EP2464975A1 - Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten - Google Patents

Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten

Info

Publication number
EP2464975A1
EP2464975A1 EP10754252A EP10754252A EP2464975A1 EP 2464975 A1 EP2464975 A1 EP 2464975A1 EP 10754252 A EP10754252 A EP 10754252A EP 10754252 A EP10754252 A EP 10754252A EP 2464975 A1 EP2464975 A1 EP 2464975A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
particles
separation
magnetizable
cells
scavenger
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP10754252A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hans-Werner Heinrich
Jan-Michael Heinrich
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pluriselect GmbH
Original Assignee
Pluriselect GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pluriselect GmbH filed Critical Pluriselect GmbH
Publication of EP2464975A1 publication Critical patent/EP2464975A1/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G01N33/54333—Modification of conditions of immunological binding reaction, e.g. use of more than one type of particle, use of chemical agents to improve binding, choice of incubation time or application of magnetic field during binding reaction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/72—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating magnetic variables
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Definitions

  • the invention relates to a method for the separation of particles and / or cells with 2 and more surface specificities. Areas of application of the invention are medicine and pharmacy
  • Process step for the research, diagnosis and treatment of diseases For the separation of particles of different specific gravity (e.g.
  • lymphocytes e.g. are accompanied by the expression of typical structures on the outer cell membrane (such as the so-called Cluster of Differentiation - CDs).
  • Antibodies can be generated against these structures, which are the crucial tool for the more specific
  • FACS Fluorescence Activated Cell Sorting
  • the invention solves this problem by a novel combination of magnetic and scavenger-based separation process. It is realized according to claims 1-9.
  • cells with the characteristics A 1 B and C are to be isolated from blood.
  • the antibodies to A become particles with a
  • the blood sample is now pre-incubated with the detection systems A and C for 10 minutes. Thereafter, detection system B is added and incubated for an additional 10 minutes. The sample is then passed through a sieve cascade with 2 sieves
  • the screen 40 ⁇ m holds back: A, AB, AC, ABC
  • the 40 ⁇ m fraction is divided into: A, AB and AC, ABC
  • the 20 ⁇ m fraction is separated into the homogeneous fractions B and BC
  • Process step 3 The fractions A, AB and AC, ABC are prepared by known methods from
  • the method can be performed with large numbers of cells, little effort in a short time and low-stress for the cells.
  • One skilled in the art can make wide combinations through the appropriate composition of magnetic and size-defined ones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Die Erfindung beschreibt ein einfaches Verfahren zur schonenden Separierung von Zellen und/oder Partikeln aus Flüssigkeiten, vorzugsweise Blut. Dazu werden bekannte Schritte von magnetischen Trennverfahren kombiniert mit dem Verfahren einem Fängerpartikel-Siebabtrennung.

