composition selon la revendication 3, pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que la maladie autoinnnnune est le purpura thronnbopénique idiopathique (PTI).
5. 5. Composition selon la revendication 2, pour son utilisation selon la revendication 2, en tant que médicament dans le traitement d'une polyglobulie.
6. 6. Composition selon la revendication 5, pour son utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que la polyglobulie est une polyglobulie primitive ou secondaire.
7. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le médicament est destiné aux patients de groupe sanguin A, B, ou AB.
8. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition.
9. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et en ce que le rapport en poids 3035789 35 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1/10 et 10/1.
10. 10. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, 5 caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 2/1 et 10/1.
11. 11. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, 10 caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1/10 et 1/2.
12. 12. Composition selon la revendication 9, pour son utilisation selon la revendication 9, 15 caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 3/10 et 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10.
13. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, pour son utilisation 20 selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'au moins 90% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des IgG.
14. 14. Composition selon la revendication 13, pour son utilisation selon la revendication 25 13, caractérisée en ce qu'au moins 40% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d'isotype IgG présentes dans la composition sont de sous-classe IgG2.
15. 15. Composition selon la revendication 13, pour son utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle possède un ratio en poids IgG2/IgG1 d'au moins 0,8. 30
16. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisée en ce qu'elle présente une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L. 35
17. 17. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisée en ce que la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 est administrée en association avec un autre agent thérapeutique choisi parmi les médicaments utiles dans le traitement d'une 40 maladie autoinnnnune et/ou d'une polyglobulie.