Description

Verfahren zur Separierung von Partikeln und/oder Zellen mit 2 und mehr
Oberflächenspezifitäten
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Separierung von Partikeln und/oder Zellen mit 2 und mehr Oberflächenspezifitäten. Anwendungsgebiete der Erfindung sind die Medizin und die Pharmazie
Beschreibung
Identifizieren und Separieren von Partikeln, insbesondere somatischer Zellen und Krankheitserreger aus komplexen Flüssigkeiten wie Blut ist ein notwendiger
Verfahrensschritt für die Erforschung, Diagnostik und Behandlung von Krankheiten. Für die Separierung von Partikeln mit unterschiedlicher spezifischer Dichte (z.B.
Leukozyten und Erythrozyten) haben sich Zentrifugationsverfahren oder Filter bewährt. Mit den Fortschritten in der Erforschung von Patho- und Immunogenese von
Krankheiten besteht ein wachsendes Bedürfnis zur Identifizierung uns Separierung von Zellen gleicher spezifischen Dichte aber unterschiedlicher Funktion. Die
unterschiedliche Funktion von Lymphozyten z.B. werden durch die Expression von typischen Strukturen auf der äußeren Zellmembran begleitet (so. z.B. die so genannten Cluster of Differentiation - CDs). Gegen diese Strukturen können Antikörper generiert werden, die das entscheidende Werkzeug für die mehr spezifischen
Separationsverfahren sind. Fluoreszenz aktivierte Separationsverfahren und
magnetische Trennverfahren haben sich seit Jahrzehnten für diese Aufgabe bewährt, neuerdings wird durch die Firma Pluriselect (Deutschland) auch ein Fängerpartikel gestütztes Sieb-Separationsverfahren angeboten.
Diese Verfahren erlauben es auf einfache Weise, Zellen aus komplexen Flüssigkeiten zu isolieren, die sich in einem Merkmal auf der Membran von anderen unterscheiden. Zellen mit unterschiedlicher Funktion tragen häufig ein gleiches Merkmal (A) auf der Oberfläche neben weiteren, innerhalb der Zellpopulation anders verteilten Merkmalen (B, C, ...), charakteristisch für anderer Funktionen. Die Isolierung von Zellen, die nur eine gewünschte Kombination von A, B oder C aufweisen, ist nach wie vor eine große Herausforderung in der biologischen Forschung. Gegenwärtig kann nur mittels
Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) nach Mehrfachmarkierungen diese Aufgabe gelöst werden. FACS ist zweifelsfrei der Goldstandard für die Separation von Zellen, aber mit hohem apparativen und personellen Aufwand verbunden. Weitere Nachteile dieser Technik liegen in dem hohen Stress für die isolierten Zellen, dem komplizierten sterilen Arbeiten und auch der Sortierung einer größeren Anzahl vitaler von Zellen sind methodische Grenzen gesetzt.
Der Erfindung löst diese Aufgabenstellung durch eine neuartige Kombination von magnetischen und durch Fängerpartikel gestützten Trennverfahren. Sie wird gemäß den Ansprüchen 1 - 9 realisiert.
Beschreibung der Erfindung:
Es sollen beispielhaft Zellen mit den Merkmalen A1 B und C aus Blut isoliert werden.
Aus dieser Anzahl von Oberflächenmerkmalen ergeben sich 7 unterschiedliche
Kombinationen (A, B, C, AB, AC, ABC, BC).
Die Aufgabe wird gelöst durch die Verwendung spezifischer Antikörper gegen A, B und
C. In diesem Beispiel werden die Antikörper gegen A an Partikel mit einem
Durchmesser von 40μm gekoppelt, Antikörper gegen B an Partikel mit einem
Durchmesser von 20μm und Antikörper gegen C an magnetisierbare Partikel < 10μm.
Verfahrensschritt 1 :
Die Blutprobe wird jetzt mit den Detektionssystemen A und C für 10 Minuten vor- inkubiert. Danach wird Detektionssystem B zugegeben und für weitere 10 Minuten inkubiert. Anschließend wird die Probe durch eine Siebkaskade mit 2 Sieben der
Maschengrösse 40μm und 20μm filtriert und ausreichend gespült.
Das Sieb 40μm hält zurück: A, AB, AC, ABC
Das Sieb 20μm hält zurück: B und BC
Im Durchlauf: C
Verfahrensschritt 2:
Alle 3 Proben werden einem magnetischen Trennverfahren unterworfen
Die 40μm-Fraktion wird aufgeteilt in: A, AB und AC, ABC
Die 20μm-Fraktion wird separiert in die homogene Fraktionen B und BC
Aus dem Durchlauf wird separiert die homogene Fraktion C
Verfahrensschritt 3: Die Fraktionen A, AB sowie AC, ABC werden mittels bekannten Methoden vom
Fängerpartikel A abgelöst. Eine Ko-Inkubation mit B ist angezeigt. Danach werden die
Proben über ein 20μm Sieb getrennt.
Auf dem Sieb werden zurückgehalten: AB und ABC
Im Durchlauf befinden sich A und AC
Verfahrensschritt 4:
Beide Fraktionen werden einem magnetischen Trennverfahren unterzogen, das zur
Separation der homogenen Fraktionen AC und ABC, sowie A und AB führt.
Das Verfahren kann mit großen Zellzahlen, geringem Aufwand in kurzer Zeit und stressarm für die Zellen durchgeführt werden. Ein Fachmann kann weite Kombinationen durch die geeignete Zusammenstellung von magnetischen und Größe-definierten
Fängerpartikel entwickeln.

Claims

Ansprüche
1. Verfahren zur Separierung von Partikeln oder Zellen mit 2 oder mehr Oberflächenspezifitäten bestehend aus einer Kombination von Partikelgestützter und magnetische Separation.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die magnetisierbaren Fängerpartikel kleiner sind als die nichtmagnetisierbaren Fängerpartikel .
3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Partikel oder Zellen enthaltende Gemisch nacheinander oder gleichzeitig mit Fängerpartikeln für die Oberflächenspezifität A,
mit Fängerpartikeln für die Oberflächenspezifität B und
ggf. mit Fängerpartikeln für die Oberflächenspezifität C und ggf. weiteren Spezifitäten inkubiert wird, wobei die Fängerpartikel unterschiedliche Größe aufweisen bzw. magnetisierbar sind, nachfolgend durch Siebmembranen getrennt oder einem magnetischen Trennverfahren unterworfen und anschließend gegebenenfalls weiterbehandelt werden.
4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Trennung der nicht magnetisierbaren Fängerpartikel durch Siebmembranen erfolgt.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Trennung mehrerer nichtmagnetisierbarer Fängerpartikel durch Siebe/Membranen mit der dafür notwendigen Maschenweite/Porengröße erfolgt.
6. Verfahren nach Anspruch -1 bis-3, dadurch gekennzeichnet, dass die Trennung der nicht magnetisierbaren Fängerpartikel durch Magnetfeldeinwirkung erfolgt.
7. Verfahren nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass Nukleinsäuren, Peptide oder Proteine, vorzugsweise Antikörper, als Fängerspezifitäten eingesetzt werden.
8. Verfahren nach Anspruch 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Abtrennung der fixierten Partikel /Zellen mit an sich bekannten Verfahren erfolgt. Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 bis 8 für die Separierung von Partikeln und/oder Zellen aus komplexen Flüssigkeiten, vorzugsweise Blut, für Forschungszwecke und zur Diagnostik und Therapie von Krankheiten.
EP10754252A 2009-08-14 2010-07-16 Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten Pending EP2464975A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102009037331A DE102009037331A1 (de) 2009-08-14 2009-08-14 Verfahren zur Separierung von Partikeln und/oder Zellen mit 2 und mehr Oberflächenspezifitäten
PCT/DE2010/000830 WO2011018067A1 (de) 2009-08-14 2010-07-16 Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2464975A1 true EP2464975A1 (de) 2012-06-20

Family

ID=42985357

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP10754252A Pending EP2464975A1 (de) 2009-08-14 2010-07-16 Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20120164634A1 (de)
EP (1) EP2464975A1 (de)
JP (1) JP2013501924A (de)
KR (1) KR20120051738A (de)
CN (1) CN102549431A (de)
AU (1) AU2010281997A1 (de)
CA (1) CA2771116A1 (de)
DE (1) DE102009037331A1 (de)
RU (1) RU2012109539A (de)
WO (1) WO2011018067A1 (de)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102011118386A1 (de) 2011-11-14 2013-05-16 Pluriselect Gmbh Verfahren zur Isolierung von Zellen und Biopartikeln
EA201500377A1 (ru) * 2012-10-11 2015-10-30 Оргентек Диагностика Гмбх Способ обнаружения анализируемого вещества и определение его концентрации с использованием намагничиваемых гранул
CN107075556B (zh) * 2014-05-15 2022-09-20 流动生物科学公司 使用基于磁性和尺寸的分离进行细胞分离的方法和系统
WO2016136273A1 (ja) 2015-02-27 2016-09-01 凸版印刷株式会社 細胞を分離する方法、およびそのためのデバイス
WO2023204043A1 (ja) * 2022-04-20 2023-10-26 ソニーグループ株式会社 生体粒子分離方法、及び生体粒子分離用複合担体

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5409813A (en) * 1993-09-30 1995-04-25 Systemix, Inc. Method for mammalian cell separation from a mixture of cell populations
US6994971B1 (en) * 1999-10-08 2006-02-07 University Of Utah Research Foundation Particle analysis assay for biomolecular quantification
GB0013658D0 (en) * 2000-06-05 2000-07-26 Dynal Asa Nucleic acid isolation
JP4407068B2 (ja) * 2001-03-26 2010-02-03 横河電機株式会社 磁気粒子泳動方法および装置
GB0110172D0 (en) * 2001-04-25 2001-06-20 Pa Consulting Services Improved analytical test approach for blood
US7166443B2 (en) * 2001-10-11 2007-01-23 Aviva Biosciences Corporation Methods, compositions, and automated systems for separating rare cells from fluid samples
KR101290558B1 (ko) * 2004-07-30 2013-07-31 퓨리셀렉트 게엠베하 생물학적 연구를 포함하는 생명공학 및 의약적 진단학에서,동물에의 적용을 목적으로, 체액으로부터 세포, 생체 입자및/또는 분자를 분리하는 장치 및 방법
US20070059680A1 (en) * 2005-09-15 2007-03-15 Ravi Kapur System for cell enrichment
JP2009511001A (ja) * 2005-09-15 2009-03-19 アルテミス ヘルス，インク． 細胞及びその他の粒子を磁気濃縮するためのデバイス並びに方法
FR2917174B1 (fr) * 2007-06-08 2021-02-12 Bio Rad Pasteur Analyse multiple d'echantillons sanguins

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2011018067A1 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20120164634A1 (en) 2012-06-28
AU2010281997A1 (en) 2012-04-05
RU2012109539A (ru) 2013-09-20
JP2013501924A (ja) 2013-01-17
WO2011018067A1 (de) 2011-02-17
DE102009037331A1 (de) 2011-03-03
KR20120051738A (ko) 2012-05-22
CN102549431A (zh) 2012-07-04
CA2771116A1 (en) 2011-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE60019111T2 (de) Verfahren zur zellseparation unter verwendung von immunorosetten
EP0733099B1 (de) Verfahren zum zerkleinern von hochmolekularen strukturen
EP2464975A1 (de) Verfahren zur separierung von partikeln und/oder zellen mit 2 und mehr oberflächenspezifitäten
DE69024477T2 (de) Verfahren zur Trennung und Reinigung menschlicher, genomischer DNS
DE19833738A1 (de) Verfahren zur Isolierung von Krebszellen aus zellhaltigen Körperflüssigkeiten sowie Sets zur Durchführung dieses Verfahrens
DE08838013T1 (de) Verfahren und kit zur schnellen isolierung humaner foxp3+-treg-zellen
DE69626418T2 (de) Verfahren zur bulk-anreicherung von einer zellpopulation oder zellsubpopulation
DE112016003951T5 (de) Molekulare verfahren zur beurteilung von komplikationen nach einer nierentransplatation
DE102019132865B4 (de) Verfahren und vorrichtung für die analyse von gewebeproben
WO2002008751A2 (de) Schonende hochanreicherung von fetalen zellen aus peripherem blut und verwendung derselben
WO2004027428A1 (de) Verfahren zum nachweis und zur isolierung von t-lymphozyten, die ein definiertes antigen erkennen
DE102006060717B4 (de) Verfahren zur Aufreinigung wenigstens einer nachzuweisenden Zielsubstanz
DE602004007429T2 (de) Verfahren zur Zellselektion
DE112021001605T5 (de) Biomarker-panel spezifisch für myeloid-abgeleitete suppressive zellen
EP2780708A1 (de) Verfahren zur isolierung von zellen und biopartikeln
Clémençon et al. Rapid method to express and purify human membrane protein using the Xenopus oocyte system for functional and low-resolution structural analysis
DE102017003312A1 (de) Nachweisverfahren und Vorrichtung
DE102009019013A1 (de) Verfahren zum Selektieren, Screening, von Blut und/oder Serum auf granulozytäre Antikörper bei umfangreicher Spenderpopulation
EP3111220B1 (de) Verfahren für die molekulardiagnostik zum anreichern einer nukleinsäure aus einer biologischen probe
DD283330A5 (de) Zepareth-herstellungsverfahren aus selektierten zellinien begrenzter vermehrungspotenz (finit lines)
DE102016209904A1 (de) Verfahren und mikrofluidische Vorrichtung zum Verarbeiten einer Probe biologischen Materials
DE10327327A1 (de) Verfahren zum Aufbereiten einer aus Partikeln bestehenden Probe
US20210382035A1 (en) Pretreatment of blood for classifying blood cells using microchannel
EP0863157A1 (de) Anti-Metakaryozyten monoklonaler Antikörper 97A6
DE102012009088B4 (de) Vorrichtung und Verfahren zur Zellseparation

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20120229

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO SE SI SK SM TR

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
17Q First examination report despatched

Effective date: 20130204

RIN1 Information on inventor provided before grant (corrected)

Inventor name: HEINRICH, HANS-WERNER

Inventor name: HEINRICH, JAN-MICHAEL

GRAP Despatch of communication of intention to grant a patent

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR1

INTG Intention to grant announced

Effective date: 20160307

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20160719

19U Interruption of proceedings before grant

Effective date: 20131231

19W Proceedings resumed before grant after interruption of proceedings

Effective date: 20190401

GRAJ Information related to disapproval of communication of intention to grant by the applicant or resumption of examination proceedings by the epo deleted

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSDIGR1

D18D Application deemed to be withdrawn (deleted)
INTC Intention to grant announced (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20191001